Kovalente Proteinmarkierung durch enzymatische Phosphocholinierung

Wir prasentieren eine neue Methode zur Proteinmarkierung, die auf der kovalenten enzymatischen Phosphocholinierung einer spezifischen Octapeptidsequenz intakter Proteine beruht. Das Enzym AnkX aus Legionellen wurde etabliert, um funktionalisierte Phosphocholingruppen aus synthetischen CDP-Cholin-Derivaten auf N- und C-Termini, sowie interne Schleifenregionen zu ubertragen. Zudem kann die kovalente Modifikation durch das Legionellen-Enzym Lem3 hydrolytisch entfernt werden. Lediglich eine 8 Aminosauren kurze Peptidsequenz und eine kleine Verbindungsgruppe (PEG-Phosphocholin) sind fur die effiziente Proteinmarkierung erforderlich.