BpuAmI: um novo neoesquisomero de SacI de Bacillus pumilus descoberta em um isolado oriundo da Bacia Amazônica, reconhecendo 5'-GAG<FONT FACE=Symbol>¯</FONT>CTC-3'

A strain of Bacillus pumilus was isolated and identified from water samples collected from a small affluent of the Amazon River. Type II restriction endonuclease activity was detected in these bacteria. The enzyme was purified and the molecular weight of the native protein estimated by gel filtration and SDS-PAGE. The optimum pH, temperature and salt requirements were determined. Quality control assays showed the complete absence of &quot;nonspecific nucleases.&quot; Restriction cleavage analysis and DNA sequencing of restriction fragments allowed the unequivocal demonstration of 5&#180;GAG&#175;CTC3&#180; as the recognition sequence. This enzyme was named BpuAmI and is apparently a neoschizomer of the prototype restriction endonuclease SacI. This is the first report of an isoschizomer and/or neoschizomer of the prototype SacI identified in the genus Bacillus. Uma linhagem de Bacillus pumilus foi isolada e identificada de amostras de &#225;guas coletadas em um pequeno Igarap&#233; do Rio Amazonas. Foi detectada atividade de restri&#231;&#227;o do tipo II nesta bact&#233;ria. A enzima foi purificada e o peso molecular da prote&#237;na nativa foi estimado por gel filtra&#231;&#227;o e por eletroforese em gel de poliacrilamida. Foram determinados, o pH e temperatura &#243;timos e as necessidades de sais. Os ensaios do controle de qualidade mostraram uma aus&#234;ncia completa de &quot;nucleases n&#227;o espec&#237;ficas&quot;. As analises das clivagens e o seq&#252;enciamento do DNA dos fragmentos de restri&#231;&#227;o permitiram uma demonstra&#231;&#227;o inequ&#237;voca de que 5&#180;GAG&#175;CTC 3&#180; &#233; a seq&#252;&#234;ncia de reconhecimento da enzima. Esta enzima foi denominada de BpuAmI e aparentemente &#233; um neoesquis&#244;mero da enzima prot&#243;tipo SacI. Este &#233; o primeiro relato de um isoesquis&#244;mero e/ou neoesquis&#244;mero da enzima prot&#243;tipo SacI identificada no g&#234;nero Bacillus.