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Generacion y caracterizacion de nuevos modelos celulares asociados al deficit neural en IGF-1
- Source :
- Digital.CSIC. Repositorio Institucional del CSIC, instname
- Publication Year :
- 2019
-
Abstract
- Resumen del póster presentado al 42nd Congress of the Spanish Society of Biochemistry and Molecular Biology (SEBBM), celebrado en Madrid del 16 al 19 de julio de 2019.<br />La deficiencia humana del factor de crecimiento similar a la insulina tipo 1 (IGF-1) causa una enfermedad rara (ORPHA 73272) que cursa con retraso en el crecimiento, microcefalia y sordera neurosensorial. El modelo murino deficiente en Igf1 reproduce el mismo síndrome y presenta una incorrecta diferenciación neuronal del ganglio auditivo acompañada de apoptosis temprana de las neuronas auditivas. El estudio del papel protector que ejerce el IGF-1 frente a la pérdida auditiva es complicado por la heterogeneidad celular de la cóclea y la limitación de los modelos experimentales disponibles. Como consecuencia, se ha generado un modelo celular de la enfermedad humana en la línea de neuroblastoma murino Neuro2a mediante edición génica con CRISPR/Cas9. Dicho modelo reproduce la deleción parcial del exón 3 del gen Igf1 murino descrita como causante de pérdida auditiva en el hombre. Para la edición génica se transfectó el complejo crRNA:tracrRNA:Cas9 en forma de ribonucleoproteína y se comprobó su incorporación en las células mediante microscopía detectando el tracrRNA marcado fluorescentemente. La presencia de mutaciones se evaluó mediante Surveyor y se seleccionaron las células mutadas tras clonación por dilución límite. La edición del gen Igf1 se comprobó por PCR en 56 clones y 5 de ellos se secuenciaron mediante el méetodo Sanger, confirmándose la deleción parcial de Igf1 en dos de los clones. Para el resto se emplearía la herramienta Mosaic Finder, desarrollada in-house, que permite analizar la multiplicidad alélica generada tras la edición genética mediante next-generation sequencing (NGS) y posterior análisis bioinformático. Finalmente, se ha iniciado un estudio del estado neuroinflamatorio de los clones secuenciados y de su respuesta a distintos estímulos pro-inflamatorios, que puede contribuir a desvelar algunos mecanismos moleculares asociados a la deficiencia crónica de IGF-1.<br />Agradecimientos: ACCI2016 (ER16P5AC7091); ACCI2017 (ER17P5AC7611) y ACCI2018 (ER19P5AC761).
Details
- Database :
- OpenAIRE
- Journal :
- Digital.CSIC. Repositorio Institucional del CSIC, instname
- Accession number :
- edsair.dedup.wf.001..32c5f8133ef9501466b873b6dc7bfc25