Kitozan/PAI-1 siRNA nanoplekslerinin hepatosellüler karsinoma hücre hatlarında anti- anjiyogenik ve anti-karsinojenik etkilerinin araştırılması

Amaç: Anjiyogenez invaziv tümör büyümesi, metastazı ve kanser ilerlemesinin kontrolünde önemli bir nokta oluşturur. Bu amaçla en yaygın çalışılan gen susturma teknolojisi RNAi (RNA interference), gen ekspresyonunu inhibe edilebilmesi (susturma), yüksek spesifisite ve hedeflenme özellikleri nedeniyle tedavide denenmektedir. Anjiyogenez ve tümörle ilgili faktörlerin siRNA (small interfering RNA)' lar ile hücre kültürü ortamında inhibe edilmesiyle ilgili çalışmalar mevcuttur. siRNA' ların terapötik verimini artırmak için uygun taşıyıcı sistem olarak kullandığımız güvenli bir biyopolimer olan kitozan büyük önem taşımaktadır. Sunulan tez kapsamında hepatosellüler karsinomada (HCC) anjiyogenezi tetikleyen bir faktör olan PAI-1' i susturarak anjiogenezin durdurulması planlanmaktadır. Gereç ve Yöntem: PAI-1' in aşırı ekspresyonu, HCC' lı hastalarda tümör invazyonu ve metastazı gelişimine yol açar. Anjiyogenezde etkin olan PAI-1 ekspresyonunu engellemek için ticari olarak satılan siRNA spektroskopik ve elektroforetik kontrollerinden sonra kitozan ile kompleksleşme oranı belirlenmiştir. Komplekslerin karakterizasyonu HepG2C3a ve Hep3B hücrelerinde in vitro transfeksiyonu etkinliği incelenmiş ve PAI-1 ekspresyonu elisa yöntemi ile tayin edilmiştir. Hazırlanan komplekslerin TEM görüntüleri ile boyut/zeta ölçümlerinin uygun olduğu tespit edildi. Bulgular: HCC hücre hatlarında uygun komplekslern PAI-1 gen ekspresyonunu yaklaşık %50 oranında inhibe ettiği istatiksel oralara anlamlı azaldığı gözlenmiştir. Sonuç: Elde edilen sonuçlar kitozan siRNA-PAI-1 için uygun bir taşıyıcı sistem olduğu desteklenmiştir. Objective: Angiogenesis is an important factor in the control of invasive tumor growth, metastasis and cancer progression. For this purpose, the most widely studied gene silencing technology, RNAi (RNA interference), gene expression inhibition (silencing), high specificity and targeting properties are being tried in the treatment. There are studies on the inhibition of angiogenesis and tumor related factors with siRNA (small interfering RNA) in cell culture media. Chitosan, a safe biopolymer, which we use as a suitable carrier system, is of great importance to increase the therapeutic efficiency of siRNAs. In this thesis, it is planned to stop angiogenesis by silencing PAI-1 (plasminogen activator inhibitor-1), a factor that triggers angiogenesis in hepatocellular carcinoma (HCC). Materials and Methods: Overexpression of PAI-1 leads to tumor invasion and metastasis in patients with HCC. The rate of complexation with chitosan was determined after spectroscopic and electrophoretic controls of commercially available siRNA to inhibit PAI-1 expression, which is effective in angiogenesis. Characterization of complexes The efficacy of in vitro transfection in HepG2C3a and Hep3B cells was examined and PAI-1 expression was determined by elisa method. TEM images and zeta measurements of the complexes were found to be appropriate. Results: In the HCC cell lines, it was observed that suitable complexes inhibited PAI-1 gene expression by approximately 50% and decreased statistically. Conclusion: The results obtained were supported to be a suitable carrier system for chitosan siRNA-PAI-1. 132