Search

Objective: The present study aimed to assess the morphology of symphysis and alveolar bone thickness (ABT) surrounding mandibular incisors in thalassemic patients, as compared to unaffected individuals. Methods: This case-control study was conducted on lateral cephalograms of 60 thalassemic and 60 unaffected patients with Class II malocclusion seeking orthodontic treatment at Dental School, Shiraz University of Medical Sciences. The sample was divided into three subgroups including hyperdivergent, normodivergent, and hypodivergent, according to the Jarabak index. Symphysis dimensions and alveolar bone thickness surrounding mandibular incisors were measured using AutoCad software. Finally, the correlation between alveolar bone thickness and symphysis morphology was assessed. Results: In general, chin dimensions and bone thickness at different levels of mandibular incisor roots (cervical, middle, apical) were smaller in thalassemic adolescents than controls. Concerning the total sample as well as the normodivergent subgroup, significantly lower values were observed in thalassemic patients for symphysis width, total ABT at the cervical, and lingual ABT at the apical root area compared to controls (p < 0.05). The hypodivergent growth pattern was not associated with any statistical differences between the groups (p> 0.05). In both thalassemic and control subjects, symphysis width showed a weak to moderate positive correlation with ABT of lower incisors (p< 0.05), whereas symphysis height showed a moderate positive correlation with cervical ABT in only ß‐thalassemia patients (p< 0.05). Conclusions: Compared to controls, ß-thalassemia patients showed thinner alveolar bone at different levels of lower incisor roots and smaller symphysis dimensions. There were significant correlations between symphysis dimensions and alveolar bone thickness of mandibular incisors in the sample. RESUMO Objetivo: O presente estudo teve como objetivo avaliar a morfologia da sínfise e a espessura do osso alveolar (EOA) ao redor dos incisivos inferiores de pacientes com talassemia, em comparação a indivíduos sem a doença. Métodos: Esse estudo de caso-controle foi conduzido por meio da análise de radiografias cefalométricas de pacientes Classe II à procura de tratamento ortodôntico na Clínica Odontológica da Shiraz University of Medical Sciences, sendo 60 pacientes com talassemia e 60 sem a doença. A amostra foi dividida em três subgrupos, de acordo com o índice de Jarabak: hiperdivergente, normodivergente e hipodivergente. As dimensões da sínfise e a espessura do osso alveolar ao redor dos incisivos inferiores foram medidas no programa AutoCAD. Por último, foi avaliada a correlação entre a espessura do osso alveolar e a morfologia da sínfise. Resultados: No geral, as dimensões do mento e a espessura do osso nos diferentes níveis da raiz dos incisivos inferiores (cervical, médio e apical) foram menores em adolescentes talassêmicos do que nos pacientes controle. Tanto na amostra total quanto no subgrupo normodivergente, valores significativamente menores foram observados nos pacientes talassêmicos para a largura da sínfise, EOA total no terço cervical e EOA lingual no terço apical da raiz, comparados aos pacientes controle (p< 0,05). O padrão de crescimento hipodivergente não foi associado a qualquer diferença estatisticamente significativa entre os grupos (p> 0,05). Em ambos os grupos de pacientes, talassêmicos e controle, a largura da sínfise mostrou uma correlação positiva de fraca a moderada com a EOA dos incisivos inferiores (p< 0,05), enquanto a altura da sínfise mostrou uma correlação positiva moderada com a EOA cervical apenas nos pacientes com talassemia beta (p< 0,05). Conclusões: Comparados aos pacientes controle, os pacientes com talassemia beta apresentaram um osso alveolar mais fino em diferentes níveis das raízes dos incisivos inferiores e dimensões menores da sínfise. Houve correlação significativa entre as dimensões da sínfise e a espessura do osso alveolar dos incisivos inferiores na amostra.

Dissertação de mestrado em Biotecnologia apresentada ao Instituto Superior Técnico, Universidade de Lisboa, 2021 Orientadores: Paula Faustino (INSA); Susana Vinga (IST) Dissertação defendida a 10-11-2021 The work presented in this thesis was performed at INESC-ID, “Instituto de Engenharia de Sistemas e Computadores: Investigação e Desenvolvimento em Lisboa”, of Instituto superior Técnico (Lisbon, ´ Portugal) and at ”Grupo de I&D em Hemoglobinopatias, Metabolismo do Ferro e Patologias Associadas” of Human Genetics Department of National Institute of Health Doctor Ricardo Jorge (INSA) (Lisbon, Portugal), during the period February-October 2021. The prevalence of anaemia in the world population is 24.8%. Proper discrimination between microcytic anaemias is essential to provide the right treatment and genetic counselling.A s the most reliable methods to diagnose thalassemias and IDA (iron deficiency anaemia), some of the most common microcytic anaemias are expensive and time-consuming, many indexes have been developed through the years. These indexes, however, have not been revealed to be 100% accurate. In this thesis, haematological data from a sample of the Portuguese population constituted by 390 individuals and their diagnosis was used to train and test different machine learning algorithms. The objective was to develop a binary classifier, specifically adapted to the Portuguese population, to dis criminate β-thalassemia carriers from IDA patients. Beyond that, a multi-class classifier capable of dis tinguishing between β-thalassemia carriers, α-thalassemia carriers, IDA patients, and healthy subjects was also developed. In order not to compromise the main objective, to obtain a quick and accessible diagnosis, the classifiers developed were only based on information obtained through a complete blood count test, one of the most common laboratory tests in medicine. Although it was not possible to surpass the performance with the binary classifiers created of the most reliable index for the Portuguese population, RDWI (red cell distribution width index), which presented a median accuracy of 95.4%, it was possible to match it with the random forest algorithm. This algorithm showed an excellent performance in the binary and in the multi-class classification, where it achieved promising results, revelling a median accuracy of 93.0%. A prevalência de anemia na população ao mundial e de 24.8%. A discriminação adequada entre anemias microcíticas e fundamental para fornecer o tratamento adequado e providenciar aconselhamento genético. Uma vez que os métodos mais fidedignos para diagnosticar talassemias e anemia ferropénica (AF), ´ algumas das anemias microcíticas mais comuns, são caros e demorados, vários índices foram desenvolvidos ao longo dos anos. Contudo, esses índices revelaram não ser 100% fiáveis. Nesta tese foram utilizados dados hematológicos de uma amostra da população portuguesa constituída por 390 indivíduos e respetivo diagnostico para treinar e testar diferentes algoritmos de aprendizagem automática. O propósito foi desenvolver um classificador bin ´ ario, especificamente adaptado ´ a população portuguesa, a fim de discriminar entre portadores de β-talassemia e doentes com AF. Para alem disso, foi desenvolvido um classificador multi-classe capaz de distinguir entre portadores de β-talassemia, portadores de α-talassemia, doentes com AF e indivíduos saudáveis. De forma a não comprometer o objetivo principal, a obtenção dum diagnóstico rápido e acessível, os classificadores desenvolvidos foram baseados apenas em informações obtidas através de um hemograma, um dos exames laboratoriais mais comuns em medicina. Embora não tenha sido possível ultrapassar o desempenho com os classificadores binários criados do índice mais fiável para a população portuguesa, RDWI ( índice de distribuição de largura dos glóbulos vermelhos), que apresentou uma exatidão mediana de 95.4%, foi possível igualar esta exatidão com o algoritmo florestas aleatórias. Este algoritmo apresentou um ´ ótimo desempenho tanto na classificação binaria, como na classificação multi-classe, onde obteve resultados promissores revelando uma exatidão mediana de 93.0%. N/A

The purpose of this work is to develop a hematocrit-independent method for the detection of beta-thalassemia trait (β-TT) and iron deficiency anemia (IDA), through the rheological characterization of whole blood samples from different donors. The results obtained herein are the basis for the development of a front microrheometry point-of-care device for the diagnosis and clinical follow-up of β-TT patients suffering hematological diseases and alterations in the morphology of the red blood cell (RBC). The viscosity is calculated as a function of the mean front velocity by detecting the sample fluid-air interface advancing through a microfluidic channel. Different viscosity curves are obtained for healthy donors, β-TT and IDA samples. A mathematical model is introduced to compare samples of distinct hematocrit, classifying the viscosity curve patterns with respect to the health condition of blood. The viscosity of the fluid at certain shear rate values varies depending on several RBC factors such as shape and size, hemoglobin (Hb) content, membrane rigidity and hematocrit concentration. Blood and plasma from healthy donors are used as reference. To validate their potential clinical value as a diagnostic tool, the viscosity results are compared to those obtained by the gold-standard method for RBC deformability evaluation, the Laser-Optical Rotational Red Cell Analyzer (LoRRCA)., LM-M and JF-T received funding from programs Doctorat Industrial (2018 DI 068) and (2018 DI 064) from AGAUR (Generalitat de Catalunya). EK receives funding from Institut Josep Carreras (IJC) under program Equality Plus, project number 2019-1-TR01-KA202-076789. TA acknowledges funding under grant numbers MTM2015-71509-C2-1-R and MDM-2014-0445. TA has been partially funded by the CERCA Program of the Generalitat de Catalunya. AH-M acknowledges funding under project FIS2016-78883-C2-1P, Ministerio de Ciencia e Innovacion (Spain) under project PID2019-106063GB-100 and AGAUR (Generalitat de Catalunya) under project 2017 SGR-1061. CT-S and AH-M acknowledge partial support from ANID/PCI (Chile) under project MEC80180021.

A 10-year-old Malay girl with underlying HbE/beta-thalassemia, on regular blood transfusion and deferoxamine iron chelation therapy, presented with two-month history of bilateral blurring of vision. On examination, her vision was 6/36 both eyes. Other optic nerve functions were normal. Anterior segment examination of both eyes was unremarkable. Fundus examination of both eyes revealed dull foveal reflex. Optical coherence tomography of both maculae showed increased central subfield thickness. Fundus fluorescence angiography showed patchy hypofluorescence over macular region for both eyes and late staining, indicating retinal pigment epithelium anomalies. A diagnosis of iron-chelation-therapy-related bilateral maculopathy was made. Patient was co-managed with pediatric hematology team to adjust the dose of deferoxamine, and was given three monthly appointments to monitor the progression of maculopathy at the ophthalmology clinic. However patient defaulted ophthalmology follow-up after the first visit. RESUMO Uma menina malaia de 10 anos de idade com doença de base- B/beta-talassemia, em transfusão de sangue regular e terapia quelante de ferro deferoxamina, apresentou história de dois meses de visão turva bilateral. Ao exame, sua visão era de 6/36 em ambos os olhos. Outras funções do nervo óptico estavam normais. O exame do segmento anterior de ambos os olhos foi normal. Exame do fundo de ambos os olhos revelou reflexo foveal opaco. A tomografia de coerência óptica de ambas as máculas mostrou aumento da espessura do subcampo central. A angiografia de fluorescência do fundo mostrou hipofluorescência irregular sobre a região macular de ambos os olhos e coloração tardia, indicando anomalias de epitélio pigmentar da retina. Um diagnóstico de maculopatia bilateral relacionada à terapia quelante de ferro foi feito. A paciente foi avaliada em conjunto com a equipe de hematologia pediátrica para ajustar a dose de deferoxamina, e foram oferecidas três consultas mensais na clínica oftalmológica, para monitorar a progressão da maculopatia. No entanto, ela não compareceu para acompanhamento oftalmológico após a primeira visita.

Orientador: Fernando Ferreira Costa Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: O estudo das hemoglobinas humanas tem contribuido substancialmente para o entendimento de principios genéticos básicos e para a aplicação de novos métodos na análise de doenças. A utilização de abordagem molecular na investigação dos genes da globina tem conduzido a um rápido progresso no entendimento de sua estrutura e função. Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital Abstract: The study of Human hemoglobins has contributed substantially to the undestanding of basic genetic principles and to the applications of new methods in the analysis of disease. The use of molecular analysis to the study of globib genes has led to rapid progress in the understanding of their structure and functions. Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations Doutorado Genética Médica Doutor em Ciências Biológicas

Orientador: Fernando Ferreira Costa Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Doutorado Doutor em Biologia

Orientador: Maria de Fatima Sonati Texto em portugues e ingles Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas Resumo: Para identificar as mutações presentes nos genes da globina a da população do Sudeste Brasileiro, foram estudados 7 pacientes com Doença da Hb H e 27 indivíduos com alterações estruturais de cadeia a. A metodologia envolveu a reação em cadeia pela polimerase (PCR), a análise com enzimas de restrição e o sequenciamento direto de DNA. Os pacientes com Hb H, caucasóides. revelaram os seguintes genótipos: -(a)20.5/- a3.7 (2 casos), -- MED/-a3.7 (1 caso), -- MED/aHpha (1 caso) e a interação da deleção -a3.7 com uma forma incomum de talassemia a, não-delecional [-?3.7/(aa)T] (3 casos) Entre as alterações estruturais encontradas estão as Hbs Hasharon (a47AspaHis) (15 caucasóides), J-Rovigo (a 53AlaaAsp) (4 caucasóides), Stanleyville-II (a78AsnaLis) (3 negróides e 1 caucasóide), G-Pest (a74 AspaAsn) (lnegróide), Kurosaki (a7LisaGlu) (l caucasóide), Westmead (al22HisaGln) (1 caucasóide) e Campinas (a26AlaaVal) (1 caucasóide), uma variante não descrita previamente. As Hbs Hasharon e Stanleyville-II foram encontradas em associação com a deleção -a3.7 . Foram determinadas pela primeira vez as bases moleculares das Hbs J-Rovigo, Stanleyville-II, G-Pest e Kurosaki (GCCaGAC, AACaAAA, GACaAAC, AAGaGAG, respectivamente). Embora as hemoglobinopatias sejam freqüentes, pouco se sabe sobre as alterações dos genes a que acometem a população brasileira. As mutações aqui detectadas refletem a importante contribuição italiana e africana na população desta região do Brasil e indicam a presença de formas não-delecionais de talassemia a, bem como de variantes estruturais raras Abstract: In order to identify the a-globin gene mutations present in the population of southeastern Brazil, 7 unrelated Hb H disease patients and 27 individuals with a-chain structural alterations were studied. Methodology involved PCR, restriction enzyme analyses and DNA direct sequencing. Among the Hb H patients, all Caucasians, 2 showed the -(a)20.5/ -a3.7 genotype, 1 the --MED/-a3.7, 1 the --MED/a Hpha, and 3 the interaction of the - a3.7 deletion with an unusual a-thalassemia, non-deletional [-a3.7/(aa)T]. The structural alterations were the Hbs Hasharon (a47AspaHis) (15 Caucasians), J-Rovigo (a53AlaaAsp) (4 Caucasians), Stanleyville-II (a78AsnaLys) (3 Blacks and 1 Caucasian), G-Pest (a74AspaAsn) (1 Black), Kurosaki (a7LysaGlu) (1 Caucasian), Westmead (al22HisaGln) (1 Caucasian) and Campinas (a26AlaaVal) (1 Caucasian), a variant not previously described. The Hbs Hasharon and Stanleyville-II were found in association with the -a 3 .7 deletion The molecular bases of Hbs J-Rovigo, Stanleyville-II, G-Pest and Kurosaki were determined (GCCaGAC, AACaAAA, GACaAAC, AAGaGAG, respectively). Although hemoglobinopathies are frequent in Brazil, very little is known about the a-globin gene alterations. The deletions and the most prevalent structural alterations found here reflect the Italian and African contribution to the population of this region of Brazil and indicate the presence of non-deletional a thalassemia, as well as rare variants Mestrado Ciências Biomédicas Mestre em Ciências Médicas

Orientador: Maria de Fatima Sonati Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: A microcitose e a hipocromia, sem o concomitante aumento da HbA2, podem ser resultantes da presença de talassemia a, de anemia por deficiência de ferro ou, ocasionalmente, da anemia de doenças crônicas. Não raramente, indivíduos com microcitose e hipocromia, sem anemia e sem a elevação da HbA2, são detectados em exames hematológicos de rotina. Com o objetivo de investigar qual a contribuição da talassemia a nestes casos, foram analisados 339 indivíduos adultos (98 negróides e 241 caucasóides), atendidos nos ambulatórios do Hospital das Clínicas da Unicamp, com exceção do ambulatório de Hematologia Clínica, apresentando níveis de hemoglobina (Hb) ~ 12g/dLpara mulheres e 14g/dL para homens, volume corpuscular médio das hemácias (VCM) e hemoglobina corpuscular média (RCM) ::;80ft e 27pg, respectivamente, e percentuais de Hb A2normais ou diminuídos (::;3.4%). Foram triadas, pela técnica da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) e análise com enzimas de restrição, as mutações que mais comumente causam talassemia a nas populações de descendência africana e mediterrânea (deleções -a3,7, -a4,2, __MED, -(aiO,5 e as formas não delecionais aHpha, aNcoh, aaNcoI e a Tsaudia), estas últimas pela primeira vez investigadas na população brasileira. Cento e sessenta e nove indivíduos (49,9%) apresentaram talassemia a, sendo 100 caucasóides (29,5%) e 69 negróides (20,4%). Entre os caucasóides, 89 (36,9%) eram heterozigotos da deleção -a3,7 (- a3,7/aa), 6 (2,5%) eram homozigotos (-a3.7/-a3,7),4 (1,7%) apresentaram a forma não delecional aHphIa em heterozigose (aHphIalaa) e 1 (0,4%) apresentou a deleção __MED, em heterozigose (--MED/aa).Entre os negróides, 56 (57,1%) apresentaram o genótipo -a3,7/aa, 12 (12,2%) o genótipo -a3,7/-a3,7 e 1 (l,OOIÓ)apresentou a mutação aHphIa, em heterozigose (aHphIa./aa). Estes resultados demonstram que a talassemia a é uma importante causa de microcitose e hipocromia em indivíduos sem anemia na população analisada, contribuindo com cerca de 50% dos casos (48% deles causados pela deleção -a3.7 e cerca de 2% por outras mutações, como a --MED e a aHphIa).Apesar de OCOITer com altas freqüências em populações negras, a presença da deleção - a3.7 nos caucasóides é provavelmente devida ao elevado grau de miscigenação da população brasileira. Os dados aqui obtidos são de relevância clínica, uma vez que a microcitose e a hipocromia são comumente interpretadas como sinais de deficiência de ferro Abstract: Microcytosis and hypochromia, without the concomitant increase of HbA2, may be caused by a-thalassemia, sideropenia or, occasionally, chronic disease anemia. Not rarely, individuaIs with microcytosis and hipochromia, without anemia and elevated HbA2, are detected on routine hematologic examination. In order to investigate the contribution of a-thalassemia in these cases, 339 individuaIs (98 Blacks and 241 Caucasians), attended as outpatients at UNICAMP University Hospital, with the exception of those ftom the Clinical Hematology ambulatories, showing total Hb ~12g/dl for women and 14g/dl for men, MCV and MCH :s;80fland 27pg, respectively, and normal or decreased Hb A2(:S;3,4%),were analyzed. Using PCR and restriction enzymes, the most common mutations causing a-thalassemia in African and Mediterranean populations (-a3.7, -a4.2, --ME,D -(a )20.5 and nondeletional aHpha , aNcola , aaNcoI and a Tsaudia forms ) were investigated, the latter for the first time among Brazilian people. One hundred sixty nine individuals (49,9%) showed a-thalassemia: 100 Caucasians (29,5%) and 69 Blacks (20.4%). Among Caucasians, 89 (36.9%) were -a3.7 heterozygotes (-a3.7Iaa), 6 (2.5%) homozygotes (- a3.7/-a3.7), 4 (1,7%) were heterozygous for the nondeletional aHplúa (aHplúa/aa) and 1 (0,4%) was heterozygous for --MEDdeletion (-_MEDlaa).Among Blacks, 56 (57.1%) had the - a3.7laa genotype, 12 (12.2%) the -a3.7/-a3.7genotype and 1 (1,0%) was heterozygous for aHplúa (aHplúa/aa). These results demonstrate that, in the analyzed population, a-thalassemia is an important cause of microcytosis and hypochromia in individuaIs without anemia, contributing with about 50% ofthe cases (48% caused by the -a3.7deletion and around 2% by other mutations, such as __MEDand a,HphIa,).Although the _a,3.?deletion is known to occur at high frequencies in African descendants,its presenceamong Caucasians is probably due to the elevated degree of miscegenation of the Brazilian population. The data obtained here are of clinical relevance, once microcytosis and hypochromia are very often interpreted asindicators of iron deficiency Mestrado Patologia Clínica Mestre em Ciências Médicas

Orientador: Antonio Sergio Ramalho Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Doutorado Doutor em Ciências

Orientador: Fernando Ferreira Costa Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas Resumo: As síndromes talassêmicas constituem um grupo heterogêneo de doenças genéticas causadas por mutações que afetam a síntese de uma ou mais cadeias globínicas, designadas de acordo com o tipo de cadeia cuja síntese está prejudicada. Nas f3-talassemiasocorre supressão parcial ou total das cadeias f3,o que provoca o excesso de subunidades livres de a-globinas instáveis, insolúveis e formam agregados chamados corpos de inclusão, responsáveis pela destruição de precursores eritróides. Os homozigotos para a f3-talassemia que apresentam anemia grave, necessitam de transfusões sangüíneas regulares, o que produz acúmulo de ferro no organismo, afetando principalmente o fígado, o coração e as glândulas endócrinas. Recentemente foi descrito o gene AHSP (Alpha Haemoglobin Stabilizing Protein) que pode ter participação na síntese de hemogiobina. A proteína produzida por este gene forma um complexo estável quando ligado a a-globinas livres, funcionando como uma chaperona molecular evitando a precipitação das cadeias nas células. O papel desta proteína nas síndromes talassêmicas ainda não está esclarecido, embora haja evidências de que ela possa desempenhar função importante quando existe excesso de cadeias a como nas f3-talassemias. Com base nesses dados, propomos o estudo do efeito da supressão da expressão do gene AHSP em células da linhagem eritroleucêmica humana K562 (ATCC), através do silenciamento gênico por interferência de RNA e em culturas de células mononucleares do sangue periférico de indivíduo portador da mutação no códon 75 do gene AHSP, para análise durante a diferenciação celular. As células mononucleares do indivíduo mutante e do controle foram obtidas a partir do sangue de doadores voluntários no ambulatório do Hemocentro da UNICAMP e foram submetidas a um sistema de cultura de células em duas fases. Através dos resultados obtidos foi possível observar que não houve a interferência esperada do gene AHSP nas condições testadas. Os resultados obtidos também demonstraram expressão diferencial no gene AHSP na presença da mutação no códon 75 que talvez esteja relacionada com a evolução clínica na ~-talassemia. Estes dados sugerem uma importante função do gene AHSP durante a diferenciação eritróide Abstract: Thalassemia syndromes are a heterogeneous group of genetics diseases caused by mutations that affect the synthesis of one or more hemoglobin chains. In ~-thalassemia partial or total suppression of ~ - chains occurs, provoking the excess of ITeea-globin chains, which are insoluble and form aggregates called inclusion bodies, responsible for the destruction of erythrocyte precursors. Homozigotes for ~-thalassemia that present serious anemia, need regular blood transfusions, leading to the accumulation of iron in the organism, affecting mainly the liver, the heart and the endocrine glands. Recently the AHSP gene was described which may have a participation in hemoglobina synthesis. The protein produced for this gene forms a stable complex with free a-globin, functioning as molecular chaperone. The role of this protein in the thalassemia syndromes hass still not been determined, although it may e predicted that it may play an important function when an excess of chains exists as in the thalassemias. Based on these data we investigated in this project the effect ofthe suppression ofthe expression of AHSP by RNAi gene silencing in the human leukemic cell line, K562 (ATCC) and in cultures of mononuclearcells of the peripheral blood derived ITomdonor with AHSP mutation at codon 75, for analysis during the cellular differentiation. For the analysis of the cellular differentiation, the cells, obtained ITomthe blood of volunteers at the Hematology and Hemotherapy Center of the UNICAMP will be submitted to a system of culture of cells in two phases. These results demonstrated that it was not possible obtain interference of the expression of AHSP. These results also demonstrated differential expression in the AHSP gene when the mutation at codon 75 was presented and maybe was related with the clinical evolution in thalassemia. Based on this data, we proposed an important function of AHSP gene during the erythroid differentiation Mestrado Medicina Experimental Mestre em Fisiopatologia Médica

Orientador: Antonio Sergio Ramalho Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Apesar de a hematúria ser uma manifestação clínica importante da hemoglobina S, existe na literatura uma inconsistência de dados a respeito da sua real freqüência e da sua exata fisiopatogenia nas síndromes falcêmicas. O presente estudo teve por objetivo determinar a freqüência da hematúria e investigar a sua origem entre 50 pacientes falcêmicos adultos portadores de anemia falciforme (35 homozigotos SS), hemoglobinopatia SC (10 heterozigotos SC) e S/ ß -talassemia (5 heterozigotos S/ ß ¿tal.). A presença de hematúria foi investigada através do exame sumário de urina (Urina I) e a sua origem glomerular ou não glomerular foi determinada pela pesquisa do dismorfismo eritrocitário. A ocorrência de hematúria foi investigada também dentre os antecedentes clínicos dos pacientes. A freqüência de hematúria encontrada na amostra total foi de 22% (25,7% dos SS; 20% dos SC e em nenhum dos S/ ß talassêmicos), tendo a sua origem glomerular sido constatada em 20% dos casos. Por outro lado, episódios antecedentes de hematúria foram verificados em 36% dos casos (31,4% dos pacientes com anemia falciforme, 50% dos heterozigotos Sc e em 2 dos pacientes com S/ ß -talassemia). Estas proporções não variaram com o sexo e a idade dos pacientes. Os resultados obtidos permitiram as seguintes conclusões: 1. A hematúria é uma manifestação clínica freqüente, tanto na anemia falciforme quanto na hemoglobinopatia SC, as duas síndromes falcêmicas de maior prevalência em populações brasileiras; 2.A ocorrência de hematúria não diferiu significativamente entre os pacientes portadores de anemia falciforme e da hemoglobinopatia SC. Já a incidência de hematúria entre os pacientes com anemia falciforme foi significativamente superior à encontrada por Ramalho colaboradores (1978) em indivíduos com o traço falciforme da mesma área geográfica, indicando que as sugestões existentes na literatura a respeito de a prevalência da hematúria ser maior entre os heterozigotos SC e AS que entre os homozigotos SS devem ser revistas; 3. A freqüência de hematúria foi ainda mais elevada quando se investigou os antecedentes clínicos dos portadores falcêmicos. A proporção de casos com hematúria verificada entre os antecedentes clínicos dos pacientes com anemia falciforme foi significativamente maior que a constatada por Hutz (1981) entro pacientes SS do Rio de Janeiro. Da mesma forma, a freqüência de antecedentes positivos de hematúria entre os pacientes se examinados foi significativamente superior àquela verificada por Gomes e Ramalho (1989) entre heterozigotos se da mesma área geográfica. Tais comparações, no entanto devem ser interpretadas com cautela, uma vez que a freqüência de antecedentes clínicos de hematúria depende do vários fatores, sobretudo do tempo de seguimento médico dos pacientes falcêmicos; 4. A hematúria não é uma alteração sugestiva das síndromes falcêmicas em nosso meio, uma vez que a sua incidência entre os pacientes com a hemoglobina S não diferiu significativamente da observada na amostra hospitalar geral; 5. As síndromes falcêmicas devem ter uma pequena importância relativa como causadoras de hematúria em nosso meio, devendo estar incluídas, juntamente com os tumores e outras causas, dentre os 8,5% casos de etiologia a esclarecer; 6. A origem glomerular da hematúria, embora significativa, não deve ser a mais freqüente nas síndromes falcêmicas. Desta forma, as lesões pós - glomerulares devem ocupar lugar de destaque na fisiopatogenia da hematúria pela hemoglobina S; 7. Seria recomendável a inclusão do exame sumário de urina e da pesquisa de dismorfismo eritrocitário no protocolo de seguimento falcêmicos, devido à sua fácil realização, baixo custo operacional e importante contribuição na orientação clínica destes pacientes Mestrado Genética Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Fernando Ferreira Costa Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: As síndromes talassêmicas compreendem um grupo heterogêneo de doenças hereditárias em que existe urna redução no ritmo de síntese de urna ou mais cadeias polipeptídicas da hemoglobina.Nas ß-talassemias ocorre supressão total ou parcial da produção de cadeias ß. O estado homozigótico da maioria das variantes genéticas de ß-talassemia produz o quadro clínico da talassemia maior ou anemia de Cooley. Esses pacientes apresentam acentuada anemia e necessitam de transfusões sangüíneas regulares para sobreviverem. Os indivíduos heterozigotos para ß-talassemia apresentam, com raras exceções, apenas discreta anemia. Existem ainda alguns quadros clínicos não tão graves quanto à forma homozigótica clássica, geralmente não dependentes de transfusão, que são denominados de "talassemia intermediária". A baixa produção de ß-globina em ß-talassemia, com a síntese normal de ?-globinas resulta num excesso de cadeias a que são responsáveis pela eritropoiese não eficaz, danos à membranas de eritrócitos e redução da vida-média de células vermelhas. Recentemente foi descrita urna proteína que formaria um complexo estável quando ligado à a-globinas, evitando que estas sofressem oxidação e precipitação. Esta proteína foi denominada AHSP (Alpha Hemoglobin Stabilizing Protein). A caracterização da proteína foi feita em camundongos e, até a presente data, não são encontrados dados da expressão do gene em humanos. Durante o desenvolvimento deste trabalho foram feitas análises de expressão gênica durante a diferenciação eritróide humana e em pacientes com ß-talassemia, evoluções clínicas maior e intermediária e em indivíduos controles. Foram feitas também análises da seqüência de DNA na procura de polimorfismos ou mutações que pudessem estar relacionados com a modulação da expressão ou relacionados com a doença. A análise da expressão gênica durante a diferenciação eritróide em humanos, mimetizada por cultura de precursores eritróides em cultura de duas fases indica que o gene AHSP está sendo requerido durante toda a diferenciação celular, sugerindo que possivevelmente AHSP está sendo requerido para estabilizar cadeias-? para a formação de hemoglobina. Em pacientes com ß-talassemia,a expressão do gene AHSP está aumentada em pacientes com clínica lntermediaria quando comparados com pacientes com clínica Maior e controles, enquanto que a expressão de ?-globina não demonstra diferenças entre os grupos. Mas dados da razão da expressão do gene AHSP/a-globina demonstram que, quando comparados com os dados obtidos da cultura, os grupos provavelmente apresentam diferenças pelo fato de que ß-talassemia intermediária apresentar mais eritroblastos que os outros grupos, mostrando que possivelmente AHSP não apresenta relação com a evolução clinicaem ß-talassemias. As análises de polimorfismos demonstraram polimorfismos que podem estar relacionado com ß talassemia e uma mutação que pode estar alterando a estrutura protéica de AHSP e talvez contribuindo para a pior evolução clinica de pacientes heterozigotos para ß talassemia. Baseado nestes dados nós prevemos uma importante função deste gene durante a diferenciação eritróide normal, descrevemos polimorfismos que podem relacionar o gene AHSP com ß-talassemias na população estudada durante o desenvolvimento deste trabalho, descrevemos aqui a primeira mutação detectada no gene AHSP que possa mostrar uma possível relação desta proteína com a evolução clinica em ß-talassemia, mas uma importância concreta do gene AHSP na fisiopatologia da ß-talassemia ainda não está bem estabelecida Abstract: Thalassemia syndromes are a heterogeneous group of heredity diseases in which there is a reduction in the synthesis of one or more hemoglobin chains. In ß-thalassemia there is a reduction or total suppression of the ß-globingene expression. The homozygous state of most ß-thalassemia genetic variants produces the clinic evolution of major thalassemia or Cooley's anemia. These patients present severe anemia and require regular blood transfusions in order to survive. Heterozygous individuaIs present, with exceptions, discrete anemia. There are some clinical evolutions, not as severe as the classic homozygous form, which are often blood transfusion independent, named ß-thalassemia intermedia. Lower levels of ß-globinin ß-thalassemia,with normal synthesis of ?-globin lead to an unbalanced globin synthesis and to an excessive production of ?-globin chains. This results in ineffectiveery thropoiesis, erythrocyte membrane damage and a shortened lifespan of red blood cells. Recently, a protein forming a stable complex when connected with ?-globin avoiding thus the deleterious effects of ?-globin precipitation and oxidation has been described. This protein has been denominated AHSP (Alpha Hemoglobin Stabilizing Protein) and its characterization has only been performed on mice. Until now no data regarding the expression in human genes has been found. The present study analyzed the gene expression of the AHSP gene during human erythroid cell differentiation and in major and intermedia homozygous ß-thalassemia patients and in controls. DNA analysis was performed in order to detect polymorphisms or mutations possibly related to expression modulation or to the disease. The gene expression analysis during human erythroid cell differentiation, reproduced by the culture of the erythroid precursor in two phases demonstrated that the AHSP gene is required during the entire cell differentiation, suggesting that AHSP may possibly be required to stabilizea-chains in order to form hemoglobin .In ß-thalassemic patients, the AHSP gene expression was increased in intermedia patients compared to major patients and controIs, however no difference regardinga-globin gene expression was demonstrated between the groups. Ratio data of the AHSP/a-globin gene expression demonstrated that, when compared with the cell differentiation data, the groups probably presented differences due to the fact that ß-thalassemia intermedia patients presented more erythroblasts than the other groups, suggesting that AHSP may not be related to the clinicalevolution of ß-thalassemia. The polymorphisms analyses showed some one that could be relationship with ß-thalassemia and a mutation that could be changing the AHSP structure an may contributing to a worse clinicevolution in patients heterozygous to ß-thalassemia. Based on these data we suggest that the AHSP gene plays an important role during normal erythroid differentiation, described some polymorphisms that could be relation AHSP gene with ß-thalassemia,described the first mutation on AHSP gene that could show a possible relation of the AHSP with the clinic evolution in ß thalassemia,but a real importance of the AHSP gene in ß-thalassemia pathophysiology is not clearly Mestrado Biologia Estrutural, Celular, Molecular e do Desenvolvimento Mestre em Fisiopatologia Médica

Orientador: Fernando Ferreira Costa Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: Persistência Hereditária de Hemoglobina Fetal (PHHF) consiste num grupo heterogêneo de desordens hereditárias, clinicamente benignas, onde ocorrem falhas na mudança perinatal normal de hemoglobina fetal para hemoglobina adulta, resultando em altos níveis de Hb F durante a vida adulta. Suas alterações moleculares correspondem a desordens no grupo de genes p, sendo divididas em duas categorias: as formas delecionais e as substituições de um nuc1eotídeo. Um total de seis delecões relacionadas a PHHF já foram descritas na literatura, sendo associadas a aumentos de ambos os tipos de cadeias y (y A e y_. (õP)O - Talassemias também se originam a partir de deficiências gênicas, em muitos casos bastante similares às que originam as formas delecionais de PHHF, entretanto com menor incremento de Hb F e concomitância de hipocromia e microcitose nas hemácias. Três hipóteses principais foram propostas para explicar a relação destas deleções com a não supressão normal dos genes y na fase adulta: a remoção de regiões competidoras pelo LCR, a justaposição de elementos acentuadores e a remoção de silenciadores do c1uster. Neste trabalho, investigamos a presença de deleções, associadas a PHHF e (õP)O - talassemias, no c1uster da beta-globina em doadores de sangue do Hemocentro e pacientes do Hospital das Clínicas, Unicamp. Para isto, desenvolvemos uma modificação de uma técnica descrita previamente para Distrofia Muscular Duchennel Becker, baseada na possibilidade de se identificar diferenças quantitativas na amplificação de amostras por PCR, em presença de deleções ou duplicações, onde o produto final de amplificação é diretamente proporcional à quantidade inicial de cópias da seqüência alvo. O método, que quantifica por intensidade de fluorescência, identificou em cinco indivíduos, a deleção responsável por PHHF-2, de origem africana. Identificamos também, com primers específicos que flanqueiam os pontos de quebra de deleções, a presença da (õP)O - talassemias do tipo Siciliana em dois indivíduos estudados, que são heterozigotos compostos, tendo associação desta alteração com p - talassemia e Hb S. Este trabalho contn"buiu para o desenvolvimento e aplicação de um método, particularmente mais rápido e de fácil execução, na investigação de deficiências gênicas (ou aumento do número de cópias), e que pode vir a ser utilizado no estudo de alterações, não só no c1uster da p-globina, mas também em outros genes de interesse. Além disto, os dados apresentados neste trabalho sobre a interação entre (õP)O-talassemia Siciliana com p - Talassemia e Hb S representam os primeiros casos descritos no Brasil, com caracterização clínica e molecular. Também destaca-se a presença marcante de uma alteração benigna (PHHF-2) que sabidamente pode influenciar a evolução clínica de determinadas condições, tais como p-talassemia e anemia falciforme Abstract: Hereditary Persistence of Fetal Hemoglobin are arare, heterogeneous and benign group of hereditary disorders with an abnormal switch from feta! to adult hemoglobin, resulting in high levels of Hb F in the adult stage. At a molecular leveI, they are divided in deletion and non-deletion fonns. A total of six deletions related to HPFH have been described, associated with increased levels of both y chains. Most (0(3) - Thalassemias also arise from deletions in the _ globin gene cluster, in some cases these deletions are very similar to those that origina te HPFH. However, these forms demonstra te smaller increases in Hb F and are accompanied by microcytic and hypochromic red blood cells, in the heterozygote state. Three main hypothesis were proposed to explain the relationship between these deletions and the non-suppression of y genes: the removal of competitive regions that interact with the LCR; the juxtaposition of enhancer elements; and the removal of silencers. Here we investigate the presence of gene deletions, associated with HPFH and (o_) - Thalassemia in blood donors at the Hemocenter and patients from the Clinical Hospital, Unicamp. For this, we developed a modification of a technique, described first in Duchenne/ Becker dystrophy, based on the possibility of identifying quantitative differences in the amplifications of samples by PCR, in the presence of deletion or duplication carriers, in which the final product of amplification is direct1y proportional to the initial amount of copies of the sequence targets. The method, employing fluorescence intensity for quantification, identified a deletion responsible for HPFH-2, in five individuais of African origino We also identified, using specific primers that bridge the breakpoints, the presence of Sicilian (0(3) - Thalassemia in two individuais that are compound heterozygous for (_) - Tha1assemia and Hb S, respectively. The sequence analysis revealed the same characteristics described for these alterations. This study contributes to the development and application of an extremely rapid and practical method for the identification of deletions (or increase in gene copy number), which could be used in the study of alterations, not only in the (3 globin gene cluster, but also in other genes of interest. Moreover, the data presented here regarding the alterations in Sicilian (0(3) - Thalassemia in association with ((3) - Thalassemia and HbS represents the first cases described in Brazil, with clinical and molecular characterisation. In addition, there is a strong presence of a benign alteration (HPFH-2), that can ameliorate some conditions, such as ((3) - Thalassemia and Sickle Cell Disease Mestrado Ciências Básicas Mestre em Clínica Médica

Red blood cell disorders represent the most common single-gene defects and pose a major public health problem, particularly in tropical countries, occurring with high frequency. Their diagnose can sometimes be difficult due to the coexistence of different causes of anemia, such as thalassemia and iron deficiency, and blood transfusions, among other factors, and requires expensive and complex molecular tests. In this work, blood samples from patients with different syndromes of alphathalassemia and iron deficiency (including anemia) as well as healthy (control) subjects were analyzed under a Leica TCS SP8 confocal microscope Samples exhibited autofluorescence when excited at 405 nm and three experimental descriptors calculated from the mean emission intensities at 502 nm, 579 nm, 628 nm, and 649 nm allowed us to discriminate between diseased and healthy cells. According to the results obtained, spectral confocal microscopy could serve as a tool in the diagnosis of thalassemia.

Orientador: Lilian Maria de Castilho Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: A seleção de sangue compatível para prevenir a aloimunização eritrocitária em pacientes em regime de transfusão crônica, em particular, os pacientes com anemia falciforme, ?-talassemia e síndrome mielodisplásica, tem sido amplamente debatida. Embora não exista um consenso sobre o melhor protocolo, a meta é fornecer sangue com alta sobrevida na circulação do paciente e que também evite a aloimunização eritrocitária, se possível. Enquanto seria benéfico fornecer sangue com compatibilidade estendida para os antígenos eritrocitários mais imunogênicos, esta prática poderia dificultar a seleção da unidade de sangue a ser transfundida, resultando em demora no atendimento transfusional e aumento de custos na busca de unidades de sangue antígenos-negativos. Nos últimos anos, os testes moleculares demonstraram ser uma excelente ferramenta para melhorar a terapia transfusional de pacientes em regime de transfusão crônica, porque podem ser usados para genotipar pacientes e doadores e assim manter um estoque de unidades de sangue genotipadas. Utilizando esta ferramenta, procuramos identificar o perfil dos principais alelos de grupos sanguíneos e variantes RHD e RHCE em pacientes falciformes, talassêmicos e portadores de SMD em regime de transfusão crônica e realizar a compatibilidade molecular em diferentes níveis com o objetivo de identificar as necessidades transfusionais destes pacientes. Nossos resultados demonstram que a genotipagem deve ser o método padrão ouro para identificação do perfil antigênico de pacientes em regime de transfusão crônica e que a compatibilidade molecular pode ser utilizada para selecionar doadores compatíveis para estes pacientes. Apesar de termos encontrado doadores compatíveis para a maioria dos pacientes, verificamos que ainda não conseguimos atender a necessidade transfusional dos pacientes que apresentam variantes RH e que encontram-se aloimunizados, pois o número de doadores genotipados ainda é insuficiente. A utilização da compatibilidade molecular utilizando um banco de doadores genotipados, pode aumentar a segurança transfusional de pacientes com anemia falciforme, talassemia e SMD, reduzindo suas necessidades transfusionais e o risco de reações adversas como TRALI e doenças infecciosas Abstract: Provision of antigen-matched blood to prevent antibody formation in the transfusion management of patients who require chronic transfusion therapy, in particular patients with sickle cell disease (SCD) and thalassaemia, has been the subject of heated debates. There is still no consensus as to the best and most practical approach, although the goal is to not only provide blood that will survive maximally but also to avoid immunization to blood group antigens whenever possible. While it would be beneficial to always provide extended phenotype-matched RBCs, patient¿s phenotypes can make donor unit select difficult, potentially resulting in delays and increased cost of multiple antigen-negative red cell units. In the past years, molecular DNA-based genetic methods have been provided an excellent tool for improved transfusion therapy for chronically transfused patients because they can be used to genotype patients and donors and maintain an inventory of units DNA typed for searching of compatible donors. In the past years, molecular DNA-based genetic methods have been provided an excellent tool for improved transfusion therapy for chronically transfused patients because they can be used to genotype patients and donors and maintain an inventory of units DNA typed for searching of compatible donors. Using this tool, we identified the antigen profile of the major alleles of blood groups and RHD and RHCE variants in sickle cell patients, thalassaemia and those with SMD chronically transfused and performed molecular matching at different levels in order to identify compatible donors for the transfusion needs of these patients. Our results showed that red cell genotyping is the only way to accurately determine SCD, thalassaemia and SMD patient's RBC antigens and that the use of molecular matching can help in the searching of compatible donors. Although we found compatible donor for most patients, we realized that the number of RH genotyped donors available is limited at present to fulfill the needs of patients with variants and confirmed alloantibodies. The use of higher-matched blood provided by molecular typing using a dry matching inventory for patients with SCD, thalassaemia and MDS can reduce transfusion requirements, reducing the risk of other adverse reactions like transfusion-related acute lung injury and potential exposure to infectious disease Mestrado Clínica Médica Mestra em Clínica Médica CAPES 01P-03487-2014

Seqüenciació de nova generació; Trastorns d’anèmia rars; Hemoglobinopaties inestables Next generation sequencing; Rare anemia disorders; Unstable hemoglobinopathies Secuenciación de nueva generación; Trastornos raros de la anemia; Hemoglobinopatías inestables Unstable hemoglobinopathies (UHs) are rare anemia disorders (RADs) characterized by abnormal hemoglobin (Hb) variants with decreased stability. UHs are therefore easily precipitating, causing hemolysis and, in some cases, leading to dominant beta-thalassemia (dBTHAL). The clinical picture of UHs is highly heterogeneous, inheritance pattern is dominant, instead of recessive as in more prevalent major Hb syndromes, and may occur de novo. Most cases of UHs are not detected by conventional testing, therefore diagnosis requires a high index of suspicion of the treating physician. Here, we highlight the importance of next generation sequencing (NGS) methodologies for the diagnosis of patients with dBTHAL and other less severe UH variants. We present five unrelated clinical cases referred with chronic hemolytic anemia, three of them with severe blood transfusion dependent anemia. Targeted NGS analysis was performed in three cases while whole exome sequencing (WES) analysis was performed in two cases. Five different UH variants were identified correlating with patients’ clinical manifestations. Four variants were related to the beta-globin gene (Hb Bristol—Alesha, Hb Debrousse, Hb Zunyi, and the novel Hb Mokum) meanwhile one case was caused by a mutation in the alpha-globin gene leading to Hb Evans. Inclusion of alpha and beta-globin genes in routine NGS approaches for RADs has to be considered to improve diagnosis’ efficiency of RAD due to UHs. Reducing misdiagnoses and underdiagnoses of UH variants, especially of the severe forms leading to dBTHAL would also facilitate the early start of intensive or curative treatments for these patients. This study was supported by funding from the authors’ institutions and the European Commission H2020-MSCA-ITN-2019, Grant Agreement N860436, “EVIDENCE.”

Objective: To evaluate the prevalence and severity of malocclusion in children suffering from β-thalassemia and to assess orthodontic treatment need using Grainger’s Treatment Priority Index (TPI) and index of orthodontic treatment need (IOTN)-dental health component (DHC). Methods: A cross-sectional study was conducted on 200 transfusion-dependent children diagnosed with homozygous β-thalassemia and 200 healthy school children aged 11-17 years. The TPI and IOTN-DHC data was recorded for both groups. Total TPI score for each subject was calculated and graded according to malocclusion severity estimate (MSE). Independent sample t-test was used to compare mean TPI scores, overjet and overbite between thalassemic and healthy children. Chi-square test was used to compare the frequency of IOTN-DHC grades, Angle’s classification, and MSE grades between thalassemic and healthy children. Results: The most prevalent malocclusion was Class I in normal children (67.5%) and Class II in thalassemic children (59%). The mean overjet and overbite were significantly (p

As talassemias configuram doenças relacionadas à síntese deficiente ou ausente de cadeias da hemoglobina, sendo mais comuns as dos tipos α e β. A forma major é considerada rara e possui uma apresentação clínica ampla, caracterizada por manifestações sistêmicas da anemia grave, como alterações ósseas, hepatoesplenomegalia, cardiopatias, hepatopatias, hipogonadismo, hipotireoidismo, diabetes mellitus, dentre outras. As complicações relacionadas a tais achados se tornam mais evidentes com o retardo do diagnóstico e tratamento inadequado. A raridade de ocorrência na região norte do Ceará e as questões socioeconômicas que envolvem a detecção da doença e condução clínica da paciente pediátrica referida torna importante a devida divulgação na comunidade científica do relato e das questões relacionadas ao tratamento, no intuito de estimular o aprimoramento de políticas públicas que beneficie os pacientes talassêmicos.

Orientador: Kleber Yotsumoto Fertrin Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: Pacientes com hemoglobinopatias podem necessitar de transfusões, o que pode levar a sobrecarga de ferro. O exame de ressonância magnética (RM) pela sequência de T2* é um método não invasivo, sensível e específico para medir a concentração de ferro hepática (LIC) e a concentração de ferro miocárdica (MIC), mas não é tão disponível em países em desenvolvimento onde a doença falciforme (DF) e a talassemia (TAL) são mais prevalentes, quanto os exames de bioquímica tradicionais. O objetivo desse estudo foi avaliar e comparar sobrecarga de ferro em pacientes com DF e TAL em seguimento no Hemocentro Campinas avaliados tanto com exames tradicionais de bioquímica (ferritina sérica, ferro sérico, capacidade total de ligação ao ferro ¿ TIBC, e índice de saturação de transferrina ¿ IST) e hemograma completo, quanto com LIC e MIC medidos por RM, e estudar as correlações entre essas medidas. Analisamos dados de pacientes avaliados entre abril de 2014 a dezembro de 2018. Os dados foram obtidos a partir dos sistemas informatizados do serviço de Ressonância Magnética, Hemocentro Campinas e do Laboratório de Patologia Clínica do Hospital de Clínicas da UNICAMP. Foram incluídos dados de 36 pacientes (25 com DF e 11 com TAL). Sobrecarga de ferro hepática foi encontrada em 23 (92%) pacientes com DF e em 10 pacientes (90%) com TAL. Dois pacientes com TAL apresentaram sobrecarga de ferro miocárdica e foi identificado um caso de sobrecarga de ferro cardíaca grave com desfecho fatal em um paciente com DF. Uma revisão sistemática da literatura mostrou que essa complicação rara está possivelmente associada com alto volume transfusional e má adesão a terapia de quelação de ferro. Em relação aos exames da população do estudo, a ferritina sérica se correlacionou com LIC (r=0.59, P 2mg/g was detected in 23 (92%) of SCD patients and in 10/11 (90%) in the THAL group. Two patients from the THAL group had cardiac iron overload, and we identified one case of severe cardiac IO with a fatal outcome in the SCD group. A systematic review showed that this rare complication in SCD may be associated with high transfusion burden and poor adhesion to iron chelation therapy. Regarding the lab and imaging tests, serum ferritin correlated with LIC (r = 0.59 P

© Springer-Verlag GmbH Germany 2017, Inherited deletions of α-globin genes and/or their upstream regulatory elements (MCSs) give rise to α-thalassemia, an autosomal recessive microcytic hypochromic anemia. In this study, multiplex ligation-dependent probe amplification performed with commercial and synthetic engineered probes, Gap-PCR, and DNA sequencing were used to characterize lesions in the sub-telomeric region of the short arm of chromosome 16, possibly explaining the α-thalassemia/HbH disease phenotype in ten patients. We have found six different deletions, in heterozygosity, ranging from approximately 3.3 to 323 kb, two of them not previously described. The deletions fall into two categories: one includes deletions which totally remove the α-globin gene cluster, whereas the other includes deletions removing only the distal regulatory elements and keeping the α-globin genes structurally intact. An indel was observed in one patient involving the loss of the MCS-R2 and the insertion of 39 bp originated from a complex rearrangement spanning the deletion breakpoints. Finally, in another case, no α-globin gene cluster deletion was found and the patient revealed to be a very unusual case of acquired α-thalassemia-myelodysplastic syndrome. This study further illustrates the diversity of genomic lesions and underlying molecular mechanisms leading to α-thalassemia.

European Society of Human Genetics, 27-30 May 2017 Introduction: Inherited deletions removing the α-globin genes and/or their upstream regulatory elements (MCSs) give rise to alpha-thalassemia, one of the most common genetic recessive disorders worldwide. The pathology is characterized by microcytic hypochromic anemia due to reduction of the α-globin chain synthesis, which are essential for hemoglobin tetramerization. Material and Methods: In order to clarify the suggestive α-thalassemia phenotype in eleven patients, we performed Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification with commercial and synthetic probes, gap-PCR, and Sanger sequencing to search for deletions in the subtelomeric region of chromosome 16p. Results: We have identified six distinct large deletions, three of them novel, and one indel. The deletions range from approximately 3.3 to 323 kb, and i) remove the whole α-globin cluster; or ii) remove exclusively the upstream regulatory elements leaving the α-globin genes structurally intact. The indel consists in the loss of MCS-R2 (HS-40), which is the most important distal regulatory element for the α-globin gene expression, and the insertion of 39 nt, seemingly resulting from a complex rearrangement involving two DNA segments (probably from chromosome 3q), bridging the deletion breakpoints with a CC-bp orphan sequence in between. Finally, in one patient no α-globin deletion or point mutation were found. This patient revealed to have acquired alpha-thalassemia associated with a myelodysplastic syndrome. Conclusions: Our study widens the spectrum of molecular lesions by which α-thalassemia may occur and emphasizes the importance of diagnosing large α0-deletions to provide patients with appropriate genetic counseling. info:eu-repo/semantics/publishedVersion