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Apperantly healthy laying hens at the end of production (60 to 91 wk) were investigated for the occurrence of pathology and bacterial infections. In total, 7,477 hens from 15 flocks representing the following production systems: Enriched cages, barn housed layers, and organic/free range layers were necropsied. Indications of bacterial infection were investigated by bacteriological cultivation. The overall prevalence of lesions was 16.60%, including lesions of both infectious and non-infectious origin. The most prevalent lesions were bursitis presternalis (6.65%), reproductive tract lesions (e.g., salpingitis and/or peritonitis and/or oophoritis) (3.50%), serosal scarification (e.g., fibrotic adhesive peritonitis) 1.55%, and neoplasm 1.73%. Significant differences were observed between different production systems and/or flocks in the prevalence of reproductive tract lesions, bursitis presternalis, serosal scarification, skin infections, juvenile hens, and traumas/fractures. No significant difference was observed between different production systems in the prevalence of neoplasia, infection of septicemic etiology, and pododermatitis. In total, 3.4% of the hens were out of lay, with significantly higher rate in organic flocks. Infections of the reproductive tract were the most prevalent lesions with bacterial etiology in all productions systems. In total, 40% of the hens with lesions associated to the oviduct were out of lay and significant difference between production systems were observed. Escherichia coli was the most commonly isolated bacteria and in 90% of the cases they were isolated from the reproductive tract lesions. The second most prevalent bacteria was Gallibacteruim anatis. Significant difference in the prevalence of E. coli positive hens was observed between production systems (P < 0.05). In conclusion, the prevalence of reproductive tract lesions in apparently healthy end-of-lay laying was higher than indicated in previous reports. These findings support the previous suggestions that E. coli and G. anatis are the major pathogens causing reproductive tract lesions.

The epidemiology of Middle East respiratory syndrome coronavirus (MERS-CoV) since 2012 has been largely characterized by recurrent zoonotic spillover from dromedary camels followed by limited human-to-human transmission, predominantly in health-care settings. The full extent of infection of MERS-CoV is not clear, nor is the extent and/or role of asymptomatic infections in transmission. We conducted a review of molecular and serological investigations through PubMed and EMBASE from September 2012 to November 15, 2018, to measure subclinical or asymptomatic MERS-CoV infection within and outside of health-care settings. We performed retrospective analysis of laboratory-confirmed MERS-CoV infections reported to the World Health Organization to November 27, 2018, to summarize what is known about asymptomatic infections identified through national surveillance systems. We identified 23 studies reporting evidence of MERS-CoV infection outside of health-care settings, mainly of camel workers, with seroprevalence ranges of 0%–67% depending on the study location. We identified 20 studies in health-care settings of health-care worker (HCW) and family contacts, of which 11 documented molecular evidence of MERS-CoV infection among asymptomatic contacts. Since 2012, 298 laboratory-confirmed cases were reported as asymptomatic to the World Health Organization, 164 of whom were HCWs. The potential to transmit MERS-CoV to others has been demonstrated in viral-shedding studies of asymptomatic MERS infections. Our results highlight the possibility for onward transmission of MERS-CoV from asymptomatic individuals. Screening of HCW contacts of patients with confirmed MERS-CoV is currently recommended, but systematic screening of non-HCW contacts outside of health-care facilities should be encouraged.

Extreme heterogeneity was found within and between influenza types, which should be considered in planning of mitigation campaigns., Influenza infection manifests in a wide spectrum of severity, including symptomless pathogen carriers. We conducted a systematic review and meta-analysis of 55 studies to elucidate the proportional representation of these asymptomatic infected persons. We observed extensive heterogeneity among these studies. The prevalence of asymptomatic carriage (total absence of symptoms) ranged from 5.2% to 35.5% and subclinical cases (illness that did not meet the criteria for acute respiratory or influenza-like illness) from 25.4% to 61.8%. Statistical analysis showed that the heterogeneity could not be explained by the type of influenza, the laboratory tests used to detect the virus, the year of the study, or the location of the study. Projections of infection spread and strategies for disease control require that we identify the proportional representation of these insidious spreaders early on in the emergence of new influenza subtypes or strains and track how this rate evolves over time and space.

Endometritis in the mare still constitutes a great problem in the management of broodmares. Inflammatory processes of the equine uterus can be classified as acute, chronic or subclinical endometritis. All these conditions may cause substantial reductions of a mare’s fertility. In recent years the problem of subclinical inflammatory processes with hidden or subtle clinical signs became more obvious. Although several diagnostic methods such as rectal palpation, transrectal ultrasonography, vaginal examination, uterine culture, cytology or endometrial biopsy are available, the correct diagnosis of subclinical endometritis challenges practitioners in the field. Therefore, the overall objective of this study was to evaluate the ability, the reliability and the representativeness of the commonly used diagnostic techniques endometrial swab, cytological brush and endometrial biopsy to diagnose subclinical endometritis in mares. In the first study bacteriological, cytological and histological samples were taken from 55 mares without clinical signs of endometritis. A double-guarded uterine swab (US), a singleguarded cytological brush (CB) and an endometrial biopsy (EB) were taken consecutively under manual control, smeared on microscopic slides for cytological examination and cultured for bacterial growth. Additionally, endometrial biopsy samples were evaluated for polymorphonuclear neutrophils (PMN) in the stratum compactum by a histopathological institute. Bacteriological cultures and cytological samples were classified as negative (no uterine pathogens in monoculture; < 2% PMN) or positive (uterine pathogens in > 90% of the grown colonies; > 2% PMN) for endometritis. Uterine pathogens were found in 20.0% of the mares. Isolation of pathogens was not associated with positive cytological findings (r = ´0.23; p = 0.87). Two of five mares infected with Streptococcus zooepidemicus had a positive cytological result. In contrast, none of the six mares with an Escherichia coli infection showed a positive cytological result. The histological presence of PMN in the stratum compactum of the endometrium is commonly accepted as 'best standard' to diagnose endometritis in mares. Compared to the 'best standard', sensitivity of cytology of CB, US and EB was 0.17, 0.00 and 0.25, respectively. Sensitivity of uterine culture was 0.25, 0.33 and 0.25 for CB, US and EB, respectively. Cytology in combination with a bacteriological examination of a cytological brush sample resulted in the best sensitivity of 0.42. Based on this result, a combination of a bacteriological and a cytological examination of a cytological brush sample can be recommended as an easy to perform technique to improve the diagnosis of subclinical endometritis in the field compared to the uterine culture as currently used routine method alone. The objective of the second study was to determine the distribution of PMN within different sampling locations of the equine uterus by cytological and histological examinations and to compare PMN numbers of the two techniques at the corresponding locations. We hypothesized that one sample of either method would represent the actual health status of the whole uterus and that PMN numbers correlate between the methods. Cytological and endometrial biopsy samples were taken in vitro from 37 uteri within 2 ± 1 h after slaughter from five pre-defined locations of each uterus. Cytological samples were smeared on microscopic slides, stained and classified as negative (< 2% PMN) or positive (≥ 2% PMN) for endometritis. Histologically, the number of PMN were counted by an experienced pathologist (≥ 5 PMN/3 high power fields in 40 x magnification = positive for endometritis) and grades of endometrosis ('-' to '+++') and angiosclerosis ('-' to '+++') were evaluated. The prevalence of positive cytological and histological samples was 14.6% and 17.8%, respectively. A fair agreement between the two diagnostic methods could be detected (k = 0.29; p < 0.01). A whole uterus was defined as positive for endometritis when at least one of the five sampled locations was scored as positive for the counts of PMN. A total of 10 and 14 uteri generally positive for endometritis could be detected in cytological and histological examination, respectively. Numbers of PMN differed between the sampling locations resulting in positive and negative locations within the positive uteri, in both, cytological (8/10) and histological examination (13/14). Nevertheless, significant differences of endometritis positive or negative scores within the different locations could not be detected, neither in cytological (p = 0.56) nor in histological examinations (p = 0.1). Additionally, no significant differences in classification of endometrosis (p = 0.96) and angiosclerosis (p = 0.67) within the locations could be observed. In conclusion, inflammatory processes are not spread uniformly within the endometrium. Also, the hypothesis that PMN numbers correlate between the two diagnostic methods at a chosen location has to be rejected. Further research is warranted to determine the optimal number of sampling locations in cases of different types of endometritis while maintaining practical feasibility. Overall, this thesis clearly showed that a single bacteriological or a single cytological examination of the uterus might produce false negative results to identify subclinical endometritis in mares. This might be due to the inhomogenous distribution pattern of PMN within the endometrium. And because of this, the prognostic category according to Kenney and Doig (1986) could also change within one uterus. Therefore, the results of all tested diagnostic techniques should be critically evaluated for the prediction of a mares fertility. The combination of a bacteriological and a cytological examination of the cytological brush is the most easy and promising approach for diagnosing subclinical endometritis in the field. Further research is needed to determine whether the combination of two diagnostic techniques or multiple sampling of the endometrium might improve the reliability of the diagnosis of subclinical endometritis in the mare., Die Endometritis spielt im Management von Zuchtstuten eine sehr bedeutende Rolle. Entzündliche Prozesse können in akute, chronische oder subklinische Endometritiden unterteilt werden. Jede dieser Veränderungen kann die Fruchtbarkeit der betroffenen Stute erheblich negativ beeinflussen. In den letzten Jahren hat das Problem der subklinischen Endometritis mit ihren fehlenden oder nur im geringen Ausmaß vorhandenen klinischen Anzeichen mehr und mehr an Bedeutung gewonnen. Obwohl es einige diagnostische Möglichkeiten wie rektale Palpation, transrektaler Ultraschall, vaginale Untersuchung, Uterustupfer, -zytologie und -biopsie gibt, ist es für den Praktiker dennoch schwierig die subklinische Endometritis zu diagnostizieren. Ziel dieser Arbeit war es deshalb, die drei etablierten diagnostischen Methoden Uterustupfer, -zytologie und -biopsie auf ihre Fähigkeit, ihre Verlässlichkeit und ihre Wiederholbarkeit bei der Diagnose von subklinischen Endometritiden zu testen. In der ersten Studie wurden dazu je eine Tupfer-, eine Zytologie- und eine Biopsieprobe aus dem Uterus von 55 Stuten, die keine klinischen Anzeichen einer Endometritis zeigten, genommen. Die Proben wurden mit einem doppelt behüllten Uterustupfer, einem einfach behüllten Zytologiebürstchen und einer Biopsiezange entnommen. Danach wurden sie zuerst für die zytologische Auswertung auf sterilen Objektträgern und anschließend auf entsprechenden Nährmedien ausgestrichen, um auch das bakterielle Wachstum beurteilen zu können. Zusätzlich zu den bereits genannten Untersuchungen wurden in den Biopsieproben die Anzahlen an neutrophilen Granulozyten (PMN) im Stratum compactum des Endometriums durch ein pathologisches Institut bestimmt. Die bakteriologischen und zytologischen Proben wurden entweder in 'Endometritis negativ' (keine pathogenen Keime in Monokultur; < 2% PMN) oder in 'Endometritis positiv' (pathogene Keime in > 90% des Wachtums; > 2% PMN) eingeteilt. Pathogene Keime wurden in 20% der Stuten gefunden. Positive Ergebnisse in der Zytologie waren nicht mit einem gleichzeitigen Auftreten von pathogenen Keimen verbunden (r = -0,23; p = 0,87). Zwei von fünf Stuten, die mit Streptokokkus zooepidemicus infiziert waren, zeigten ein positives zytologisches Ergebnis. Die sechs Stuten, die mit Escherichia coli infiziert waren, wiesen hingegen allesamt kein positives zytologisches Ergebnis auf. Das Vorkommen von PMN im Stratum compactum des Endometriums ist bei der Stute als der 'best standard' zur Diagnose von Endometritiden akzeptiert. Bezogen auf den 'best standard' erreichten die Zytologieproben von Tupfer, Zytologiebürstchen und Biopsie eine Sensitivität von 0,17, 0,00 und 0,25. Bei der Auswertung der Bakteriologie erreichten Tupfer, Zytologiebürstchen und Biopsie eine Sensitivität von 0,25, 0,33 und 0,25. Die beste Sensitivität (0,42) wurde durch die Kombination von zytologischer und bakteriologischer Auswertung eines Zytologiebürstchens erreicht. Im Vergleich zu der bisherigen Routineuntersuchung des Tupfers zeigt dies, dass die kombinierte zytologische und bakteriologische Auswertung eines Zytologiebürstchens empfohlen werden kann. Die Diagnose von subklinischen Endometritiden würde dadurch in der Praxis deutlich verbessert werden. Ziel der zweiten Studie war es, die Verteilung von PMN an verschiedenen Stellen in einem Uterus mittels Zytologiebürstchen und Biopsie zu untersuchen und die Anzahl der PMN zwischen den zwei diagnostischen Methoden an der jeweils selben Stelle zu vergleichen. Unsere Hypothesen waren, dass eine einzelne getestete Lokalisation eine verlässliche Aussage für den gesamten Uterus liefern kann, und dass die Anzahl der PMN zwischen den zwei Methoden für jeweils dieselbe Stelle miteinander korreliert. Die zytologischen Proben und Biopsien wurden von fünf vorher definierten Stellen aus 37 Uteri innerhalb von 2 ± 1 h nach der Schlachtung und Entfernung des Uterus aus dem Schlachtkörper entnommen. Anschließend wurden sie auf Objektträgern ausgestrichen, gefärbt und als 'Endometritis negativ' (< 2% PMN) oder 'Endometritis positiv' (≥ 2% PMN) beurteilt. Die Biopsien wurden von einem pathologischen Institut hinsichtlich der Anzahl an PMN (≥ 5 PMN/3 Gesichtsfelder in 40 x Vergrößerung = 'Endometritis positiv') wie auch auf das Vorkommen einer Endometrose und Angiosklerose (Einteilung in Grad '-' bis '+++') ausgewertet. Es wurden in 14,6% 'Endometritis-positive' Zytologieproben und in 17,8% 'Endometritispositive' histologische Proben gefunden. Das ergibt eine mäßige Korrelation von k = 0.29 (p < 0.01). Ein Uterus wurde im Gesamten als 'Endometritis-positiv' bewertet, sobald einer seiner fünf beprobten Lokalisationen als positiv befunden wurde. Insgesamt wurden in der zytologischen 10 und in der histologischen Auswertung 14 Uteri als 'Endometritis-positiv' bewertet. Die Anzahl an PMN variierte, so dass es innerhalb dieser als 'Endometritis-positiv' befundeten Uteri, sowohl 'Endometritis-positive' als auch 'Endometritis-negative' Lokalisationen gab. Dies war in 8/10 Uteri bei der zytologischen und in 13/14 Uteri bei der histologischen Auswertung eingetreten. Trotzdem konnte, sowohl bei den zytologischen (p = 0,56) als auch bei den histologischen Auswertungen (p = 0,1) kein signifikanter Unterschied bei der Endometritis-Einteilung zwischen den beprobten Lokalisationen gefunden werden. Auch bei den unterschiedlichen Graden von Endometrose (p = 0,96) und Angiosklerose (p = 0,67) konnten keine signifikanten Unterschiede festgestellt werden. Diese Studie über die Untersuchung von verschiedenen Lokalisationen zeigt, dass eine entzündliche Veränderung nicht gleichmäßig über das Endometrium verteilt ist. Auch korreliert die Anzahl an PMN bei zwei Untersuchungsmethoden an derselben Lokalisation des Uterus nicht miteinander. Daraus folgt, dass die optimale Anzahl an Proben, abhängig von der Entzündungsform und der Art der Methode, in weiteren Studien noch untersucht werden sollte. Insgesamt zeigt diese Arbeit, dass bei der Diagnose der subklinischen Endometritis sowohl eine einzelne bakteriologische als auch eine einzelne zytologische Untersuchung zu falsch negativen Ergebnissen führen kann. Dies kann darauf zurückzuführen sein, dass bei einer vorliegenden Entzündung keine einheitliche Verteilung der PMN vorhanden ist. Dieses kann dann auch zu Veränderungen in der Einteilung in eine der Kategorien nach Kenney und Doig (1986) führen. Die Ergebnisse aller hier getesteten diagnostischen Methoden sollten aus diesem Grund immer kritisch ausgewertet werden. Die kombinierte Auswertung (bakteriologisch und zytologisch) eines Zytologiebürstchens stellt in der Praxis die einfachste und sicherste Methode für eine Diagnose der subklinischen Endometritis dar. Ob entweder eine Kombination von Untersuchungsmethoden oder eine mehrfache Beprobung die größere Verbesserung in der Sicherheit der Diagnose der subklinischen Endometritis bringen kann, sollte in weiteren Studien genauer untersucht werden.

Deckblatt-Impressum Inhaltsverzeichnis Abkürzungsverzeichnis Einleitung Literaturübersicht Material Methodik Ergebnisse Diskussion Zusammenfassung Summary Literaturverzeichnis Danksagung Selbständigkeitserklärung, Für ein erfolgreiches Management in Milchviehbetrieben ist eine hohe Fruchtbarkeitsleistung eine wichtige Voraussetzung. Im Anschluss an die Kalbung sind vor allem Endometritiden maßgeblich an Störungen der Fruchtbarkeit beteiligt. Häufig bleiben jedoch subklinische Endometritiden unentdeckt und verursachen hohe wirtschaftliche Verluste. Um einen tieferen Einblick in die zellulären Vorgänge des Endometriums zu gewinnen, kann die Analyse der Gen-Expression wertvolle Informationen liefern. In der Literatur werden zahlreiche Zytokine und Enzyme diskutiert, die im Zusammenhang mit der Vorbereitung des Endometriums auf die Implantation eine wichtige Rolle spielen. Ziel der vorliegenden Arbeit war die Untersuchung der mRNA-Expression von ausgewählten pro-inflammatorischen Systemen im bovinen Endometrium. Die Gewinnung endometrialer Zellen erfolgte minimal invasiv mittels der Cytobrush®-Methode. Mit Hilfe der quantitativen RT-PCR wurde die mRNA- Expression der Entzündungsmediatoren bovines granulozytäres chemotaktisches Protein 2 (bGCP-2), der Cyclooxygenasen 1 und 2 (COX-1/-2), Haptoglobin, der Interleukine 1ß (IL-1ß), 6 (IL-6) und 8 (IL-8) sowie des Tumor Nekrose Faktors alpha (TNFα) untersucht. Im ersten Teil der Studie erfolgte die Untersuchung der mRNA-Expression anhand von Schlachthofmaterial in Abhängigkeit vom Entnahmeort (ipsilaterales, contralaterales Horn, Corpus) sowie von der Zyklusphase. Die Uteri (n=8 pro Zyklusphase) wurden in folgende Zyklusphasen eingeteilt: prä- (Tag 19-21) und postovulatorische Phase (Tag 1-5) sowie frühe (Tag 6-12) und späte Lutealphase (Tag 13-18). Alle untersuchten Mediatoren konnten im bovinen Endometrium nachgewiesen werden. bGCP-2, IL-1ß und IL-8 wurden zum Zeitpunkt um die Ovulation signifikant höher expremiert als in der Lutealphase. Es konnten keine signifikanten Expressionsunterschiede zwischen den Entnahmeorten (ipsilaterales und contralaterales Horn, Corpus) festgestellt werden. Auf einem Milcherzeugerbetrieb wurde die Expression der Entzündungsmediatoren im Endometrium von gesunden Kühen sowie Kühen mit subklinischer und klinischer Endometritis unter Feldbedingungen untersucht (jeweils n=9). Die Unterscheidung zwischen gesunden Tieren und Tieren mit subklinischer Endometritis erfolgte anhand des prozentualen Anteils an PMN im Endometrium. Betrug der Anteil an PMN über 5%, so wurden die Tiere als subklinisch krank eingestuft. Kühe mit eitrigem Vaginalausfluss wurden als klinisch krank beurteilt. Die Probengewinnung erfolgte 21 bis 27 Tage post partum. Im Vergleich zu gesunden Kühen wiesen Tiere mit subklinischer und klinischer Endometritis eine signifikant höhere mRNA-Expression der Faktoren bGCP-2, IL-1ß, IL-8 sowie TNFα im Endometrium auf. Im dritten Teil der Studie wurde die mRNA-Expression im Endometrium von Erstkalbinnen (n=5) im Verlauf des Puerperiums untersucht. Die Probengewinnung erfolgte 10, 17, 24, 31, 38 und 45 Tage nach der Kalbung. bGCP-2, COX-2, Haptoglobin, IL-1ß, IL-6, IL-8 sowie TNFα wurden am 17. Tag signifikant höher expremiert als am 31. Tag post partum. Aus den Ergebnissen der vorliegenden Arbeit lässt sich schließen, dass die angewendete Methode zur Diagnostik von subklinischen Endometritiden geeignet ist. Der Ort der Probenentnahme hatte keinen Einfluss auf das Ergebnis. Somit ist es von untergeordneter Bedeutung, ob die Proben vom ipsilateralen, contralateralen Horn oder aus dem Corpus entnommen werden. Es muss berücksichtigt werden, dass die untersuchten Entzündungsmediatoren physiologisch während des Sexualzyklus sowie im Puerperium expremiert werden. Eine Untersuchung der Gen-Expression unter Beachtung der Zyklusphase erscheint ab dem 24. Tag nach der Kalbung sinnvoll, um subklinische Endometritiden bei der Milchkuh besser zu diagnostizieren., High reproductive performance is required for successful management of dairy farms. After calving, especially endometritis is one of the main reasons for reproductive failure. However, subclinical endometritis remains undetected in many cases and causes a high financial loss. To elucidate the cellular processes in the endometrium, the acquisition of the gene expression of selected transcripts will provide helpful information. In the literature, numerous cytokines and enzymes were discussed to play important roles in preparing the endometrium for implantation. The aim of the present study was to examine of the mRNA expression of pro-inflammatory systems in the bovine endometrium. Endometrial cells were harvested by using the cytobrush®-method. Quantitative RT-PCR was performed to investigate the mRNA expression of inflammatory mediators as bovine granulocyte chemotactic protein 2 (bGCP-2), cyclooxygenases 1 and 2 (COX-1/-2), haptoglobin, interleukins 1ß (IL-1ß), 6 (IL-6) and 8 (IL-8) as well as tumor necrosis factor alpha (TNFα). In the first part of the present study, endometrial cells were collected at a local slaughterhouse. The mRNA expression was examined in relation to different regions of the uterus (ipsilateral, contralateral horn and corpus) as well as during the estrous cycle (n=8 for each phase). Bovine uteri were classified into the following four phases: pre- (day 19-21) and postovulatory phase (day 1-5), early luteal phase (day 6-12) and late luteal phase (day 13-18). All of the investigated mediators were detected in the bovine endometrium. bGCP-2, IL-1ß and IL-8 were significantly higher expressed around ovulation compared to the luteal phase. Concerning the different regions of the uterus, there was no significant difference observed between the ipsilateral, contralateral horn and the corpus. On a commercial dairy farm, the expression of the inflammatory mediators were investigated under field conditions in the endometrium of healthy cows as well as of cows with subclinical and clinical endometritis (n=9 for each group). The differentiation between healthy cows and cows with subclinical endometritis was performed in relation to the percentage of PMN in the endometrium. Subclinical endometritis was diagnosed when the percentage of PMN exceed 5%. Purulent vaginal discharge was defined as a sign for clinical endometritis. Endometrial samples were harvested between 21 and 27 days post partum. Cows with subclinical or clinical endometritis showed a significant higher mRNA expression of the mediators bGCP-2, IL-1ß, IL-8 and TNFα compared to the group of healthy cows. In the third part of the study, the mRNA expression was examined in the endometrium of heifers (n=5) directly after calving. Samples were collected on days 10, 17, 24, 31, 38 and 45 post partum. bGCP-2, COX-2, haptoglobin, IL-1ß, IL-6, IL-8 and TNFα were expressed significantly higher on day 17 compared to day 31 post partum. In addition to the results of the present study, it can be concluded that the used method is appropriate in diagnosing subclinical endometritis. Furthermore, it is not important whether the endometrial cells were collected from the ipsilateral, the contralateral horn or the corpus. It has to be considered, that the investigated cytokines were expressed physiologically during the estrous cycle and the post partum period. For a better diagnostic of subclinical endometritis in dairy cows, the mRNA expression should be investigated after day 24 post partum.