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An efficient protocol for in vitro flowering was successfully established for Impatiens balsamina cv Dwarf Bush, an important medicinal plant, through tissue culture techniques. Shoot, stem and petiole explants obtained from 4 week-old aseptic seedlings cultured on MS medium supplemented with different concentrations of plant growth regulator (PGR) were used for in vitro flower induction. Gibberellic acid (GA3), benzylaminopurine (BAP) and kinetin (Kin) treatment singly applied in MS media (pH 5.8), could all stimulate flowering at 23-26 oC with photoperiod of 16 hours light and 8 hours dark. It was observed that shoot explants were more responsive than stem explants in floral formation. Regeneration was achieved via direct organogenesis. For shoot explants, the treatment that induced the highest rate of in vitro flowering (7.30 ± 0.16 flowers per plantlet) was 1.0 mg L-1 GA3. Ultrastructural and histological analysis of in vivo and in vitro flowers were done to discover any somaclonal variation. This research described a simple protocol for rapid in vitro flowering that will be very beneficial for further breeding, cytological and molecular biology research. RESUMO: Um protocolo eficiente para a floração in vitro foi estabelecido com sucesso para Impatiens balsamina cv. Dwarf Bush, uma planta medicinal importante, através de técnicas de cultura de tecidos. Foram utilizados explantes com broto, talo e pecíolo, extraídos de mudas assépticas com quatro semanas de vida, cultivadas em meio MS, suplementadas com diferentes concentrações de reguladores de crescimento de plantas (RCP), para indução de floração in vitro. O tratamento com ácido giberélico (GA3), benzilaminopurina (BAP) e cinetina (Kin), aplicado isoladamente em meio MS (pH 5,8), conseguiu estimular a floração a 23-26 oC, com fotoperíodo de 16 horas com luz e 8 horas sem. Observou-se que os explantes de broto eram mais responsivos que os explantes de talo na formação floral. A regeneração foi obtida via organogênese direta. Para explantes de broto, o tratamento que induziu a maior taxa de floração in vitro (7,30 ± 0,16 flores por plântula) foi o de 1,0 mg L-1 GA3. Análises ultraestruturais e histológicas de flores in vivo e in vitro foram realizadas para detectar qualquer variação somaclonal. Esta pesquisa descreveu um protocolo simples para a rápida floração in vitro, que será muito benéfico para futuras pesquisas em genética, citologia e biologia molecular.

The present study reports the first efficient in vitro regeneration of Ananas erectifolius via indirect organogenesis. Leaf segments (leaf base, middle, and apex) excised from 3- or 5-week-old in vitro plantlets were cultured on 1/4 strength MS medium supplemented with different concentrations and combinations of plant growth regulators. The explants were also exposed to pulse treatment with thidiazuron (TDZ) and 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D) for different periods of time. The results showed that using juvenile rather than old explants enhanced the frequency of callus induction (35.0% and 16.0%, respectively). Among the explant types tested, only leaf base segments induced calli; the highest frequency occurred via culture treatment containing 4-amino-3,5,6- trichloropicolinic acid (picloram; 48.57%), 2,4-D (40%), or TDZ (35.71%). However, only calli generated in treatments containing TDZ or N6-isopentenyladenine (2ip) were able to develop shoots (maximum 35.71% and 14.28%, respectively). A combination of TDZ and 2,4-D improved callus induction (60.0%) but did not increase shooting response. However, both callusing and shooting response increased when 10 days of pulse treatment with TDZ and 2,4-D was applied (66.83% and 48.7%, respectively). Rooted plantlets that exhibited normal growth and development were acclimatized in a greenhouse and had a survival rate of 95%.

O objetivo deste trabalho foi estabelecer um protocolo para a regeneração in vitro de pau-rosa (Aniba rosaeodora Ducke), utilizando brotações apicais e segmentos nodais inoculados em meio de cultura com distintas concentrações de diferentes reguladores de crescimento. Explantes esterilizados com soluções de benomyl (4,0 g.L-1) por 24 horas e hipoclorito de sódio a 20% + tween 20 por 20 minutos, foram submetidos a um experimento de indução de broto, raiz e calo em meio MS1 acrescido de 30g.L-1 de sacarose e 9g.L-1 de agar, suplementado com BAP (0,0 e 4,0 mg.L-1), ANA, AIA e 2,4-D (0,0; 3,0 e 6,0 mg.L-1), e suas respectivas combinações. O delineamento utilizado foi o inteiramente casualizado em esquema fatorial 7 X 2, com 14 tratamentos e 15 repetições cada, onde foram analisados o número médio de brotos, raízes e calo. Após 90 dias, os resultados mostraram que a presença de auxinas é fundamental para a formação dos parâmetros induzidos nos explantes de pau-rosa. O meio de cultura contendo 4,0 mg.L-1 de BAP + 6,0 mg.L-1 de AIA apresentou a melhor média para a brotação com 2,13 brotos/explante. Para o enraizamento o meio contendo 3,0 mg.L-1 de ANA foi o mais eficiente, apresentando uma média de 2,53 raízes/explante. Em relação à indução de calo, todos os tratamentos apresentaram calogênese, porém o meio suplementado com 4,0 mg.L-1 de BAP + 6,0 mg.L-1 de 2,4-D, apresentou a melhor média, 1,67 calos/explante. The objective of this work was to establish a protocol for in vitro regeneration of rosewood (Aniba rosaeodora Ducke), using apical and nodal segments inoculated in culture medium with various concentrations of growth regulators. Explants disinfected with solutions of benomyl (4,0 g.L-1) for 24 hours and sodium hipoclorite in 20% + tween 20 for 20 minutes were submitted in an experiment of shoot, root and callus induction in MS medium, with 30 g.L-1 of sucrose and 9,0 g.L-1 of agar added with the growth regulators: BAP (0,0 and 4,0 mg.L-1), ANA, AIA and 2,4-D (0,0; 3,0 and 6,0 mg.L-1), and their respective combinations. The design was complete randomized in arranged factorial 7 X 2, with 14 treatments and 15 replications, where about the explants were analysed the number of shoot, root and callus . After 90 days, the results showed that the presence of auxins is fundamental to induce buds, roots and callus . The medium was contained 4,0 mg.L-1 BAP + 6,0 mg.L-1 AIA showed the best average for shooting with 2,13 buds/explants. In the rooting, the medium was contained 3,0 mg.L-1 of ANA was the more efficient, showed 2,53 roots/explant. However, all the treatments obtained formation of callus, but the medium with 4,0 mg.L-1 BAP + 6,0 mg.L-1 2,4-D showed the best result,1.67 callus/explant.

Este trabalho teve como objetivo aplicar técnicas de cultura de tecidos em diferentes híbridos de dendezeiro (Elaeis guineensis Jacq.) para a conversão in vitro de embriões zigóticos em plântulas para produção de mudasviáveis para serem disponibilizadas no Estado do Pará. O experimento foi realizado na Embrapa Amazônia Oriental, Belém-PA. A metodologia foi a aplicação de práticas assépticas de isolamento embrionário, cultura de embriões, conversão em plântulas e aclimatação destas. Dezessete híbridos foram submetidos a desinfestação e assepsia, com posterior inoculação nos meios de cultura MS, ½ MS, Y3 e ½ Y3. Os frascos inoculados foram dispostos em sala de cultivo sob fotoperíodo de 16 h luz dia-1, com intensidade luminosa de 25 μmol s-1 e temperatura de 25±3 °C. O delineamento experimental foi o inteiramente casualizado em fatorial 3 x 4. Após avaliação da germinação e crescimento dos embriões, quanto à oxidação os genótipos CN 470, nos tratamentos MS e 1/2 Y3 não apresentaram oxidação, e esta apresentou-se mais adequada para o desenvolvimento do comprimento de raiz. Quanto ao genótipo indicado para a conversão de embriões zigóticos de híbridos de dendezeiro em plântulas viáveis à aclimatização, em extrato de vermiculita e solução nutritiva, o CN 514 em meio Y3 foi o mais viável. Aos três meses foi possível a conversão de embriões de híbridos de dendezeiro até a formação de plântulas.

A regeneração in vitro foi desenvolvida para louro-pardo (Cordia trichotoma (Vellozo) Arrabida ex Steudel). Segmentos nodais foram desinfestados e inoculados em dois meios básicos de cultura: WPM (Wood Plant Médium, 1981) e MS (Murashige & Skoog, 1962) suplementados com BAP (6-Benzilaminopurina), TDZ (Thidiazuron), ANA (Ácido-1-Naftaleno Acético), GA 3 (Ácido Giberélico), AIB (Ácido Indol-3-Butírico) e CA (Carvão Ativado) em diferentes combinações e concentrações para cada fase de desenvolvimento. As maiores taxas de multiplicação e alongamento de brotações foram obtidas com o meio WPM acrescido de 0,1 mg.l -1 de BAP e GA 3. O melhor enraizamento das brotações foi obtido com AIB (0,5 mg.l -1 ) combinado ao Carvão Ativado (1,5 g.l - 1 ) acrescidos ao meio de cultura. This study was carried out aiming at evaluating the in vitro regeneration of louro-pardo (Cordia trichotoma (Vellozo) Arrabida ex Steudel). Nodal segments were desinfested and innoculated in two basal media: WPM (Wood Plant Médium, 1981) and MS (Murashige & Skoog, 1962) supplemented with BAP (6-Benzylaminopurine), TDZ (Thidiazuron), NAA (Naphthaleneacetic Acid), GA 3 (Gibberellic Acid), IBA (Indole-3-Butyric Acid) and A.C. (Activated Charcoal) in different combinations and concentrations for each developmental step. The regeneration rate and the shoot elongation were higher in the WPM medium containing 0,1 mg.l -1 of BAP and GA 3 . The rooting of regenerated shoots was observed in IBA (0,5 mg.l -1 ) and Ativated Charcoal (1,5 g.l -1 ).

Micro-propagation has potential to apply to multiply genotypes of Brazilian forest species. The studies on in vitro culture of these species are related to their recalcitrance to other propagation techniques as well as in vitro conservation of plant germplasm. Micro-propagation by axillaries buds proliferation corresponds to the main system used for in vitro propagation, due to its simplicity compared to organogenesis and somatic embryogenesis. Nevertheless, the native forest species are poorly studied and consequently the advances in in vitro propagation protocols are still not expressive. Thus, it is necessary to develop new works to promote advances in in vitro culture of native species, and the use of new culture media compositions. It is also important to test the interaction of growth regulators or even bioreactor systems, aiming at to consolidate the micro-propagation technique as applicable strategy in Brazilian silviculture. A micropropagação apresenta um enorme potencial de aplicação para a multiplicação de genótipos de espécies florestais brasileiras de interesse. Os estudos relativos ao cultivo in vitro de espécies nativas estão relacionados, principalmente, à ausência de resposta morfogênica às demais técnicas de propagação bem como, à conservação in vitro de germoplasma. A micropropagação via proliferação de gemas axilares corresponde ao principal sistema de propagação in vitro utilizado para a multiplicação de genótipos selecionados, em razão da maior simplicidade ao comparar com a organogênese e embriogênese somática. Entretanto, em vista das espécies florestais nativas serem pouco estudadas, os avanços relacionados à propagação in vitro ainda são pouco expressivos. Dessa forma, é necessária a condução de novos trabalhos para promover avanços do cultivo in vitro nestas espécies, bem como o desenvolvimento de novas composições de meios de cultura. Também se observa a necessidade de se testar a interação de reguladores de crescimento ou, até mesmo, sistemas de biorreatores, buscando assim consolidar a técnica de micropropagação como estratégia aplicável na silvicultura de espécies nativas.

A micropropagação apresenta um enorme potencial de aplicação para a multiplicação de genótipos de espécies florestais brasileiras de interesse. Os estudos relativos ao cultivo in vitro de espécies nativas estão relacionados, principalmente, à ausência de resposta morfogênica às demais técnicas de propagação bem como, à conservação in vitro de germoplasma. A micropropagação via proliferação de gemas axilares corresponde ao principal sistema de propagação in vitro utilizado para a multiplicação de genótipos selecionados, em razão da maior simplicidade ao comparar com a organogênese e embriogênese somática. Entretanto, em vista das espécies florestais nativas serem pouco estudadas, os avanços relacionados à propagação in vitro ainda são pouco expressivos. Dessa forma, é necessária a condução de novos trabalhos para promover avanços do cultivo in vitro nestas espécies, bem como o desenvolvimento de novas composições de meios de cultura. Também se observa a necessidade de se testar a interação de reguladores de crescimento ou, até mesmo, sistemas de biorreatores, buscando assim consolidar a técnica de micropropagação como estratégia aplicável na silvicultura de espécies nativas.

The Atlantic Forest is a biome with megadiversity and a number of bromeliads take part of it. This is the case of Vriesea reitzii, an endemic bromeliad threatened with extinction. Tissue culture techniques are valuable tools for the mass propagation of bromeliads, thus reducing pressure in the natural habitat. The aim of the present work was to establish an in vitro protocol based on the induction and proliferation of nodule cluster cultures of this species. Plantlets maintained in MS liquid culture medium plus NAA (2µM) and BAP (4µM) had the basal regions of leaves excised and then inoculated in gelled with agar (7g L-1) MS culture medium plus with Dicamba (2.5; 5; 10; 20 e 30µM) and Kin (2µM) or free of plant growth regulators. Nodule cluster cultures arose from the basal region of explants. The subculture to MS liquid medium plus GA3 (10µM) and in MS liquid medium free of plant growth regulators resulted in a high proliferation rate. The mean regenerative rate was 39 plantlets/0.03g of nodule culture. Plantlets were acclimatized in a mix substrate of 1:1 (v:v) of carbonized rice coat and Turfa Fertil® mineral supplement. A floresta tropical atlântica é um bioma de alta diversidade, rico em espécies endêmicas de bromélias, entre elas Vriesea reitzii, que se encontra ameaçada de extinção. Técnicas de cultura de tecidos possibilitam a propagação massal de bromélias, reduzindo a pressão de coleta na natureza. O presente trabalho teve como objetivo desenvolver um protocolo regenerativo baseado na indução e no desenvolvimento de culturas nodulares desta espécie. Plantas multiplicadas em meio MS líquido com ANA (2µM) e BAP (4µM) tiveram suas folhas excisadas e inoculadas em meio MS geleificado com ágar (7g L-1) e suplementado com Dicamba (2,5; 5; 10; 20 e 30µM) e Kin (2µM) ou isento de fitorreguladores. A indução de culturas nodulares foi observada na região basal dos explantes. Estas culturas foram subcultivadas em meio de cultura MS líquido suplementado com GA3 (10µM) e subseqüentemente para meio MS líquido isento de fitorreguladores, resultando em altas taxas de proliferação de culturas nodulares que originaram brotos adventícios e microbrotos. A taxa média de regeneração foi de 39 brotos/0,03g de culturas nodulares. As mudas foram aclimatizadas com sucesso em substrato composto por fertilizante organomineral Turfa Fértil® e casca de arroz carbonizada na proporção de 1:1 (v:v).

Com o objetivo de avaliar o controle genético da regeneração direta in vitro a partir de plântulas de Eucalyptus grandis, foram utilizadas sementes de 10 progênies de polinização aberta da população base, origem Atherton, localizada em Anhembi, Estado de São Paulo. Vinte dias de cultivo após a germinação, 196 segmentos distais dos hipocótilos por progênie foram inoculados in vitro num Delineamento em Blocos Completos Aleatorizado Generalizado, com duas unidades experimentais por bloco e sete repetições por bloco, usando a interação blocos por progênie como estimadora do erro experimental. Após 14 semanas de cultivo, foram feitas avaliações da regeneração. Houve diferenças significativas de regeneração entre as progênies (P

O objetivo deste trabalho foi obter plantas autotetraplóides de tangerina 'Ponkan', laranja 'Pêra-de-abril' e tangor 'Murcott', que serão usadas em cruzamentos com cultivares diplóides, visando à obtenção de indivíduos triplóides sem sementes. Utilizou-se o método de cultivo in vitro de segmentos de epicótilo em meio com colchicina (0,025, 0,05 e 0,1%), por diversos períodos (1, 2, 3, 7 e 14 dias), com subseqüente regeneração de brotações em meio sem a presença do alcalóide. As brotações foram microenxertadas in vitro e aclimatizadas em estufas. A determinação do nível de ploidia das plantas foi realizada por citometria de fluxo. A colchicina demonstrou ser tóxica aos explantes das três variedades, ocasionando redução significativa no número médio de brotações adventícias e aumento na porcentagem de explantes não-responsivos, em comparação com o controle. Entre as quatro plantas de laranja e uma de tangor obtidas, duas plantas de laranja e a de tangor, demonstraram ser autotetraplóides, apresentando folhas com maior espessura, arredondadas e coloração verde intensa. O método utilizado na duplicação cromossômica, com uso de colchicina, é eficiente em produzir plantas autotetraplóides de citros. The objective of this work was to obtain autotetraploid plants of 'Murcott' tangor, 'Ponkan' mandarin and 'Pêra-de-abril' sweet orange to be used in crosses with diploid cultivars, aiming to produce triploid seedless hybrids. The methodology used was the in vitro culture of epicotyl segments in media containing different concentrations of colchicine (0.025, 0.05 and 0.1%), for several periods of time (1, 2, 3, 7 and 14 days), followed by the regeneration of adventitious shoots in culture media without the alkaloid. All shoots obtained were micro-grafted, acclimatized and transferred to a greenhouse. The evaluation of the ploidy level of the plants was performed by flow citometry technique. Colchicine was toxic to the explants of three varieties, and caused the reduction on the average number of shoots regenerated per explant as well as an increase in the percentage of non-responsive explants when comparing with the control plants. Among four plants of sweet orange obtained, two of them showed to be autotetraploid. The only plant of tangor obtained also showed to be autotetraploid. These plants presented thicker and roundisher leaves displaying deeper green color. The methodology used resulted efficient for obtaining tetraploid plants.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior This paper aims to describe the familiar cotton culture in the districts of Tangará and Triunfo Potiguar, located in the state of Rio Grande do Norte. It relates specific problems that small cotton agriculturists face in the cotton production and sale as well as their perception in relation to public policies that have been put into practice in these districts. The research revealed soils with potentiality for the cotton culture, but that are not being cultivated for anything else but subsistence, not being able to become productive, specifically through the cotton culture. That activity should be practiced so that it preserves the environment and the familiar farmers themselves, since it was verified they are constant1y exposed to health problems due to insecticides use. In what refers to fomentation policies it was observed that bureaucracy delays the liberation of the money destined to production, seeds delivery and other actions related to production and commercialization. Some procedures such as information and training about productivity development and attention with the environrnent and infrastructure are recommended. The results indicate lack of investments, rural credit and technical help, main1y in Triunfo Potiguar. There is unanimity, from the rural farmers of that district in what refers to the desire of improving the production and remaining in that activity. In this sense, the contribution of this research for the most appropriate culture production can be materialized through the technique of tissue's culture, aimed at obtaining plants that are resistant to diseases. The data indicated that the hormonal supplementations used induced regenerative calluses making in vitro morphogenesis possible in alI tested varieties. The use of the activated coal antioxidant was efficient, reducing oxidation, however not suppressing it. The results lead to an opportunity for the familiar tàrmers from Rio Grande do Norte enlarge the cotton culture, because to obtain plants that are resistant to diseases implies in insecticides reduction, propitiating smaller impact to the atmosphere and less cost Este trabalho tem como objeto de estudo a cotonicultura familiar nos Municípios de Tangará e Triunfo Potiguar, localizados no Estado do Rio Grande do Norte. Discute problemas específicos que os pequenos cotonicultores enfrentam para a produção e a venda do algodão bem como sua percepção quanto às políticas públicas que vêm sendo postas em prática nos municípios. A pesquisa revelou áreas cultiváveis com potencialidade para a cotonicultura, mas que, não estão sendo cultivados para além da subsistência, deixando de se tomarem produtivos, especificamente através da cotonicultura. Essa atividade deve ser praticada de forma que preserve o meio ambiente e os próprios agricultores familiares, pois se constatou estarem estes expostos permanentemente a problemas de saúde decorrentes do uso de agrotóxicos. No que diz respeito às políticas de fomento observou-se que, a burocracia dificulta a liberação, em tempo ágil, dos créditos destinados à produção, à liberação de sementes e a outras ações voltadas para a produção e a comercialização. Recomendam-se alguns procedimentos, como informação e capacitação voltadas para o desenvolvimento da produtividade e do cuidado com o meio ambiente, e atenção para a infra-estrutura. Os resultados indicam carência de investimentos, de crédito rural e de assistência técnica, principalmente em Triunfo Potiguar. Há unanimidade, por parte dos agricultores rurais desse município, quanto ao desejo de melhorar a produção e permanecer nessa atividade. Nesse sentido, a contribuição da pesquisa para a produção mais adequada de cultivares pode ser materializada através das técnicas de cultura de tecidos, com o objetivo de se obterem plantas resistentes a doenças. Os dados indicam que as suplementações hormonais utilizadas induziram calos regenerativos possibilitando a morfogênese in vitro em todas as variedades testadas. O uso do antioxidante carvão ativado mostrou-se eficiente, reduzindo a oxidação, porém não a suprimiu. Os resultados ensejam uma oportunidade para os agricultores familiares do Rio Grande do Norte ampliarem a cotonicultura, pois a obtenção de plantas resistentes a doenças implica redução no uso de agrotóxico, propiciando menor impacto ao ambiente e menos custo

Primary somatic embryogenesis, secondary somatic embryogenesis (cyclic) and shoot organogenesis protocols, were developed, for 2 genotypes of cassava plants – Tapicínea and Bujá Preta, cultivated in the state of Ceará. Cultures were established, using shoot apical meristems of plants maintained in the field, and using the basic MS medium, supplemented with sucrose, copper sulfate and agargel. The material was maintained by monthly sub-culture as in vitro shoot, using nodal explants and cultured on MS medium without growth regulators. Apical shoot meristems from in vitro plants, with 2 or 3 immature leaves were used for induction of primary somatic embryos, on basic medium, supplemented with Picloram. That growth regulator was capable to induce the embryos formation in different concentrations, being the 8,0 mg/L concentration, the most appropriate for the 2 genotypes. The embryos were, then, transferred to maturation medium (MS + 0,1 mg/L of BAP). Cotyledons from germinating primary somatic embryos were used to induction secondary (cyclic) somatic embryos, in MS medium supplemented with different Picloram concentrations. A larger competence was observed for the embriogênese in that explante type, when compared to shoot apexes, in both, frequency and productivity. The most appropriate concentrations for the 2 genotypes were 4,0 mg/L and 8,0 mg/L - Tapicínea and Bujá Preta, respectively. Pieces of cotyledons from secondary somatic embryos were used in the shoot organogenesis induction. The explantes were inoculated in MS medium, supplemented with IBA and BAP (0,0; 0,25; 0,5; 1,0 and 3,0 mg/L, for both regulators), in factorial (5 x 5) arranged. The positive answer was observed in both genotypes, being the concentrations of IBA and BAP of 1,0 mg/L and 0,25 mg/L, and of 1,0 mg/L and 0,5 mg/L, the best for Bujá Preta and Tapicínea, respectively. The histological analysis of secondary somatic embryogenesis – Bujá Preta cultivar - showed an embryogenics cells proliferation, starting from the vascular areas. Globular structures appeared starting from that cellular mass, configuring the multicelular origin of the embryos. Histological analysis of the shoot organogenesis, also in Bujá, Preta cultivar, presented different result compared to embryogenesis. The structures formation occur in sub-epidermal layers, forming buds that development in to shoots, with a vascular connection from the explante Protocolos de indução de embriogênese somática primária, embriogênese somática secundária (cíclica) e organogênese de partes aéreas, foram desenvolvidos, objetivando a regeneração de novo, de plantas de mandioca de duas cultivares amplamente exploradas no estado de Ceará, Tapicínea e Bujá Preta. As culturas foram estabelecidas in vitro, a partir de meristemas apicais caulinares de plantas no campo e mantidas em meio básico MS, suplementado com sacarose, sulfato de cobre e agargel. A multiplicação se deu através de repicagens mensais de ápices e regiões nodais. Ápices caulinares com 2 ou 3 primórdios foliares, de plantas mantidas in vitro, foram utilizados para a indução de embriogênese somática primária, em meio básico MS, suplementado com Picloram. Esse regulador de crescimento foi capaz de induzir a formação de embriões em diferentes concentrações, sendo a concentração de 8,0 mg/L a mais apropriada para as duas cultivares estudadas. Os embriões foram, então, transferidos para o meio de maturação (MS + 0,1 mg/L de BAP). Fragmentos de cotilédones verdes (± 6 mm2), de embriões somáticos primários em processo de maturação, foram utilizados para a indução de embriogênese somática secundária, em meio MS suplementado com diferentes concentrações de Picloram. Foi observada uma maior competência para a embriogênese nesse tipo de explante, quando comparado a ápices caulinares, tanto em freqüência como em produtividade. As concentrações de Picloram mais adequadas para os 2 genótipos foram 4,0 mg/L para a Tapicínea e 8,0 mg/L para a Bujá Preta. Segmentos de cotilédones de embriões somáticos secundários foram utilizados nos experimentos de indução de organogênese de partes aéreas. Os explantes foram inoculados em meio MS suplementado com AIB e BAP, nas concentrações de 0,0; 0,25; 0,5; 1,0 e 3,0 mg/L, para ambos os reguladores, combinados segundo fatorial (5 x 5), num total de 25 tratamentos. Houve resposta positiva em ambos os genótipos, sendo as concentrações de AIB e BAP de 1,0 mg/L e 0,25 mg/L, e de 1,0 mg/L e 0,5 mg/L, as mais adequadas para Bujá Preta e Tapicínea, respectivamente. A análise histológica dos processos de embriogênese somática secundária em Bujá Preta mostrou uma proliferação de células embriogênicas, iniciando-se a partir das regiões vasculares. Estruturas globulares surgiam a partir dessa massa celular, configurando a origem pluricelular dos embriões. A análise histológica da organogênese de partes aéreas, também em Bujá Preta, apresentou resultado bastante diverso daquele da embriogênese. O início da formação das estruturas ocorreu em camadas sub-epidérmicas, formando protuberâncias (gemas adventícias) que se desenvolviam em partes aéreas, mantendo uma conexão vascular com o explante.