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Los piretroides constituyen un grupo de plaguicidas catalogados como moduladores del canal de sodio (Grupo 3), según el comité de acción contra la resistencia a los insecticidas (IRAC). Estos plaguicidas son análogos sintéticos de las piretrinas, compuestos naturales con actividad insecticida que se encuentran en las flores de las plantas del género Chrysanthemum, popularmente conocidas como crisantemos. Actualmente, existen numerosos productos plaguicidas que contienen en su formulación piretroides, siendo ampliamente utilizados en el control de plagas en diferentes contextos como la agricultura, la ganadería, la apicultura e incluso a nivel doméstico, erigiéndose como uno de los grupos de plaguicidas con mayor cuota de mercado. Tanto las piretrinas, como los piretroides se unen al canal de sodio dependiente de voltaje (VGSC por sus siglas en inglés). Esta proteína, que se encuentra presente en las membranas de las neuronas, tiene un papel clave en la transmisión del impulso nervioso a través de los axones. La unión de los piretroides a la proteína provoca su mal funcionamiento. Concretamente, cuando la membrana se despolariza al inicio de un potencial de acción, el canal se abre permitiendo la entrada de iones sodio (Na+) al interior de la neurona, llevando el potencial de membrana a valores más positivos. Esta acción ocurre de una manera muy rápida, ya que el canal rápidamente se cierra deteniendo la entrada de iones. Los piretroides se unen dificultando esta transición entre el estado abierto y cerrado, causando un mal funcionamiento del sistema nervioso y en última instancia, la muerte. El VGSC es una proteína de membrana formada por cuatro dominios, que presentan una alta homología entre ellos, unidos por loops intracelulares. A su vez, cada dominio está compuesto por 6 segmentos transmembrana. Esta proteína forma un poro en la membrana con permeabilidad selectiva a cationes de sodio. Debido a su importante función en la transmisión del impulso nervioso, el gen que la codifica está muy conservado en los metazoos. A diferencia de los vertebrados, los artrópodos solo presentan una copia del gen, aumentando la conservación de este gen entre las especies dentro del clado debido a la fuerte presión de selección que sufre el canal. Las denominadas como mutaciones de tipo kdr (del inglés knock down resistance) o super-kdr corresponden a mutaciones en la secuencia del VGSC asociadas a fenotipos de resistencia a piretroides. Estas mutaciones se localizan principalmente en dos regiones muy concretas del canal de sodio, que se corresponderían con los sitios de unión de los piretroides. Estudios recientes utilizando modelos predictivos de la estructura del canal han confirmado la existencia de los dos sitios de unión, analizando como las mutaciones en los residuos que conforman estos sitios dificultarían la unión de los piretroides, provocando fenotipos de resistencia. El sitio de unión de piretroides 1 (PyR1) estaría constituido por el linker IIS4-5, el IIS5 y el IIIS6. El sitio de unión 2 (PyR2) estaría formado por el linker IS4-5, el IS5, IS6 y IIS6. Existen mutaciones asociadas con la resistencia que están alejadas de estos sitios. En esos casos se plantea que estas ejercerían su efecto de manera alostérica. El uso intensivo de los plaguicidas ha provocado la aparición de poblaciones resistentes en todo el mundo. En el caso concreto de los piretroides, se han descrito dos mecanismos principales de resistencia; la modificación del sitio de unión y la resistencia metabólica. La modificación del sitio de unión consiste en la mutación de los residuos clave para la interacción entre el VGSC y el piretroide. Por otro lado, la resistencia metabólica consiste en el aumento de la capacidad de degradar los piretroides, y suele involucrar a las principales familias de enzimas de detoxificación, monooxigenasas citocromo P450 (P450s), glutatión S-transferasas (GSTs) y carboxilesterasas (CEs). Los agentes de control biológico (ACBs) engloban a diferentes especies utilizadas para el control de plagas. Un grupo destacado dentro de estos ACBs son los ácaros depredadores, muchos de ellos pertenecientes a la familia Phytoseiidae. De entre los diferentes enfoques que se pueden adoptar para combatir las plagas, en las últimas décadas ha destacado la Gestión Integrada de Plagas (GIP). La GIP consiste en un enfoque holístico que combina diferentes prácticas y técnicas que tienen como finalidad controlar las plagas reduciendo el uso de fitosanitarios a niveles económica y ecológicamente justificables. Los ACBs son una de las principales herramientas que posee la GIP para el control de plagas. Estos artrópodos también poseen la capacidad de desarrollar resistencia a diferentes plaguicidas. De hecho, contar con ACBs que posean la capacidad de resistir los tratamientos fitosanitarios utilizados en los cultivos constituye un rasgo muy deseable. Esto habilitaría la combinación de estos ACBs con el uso de plaguicidas en los escenarios que lo requiriesen. El objetivo principal de este trabajo fue dilucidar los mecanismos de resistencia a los piretroides en varias especies de ácaros depredadores, realizando una caracterización toxicológica y molecular de la respuesta a la deltametrina en varias poblaciones. Además, también se ha optimizado un sistema de edición genómica como herramienta para el estudio del efecto de mutaciones asociadas con la resistencia a plaguicidas en poblaciones de artrópodos de interés económico. Los ácaros depredadores representan los ACBs más utilizados en control biológico, siendo especies muy relevantes para el estudio de la resistencia a plaguicidas. En el capítulo 1 de nuestro trabajo hemos analizado el efecto de la deltametrina sobre varias poblaciones de las especies Phytoseiulus persimilis, Amblyseius swirskii y Neoseiulus californicus, tres de los ácaros más utilizados como ACBs. Todas las poblaciones de P. persimilis analizadas en este trabajo han mostrado mutaciones del tipo kdr y super-kdr en el gen del VGSC. Las poblaciones caracterizadas toxicológicamente, suministradas por las empresas Koppert Biological Systems (en adelante, Koppert) y Syngenta Bioline (en adelante, Syngenta) han mostrado diferentes niveles de resistencia a los tratamientos con deltametrina. La población de Koppert ha sido la población que ha mostrado un nivel de resistencia mayor. En ambas poblaciones se separaron los ácaros vivos y muertos tras los tratamientos con diferentes concentraciones de deltametrina y se analizó la secuencia del VGSC. Concretamente, en la población de Syngenta, los ácaros que sobrevivieron al tratamiento con deltametrina a 10 ppm eran homocigotos para las mutaciones M918L y A1536T. Por otra parte, los ácaros que no sobrevivían mostraban las mutaciones M918L, L925V y A1536T, pero en este caso eran heterocigotos con los residuos canónicos. En la población de Koppert, todos los ácaros eran homocigotos para la mutación M918L y aquellos que sobrevivían al tratamiento con deltametrina a 40 ppm tenían también la mutación L925V en homocigosis. Los ácaros susceptibles eran también homocigotos para la mutación M918L, pero exhibían la leucina canónica en la posición 925. Un dato curioso, que contrasta con lo encontrado en los ácaros que sobrevivían al tratamiento, es que los ácaros susceptibles tenían la mutación T1539S también en homocigosis. En esta población se realizó un análisis del genotipo de ácaros individuales y se encontró ligamiento entre los alelos L925 y S1539 y entre los alelos V925 y T1539. En A. swirskii, se analizaron dos poblaciones, una procedente de campo y otra suministrada por Koppert. El análisis preliminar de las secuencias del gen del VGSC mostró que ambas poblaciones presentaban mutaciones de resistencia. La población comercial tenía la mutación L925V fijada, sin rastro del alelo WT y la población de campo las mutaciones M918L y L925V junto con los alelos WT. Los resultados de los bioensayos con deltametrina revelaron que ambas poblaciones serían capaces de sobrevivir a concentraciones superiores a las que se usan habitualmente en el campo. La población de Koppert mostró un nivel de resistencia mayor. En esta población la separación de ácaros entre vivos y muertos no mostró diferencias genéticas en la región de interés del VGSC. En cambio, la población de campo mostró una variabilidad mayor. Aquellos ácaros que no resistían el tratamiento con deltametrina a 40 ppm poseían únicamente los alelos M918 y L925. Por otra parte, el resto de los ácaros analizados, supervivientes a los tratamientos con deltametrina 40 ppm, deltametrina 60 ppm y ácaros muertos en el tratamiento de 60 ppm poseían las mutaciones M918L y L925V junto con los alelos WT. Los resultados de los bioensayos, juntamente con el perfil genético, sugerían que había otros mecanismos de resistencia diferentes a la modificación del sitio de unión contribuyendo al fenotipo resistente en estas poblaciones. Entonces, se analizó el efecto de un tratamiento con deltametrina a 20 ppm sobre ácaros que habían sido tratados previamente con compuestos que inhiben los principales grupos de enzimas de detoxificación. Estos ensayos mostraron un aumento significativo de la mortalidad cuando se pretrató a los ácaros con el sinergista BOP, inhibidor de las monooxigenasas citocromo P450. La mortalidad fue de sólo un 3,4% en el tratamiento con deltametrina a 20 ppm, mientras que el tratamiento combinado (BOP + deltametrina 20 ppm) provocó un aumento significativo de la mortalidad hasta el 18,4%. Estos datos indicaron que, en esta población, el fenotipo resistente se debía en parte a la contribución de la resistencia metabólica. Complementariamente, en la población de Koppert se realizaron ensayos de semi-campo, aplicando varios tratamientos con deltametrina sobre plantas de pimiento colonizadas con los ácaros, el fin de estos ensayos era comprobar si los resultados obtenidos en bioensayos de laboratorio eran representativos de los resultados en un entorno más similar al campo (semi-campo). Estos ensayos mostraron una reducción drástica en el número de ácaros por planta después de los tratamientos con deltametrina en un contraste claro con los resultados obtenidos en los bioensayos de laboratorio. Para profundizar en el efecto de la deltametrina sobre los ácaros se realizaron otros ensayos complementarios. En primer lugar, no se detectó un efecto de repelencia por parte de los volátiles emitidos por las plantas tratadas con deltametrina, tampoco se observó un aumento de la mortalidad debida al contacto prolongado de los ácaros con la superficie contaminada con el plaguicida. En los ensayos de elección, no hubo diferencias significativas entre el número de ácaros que permanecían en la superficie tratada frente a aquellos que se quedaron sobre la superficie no tratada. Sin embargo, sí se encontró un aumento significativo en los ácaros que escapan del disco de hoja. Este resultado sugiere un posible efecto de repelencia y/o irritabilidad provocada por las superficies tratadas con deltametrina. También se pudo demostrar que los ácaros escapaban activamente de las plantas tratadas, a diferencia de lo que ocurría en los controles no tratados. Los ácaros huían de las plantas tratadas, encontrándose un mayor número en las trampas ubicadas en los tallos de las plantas con el tratamiento de deltametrina. En N. californicus se analizó la población procedente de Koppert. La caracterización toxicológica del ácaro mostró una mortalidad reducida en los tratamientos con deltametrina, siendo capaz de resistir tratamientos superiores a las dosis de campo. El análisis del gen del VGSC no mostró mutaciones del tipo kdr o super-kdr, tampoco se encontraron diferencias en las regiones analizadas del VGSC en los ácaros muertos y los vivos después de los tratamientos. Los bioensayos utilizando compuestos sinergistas mostraron un aumento de la mortalidad cuando se pretrató a los ácaros con IBP. La mortalidad al tratar con deltametrina a 20 ppm fue del 19,1% y la mortalidad del tratamiento combinado con IBP + deltametrina 20 ppm fue del 75,4%. Los sinergistas BOP y DEM no provocaron un aumento de la mortalidad del tratamiento con deltametrina 20 ppm. Complementariamente, con el fin de analizar la secuencia completa del canal, se secuenció y ensambló el transcrito del VGSC. La comparación de la secuencia con las bases de datos mostró una gran homología con especies emparentadas como Galendromus occidentalis. En todas las especies analizadas al menos una población ha mostrado la capacidad de resistir tratamientos con deltametrina a concentraciones superiores a las dosis de campo. Estos resultados contrastan con la información ofrecida por las empresas proveedoras de estos ACBs, además los resultados resultan útiles para el diseño de estrategias de GIP más robustas y eficaces. En el capítulo 2 de este trabajo se optimizó un sistema para la edición genómica de Spodoptera exigua, vía CRISPR/Cas9, que permitiese la introducción de mutaciones en el gen del VGSC. Las primeras etapas se focalizaron en aumentar la viabilidad del huevo tras la microinyección optimizando parámetros como la cantidad de contraste utilizada para la visualización de los huevos, las condiciones de incubación de los huevos, el tratamiento de desinfección previo a la microinyección y las características de las agujas capilares utilizadas. Los resultados mostraron que la adición de Rojo de fenol a una concentración de 0,01% era suficiente para discriminar los huevos microinyectados. Además, se determinó que era necesario mantener un nivel adecuado de humedad relativa y protección contra los hongos para garantizar la viabilidad de los huevos. En el caso de los capilares se determinó que había dos configuraciones óptimas para nuestro trabajo. Una para los capilares utilizados en los dispositivos mecánicos y otra para los dispositivos neumáticos. Una vez optimizado el proceso de microinyección e incubación de los huevos, se procedió a la optimización de la edición genómica. El primer gen escogido para la edición genómica fue el gen abd-A, un gen homeótico con un papel clave en el desarrollo larvario. La disrupción de este gen provoca un entrecruzamiento de los segmentos que componen la larva, fenotipo muy fácil de apreciar. Estas características lo convierten en un candidato óptimo, cuando se quiere llevar a cabo una optimización de la edición genómica, ya que el fenotipo producido es fácilmente identificable. Se llegó a alcanzar una ratio de eclosión del 31,25% después de la optimización. En total eclosionaron 82 larvas, de las cuales 10 mostraron el fenotipo de disrupción del gen abd-A. Una vez demostrado que se podían obtener mutantes del tipo knock out se procedió a la obtención de mutantes knock in en el receptor de rianodina (RyR) y en el VGSC. En el caso del RyR se pretendía la introducción de la mutación G4946E, conocida por causar resistencia a las diamidas. Eclosionaron 27 larvas de un total de 2616 huevos microinyectados, obteniendo una ratio de eclosión del 1,1%. Las larvas eclosionadas fueron genotipadas y una de ellas mostró haber introducido la mutación G4946E en heterocigosis además del SNP para evitar el reconocimiento por el crRNA. En cuanto al gen del VGSC de S. exigua, su edición fue la más difícil de acometer. El objetivo era la introducción de la mutación M918T y para ello se probaron diferentes concentraciones de los componentes CRISPR/Cas9 y se diseñaron diferentes crRNAs y ssODN. También se probó con diferentes dispositivos de microinyección. Los resultados muestran un mejor desempeño de los dispositivos neumáticos frente a los dispositivos mecánicos, siendo el mejor resultado el obtenido con el FemtoJet con un 3,05% de ratio de eclosión. Además, utilizando los dispositivos neumáticos junto con el ssODN Se-e18-superKDR se consiguió alcanzar un éxito notorio en la introducción de la mutación, al conseguir un porcentaje de mutación del 87,8% y 187 larvas que mostraron el genotipo mutante. Estos resultados se obtuvieron utilizando análisis RFLP ya que el ssODN Se-e18-superKDR introducía una diana de restricción TaqI. Estas larvas se dejaron desarrollar hasta adultos, pero no se logró obtener descendencia que portase la mutación, no pudiendo caracterizar el efecto de la mutación de manera aislada. También se encontró que las mutaciones del tipo indel no impiden el desarrollo de la larva en el huevo, pero si resultan letales, posiblemente por las características y función del VGSC. Pyrethroids are a group of pesticides classified as sodium channel modulators (Group 3A) according to the Insecticide Resistance Action Committee (IRAC). These pesticides are synthetic analogues of pyrethrins, natural compounds with insecticidal activity found in the flowers of plants of the genus Chrysanthemum, popularly known as chrysanthemums. Currently, there are numerous pesticide products containing pyrethroids in their formulation, being widely used for pest control in different contexts such as agriculture, livestock, beekeeping and even at household level, being one of the groups of pesticides with the largest market share. Both pyrethrins and pyrethroids bind to the voltage-gated sodium channel (VGSC), a protein, found in the membranes of nerve cells, that plays a key role in the transmission of nerve impulses along axons. VGSC is a membrane protein consisting of four highly homologous domains linked by intracellular loops. Each domain is composed of 6 transmembrane segments. This protein forms a pore in the membrane with selective permeability for sodium cations. Because of its important role in nerve impulse transmission, the gene encoding it is highly conserved in metazoans. The intensive use of pyrethroids over the years has led to the emergence of resistant populations worldwide. Two main mechanisms of resistance have been described so far: target site modification and metabolic resistance. Target site modification involves the mutation of residues proposed to be key for the interaction between the VGSC and the pyrethroid. The so-called kdr (knock down resistance) or super-kdr mutations correspond to mutations in the VGSC associated with pyrethroid resistant phenotypes. These mutations are mainly located in two very specific regions of the channel corresponding to the putative pyrethroid binding sites. Metabolic resistance consists of an increased ability to degrade pyrethroids and usually involves the major families of detoxifying enzymes, cytochrome P450 monooxygenases (P450s), glutathione S-transferases (GSTs) and carboxylesterases (CEs). In recent decades, Integrated Pest Management (IPM) has emerged as one of the best approaches that can be used to control pests. IPM is a holistic approach that combines different practices and techniques to control pests by reducing the use of pesticides to economically and ecologically justifiable levels. Biological control agents (BCAs) are one of the main tools for IPM. Thus, integration of BCAs with the use of pesticides when needed, might be the right way to go, in order to achieve a long-term success in controlling pests. Predatory mites, mostly from the Phytoseiidae family, are a prominent group among BCAs. They are playing a fundamental role for pest control in protected crops settings from South-eastern Spain, but sometimes it is impossible to reach an adequate control of all the pests infesting the crops at the same time. It is in those cases when colonies of predatory mites showing resistance to pesticides would be the solution to maintain the IPM strategy in place. One of the main objective of this work was to elucidate the mechanisms of resistance to pyrethroids in several species of predatory mites by carrying out a toxicological and molecular characterisation of the response to deltamethrin in several populations. In addition, a genome editing system has been optimised as a tool to study the effect of mutations associated with pesticide resistance in arthropod populations of economic interest. In Chapter 1, we analysed the effect of deltamethrin on several populations of the species Phytoseiulus persimilis, Amblyseius swirskii and Neoseiulus californicus, three of the most widely used predatory mite species. All populations of P. persimilis analysed in this work carried kdr and super-kdr mutations in the VGSC gene. The populations supplied by Koppert Biological Systems (hereafter Koppert) and Syngenta Bioline (hereafter Syngenta) were toxicologically characterised showing different levels of resistance to deltamethrin treatments being the population from Koppert the most resistant. In both populations, live and dead mites were separated after treatment with different concentrations of deltamethrin. The VGSC was then partially sequenced and analysed. Specifically, in the Syngenta population, mites that survived a treatment with deltamethrin at 10 ppm were homozygous for the M918L and A1536T mutations. Mites that did not survive had the M918L, L925V and A1536T mutations, but they were all heterozygous. In the Koppert population, all mites were homozygous for the M918L mutation and those that survived treatment with deltamethrin at 40 ppm were also homozygous for the L925V mutation. Susceptible mites were also homozygous for the M918L mutation but had the canonical leucine at position 925. Interestingly, in contrast to what was found in mites that survived the treatment, susceptible mites were also homozygous for the T1539S mutation. For A. swirskii, two populations were tested, one collected from the field in Israel, the region of origin of this species and the other one was supplied by Koppert. Preliminary analysis of the VGSC gene sequences showed that both populations had mutations previously associated with resistance. The commercial population had the L925V mutation fixed, with no trace of the wild-type (WT) allele, and the field population had the M918L and L925V mutations along with the WT alleles. Results from bioassays with deltamethrin showed that a significant number of mites from both populations would be able to survive at concentrations higher than those commonly used in the field. The Koppert population showed again the highest level of resistance. In this population, separation of live and dead mites showed no genetic differences in the VGSC region of interest. In contrast, the field population showed higher variability. The mites that were not resistant to the treatment with deltamethrin at 40 ppm had the canonical M918 and L925 alleles. On the other hand, survivors of the treatments with deltamethrin at 40 ppm, deltamethrin at 60 ppm treatments and also the mites killed at 60 ppm showed the mutations M918L and L925V in addition to the WT alleles. The bioassay results, together with the genetic profile, suggested that resistance mechanisms other than target site modification were contributing to the resistant phenotype in these populations. The effect of 20 ppm deltamethrin treatment on mites pre-treated with compounds inhibiting the major detoxification enzymes was then tested. These trials showed a significant increase in mortality when mites were pre-treated with the synergist piperonyl butoxide (POB), an inhibitor of cytochrome P450 monooxygenases. Mortality was only 3.4% in the 20 ppm deltamethrin treatment, while the combined treatment (POB+ 20 ppm deltamethrin) significantly increased mortality to 18.4%. These data indicated that the resistant phenotype in this population was partly due to the contribution of metabolic resistance. In addition, semi-field trials were carried out in the Koppert population using different deltamethrin treatments on pepper plants colonised by the mites to test whether the results obtained in laboratory bioassays were representative of those obtained in a more field-like environment. These trials showed a dramatic reduction in the number of mites per plant following deltamethrin treatments, in contrast to the results obtained in the laboratory bioassays. Additional tests were carried out to further investigate the effect of deltamethrin on mites. Firstly, there was no repellent effect of the volatiles emitted by the deltamethrin-treated plants, nor was there an increase in mortality due to prolonged contact of the mites with the pesticide-contaminated surface. In the choice trials, there was no significant difference between the number of mites remaining on the treated and untreated surfaces. However, there was a significant increase in the number of mites escaping from the disc. This result suggests a possible repellent and/or irritant effect of deltamethrin treated surfaces. It was also shown that mites actively escaped from treated plants in contrast to untreated controls. Mites escaped from treated plants, with higher numbers found in traps placed on the stems of deltamethrin treated plants. For N. californicus, only the Koppert population was analysed. Toxicological characterisation of this population showed reduced mortality to the treatment with deltamethrin at concentrations well above the field rate. Analysis of the VGSC gene showed no kdr or super-kdr mutations, and no differences were found in the VGSC regions analysed in dead and live mites after treatment. Bioassays using synergistic compounds showed increased mortality when mites were pre-treated with Iprobenfos (IBP). Mortality from treatment with deltamethrin at 20 ppm was 19.1% and mortality from the combined treatment of IBP + deltamethrin at 20 ppm was 75.4%. The synergists PBO and diethylmaleate (DEM) did not increase the mortality of the deltamethrin 20 ppm treatment. In addition, the VGSC transcript was sequenced and assembled to analyse the complete channel sequence. Comparison of the sequence with databases showed a high degree of homology with related species such as Galendromus occidentalis. In all species analysed, at least one population showed the ability to resist treatment with deltamethrin at concentrations higher than field rates. These results contrast with the information provided by the companies supplying these BCAs and are useful in designing more robust and effective IPM strategies. In Chapter 2 of this thesis, a system for CRISPR/Cas9 genome editing of Spodoptera exigua was optimised to allow the introduction of mutations in the VGSC gene. First steps focused on increasing egg viability after microinjection by optimising parameters such as the amount of contrast used to visualise the eggs, egg incubation conditions, disinfection treatment prior to microinjection and the characteristics of the capillary needles used. Once the process of microinjection and incubation of the eggs had been optimised, we moved on to optimising the genome editing. The first gene selected for genome editing was abd-A, a homeotic gene that plays a key role in larval development. An ideal candidate for genome editing, since the resulting phenotype of a knock out is easily identifiable. After optimisation, a hatching rate of 31.25% was achieved. A total of 82 larvae hatched, of which 10 showed the abd-A gene disruption phenotype. Having demonstrated that knock-out mutants could be obtained, knock-in mutants in the ryanodine receptor (RyR) and in the VGSC were obtained. In the case of the RyR, the aim was to introduce the G4946E mutation, which is known to confer resistance to diamide insecticides. Twenty-seven larvae hatched from a total of 2616 microinjected eggs, giving a hatching rate of 1.1%. The hatched larvae were genotyped, and one of them was found to carry the G4946E mutation in heterozygosity in addition to another polymorphism introduced to avoid recognition by the crRNA. The S. exigua VGSC gene was the most difficult to edit. The aim was to introduce the M918T mutation, known to confer resistance to pyrethroids. Thus, different concentrations of CRISPR/Cas9 components were tested and different crRNAs and ssODNs were designed. Different microinjection devices were also tested. The results show a better performance of the pneumatic devices compared to the mechanical devices, with the best result being obtained with the FemtoJet with a hatching rate of 3.05%. Furthermore, by using the pneumatic devices together with the ssODN Se-e18-superKDR, a remarkable success in mutation introduction was achieved, with a mutation rate of 87.8% and 187 larvae showing the mutant genotype. These results were screened using RFLP analysis, as the ssODN Se-e18-superKDR introduced a TaqI restriction target. These larvae were allowed to develop into adults, but no offspring carrying the mutation were obtained and the effect of the mutation could not be characterised in isolation. It was also found that indel-type mutations do not prevent larval development in the egg, but are lethal, possibly because of the properties and function of the VGSC.

Pyrethroids are ectoparasiticides safe for mammals and widely used in farm animals. An outbreak of systemic intoxication with irritant contact dermatitis resulting from the use of cypermethrin pour on in dairy cows is reported in the state of Pernambuco. Eight adult animals were affected, three died on the property and five were referred to the Clínica de Bovinos, Universidade Federal Rural de Pernambuco, Campus Garanhuns. These received 100 mL of pour on Cypermethrin (Ectonil ®, Cipermetrina, Labgard, Brasil). Apathy, hyperexcitability, muscle tremors, sialorrhea, bradycardia and crusted lesions were observed on the dorsum of the neck, scapula, ears and ulcerations in the oral and vaginal mucosa. There was hyperfibrinogenemia and leukocytosis due to neutrophilia with a regenerative left shift. Histopathology showed areas of erosion and ulceration of the epidermis and perivascular lymphohistiocytic and neutrophilic infiltrate in the superficial dermis. Supportive treatment was done with improvement of systemic signs and skin lesions, however, in one animal (with 19 days hospitalized), there was no complete regression of neurological alterations of bradycardia and muscle tremors, even so, it was possible to return to productive activity. High doses of pour on cypermethrin may cause systemic intoxication in cattle and result in bradycardia, hyperexcitability, muscle tremors and sialorrhea with irritant contact dermatitis, and death in severe cases. RESUMO Os piretroides são ectoparasiticidas com grande segurança para mamíferos, utilizados amplamente em animais de produção. Relata-se um surto de intoxicação sistêmica com dermatite irritante por contato, resultante do uso de Cipermetrina Pour-On em bovinos, no estado de Pernambuco. Oito animais adultos foram acometidos: três deles morreram na propriedade e cinco foram recebidos na Clínica de Bovinos da Universidade Federal Rural de Pernambuco, Campus Garanhuns. Todos haviam recebido 100mL de Cipermetrina Pour-On (Ectonil®, Cipermetrina, Labgard, Brasil). Observou-se apatia, hiperexcitabilidade, tremores musculares, sialorreia, bradicardia e lesões crostosas no dorso da região de pescoço, na escápula, mas orelhas, bem como ulcerações em mucosa oral e vaginal. No hemograma, verificou-se hiperfibrinogenemia e leucocitose por neutrofilia com desvio à esquerda regenerativo. Na histopatologia, foram constatadas áreas de erosão e ulceração da epiderme e infiltrado linfo-histiocitário e neutrofílico perivascular na derme superficial. O tratamento de suporte gerou melhora dos sinais sistêmicos e das lesões cutâneas, porém, em um dos animais (que esteve internado por 19 dias), não houve regressão completa das alterações neurológicas de bradicardia e de tremores musculares; mesmo assim, foi possível o retorno à atividade produtiva. Doses elevadas de Cipermetrina Pour-On podem causar intoxicação sistêmica em bovinos e resultarem em bradicardia, hiperexcitabilidade, tremores musculares e sialorreia com dermatite irritante por contato, bem como morte em casos severos.

Rhipicephalus (Boophilus) microplus is one of the parasites that has an impact on livestock farming in Brazil. Bioassays using the larval packet test (LPT) impregnated with cypermethrin and diazinon at different concentrations were performed to characterize phenotypic resistance (resistance level, RL), molecular resistance (mutation in domain III - S6 T2134A) and enzymatic metabolism of diazinon and cypermethrin in some populations of R. microplus that were collected in different regions of the state of São Paulo. Among the 40 farms analyzed, 18 of them presented resistance factors for cypermethrin, with RL I (53%) and RL II (47%). Mutation of domain III T2134A was found for the first time in Brazil, on seven farms. Heterozygous larvae were found on six of them and resistant homozygous larvae on four. No differences (p>0.05) in enzymatic activity of α-esterase and β-esterase were found in tests with live and dead larvae at a cypermethrin concentration of 409.6μg/cm2. Ninety percent of the farms showed resistance to the active agent diazinon: RL I in 6%, RL II in 30% and RL III in 64%. There were significant differences (p0,05) na atividade enzimática de α-esterase e β-esterase foi observada em testes com larvas vivas e mortas em uma concentração de cipermetrina de 409,6μg/cm2. Noventa por cento das propriedades apresentaram resistência ao agente ativo diazinon: RL I em 6%, RL II em 30% e RL III em 64%. Houve diferenças significativas (P

Se realizó la evaluación del uso de plaguicidas con el fin de conocer cuáles son los más empleados en la zona de estudio, para posteriormente analizar los cultivos de mayor relevancia con lo cual se propuso un plan manejo de agropesticidas. The evaluation of the use of pesticides was carried out in order to know which are the most used in the study area, to later analyze the most relevant crops with which an agropesticide management plan was proposed.

Los insectos triatominos son los vectores de la enfermedad de Chagas. El control químico de estos insectos es la principal herramienta utilizada para reducir la incidencia de la enfermedad. Los piretroides son los principales insecticidas utilizados para el control de los triatominos en todos los países endémicos. La evolución de resistencia a insecticidas convierte en ineficiente una exitosa estrategia de control químico. En Argentina se han detectado diferentes focos de resistencia en Triatoma infestans, el vector más importante en el Cono Sur de Sudamérica, asociados a deficiencias en el control. Los estudios realizados sobre esta especie muestran que la resistencia es un problema complejo, ya que evolucionó en varias zonas de la distribución geográfica de la especie, se identificaron diferentes mecanismos de resistencia, está asociada a modificaciones en diversos procesos biológicos, está vinculada a variaciones ambientales y hay escasez de alternativas de control. En este manuscrito presentamos una revisión del conocimiento sobre la resistencia a piretroides en T. infestans en Argentina. Triatominae (kissing bugs) are the vectors of Chagas disease. Chemical control of these insects is the main tool for reducing the incidence of the disease. Pyrethroids are the main insecticides used for triatomine control in all endemic countries. The evolution of insecticide resistance renders a successful chemical control strategy ineffective. In Argentina, different foci of resistance have been detected in Triatoma infestans—the most important vector in the Southern Cone of South America, which are associated with control deficiencies. The studies conducted on this species show that resistance is a complex problem because it has evolved in several areas of the species’ geographical distribution. Different resistance mechanisms have been identified. Resistance is associated with changes in various biological processes and linked to environmental changes. There is a lack of control alternatives. This paper is a review of the knowledge on pyrethroid resistance in T. infestans in Argentina. Os insetos triatomíneos são os vetores da doença de Chagas. O controlo químico desses insetos é a principal ferramenta utilizada para reduzir a incidência da doença. Os piretróides são os principais inseticidas usados para controlar os triatomíneos em todos os países endémicos. A evolução da resistência aos inseticidas converte em ineficiente uma estratégia de controlo químico eficiente. Na Argentina foram detetados diferentes focos de resistência em Triatoma infestans, o vetor mais importante do Cone Sul da América do Sul, associados a deficiências de controlo. Os estudos realizados nesta espécie mostram que a resistência é um problema complexo, visto que evoluiu em várias áreas da distribuição geográfica da espécie. Foram identificados diferentes mecanismos de resistência, associados a modificações em vários processos biológicos e ligados a variações ambientais, havendo uma escassez de alternativas de controlo. Neste manuscrito é apresentada uma revisão do conhecimento sobre a resistência aos piretróides em T. infestans na Argentina.

Los insectos triatominos son los vectores de la enfermedad de Chagas. El control químico de estos insectos es la principal herramienta utilizada para reducir la incidencia de la enfermedad. Los piretroides son los principales insecticidas utilizados para el control de los triatominos en todos los países endémicos. La evolución de resistencia a insecticidas convierte en ineficiente una exitosa estrategia de control químico. En Argentina se han detectado diferentes focos de resistencia en Triatoma infestans, el vector más importante en el Cono Sur de Sudamérica, asociados a deficiencias en el control. Los estudios realizados sobre esta especie muestran que la resistencia es un problema complejo, ya que evolucionó en varias zonas de la distribución geográfica de la especie, se identificaron diferentes mecanismos de resistencia, está asociada a modificaciones en diversos procesos biológicos, está vinculada a variaciones ambientales y hay escasez de alternativas de control. En este manuscrito presentamos una revisión del conocimiento sobre la resistencia a piretroides en T. infestans en Argentina. Os insetos triatomíneos são os vetores da doença de Chagas. O controlo químico desses insetos é a principal ferramenta utilizada para reduzir a incidência da doença. Os piretróides são os principais inseticidas usados para controlar os triatomíneos em todos os países endémicos. A evolução da resistência aos inseticidas converte em ineficiente uma estratégia de controlo químico eficiente. Na Argentina foram detetados diferentes focos de resistência em Triatoma infestans, o vetor mais importante do Cone Sul da América do Sul, associados a deficiências de controlo. Os estudos realizados nesta espécie mostram que a resistência é um problema complexo, visto que evoluiu em várias áreas da distribuição geográfica da espécie. Foram identificados diferentes mecanismos de resistência, associados a modificações em vários processos biológicos e ligados a variações ambientais, havendo uma escassez de alternativas de controlo. Neste manuscrito é apresentada uma revisão do conhecimento sobre a resistência aos piretróides em T. infestans na Argentina. Triatominae (kissing bugs) are the vectors of Chagas disease. Chemical control of these insects is the main tool for reducing the incidence of the disease. Pyrethroids are the main insecticides used for triatomine control in all endemic countries. The evolution of insecticide resistance renders a successful chemical control strategy ineffective. In Argentina, different foci of resistance have been detected in Triatoma infestans—the most important vector in the Southern Cone of South America, which are associated with control deficiencies. The studies conducted on this species show that resistance is a complex problem because it has evolved in several areas of the species’ geographical distribution. Different resistance mechanisms have been identified. Resistance is associated with changes in various biological processes and linked to environmental changes. There is a lack of control alternatives. This paper is a review of the knowledge on pyrethroid resistance in T. infestans in Argentina. Fil: Mougabure Cueto, Gastón Adolfo. Ministerio de Salud. Dirección de Enfermedades Transmisibles por Vectores. Centro de Referencia de Vectores; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba; Argentina Fil: Lobbia, Patricia Alejandra. Ministerio de Salud. Dirección de Enfermedades Transmisibles por Vectores. Centro de Referencia de Vectores; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba; Argentina

Orientador: Angelo Pires do Prado Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Entre os ectoparasitos dos animais bovinos, o carrapato ¿ Boophilus microplus (Acari: Ixodidae) - continua sendo uma das principais causas das perdas econômicas na pecuária do Estado de São Paulo. A situação atual do controle do carrapato caracteriza-se por uma crise na produção de novas moléculas de parasiticidas e o desenvolvimento acelerado da resistência dos parasitas aos produtos usados. O presente trabalho teve por objetivo verificar o perfil de sensibilidade do carrapato B. microplus nas fazendas localizadas em alguns municípios do Vale do Ribeira e no município de Pindamonhangaba e propor um sistema de tratamento carrapaticida com base na infestação de paternóginas. Foram realizados testes de larvas - LPT (larval packet test) adotado pela FAO - teste de imersão com a fêmea adulta e o levantamento sobre as práticas de controle adotadas nas duas regiões. Os resultados de resistência para as fazendas de Pindamonhangaba mostraram que, para cipermetrina 15,4% das fazendas foram classificadas como sensível; 7,7% com resistência nível I; 69,2% com resistência nível II e 7,7% com resistência nível III. Para a deltametrina 23% sensível; 38,5% com resistência nível II e 38,5% com resistência nível III. Para o organofosforado clorpirifós 54% mostraram-se sensível; 38,4% com resistência nível I e 7,6% com resistência nível II. A região do Vale do Ribeira apresenta uma média de eficácia inferior a 20% para os piretróides; eficácia entre 49% e 72% para as associações piretróides e organofosforados; 66,83% para o amitraz e acima de 90% para as associações entre os organosfosforados. Para o teste de larvas a cipermetrina apresentou uma porcentagem de 42,85% de amostras sensível; 14,3% com resistência nível I e 42,85% com resistência nível II. Deltametrina, 50% sensível; 25% com resistência nível II e 25% com resistência nível III. O organofosforado clorpirifós mostrou uma porcentagem de 50% de amostras sensível; 25% com resistência nível I e 25% com resistência nível II. Constatouse, para as duas regiões estudadas, a falta de conhecimento dos principais grupos químicos usados no controle dos carrapatos. O produto amitraz é o mais usado e a maioria das fazendas usam o método de pulverização na aplicação dos carrapaticidas. Experimento realizado no ano de 2001 a 2003 num sítio localizado no município de Ibiúna mostrou que a avaliação de infestação de paternóginas do carrapato B. microplus na área do úbere ou escroto e baixo períneo é um critério que pode ser empregado para se determinar a aplicação de carrapaticidas. Quando se realiza a aplicação de carrapaticidas nos animais infestados com bastante paternóginas diminui a infestação de larvas no campo. Testes de bioensaios, usando fêmeas adultas, realizados num intervalo de três meses, e teste de larvas no período de seis meses servem como orientação para o proprietário na avaliação da sensibilidade dos carrapatos aos produtos químicos Abstract: The cattle tick - Boophilus microplus (Acari: Ixodidae) ¿ is one of the principal causes of economic losses in the cattle farms in São Paulo state. The current situation of the tick control is characterized by a crisis in the production of new molecules with acaricidal properties and by an increasing in the parasites resistance to the products used to control them. The current study aimed to verifying the sensibility profile of tick B. microplus in farms located in the municipalities of Vale do Ribeira and in the region of Pindamonhangaba, and propose a tick control treatment system based on nymph infestation. The resistance diagnosis tests have been carried by the larval bioassay (Larval packet test), adult immersion test and the survey of the tick control practices applied in both regions. The results for the farms at Pindamonhangaba show that to Cypermethrin 15,4% of the farms were classified as sensible, 7,7% resistance level I, 69,2% resistance level II and 7,7% resistance level III. To deltamethrin 23% were considered sensible, 38,5% Resistance level II, and 38,5% resistance level III. To organophosphate chlorpyriphos 54% presented a sensible frame, 38,4% resistance level I and 7,6% resistance level II. The Vale do Ribeira region presents an average efficacy lower than 20% for all pyrethroids; efficacy between 49% and 72% to associations with pyrethroids and organophosphates; 66,83% to amitraz, and over 90% to organophosphates associations. For the larval test, the cypermethrin presented a percentage of 42,85% from samples sensible; 14,3% resistance level I and 42,85% resistance level II. Deltamethrin, 50% sensible; 25% resistance level II and 25% resistance level III. The organophosphate chlorpyriphos presented a percentage of 50% from samples sensible; 25% resistance level I and 25% resistance level II. It has been proved, that for both regions under this study, there is a lack of knowledge concerning the main chemical groups used in the tick control. The amitraz is the most used and most farms apply the pulverization method when performing the tick control. An experiment taken from 2001 to 2003 in a little farm located in the municipality of Ibiúna has shown the evaluation in the infestation of tick B. microplus in the udder area or escrotum and low perineum is a good criteria to be applied in order to determine the application of anti-ticks. When the application of anti-ticks is undertaken on infested animals full of pathenogens, the field larvae infestation is diminished. Bioassay, using engorged female ticks, undertaken at three months intervals and larval packet test undertaken at six months intervals serve as orientation for the owners for the evaluation of ticks¿ sensibility to the chemical products Doutorado Entomologia Doutor em Parasitologia

Triatominae (kissing bugs) are the vectors of Chagas disease. Chemical control of these insects is the main tool for reducing the incidence of the disease. Pyrethroids are the main insecticides used for triatomine control in all endemic countries. The evolution of insecticide resistance renders a successful chemical control strategy ineffective. In Argentina, different foci of resistance have been detected in Triatoma infestans—the most important vector in the Southern Cone of South America, which are associated with control deficiencies. The studies conducted on this species show that resistance is a complex problem because it has evolved in several areas of the species’ geographical distribution. Different resistance mechanisms have been identified. Resistance is associated with changes in various biological processes and linked to environmental changes. There is a lack of control alternatives. This paper is a review of the knowledge on pyrethroid resistance in T. infestans in Argentina. Los insectos triatominos son los vectores de la enfermedad de Chagas. El control químico de estos insectos es la principal herramienta utilizada para reducir la incidencia de la enfermedad. Los piretroides son los principales insecticidas utilizados para el control de los triatominos en todos los países endémicos. La evolución de resistencia a insecticidas convierte en ineficiente una exitosa estrategia de control químico. En Argentina se han detectado diferentes focos de resistencia en Triatoma infestans, el vector más importante en el Cono Sur de Sudamérica, asociados a deficiencias en el control. Los estudios realizados sobre esta especie muestran que la resistencia es un problema complejo, ya que evolucionó en varias zonas de la distribución geográfica de la especie, se identificaron diferentes mecanismos de resistencia, está asociada a modificaciones en diversos procesos biológicos, está vinculada a variaciones ambientales y hay escasez de alternativas de control. En este manuscrito presentamos una revisión del conocimiento sobre la resistencia a piretroides en T. infestans en Argentina. Os insetos triatomíneos são os vetores da doença de Chagas. O controlo químico desses insetos é a principal ferramenta utilizada para reduzir a incidência da doença. Os piretróides são os principais inseticidas usados para controlar os triatomíneos em todos os países endémicos. A evolução da resistência aos inseticidas converte em ineficiente uma estratégia de controlo químico eficiente. Na Argentina foram detetados diferentes focos de resistência em Triatoma infestans, o vetor mais importante do Cone Sul da América do Sul, associados a deficiências de controlo. Os estudos realizados nesta espécie mostram que a resistência é um problema complexo, visto que evoluiu em várias áreas da distribuição geográfica da espécie. Foram identificados diferentes mecanismos de resistência, associados a modificações em vários processos biológicos e ligados a variações ambientais, havendo uma escassez de alternativas de controlo. Neste manuscrito é apresentada uma revisão do conhecimento sobre a resistência aos piretróides em T. infestans na Argentina.

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Según datos de la Organización Mundial de la Salud (OMS), la enfermedad de Chagas es una de las principales enfermedades desatendidas del subcontinente latinoamericano. El agente causante es el parásito protozoario Tripanosoma cruzi, transmitido a humanos por insectos triatominos de distintas especies. Debido a la ausencia de vacunas y tratamientos efectivos para la etapa crónica de la enfermedad, el control del vector sigue siendo el medio elegido para reducir el riesgo de transmisión. Después de casi 30 años de tratamiento con insecticidas piretroides, han emergido poblaciones de Triatoma infestans con altísimos niveles de resistencia, asociadas a fallas en las campañas de control, lo que plantea la necesidad de programas para el manejo de resistencia a nivel regional. Un requerimiento fundamental para ello es la detección temprana de la dispersión de poblaciones e individuos resistentes, así como del surgimiento de nuevos focos. Los piretroides ejercen su acción insecticida modificando el funcionamiento fisiológico de canales proteicos de Na+ dependientes de voltaje (NaV), presentes en la membrana de células excitables. Se conoce como kdr (knockdown resistance) a la reducción en la sensibilidad a piretroides causada por mutaciones puntuales en el gen NaV. El mecanismo de resistencia tipo kdr ha sido descrito en numerosas especies de insectos de interés económico y sanitario. La gran mayoría de las mutaciones correlacionadas con resistencia a piretroides se encuentra en el dominio II de esta proteína. El diseño de ensayos moleculares para detección de mutaciones asociadas a resistencia habilita la detección temprana de dispersión y surgimiento de nuevos focos, al permitir detectar la presencia de dichas mutaciones en insectos individuales, cuando la frecuencia poblacional de las mismas aún es baja. La detección temprana no puede conseguirse con ensayos de toxicidad, que detectan resistencia a nivel poblacional y no individual. En este sentido, en la primera parte de esta Tesis se realizó una evaluación de la sensibilidad y una optimización de los métodos moleculares de detección de mutaciones asociadas a resistencia, seguida de un estudio de la presencia de mutaciones para la región IIS4-IIS6 del gen del canal TiNav presentes en distintas poblaciones de T. infestans resistentes a piretroides provenientes de la ecoregión del Gran Chaco. Por otro lado, a través de una secuencia de TiNav detectada en una base de datos transcriptómica depositada en vector base (https://www.vectorbase.org/), complementada con el clonado y pirosecuenciación de regiones concretas del gen, se obtuvo la secuencia nucleotídica completa del mismo, y se realizó una caracterización bioinformática de la secuencia aminoacídica. Los resultados de esta parte del trabajo podrían tener aplicabilidad en el manejo de resistencia dentro de las campañas de control primario de Chagas. Durante el transcurso de la primera parte de la Tesis hemos encontrado que, aunque las mutaciones en el gen TiNav parecen ser la principal causa de resistencia a piretroides en T. infestans provenientes del Gran Chaco, no toda la resistencia es explicable por estos polimorfismos; distintas poblaciones con la misma frecuencia en una mutación kdr presentaron tasas de resistencia muy variables. Esto puede indicar que existen otros mecanismos de resistencia potencialmente involucrados en el fenómeno, tales como procesos de detoxificación y cambios en la penetrancia cuticular. En la segunda parte de esta Tesis, se realizó un estudio comparativo de la expresión diferentes enzimas detoxificativas entre una población sensible y una resistente de T. infestans provenientes del Gran Chaco. También se estudió la expresión génica en una población sensible expuesta a deltametrina, a fin de estudiar su posible papel en la respuesta detoxificativa a insecticidas piretroides, y posiblemente en la resistencia. Los experimentos mostraron una sobreexpresión de un citocromo P450 del clado 4 en la población resistente de T. infestans del Gran Chaco. No detectamos cambios en la expresión de las enzimas estudiadas cinco horas después de una topicación con deltametrina. Se estudió el rol de una Glutatión Transferasa del clado Delta (deltaGST) en la detoxificación de deltametrina. Se realizaron estudios bioinformáticos y de fisiología molecular usando como modelo Rhodnius prolixus. Se registró un aumento en la letalidad causada por dosis bajas de deltametrina cuando la expresión del gen de gst delta fue disminuida significativamente con técnicas de ARN de interferencia. La llamativa conservación en la estructura, función y farmacología del canal de sodio dependiente de voltaje a través del reino animal, genera que aquellos insecticidas que tengan como blanco esta molécula posean también una toxicidad potencial para otras especies. En este sentido, y teniendo en cuenta que las moléculas del sistema neuroendocrino (neuropéptidos y sus receptores) han sido propuestos como blanco de insecticidas, en el Capítulo 3 se estudió la expresión diferencial de genes precursores de diferentes neuropéptidos entre una población de T. infestans sensible a piretroides y otra resistente, a fin de obtener indicios de su posible papel en procesos asociados a resistencia. Por otra parte, se comparó el efecto de deltametrina en la inducción de la expresión de genes precursores de neuropéptidos en una población susceptible de T. infestans. En el Capítulo 4, a partir de secuencias ortólogas en Anopheles gambiae, Apis mellifera, Bombyx mori, Drosophila melanogaster y Tribolium castaneum, se identificaron genes de receptores de neuropéptidos en transcriptomas de T. infestans, Triatoma dimidiata y Triatoma pallidipennis generados en nuestro laboratorio, así como en el genoma de R. prolixus, por medio de búsquedas en bases de datos y análisis filogenéticos. Se espera que esta última parte del trabajo de Tesis aporte conocimientos para ampliar los horizontes en la investigación de posibles nuevos blancos de insecticidas, que sean capaces de reemplazar o complementar a los neurotóxicos dentro de estrategias de manejo integrado de plagas., Facultad de Ciencias Exactas

La exposición aguda o crónica de mamíferos (incluyendo humanos) a los plaguicidas modernos puede causar neurotoxicidad. Los piretroides (PIRs) son insecticidas sintéticos cuyo uso en el control de plagas a nivel agrícola y peri-domiciliario se ha incrementado en los últimos años. Se propone que la mayoría de los PIRs comparten el mismo modo primario de acción (MdA) en las plagas (insectos) y en los mamíferos. Para cada PIR administrado de manera individual los estudios previos realizados en ratas adultas reportanque la toxicidad difiere de un compuesto a otro hasta 103veces, ya sea evaluando efectos adversos subletales o letalidad. Si bien existen estudios medioambientales que confirman la exposición simultánea a dosis bajas de múltiples PIRs, se dispone de poca información toxicológica que permita fundamentar empíricamente los rangos de dosis que pueden considerarse inocuos en humanos luego de exposición a combinaciones de PIRs, que es lo que puede ocurrir en la realidad. En este trabajo se expusieron ratas Wistar adultas machos a dosis orales agudas bajas (0,1-12 mg/kg) de PIRs Tipo I (Bifentrina y Teflutrina) y Tipo II (α-Cipermetrina y Deltametrina) a fin de evaluar las curvas dosis-efecto de cada PIR. La variación de temperatura subcutánea (Tsc) se usó como medida de efecto neurotóxico. La Tsc se registró cada 30 minutos durante 5 h, y ~1 h después de finalizar el monitoreo de Tsc se sacrificaron los animales, se extrajeron muestras de sangre, hígado y cerebelo,y se determinó la concentración de cada PIR en los tejidos mediante cromatografía gaseosa con detector de captura de electrones (GC-ECD). Como hipótesis se consideró que la acción combinada de dosis bajas de estos PIRs debía seguir los postulados del “modelo de dosis aditiva” (dose addition) teniendo en cuenta que estos insecticidas tienen un mismo MdAen ratas. Los resultados mostraron que al administrar cada PIR en forma individual o combinada huborelación directa entre la dosis administrada, la concentración en tejidos, y la magnitud del efecto sobre la Tsc. Además, la relación dosis-efecto obtenida, las concentraciones absolutas de los 4 PIRs y sus proporciones (respecto a la carga total de PIRs) en los tejidos examinados luego de la administración de la mezcla sugieren la ausencia de interacción sinérgica y la confirmación de la hipótesis (modelo de dosis aditiva). Este trabajo permite ejemplificar una aproximación metodológica exploratoria para evaluar hipótesis relevantes en los procesos de evaluación de riesgo, especialmente en el caso de escenarios realistas de exposición humana (ambiental, ocupacional o alimentaria) a mezclas de estos plaguicidas. Acute or chronic exposure to modern pesticides maycause neurotoxicityinmammals (including humans). Pyrethroidinsecticides(PYRs) are synthetic compounds increasingly used for agricultural and household pest control. In vivoand in vitroevidence strongly suggest that PYRs share a similar primary Mode of Action (MoA)in pests (insects) and mammals.In general, single-compounddose-effect studies using sublethal effects and lethality as endpoints haveshown that toxicity may differ up to 103-foldacross PYRs in adult rats. There are several environmental studies reportingsimultaneous exposure to low doses ofmultiple PYRs, butlittle toxicological information is available to empirically establishmaximum safe levels of PYRs inhumans after low-dose combined exposure tomultiple PYRs.In this PhD Thesis, male adult Wistar rats were exposed to low acute oral doses (0.1-12 mg/kg)of Type I (Bifenthrin and Tefluthrin) and Type II (α-Cypermethrin and Deltamethrin) PYRsin order to obtainsingle-compound dose-effect curves and identify low-dose levels for every PYR.Subcutaneoustemperature (Tsc)monitoring was conducted for a measure of neurotoxicity. Tscwas recorded every 30 minutes through5 h, and ~ 1 h after animals were sacrificed, blood, liver and cerebellum samples were dissected out, and the concentration of the test PYRs was measured using gas chromatography with an Electron Capture Detector (GC-ECDsystem).As a hypothesis, it was considered that the combined action of low doses of these PYRs should follow the postulates of the “dose addition model” considering that these insecticides share a similar MOAin adult rats.The results showed a direct relationship between the administered dose, the concentration of test chemicals in the tissues, and the magnitude of the Tsc effectin single compound and combined assays. Furthermore, the exposure-dose-effect relationship obtained,the absolute concentrations of the 4 PYRs and their proportions ([PYRi] / Σ[PYRs])in the tissues examined after the administration of themixture did not provide any evidence of synergy, and strongly suggest athe confirmation of the hypothesis (dose addition model).This work allows exemplifying an exploratory methodological approach to evaluate relevant hypotheses in the processes ofrisk assessment, especially in the case of simulations of environmentally relevant scenarios of exposure (dietary,environmentaland/oroccupational) to PYR mixtures in humans. Fil: Mosquera Ortega, Mónica Elizabeth. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.