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Nowadays, in Spain, at a state and regional level, the cheese makers community is made up of small artisanal productions. Often, these artisans do not have basic scientific knowledge, and they acquire it from trial and error. In Catalonia, these artisans produce more than 250 different varieties of cheese, creating a huge variety of products that are considered local gastronomic heritage. However, the sanitary authorities in the last years have changed their criteria regarding raw milk and raw milk cheese, stating that these cheeses can cause different zoonotic diseases. In this paper, we will do a bibliographic review about microbiology, raw milk, raw milk cheese, and its fabrication process. We will do an easy overview so that a basic knowledge of the previously stated areas can be acquired. The result of this bibliographic review has been acknowledging that the main factors in order to control the growth of the different microorganisms are the pH, temperature, and the activity of the water of the cheese. Also, which are the pathogens that present a higher risk and the ways to avoid its growth. Support for the European guide of good hygiene practices has been made, stating the pages of the guide you should consult in order to produce in a safe manner during all the different processes of raw cheese production. The guide has been based on the cheese production process, pointing out all the aspects that the guide indicated. Adding information to the different aspects that are required. This support explains that following a good guideline during the production process, raw milk cheese can be produced in a safe and hygienic way. We have seen that the initial microbiota, and so the quality of the raw milk, is vital in order to be able to produce raw milk cheese safely. The milk contains molecules such as lactoferrin or the lactoperoxidase system that naturally protect milk from the growth of certain pathogens. In addition, we have elaborated a guideline to produce cheese of the Camembert type, as it represents the cheeses with higher risk. We also list the different legal permits required in order to produce raw milk cheese. With this paper, we have concluded that with a good education, the artisans should not have any problem producing raw milk cheese in a safe manner. Avui en dia, a Espanya, tant en l'àmbit estatal com autonòmic, el teixit formatger està molt basat en petites produccions artesanes. Molts cops, aquests productors no tenen una formació científica de base i van aprenent a base d'errors. Aquests productors a Catalunya produeixen més de 250 diferents varietats de formatges, creant una diversitat de productes que es considera patrimoni gastronòmic local. Les autoritats sanitàries no obstant, els últims anys han anat canviant de criteri en relació amb la llet crua i el formatge de llet crua, al·legant que aquests formatges poden provocar diverses malalties zoonòtiques. En aquest treball realitzarem una revisió bibliogràfica extensa sobre la microbiologia, la llet crua, els formatges de llet crua i el procés de fabricació. Durem a terme un resum senzill de manera que es puguin adquirir uns coneixements bàsics sobre tot l'anterior. El resultat d'aquesta revisió bibliogràfica ha sigut veure que els principals factors de creixement dels microorganismes a controlar són el pH, la temperatura i l'activitat d'aigua dels formatges. També quins són els patògens de més risc i maneres d'evitar que aquests puguin créixer. S'ha fet una guia d'acompanyament a la guia europea de bones pràctiques d'higiene referenciant les pàgines de la guia a consultar per treballar segur a les diferents etapes de l'elaboració de formatges. La guia s'ha basat en el procés d'elaboració del formatge assenyalant tots els punts que marcava la guia europea. Afegint informació en els punts en què aquesta era necessària. Aquest acompanyament explica que seguint unes bones pautes durant el procés d'elaboració es pot produir el formatge de manera higiènica i segura. Hem pogut veure que la microbiota inicial, i, per tant, la qualitat de la llet crua, és vital a l'hora de poder produir el formatge de llet crua de manera segura. La llet conté molècules com la lactoferrina o el sistema lactoperoxidasa que de manera natural poden protegir la llet de possibles creixements de patògens. A més, hem elaborat una guia d'elaboració del formatge tipus Camembert com a representant dels formatges de més risc. També llistem els permisos necessaris per a poder començar a produir els formatges de llet crua. Per tant, amb aquest treball es conclou que amb una bona formació, els productors no haurien de tenir problemes per a produir formatges de llet crua de manera segura. Hoy en día, en España, tanto a nivel estatal como autonómico, el tejido quesero está muy basado en pequeñas producciones artesanas. Muchas veces, estos productores no tienen una formación científica de base y van aprendiendo a base de errores. Estos productores en Cataluña producen más de 250 diferentes variedades de queso, creando una diversidad de productos que se consideran patrimonio gastronómico local. Las autoridades sanitarias no obstante, los últimos años han cambiado de criterio con relación a la leche cruda y el queso de leche cruda, alegando que estos quesos pueden provocar varias enfermedades zoonóticas. En este trabajo realizaremos una revisión bibliográfica extensa sobre la microbiología, la leche cruda, los quesos de leche cruda y el proceso de fabricación. Realizaremos un resumen sencillo de manera que se puedan adquirir unos conocimientos básicos sobre todo lo anterior. El resultado de esta revisión ha sido ver que los principales factores de crecimiento de los microorganismos a controlar son el pH, la temperatura y la actividad de agua de los quesos. También cuáles son los patógenos de mayor riesgo y maneras de evitar que estos puedan crecer. Se ha hecho una guía de acompañamiento a la guía europea de buenas prácticas de higiene referenciando las páginas de la guía a consultar para trabajar de manera segura en las diferentes etapas de elaboración del queso. La guía se ha basado en el proceso de elaboración del queso señalando todos los puntos que marcaba la guía europea. Añadiendo información en los puntos en que era necesaria. Este acompañamiento explica que siguiendo unas buenas pautas durante el proceso de elaboración se puede producir el queso de manera higiénica y segura. Hemos podido ver que la microbiota inicial, y, por lo tanto, la calidad de la leche cruda, es vital para poder producir el queso de leche cruda de manera segura. La leche contiene moléculas como la lactoferrina o el sistema lactoperoxidasa que de manera natural pueden proteger la leche de posibles crecimientos de los patógenos. Además, hemos elaborado una guía de fabricación del queso tipo Camembert como representante de los quesos de mayor riesgo. También listamos los permisos necesarios para poder empezar a producir los quesos de leche cruda. Con este trabajo se concluye que con una buena formación, los productores no deberían tener problemas para producir quesos de leche cruda de manera segura. Objectius de Desenvolupament Sostenible::3 - Salut i Benestar

Les infeccions causades per bacteris resistents a múltiples antibiòtics son una amenaça tant per a la salut animal com la humana degut a la limitació en el tractament, la qual pot portar a complicacions clíniques severes, estades hospitalàries més llargues o, fins i tot, a la mort. Els bacteris resistents a múltiples antibiòtics poden ser transmesos al medi ambient, a altres animals o a humans a través de diferents vies, tals com la contaminació fecal o per la cadena alimentària. En aquest escenari, l’aproximació One-Health considera la salut com una entitat global, incloent la humana, l’animal i la mediambiental. L’objectiu d’aquesta tesis és optimitzar l’ús de reads llargs en la seqüenciació de genoma complet (whole-genome sequencing) per a la caracterització del cromosoma i plasmidis bacterians, incloent la presència de gens de resistència a antibiòtics, elements genètics mòbils, i factors de virulència. Mitjançant l’ús de seqüenciació de genoma complet amb reads llargs hem muntat de novo cromosomes i plasmidis en contigs únics per a Staphylococcus pseudintermedius aïllats en gossos, Escherichia coli d’animals de producció i el granger, i Klebsiella pneumoniae d’humans. Aquesta aproximació ha permès localitzar els gens de resistència a antibiòtics en plasmidis o cromosoma, i ha permès seqüenciar elements genètics mòbils sencers, superant així els desavantatges associats al reads curts. A més, hem pogut descriure la transmissió de plasmidis similars que duien gens de resistència a antibiòtics per a Escherichia coli resistent a colistina en una granja mixta, i per a Klebisella pneumoniae resistent a carbapenems en un brot interhospitalari. Els perfils de resistència a antibiòtics i factors de virulència d’Staphylococcus pseudintermedius aïllats de gossos i Escherichia coli d’animals de producció ressalten el rol dels animals domèstics com a un reservori de patògens amb alt potencial zoonòtic. Las infecciones causadas por bacterias resistentes a múltiples antibióticos son una amenaza tanto para la salud animal como la humana debido a la limitación en el tratamiento, la cual puede conllevar complicaciones clínicas severas, estancias hospitalarias más largar o incluso la muerte. Las bacterias resistentes a múltiples antibióticos pueden ser transmitidos al medio ambiente, otros animales o humanos mediante diferentes vías, tales como la contaminación fecal o a través de la cadena alimentaria. En este escenario, la aproximación One-Health considera la salud como una entidad global, incluyendo la humana, la animal y la medioambiental. El objetivo de esta tesis es optimizar el uso de reads largos en la secuenciación de genoma completo (whole-genome sequencing) para la caracterización del cromosoma y plásmidos bacterianos, incluyendo la presencia de genes de resistencia a antibióticos, elementos genéticos móviles, y factores de virulencia. Mediante el uso de secuenciación de genoma completo con reads largos hemos montado de novo cromosomas y plásmidos en contigs únicos para Staphylococcus pseudintermedius aislados de perros, Escherichia coli de animales de producción y el granjero, i Klebsiella pneumoniae de humanos. Esta aproximación ha permitido localizar los genes de resistencia a antibióticos en plásmidos o el cromosoma, y ha permitido secuenciar elementos genéticos móviles completos, superando así las desventajas asociadas a reads cortos. Además, hemos podido describir la transmisión de plásmidos similares que llevaban genes de resistencia a antibióticos para Escherichia coli resistente a colistina en una granja mixta, y para Klebsiella pneumoniae resistente a carbapenems en un brote interhospitalario. Los perfiles de resistencia a antibióticos y factores de virulencia de Staphylococcus pseudintermedius aislados de perros y Escherichia coli de animales de producción resaltan el rol de los animales domésticos como reservorio de patógenos con alto potencial zoonótico. Multi-drug resistant bacteria infections are a threat to animal and human health due to the limitation in treatment, which can lead to severe clinical complications, longer hospital stays, or even death. Multi-drug resistant bacteria can be transmitted to the environment, other animals, or humans via different ways, such as fecal contamination or food-chain. In this scenario, One-Health is an approach that considers health as a global entity, including human, animal, and the environment. The aim of this thesis is to optimize the use of long reads in whole-genome sequencing approaches for characterizing the bacterial genome and plasmids, including the presence of antibiotic resistance genes, mobile genetic elements, and virulence factors. By using long-read whole-genome sequencing, we de novo assembled complete chromosomes and plasmids as single contigs for Staphylococcus pseudintermedius from dogs, Escherichia coli from livestock and the farmer, and Klebsiella pneumoniae from humans. This approach located the antibiotic resistance genes in plasmids or chromosomes and spanned mobile genetic elements, thus overcoming the pitfalls associated with short reads. Moreover, we unraveled the transmission of similar plasmids harboring antibiotic resistance genes for colistin-resistant Escherichia coli in a mixed farm and for carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae in an inter-hospital outbreak. The antibiotic resistance and virulence factor genes profiles of Staphylococcus pseudintermedius from dogs and Escherichia coli from livestock highlight the role of domestic animals as a reservoir of pathogens with highly zoonotic potential. Universitat Autònoma de Barcelona. Programa de Doctorat en Producció Animal

Universitat Pompeu Fabra. Departament de Ciències Experimentals i de la Salut.-- Fecha de defensa: 23-03-2021., [EN] Infectious diseases have affected humanity since its apparition in Africa 300,000 years ago. Demographic changes associated to the Neolithic transition, and ensuing population movements, have facilitated the emergence and expansion of those diseases around the world. The usage of ancient DNA has allowed us to have a snapshot of ancient pathogens’ genomes. In this thesis I present the genomes of different ancient pathogens associated to a global disease, to an historical individual case and to past epidemics. In the first case, we retrieve the partial genome of a European Plasmodium falciparum strain, which hints the arrival of the parasite to Europe during antiquity. We also take a look at French revolutionary Jean-Paul Marat’s condition, in order to shed light to his mysterious condition. Finally, we analyse an ancient Salmonella enterica Paratyphi C strain, which suggests that, although infections by this particular serovar are fairly scarce in the present, in the past could have been the responsible agent of epidemics around the globe., [CA] Les malalties infeccioses han afectat a l’ésser humà des de la seva aparició a Àfrica fa 300,000 anys. Canvis demogràfics associats a la transició neolítica, i posteriors moviments poblacionals, han afavorit l’aparició i dispersió d’aquestes malalties al voltant del mon. L’ús de ADN antic permet obtenir una finestra temporal des d’on observar com eren aquests patògens en el passat. En aquesta tesi presento els genomes d’una sèrie de patògens antics associats a malalties, casos individuals històrics i epidèmies. En el cas de la malaltia, recuperem un genoma parcial d’una soca Europea erradicada de Plasmodium falciparum, la qual dóna indicis de l’arribada del paràsit a Europa durant l’antiguitat. Fem una ullada també al cas del revolucionari francès Jean Paul Marat amb la intenció d’esbrinar l’origen de la seva condició. Finalment analitzem una soca de Salmonella enterica Paratifoide C que podria suggerir que aquest patogen, actualment escàs, era el responsable d’epidèmies al voltant del mon.

Infectious diseases have affected humanity since its apparition in Africa 300,000 years ago. Demographic changes associated to the Neolithic transition, and ensuing population movements, have facilitated the emergence and expansion of those diseases around the world. The usage of ancient DNA has allowed us to have a snapshot of ancient pathogens’ genomes. In this thesis I present the genomes of different ancient pathogens associated to a global disease, to an historical individual case and to past epidemics. In the first case, we retrieve the partial genome of a European Plasmodium falciparum strain, which hints the arrival of the parasite to Europe during antiquity. We also take a look at French revolutionary Jean-Paul Marat’s condition, in order to shed light to his mysterious condition. Finally, we analyse an ancient Salmonella enterica Paratyphi C strain, which suggests that, although infections by this particular serovar are fairly scarce in the present, in the past could have been the responsible agent of epidemics around the globe. Les malalties infeccioses han afectat a l’ésser humà des de la seva aparició a Àfrica fa 300,000 anys. Canvis demogràfics associats a la transició neolítica, i posteriors moviments poblacionals, han afavorit l’aparició i dispersió d’aquestes malalties al voltant del mon. L’ús de ADN antic permet obtenir una finestra temporal des d’on observar com eren aquests patògens en el passat. En aquesta tesi presento els genomes d’una sèrie de patògens antics associats a malalties, casos individuals històrics i epidèmies. En el cas de la malaltia, recuperem un genoma parcial d’una soca Europea erradicada de Plasmodium falciparum, la qual dóna indicis de l’arribada del paràsit a Europa durant l’antiguitat. Fem una ullada també al cas del revolucionari francès Jean Paul Marat amb la intenció d’esbrinar l’origen de la seva condició. Finalment analitzem una soca de Salmonella enterica Paratifoide C que podria suggerir que aquest patogen, actualment escàs, era el responsable d’epidèmies al voltant del mon.

Juny

L’us de microorganismes com a bioconservants en productes mínimament procesats pot ser una alternativa als productes químics. En aquesta tesi es va estudiar l’efecte bioconservant de Pseudomonas graminis CPA-7 i Lactobacillus rhamnosus GG en el control de Salmonella enterica subsp. enterica i Listeria monocytogenes en pera mínimament processada. Es va observar que ambdós antagonistes van controlar el creixement dels patògens inoculats artificialment a concentracions elevades (103-104 ufc/g). No obstant, l’ús de substàncies antioxidants i d’atmosferes modificades va influir en l’efectivitat. Es va demostrar que L. rhamnosus GG, ademés de controlar el creixement de S. enterica i L. monocytogenes també va reduir el potencial patogènic de L. monocytogenes CECT 4032. L’ús d’ambdos antagonistes no va afectar negativament a la qualitat de la pera. La pera enriquida amb L. rhamnosus GG podria ser una font de probiòtics per aquelles persones que no els puguin consumir a través dels derivats lactis., El uso de microorganismos como bioconservantes en productos mínimamente procesados puede ser una alternativa a los productos químicos. En esta tesis se estudió el efecto bioconservante de Pseudomonas graminis CPA-7 y Lactobacillus rhamnosus GG en el control de Salmonella enterica subsp. enterica y Listeria monocytogenes en pera mínimamente procesada. Se observó que ambos antagonistas fueron capaces de controlar el crecimiento de los patógenos inoculados artificialmente a concentraciones elevadas (103-104 ufc/g). Aunque el uso de antioxidantes y de atmósferas modificadas influyó en la efectividad. Se observó demostró que L. rhamnosus GG, además de controlar el crecimiento de S. enterica y L. monocytogenes, también redujo el potencial patogénico de L. monocytogenes CECT 4032. El uso de ambos antagonistas no afectó negativamente a la calidad de la pera. La pera tratada con L. rhamnosus GG podría ser un aporte de probióticos para aquellas personas que no los obtengan con el consumo de derivados lácteos., The use of antagonistic microorganisms to control the growth of foodborne pathogens on minimally processed products could be an alternative to the use of chemical products. In this thesis the effect of Pseudomonas graminis CPA-7 and Lactobacillus rhamnosus GG against Salmonella enterica subsp. enterica and Listeria monocytogenes on minimally processed pear was studied. Both antagonistic microorganisms were able to control the growth of two foodborne pathogens artificially inoculated at high concentration (103-104 cfu/g). However, the use of antioxidant solutions and modified atmosphere affected their effectivity. Results shown that L. rhamnosus GG reduced the pathogenic ability of L. monocytogenes CECT 4032. The application of both antagonists did not affect negatively to pear quality. Minimally processed pear enriched with L. rhamnosus GG could be a source of probiotics to people who do not eat dairy products.

U „Narodnim novinama Međunarodni ugovori“ 3/10 objavljen je Zakon o potvrđivanju Međunarodne konvencije o nadzoru i upravljanju brodskim balastnim vodama i talozima iz 2004. godine, koji je Hrvatski sabor donio na sjednici 30. travnja 2010. Konvencija je sastavljena u Londonu 13. veljače 2004., u izvorniku na arapskome, kineskome, engleskome, francuskome, ruskom i španjolskom jeziku. Uz odluku o ratifikaciji objavljen je tekst Konvencije na engleskom jeziku i u prijevodu na hrvatski jezik. Konvencija je napisana u obliku standardne nomotehničke strukture uobičajene za međunarodne ugovore, a posebno za konvencije kao univerzalne izvore prava („viza“), što uključuje: preambulu, subjekte (stranke države članice IMO), definicije (mjerodavna uprava, balastne vode, svjedodžba, bruto-tonaža, štetni vodeni organizmi i patogeni talozi, brod i dr.); opće obveze, primjenu, rješavanje sporova, odnos prema međunarodnom pravu i drugim sporazumima, potpisivanje, pristup ratifikacija, odobrenje, stupanje na snagu, otkaz i drugo. Predmeti reguliranja ove konvencije su: kontrola prijenosa štetnih vodenih organizama i patogena brodskim balastnim vodama i talozima; znanstveno i tehničko istraživanje te praćenje stanja, pregled i izdavanje svjedodžba, kršenja, inspekcija brodova, otkrivanje kršenja i nadzor brodova, obavijest o postupcima u nadzoru brodova, nepotrebno kašnjenje brodova, tehnička pomoć, suradnja, priopćavanje informacija i drugo. Posebna karakteristika je u tome što se u sadržaj unose Pravila o nadzoru i upravljanju brodskim balastnim vodama i talozima (Pravilo A-1 do Pravilo A-5), Zahtjevi upravljanja i nadzora nad brodovima (Pravilo B-1 do Pravila B-6) i Posebni zahtjevi u određenim područjima (Pravilo C-1 do C-3), Standardi za upravljanjem balastnim vodama (Pravilo D-1 do D-5) i Zahtjevi za pregled i izdavanje svjedodžba za upravljanje balastnim vodama (Pravila E-1 do E-5). Komentar toga sadržaja predmet je ovoga rada., The Law on Adoption of the International Convention for the Control and Management of Ships’ Ballast Water and Sediments was published in the ‘’Official Gazette International Contracts’’ 3/10. The Law was brought by the Croatian Parliament on 30 April 2010. The Convention was established in London on 13 February 2004, in a single original in the Arabic, Chinese, English, French, Russian and Spanish languages. With the decision on ratification the text of the Convention was published in English and in Croatian translation. The Convention was developed as a standard nomotechnical structure normally used in international contracts, and particularly in conventions as universal legal sources (‘’visa’’), including: preamble, subjects (parties to the IMO member state), definitions (administrations, ballast waters, certificate, gross tonnage, harmful aquatic organisms and pathogen sediments, ship etc.); general obligations, implementation, dispute settlement, relationship to international law and other agremeents, signature, ratification, acceptance, approval, accession, entry into force, denunciation etc. The Convention regulates the following: control of transfer of harmful aquatic organisms and pathtogens through ships’ ballast water and sediments; scientific and technical research and monitoring, surveys and issuance of certificates, violations, ship inspections, detection of violations and control of ships, notification of control actions, undue delay to ships, technical assistance, co-operation, communication of information etc. It is specific for this Convention that Regulations for the Control and Management of Ships’ Ballast Water and Sediments (Regulation A-1 to Regulation A-5) are introduced as well as Management and Control Requirements for Ships (Regulation B-1 to B-6) and Special Requirements in Certain Areas (Regulation C-1 to C-3), Standards for Ballast Water Management (Regulation D-1 to D-5) and Survey and Certification Requirements for Ballast Water Management (Regulations E-1 to E-5). This paper elaborates on the cited contents.

El género Aeromonas está constituido por bacilos Gram negativos y comprende patógenos de animales poiquilotermos y oportunistas en humanos. El lipopolisacárido (LPS) es un importante factor de virulencia de Aeromonas hydrophila, por lo que se planteó hallar los genes implicados en la biosíntesis del núcleo del LPS de la cepa AH-3. Con este fin, se aislaron tres mutantes por inserción del transposón mini-Tn5::Km1 con un fenotipo alterado del núcleo, lo que permitió la caracterización de tres regiones wa genómicas distintas. La construcción de mutantes en los genes en los que fue posible y la elucidación de la estructura química de su núcleo mediante ESI MS y el análisis de metilación de los monosacáridos, permitió, junto con el análisis fenotípico del LPS mediante SDS-PAGE y los datos obtenidos a partir de su secuencia y de ensayos de complementación, asignar funciones a cada uno de ellos. Las regiones 2 y 3 wa, constituidas por 4 y 2 genes, respectivamente, codifican las enzimas para la biosíntesis del núcleo interno. La región 1 wa contiene 7 genes que codifican la epimerasa HldD, la ligasa del antígeno O WaaL y las transferasas para la biosíntesis del núcleo externo y la incorporación de la L,D-HepIV. Además, se estudió la distribución de distintos genes del núcleo y se observó su elevada conservación entre diferentes serotipos de Aeromonas mesófilas.Por otro lado, se realizó el análisis y la caracterización funcional de algunos de los genes de la agrupación wb de la cepa AH-3 responsable de la biosíntesis del antígeno O:34, obtenida en un estudio anterior. Consta de 17 genes entre los que se incluyen genes para la biosíntesis de GDP-manosa y dTDP-6-desoxi-L talosa y para la transferencia de sus monosacáridos, para la modificación del antígeno O con acetilaciones, para el inicio de la síntesis de las subunidades O (wecA), su transporte (wzx) y su polimerización (wzy), y para la determinación de la longitud de la cadena (wzz). La región promotora del gen wzz, localizada en función de la determinación de su inicio de transcripción por 5'RACE, presentaba una regulación por temperatura, de manera que el nivel de transcripción/expresión del gen era menor a 37ºC que a 20ºC, según los ensayos de RT-PCR semicuantitativa y de la actividad β-galactosidasa de la fusión transcripcional de la región promotora con el gen indicador lacZ.Este hecho ofrece una explicación a la diferente producción del LPS que presenta la cepa AH-3 a ambas temperaturas., The genus Aeromonas is composed of Gram-negative rod-shaped bacteria and comprises opportunistic and primary pathogens of poikilothermic and homeothermic animals, including humans. The lipopolysaccharide (LPS) is an important virulence factor of Aeromonas hydrophila. In order to identify the genes involved in the LPS core biosynthesis a mini-Tn5::Km1 transposon mutagenesis was carried out in strain AH-3 and three different mutants with an altered core phenotype were isolated, which enabled the characterization of three different wa genomic regions. By means of mutant construction in each gene when possible and their LPS core structures elucidation by ESI-MS and monosaccharides methylation analysis, together with LPS phenotypic analysis by SDS-PAGE and data obtained from the sequence analysis and complementation assays, it was possible to assign functions to each gene. Regions 2 and 3 wa, containing 4 and 2 genes, respectively, encode inner core biosynthesis enzymes. Region 1 wa includes 7 genes encoding HldD epimerase, WaaL Oantigen ligase and transferases involved in outer core biosynthesis and L,D-HepIV incorporation. Moreover, the LPS core genes distribution study showed a high conservation between different mesophilic Aeromonas serotypes. Analysis and functional characterization of some of the 17 genes of the AH-3 wb gene cluster responsible for the O:34-antigen biosynthesis, which had been identified in a previous work, was also performed. It contains genes for activated monosaccharides GDP manose and dTDP-6-deoxy-L-talose production and for transfer, for O-antigen acetylation, for the O-unit biosynthesis initiation (wecA), transport (wzx) and polymerization (wzy) and to determine the O-antigen chain length (wzz). The wzz promoter region was localized due to its transcription start site determined by 5'RACE. Semi-quantitative RT-PCR and β-galactosidase fusion assays lead to the conclusion that the wzz gene transcription/expression level was much lower at 37ºC than at 20ºC, which explains the differential O:34-antigen production at both temperatures.

INTRODUCCIÓN: El "Staphylococcus aureus" resistente a meticilina (SARM) es un patógeno de gran importancia para la Salud Pública tanto a nivel hospitalario como en la comunidad. Presenta una rápida diseminación por todo el mundo y crea resistencias a los diferentes antibióticos con gran facilidad. En España se describió por primera vez a finales de 1970 y su frecuencia hasta nuestros días ha seguido un curso ascendente en el que se han producido cambios epidemiológicos y moleculares destacables. Con objeto de conocer la situación actual del SARM en España, se realizó un estudio multicéntrico durante el período de junio de 2003 en el que participaron 64 hospitales españoles pertenecientes a 14 Comunidades Autónomas. OBJETIVOS: Se determinó el porcentaje de resistencia a meticilina en las cepas aisladas durante dicho período, se estudió la sensibilidad a otros antibióticos no beta-lactámicos, así como las propiedades genotípicas de las cepas SARM, la detección de genes de resistencia a macrólidos y finalmente el estudio de la producción de leucocidina de Panton-Valentine en aquellas cepas de adquisición comunitaria y en una selección de cepas de origen nosocomial. METODOLOGÍA: caracterización bioquímica de microorganismos, técnicas microbiológicas convencionales, métodos moleculares de ácidos nucleicos como PCR, Electroforesis en campo pulsátil (ECP), Multilocus sequence typing (MLST), Staphylococcal cassette chromosome mec (SCCmec). Detección de factores de virulencia. RESULTADOS y CONCLUSIONES:- El porcentaje de resistencia a meticilina fue del 20% (similar al obtenido en otros estudios realizados en nuestro país y en Europa).- No se detectaron cepas resistentes a glucopéptidos, aunque un 1,4% de las cepas presentaron heterorresistencia a vancomicina. - El 60% de las cepas resistentes a eritromicina presentaron un fenotipo MLSB codificado por los genes ermA y ermC y el 40% restante presentaron un fenotipo MSB codificado por el gen msrA. - Se identificó un complejo clonal dominante, 73% de las cepas, (ST125::P/Q::mecIV) cuyo ancestro genético podría estar relacionado con el clon epidémico internacional denominado Clon Pediátrico (ST5::mecIV). Estaba presente en todos los hospitales participantes en el estudio.- En menor frecuencia se detectaron otros clones epidémicos, EMRSA-16 (ST36::mecII), 8%, aislado preferentemente en la comunidad Gallega; EMRSA-15 (ST22::mecIV), 2%, aislado en un hospital de Palma de Mallorca; y un solo aislamiento del Clon Ibérico (ST247::mecI) aislado en un hospital de Toledo. - La prevalencia de los aislamientos de SARM de origen comunitario, productores de leucocidina de Panton-Valentine fue baja (3%). Las tres cepas fueron aisladas en dos hospitales en Barcelona y pertenecieron al mismo clon (ST8::BG::mecIV)., "EPIDEMIOLOGY OF RESISTANCE TO METHICILLIN IN STRAINS OF Staphylococcus aureus ISOLATED AT SPANISH HOSPITALS"INTRODUCTION: Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus (MRSA) is one of the most relevant health care-associated pathogens. The spread of new antibiotic resistance patterns among methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) and the detection of the first cases of infection by community-acquired (CA) MRSA, are among the most important features exhibited by MRSA in recent years in Spanish Hospitals.OBJECTIVES: A multicenter study was carried out in Spain during the period of June 2003 to evaluate the percentage of resistance to methicillin, the current levels of antibiotic resistance, the detection of genes of resistance to macrolides, the distribution of clones and the prevalence of strains producing Panton-Valentine Leucocidine and CA-MRSA. METHODS: Biochemical characterization, Molecular typing of MRSA isolates by Pulsed-field gel electrophoresis (PFGE), multilocus sequence typing (MLST) and Staphylococcal cassette chromosome mec (SCCmec). Production of Panton-Valentine Leucocidine by PCR.RESULTS AND CONCLUSION:- The percentage of methicillin resistance was to 20%. - There were no glycopeptide resistance, although 1.4% of the isolates showed vancomycin heteroresistance. - Resistance to macrolides of MLSB phenotype was found in 60% of MRSA strains. This was due to the presence of ermA and ermC. In 40% was detected MSB phenotype, these strains carried the genetic determinant msrA, responsible of an active erythromycin efflux. - It was detected a clonal complexe dominant, 73% of the isolates, (ST125::P/Q::mecIV) whose ancestral genetic background would be able to be pertaining to the epidemic international clone named Pediatric clone (ST5::mecIV). He was present at all of the participating hospitals in the study.- More rarely were detected another epidemic clones, EMRSA-16 (ST36::mecII), 8%, isolated preferentially in Galicia; EMRSA-15 (ST22::mecIV), 2%, isolated at Palma's hospital of Mallorca; And only one isolated of the Iberic clone (ST247::mecI) was found among the MRSA studied, isolated at Toledo's hospital.- The prevalence of CA-MRSA was very low in this period (3%). Three strains were isolated at two hospitals in Barcelona and belonged to the same clone (ST8::BG::mecIV ).