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Dans cette thèse, nous nous sommes intéressée à une mutation dans le gène SOCS2(Suppressor Of Cytokine Signaling 2) dont l’effet est pléiotrope, c’est-à-dire qu’il concerne plusieurs caractères d’intérêt chez la brebis laitière Lacaune. Cette mutation estdéfavorable pour la résistance aux mammites (inflammation de la mamelle), et favorable pour les caractères de croissance et de productionlaitière. Située dans le domaine de liaison très conservé de la protéine SOCS-2, cette mutation ponctuelle (SNP:Single Nucleotide Polymorphism) entraîne la perte de fonctionnalité de la protéine qui est impliquée dans une voie majeure de signalisation chez les mammifères, la voie JAK (Janus Kinase) / STAT (Signal Transducer and Activator of Transcription), régulant un large spectre de cytokines et de facteurs de croissance.Le premier objectif de cette thèse était de proposer la prise en compte de cette mutation dans le contexte de la sélection génomique dans la race Lacaune. Les méthodes d’évaluation pondérées, et l’ajout du SNP SOCS2parmi les marqueurs de la puce, ont apporté des gains de précisions sur les prédictions (respectivement +3,99% et +0,26% en moyenne), laissant envisager la possibilité d’unesélection plus efficace. La méthode Gene Contentétait également intéressante car elle a permis de dissocier la valeur génétique due au gène SOCS2de celle provenant des autres gènes (polygène). Ainsi nous avons montré que la sélection actuelle en race Lacaune permet de diminuer la fréquence de l’allèle défavorable SOCS2tout en améliorant la résistance aux mammites expliquée par le reste du génome.Le deuxième objectif était d’étudier les effets de SOCS-2 sur des caractères d’intérêt non évalués jusqu’à présent: statut infectieux des mamelles et reproduction chez la femelle, et croissance des mâles. Des études d’association avec une puce de 960 SNP, dont le SNP SOCS2, ont confirmé l’effet de SOCS2sur la production laitière et sur l’inflammation mammaire, et ont montré un effet direct sur l’infection à l’aide de nouveaux phénotypes fins (bactériologie, examens cliniques). Des modèles linéaires ont montréque la mutation SOCS2était associée à une augmentation de poids chez les jeunes mâles (+1,5%), comme cela avait été observé chez la brebis, et àune diminution du taux de réussite à l’insémination artificielle chez les brebis (+1,3 fois de risque d’échec), sans effet sur la prolificité. Ces résultats marquants et originaux sur la reproduction ouvrent la voie à des analyses complémentaires pour déterminer notamment à quelstade biologique (ovulation, fécondation, implantation embryonnaire, etc.) la protéine SOCS-2 pourrait intervenir.Le dernier objectif était de déterminer le rôle de la protéine SOCS-2 dans les mécanismes biologiques sous-jacents de l’immunité grâce à l’étude de la réponse de 14 brebis porteuses et non porteuses de la mutation à l’état homozygote dans le cadre d’une infection intra-mammaire par un Staphylococcus aureus. L’ensemble des brebis a présenté deux pics de recrutement de cellules immunitaires versla mamelle à 20 et 88 heures post-inoculation (T20 et T88). Une analyse différentielle des gènes exprimés a confirmé une modification du transcriptome à partir de T16 en lien avec l’activation du système immunitaire,des voies de réparation de l’ADN et d’apoptose cellulaire. Les brebis portant la mutation SOCS2se sont différenciées des brebis sauvages, par une réaction clinique accrue à T56 et une différence de recrutement de lymphocytes T au moment des pics inflammatoires. A T56, un total de 177 gènes était différentiellement exprimé entre les deux génotypes. Une analyse fonctionnelle de ces gènes, et l’intégration entre l’expression génique et les phénotypes, suggèrent que la mutation conduit à une sur activation des voies de transmission de signal et derégulation (interférons, STAT3) avec un impact délétère sur l’état clinique des brebis., In this PhD thesis, we investigated a mutation in the SOCS2gene (Suppressor Of Cytokine Signaling 2) with a pleiotropic effect, i.e.it affects several traits of interest in the Lacaune dairy sheep. This mutation is unfavorable for mastitis resistance (udderinflammation), and favorable for growth and milk production traits.This point mutation (SNP -Single Nucleotide Polymorphism), located in the highly conserved binding domain of the SOCS-2 protein,causes the loss of functionality of the protein that is involved in a major signaling pathway in mammals:the JAK(Janus Kinase) / STAT (Signal Transducer and Activator of Transcription) pathway, regulating a large spectrum of cytokines and growth factors.The first objective of this PhD thesis was to provide a basis for considering this mutation in the context of genomic selection in the Lacaune breed. Weighted evaluation methods, and the addition of the SOCS2SNP among the chip markers, brought gains in accuracy on predictions (+3.99% and +0.26% respectively on average), suggesting the possibility of more efficient selection. The Gene Contentmethod was also interesting because it alloweddissociatingthe genetic value due to the SOCS2gene from that of the other genes (polygene). Thus, we have shown that the current selection in Lacaune breed allows reducing the frequency of the unfavorable SOCS2allele while improving the resistance to mastitis explained by the remaining part of the genome.The second objective was to study the effects of SOCS2on traits of interest not yet investigated: udder infection status and reproduction in females, and growth in males. Association studies with a 960 SNP chip, including SOCS2SNP, confirmed the effect of SOCS2on milk production and mammary inflammation, and showed a direct effect on infection using new fine phenotypes (bacteriology, clinical examinations). Linear models showed that the SOCS2mutation was associated withan increase in weight in young males (+1.5%), as observed in ewes, and a decrease in the artificial insemination success rate in ewes (+1.3 times the risk of failure), with no effect on prolificacy. These striking and original results on reproduction pave the way for further analyses to determine in particular at what biological stage (ovulation, fecundation, embryonic implantation, etc.) the SOCS-2 protein could be involved.The last objective was to determine the role of the SOCS-2 protein in the underlying biological mechanisms of immunity by investigating the response of 14 homozygous carrier and non-carrier ewes to intramammary infection by Staphylococcus aureus. All ewes developed two peaks of immune cell recruitment to the udder at 20 and 88 hours post-inoculation (T20 and T88). Differential analysis of the expressed genes confirmed a modification of the transcriptome from T16 related to the activation of the immune system, the DNA repair and the cellular apoptosis pathways. Ewes carrying the SOCS2mutation were distinguished from wild ewes by an increased clinical response at T56 and a difference in T lymphocyte recruitment at the time of the inflammatory peaks. At T56, a total of 177 genes were differentially expressed between the two genotypes. A functional analysis of these genes, and the integration between gene expression and phenotypes, suggest that the mutation leads to an over activation of signal transmission and regulatory pathways (interferons, STAT3) with a deleterious impact on the clinical status of ewe.

Les mammites infectieuses sont des inflammations de la mamelle provoquees principalement par des bacteries. Elles representent un probleme majeur en elevage car elles entrainent d’importantes pertes economiques pour la filiere lait et produits laitiers. En effet, elles vont toujours de pair avec une baisse de la production laitiere des quartiers touches de la mamelle. Cette baisse est la plus nette en cas de mammites cliniques. Les infections mammaires cachees ou mammites subcliniques reduisent egalement la productivite jusqu’a 40% (Schaeren, 2006) et les durees de vie des vaches concernees deviennent plus courtes. Par ailleurs, a noter l’augmentation des frais veterinaires et de medicaments ainsi que des pertes au niveau de la quantite du lait livre dues aux traitements de ces infections mammaires. Pour toutes ces raisons, la rentabilite de l’exploitation laitiere est generalement touchee. De plus, les defenses intrinseques de la mamelle et les defenses immunitaires ne sont pas suffisantes pour eviter les infections intramammaires. C’est pourquoi, des mamelles saines constituent un facteur important pour une production laitiere rentable. Infectious mastitis is an inflammation of the udder caused mainly by bacteria. They represent a major problem in breeding because they lead to significant economic losses for dairy ruminants. They are always in tandem with a decline in milk production in the affected neighbourhoods of udder. This decrease is mostly marked in the case of clinical mastitis. Sub-clinical hidden or mastitis infections also reduce productivity by up to 40% (Schaeren, 2006). As a result, the lives of the affected cows become shorter. On the other hand, there is a need to note the increase in veterinary and medicinal costs as well as losses in the quantity of milk delivered due to the induced breast treatments. Due to the above reasons, the profitability of the dairy farm is generally affected. In addition, the intrinsic defenses of udder and immune defenses are not sufficient to prevent intra-mammary infections. Therefore, healthy udders are important factor for a profitable milk production.

Les mammites représentent une dominante pathologique majeure en élevage laitier, avec un impact économique pouvant être considérable. La lutte contre les mammites nécessite de mettre en place diverses mesures préventives. La sélection génétique en fait partie, grâce à la découverte d’une mutation ponctuelle de la protéine SOCS-2 dans la race Lacaune, significativement associée à des CCS élevées. L’objectif de ce travail est de mieux comprendre les mécanismes sous-jacents de cette sensibilité, en ciblant la réaction inflammatoire systémique apparaît lors de mammite. La comparaison des réponses systémiques entre les deux lignées face à une infection mammaire à Staphylococcus aureus a permis de mettre en évidence des différences dans le recrutement des lymphocytes CD14low CD16-, des lymphocytes B et des cellules NK. Des différences de concentrations en IL8, CCL2 et CCL3, possédant un fort pouvoir chimioattractif, ont aussi été observées.

National audience

The position of the Cenomanian-Turonian boundary is established for the first time in Charente-Maritime, northwestern Aquitaine (France), on the basis of ammonite occurrences and the δ13C isotope curve, corresponding to Oceanic Anoxic Event 2, that straddles the boundary. The earliest Turonian ammonites recognised are a monospecific occurrence of the early early Turonian pseudotissotiine Bageites bakui Zaborski, 1998, previously known only from northern Nigeria. Newly collected material and well-preserved specimens from existing collections supplement previous records, and include species of Placenticeras, Morrowites, Kamerunoceras, Romaniceras (Romaniceras), Spathites (Jeanrogericeras), Mammites, Fagesia, Neoptychites, Choffaticeras (Leoniceras), Collignoniceras and Lecointriceras. These confirm the presence of the upper lower Turonian nodosoides Zone and the lower middle Turonian turoniense and kallesi zones/subzones of authors.

The Turonian successions of the southern Corbieres comprise three transgressive-regressive cycles in which ammonites occur in three intervals. The lowest comes from the glauconitic basal transgressive unit of the first cycle, and comprises 21 species, including Kamerunoceras douvillei (Pervinquiere, 1907), Kamerunoceras turoniense (d’Orbigny, 1850), Spathites (Jeanrogericeras) revelerianus (Courtiller, 1860), Spathites (Jeanrogericeras) combesi (d’Orbigny, 1856), Mammites nodosoides (Schluter, 1871), Mammites powelli Kennedy, Wright and Hancock, 1987, Fagesia tevestensis (Peron, 1896), Neoptychites cephalotus (Coutiller, 1860), Thomasites rollandi (Thomas and Peron, 1889), Wrightoceras wallsi Reyment, 1954, and Choffaticeras (Choffaticeras) quaasi (Peron, 1904). This is a Lower Turonian assemblage referred to the Mammites nodosoides Zone, although the possibility that elements from the preceding Fagesia catinus Zone are also present cannot be excluded. The fauna from the transgressive glauconitic interval of the succeeding cycle comprises nine species, including Romaniceras (Romaniceras) mexicanum Jones, 1938, Romaniceras (Yubariceras) ornatissimum (Stoliczka, 1864), Pseudotissotia galliennei (d’Orbigny, 1850), Collignoniceras woollgari (Mantell, 1822) sensu lato, Coilopoceras springeri Hyatt, 1903, and Eubostrychoceras (Eubostrychoceras) saxonicum (Schluter, 1872). They indicate the Middle Turonian Romaniceras (R.) mexicanum and R. (Y.) ornatissimum zones. The highest fauna, from the Marnes superieurs de Saint-Louis of the Saint-Louis syncline, is: Subprionocyclus sp. juv., Prionocyclus sp. and Worthoceras cf. rochatianum (d’Orbigny, 1850). The Subprionocyclus are minute individuals that resemble S. bravaisianus (d’Orbigny, 1841), and suggest the presence of the lower Upper Turonian bravaisianus Zone.

Mastitis is an inflammation of the mammary gland associated with worldwide economic losses. Staphylococcus aureus is one of the main etiologic agents of mastitis and triggers several clinical manifestations in the host. Although S. aureus is extensively studied as an agent of nosocomial infections, the mechanisms involved in S. aureus pathogenesis in a mastitis context are not completely understood. Extracellular factors are important components of S. aureus virulence. The production of extracellular vesicles (EVs) by S. aureus has gained attention in the last years. EVs are nano-sized particles formed by the budding of the bacterial membrane. Nowadays, EVs are accepted as a conserved mechanism of secretion that enables inter-kingdom cellular communication. EVs have been purified from different clinical isolates of S. aureus and appear to be a key factor in the infectious process when evaluated using several in vitro and in vivo models. In this thesis, we purified EVs from phylogenetically distant strains of S. aureus isolated from bovine, ovine and human hosts. Ruminant strains were responsible for different degrees of severity of mastitis. S. aureus EVs were strain-dependent in terms of yield, proteins cargo and size. Overall, they were enriched with cytoplasmic and membrane-associated proteins, lipoproteins and virulence factors, including toxins (e.g. PSMs, δ-hemolysin), factors associated to adhesion and colonization (e.g. EbpS, FnBPs), and evasion of host immune system (e.g. Sbi, leukocidin). 44 proteins were shared between all strains, defining a core proteome for S. aureus EVs. We selected the bovine strain S. aureus N305 for further in vitro and in vivo investigations. Although S. aureus N305 EVs were not able to induce cytotoxic effects in bovine mammary epithelial cells (bMEC), they stimulated an immunomodulatory response with an increase of some key inflammatory markers, such as the chemokine IL-8. Purified S. aureus N305 EVs were then tested in a murine model of mastitis. Histopathological results were consistent with the levels of cytokine after 24 h of mammary infection. S. aureus N305 EVs induced a dose-dependent neutrophil recruitment to the alveolar space that can be correlated to the local levels of chemokines. EVs-induced symptoms were although distinct and milder than those induced by the live N305. These results suggest that EVs play a role in S. aureus pathogenesis and can induce an immune response to S. aureus mastitis. Overall, this work opens new perspectives in the development of diagnostic tools and vaccine formulations using native or engineered EVs against S. aureus mastitis., La mammite est une inflammation de la glande mammaire responsable de pertes lourdes économiques dans le monde. Staphylococcus aureus est l'un des principaux agents étiologiques de la mammite et déclenche plusieurs manifestations cliniques chez l'hôte. Bien que S. aureus soit largement étudié en tant qu'agent d’infections nosocomiales, les mécanismes impliqués dans la pathogenèse de S. aureus dans un contexte mammite sont encore inconnus. Les facteurs extracellulaires sont des composants importants de la virulence de S. aureus. La production de vésicules extracellulaires (VEs) par S. aureus a attiré l'attention au cours de ces dernières années. Les VEs sont des particules de taille nanométrique formées par le bourgeonnement de la membrane bactérienne. De nos jours, les VEs sont considérées comme un mécanisme de sécrétion conservé qui permet la communication cellulaire inter-royaume. Les VEs ont été purifiées à partir de différents isolats cliniques de S. aureus et semblent être un facteur clé dans le processus infectieux lorsqu'ils sont testés en modèles in vitro et in vivo. Dans cette thèse, nous avons purifié des VEs de souches phylogénétiquement distantes de S. aureus, isolées d'hôtes bovins, ovins et humains. Les souches de ruminants étaient responsables de différents degrés de sévérité de mammite. Les caractéristiques de VEs de S. aureus étaient souches-dépendantes en termes de rendement, de contenu protéique et de taille. Elles sont enrichies en protéines cytoplasmiques et membranaires, en lipoprotéines et en facteurs de virulence, notamment en toxines (ex. PSM, δ-hémolysine), en facteurs d'adhésion et de colonisation (ex. EbpS, FnBPs) et d'évasion du système immunitaire de l'hôte (ex. Sbi, leucocidine). 44 protéines sont communes à toutes les souches et définissent un protéome coeur pour les VEs de S. aureus. Nous avons sélectionné la souche bovine S. aureus N305 pour des études fonctionnelles in vitro et in vivo. Bien que les VEs de S. aureus N305 ne soient pas capables d'induire des effets cytotoxiques sur cellules épithéliales mammaires bovines (CEMb), elles induisent une réponse immunomodulatrice avec une augmentation de certains marqueurs inflammatoires clés, tels que la chimiokine IL-8. Des VEs de N305 purifiées ont ensuite été testées dans un modèle murin de mammite. Les résultats histopathologiques étaient en accord avec les taux de cytokines mesurés après 24 h d'infection mammaire. Les VEs de S. aureus N305 ont induit un recrutement de neutrophiles dose-dépendant dans l'espace alvéolaire qui peut être corrélé aux taux locaux de chimiokines. Les symptômes induits par les VEs étaient bien distincts et plus légers que ceux induits par la souches N305 vivante. Ces résultats suggèrent que les VEs jouent un rôle dans la pathogenèse de S. aureus et peuvent induire une réponse immunitaire lors de mammite à S. aureus. Dans l'ensemble, ces travaux ouvrent de nouvelles perspectives dans le développement d'outils diagnostiques et de formulations de vaccins utilisant des VEs naturels ou artificiels contre la mammite à S. aureus.

Critical appraisal of vaccine approaches to control bovine mastitis. Despite their interest to combat mastitis, vaccines are few and underused, owing to limited efficacy. The mammary gland may have established with its pathogens a modus vivendi that favours the settlement of chronic subclinical infections. Reprogramming this immune response in a way that favours bacteriological cure but spares the secretory function presents a major challenge to immunologists. To improve vaccine efficacy, stress should be put on research on T lymphocyte-dependent immune defenses. In this view, improved knowledge of mammary lymphocyte populations, in association with systems vaccinology approaches, should offer new prospects for the development of efficient vaccines., Les vaccins contre les mammites sont peu nombreux à être commercialisés et peu utilisés en raison d’une efficacité limitée. Il semble que la mamelle ait établi avec ses agents pathogènes un modus vivendi qui favorise le maintien d’infections chroniques subcliniques. La reprogrammation de cette immunité par la vaccination dans un sens favorisant l’élimination des infections sans compromettre la fonction sécrétoire pose un défi majeur aux immunologistes. Pour améliorer l’efficacité des vaccins, les défenses immunitaires dépendantes des lymphocytes T ne devraient plus être négligées. Dans cette optique, une meilleure connaissance des populations lymphocytaires mammaires, associée aux approches de la vaccinologie systématique, devrait offrir de nouvelles perspectives de développement de vaccins efficaces., Rainard Pascal. Examen critique des approches vaccinales pour lutter contre les mammites bovines. In: Bulletin de l'Académie Vétérinaire de France tome 168 n°1, 2015. pp. 61-66.

Les infections intra-mammaires (IMI) responsables de mammites, sont une cause importante de maladie, de mortalité et de pertes de production chez les ruminants laitiers. Le péri-partum est une période où la fréquence des mammites est significativement plus élevée. Parmi les facteurs de risques, le déficit énergétique, fréquent au début de la lactation, est souvent évoqué. Cependant, les bases mécanistiques de l’éventuelle relation entre IMIs et déficit énergétique sont encore peu comprises. L’objectif de ma thèse était ainsi d’évaluer la relation éventuelle entre le déficit énergétique et la prédisposition aux mammites en utilisant la brebis laitière comme modèle. Mes travaux ont montré que les brebis génétiquement prédisposées aux mammites ont également une sensibilité accrue au déficit énergétique et à la cétose.

Coagulase-negative staphylococci (CNS) are the predominant cause of bovine intra-mammary infections. They can lead to chronic infections and were reported to significantly increase milk somatic cell counts. The goal of our study was to determine the species distribution and antimicrobial susceptibility profiles of CNS in bovine mastitis milk samples in Switzerland. Between March 2011 and February 2012, a total of 120 CNS were isolated from mastitis milk samples from 117 different animals at 77 farms. The isolates were identified by matrix-assisted laser desorption ionization - time of flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS) and subsequently tested for sensitivity to various antibiotic agents by disk diffusion. Antimicrobial agents were selected mainly based on their relevance to the treatment of bovine mastitis in Switzerland. MALDI-TOF MS assigned the 120 isolates to 12 different staphylococcal species - S. chromogenes (33 %), S. xylosus (28 %), S. sciuri (13 %), S. haemolyticus (9 %), S. epidermidis (4 %), S. simulans (4 %), S. warneri (3 %), S. equorum (2 %), S. hyicus (2 %), S. cohnii (1 %), S. succinus (1 %), and S. fleuretti (1 %). Resistance rates in CNS were high, with 39% of isolates exhibiting resistance to ampicillin and penicillin, 6% of isolates being resistant to amoxicillin with clavulanic acid, ceftiofur, cephalothin, and cefoxitin, and 5 % being resistant to erythromycin. In rare cases resistance to gentamicin (2 %), kanamycin (2 %), and kanamycin-cefalexin (1 %) was detected.Koagulase-negative Staphylokokken (CNS) stellen die häufigste Ursache intramammärer Infektionen beim Rind dar. Sie können chronische Infektionen verursachen und den somatischen Zellgehalt der Milch deutlich erhöhen. Ziel dieser Studie war es, die Speziesverteilung und Resistenzprofile von CNS in bovinen Mastitismilchproben zu bestimmen. Zwischen März 2011 und Februar 2012 wurden 120 CNS aus Mastitismilchproben von 117 verschiedenen Kühen auf 77 landwirtschaftlichen Betrieben isoliert. Die Isolate wurden mittels MALDI-TOF MS (matrix-assisted laser desorption ionization – time of flight mass spectrometry) Technologie identifiziert und anschließend mittels Agardiffusion auf ihre Empfindlichkeit gegenüber diverser Antibiotika getestet. Die getesteten Antibiotika wurden vor allem anhand ihrer Relevanz in Bezug auf die Behandlung boviner Mastitiden in der Schweiz ausgewählt. MALDI-TOF MS ordnete die 120 Isolate 12 verschiedenen Staphylokokken Spezies zu – S. chromogenes (33 %), S. xylosus (28 %), S. sciuri (13 %), S. haemolyticus (9 %), S. epidermidis (4 %), S. simulans (4 %), S. warneri (3 %), S. equorum (2 %), S. hyicus (2 %), S. cohnii (1 %), S. succinus (1 %) und S. fleuretti (1 %). Insgesamt betrachtet lag der Anteil resistenter CNS hoch, wobei 39 % der Isolate als resistent gegen Ampicillin und Penicillin, 6 % als resistent gegen Amoxicillin mit Clavulansäure, Ceftiofur, Cephalothin und Cefoxitin und 5 % als resistent gegen Erythromycin eingestuft wurden. In seltenen Fällen wurden auch Resistenzen gegen Gentamicin (2 %), Kanamycin (2 %) und Kanamycin-Cefalexin (1 %) gefunden.Les staphylocoques coagulase négatifs (CNS) sont la cause la plus fréquente d'infections intra mammaires chez les bovins. Ils peuvent causer des infections chroniques et augmenter nettement le nombre de cellules somatiques du lait. Le but de la présente étude était de déterminer la répartition des espèces et les profils de réséstance des CNS dans des échantillons de lait mammiteux bovins. De mars 2011 à février 2012, 120 CNS ont été isolé à partir d'échantillons de lait issus de 117 vaches provenant de 77 exploitations. Les isolats ont été identifiés par la technologie MALDI-TOF MS (matrix-assisted laser desorption ionization – time of flight mass spectrometry) puis testés par diffusion sur gel d'agar quant à leur sensibilité vis à vis de divers antibiotiques. Les antibiotiques ont été choisis principalement par rapport à leur importance quant aux traitements des mammites bovines en Suisse. Le test MALDI-TOF MS a classifié les 120 isola en 12 espèces différentes de staphylocoaques: S. chromogenes (33 %), S. xylosus (28 %), S. sciuri (13 %), S. haemolyticus (9 %), S. epidermidis (4 %), S. simulans (4 %), S. warneri (3 %), S. equorum (2 %), S. hyicus (2 %), S. cohnii (1 %), S. succinus (1 %) et S. fleuretti (1 %). D'une façon générale, la proportion de CNS résistants était élevée, 39 % des échantillons étant résistants à l'ampicilline et à la pénicilline, 6 % à l'amoxicilline avec acide clavulanique, au ceftiofur, à la céphalothine et à la céfoxitine et 5 % à l'érythromycine. Dans de rares cas on a trouvé des resistances à la gentamicine (2 %), à la kanamycine (2 %) et à la kanamycine-céfalexine (1 %).Gli stafilococchi coagulasi-negativi (CNS) rappresentano la causa più comune delle infezioni intramammarie nei bovini. Essi possono causare infezioni croniche e aumentare significativamente il contenuto di cellule somatiche del latte. Lo scopo di questo studio è di determinare la distribuzione delle specie e i profili di resistenza dei CNS in campioni di latte con mastite bovina. Tra marzo 2011 e febbraio 2012 sono stati isolati 120 CNS da campioni di latte con mastite di 117 diversi bovini provenienti da 77 aziende agricole. Gli isolati sono stati identificati mediante la tecnologia MALDI-TOF MS (matrix-assisted laser desorption ionization – time of flight mass spectrometry) e infine è stata testata la loro sensibilità, per diffusione su agar, ai vari antibiotici. Gli antibiotici testati sono stati selezionati principalmente sulla base della loro rilevanza per il trattamento della mastite bovina in Svizzera. MALDI-TOF MS ha associato i 120 isolati a 12 specie diverse di stafilococchi – S. cromogeni (33 %), S. xylosus (28 %), S. sciuri (13 %), S. haemolyticus (9 %), S. epidermidis (4 %), S. simulans (4 %) S. warneri (3 %), S. equorum (2 %), S. hyicus (2 %), S. cohnii (1 %), S. succinus (1 %) e S. fleuretti (1 %). Nel complesso, la percentuale di CNS resistenti era alta, anche se il 39 % degli isolati sono stati classificati come resistenti alla ampicillina e alla penicillina, il 6 % erano resistenti all'amoxicillina con acido clavulanico, ceftiofur, cefalotina e cefoxitina e il 5 % erano resistenti alla eritromicina. In rari casi sono stati trovati anche resistenze alla gentamicina (2 %), canamicina (2 %), e canamicina-cefalexina (1 %).

Ce travail avait pour objectif d’évaluer la capacité d’une méthode de typage moléculaire pour décrire la dynamique des infections à Streptococcus uberis (Str. uberis) dans les troupeaux et plus précisément pour distinguer les troupeaux selon leur voie majoritaire de transmission des infections. Dans 19 troupeaux de l’Ouest de la France à problèmes récurrents de mammites liées Str. uberis, cinq séries de prélèvements aseptiques d’échantillons de lait de quartier ont été effectuées toutes les six semaines, sur toutes les vaches en lactation. Après identification bactériologique de l'espèce, un génotypage des souches de Str. uberis a été effectué par la technique MLVA et a permis de préciser que de nombreuses souches de Str. uberis étaient présentes dans les élevages (203 souches différentes, soit de 5 à 30 souches par troupeau). Par contre, même si l’approche MLVA est à même de caractériser sans ambiguïté le modèle épidémiologique des infections en élevage (contagieux, environnemental ou mixte), il est inenvisageable, pour des raisons financières, de procéder en routine à ce type d’approche. Une diminution marquée de ce coût, rendue possible par une automatisation d’une ou toute partie de l’analyse, permettrait d’associer cette approche par MLVA aux outils actuellement disponibles pour la réalisation d’un diagnostic des mammites par les intervenants de terrain. Le typage basé sur l’étude de la variabilité de séquence d’un des gènes de virulence que nous avons mis en évidence pourrait également constituer une alternative moins coûteuse.

Ce travail avait pour objectif d’évaluer la capacité d’une méthode de typage moléculaire pour décrire la dynamique des infections à Streptococcus uberis (Str. uberis) dans les troupeaux et plus précisément pour distinguer les troupeaux selon leur voie majoritaire de transmission des infections. Dans 19 troupeaux de l’Ouest de la France à problèmes récurrents de mammites liées Str. uberis, cinq séries de prélèvements aseptiques d’échantillons de lait de quartier ont été effectuées toutes les six semaines, sur toutes les vaches en lactation. Après identification bactériologique de l'espèce, un génotypage des souches de Str. uberis a été effectué par la technique MLVA et a permis de préciser que de nombreuses souches de Str. uberis étaient présentes dans les élevages (203 souches différentes, soit de 5 à 30 souches par troupeau). Par contre, même si l’approche MLVA est à même de caractérisersans ambiguïté le modèle épidémiologique des infections en élevage (contagieux, environnemental ou mixte), il est inenvisageable, pour des raisons financières, de procéder en routine à ce type d’approche.Une diminution marquée de ce coût, rendue possible par une automatisation d’une ou toute partie de l’analyse, permettrait d’associer cette approche par MLVA aux outils actuellement disponibles pour la réalisation d’un diagnostic des mammites par les intervenants de terrain. Le typage basé sur l’étude de la variabilité de séquence d’un des gènes de virulence que nous avons mis en évidence pourrait également constituer une alternative moins coûteuse.

La mammite est une inflammation de la mamelle, le plus souvent, en réponse à une invasion d’origine bactérienne. L’utilisation d’antibiotiques pour le traitement de cette pathologie n’est pas la solution idéale. Outre les problèmes engendrés pour la qualité du lait, l’apparition de résistance et l’inefficacité des traitements nécessitent de développer des méthodes alternatives. L’objectif de ces travaux de thèse était de vérifier si l’utilisation d’huile de tournesol ozonée comme moyen de lutte alternatif contre les mammites est envisageable. Dans un premier temps, l’effet des conditions d’ozonation sur la composition et sur l’activité antibactérienne de l’huile ozonée a été étudié pour déterminer les conditions optimales de synthèse d’un agent antibactérien. Les résultats ont montré que l’ajout d’eau et l’augmentation de la durée de la réaction permettaient l’obtention de valeurs d’indice de peroxyde plus élevées et d’une meilleure activité antibactérienne mettant en évidence la relation existant entre ces deux paramètres. Par la suite, l’activité antibactérienne d’huile de tournesol ozonée a été évaluée in vitro sur 59 espèces bactériennes isolées de cas déclarés de mammites chez des brebis. Le produit testé a prouvé son efficacité contre toutes les souches étudiées avec des concentrations minimales inhibitrices de croissance comprises entre 0,625 et 20 mg/mL. L’homologation de l’huile de tournesol ozonée comme préparation vétérinaire requiert d’avoir des données sur sa stabilité thermique et d’identifier les molécules actives. Les travaux menés ont montré que la composition de l’huile de tournesol ozonée stockée à −20 °C ou à +4 °C n’évoluait pas pendant une durée d’un an. Au contraire, des températures de stockage plus élevées entrainaient rapidement une diminution de l’indice de peroxyde et une augmentation de l’acidité. Cependant, ces modifications n’ont pas eu d’effet sur l’activité antibactérienne qui a gardé une valeur constante. Ces observations ont permis d’émettre des hypothèses sur l’identité des molécules actives. L’activité antibactérienne des huiles ozonées serait due à la présence d’ozonides, d’hydroperoxydes et d’acides nonanoïque et azélaïque. L’étude de la réaction d’ozonolyse sur un composé modèle, l’oléate de méthyle, a permis d’affiner ces hypothèses. En effet, l’activité antibactérienne spécifique de différentes fractions obtenues après purification d’oléate de méthyle ozoné a été évaluée. Toutefois, les ozonides purifiés et caractérisés par RMN n’ont pas montré d’activité dans la gamme de concentration testée. L’activité antibactérienne de l’huile de tournesol ozonée peut donc être attribuée aux hydroperoxydes, aux aldéhydes et aux acides carboxyliques à chaines courtes.

Zusammenfassung Die durch E. coli und A. aerogenes hervorgerufenen akuten Mastitiden sind neben den teils katarrhalischen, teils fibrinosen Entzundungsprozessen in den Milchgangen und in den Drusenendstucken besonders durch stark ausgepragte Odeme, wechselnde Grade der Hyperamie, Blutungen, Thromben-bildungen in Blut- und Lymphgefasen sowie durch Nekrosen gekennzeichnet, die sich in kleineren Bezirken infiltrativ auf Parenchym und Interstitium ausbreiten oder zu umfangreichen Sequesterbildungen fuhren. — Die Befunde sprechen fur eine hamatogene Entstehung. — Die verschiedenartigen Prozesse werden vermutlich durch Endotoxine von zerfallenden Bakterien bedingt, die in den nekrotischen Bezirken nur schwer oder uberhaupt nicht nachzuweisen sind. — Im Verlauf von Mischinfektionen mit koliformen Keimen und Staphylokokken finden sich in den kanalikular und perikanalikular fort-schreitenden nekrotisierenden Entzundungsprozessen massenhaft Kokken in den Milchgangen und Drusenendstucken. Summary Infectious mastitis caused by E. coli, Aerobacter aerogenes and Klebsiella The acute forms of mastitis caused by E. coli and A. aerogenes are characterised — apart from catarrhal or fibrinous inflammation of the galactophorous ducts and acini — by very marked oedema, a varying degree of hyperaemia, haemorrhages, thrombus formation in blood and lymph vessels, and a process of necrosis which infiltrates in small areas into the parenchyma and interstitial tissue or produces extensive sequestra. These findings suggest a haematogenous origin. The various processes are presumably due to endotoxin from broken down organisms which cannot readily be demonstrated, if at all, in the necrotic areas. In the course of mixed infections with coliforms and staphylococci, enormous numbers of the latter can be seen in the milk ducts and acini within the necrotic areas which are extending along the ducts and interstitially. Resume Mammites a Escherichia coli, Aerobacter aerogenes et Klebsiella Les mammites aigues provoquees par E. coli et A. aerobacter sont caracterises — outre les processus inflammatoires d'aspect catarrhal ou fibrineux dans les canaux galactophores et les acini — surtout par des oedemes tres prononces, une hyperaemie d'intensite variable, des hemorragies, des thromboses dans les vaisseaux sanguins et lymphatiques ainsi que par une necrose qui dans de petits territoires s'etendent dans le parenchyme et le tissu interstitiel ou provoquent la formation d'esquarres etendus. Ces observations suggerent une origine hematogene. Ces divers processus sont probablement dus aux endotoxines des bacteries en voie de destruction qui ne peuvent etre mis en evidence que difficilement ou pas du tout, dans les parties necrosees. Au cours d'infections mixtes par des germes coliformes et des staphylocoques on trouve dans les processus inflammatoires necritisants progressant par voie canaliculaire et pericanaliculaire des staphylocoques en tres grand nombre dans les canaux galactophores et les acinis. Resumen Mastitis en infecciones con Escherichia coli, Aerobacter aerogenes y Klebsiella Las mastitis agudas producidas por E. coli y A. aerogenes se caracterizan especialmente, al lado de los procesos inflamatorios en parte catarrales, en parte fibrinosos en los conductos galactoforos y en los tramos glandulares finales, por edemas muy pronunciados, diversos grados de hiperemia, hemorragias, formaciones de trombos en vasos sanguineos y linfaticos, asi como por necrosis, que se extienden en pequenas zonas infiltrativamente al parenquima e intersticio o conducen a vastas formaciones de secuestros. — Los mas diversos procesos se deben probablemente a endotoxinas de bacterias en descomposicion, que en los tramos necroticos solo se pueden identificar con dificultad o no se encuentran. En el curso de infecciones mixtas con germenes coliformes y estafilococos, en los procesos inflamatorios necrotizantes canalicular y pericanalicularmente progresivos se encuentran cocos en cantidades masivas en los conductos galactoforos y tramos glandulares finales.

Zusammenfassung Das Trockenstehen einzelner Euterviertel war bedingt durch Verlegung der Zisterne, der ausfuhrenden Milchgange und durch Veranderungen im Drusengewebe. Die Obliteration der Zisterne, bzw. der ausfuhrenden Milchgange wurde bei 16 Kuhen in 20 Eutervierteln beobachtet, war in erster Linie durch eine proliferative Entzundung bedingt, ging zuweilen mit Epithelmetaplasie einher und war zweimal durch Abszesbildung kompliziert. Die obliterierenden Prozesse gingen einher in 7 Eutervierteln mit Pyogenes-Mastitiden, in 5 Eutervierteln mit unspezifischen Euterentzundungen, in 4 Vierteln mit Traumen an der Zitze, in einem Viertel mit Galtstreptokokkenmastitis und einem Viertel mit jauchig-eitriger Entzundung. In 2 Vierteln von einer erstgebarenden Kuh lag eine atiologisch nicht geklarte Storung in der Entwicklung des Euters wahrend der ersten Trachtigkeit vor. Der Zisternenverschlus fuhrte im zugehorigen Euterviertel meistens zur Verkleinerung der Drusenlappchen und ruckbildung der Alveolen in nicht sezernierende tubulose Drusenendstucke. Die ruckbildung erfolgte mit und ohne entzundliche Prozesse im Eutergewebe. — In einzelnen Fallen war zu Beginn der Laktation uber der verschlossenen Zisterne sezernierendes Drusengewebe zu beobachten. — Sekretstauung und besonders Ansammlung von eitriger Flussigkeit hatten zuweilen zur Dilatation der Milchgange gefuhrt. Bei 6 Kuhen war in 8 Vierteln mit weiter Zisterne und offenen Milchgangen das Aufhoren der Milchsekretion durch Veranderungen im Euterdrusengewebe bedingt. Dabei lag vor in je einem Viertel nekrotisierende Mastitis, jauchig-eitrige Mastitis, Pyogenes-Mastitis, Adenombildung sowie in 4 Vierteln Galtstreptokokkenmastitis. Beim Gait zeigten sich eigenartige Gestaltsveranderungen der Drusenendstucke und Umwandlung der Epithelien, die als Fehlregeneration gedeutet wurden. Summary The Pathology of Disturbances of Milk Secretion, and Milking, in Cows with 1, 2, or 3 Quarters Drying up of one or more quarters was produced by obliteration of the galactophorous sinus, or the milk ducts, or by pathological changes in the glandular tissue. Blockage of the sinus or ducts was observed in 16 cows, and involved 20 quarters. It Was mainly due to a proliferative inflammation, sometimes accompanied by epithelial metaplasia, and on two occasions was complicated by abscess formation. In 7 quarters the obliterative process was associated with a C. pyogenes mastitis, in 5 quarters with non-specific inflammation, in 4 quarters with teat injury, in 1 quarter with streptococcal mastitis and in 1 quarter with a gangrenous inflammation. In 2 quarters of a primiparous cow there occurred an error of development of unknown origin in the udder during the first pregnancy. Blockage of the sinus usually caused atrophy of the gland lobules and conversion of the alveoli into non-secreting tubular glands. This involution occurred with or without inflammatory changes in the udder. Occasionally there were some signs of activity at the beginning of lactation in the glandular tissue, in spite of the blockage of the sinus. Stasis of secretion and especially the accumulation of purulent fluid sometimes caused dilatation of the milk ducts. In six cows there were 8 quarters which showed no stenosis of the sinus or ducts, but in which secretion had caused lesions of the mammary tissue. These lesions comprised necrotising mastitis, gangreno-purulent mastitis, C. pyogenes mastitis and adenomatous change formation, each affecting 1 quarter, as well as 4 quarters affected with streptococcal mastitis. In streptococcal mastitis, the acini showed a special deformation and a transformation of their epithelium which was interpreted as being a failure of regeneration. Resume La pathologie des troubles de la secretion lactee et de l'ecoulement du lait chez des vaches n'ayant que 1, 2 ou trois trayons Le tarissement d'un ou de plusieurs quartiers etait provoque par l'obliteration du sinus galactophore ou des conduits et par des lesions du tissu glandulaire. L'obliteration du sinus et des conduits galactophores fut observee chez vingt vaches et vingt quartiers. Elle etait produite le plus souvent par une inflammation proliferative, accompagnee parfois d'une metaplasie epitheliale et se trouva deux fois compliquee d'abces. Les processus obliterants furent provoques dans 7 quartiers par une mammite pyobacillaire, dans 5 quartiers par des mammites non specifiques, dans 4 quartiers par un traumatisme du trayon, dans un quartier par une mammite streptococcique et une fois par une inflammation putride. Dans deux quartiers d'une vache primipare, on constata un trouble du developpement de la mammelle survenu pendant la premiere periode de la gestation et d'origine inconnue. L'obliteration du sinus galactophore provoquait generalement dans le quartier correspondant une atrophie des lobules glandulaires et une involution des acini ne secretant plus. L'involution se produit avec ou sans processus inflammatoires du tissu mammaire. Dans quelques cas isoles, on put observer au debut de la lactation du tissu glandulaire en activite malgre l'obliteration du sinus galactophore correspondant. Une stase des secreta et surtout des amas de liquide purulent provoquerent parfois une dilatation des conduits galactophores. Chez 6 vaches et dans 8 quartiers ne presentant aucune stenose du sinus galactophore ou des conduits, l'arret de la secretion lactee fut provoque par des lesions du tissu mammaire. Les lesions observees furent: chaque fois dans un quartier une mammite necrotisante, une mammite putride, une mammite pyobacillaire et une formation adenomateuse. Dans 4 quartiers on diagnostiqua une mammite streptococcique. Dans la mammite streptococcique les acini presentaient une deformation speciale et une transformation des epitheliums qui pouvait etre interpretee comme un essai manque de regeneration. Resumen Patologia de las alteraciones de secrecion y salida de la leche en vacas con mamitis que interesan uno, dos o tres cuarterones La desecacion de los diversos cuarterones se debia a la obstruccion de la cisterna, conductos galactoforos y a alteraciones en el tejido glandular. La obliteracion de la cisterna o bien de los conductos galactoforos se observo en 20 cuarterones de 16 vacas, debiendose en primer a instancia a una inflamacion proliferativa y estando esta a veces acompanada de metaplasia epitelial y, en dos ocasiones, complicada con la formacion de abscesos. Los procesos obliterantes estaban ligados a mastitis por Str. pyogenes en 7 cuarterones, en 5 cuarterones complicados con mamitis inespecificas, por traumatismos en el pezon en 4 cuarterones, en 1 cuarteron con mamitis estreptococica y en otro cuarteon estaba complicado por una inflamacion icoroso-purulenta. En 2 cuarterones de una vaca primipara nos hallamos ante una alteracion sin definir etiologicamente en el desarrollo de la mama durante la primera gestacion. — La oclusion de la cisterna casi siempre condujo en el cuarteron correspondiente a una disminucion de los lobulillos glandulares y regresion de los alveolos en los tramos glandulares tubulosos finales sin secrecion. La regresion sobrevino con y sin procesos inflamatorios en el tejido glandular. — En algunos casos, al comienzo de la lactacion pudo observarse tejido glandular secretor por encima de la cisterna obstruida. — El extasis de la secrecion y, sobre todo, el acumulo de liquido purulento condujeron incluso a dilatar las vias galacticas. En 6 vacas, 8 cuarterones con cisterna dilatada y vias galacticas abiertas tenian condicionada la terminacion de la secrecion lactea a alteraciones en el tejido glandular mamario. Entre las mismas se encontraban: en un cuarteron cada vez, mastitis necrotizante, mamitis icoroso-purulenta, mastitis por Str. pyogenes, formacion de un adenoma, asi como mamitis estreptococicas en 4 cuarterones. En las mastitis producidas por el Str. agalactiae se presentaron alteraciones morfologicas singulares en los tramos finales de la glandula y transformacion de los epitelios, las cuales se senalaron como regeneraciones defectuosas.

Zusammenfassung der Untersuchungsergebnisse 1. Die Eutergesundheit von 30660 Kuhen aus 3282 Melkmaschinenbetrieben wurde in Vergleich gesetzt zu den Befunden von 8642 Kuhen aus 1883 Handmelkbetrieben. 29,9% der maschinengemolkenen und 25,7% der handgemolkenen Kuhe lieferten Milch mit erhohtem Zellgehalt. Bezogen auf Euterviertel waren 22,7% der Proben aus Melkmaschinenbetrieben und 14,2% derjenigen aus Handmelkbetrieben beteiligt. Bei 6,2% der Viertelgemelksproben aus Melkmaschinen-Betrieben und 2,9% der Proben aus Handmelkbetrieben wurde ein Befund an Staphylokokken, Sc. agalactiae und anderen Streptokokken erhoben. 2. In 828 uberpruften Melkmaschinenbestanden waren 63% der Melker nur unzureichend im Maschinenmelken ausgebildet. 14,5% der Melkanlagen dieser Betriebe wurden in einwandfreiem Zustand vorgefunden, 37,5% konnten als noch tauglich bezeichnet werden, in 48% wurden Mangel festgestellt. Der Anteil an Sekretionsstorungen war bei beanstandeten Melkanlagen hoher. 3. Die Umgebung der Zitzenspitze verbleibt bei den derzeit ublichen Melkmaschinen wahrend des ganzen Melkvorgangs unter Vakuumeinflus. Auch bei kollabiertem Zitzengummi im Entlastungstakt erreicht das Vakuum uber randstandige Kanale die Zitzenkuppe. 4. Die im Melkbecher-Zwischenraum auftretenden Druckanderungen bei verschiedenen Pulsatoren werden graphisch dargestellt. Fur den Ubergang von Saugtakt zu Entlastungstakt und umgekehrt ist die Druckdifferenz zwischen Melkbecher-Innenraum und Melkbecher-Zwischenraum, nicht die Vakuumhohe masgebend. Der Taktwechsel erfolgt bei einer Druckdifferenz von etwa 130 mm HgS. 5. Die Erhohung der Taktgeschwindigkeit verandert das Taktverhaltnis zugunsten des Entlastungstaktes. Verstopfungen von Luftdusen und -kanalen des Pulsators konnen den Druckwechsel so verandern, das die Funktion gestort wird. 6. Die Menge der in die Vakuumleitung einstromenden Luft steigt mit zunehmender Taktgeschwindigkeit. Durch den Betrieb zu vieler Melkzeuge oder bei zu hohen Taktgeschwindigkeiten kann es zu Vakuumabfall und -Schwankungen kommen. 7. 27 Kuhe wurden einem 15wochigen Versuch unterworfen, bei dem nur ungenugend angerustet wurde. Bei Erstlingskuhen zeigte sich vermehrt erhohter Zellgehalt, bei alteren Kuhen war in der Versuchszeit kein Einflus feststellbar. 8. 16 Kuhe wurden uber 7 Wochen zu jeder Melkzeit an je einer Euterhalfte 10 oder 20 Minuten lang blind gemolken. Klinisch feststellbare Veranderungen an Zitzen, Euter oder Milch traten in der Versuchszeit nicht auf. In der Milch aus blind gemolkenen Vierteln wurde teilweise Zellanstieg beobachtet. Bei der histologischen Untersuchung der Euter ergab sich, das in blindgemolkenen Vierteln gehauft starke Epithelabschilferungen des Strichkanals und interstitielle Odeme auftraten. 9. 27 Kuhe wurden in der Versuchszeit von 13 Wochen nur mit der Maschine nachgemolken und nicht mehr auf zuruckgebliebene Milchreste in den Zisternen kontrolliert. Erstlingskuhe zeigten sich vollig unbeeinflust, wahrend altere Kuhe teilweise mit stark erhohtem Zellgehalt reagierten. Summary Studies on the influence of the milking machine on udder health 1. The udder health of 30,660 cows from 3,282 herds milked by machine was compared with the findings in 8,642 cows in 1,883 herds milked by hand. 29.9% of cows milked by machine and 25.7% of those milked by hand produced milk with a raised cell content. So far as individual quarters are concerned, 22.7% of samples from machine-milked herds and 14.2% from hand-milked herds were affected. In 6.2% of quarter samples from machine-milked herds and 2.9% of those from hand-milked herds, staphylococci, Str. agalactiae and other streptococci were recovered. 2. In 828 herds milked by machine 63% of the milkers were insufficiently trained in machine-milking. 14.5% of the milking units in these herds were in every way satisfactory, 37.5% could be classed as barely satisfactory and 48% had obvious faults. The number of abnormal milk samples was greater on premises with faulty milk installations. 3. The area around the end of the teat remained in a condition of vacuum throughout the whole milking procedure with the usual milking machines. Even when the teat liner was collapsed in the release phase the vacuum reached beyond the peripheral canals of the teat cups. 4. The pressure changes in the space within the teat cups with various pulsators are shown graphically. For the transition from the milking phase to the release phase and the converse, the pressure difference between the teat cup inner space and the teat cup outer space is not the same as the height of the vacuum. The phase change is associated with a pressure difference of about 130 millimetres of mercury. 5. An increase in pulse rate changes the pulse relationship in favour of the release phase. Blockage of the air ports and tubes of the pulsator can so alter changes in pressure that the machine's activity is disturbed. 6. The amount of air coming into the vacuum line rises with increasing pulse rate. If there are too many milking units or there is too high a pulse rate, the vacuum may show a fall and fluctuations. 7. 27 cows were subjected to a 15-week experiment, during which they were insufficiently milked. The first-calving heifers showed a raised cell content, whereas older cows showed no effects. 8. Over a period of seven weeks one half of the udder of 16 cows was over milked for 10 or 20 minutes. No clinically demonstrable changes in teats, udder or milk resulted. Milk samples taken from the over milked quarters occasionally showed a rise in cell content and histological study of these quarters showed markedly increased desquamation of the epithelial cells of the streak canal and interstitial oedema. 9. 27 cows were machine stripped for a period of 13 weeks and no other steps taken to remove milk residues from the cistern. First-calving heifers showed no effects from this treatment, whereas older cows occasionally reacted by a markedly increased cell content. Resume Recherches concernant l'influence de la machine a traire sur la sante de la mamelle L'auteur expose les processus physiologiques de la secretion lactee et de l'extraction du lait de la mamelle en l'etat actuel de nos connaissances. En s'appuyant sur une litterature importante, il examine les causes et le nombre des mammites ainsi que l'influence possible de la machine a traire sur la sante de la mamelle. Sur la base de recherches personnelles, il montre que les mammites sont plus frequentes chez les vaches traites a la machine que chez les vaches traites a la main. Selon les observations de l'auteur, cela provient d'une formation insuffisante du personnel et d'installations defectueuses. Des recherches experimentales montrerent la possibilite de lesions traumatiques des mamelles par l'emploi de machines a traire defectueuses et mal utilisees. L'auteur preconise que le controle des techniques de traite soit pris en consideration dans la lutte contre les mammites. Resumen Estudios acerca del influjo de la ordenadora mecanica sobre la salud de la glandula mamaria Exponense los procesos fisiologicos durante la emision y sustraccion lacteas de la mama con arreglo al estado actual de los conocimientos. Ensolviendo la copiosa bibliografia, se tratan la etiologia y difusion de las mastitis, asi como las posibilidades de influir sobre la sanidad de la glandula mamaria mediante la ordenadora mecanica. En investigaciones propias se mostro que las perturbaciones mamarias se manifiestan con mayor frecuencia en las vacas ordenadas a maquina que en las ordenadas a mano, lo cual se atribuye a la insuficiente formacion hallada entre el personal ordenador y a las instalaciones defectuosas de ordeno. Estudios experimentales evidencian la posibilidad de una lesion traumatica en la mama con ordenadoras mecanicas deterioradas e imperfectamente manejadas. Se exige incluir la revision de la tecnica de ordeno en la lucha contra la mamitis.

Zusammenfassung 1000 Viertelgemelkproben von 250 eutergesunden Kuhen und 118 Viertel-gemelkproben von 100 euterkranken Kuhen wurden auf das Vorkommen von hefeartigen Pilzen untersucht. Bei Tieren ohne Sekretionsstorungen waren 3,1%, bei Tieren mit Sekretionsstorungen 26,4% der Proben hefepositiv. Von den 64 verschiedenen isolierten Hefestammen konnten 23 Arten den Gattungen Candida, Torulopsis, Trichosporon, Rhodotorula und Sporobolo-myces zugeordnet werden. Es handelt sich vornehmlich um ubiquitar verbreitete Hefearten. Nur 34 der 64 Stamme waren bei der Korpertemperatur des Rindes vermehrungsfahig. Im Euter siedelten sich ausschlieslich die bei Mensch und Tier bereits als Erreger von Mykosen der inneren Organe bekannten Arten an. Die Ansiedlung war jedoch nur nach bakteriell bedingter Schleimhautschadigung oder nach Reizung durch Antibiotika moglich. Eine Applikation von Antibiotika fordert die Ausbreitung von Hefen im sezernierenden Drusengewebe. Die fakultativ pathogenen Arten der Gattung Candida sind in der Lage, die getesteten Antibiotika Penicillin und Tetracyclin-hydrochlorid als Stickstoffquelle zu nutzen. Summary Yeasts as a cause of mastitis in cattle 1,000 quarter milk samples from 250 cows with normal udders and 118 quarter samples from 100 cows with diseased udders were examined for yeastlike fungi. 3.1 per cent of the animals without changes in the milk and 26.4 per cent of those with milk changes gave samples positive for yeasts. Of the 64 different yeast strains isolated, 23 species were identified belonging to the genera Candida, Torulopsis, Trichosporon, Rhodotorula and Sporobolomyces. Most of these are ubiquitous mould species. Only 34 of the 64 strains grew at the body temperature of cattle. Only those species already known as mycotic agents in the viscera of man or animals can become implanted in the udder. Establishment was only possible after mucosal damage produced by bacterial lesions or after stimulation by antibiotics. The use of antibiotics favours the spread of yeasts in the secreting udder tissue. Facultative pathogens of the genus Candida can utilise the antibiotics penicillin and tetracycline hydrochloride as sources on nitrogen. Resume Les mammites provoquees par des levures chez la vache On rechercha des champignons levuriformes dans 1000 specimens de lait preleves par quartier provenant de 250 vaches saines et dans 118 specimens provenant de 100 vaches atteintes de mammite. Chez les animaux ne presentant pas de troubles de secretion 3,1% eliminaient des levures tandis que chez les animaux atteints de mammite, on en decela 26,4%. Parmi les 64 souches de levures isolees, 23 especes purent etre classees dans les genres Candida, Torulopsis, Trichosporon, Rhodotorula et Sporobolomyces. Il s'agit essentiellement de levures ubiquitaires. Seulement 34 souches sur 64 etaient capables de se multiplier a la temperature du corps de la vache. Seules les especes deja connues comme agents mycosiques dans les visceres de l'homme ou de l'animal purent s'implanter dans la mamelle. L'implantation n'est toutefois possible qu'apres une lesion bacterienne de la muqueuse ou apres irritation par les antibiotiques. Une application d'antibiotiques favorise l'infiltration des levures dans le tissu glandulaire actif. Les especes facultativement pathogenes du genre Candida peuvent utiliser comme source d'azote les antibiotiques penicilline et hydrochlorure de tetracycline. Resumen Levaduras como agentes etiologicos de mamitis en vacas 1000 muestras de ordeno de cuarterones pertenecientes a 250 vacas con glandulas mamarias sanas y 118 muestras de ordeno de cuarterones correspon-dientes a 100 vacas con mastitis se analizaron en cuanto a la presencia de hongos del tipo de la levadura. En animales sin alteraciones secretorias, el 3,1% de las muestras resulto ser levadura-positivo, mientras que en animales con alteraciones en la secrecion lo era el 26,4% de las muestras. De 64 cepas diferentes de levaduras aisladas se pudieron clasificar 23 especies en los generos Candida, Torulopsis, Trichosporon, Rhodotorula y Sporobolomyces. Tratase, sobre todo, de especies de levaduras de difusion ubicuitaria. Solo 34 de las 64 cepas poseian la capacidad de reproduccion a la temperatura organica de los bovinos. En la glandula mamaria no colonizaron mas que las especies ya conocidas que en el hombre y en los animales son agentes causales de micosis de los organos internos. Sin embargo, el afincamiento solamente resulta posible tras una lesion mucosa condicionada por bacterias o tras el estimulo por antibioticos. La aplicacion de antibioticos favorece la difusion de levaduras en el tejido glandular secretor. Las especies facultativamente patogenas del genero Candida estan en condiciones de utilizar los antibioticos controlados, penicilina y clor-hidrato de tetraciclina, como fuente nitrogenada.

Zusammenfassung Die brucellose Mastitis des Rindes wurde an 25 brucellenausscheidenden Eutern untersucht. Makroskopisch bestehen keine fur Brucellose spezifischen Veranderungen im Eutergewebe sowie in der Milch. Die Mastitis brucellosa wird bezeichnet als eine nichteitrige, proliferierende interstitielle Entzundung von teilweise diffuser, teilweise granulombildender Art, von uberwiegend retikularem Charakter und mit einer Tendenz zum Einbrechen in das Drusenparenchym. Summary The pathology of the udder excreting Brucella abortus Mastitis in cattle caused by Brucella abortus was studied on 25 udders from cows excreting this organism. There were no changes in the udder tissue or in the milk which were specific macroscopically for Brucellosis. Mastitis due to Brucella abortus is characterised by a nonpurulent, proliferative interstitial inflammation, partly diffuse and partly granulomatous, of predominant reticular character and with a tendency to break into the glandular tissue. Resume La pathologie des mammites brucelliques bovines La mammite brucellique de la vache fut etudiee sur 25 mamelles dont le lait contenait des Brucellas. Macroscopiquement on ne trouve aucune lesion specifique pour la brucellose ni dans le tissu mammaire ni dans le lait. La mammite brucellique peut ětre definie comme une inflammation non purulente, proliferative et interstitielle, en partie diffuse et en partie granulomateuse, de caractere surtout reticulaire presentant une certaine tendance a envahir le tissu glandulaire. Resumen Sobre la patologia de la mama de vaca eliminadora de brucelas La mastitis brucelar de la vaca se ha investigado en 25 mamas que eliminaban brucelas. Macroscopicamente no existen alteraciones especificas para la brucelosis, tanto en el tejido mamario como en la leche. La mastitis brucelar se conceptua como una inflamacion intersticial no purulenta proliferante de tipo en parte difuso, en parte granulomatogeno, de caracter preponderante reticular y con tendencia a penetrar en el tejido glandular.

Zusammenfassung Miserfolge bei der Mastitis-Therapie mit Antibiotika konnen — neben vielen anderen Faktoren — auch auf physikalischen und chemischen Interferenzen der Praparate mit den Proteinen der Milch beruhen. Im Falle der “klassischen” Tetracycline sind Hemmungen der antibiotischen Aktivitat durch in der Kuhmilch enthaltene Ionen, besonders Magnesium-Ionen, beschrieben worden. Da infolge Erregerwechsels oder Antibiotika-Resistenz die Penicillin-Therapie bei Kuh-Mastitiden oft versagt, ist es von Bedeutung, uber die Aktivitat der neuen Antibiotika in Kuhmilch informiert zu sein. Die Verfasser haben unter diesem Aspekt mit einer von ihnen entwickelten quantitativen Methodik die Wirkungsverluste des Pyrrolidino-methyltetracyclins (Reverin®) in Kuhmilch studiert und kamen zu dem Ergebnis, das dieses Praparat experimentell etwa in gleichem (nicht sehr erheblichem) Mase wie die “klassischen” Tetracyline gehemmt wird. Entsprechende therapeutische Konsequenzen (hohe Dosierung) werden beschrieben. Summary Quantitative studies on the loss of activity of Reverin in milk with special reference to its therapeutic consequence Failures in mastitis therapy with antibiotics may result from many factors, one of which is physical and chemical interference with the antibiotic by the proteins of milk. In the case of the “classical” tetracyclines inhibition of antibiotic activity by the ions in milk, particularly Mg, has been described. Because of the changes in the infective agent concerned or antibiotic resistance, the treatment of mastitis with penicillin often fails and so it is important to be informed about the activity of the newer antibiotics. In this respect the authors have studied the loss of activity of pyrrolidinomethyl-tetracyclines (Reverin) by one of the quantitative methods they have developed. They conclude that this preparation is inhibited experimentally to about the same degree (not very considerable) as the “classical” tetracyclines. The appropriate therapeutic indications (high dosage) are described. Resume Recherches quantitatives concernant la diminution de l'activite de la Reverine® dans le lait de vache avec consideration particuliere des consequences therapeutiques Des echecs dans la therapeutique des mammites par les antibiotiques peuvent avoir pour origine — outre beaucoup d'autres facteurs — les interferences physiques et chimiques des preparations avec les proteines du lait. Dans le cas des tetracyclines «classiques» on a decrit des inhibitions de l'activite antibiotique par des ions contenus dans le lait de vache, en particulier des ions de magnesium. Comme par suite d'une substitution des germes ou de leur penicillo-resistance le traitement a la penicilline est souvent inoperant dans les mammites de la vache, il est important d'etre informe de l'activite des nouveaux antibiotiques dans le lait de vache. Les auteurs ont etudie sous cet angle par une methode quantitative qu'ils ont mise au point, la diminution d'activite de la pyrrolidino-methyl-tetracycline (Reverine®) dans le lait de vache. Ils arrivent a la conclusion que cette preparation est inhibee experimentalement a peu pres dans le meme ordre de grandeur (pas tres considerable) que les tetracyclines «classiques». Resumen Estudios cuntitativos sobre el problema de la perdida de actividad de Reverin® en la leche de vaca, bajo la consideracion especial de sus consecuencias terapeuticas Los fracasos en la terapeutica de la mamitis con antibioticos pueden deberse — al lado de muchos otros factores — a las interferencias fisicas y quimicas de las especialidades con las lactoproteinas. En el caso de las tetraciclinas «clasicas», se han descrito inhibiciones de la actividad antibiotica por los iones contenidos en la leche de vaca, sobre todo los iones magnesicos. Puesto que a causa del cambio de agente etiologico o de la resistencia frente al antibiotico muchas veces fracasa la penicilinoterapia en las mastitis de la vaca, resulta importante el estar informado sobre la actividad de los nuevos antibioticos en la leche de vaca. Bajo este aspecto, los autores han estudiado, con una tecnica cuantitativa desarrollada por ellos, las perdidas de actividad de la pirrolidino-metil-tetraciclina (Reverin®) en la leche de vaca, llegando a la conclusion de que esta especialidad es inhibida experimentalmente en el mismo (no muy considerable) grado que las tetraciclinas «clasicas».

Zusammenfassung Es werden pathologisch-anatomische und histologische Veranderungen von Coli-Mastitiden des Rindes, der Ziege und des Schweines beschrieben. Ihre wesentlichen Merkmale sind Odematisierung, wechselnde Grade der Hyperamie mit Blutungen, Thrombenbildungen in Blut- und Lymphgefasen sowie nekrotisierende Prozesse inmitten des entzundeten Eutergewebes. Die Pathogenese dieser Veranderungen wird erortert. Unter den differentialdiagnostisch zu berucksichtigenden Euterentzundungen wird besonders auf die akute Pyogenes-Mastitis und die akute verkasende Eutertuberkulose hingewiesen. Mischinfektionen von Bact. coli und C. pyogenes sowie von Bact. coli und Bact. tuberculosis konnen den Krankheitsprozes komplizieren. Summary A contribution to the diagnosis and pathogenesis of acute mastitis The gross and microscopic changes which occur in E. coli mastitis in the ox, goat and pig are described. The most significant changes are oedema, hyperaemia of varying degree with haemorrhage, thrombus formation in the blood and lymph vessels, and necrotic changes within the inflamed udder tissue. The pathogenesis of these lesions is discussed. Among the forms of mastitis which need to be considered for differential diagnosis the author mentions particularly acute C. pyogenes mastitis and acute caseating tuberculous mastitis. Mixed infections of E. coli and C. pyogenes as well as of E. coli and the tubercle bacillus may complicate the pathological process. Resume Contribution au diagnostic et a la pathogenie des mammites aigues L'auteur decrit les lesions anatomo-pathologiques et histologiques des mammites colibacillaires de la vache, de la chevre et du porc. Leurs caracteristiques les plus importantes sont avec l'oedeme, une hyperemie plus ou moins prononcee avec hemorragies, des thromboses des vaisseaux sanguins et lymphatiques ainsi que des processus necrotiques au sein du tissu mammaire enflamme. La pathogenie de ces lesions est discutee. Parmi les mammites qui doivent etre prises en consideration pour le diagnostic differentiel l'auteur signale surtout la mammite pyobacillaire aigue et la tuberculose mammaire caseeuse aigue. Des infections mixtes au colibacille et au bacille pyogene ainsi qu'au colibacille et au bacille tuberculeux peuvent compliquer le processus morbide. Resumen Contribucion al diagnostico y patogenia de las mastitis agudas Se describen las alteraciones anatomopatologicas e histologicas de las colimastitis de la vaca, cabra y cerda. Sus caracteristicas esenciales son: edematizacion, grados variables de hiperemia con hemorragias, formacion de trombos en los vasos sanguineos y linfaticos, asi como procesos necrotizantes en medio del tejido mamario inflamado. Se comenta la patogenia de estas alteraciones. Entre las inflamaciones mamarias a tener en cuenta desde el punto de vista diagnostico-diferencial, se llama la atencion sobre la mastitis aguda por pyogenes y la tuberculosis mamaria caseificante aguda. Las infecciones mixtas de Bact. coli y C. pyogenes, asi como de Bact. coli y Bact. tuberculosis pueden complicar el curso de la enfermedad.

Zusammenfassung An 440 Kuhen aus 29 Milchkontrollbetrieben Mittelhessens, in denen bestimmte Besamungsbullen eingesetzt worden waren, und von denen Tochter in Laktation standen, wurde der Einflus bestimmter qualitativer und quantitativer Euter- und Zitzenmerkmale, des Lebensalters und des Laktationsstadiums sowie der genetische Einflus auf Mastitisanfalligkeit, Sekretionsstorungen, Ausscheider von Mastitiserregern (gesunde Infektionstrager), Infektionsbereitschaft und Entzundungsbereitschaft unter Ausschlus von Betriebseinflussen mittels eines “Least Squares-Verfahrens” fur Eigenschaften mit Schwellenwert berechnet. Heritabilitatsschatzungen ergaben fur das Merkmal “Mastitisanfalligkeit” eine Heritabilitat von 0,127 und fur das Merkmal “Entzundungsbereitschaft” eine solche von 0,132. Der genetische Einflus auf die Merkmale Infektionsbereitshaft, Sekretionsstorung und Infektionstrager (Ausscheider) war unbedeutend. Infektionsbereitschaft, Mastitisanfalligkeit und Entzundungsbereitschaft allgemein erhohen sich mit Zunahme der Ordnungszahl der Laktationen. Die Erhohung der Mastitisanfalligkeit ist durch eine gesteigerte Infektionsbereitschaft und eine grosere Durchlassigkeit des Strichkanals fur pathogene Keime sowie durch eine im Lauf der Laktation verminderte Antikorpersynthese bedingt. Morphologische Eigenschaften des Euters und der Zitzen haben, soweit sie keine extreme Formabweichungen aufweisen, keinen Einflus auf die Infektionsbereitschaft. Die offenbar vom Bodenabstand, von der Zitzenlange und von der Zitzenwanddicke beeinfluste Variabilitat der Eutergesundheit ist angesichts der Zusammenhange der Auspragung dieser Merkmale mit der Laktationszahl auf das Lebensalter, bzw. auf altersbedingte Veranderungen, zuruckzufuhren. Summary Influence of various phenotypic and genetic characters of the cow udder on its predisposition to mastitis In 440 cows from 29 milk control herds in Middle Hesse where particular bulls were in use and where the daughters of the cows were in lactation, the influence of certain qualitative and quantitative characters of udder and teats, age and stage of lactation, as well as genetic factors, were examined in relation to occurrence of mastitis, abnormal secretion, excretion of mastitis organisms (healthy carrier), predisposition to infection and to inflammation, while excluding management factors, and using the least squares test to determine increase in predisposition. The character “mastitis susceptibility” had a heritability of 0.127, “susceptibility to inflammation” one of 0.132. The genetic influence on susceptibility to infection, altered secretion and carriers was insignificant. Susceptibility to infection, to mastitis and to inflammation generally increased with increasing numbers of lactations. The rise in mastitis susceptibility was associated with increased susceptibility to infection and greater permeability of the streak canal for pathogenic organisms, as well as reduced antibody synthesis in the course of lactation. Morphological characters of the udder and teats, provided there was no extreme abnormality, had no effect on susceptibility to infection. Variations in udder health which arreared to be affected by distance from the floor, teat length and teat wall thickness were in fact associated more with number of lactationa and with age or conditions associated with age. Resume Influence de differentes proprietes phenotypiques et genetiques de la mamelle du bovin sur sa predisposition aux mammites Chez 440 vaches dans 29 exploitations laitieres dans lesquelles on avait utilise certains taureaux d'insemination et dont des filles etaient en lactation, on a calcule au moyen d'un procede «Least Squares» l'influence des caracteres qualitatifs et quantitatifs de la mamelle et des trayons, de l'âge, du stade de lactation et de l'influence genetique sur une sensibilite a la mammite des troubles de la secretion, une excretion des germes de la mammite (porteurs sains), une predisposition a l'infection et a l'inflammation a l'excusion des influences de l'exploitation. Des evaluations d'heredite ont donne 0,127 pour une «sensibilite a la mammite» et 0,132 pur une «predisposition a l'inflammation». L'influence genetique pour la predisposition a l'infection, les troubles de la secretion et les porteurs (excreteurs) est insignifiante. La disposition a l'infection, a l'inflammation et la sensibilite a la mammite augmente avec le nombre des lactations. Cette augmentation est due a une sensibilite plus grande a l'infection, a une permeabilite plus forte du canal du trayon pour des germes pathogenes et a une synthese diminuee des anticorps au cours de la lactation. Les proprietes morphologiques de la mamelle et des trayons, pour autant que l'on n'ait pas de formes extremes, n'ont pas d'influence sur une predisposition a l'infection. La variation de la sante de la mamelle influencee de facon manifeste par la distance au sol, la longueur des trayons et l'epaisseur de la paroi des trayons est a attribuer dans son ensemble avec le nombre de lactation a l'âge et aux lesions dues a l'âge. Resumen El influjo de varias propiedades fenotipicas y geneticas de la ubre de vaca sobre su predisposicion a las mastitis Se calculo en 440 vacas de 29 explotaciones lecheras controladas de Hesse Central, en las cuales se habian empleado ciertos toros de inseminacion instrumental, y de los cuales se hallaban hijas en lactacion, el influjo de ciertas caracteristicas cuali y cuantitativas de las glandulas mamarias y de los pezones, de la edad y del estadio de lactacion, asi como el influjo genetico, sobre la propension a mastitis, trastornos en la secrecion, difusoras de agentes etiologicos de mamitis (portadoras sanas de infecciones), disposiciones a la infeccion e inflamacion excluyendo los influjos de empresa mediante un procedimiento de minimos cuadrados para propiedades con valor umbral. Los calculos de heredabilidad arrojaron para la caracteristica «propension a la mastitis» una heredabilidad de 0,127 y para la caracteristica «propension a la inflamacion» una semejante de 0,132. El influjo genetico era insignificante sobre las caracteristicas disposicion para infecciones, trastornos en la secrecion y portadora (difusora) de infecciones. La disposicion a infecciones, propension a la mamitis y disposicion a la inflamacion en general aumentan con el incremento del numero cardinal de lactaciones. El aumento de la propension a mastitis esta condicionado por una disposicion intensificada a las infecciones y una permeabilidad mayor del canal galactoforo para germenes patogenos, asi como por la sintesis reducida de anticuerpos en el curso de la lactacion. Las propiedades morfologicas de la glandula mamaria y de los pezones no ejercen — siempre y cuando no exhiban deformaciones extremas — ningun influjo sobre la disposicion de las infecciones. La variabilidad de la sanidad mamaria, que depende al parecer de la distancia al suelo, de la longitud de los pezones y del espesor de la pared de los pezones, se atribuye a la vista de los vinculos de la impresion de estas caracteristicas con el numero de lactaciones sobre la edad, resp. sobre modificaciones gerontologicas.

Zusammenfassung Es werden pathologisch-anatomische und -histologische Veranderungen der bald schneller, bald langsamer verlaufenden Mastitiden beschrieben, die durch Corynebacterium pyogenes und Mischinfektionen von verschiedenartigen Streptokokken, Staphylokokken und coliformen Bakterien mit C. pyogenes hervorgerufen werden. Mit Ausnahme der sehr heftig und der sehr milde verlaufenden Formen ist das Krankheitsbild in den meisten Fallen durch Abszezbildungen gekennzeichnet, die vorwiegend galaktogen entstehen, aus proliferativen und regressiven Prozessen hervorgehen und keine wesentliche Mitbeteiligung von Leukozyten erkennen lassen. — Bei schnellem Krankheitsverlauf breiten sich exsudative und nekrotisierende Prozesse mehr diffus uber Milchgange, Drusenparenchym und Interstitium aus und greifen auch auf Blut- und Lymphgefaze uber. Bei schleichend verlaufenden Fallen ohne Abszezbildungen zeigen sich infolge proliferativer Entzundung Einengungen und Verlegungen der Zisterne und Milchgange. Summary Pathogenesis of pure and mixed mastitis caused by Corynebacterium pyogenes A description is given of the pathological anatomy and histology of rapidly and slowly developing forms of mastitis associated with Corynebacterium pyogenes and mixed infections with various streptococci, staphylococci and coliform bacteria along with Corynebacterium pyogenes. Except for the very massive and the very mild forms the picture in most cases is characterised by abscess formation which is mainly galactogenous in origin, and consists of proliferative and regressive processes without a very marked association with leukocytes. In the rapidly developing disease exudative and necrotic processes spread more diffusely through the ducts, the glandular tissue and the interstitial tissue, and involve blood and lymph vessels. In the insidious forms without abscess formation a proliferative inflammation causes partial or total obstruction and damage to the system and ducts. La Pathogenese des mammites dues a Corynebacterium pyogenes avec ou sans germes surajoutes L'auteur decrit les lesions anatomo-pathologiques et histologiques des mammites a evolution tanto't plus rapide, tanto't plus lente provoquees par Corynebacterium pyogenes ou dues a une infection mixte de ce germe avec divers streptocoques, staphylocoques et bacteries coliformes. A l'exception des cas a evolution tres rapide et des formes a evolution lente le processus pathologique est caracterise dans la plupart des cas par la formation d'abces, qui se produisent surtout par voie galactogene, sont issus de processus pro-liferatifs et regressifs et ne laissent voir aucune participation importante de leucocytes. Dans les cas a evolution rapide, les processus exsudatifs et de necrose s'etendent d'une faĉon plus diffuse aux canaux galactophores, au parenchyme glandulaire et au tissu interstitiel pour attaquer finalement les vaisseaux sanguins et lymphatiques. Dans les cas a evolution insidieuse sans formation d'abces, l'inflammation proliferative provoque l'obliteration partielle ou totale de la citerne et des canaux galactophores. Resumen Patogenia de las mastitis puras y mixtas producidas por Corynebacterium pyogenes Se describen las alteraciones anatomopatologicas e histologicas de las mastitis de curso a veces rapido, a veces lento, producidas por Corynebacterium pyogenes e infecciones mixtas de diversos estreptococos, estafilococos y bacterias coliformes con C. pyogenes. Con excepcion de las formas muy agudas y de las de curso extremadamente benigno, el cuadro clinico se caracteriza en la mayoria de los casos mediante formaciones de abscesos, que se originan primordialmente por via galactogena, proceden de procesos pro-iiferativos y regresivos y no permiten reconocer ninguna participacion esencial de los leucocitos. — En el curso agudo de la enfermedad se extienden procesos exudativos y necrotizantes mas difusamente a traves de los canales galacto-foros, parenquima glandular e intersticio, afectando tambien a los vasos sanguineos y linfaticos. En casos de curso cronico sin formacion de abscesos, se presentan estenosis y obturaciones de la cisterna y conductos galactoforos, como consecuencia de la inflammacion proliferativa.

Summary 206 strains of Staph, aureus isolated from bovine mastitic milks were analysed for their susceptibility to benzylpenicillin (PEN) and dihydrostreptomycin (DHSM). On the base of MIC-determinations 43% of the strains turned out to be PEN-resistant and 33% DHSM-resistant. 97% of the PEN-resistant strains were penicillinase producers. The influence of the inoculum size on the PEN-susceptibility of the PEN-resistant group was very pronounced. On the other hand, the response of the strains to DHSM was hardly influenced by the inoculum size. The comparison of cumulative percentages of inhibition of the antibiotics used singly and combined and the analysis of the fractional inhibitory concentrations led to the conclusion of a significant synergistic effect of the combination. A synergistic effect of the combination was established also with the group of staphylococci resistant to both PEN and DHSM. The induction of penicillinase by PEN was examined on two PEN-resistant strains. The beta-lactamase production was reduced to one tenth by the concomitant influence of DHSM (PEN 100 I. U./ml, DHSM 100 mcg/ml). In an agar-diffusion assay, one tenth MIC of DHSM increased the activity of PEN 9–14 fold while PEN potentiated the efficacy of DHSM by a factor 3–7. These data are discussed with respect to the number of staphylococci that are likely to occur in the bovine udder in cases of chronic mastitis, and with regard to the concentrations of the drugs present in the mammary glands of cows treated at drying-off. The results give substantial evidence to explain the excellent therapeutic effect obtained against staphylococcal mastitis by combinations of PEN and DHSM at high dosage rates. Zusammenfassung Quantitative Erfassung der kombinierten in-vitro Aktivitaten von Benzylpenicillin und Dihydrostreptomycin auf bovine Euter-Staphylokokken unter besonderer Berucksichtigung von synergistischen Wirkungen 206 aus Milchproben isolierte Staph. aureus-Stamme wurden auf ihre Empfindlichkeit gegen Benzylpenicillin (PEN) und Dihydrostreptomycin (DHSM) untersucht. Bei einer angenommenen Grenzkonzentration von 4.1 I. E./ml resp. 37 mcg/ml wurden 43% der Stamme als PEN-resistent und 33% als DHSM-resistent klassiert. 97% der PEN-resistenten Stamme produzierten Penicillinase. Die PEN-Empfindlichkeit der PEN-resistenten Staphylokokken war stark inokulumabhangig. In viel geringerem Ausmas wurde die DHSM-Empfindlichkeit der DHSM-resistenten Stamme durch die Grose des Inokulums beeinflust. Aus dem Vergleich der kumulativen Prozentsatze der Wachstumshemmung durch die Antibiotika allein und in Kombination sowie aus einer Analyse der fraktionierten Hemmkonzentrationen (FIC) ergaben sich eindeutige Anhaltspunkte fur eine signifikante synergistische Wirkung der Kombination PEN/DHSM. Diese synergistische Wirkung kam auch bei PEN- und DHSM-resistenten Stammen zum Ausdruck. An zwei Stammen wurde die Penicillinase-Induktion durch PEN uberpruft. Es zeigte sich, das die Beta-Laktamase-Produktion durch den Einflus von DHSM auf einen Zehntel der durch PEN allein induzierten vermindert wurde. In einem Agar-Diffusionstest potenzierte eine subinhibitorische Konzentration von DHSM (ein Zehntel der minimalen Hemmkonzentration) die Wirkung von PEN um das 9 bis 14fache. Im selben Sinne (Faktor 3–7) verbesserte PEN die DHSM-Wirkung. Bei der Besprechung der genannten Versuchsresultate wird insbesondere Bezug genommen auf die Zahl der bei chronischer Mastitis im Euter zu erwartenden Staphylokokken und auf die Wirkstoffkonzentrationen nach Trockenstellbehandlung. Die Versuchsergebnisse bieten eine Erklarung fur die gute Wirkung, die eine hochdosierte PEN/DHSM-Behandlung selbst gegen durch resistente Stpahylokokken verursachte Mastitiden entfaltet. Resume Estimation quantitative de l'action combinee de benzylpenicilline et dihydrostreptomycine contre des staphylocoques isoles de mamelles de vaches avec consideration particuliere d'activites synergistiques 206 souches de Staph, aureus isolees de laits provenant de mammites bovines furent analysees quant a leur susceptibilite a la benzylpenicilline (PEN) et la dihydrostreptomycine (DHSM). Le 43% des souches fut classe resistant a PEN et 33% a DHSM sur la base de limites de concentration de 4,1 U. I./ml et 37 mcg/ml. 97% des souches resistantes a PEN produisirent de la penicillinase. La susceptibilite a PEN des staphylocoques resistants a PEN fut fortement influencee par la quantite des germes inocules. En revanche, l'activite de la DHSM fut a peine influencee par l'ampleur de l'inoculum. La comparaison des pourcentages cumulatifs de l'inhibition exercee par les antibiotiques seuls et combines et l'analyse des fractions de concentrations inhibitrices montrerent l'existence d'une synergie significative resultant de l'emploi combine des deux antibiotiques. Cette activite synergistique fut meme confirmee sur le groupe de staphylocoques a double resistance. L'induction de la penicillinase par PEN a ete examinee sur deux souches resistantes a PEN. La production de beta-lactamase resta reduite a un dixieme sous l'influence simul-tanee de DHSM (PEN 100 U. I./ml, DHSM 100 mcg/ml). Dans un essai de diffusion en gelose, un dixieme de concentration minimale inhibitrice de DHSM augmenta l'activite de PEN 9 a 14 fois, alors que l'efficacite de DHSM fut multipliee d'un facteur de 3 a 7 par PEN. Ces resultats ont ete discutes en tenant compte du nombre probable de staphylocoques se trouvant dans la mamelle bovine lors de mastite chronique et en prenant en consideration les concentrations d'antibiotiques presentes dans les glandes mammaires de vaches traitees au tarissement. Les resultats obtenus expliquent l'excellent effet therapeutique de combinaisons de PEN et DHSM a hauts dosages contre les mastites a staphylocoques. Resumen Evaluacion cuantitativa in vitro de la actividad de la combinacion Benzilpenicilina y Dihidroestreptomicina sobre estafilococos aislados en cuarterones de vacas y sobre las actividades sinergisticas en particular 206 cepas Staph, aureus aisladas en muestras de leche fueron analizadas en cuanto a su sensibilidad frente a Benzilpenicilina (PEN) y Dihidroestreptomicina (DHSM). Ante una supuesta concentracion minima de inhibicion de 4.1 resp. 37 ppm, el 43% de las cepas bacterianas eran PEN-resistentes y el 33% DHSM-resistentes. El 97% de las cepas que eran PEN-resistentes producian penicilinasa. El tamano del inoculum tuvo un influjo importante sobre la sensibilidad frente al PEN de los estafilococos que eran PEN-resistentes. El influjo del tamano del inoculum sobre la sensibilidad frente al DHSM de las cepas que eran DHSM-resistentes era insignificante. La comparacion entre los porcentajes cumulativos de inhibicion de los antibioticos utilizados solos o en combinacion, y los analisis de las concentraciones de inhibicion fraccionadas (Fractional Inhibitory Concentrations) mostro indicios univocos de un efecto sinergistico significante por la combinacion PEN/DHSM. Este efecto sinergistico se expreso tambien en las cepas PEN- y DHSM-resistentes. Se contrasto la induccion de penicilinasa por PEN con ayuda de dos cepas PEN-resistentes. Resulto que la produccion de beta-lactamasa era disminuida a un deimo (1/10) por el simultaneo influjo del DHSM (PEN 100 unidades/ml, DHSM 100 ppm). En un ensayo de agardifusion un decimo de la concentracion minima de inhibicion de DHSM aumento la actividad de PEN de 9–14 veces, mientras que PEN elevo la eficacia de DHSM a la potencia 3–7. Los datos de estos estudios se refieren al numero esperado de estafilococos en los cuarterones de vacas en casos de mamitis cronicas y a las concentraciones de agentes quimicos despues del tratamiento. Los resultados ofrecen una explicacion por el buen efecto obtenido con tratamientos con alta dosis de PEN/DHSM; y tambien por los casos de mamitis provocadas por estafilococos resistentes.

Summary Studies were conducted on the in vitro sensitivity of 285 pathogenic strains of microorganisms of bovine udder origin, representing 8 different bacterial species, to quinaldofur, a new synthetic nitrofuryl quinoline derivative, using the twofold serial tube dilution method and milk as fluid medium. Approximately 80% of Gram-positive udder pathogens were inhibited by quinaldofur concentrations ranging from 0.038 to 0.625 μg./ml. and all were inhibited at 2.5 to 5.0 μg./ml. The drug was equally effective against Staphylococcus aureus strains resistant to antibiotics commonly used in mastitis therapy. All Gram-negative udder pathogens examined were resistant to less than 5.0 μg./ml. of the drug. Quinaldofur could be quantitatively assayed in milk by microbiological procedures and can be detected at concentrations lower than 0.038 μg./ml. Zusammenfassung Quinaldofur, eine neue synthetische Verbindung zur Mastitis-Behandlung I. Charakteristika in vitro Es wurden Untersuchungen durchgefuhrt uber die Empfindlichkeit in vitro von 285 pathogenen aus Rindereuter isolierten Mikroorganismen-Stammen, wobei es sich um acht verschiedene Bakterienarten handelte, gegenuber Quinaldofur, einem neuen synthetischen Nitrofurylquinolinderivat. Dazu diente der abgestufte Reihenverdunnungstest (Faktor 2) mit Milch als flussiges Medium. Etwa 80% der Gram-positiven euterpathogenen Stamme wurden durch Quinaldofur in Konzentrationen von 0,038 bis 0,625 μg/ml gehemmt und 100% durch Mengen von 2,5 bis 5,0 μg/ml. Das Medikament war gleichermasen wirksam gegenuber Staphylococcus aureus-Stamme, die sich als resistent gegenuber den in der Mastitistherapie gebrauchlichen Antibiotika erwiesen hatten. Alle untersuchten Gram-negativen euterpathogene Stamme waren gegenuber weniger als 5,9 μg/ml des Medikaments resistent. Quinaldofur kann in der Milch mikrobiologisch quantitativ bestimmt und in Konzentrationen < 0,038 μg/ml nachgewiesen werden. Resume Quinaldofur, un nouveau produit synthetique pour le traitement des mammites I. Caracteres in vitro Des recherches ont ete faites sur la sensibilite in vitro de 285 souches bacteriennes pathogenes d'origine mammaire chez le bovin, representant 8 especes bacteriennes differentes, au quinaldofur, un nouveau derive synthetique du nitrofuryle quinoline. On a utilise la methode de dilution en double serie et du lait comme milieu liquide. Le 80% des germes gram-positifs pathogenes furent inhibes par le quinaldofur aux concentrations allant de 0,038 a 0,625 μg/ml. Le produit fut egalement efficace contre Staphylococcus aureus resistant aux antibiotiques utilises habituellement dans la therapie des mammites. Tous les germes pathogenes gram-negatifs examines furent resistants a des concentrations inferieures a 5,0 μg/ml. Le quinaldofur peut etre titre quantitativement et microbiologiquement dans le lait; sa detection peut se situer a des concentrations inferieures a 0,038 μg/ml. Resumen Quinaldofur, un farmaco sintetico nuevo en la terapeutica de la mastitis I. Caracteristicas in vitro Se llevaron a cabo estudios sobre la sensitividad in vitro de 285 estirpes patogenas de microorganismos procedentes de ubres vacunas, representando 8 especies bacterianas diferentes, frente a quinaldofur, un derivado sintetico de la nitrofurilquinolina, usando la tecnica de dilucion con dos tubos seriados y leche como vehiculo liquido. El 80% aprox. de los germenes grampositivos patogenos para la ubre eran inhibidos por concentraciones de quinaldofur que variaban entre 0.038 y 0.625 μg/ml. y todos eran inhibidos desde 2.5 hasta 5.0 μg/ml. Este farmaco tambien resulta efectivo frente a estirpes Staphylococcus aureus, resistentes a los antibioticos que se suelen usar en la terapeutica de la mamitis. Todos los germenes patogenos para la mama gramnegativos eran resistentes a concentraciones del farmaco inferiores a 5.0 μg/ml. Quinaldofur se pudo verificar cuantitativamente en leche por via microbiologica y es identificable a concentraciones inferiores a 0.038 μg/ml.

National audience; Le typage génétique des souches de Streptococcus uberis par la technique MLVA a été développé en 2006 à l’INRA de Nouzilly. Elle permet de distinguer les souches entre elles avec une discrimination importante et compatible avec des enquêtes épidémiologiques intra et inter élevages. Les travaux réalisés enFrance et déjà décrits (publications aux JNGTV et 3R) ont été utilisés pour montrer l’intérêt des apports de cette technique et ses limites. Un cas d’élevage associé à une situation difficile concernant la concentration cellulaire du tank est présentée. Ce cas présente un intérêt pédagogique pour illustrer un modèle épidémiologique contagieux par la méthodologie classique du CASDAR et également par l’apport de la technique par MLVA : la techniqueMLVA permet d’appréhender la contamination entre les quartiers d’une même vache, et des contaminations de quartiers entre des vaches différentes. Ces informations par leur aspect pédagogique permettent de mieux expliquer les problèmes de contagiosité qui surviennent selon toute vraisemblance à latraite. Pour les auteurs, en l’absence de précision sur la diversité des souches présentes dans un troupeau par une méthode MLVA ou autres, il apparait prudent de prioriser d’emblée un modèle mixte pour la hiérarchisation des conseils de prévention et de traitement.

Mastitis is an inflammatory disease of the mammary gland, generally of infectious origin,which causes huge economic losses in the milk production chain and can affect milk yield and quality. The capacity of the internal microbiota of the bovine udder (contained notably in foremilk) to exert a barrier effect with regard to pathogens has never been investigated so far. In this study, we evaluated composition of the bovine udder microbiota in relation to mastitis susceptibility. Udder microbiota was investigated in 31 quarters whose sanitary status ranged from healthy (i.e. no mastitis during the previous lactations) to susceptible to mastitis (i.e. one to several mastitis episodes during each of the previous lactations). Total bacterial DNA was extracted from foremilk sample and swab sample of the teat canal in each quarter. The 16S DNA was PCR-amplified and pyrosequenced. Phylobiome was analyzed using QIIME, and results were further treated using R, and LEfSe. Clustering of the samples based on their bacterial composition showed a link between udder microbiota and sanitary status. Healthy quarters showed a higher diversity compared to mastitis susceptible ones. Discriminant analysis of phylobiomes revealed dysbiosis in mastitis-susceptible quarters and allowed identification of taxonomic markers in relation to mastitis susceptibility. Healthy quarters were associated to a higher proportion of the Clostridia class, the Bacteroidetes phylum and the Bifidobacteriales order whereas mastitis-susceptible quarters showed a higher proportion of the Bacilli class (Staphylococcus) and Chlamydiia class. These results suggest that a diverse and balanced microbiota in the udder contributes to the mammary gland health, likely by exerting a barrier affect with regard to pathogens, as observed in other contexts (e.g.human gut). Mechanisms of interaction between this endogenous microbiota and the mammary gland deserve further investigations, which will help maintain a balanced mammary microbiota e.g. through the development of mammary probiotics.

absent

An ammonoid genus Mrhiliceras Kennedy and Wright, 1985, is revised to be based on the "inflated forms" as represented by the holotype of its type species Mammites lapparenti Pervinquiere, 1907. How are the "compressed forms" of Kennedy and Wright, 1985 should be treated is a problem to be examined further. In this paper we describe an example of M. lapparenti from the basal part of the Cenomanian (Cretaceous) sequence of strata in the Soeushinai area, northwest Hokkaido. It is somewhat larger than the previously reported specimens and represents a full grown shell of a mature stage.

Les mammites subcliniques sont des affections incideuses de la glande mammaire mais qui impactent negativement la production de la vache laitiere. Il s’avere necessaire de faire le diagnostic en vue de les controler. Objectif : Le present travail avait pour objectif de determiner la prevalence des mammites subcliniques dans les elevages traditionnels de la region de Kaolack au Senegal. Methodologie et resultats : Au total 101 vaches en lactation des elevages traditionnels de la zone periurbaine de Kaolack ont fait l’objet de l’etude. Le California Mastitis Test (CMT) et le Comptages des Cellules Somatiques (CCS) avec le Delaval cells counter (Delval, Tumba, Suede), ont ete utilises pour analyser les echantillons de lait preleves. Les prevalences ont ete de 11,9% et de 10,9% en utilisant le CMT et le CCS respectivement. Il n’y a pas eu de difference significative entre prevalences obtenues par les deux tests (p=0,824). La prevalence des mammites chez les vaches metisses (12,5%) a ete significativement plus elevee que celle des vaches de race locale Gobra (11,8%) (p=0,007). Par contre, le rang de mise bas n’a eu aucun effet sur la survenue des mammites (Odds ratio = 1,542 ; 95% IC : [0,884-2,690]). Conclusion : La prevalence des mammites obtenue dans les elevages traditionnels permet de dire qu’il faut envisager une prise en charge efficace des vaches malades et ameliorer la production laitiere. A la lumiere de nos resultats, le test de CMT qui est fiable rapide simple et efficace peut etre un bon moyen de detection rapide des mammites subcliniques dans les elevages traditionnels Mots cles : California Mastitis Test, Comptage Cellules Somatiques, Mammite subclinique, vache laitiere, Senegal Subclinical mastitis is an insidious infection of the mammary gland which negatively affects the production of the dairy cow. Thus, it is necessary to make the diagnosis in order to control it. Objective : The objective of this study was to determine the prevalence of subclinical mastitis in traditional livestock (cows) in the region of Kaolack in Senegal. Methodology and results : A total of 101 lactating cows from traditional Kaolack peri-urban farming were studied. The California Mastitis Test (CMT) and Somatic Cell Counts (CCS) using Delaval cells counter (Delval, Tumba, Sweden) were utilized to analyze the milk samples. The prevalences were 11.9% and 10.9% using CMT and CCS respectively. There was no significant difference between the prevalences obtained by the two tests (p = 0.824). The prevalence of mastitis in crossbred cows (12.5%) was significantly higher than that of local Gobra cows (11.8%) (p = 0.007). On the other hand, the calving rank had no effect on the occurrence of mastitis (Odds ratio = 1.542 ; 95% CI : [0.884-2.690]). Conclusion : The prevalence of mastitis obtained in traditional livestock suggests that effective management of sick cows should be considered in order to improve dairy production. In light of our findings, the CMT test which is reliable fast simple and effective can be a good means of rapid detection of subclinical mastitis in traditional dairy farms. Keywords : California Mastitis Test, Somatic cell count, Subclinical mastitis, dairy cow, Senegal

La période de transition entre la fin de la gestation et le début de la lactation est une période critique du cycle de production des ruminants laitiers. Un déficit énergétique est souvent présent et a des répercussions sur le métabolisme et les fonctions immunitaires, qui peuvent être altérées, dont notamment l’expression de gènes leucocytaires. Notre étude a porté sur l’influence d’une restriction énergétique d’une durée de 15 jours sur la production et le métabolisme de 24 brebis. Ses conséquences sur la réponse inflammatoire mammaire après injection de composés phlogogènes ont été évaluées. Après restriction, une diminution du poids vif, de la note d’état corporel et de la production laitière ont été observées. Un bilan énergétique négatif entraîne une augmentation marquée de la concentration des acides gras non estérifiés et du bétahydroxybutyrate, ainsi qu’une diminution de la glycémie ; il a une influence légère sur la réponse inflammatoire mammaire.

International audience; Clinical mastitis caused by E. coli accounts for significant production losses and animal welfare concerns on dairy farms worldwide. The benefits of therapeutic intervention in mild to moderate cases are incompletely understood. We investigated the effect of intramammary treatment with cefapirin alone or in combination with prednisolone on gene expression profiles in experimentally-induced E. coli mastitis in six mid-lactating Holstein Friesian cows. Cows were challenged with E. coli in 3 quarters and received 4 doses of 300 mg cefapirin in one quarter and 4 doses of 300 mg cefapirin together with 20 mg prednisolone in another quarter. At 24 h (n = 3) or 48 h (n = 3) post-challenge, tissue samples from control and treated quarters were collected for microarray analysis. Gene expression analysis of challenged, un-treated quarters revealed an up-regulation of transcripts associated with immune response functions compared to un-challenged quarters. Both treatments resulted in down-regulation of these transcripts compared to challenged, un-treated quarters most prominently for genes representing Chemokine and TLR-signaling pathways. Gene expression of Lipopolysaccharide Binding Protein (LBP), CCL2 and CXCL2 were only significantly down-regulated in cefapirin-prednisolone-treated quarters compared to un-treated controls. Down-regulation of chemokines was further confirmed on the basis of protein levels in milk whey for CXCL1, CXCL2 and CXCL8 in both treatments with a greater decrease in cefapirin-prednisolone-treated quarters. The data reveal a significant effect of treatment on cell recruitment with a more pronounced effect in cefapirin-prednisolone treated quarters. Provided a rapid bacteriological clearance, combination therapy may prevent neutrophil-induced tissue damage and promote recovery of the gland.

S. aureus is a major aetiological agent of ruminant mastitis worldwide. The chronic nature of S. aureus mastitis makes it difficult to cure and prone to resurgence. In order to identify the bacterial factors involved in this chronicity, Newbould 305 (N305), a strain that can reproducibly induce mild and chronic mastitis in an experimental setting, was characterized in depth. We employed genomic and proteomic techniques combined with phenotype characterization, in order to comprehensively analyse N305. The results were compared with data obtained on S. aureus RF122, a strain representative of the major clone involved in severe bovine mastitis worldwide. Five mobile genetic elements were identified in the N305 genome as carrying virulence factors which correlated with phenotypic features such as cytotoxicity, mammary epithelial cell invasion or host-adaptation. In particular, the presence and characteristics of surface exposed proteins correlated well with the greater adhesion and internalization capacities of N305 in bovine mammary epithelial cells. N305 also displayed less diversity of toxin genes but secreted larger quantities of these toxins, associated with a higher cytotoxicity potential. Our data are consistent with the invasiveness and host-adaptation features which contribute to the chronicity of S. aureus mastitis. Mobile genetic elements, exoproteins and surface exposed proteins constitute good targets for further research to explore the underlying mechanisms related to mastitis chronicity.

Staphylococcus aureus est un des pathogènes majeurs impliqués dans les mammites chez les ruminants. Il engendre des tableaux cliniques très variables, allant des mammites subcliniques aux mammites gangréneuses, mais les mécanismes de cette variabilité restent encore mal connus. La volonté de réduire l’utilisation d’antibiotiques en médecine vétérinaire ainsi que leurs faibles efficacités contre les mammites staphylococciques justifient les efforts consentis au développement de stratégies alternatives. L’une des particularités des infections intramammaires à S. aureus est leur chronicité et leur persistance dont l’une des principales causes est la capacité de S. aureus à adhérer et internaliser dans les tissus de l’hôte. Utiliser les propriétés inhibitrices des bactéries dites « probiotiques » d’un écosystème pour réduire, prévenir ou traiter des infections est une stratégie qui a déjà montré de bons résultats chez l’homme. Ce travail de thèse vise à mieux caractériser le microbiote mammaire et notamment la composante lactique et à évaluer son potentiel à moduler l’adhésion et l’internalisation de S. aureus dans les cellules épithéliales mammaires bovines. L’ensemble de ce travail a été réalisé avec deux souches de S. aureus très différentes au niveau des tableaux cliniques engendrés. La souche RF122, très virulente, et la souche Newbould 305, induisant des infections modérées et chroniques. Les résultats obtenus montrent que la capacité d’invasion cellulaire semble être un élément clé dans la chronicité de la souche Newbould 305. Ceci a été montré par l’analyse comparative (génomes, protéomes et phénotypes) des souches Newbould 305 et RF122. D’autre part, l’écosystème de la glande mammaire présente une composante lactique ayant des capacités probiotiques intéressantes. Ceci a été montré in vitro sur une modèle d’interaction tripartite, entre S. aureus, Lactobacillus casei et les cellules épithéliales mammaires MAC-T. Dans ce système, L. casei affecte l’adhésion et surtout l’internalisation de S. aureus sans modifier la viabilité et la morphologie des cellules en culture. L’inhibition semble dépendante d’un contact direct avec des L. casei viables. La caractérisation des bases moléculaires de ces phénomènes se poursuit dans l’équipe. Ces résultats ouvrent de nouvelles perspectives dans l’application de bactéries lactiques en tant que probiotique mammaire., Staphylococcus aureus is one of the main pathogens involved in ruminant mastitis. Severity of bovine S. aureus mastitis is highly variable, from subclinical to gangrenous mastitis. Nevertheless S. aureus factors that may explain this variability are still poorly documented. There is a great demand for the reduction of antibiotics use in veterinary medicine. Besides, these antibiotics have a low efficiency against staphylococcal mastitis. There is thus a need to develop alternative strategies. One feature of S. aureus is its ability to persist within the mammary tissue and induce chronicity of the infection. One of the main causes is the S. aureus ability to adhere to and internalize into host cells. The concept of biological control, using natural inhibitory properties of lactic acid bacteria (LAB) as probiotics, is now well established in humans and animals and is used to reduce, prevent or treat bacterial infections. This PhD work aims to better characterize the mammary microbiota in particular its LAB population, which might exert a positive effect on host health, and to determine its potential to modulate adhesion and internalization of S. aureus. This work was realized using two S. aureus strains as representatives of strains inducing severe (S. aureus RF122) or mild and chronic (Newbould 305) mastitis. Our results showed that the cellular invasion capacities seems to be key element in the chronicity observed in Newbould 305 mastitis. This was determined by genomic, proteomic and phenotypic comparison with RF122. Besides, we showed that the bovine mammary ecosystem present a LAB biodiversity and that these LAB presented interesting probiotic capacities. This was shown in an in vitro model of tripartite interaction, between S. aureus, Lactobacillus casei and the mammary epithelial cells MAC-T. In this system, L. casei impairs S. aureus adhesion and internalization without modifying the viability and the morphology of cells. The inhibition depends on a direct contact with live L. casei. Identification of the molecular basis of this inhibition are currently under investigation. These results open new perspectives in the application of lactic acid bacteria as mammary probiotics.

National audience

National audience

National audience; On constate depuis quelques années une augmentation de la prévalence des mammites dues à Streptococcus uberis qui peuvent persister dans la mamelle et ainsi contribuer à une augmentation des niveaux cellulaires des laits. Un travail a été engagé depuis plus de 2 ans par l’UMT Maîtrise de la santé des troupeaux bovins et l’INRA afin de mieux connaitre grâce au typage moléculaire MLVA, l’épidémiologie des infections à Streptococcus uberis au sein des troupeaux et ainsi permettre de mieux cibler les actions de maîtrise à recommander. Cet article a pour objectif de décrire les premiers résultats concernant la dynamique des infections (prévalence, incidence, taux de guérison, proportion de contagion) dans dix neuf troupeaux de l’ouest de la France (Bretagne et Pays de la Loire) à problèmes récurrents de mammites liées Streptococcus uberis.

Master

Despite being one of the main pathogens involved in ruminant mastitis, little is known about what proteins Staphylococcus aureus does express, in vivo, during the infection. Here, two S. aureus strains were isolated from curds formed within the udder of two ewes suffering from gangrenous mastitis. Protein samples were prepared from cell fractions and were analyzed using 1D-LC MS/MS. Results were compared to 1D-LC MS/MS analysis of the same S. aureus strains grown in ewe milk. A total of 365 proteins were identified. Most of them were related to cellular metabolism, cellular division and stress response. Half of the proteins were found in both conditions but a substantial number were specifically found in in vivo conditions and gave indications about the active metabolic status and the stresses encountered by S. aureus within the cistern during a gangrenous mastitis.

La mammite clinique est une inflammation sévère du trayon et de la glande mammaire fréquente dans l’espèce bovine. En fonction de l’agent bactérien impliqué et de la réaction de l’hôte, les symptômes sont variables et peuvent, dans certains cas, provoquer une chute importante de la production laitière et altérer de façon irréversible la glande mammaire et le trayon des animaux atteints par cette pathologie. Notre premier objectif était de vérifier l’impact des mammites cliniques sur les paramètres de production laitière et les mesures de conductivité électrique du lait par quartier sur les vaches Holstein de l’élevage INRA de Nouzilly. Notre deuxième objectif était de mettre en évidence par échographie, les changements qualitatifs et quantitatifs observés au niveau de la glande mammaire et des trayons atteints de mammite clinique, dans le but de valider de nouveaux indicateurs morphométriques. Nos résultats montrent clairement une baisse de la production laitière pendant et après les épisodes de mammite clinique observés pendant l’étude, cette diminution pouvant atteindre 80% de la production antérieure à la mammite pour certaines vaches. En parallèle, l’analyse des données de conductivité par quartier révèle une augmentation significative de ce paramètre dans les 4 jours qui entourent l’apparition des signes cliniques et des fluctuations importantes de ce paramètre sur les quartiers touchés par une mammite pendant les 28 jours qui entourent les signes cliniques. Grâce aux examens échographiques, il est possible de mettre en évidence une inflammation au niveau de la glande mammaire et une réduction du volume de la citerne des trayons dans les quartiers atteints pendant une mammite. L’examen échographique réalisé 15 jours après la fin du traitement antibiobique permet d’évaluer la qualité de la récupération ou les séquelles d’une mammite sur la glande mammaire et le trayon atteints. Ces premiers résultats pourraient aboutir à la validation de nouveaux indicateurs morphométriques et servir d’aide à la réforme pour les éleveurs., Clinical mastitis is a germ-related teat and udder infection prevalent in dairy cows. The severity of the disease depends on the involved bacteria and the host reaction. Milk production but also teat and udder morphology can be irreversibly impacted. Our first goal was to study the incidence of clinical mastitis on milk production parameters in our dairy herd, with a special emphasis on the measure of electrical conductivity of individual udder quartiers. Our second goal was to use ultrasonography to illustrate changes caused by clinical mastitis on udder parenchyma and teats’ cistern, aiming at validating new indicators. Our results show a significant reduction of milk yield during and after a clinical mastitis episode, the loss of milk production reaching up to 80% in the most severe cases. Moreover, changes in milk composition during mastitis induce a significant increase in milk mean conductivity in the 4 days surrounding the first clinical signs and dramatic fluctuations of this parameter over at least a 28-day period surrounding detection of the pathology. Ultrasonography of udders and teats affected by mastitis reveals distention of the udder parenchyma and reduction of teat cistern volume during inflammation. This work shows that sonographic examination of bovine teats is a useful non-invasive method to be used in mastitis control during and after clinical episodes. Those morphometric indicators could help dairy cattle breeders to decide whether they should cull a cow after clinical mastitis.

Les mammites sont des inflammations de la mamelle provoquées principalement par des bactéries. Elles représentent un problème majeur en élevage car elles entraînent d’importantes pertes économiques pour les filières de ruminants laitiers. Elles sont caractérisées par de fortes augmentations de la concentration des cellules somatiques dans le lait. Le score de cellules somatiques (SCS) est très bien corrélé à la présence d’une infectionmammaire. Il peut donc être utilisé en sélection pour améliorer la résistance aux mammites. Pour comprendre les mécanismes mis en place lors d’une sélection sur les SCS, deux lignées divergentes de brebis ont été produites à partir de géniteurs ayant des valeurs extrêmes de l’index SCS.Le principal objectif de ce travail est d’identifier et de comprendre les mécanismes qui confèrent une plus grande résistance ou sensibilité aux mammites provoquées par des staphylocoques. Nos travaux ont porté principalement sur des analyses transcriptomiques de trois types cellulaires majeurs, après contact avec des staphylocoques : les cellules inflammatoires du lait recueillies après infection, qui sont principalement composées deneutrophiles, les cellules dendritiques, comme cellules présentatrices d’antigène et les cellules épithéliales mammaires, première barrière de défense et qui sont les plus nombreuses sur le site de l’infection. Nous avons montré que la migration des cellules immunitaires et les processus inflammatoires se traduisent par des activations de voies différentes chez les brebis des deux lignées divergentes. Nous avons aussi identifié des gènes fonctionnels candidats (ahr, tp53, sc5 et tmem87b) pour expliquer la différence de sensibilité aux mammites. En parallèle, nous avons étudié l’association entre le polymorphisme de l’ADN et la présence d’abcès mammaires liés aux mammites dans un dispositif cas-contrôle visant à détecter des gènes à effet majeur. Les études ont permis de mettre en évidence une zone chromosomique d’intérêt située sur le chromosome OAR5. Les deux approches de génétique moléculaire menées dans ces études, à la fois l’analyse du transcriptome et celle du polymorphisme du génome, ont permis d’identifier desgènes fonctionnels et positionnels candidats pour comprendre les mécanismes associés à la résistance aux mammites.

Analise immunoproteomica de staphylococcus aureus causador da mastite ovina revela polipepideos diferencialmente reconhecidos por soros de animais infectados e portadores. 26 . Congresso Brasileiro de Microbiologia

Cette publication est également parue dans la revue "Journal of Animal Science", Vol.89, E-Suppl.1.; Staphylococcus aureus is a major cause of mastitis in ruminants. In ewe mastitis, symptoms range from subclinical to gangrenous mastitis. S. aureus factors or host-factors contributing to the different outcomes are not completely elucidated. In this study, experimental mastitis was induced on primiparous ewes using two S. aureus strains, isolated from gangrenous (strain O11) or subclinical (strain O46) mastitis. Strains induced drastically distinct clinical symptoms when tested in ewe and mice experimental mastitis. Notably, they reproduced mild (O46) or severe (O11) mastitis in ewes. Ewe sera were used to identify staphylococcal immunoreactive proteins commonly or differentially produced during infections of variable severity and to define core and accessory seroproteomes. Such SERological Proteome Analysis (SERPA) allowed the identification of 89 immunoreactive proteins, of which only 52 (58.4%) were previously identified as immunogenic proteins in other staphylococcal infections. Among the 89 proteins identified, 74 appear to constitute the core seroproteome. Among the 15 remaining proteins defining the accessory seroproteome, 12 were specific for strain O11, 3 were specific for O46. Distribution of one protein specific for each mastitis severity was investigated in ten other strains isolated from subclinical or clinical mastitis. We report here for the first time the identification of staphylococcal immunogenic proteins common or specific to S. aureus strains responsible for mild or severe mastitis. These findings open avenues in S. aureus mastitis studies as some of these proteins, expressed in vivo, are likely to account for the success of S. aureus as a pathogen of the ruminant mammary gland.

Ce guide propose une méthode qui est le fruit de l'expertise commune de zootechniciens et vétérinaires de différents organismes de recherche et/ou développement. L'objectif est de fournir des outils pour la gestion de la santé mammaire du troupeau en structurant et facilitant la conduite de l'intervention avec deux lignes directrices : associer et impliquer l'éleveur, et procéder selon une démarche structurée. L'implication de l'éleveur est favorisé par sa propre auto-évaluation de la situation et par une approche économique réalisée avec le logiciel "Economie des plans de maitrises des mammites et des boiteries" qui permet une évaluation économique de la situation initiale du troupeau vis à vis des mammites et la réalisation d'une analyse coûts-bénéfices du plan de maîtrise proposé, avec prise en compte du coût des mesures correctives proposées et des gains attendus de leur mise en oeuvre. La démarche d'intervention est structurée en 4 phases successives : - Positionnement de l'élevage par rapport à différents profils-types d'épidémiologie des infections intramammaires dans les troupeaux ; - sur la base de ce positionnement, investigation orientée des facteurs de risque pouvant être en cause de l'exploitation ; - détermination des actions permettant de réduire les facteurs identifiés et hiérarchisation de celles-ci ; - suivi de la mise en place des mesures retenues et de l'évolution de la santé mammaire du troupeau dans les mois qui suivent l'intervention.