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Dissertação de Mestrado em Antropologia Forense apresentada à Faculdade de Ciências e Tecnologia Um dos problemas enfrentados pelo Brasil em relação à segurança pública é a alta taxa de criminalidade, especialmente os homicídios e a baixa resolução desses casos. Um dos motivos apontados é o baixo número de profissionais nos Institutos Médico-Legais e Centros de Perícias, principalmente para a análise de cadáveres que não são mais passíveis de identificação pelos métodos primários (genética, datiloscopia e odontologia). Além disso, as lacunas de informação sobre processos de decomposição cadavérica também dificultam a resolução de muitos casos. A Antropologia Forense oferece instrumentos fundamentais para a resolução desses casos mais complexos, porém, há necessidade de uma parceria entre os profissionais e pesquisadores das áreas que envolvem a perícia para a realização e desenvolvimento de métodos e protocolos a serem utilizados, sendo a realização de experimentação controlada importante para o conhecimento de parâmetros específicos, como o tempo de decomposição cadavérica em diferentes ambientes. O objetivo do presente estudo foi conduzir um experimento para analisar, e posteriormente descrever o processo de decomposição cadavérica na região norte do Brasil, para desenvolver uma estimativa de Intervalo Post Mortem (PMI), analisando a decomposição cadavérica e a fauna entomológica forense específicas da região. Foram utilizados na pesquisa modelos suínos da espécie Sus scrofa domesticus que foram monitorados diariamente durante as fases da decomposição até à esqueletização. One of the problems faced by Brazil in relation to public security is the high crime rate, especially homicides, and the low resolution of these cases. One of the reasons mentioned is the low number of professionals in the Forensic Institutes and Centers of Expertise, mainly for the analysis of corpses that are no longer possible to identify by primary methods (genetics, fingerprints and dentistry). In addition, information gaps on cadaveric decomposition processes also make it difficult to solve many cases. Forensic Anthropology offers fundamental tools for solving those more complex cases, however, there is a need for a partnership between professionals and researchers in areas that involve expertise to carry out and develop methods and protocols to be used, with experimentation being carried out under controlled important for the knowledge of specific parameters, such as the time of cadaveric decomposition in different environments. The aim of the present study was to conduct an experiment to analyze, and later describe, the cadaveric decomposition process in the northern region of Brazil, to develop a Post Mortem Interval (PMI) estimate, analyzing cadaveric decomposition and forensic entomological fauna specific to the region. Porcine models of the species Sus scrofa domesticus were used in the research, which were monitored daily during the phases of decomposition until skeletonization. v

Se identificó la entomofauna de interés forense y su utilidad para estimar el Intervalo Post Mortem (IPM), además de establecer la sucesión de la entomofauna, su relación con el proceso de descomposición y el papel de la vestimenta como factor que favorece la proliferación de la entomofauna asociada a carcasas de cerdo doméstico (Sus scrofa Linnaeus, 1758) vestido y no vestido. Se sacrificaron dos cerdos in situ (uno con vestimenta) que fueron colocados por separado en jaulas de exclusión. Se realizaron muestreos durante 60 días y se registró diariamente la temperatura y humedad ambiental. Los estados inmaduros (huevos, larvas y pupas) recolectados en los cadáveres, fueron separados en dos grupos; el primero fue sacrificado y, el segundo grupo fue conservado en cámaras de desarrollo post embrionario. Los adultos sacrificados fueron montados en alfileres entomológicos para su evaluación y determinación taxonómica. Se identificaron trece especies de insectos importantes para estimar el IPM pertenecientes a los órdenes Diptera: Chrysomya albiceps (Wiedemann, 1819) (Calliphoridae), Chrysomya megacephala (Fabricius, 1794) (Calliphoridae), Cochliomyia macellaria (Fabricius, 1775) (Calliphoridae), Synthesiomyia nudiseta (van Der Wulp, 1883) (Muscidae), Musca domestica (Linnaeus, 1758) (Muscidae), Sarcophagidae sp., Euxesta sp. (Ulidiidae), Notogramma sp. (Ulidiidae), Dermestes maculatus (DeGeer, 1774) (Dermestidae), Necrobia rufipes (DeGeer, 1775) (Cleridae), Euspilotus sp. 1, sp. 2 y sp. 3 (Histeridae). Finalmente se demostró que la vestimenta favorece la proliferación del orden Diptera.

Dissertação de Mestrado em Química Forense apresentada à Faculdade de Ciências e Tecnologia The estimation of the post mortem interval is an important task in a medico-legal investigation. This determination is crucial in homicide cases, since it can lead to the identification or elimination of a suspect. The conventional methods that are used for determining time since death are mostly based on physical changes and decomposition artefacts of the corpses. These changes are extremely affected by both internal and external conditions and thus the chance of producing erroneous results is high. However, death also results in metabolic changes in the tissues of the deceased. The study of these changes could lead to the identification of new biomarkers for a more accurate estimation of the post mortem interval. In the present study, liver samples of twenty mice (Mus musculus), ten males and ten females, were collected immediately after death and 2, 6, 24, 48 and 72 hours after death. The aim was to analyse the metabolic changes by HR-MAS NMR spectroscopy and identifying potential post mortem interval biomarkers. Six NMR spectra were obtained per mouse liver, one per each time of sample collection, as such, a large amount of data was obtained. All spectral data were processed and subjected to a multivariate statistical analysis.The results of principal component analysis (PCA) allowed to verify significant differences between the metabolic profiles of samples collected at 0, 6, 24 and 48 hours after death in both sexes. It was possible to observe changes of lipids, lactate and glucose. From the analysis of the spectra, was possible to identify an increase in lactate and glucose levels over time, after death, exposing these metabolites as potential post mortem biomarkers. The presented results showed that a metabolic analysis of biological tissues by HR-MAS NMR spectroscopy is a potential valid approach for a more precisely estimation of post mortem interval. A determinação do intervalo post mortem é um dos aspetos mais importantes numa investigação médico legal, tendo maior relevância em casos de homicídio, visto que possibilita a identificação ou eliminação de suspeitos. Os métodos convencionais para a determinação do tempo após a morte baseiam-se, maioritariamente, nas alterações físicas e nos fenómenos de decomposição do cadáver. Estes são bastante afetados tanto pelas condições internas como externas, o que faz com que a probabilidade de ocorrerem erros na estimativa do intervalo post mortem seja muito elevada. No entanto, a morte resulta também em alterações metabólicas nos tecidos do cadáver. O estudo destas alterações poderá levar à identificação de novos biomarcadores para uma estimativa mais precisa da hora da morte. No presente estudo, foram recolhidas amostras de fígado de 20 murganhos, 10 machos e 10 fêmeas, da espécie Mus Musculus, imediatamente após a morte e 2, 6, 24, 48 e 72 horas depois, com o objetivo de analisar as alterações metabólicas e identificar possíveis biomarcardores úteis na determinação do intervalo post mortem, usando HR-MAS NMR. Foram obtidos 6 espectros de RMN por fígado de murganho, um por cada tempo de recolha de amostra, tendo-se obtido uma grande quantidade de dados, os quais foram todos processados e submetidos a uma análise estatística multivariada. Os resultados da Análise de Componentes Principais (PCA) permitiram verificar diferenças significativas entre os perfis metabólicos relativos a amostras recolhidas 0, 6, 24 e 48 horas após a morte nos dois sexos, tendo-se observado alterações a nível dos lípidos, do lactato e da glucose. A partir da análise dos espectros, observou-se um aumento da concentração do lactato e glucose com o tempo após a morte, indicando, assim, que estes metabolitos apresentam ser biomarcadores post mortem promissores. Estes resultados mostraram que uma análise metabolómica de tecidos biológicos através de espectroscopia de HR-MAS NMR é uma abordagem promissora para a determinação do intervalo post mortem de um modo mais preciso.

El tiempo que un cadáver requiere para igualar su temperatura con la temperatura ambiental se conoce como "Intervalo Post Mórtem Temprano" y durante este período, el algor mortis es un elemento de utilidad y de uso rutinario en medicina forense humana para estimar el Intervalo Post Mórtem (IPM). En humanos se acepta que el IPM temprano es de 24 horas en promedio, pero en animales carecemos de información que permita utilizar el algor mortis para estimar el IPM. De esta forma, en este estudio se utilizaron 50 cadáveres de rata de laboratorio a los cuales se les midió la temperatura intraesofágica profunda en forma continua y la temperatura ambiental. Los resultados muestran que, en promedio, el IPM temprano fue de 11 horas con 14 minutos, con una variación entre 8 horas con 32 minutos y 17 horas con 7 minutos. También se obtuvo una ecuación para estimar el IPM en ratas, con residuos mínimos. Éste es el primer estudio experimental dirigido a obtener parámetros con los cuales estimar el post mórtem a partir del algor mortis en animales.

O Intervalo post mortem (PMI) representa o período de tempo decorrido entre a morte e a altura em que o cadáver é encontrado. A determinação precisa do PMI é uma das informações mais importantes na altura da autópsia, sendo crucial para a investigação criminal, civil e forense. Apesar da variadíssima literatura acerca deste assunto, a determinação precisa do PMI ainda apresenta muitas dificuldades, mesmo para patologistas experientes. Atualmente, existem múltiplas técnicas para determinar o PMI que englobam métodos de várias áreas das ciências forenses. Os patologistas forenses avaliam normalmente processos físicos (temperatura corporal, livor mortis), físico-químicos (rigor mortis), bioquímicos (concentração de eletrólitos, atividade enzimática), microbiológicos (decomposição) e entomológicos. No entanto, todos estes métodos são imprecisos no cálculo do PMI, dando-nos na melhor das hipóteses uma estimativa, que só deverá ser aceite após a consideração de todos os fatores que possam influenciar os resultados. Idealmente, para determinar de forma precisa o PMI, será necessário um parâmetro que altere constantemente, o qual se possa correlacionar com o tempo da morte. A degradação post mortem dos ácidos nucleicos parece ter esta característica. Com os avanços da biologia molecular, a análise da degradação ao longo do tempo dos ácidos nucleicos (DNA e RNA) tem desempenhado um papel fundamental na medicina, assim como nas ciências forenses. Neste contexto, o potencial do RNA nas ciências forenses tem sido estudado com vários objetivos, como a identificação de fluidos corporais, a determinação do tempo das amostras biológicas através da análise da degradação do RNA e a determinação do PMI. A estimativa do PMI, baseada somente na degradação do mRNA, pode ser limitada por vários fatores físicos e químicos que ocorrem no momento na morte ou durante o PMI. Por outro lado, o perfil do microRNA (miRNA) oferece grandes vantagens quando comparado com o mRNA. Estas pequenas sequências de RNA não codificante têm demostrado uma maior estabilidade e são muito mais sensíveis e específicas do que todos os métodos usados em ciências forenses para a quantificação de mRNA. Contudo, o seu potencial na estimativa do PMI é, até agora, desconhecido. Este trabalho teve como objetivo caracterizar a degradação do RNA e do miRNA em diferentes matrizes biológicas, assim como desenvolver um modelo matemático que possa ser usado como método auxiliar para uma determinação mais x precisa do PMI. Foi proposta uma avaliação combinada da degradação do mRNA e do miRNA, o que poderá trazer grandes vantagens em relação aos métodos atuais, uma vez que não existe um método fiável e preciso para estimar o PMI. Foi realizada uma cinética de 11 horas, com um “checkpoint” a cada hora para análise do RNA total extraído do coração, musculo esquelético, fígado e pâncreas de um modelo murino. O perfil de degradação do RNA total foi avaliado no RNA electrophoresis (ExperionTM Bio-Rad), através do indicador da qualidade do RNA (RQI). A transcrição de vários genes referência (Tropomiosina, Albumina, Beta-Actina, GAPDH, 18S rRNA, HPRT, Ciclofilina, BHMT, MLCK, SRP72, Cyp2E1 e RPS29) foi analisada através de PCR quantitativo em tempo real e expressa pelos valores de threshold cycle (Ct). Para diminuir possíveis erros, todos os resultados foram normalizados relativamente aos valores de Ct do gene RPS29. A análise quantitativa da transcrição nestes órgãos permitiu a identificação de genes que se correlacionam com o PMI de forma específica em cada órgão. Exceto a Tropomiosina e a Cyp2E1, todos os genes demonstraram uma degradação gradual com o tempo no músculo-esquelético, enquanto no coração não foi encontrada qualquer correlação significativa. Além disso, a Albumina, o GAPDH e a Cyp2E1 foram identificados no fígado como tendo a melhor correlação (p