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Šećerna bolest, kronična progresivna metabolička bolest, globalni je javnozdravstveni problem. U pojedinaca čije razine glukoze u plazmi ne zadovoljavaju dijagnostičke kriterije za šećernu bolest, a previsoke su da bi se smatrale urednim nalazom postoji stanje koje nazivamo predijabetes. Budući da je predijabetes reverzibilno stanje, u kojem se još uvijek može spriječiti razvoj šećerne bolesti, cilj je mnogih znanstvenika odrediti točku u kojoj stanje predijabetesa prelazi u šećernu bolest. Znanstvenici su prepoznali infekcije kao jedan od potencijalnih rizičnih čimbenika za razvoj šećerne bolesti tipa 2, odnosno kao ‘događaj’ koji pretvara stanje predijabetesa u šećernu bolest. Virusna infekcija dovodi do smanjenja osjetljivosti na inzulin, koji gušterača ne može kompenzirati povećanjem lučenja inzulina, što dovodi do hiperglikemije i naglog nastupa šećerne bolesti u bolesnika s predijabetesom. Ako bi ova saznanja bila ponovljiva u humanim studijama većega opsega, ovo bi zapažanje moglo utjecati na način kako liječnici pružaju zdravstvenu skrb bolesnicima s predijabetesom i s virusnim infekcijama. Virusne infekcije uobičajeno ne zahtijevaju liječenje, no klinički pristup zasigurno bi se promijenio ako bi se time mogao spriječiti njihov utjecaj na toleranciju glukoze. Iako je šećerna bolest značajan zdravstveni problem, tek nam je aktualna pandemija uzrokovana koronavirusom identificiranim 2019. godine otkrila koliko, zapravo, malo znamo o imunološkim mehanizmima infekcije u bolesnika sa šećernom bolesti. Sada postajemo svjesni koliko je važno istraživati mehanizme, koji objašnjavaju imunoendokrinološke odnose, i usmjeriti znanstvene napore upravo u polje imunometabolizma kako bismo dobili što više informacija koje bi nam pomogle u svakodnevnoj skrbi bolesnika sa šećernom bolesti., Diabetes mellitus, chronic progressive metabolic disorder, is a global public-health problem. In individuals whose glucose levels do not reach diagnostic criteria for diabetes mellitus but are too high to be considered normal, there is a condition called prediabetes. Since prediabetes is a reversible condition, in which the development of diabetes mellitus can be prevented, many investigators aim to determine the point at which prediabetes shifts to diabetes. Scientists recognized infection as one of the potential risk factors for the development of diabetes mellitus type 2, more precisely as an ‘event’ that derails glycemic control from prediabetes to diabetes. The viral infection leads to decreased insulin sensitivity, which cannot be compensated by insulin production in the pancreas resulting in hyperglycemia and abrupt onset of diabetes in patients with prediabetes. If these findings were replicable in large-scale human studies, this observation could impact the way clinicians would provide healthcare to patients with prediabetes and viral infection. Viral infections usually do not require treatment, but the clinical approach would change if their impact on glucose tolerance could be prevented. Even though diabetes mellitus is a significant health issue, only current coronavirus disease 2019 pandemic has unfolded how little we know about the immunological mechanisms in patients with diabetes mellitus. We are now becoming aware of how important it is to investigate mechanisms, that elucidate immunoendocrinologic interactions, and to direct scientific efforts particularly in the field of immunometabolism to obtain as many information as possible, that would help us in the daily care of patients with diabetes mellitus.

Uvod: Vulgarna psorijaza je kronična bolest kože posredovana združenim djelovanjem rizičnih okolišnih čimbenika i nekontroliranog imunološkog odgovora na nepoznate antigene. Velik udio upalnog leukocitnog infiltrata čine CD8+ citotoksični limfociti T koji lučenjem IL- 17/IFN-γ/TNF-α potiču razvoj upalnog mikrookoliša u koži, proliferaciju i dediferencijaciju keratinocita i posljedični razvoj ljuskavih plakova. Cilj istraživanja: Analizirati i usporediti brojnost CD3+CD8+ limfocita T u oboljelih i zdravih ispitanika te ustanoviti povezanost njihove promjene s demografskim i kliničkim obilježjima psorijaze. Materijali i metode: Istraživanjem su obuhvaćeni uzorci periferne krvi 22 zdrava (CTRL) i 21 oboljelog (PV) ispitanika. Periferni leukociti izolirani su centrifugiranjem u gradijentu Lymphoprep™ medija. Mrtve stanice isključene su primjenom boje za određivanje vijabilnosti stanica („LIVE/DEAD™ Fixable Dead Cell Stain Kits“), a imunofenotipizacija CD3+CD8+ stanica provedena protočnom citometrijom (BD FACS Canto II) nakon obilježavanja s anti-human CD3 FITC i CD8 PerCP monoklonalnim protutijelima. FlowLogic računalni program korišten je za obradu podataka. Rezultati: U odnosu na kontrolne ispitanike, oboljeli od PV pokazuju značajno smanjene udjele CD3+CD8+ limfocita T u perifernoj krvi, čiji su udjeli značajno veći u CMV seropozitivnih nego CMV seronegativnih ispitanika. Zaključak: U odnosu na zdrave ispitanike, PV oboljeli imaju značajno snižene udjele CD3+CD8+ limfocita T u perifernoj krvi, na čiju brojnost, značajno utječu prethodne CMV infekcije.

Submitted by Vitor Silverio Rodrigues (vitorsrodrigues@reitoria.unesp.br) on 2014-05-27T11:22:43Z No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2014-05-27T14:46:05Z : No. of bitstreams: 1 2-s2.0-41349090370.pdf: 92713 bytes, checksum: 8bc39c91630ea03f820ce9a2c362be9f (MD5) Made available in DSpace on 2014-05-27T11:22:43Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-12-01 O objetivo do presente estudo foi comparar a produção de IFN-γ, IL-12 e IL-4 entre camundongos jovens (5, 12 e 19 dias de idade) e adultos (30 dias de idade). As avaliações foram feitas por estimulação, in vitro, de células esplênicas com Concanavalina A (ConA) , Staphylococcus aureus (S. aureus) e lipopolissacarídeo (LPS). Diferentes concentrações de cada estímulo foram testadas e os sobrenadantes das culturas foram coletados após 48 horas de incubação e as concentrações de IFN-γ, IL-12 e IL-4 determinadas por ELISA. Células de camundongos jovens e adultos produziram níveis igualmente elevados de IFN-γ após estímulo com ConA. Somente animais adultos produziram IFN-γ em resposta ao estímulo com S. aureus. Em culturas estimuladas com LPS, a produção desta citocina foi baixa e similar nos animais jovens e significativamente elevada nos animais adultos. Somente células de animais adultos estimuladas com S. aureus foram capazes de produzir IL-12. O único estímulo capaz de induzir níveis detectáveis de IL-4 foi ConA, sendo que estes níveis foram mais elevados nos animais com 12 e 19 dias de idade em comparação com animais neonatos e adultos. A diminuição das doses ótimas dos estímulos não mudou o perfil de produção de cada citocina nos animais jovens. Estes resultados permitem concluir que a idade afeta a produção de citocinas: ocorre maior produção de IL-4 em camundongos jovens e maior produção de IL-12 e IFN-γ em animais adultos. Estas informações são importantes devido ao papel destas citocinas na polarização das respostas imunes nos sentidos Th1 e Th2. Palavras-chave: camundongo; citocina; interferon-gama; interleucina-4; interleucina-12. In this paper we compare cytokine production (IFN-γ, IL-12 and IL-4) by young (5, 12 and 19 days old) and adult (30 days old) BALB/c mice. Cultures of spleen cells isolated from these mice were stimulated with Concanavalin A (ConA), Staphylococcus aureus (S. aureus) and lipopolysaccharide (LPS); three different doses of each stimulus being tested. Culture supernatants were collected 48 h later and cytokine concentrations determined by ELISA. ConA induced similarly high IFN-γ levels in cultures derived from both young and adult mice, but only adult animal cells produced IFN-γ after stimulation with S. aureus. On the other hand, LPS stimulation significantly raised IFN-γ production in adults, while this cytokine remained at a low level in young mice. IL-12 production was induced only by S. aureus and only in adult cells. IL-4 production was only observed in ConA-stimulated cultures, where its levels were similarly low in cells from 5- and 30-day-old mice but significantly higher in 12- and 19-day-old animal cultures. Addition of a smaller dose of each stimulus did not change the profile of cytokine production. We conclude from these results that cytokine production was affected by age: higher IL-4 production was observed in cells from young mice whereas higher IFN-γ and IL-12 production was associated with adult animals. This information is highly relevant in that these cytokines are directly involved in Th1 / Th2 polarization. Departamento de Microbiologia e Imunologia Instituto de Biociências Universidade Estadual Paulista, UNESP, Botucatu, SP Departamento de Microbiologia e Imunologia Instituto de Biociências Universidade Estadual Paulista, UNESP, Distrito de Rubiào Júnior s/n, CEP: 18618-000 - Botucatu - SP Departamento de Microbiologia e Imunologia Instituto de Biociências Universidade Estadual Paulista, UNESP, Botucatu, SP Departamento de Microbiologia e Imunologia Instituto de Biociências Universidade Estadual Paulista, UNESP, Distrito de Rubiào Júnior s/n, CEP: 18618-000 - Botucatu - SP

O objetivo do presente estudo foi comparar a produção de IFN-γ, IL-12 e IL-4 entre camundongos jovens (5, 12 e 19 dias de idade) e adultos (30 dias de idade). As avaliações foram feitas por estimulação, in vitro, de células esplênicas com Concanavalina A (ConA) , Staphylococcus aureus (S. aureus) e lipopolissacarídeo (LPS). Diferentes concentrações de cada estímulo foram testadas e os sobrenadantes das culturas foram coletados após 48 horas de incubação e as concentrações de IFN-γ, IL-12 e IL-4 determinadas por ELISA. Células de camundongos jovens e adultos produziram níveis igualmente elevados de IFN-γ após estímulo com ConA. Somente animais adultos produziram IFN-γ em resposta ao estímulo com S. aureus. Em culturas estimuladas com LPS, a produção desta citocina foi baixa e similar nos animais jovens e significativamente elevada nos animais adultos. Somente células de animais adultos estimuladas com S. aureus foram capazes de produzir IL-12. O único estímulo capaz de induzir níveis detectáveis de IL-4 foi ConA, sendo que estes níveis foram mais elevados nos animais com 12 e 19 dias de idade em comparação com animais neonatos e adultos. A diminuição das doses ótimas dos estímulos não mudou o perfil de produção de cada citocina nos animais jovens. Estes resultados permitem concluir que a idade afeta a produção de citocinas: ocorre maior produção de IL-4 em camundongos jovens e maior produção de IL-12 e IFN-γ em animais adultos. Estas informações são importantes devido ao papel destas citocinas na polarização das respostas imunes nos sentidos Th1 e Th2. Palavras-chave: camundongo; citocina; interferon-gama; interleucina-4; interleucina-12.

CNPq Introdução: A prevalência de sibilância recorrente no lactente tem aumentado em vários países, e esse resultado não pode ser unicamente explicado por fatores hereditários, pois fatores ambientais têm tido papel importante, influenciando o sistema imunológico em fase inicial da vida. Desequilíbrios no balanço Th1/Th2 e Treg, por fatores externos que alteram a microbiota intestinal, favorecem respostas imunes deficientes ou até exacerbadas frente às várias agressões diárias. Através da ação imunoestimulatória in vitro dos probióticos, estudos começam a direcionar sua aplicação e avaliar os possíveis benefícios que essas bactérias podem promover. Atualmente, vem sendo realizados estudos com o uso de probióticos na prevenção e tratamento das infecções respiratórias, assim como na asma em crianças maiores, mas estudos para avaliar o comportamento dos probióticos em lactentes sibilantes são necessários. Objetivos: Identificar ensaios clínicos randomizados que tiveram como intervenção o uso de probióticos no tratamento das infecções respiratórias na infância; avaliar a ocorrência de sibilância após uso de probióticos como adjuvante no tratamento do lactente sibilante e a expressão das citocinas IL-10, IL-12 e INF-γ in vitro. Métodos: Para o primeiro objetivo específico realizamos uma revisão sistemática com ensaios clínicos randomizados que foram identificados em quatro bases de dados eletrônicas, avaliando o uso de probióticos na redução dos sintomas, na redução da duração da doença e redução de novos episódios de infecções respiratórias superior e inferior em crianças. Para o segundo objetivo específico, realizamos um ensaio clínico randomizado, duplo-cego, paralelo, placebo-controlado em 60 lactentes sibilantes recorrentes, de seis a 24 meses de idade, no período de Abril de 2014 à Abril de 2015. Os lactentes foram randomizados para receberem diariamente uma mistura de probióticos ou placebo, adicionados ao tratamento convencional com esteroide inalatório durante oito semanas. Realizaram exames antes e após intervenção e foram acompanhados por mais oito semanas de seguimento. Resultados: Na revisão sistemática foram analisados 11 ensaios clínicos randomizados que apresentaram grande heterogeneidade em relação às cepas dos probióticos utilizadas, à forma de administração e ao tempo de intervenção. Redução de novos episódios de infecção respiratória foi o desfecho mais identificado em seis ensaios clínicos. No estudo experimental, o uso da mistura de probióticos foi mais propenso em reduzir a ocorrência de sibilância durante o período de intervenção e seguimento em comparação ao grupo placebo, entretanto não houve diferença significativa entre os dois grupos. Houve aumento com significância estatística da citocina IL-10 (P = 0,029) ao estímulo in vitro com Phitohemaglutinina A e da IL-12 aos estímulos com Dermatophagoides pteronyssinus (P = 0,040) e Probióticos (P = 0,032) no grupo que usou probióticos em comparação ao grupo placebo. Conclusão: Redução de novos episódios de infecção respiratória foi o desfecho positivo encontrado com o uso de probióticos nos ensaios clínicos randomizados da revisão sistemática. Probióticos exercem um efeito imunoestimulatório com maior expressão in vitro das citocinas IL-10 e IL-12, mas não houve benefício clínico entre os grupos que receberam a mistura de probióticos em comparação ao placebo. Introduction: The prevalence of recurrent wheezing in infants has increased in several countries, and this result can not be solely explained by hereditary factors as environmental factors have played an important role in influencing the immune system in early life. Imbalances in the Th1 / Th2 and Treg by external factors that alter the intestinal microbiota, favoring immune responses disabled or even exacerbated front of several daily aggressions. Through in vitro immunostimulatory action of probiotics, studies are beginning to direct their application and evaluate the possible benefits that these bacteria can promote. Currently, studies have been conducted with the use of probiotics in the prevention and treatment of respiratory infections, and asthma in older children, but studies to assess the behavior of probiotics in wheezing infants are needed. Objectives: To identify randomized controlled trials that had the intervention the use of probiotics in the treatment of respiratory infections in childhood; to evaluate the occurrence of wheezing after the use of probiotics as an adjunct in the treatment of wheezy infant and expression of IL-10, IL-12 and IFN-γ in vitro. Methodology: For the first specific goal we conducted a systematic review and randomized clinical trials that have been identified in four electronic databases, evaluating the use of probiotics in reducing symptoms, reducing disease duration and reduced new episodes of upper respiratory infections and lower in children. For the second specific goal, we conducted a randomized, double-blind, parallel, placebo-controlled study in 60 recurrent wheezing infants six to 24 months, from April 2014 to April 2015. Infants were randomized to receive a daily mixture of probiotic or placebo added to conventional treatment with inhaled steroid for eight weeks. Tests performed before and after intervention and were followed by eight weeks of follow-up. Results: The systematic review analyzed 11 randomized clinical trials that showed diverse with respect to strains of probiotics used, the form of administration and the intervention time. Reduction of new episodes of respiratory infection was the most frequent outcome in six clinical trials. In the experimental study, the use of the mixture of probiotics was more likely to reduce the occurrence of wheezing during the intervention and follow-up compared to the placebo group, however there was no significant difference between the two groups. There was increased with a statistical significance of IL-10 cytokine (P = 0.029) in vitro stimulation with Phitohemaglutinina A and IL-12 to the stimuli to house dust mite (P = 0.040) and Probiotics (P = 0.032) in the group using probiotics in compared to the placebo group. Conclusion: Reduction of new episodes of respiratory infection was the positive outcome found with the use of probiotics in randomized clinical trials systematic review. Probiotics exert an immunostimulatory effect with higher in vitro expression of IL-10 and IL-12 cytokines, but no clinical benefit from the groups receiving the mixture of probiotics compared to placebo.

O diagnóstico presuntivo da tuberculose bovina é baseado na análise da resposta imune celular a antígenos micobacterianos. Procedeu-se à simulação experimental de sensibilização por Mycobacterium bovis e Mycobacterium avium inativados em bovinos a fim de acompanhar a resposta imune a partir do teste cervical comparativo e da evolução da produção específica de interferon-gama, além de identificar a interferência de reações inespecíficas por M. avium nos resultados dos testes. Verificou-se que os animais desencadearam resposta de hipersensibilidade tardia contra os bacilos inativados, e que ambos os testes diagnósticos da tuberculose bovina foram eficientes na identificação dos animais sensibilizados com M. bovis e na discriminação das reações geradas pela inoculação dos bovinos com M. avium. The presumptive diagnosis of bovine tuberculosis is based on analysis of the immune response to micobacterial antigens. This experimental simulation of sensibilization by Mycobacterium bovis and Mycobacterium avium in cattle aimed to verify the immune response by both the cervical comparative test and the evolution of the specific production of gamma-interferon, and also to identify interference of unspecified reactions by M. avium on the test results. The results support that the experimental animals started a response of delayed hypersensitivity to the inactivated bacilli, and that both diagnostic tests for bovine tuberculosis were efficient for the identification of animals sensitized with M. bovis and for discrimination of reactions generated by inoculation of cattle with M. avium.

Introducción: el tratamiento con metadona constituye el estándar de manejo de adictos a heroína. Durante la rehabilitación los pacientes mejoran su estado de salud y parecen volverse inmunocompetentes; hecho atribuido al abandono de prácticas de riesgo, mejor nutrición y suspensión de la heroína, cuyo efecto inmunodepresor es conocido. Pero como la metadona es también antagonista del glutamato, podría tener actividad inmunoestimulante adicional. Objetivo: comparar niveles séricos de las citoquinas FNT-a, IFN-y e IL-10, entre adictos a heroína en consumo activo (CA=32), adictos tratados con metadona (Met=20) y controles sanos sin historia de adicción (Cont=20). Materiales y métodos: participaron 72 individuos de ambos sexos, mayores de edad, con pruebas serológicas para VIH/SIDA, hepatitis B y C negativas, que no utilizaran fármacos con efectos sobre el sistema inmune. Resultados: no hubo diferencias entre los grupos respecto a género (91,7% hombres), edad (25,2 ± 8 años) y tiempo de abuso de heroína (5,3 ± 2,9 años). Todos los adictos reportaron consumo de otras drogas ilícitas: 96% marihuana, 79% cocaína/basuco y 52% otros psicoactivos. Ningún individuo del grupo Met seguía consumiendo cocaína/basuco, pero la mayoría continuaba el consumo de marihuana. Se encontraron diferencias significativas en los niveles de FNT-a (p=0,0004), IFN-y (p=0,014) e IL-10 (p=0,0001) entre los tres grupos estudiados; esta diferencia se conserva para las tres citoquinas cuando se comparan adictos con no adictos. Conclusión: se encontró un patrón de producción de citoquinas séricas diferencial entre adictos y no adictos, pero no fue posible determinar un patrón de respuesta inmune inducido por metadona. Introduction: methadone constitutes the standard therapy for the management of heroin addiction. During the rehabilitation, patients improve their health status and seem to become immunocompetent, a fact attributed to the decrease in risk practices, better nutrition and the cessation of heroin consumption, whose immunosuppressive effects are known. However, since methadone is also a glutamate antagonist, it might have an additional immunostimulant activity. Aim: to compare serum levels of the cytokines TNF-a, IFN-y and IL-10 between heroin addicts under active consumption (CA=32), addicts under methadone maintenance therapy (Met=20) and healthy controls without history of addiction (Cont=20). Materials and methods: seventy two individuals from both sexes, under 18 years-old, without any recent infection or a positive HIV, hepatitis B or hepatitis C test, were included in the study. None of the subjects were taking drugs with effects on the immune system. Results: there were no differences between the groups in terms of gender (91,7 % men), age (25,2 ± 8 years) and time of heroin abuse (5,3 ± 2,9 years). All the addicts reported the use of other illicit drugs such as marijuana (96%), cocaine/ bazuco (79%) and other psychoactive drugs (52%). In the Met group, none of the individuals reported the use of cocaine/bazuco but most of them kept on consuming marijuana. Significant differences in the TNF-a (p=0.0004), IFN-y (p=0.014) and IL-10 (p=0.0001) levels between the studied groups were found; these differences persist when we compared addicts and control individuals. Conclusion: a differential pattern of cytokine production in the sera of addicts and healthy individuals was found, however, a clear pattern of immune response induced by the methadone treatment could not be determined. Introdução: o tratamento com metadona constitui o padrão no manejo de dependentes de heroína. Durante a reabilitação, os pacientes melhoram seu estado de saúde e parecem se tornar imunecompetentes; o fato é atribuído ao abandono de práticas de risco, melhor nutrição e suspensão da heroína, cujo efeito imunedepres-sor é conhecido. Mas como a metadona é também antagonista do glutamato, poderia ter atividade imune-estimulante adicional. Objetivo: comparar níveis séricos das citocinas FNT-a, IFN-y e IL-10, entre dependentes de consumo ativo da heroína (CA=32), dependentes tratados com metadona (Met=20) e controles de pessoas sãs sem história de dependência (Cont=20). Materiais e métodos: participaram 72 pessoas de ambos os sexos, maiores de idade, com provas serológicas para VIH/SIDA, hepatites B e C negativas, que não utilizaram medicamentos com efeitos sobre o sistema imunológico. Resultados: não houve diferenças entre os grupos a respeito de gênero (91,7% homens), idade (25,2 ± 8 anos) e tempo de abuso de heroína (5,3 ± 2,9 anos). Todos os dependentes empregaram outras drogas ilícitas: 96% - maconha, 79% - cocaína/ crack e 52% - outros psicoativos. Ninguém do grupo Met continuava consumindo cocaína/crack, mas a maioria continuava com maconha. Encontraram-se diferenças significativas nos níveis de FNT-a (p=0,0004), IFN-y (p=0,014) e IL-10 (p=0,0001) entre os três grupos estudados; esta diferença se conserva para as três citocinas quando se comparam dependente e não dependentes. Conclusão: encontrou-se um padrão de produção de citocinas séricas, considerado o diferencial entre dependentes e os que não o são, mas não se achou um padrão de resposta imune-induzido por metadona.

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandar@gmail.com) on 2013-08-13T16:46:26Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_Heidiane Alves dos Santos.pdf: 1654611 bytes, checksum: d1c1496a80a371c6d05868103f946b63 (MD5) Made available in DSpace on 2013-08-13T16:46:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_Heidiane Alves dos Santos.pdf: 1654611 bytes, checksum: d1c1496a80a371c6d05868103f946b63 (MD5) A linfadenite caseosa é uma doença infecto-contagiosa crônica, de ocorrência mundial que acomete pequenos ruminantes, causando grandes perdas econômicas. Esta doença tem como agente etiológico a bactéria Corynebacterium pseudotuberculosis e caracteriza-se pela formação de granulomas em gânglios linfáticos superficiais, podendo também acometer órgãos e linfonodos internos, como forma de resposta do sistema imune do hospedeiro à penetração deste agente que resiste a ação bactericida das células fagóciticas. Este patógeno se relaciona filogeneticamente ao Mycobacterium tuberculosis. A avaliação da resposta imune é uma importante ferramenta para localização de animais possivelmente infectados, dificultando desta forma a disseminação do agente. Estudos têm demonstrado a importância de citocinas na defesa de patógenos intracelulares facultativos, inclusive para C. pseudotuberculosis, destacando-se o interferon-gama (IFN-) citocina característica de células Th1, que pode está envolvida na proteção à patógenos intracelulares. O presente estudo avaliou aspectos da resposta imunológica de camundongos da linhagem C57Black/6 selvagem e knockout para IFN-gama, durante a infecção por Corynebacterium pseudotuberculosis. Os grupos foram acompanhados ao longo de 7 e 14 dias após infecção intraperitoneal com 107 UFC, durante os quais foram avaliados a disseminação bacteriana, a frequência de granulomas, a variação de peso do baço, o padrão de migração celular para a cavidade peritoneal, além da resposta imune humoral através da dosagem de IgG e subclasses e resposta imune celular através da dosagem de citocinas e imunofenotipagem. Os camundongos knockout para IFN-gama se mostraram mais susceptíveis à infecção por Corynebacterium pseudotuberculosis apresentando maior disseminação bacteriana nos linfonodos mesentéricos, maior frequência de granulomas, aumento considerável no peso do baço, intensa migração celular para a cavidade peritoneal, principalmente neutrófilos e macrófagos e expressão de linfócitos T CD8+ nas células esplênicas, e consequentemente menor expressão de citocinas pró-inflamatórias e regulatórias. Estes achados apontam para a importância do IFN-γ na resposta imune a patógenos intracelulares a exemplo de C. pseudotuberculosis, ao tempo em que demonstra a resposta deficiente do sistema imune dos animais nocauteados à infecção. Salvador

Giriş: Kronik granülomatöz hastalık (KGH): Fagositik hücrelerin, bazı bakteri ve mantarları fagosite ettikten sonra öldürememesiyle karakterize heterojen, kalıtsal primer bir immünyetmezlik hastalığıdır. Doğal ve kazanılmış bağışıklık yanıtta rol oynayan interferon-gama (INF-), KGH tedavisinde uzun yıllardır kullanılmasına rağmen etkinliği hala tartışılmaktadır. Gereç ve Yöntem: Çalışmamızda, 14 immünoloji merkezinde KGH tanısıyla takip edilen toplam 57 hastanın demografik verileri, infeksiyöz ve granülomatöz komplikasyonlar gibi klinik bulgularına ait verileri, INF- tedavisi öncesi ve sonrası anket formları üzerinden değerlendirildi. Bulgular: Çalışmaya alınan 57 hastanın 14’ü kadın ve 43’ü erkekti. Yaş ortalaması 10.9 7.4 yıl iken tanı yaşı ortalaması ise 4.9 4.8 yıl olarak saptandı. Hastaların 56’sında akrabalık öyküsü ve 60’ında ise ailede primer immünyetmezlik (PİY) öyküsü vardı. Olguların %95’i trimetoprim-sülfametoksazol (TMP-SMX) ve %89.5’i itrakonazol tedavisi alırken %60’ı INF-? kullanıyordu. INF-? alanlarda, almayanlara göre ciddi infeksiyon, pnömoni, yumuşak doku infeksiyonu ve lenfadenit gibi infeksiyöz komplikasyonların sıklığının daha az olduğu görüldü. Ayrıca, INF-? alanlarda, aspergillozis infeksiyonu, organ apsesi, granülomatöz reaksiyon sıklığının daha az olduğu saptandı. Hastaların KGH alt tiplerine göre yıllık infeksiyöz komplikasyonları karşılaştırıldığında; gp91phox alt tipinde INF-? alan grupta infeksiyon sıklığının daha az olduğu görüldü. Sonuç: KGH’li olguların demografik ve klinik özelliklerini yansıtan çalışmamız göstermiştir ki, KGH’de INF profilaksisi tedavisi, infeksiyöz ve granülomatöz komplikasyon sıklığını azaltmakta ve bu tedavi özellikle gp91phox alt tipinde etkili olmaktadır., Objective: Chronic granulomatous disease (CGD) is a genetically heterogeneous primary immunodeficiency that is characterised by bacteria and fungal infections with defective phagocytosis. Interferongamma (INF-γ) has diverse roles in the innate and adaptive responses. Despite several decades of work on INF treatment in CGD, contraversy remains about its use. Materials and Methods: Fifty seven patients with CGD from 14 immunology centers were enrolled to our multi-center study. A questionnaire including patients demographic datas and clinical manifestations such as infectious and granulomatous complications up to enrolment was obtained before and after INF therapy. Results: Fifty seven patients 14 girls and 34 boys aged from 2-35 years were enrolled. The mean age of diagnosis were of the patient’s family had consanguineous marriage and 60 had a primary immunodeficiency history. Ninety five of the patients were treated with trimethoprim-sulfamethoxazole and 89.5 of them with itraconazol while 60 of them were received INF treatment. The patients receiving INF therapy tend to have lower infectious complications like severe infections, pneumonia, soft tissue infections and lymphadenitis. Aspergillus infection, tissue abcesses and granulomatous complications were also lower in this group. The annual infectious complications according to CGD subtypes, were also lower in gp91phox with receiving INF therapy. Conclusion: The demographic and clinical data of CGD patients in our study indicate that INF prophylaxis treatment decreases the infectious and granulomatous complications in some majority of CGD patients especially in gp91phox.

Made available in DSpace on 2015-04-11T13:54:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 eduardo bentes.pdf: 1682417 bytes, checksum: be32237b0a1e23a7f3225f1419caf484 (MD5) Previous issue date: 2012-05-17 Coordena????o de Aperfei??oamento de Pessoal de N??vel Superior Tuberculosis (TB) is an infectious disease caused by Mycobacterium tuberculosis complex species, which infect the exposed individuals, initiate an immune response with production of several cytokines, among them interferon-gamma (IFN-gamma), which is crucial for activation of cellular immune response against TB bacillus. This cytokine has been extensively studied as a possible biomarker for diagnosis of TB. In this work, we analyzed the levels of IFN-gamma in response to in vitro stimulation with ESAT-6, CFP10 and TB7.7, by QuantiFERON ??-TB Gold (In-tube method) (QTF-IT) in 155 participants: 47 patients confirmed pulmonary TB (patient group), 49 direct contacts (group contact), and 59 individuals without history or contact with TB (control group). The levels of IFN-gamma were different among the groups (p=0.0001); the highest level was observed in the patients group (median=1.43 IU/mL). In contacts group, 20/49 (40.8%) subjects were positive for the QTF-IT (median = 0.26 IU / mL), and among these positive contacts 14/20 (70.0%) exhibited high levels of IFN-gamma, (??? 1.05 IU/mL). The performance testing of TB patients versus controls, resulted in 80.9% sensitivity (95% CI = 69.6% to 92.1%) and 93.2% specificity (95% CI = 86.8 % to 99.6%), but when the results of contacts and control group were combined, the specificity decreased to 77.8% (95% CI = 69.9% to 85.6%). Thus, according to our data, there is a distinctive profile of IFN-gamma, with higher levels in the patients group. The QTF-IT positive in contacts, especially those with high levels of IFN-gamma, should be monitored, especially those with high levels of IFN-gamma. This result may be a risk factor for developing TB disease. In addition, the QTF-IT, properly executed, can be useful in endemic areas for the diagnosis of latent and active TB (infection) when evaluated with other routine tests. A Tuberculose (TB) ?? uma doen??a infecciosa causada por esp??cies do complexo Mycobacterium tuberculosis, que ao infectar os indiv??duos expostos, iniciam uma resposta imunol??gica com produ????o de v??rias citocinas, dentre elas o Interferon-gama (IFN-gama), que ?? crucial para ativa????o da resposta imune celular contra o bacilo da TB. Esta citocina tem sido amplamente estudada como um poss??vel biomarcador para auxiliar no diagn??stico da TB. Neste trabalho foram analisados as concentra????es de IFN-gama em resposta a est??mulos in vitro com ESAT-6, CFP10 e TB7.7, utilizando o QuantiFERON??-TB Gold (In-tube method) (QTF-IT), em 155 participantes, sendo: 47 pacientes com TB pulmonar confirmada (grupo paciente), 49 contatos de pacientes com TB pulmonar (grupo contato), e 59 indiv??duos sem hist??ria e/ou contato com TB (grupo controle). As concentra????es de IFN-gama foram diferentes entre os grupos avaliados (p=0,0001), sendo mais elevado nos pacientes com TB (Mediana = 1.43 UI/mL). Dos contatos diretos, 20/49 (40,8%) foram positivos para o QTF-IT (Mediana=0,26 UI/mL), e destes 14/20 (70,0%) apresentaram n??veis elevados de IFN-gama, superior ?? 1,05 UI/mL. O desempenho do teste relacionando os pacientes de TB como os doentes e os controles como sadios, resultou em 80,9% de sensibilidade (IC 95% = 69,6% a 92,1%) e 93,2% de especificidade (IC 95% = 86,8% a 99,6%), mas quando os resultados dos contatos diretos foram adicionados aos controles, a especificidade reduziu para 77,8% (IC 95% = 69,9% a 85,6%). Concluiu-se que h?? um perfil diferenciado na produ????o de IFN-gama, com n??veis mais elevados nos pacientes de TB ativa, e que os contatos positivos para o QTF-IT, principalmente, aqueles com altas concentra????es de IFN-gama, devem ser monitorados, considerando que o perfil ou concentra????o elevado desta citocina, pode ser um fator de risco para o desenvolvimento da TB doen??a. Al??m disso, o QTF-IT, executado corretamente, pode ser ??til em ??reas end??micas para auxiliar no diagn??stico da TB latente (infec????o) e ativa, quando avaliados com outros exames de rotina.

O ambiente bucal é particularmente favorável à biodegradação de metais devido às suas propriedades iônicas, térmicas, microbiológicas e enzimáticas. Estudos têm demonstrado que íons metálicos podem ser liberados de matérias metálicos como resultado da corrosão. Outros apontam que o Níquel é um componente comum em muitos materiais ortodônticos e uma alergia ao Níquel é comumente observada na população. Juntamente com os testes de citotoxicidade tradicionais, o estudo da produção celular de Óxido Nítrico (NO) estimulado por determinado material é um método capaz de avaliar seu potencial citotóxico. O presente estudo teve como objetivo avaliar pelo método MTT [3-(4,5-dimetil-2-tiazolil)-2,5-difenil tetrazólio brometo] a viabilidade celular de macrófagos murinos J774 na presença de 9 diferentes fios ortodônticos e o estímulo dos fios à produção de NO produzido por estas células. A avaliação das culturas celulares foi realizada em três intervalos de tempo: 24, 48 e 72 horas. A viabilidade celular em todos os grupos foi maior no intervalo de tempo final, que no intervalo de tempo inicial. Este aumento foi significativo no grupo controle. Nos grupos dos materiais, a média final da viabilidade celular no tempo de 72 horas não mostrou diferença significativa quando comparado com o grupo controle. A produção de NO em todos os grupos foi maior no intervalo de tempo final, que no intervalo de tempo inicial. Este aumento foi estatisticamente significativo no grupo controle. Nos grupos dos materiais, a média final da produção de NO apresentou diferença significativa apenas no grupo 8 (beta-Titânio), quando comparado com o grupo controle. Numa segunda etapa do estudo os macrófagos foram ativados com interferon-gama (IFN-) procurando simular uma condição comum no organismo humano no qual estas citocinas são produzidas e liberadas frente à presença de antígenos. As médias da análise da viabilidade celular dos macrófagos murinos ativados com interferon-gama nos grupos dos fios ortodônticos não apresentaram diferença estatisticamente significativa quando comparada com a média das células do grupo controle. As médias da análise da produção de óxido nítrico pelos macrófagos murinos ativados com interferon-gama nos grupos dos fios ortodônticos não apresentaram diferença estatisticamente significativa quando comparada com a média das células do grupo controle. The oral environment is particularly favorable to metal biodegradation due to is ionic, thermal, microbiological, and enzymatic properties. Studies have shown that metal ions may be released from metallic materials as the result of corrosion. Other studies demonstrate that Nickel is a common component in many orthodontic materials and that an allergy to Nickel is commonly observed in the population. In addition to the traditional cytotoxicity tests, the study of nitric oxide cellular production stimulated by a specific material has shown to be a reliable tool for evaluating its cytotoxic potential. The present study was aimed at assessing cellular viability by MTT [3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide] assay in a murine macrophage cell line J774 in the presence of 9 different orthodontics wires and quantify nitric oxide production by these cells. Evaluation of cell culture was undertaken in three time intervals: 24, 48 and 72 hours. The cellular viability in all groups was higher at the final time interval than at the initial time interval. This increase was statistically significant in the control group. In the material groups, the final mean of cellular viability at 72 hours showed no statistically significant difference when compared with the control group. NO production in all groups was higher at the final time interval than at the initial time interval. This increase was statistically significant in the control group. In the material groups, the final mean of NO production at 72 hours was only significant in group 8 (beta-Titanium) when compared with the control group. In a second step of the study, macrophages were activated with gamma interferon (IFN-) in order to stimulate a common condition of the human body in which these cytokines are produced and released with the presence of antigens. The means of the analysis of cell viability of murine macrophages activated with gamma interferon in the groups of orthodontic wires did not show statistically significant difference when compared to the mean of cells in the control group. The means of the analysis of NO production by the murine macrophages activated with gamma interferon in the groups of orthodontic wires did not show statistically significant difference when compared to the mean of cells in the control group.

O líquen plano bucal (LPB) é uma doença inflamatória crônica que acomete a mucosa com uma variedade de manifestações clínicas em cerca de 0,5 a 3% da população adulta, principalmente, em pacientes do sexo feminino. Embora sua etiopatogênese ainda seja desconhecida, vários estudos demonstraram tratar-se de uma doença imunologicamente mediada por uma resposta, predominantemente, do tipo Th1, havendo expressão de elevados níveis da citocina interferon-gama (IFN-). Os microRNAs (miRNAs) são pequenas moléculas de RNA que não codificam proteínas e atuam regulando a expressão de genes na fase pós-transcricional através da degradação ou silenciamento de RNAs mensageiros (mRNAs). O miRNA-146a e miRNA-155 são importantes reguladores da resposta imune. Estudos revelam que estes podem atuar regulando, inclusive, a diferenciação de linfócitos T naive. Desta maneira, objetivo deste estudo foi avaliar o miRNA-146a e miRNA-155 em amostras de LPB em relação a amostras de mucosa normal; além de correlacionar a expressão destes miRNAs aos níveis de IFN- nas amostras LPB. Foram avaliados 31 indivíduos (grupo caso) que apresentavam diagnóstico clínico e histopatológico de LPB e 6 indivíduos voluntários saudáveis (grupo controle ou grupo de comparação). As amostras coletadas foram submetidas ao PCR em Tempo Real quantitativo (qRT-PCR) e parte delas ao teste imunoenzimático (ELISA). Os resultados revelaram uma elevada quantificação do miRNA-146a e do miRNA-155 nas amostras de LPB em relação às amostras de mucosa normal (p=0.0031 e p=0.0120, respectivamente). Não foi observada correlação estatisticamente significativa entre a dosagem de IFN- e a quantificação relativa de ambos os miRNAs avaliados. Desta maneira, os dados deste estudo sugerem uma possível participação do miRNA-146a e do miRNA-155 na patogênese do LPB. Entretanto, estudos futuros são necessários para melhor esclarecer os mecanismos envolvidos na regulação da resposta imune no LPB pelos miRNAs. Além disso, os dados deste estudo também poderão ser úteis no desenvolvimento de ferramentas moleculares que permitam um melhor entendimento da patogênese da doença e tratamentos mais eficazes. Oral lichen planus (OLP) is a chronic inflammatory disease that is Th1-mediated and affects the oral mucosa with a variety of clinical presentations. Interferon-gamma (IFN-) is an important cytokine involved in the regulation of local immune response in OLP. MicroRNAs (miRNAs) are small non-coding RNA molecules whose function is the post-transcriptional regulation of certain subsets of mRNAs. Recently, some studies have demonstrated that miRNAs participate in immune system regulation. Considering that increased IFN- expression is possibly associated with OLP pathogenesis and may be influenced by the action of miRNA-146a and miRNA-155, the purpose of the present study was to investigate the expression of these miRNAs together with its association with IFN- expression in OLP lesions. Quantitative Real-Time polymerase chain reaction (qRT-PCR) was used to verify the relative quantification of miRNA-146a and miRNA-155 in 31 OLP samples and 6 normal mucosa samples. ELISA assay also was performed to determine the IFN- levels in some OLP samples. The results showed that the relative quantification of miRNA-146a and miRNA-155 was higher in OLP than in normal oral mucosa (p = 0.0120 and p = 0.0031, respectively). However, both the miRNAs were not correlated with the IFN- levels. In conclusion, our study brings to light the possibility of miRNA-146a and miRNA-155 involvement in the regulation of the immune response in OLP. Nevertheless, further studies are necessary to establish the functional significance of these findings in OLP development.

OBJETIVOS: Apresentar uma revisão atualizada sobre os novos métodos para o diagnóstico da tuberculose baseados na produção in vitro de interferon-gama (IFN-γ) por células T dos pacientes sob investigação, comparando-os com a tradicional prova tuberculínica. FONTES DOS DADOS: Revisão de literatura utilizando os bancos de dados MEDLINE e LILACS (2000-2008) utilizando as palavras-chave tuberculose, interferon-gama, quantiFERON, ELISPOT e T-SPOT.TB. SÍNTESE DOS DADOS: Esses novos testes mostraram-se, de um modo geral, tão ou mais sensíveis e específicos que a prova tuberculínica, tanto em adultos como em crianças e imunossuprimidos, para o diagnóstico da infecção latente e da doença ativa, apresentando vantagens como a menor interferência da vacinação prévia pelo BCG, menor influência de estados anérgicos e melhor acurácia em crianças menores. Nos Estados Unidos, já estão sendo utilizados em substituição à prova tuberculínica, e apesar dos custos ainda elevados, a Organização Mundial de Saúde vai priorizar a sua viabilidade econômica. CONCLUSÕES: Sempre levando em conta a importância da história clínica e epidemiológica, os novos testes baseados na produção de IFN-γ apresentam resultados promissores e deverão ser considerados na investigação de tuberculose em qualquer paciente, mas especialmente nos grupos de risco, como as crianças e os imunossuprimidos. OBJECTIVES: To present an updated review concerning new assays for diagnosing tuberculosis based on in vitro interferon-gamma production by host T cells, and compare them with tuberculin skin test. SOURCES: A literature review was carried out based on Medline and LILACS databases (2000-2008) searching for the following keywords: tuberculosis, interferon-gamma, quantiFERON, ELISPOT and T-SPOT.TB. SUMMARY OF THE FINDINGS: These new assays proved to have, in general, equal or superior sensitivity and specificity than the tuberculin skin test not only in adults but also in children and immunosuppressed patients for the diagnosis of both latent tuberculosis infection or active disease, with some advantages such as less cross-reactivity as a result of previous BCG vaccination, less influence of anergy and better accuracy in small children. In the United States, these assays have been used instead of the tuberculin skin test and, although still very expensive, the World Health Organization will be making its economic viability a priority. CONCLUSIONS: Always having in mind the importance of clinical and epidemiological histories, these new assays based on interferon-gamma release present promising results and should be considered in tuberculosis investigation procedures for all patients, however with a special concern in the risk groups (i.e., children and immunosuppressed patients).

As infestações por carrapatos em bovinos reduzem a produtividade do gado de corte e leiteiro causando grandes perdas econômicas à pecuária. Os prejuízos acarretam desde debilidade física e transmissão de doenças ao rebanho, como anaplasmose e babesiose, até a morte dos indivíduos mais vulneráveis. Os carrapatos permanecem por longos períodos fixados em seus hospedeiros sendo expostos ao sistema de defesa do bovino, o que provoca inflamação e ativa elementos da resposta imune humoral e celular do hospedeiro. Em contrapartida, componentes imunogênicos da glândula salivar do carrapato modulam a resposta bovina para perfis de citocinas favoráveis à hematofagia. Existem poucos estudos sobre mecanismos imunes que guiam a interação parasito-hospedeiro e determinam o sucesso ou não do parasitismo. Trabalhos recentes apontam para importância de fatores genéticos relacionados à resistência ao carrapato em determinadas raças bovinas, além de estudos que mostram o papel crítico das citocinas na prevenção e progressão de quadros patológicos. O objetivo desse trabalho foi avaliar a resposta imunológica de bovinos infestados artificialmente pelo carrapato Boophilus microplus através de ensaios de proliferação celular e detecção de óxido nítrico (NO) e interferon-gama (IFN-) em células mononucleares do sangue periférico a fim de verificar diferentes níveis de resistência bovina. Seis bovinos mais resistentes e seis mais susceptíveis de uma população F2 de 332 animais, originária do cruzamento de F1 (½ Holandês : ½ Gir), foram selecionados com base na contagem de carrapatos e valor genético. Amostras de sangue foram coletadas nos pontos 0, 5º e 12º dias pós-infestação para cultura de células e estimulação in vitro com antígenos do B. microplus. A proliferação celular e os níveis de NO e IFN- foram avaliados respectivamente pelos métodos de MTT, Griess e ELISA. As células dos animais resistentes (R) tenderam ao aumento de proliferação no 5º dia quando estimuladas com antígenos do carrapato retornando aos níveis iniciais no 12° dia. Já nos animais susceptíveis (S), a estimulação pareceu inibir a proliferação das células no dia 0 e não alterou os índices do 5° e 12° dia. Apesar disso, não houve diferença significativa na proliferação celular entre os grupos R e S. Quando as células obtidas no dia 0 foram cultivadas na ausência de estímulo, os níveis de NO dos animais R tenderam a ser mais altos que dos animais S. A estimulação com antígenos de carrapato pareceu inibir a produção de NO no 5º dia por células de animais R. Também não houve diferença significativa nas produções de NO e de IFN- entre os grupos R e S. Os resultados sugerem que o NO possa ter um papel no início da resposta imune que delineia o mecanismo de resistência ao carrapato, uma vez que as alterações mais importantes foram detectadas até o 5º dia após a infestação. É possível que o mecanismo de resistência esteja associado à regulação negativa da resposta imune a fim de não incitar a modulação desta pelo carrapato, porém sendo eficaz o suficiente para eliminá-lo. A avaliação da resposta imunológica nos primeiros momentos após a fixação do carrapato no couro bovino, bem como um acompanhamento mais detalhado dos pontos temporais da infestação poderia fornecer dados mais conclusivos. Tick infestations in cattle reduce its beef and dairy productivity causing great economic losses to livestock. The potential damages are physical weakness, transmission of diseases to the herd, as anaplasmosis and babesiosis, and even vulnerable animals deaths. Thus, the tick control has been considered priority in tropical regions worldwide. The ticks remain fixed to their hosts for long periods being exposed to the cattle defense system; it causes inflammation and activates the host’s humoral and cellular immune response. Nevertheless, immunogenic components of the salivary gland of cattle tick modulate the response to profiles of cytokines that promote the blood-feeding. There are few studies approaching immune mechanisms that lead to host-parasite interaction and determine the success or unsuccessful of parasitism. Recent works suggest the importance of genetic factors related to the resistance to ticks in Bos taurus and Bos indicus breeds. In addition, studies show the critical role of cytokines in the prevention and progression of diseases. The aimed of this work was to evaluate the immune response in cattle artificially infested by Boophilus microplus through cell proliferation assays and detection of nitric oxide (NO) and interferon-gamma (IFN-) in peripheral blood mononuclear cells, in order to establish different resistance levels in Girolando breed. Six tick-resistant and six tick-susceptible animals from a F2 population of 332 animals originated from crossing cattle F1 (½ Holstein : ½ Gir) were selected based on the ticks counting and breeding value. Blood samples were collected for cell culture and stimulation in vitro with antigens of B. microplus in the points 0, 5 and 12 days after infestation. The cell proliferation and the NO and IFN- levels were evaluated by MTT, Griess and ELISA, respectively. There was a tendency of increasing proliferation of resistant animals (R) cells in the 5th day when they were stimulated with the tick antigens, returning to initial levels at 12th day. In the other hand, for the susceptible animals (S) the stimulation seemed to inhibit proliferation of cells in day 0, and did not altered the rates of 5th and 12th day. There was no significant difference between the cell proliferation of the groups R and S. When the cells obtained in the day 0 were cultured in the absence of stimulation, the levels of NO of animals R tended to be higher than that of the animals S. The stimulation with tick antigens inhibited the NO production by cells of animals R in the 5th day. In addition, there was no significant difference in NO and IFN- production between the groups R and S. The results suggest that NO may play a role in the early immune response that outlines the mechanism of resistance to ticks, since the most important changes were detected until the 5th day after the infestation. It is possible that the resistance mechanism is associated to the downregulation of immune response in order not to encourage the modulation by the ticks, although being effective enough to eliminate it. An evaluation of the immune response in the first moments after the tick fixation to cattle leather, as well as a more detailed monitoring of the temporal points of the infestation, could provide more conclusive data.

Estudos apontam para o fato de os bráquetes cerâmicos serem quimicamente inertes no meio bucal, enquanto os bráquetes de policarbonato podem degradar-se liberando bisfenol-A (BPA) e os bráquetes de polioximetileno, o formaldeído. Juntamente com os testes de citotoxicidade tradicionais, o estudo da produção celular de Óxido Nítrico (NO) estimulado por determinado material é um método capaz de avaliar seu potencial citotóxico. O presente trabalho teve como objetivo avaliar a viabilidade celular (citotoxicidade) destes três grupos de bráquetes sobre cultura celular da linhagem de macrófagos murinos J774 pelo método MTT {3,(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide} e o estímulo dos bráquetes à produção de óxido nítrico pelos macrófagos. A avaliação das culturas celulares foi realizada em três intervalos de tempo: 24, 48 e 72 horas. A viabilidade celular em todos os grupos foi maior no período final da avaliação (72 horas) em relação ao período inicial (24 horas), aumento este significativo nos grupos controle e bráquetes cerâmicos. As médias finais nos grupos de bráquetes não apresentaram diferenças significativas em relação ao controle. A produção de NO foi significativamente maior em todos os grupos no período final em relação ao período inicial. Não houve diferença significativa entre as médias finais dos grupos de bráquetes e do grupo controle, embora os bráquetes de polioximetileno tenham apresentado médias significativamente maiores nos períodos de 24 e 48 horas. Numa segunda etapa do trabalho os macrófagos foram ativados com interferon-gama (IFN-Y) procurando simular uma condição comum no organismo humano no qual estas citocinas são produzidas e liberadas frente à presença de antígenos. A viabilidade celular em todos os grupos foi significativamente maior no período final da avaliação em relação ao período inicial. As médias finais da viabilidade celular nos grupos de bráquetes não apresentaram diferenças significativas em relação ao controle. A produção de NO foi significativamente maior em todos os grupos no período final da avaliação em relação ao período 24 horas. Todavia não houve uma maior produção de óxido nítrico relacionado à presença dos bráquetes associada ao estímulo com Interferon-Y. Studies point to the fact that ceramic brackets are chemically inert to the oral cavity, whereas polycarbonate and polyoxymethylene brackets may degradate releasing bisphenol-A and formaldehyde, respectively. In addition to the traditional cytotoxicity tests, the study of nitric oxide cellular production stimulated by a specific material has shown to be a reliable tool for evaluating its cytotoxic potential. The present study was aimed at assessing cellular viability by MTT {3,(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide} assay in a murine macrophage cell line J774 in the presence of esthetic brackets, and quantify nitric oxide production by these macrophages. Evaluation of cell culture was undertaken in three time intervals: 24, 48, and 72 hours. Cellular viability in all groups was higher at the final time interval (72 hours) in relation to the initial time (24 hours). This increase was significant in the control and ceramic bracket groups. Final means in the bracket groups did not show significant differences when compared to the control group. Nitric oxide production was significantly greater in all groups at the final time interval in relation to the initial time. There was no significant difference between the final means of the bracket groups and the control group, although polyoxymethylene brackets have shown significantly greater means at times 24 and 48 hours. In a second step of the study, macrophages were activated with gamma interferon (IFN-γ) in order to simulate a common condition of the human body in which these citocines are produced and released with the presence of antigens. Cellular viability in all groups was higher at the final time interval (72 hours) in relation to the initial time. Final means in the bracket groups did not show significant differences when compared to the control group. Nitric oxide production was significantly greater in all groups at the final time interval in relation to the initial time. However, there was not an increase of nitric oxide production in relation to the presence of brackets associated with the Interferon-Y stimulus.

Healthcare workers (HCW) are at an increased risk of tuberculosis infection due to their exposure to tuberculous patients. The prevalence of latent tuberculosis infection (LTBI) in HCW from low- and middle-income countries ranges between 33% and 79% and in those from high-income countries from 5% to 55%. Tuberculin skin test (TST) which is used for the detection of LTBI has many disadvantages such as false-negative results in immuno compromised and false positivities due to cross reactions between environmental mycobacteria and bacille Calmette-Guérin (BCG) strains. The new approach in the detection of LTBI is based on ex vivo whole blood tests to determine interferon-gamma (IFN-γ ) released from T lymphocytes upon stimulation with specific antigens to Mycobacterium tuberculosis. The aim of the present study was to compare IFN-γ and TST findings in BCG vaccinated HCW in a middle-income country with an intermediate prevalence of tuberculosis. Fifty-four HCW were divided into groups according to their exposure to tuberculous patients and IFN-γ findings. IFN-γ determination (QuantiFERON-TB Gold In Tube) and TST (RT23) were performed in parallel. Positive IFN-γ results were recorded in 31% of study HCW. The rate of HCW with positive TST results varied in dependence of the cut off value applied (83%, 63% and 35% for the cut off values of 5, 10 and 15 mm, respectively). The two tests showed highest compatibility (74% ; kappa 0.418) at TST cut off value of 15 mm. The higher exposure to tuberculous patients did not lead to a statistically significant increase in the rate of positive IFN-γ findings but did increase the number of hyperreactors. Our data suggest that IFN-γ is the appropriate test when screening a population of BCG vaccinated HCW for LTBI.

Cilj je rada prikazati rezultate određivanja interferona-gama (INF-γ ) otpuštenog iz leukocita (ex vivo) s rezultatima tuberkulinskog testa (in vivo), u svrhu otkrivanja LTBI u djece.

Uvod: Upala je početni odgovor domaćina na ozljedu. Ona nije ograničena samo na mjesto rane, nego izaziva sustavne promjene uključujući raznovrsne fiziološke i biokemijske promjene koje se skupno nazivaju odgovorom akutne faze. Ove se promjene nastavljaju tijekom rješavanja upale i procesa cijeljenja rane. U ovom ispitivanju smo usporedili serumski amiloid A protein (SAA), hematološke parametre (ukupna bijela krvna slika, postotak neutrofila i lim-focita) te koncentracije interferona-gama (IFN-γ) u serumu tijekom cijeljenja neokludirane, ekscizijske kožne rane u punoj debljini kod genetski dijabetičnih db/db miševa i nedijabetičnih C57Bl/6 miševa iz istoga legla. Materijal i metode: Područje rane izazvane „punch" biopsijom (promjera 8 mm) kod svakog je miša analizirano planimetrijski uz računalnu potporu. Trećeg, 6., 9. i 13. dana od ranjavanja SAA i IFN-g mjereni su u plazmi testovima ELISA, a hematološki parametri u punoj krvi na automatskom hematološkom analizatoru Sysmex SF 3000. Rezultati: Šestog i devetog dana jasno je zabilježeno kašnjenje u zatvaranju rane kod db/db miševa u usporedbi sa zdravim miševima. Ukupna bijela krvna slika bila je značajno viša u db/db miševa 9. i 13. dana. Kroz čitavo razdoblje obnove rane, diferencijalni broj neutrofila bio je viši, a broj limfocita niži kod db/db miševa u usporedbi s C57Bl/6 miševima. Vršne koncentracije SAA zabilježene su 3. dana kod C57Bl/6 miševa i db/db miševa (368,7 mg/L odnosno 173,5 mg/L), s težnjom prema nižim vrijednostima kod db/db miševa. Razine IFN-γ bile su značajno više (P < 0,05) 9. i 13. dana kod db/db miševa (75,3 pg/mLodnosno 89,9 pg/mL) u usporedbi s razinama kod C57Bl/6 miševa (66,6 pg/mL odnosno 57,2 pg/mL). Zaljučak: Lokalni proces tkivne regeneracije kod miševa nakon lokalne kožne ozljede uzrokuje sustavne promjene u perifernoj krvi. Niti određivanje koncentracije SAA niti IFN-γ nije se moglo rabiti za motrenje dinamike cijeljenja rane u ovim vremenskim točkama., Introduction: Inflammation is the initial host response to injury. It is not only localized to the wound site but also causes systemic changes, including a variety of physiological and biochemical changes collectively called the acute phase response. These changes continue during the resolution of inflammation and the wound healing process. In this study we compared serum amyloid A protein (SAA), hematological parameters (total white blood cell count, neutrophil and lymphocyte percentage) and interferon-gamma (IFN-γ) concentrations in serum during healing of non-occluded, excisional, full-thickness dermal wounds in genetically diabetic db/db mice and non-diabetic C57Bl/6 littermates. Materials and Methods: Area of a punch biopsy (8 mm in diameter) wound in each mouse was analyzed by computer-assisted planimetry. On days 3,6, 9 and 13 after wounding, SAA and IFN-γ were measured in plasma by ELISA assays and hematological parameters in whole blood by SysmexSF 3000 automatic hematology analyzer. Results: A delay in the closure of wounds in db/db in comparison to normal mice was clearly seen on days 6 and 9. Total white blood cell count was significantly higher on days 9 and 13 in db/db mice. Differential neutrophil counts were higher and lymphocyte counts lower in db/db mice in comparison to C57BL/6 mice throughout the wound repair period. Peak SAA concentrations were seen on day 3 in C57Bl/6 and db/db mice (368.7 mg/L and 173.5 mg/L, respectively), but tended to be lower in db/db mice. IFN-γ levels were significantly higher (P < 0.05) on days 9 and 13 in db/db (75.3 pg/mL and 89.9 pg/mL, respectively) in comparison to those in C57Bl/6 mice (66.6 pg/mL and 57.2 pg/mL, respectively). Conclusion. The local tissue regeneration process in mice after local skin injury causes systemic changes in peripheral blood. Determination of neither SAA nor IFN-γ concentrations could be used to monitor wound healing dynamics at these time points.

Cilj rada: Prema literaturnim podacima u 5-55% zdravstvenih djelatnika koji su često u kontaktu s tuberkuloznim bolesnicima može se pojaviti latentna tuberkulozna infekcija (LTI). Cilj je rada usporediti rezultate određivanja interferona-gama (INF-γ ) otpuštenog iz leukocita (ex vivo) s rezultatima tuberkulinskog testa (in vivo), u svrhu otkrivanja LTI u zdravstvenih djelatnika Dječje bolnice Srebrnjak. Materijal i metode: Ispitanici (N=40) su bili zdravi, BCG cijepljeni zdravstveni djelatnici svrstani u dvije skupine: A) djelatnici koji su tijekom cijelog radnog radnog vremena u izravom kontaktu s tuberkuloznim bolesnicima (N=14) i B) djelatnici s preostalih odjela (N=26), koji su povremeno u kontaktu s tuberkuloznim bolesnicima. Određivanje INF-γ je provedeno komercijalnim testom QuantiFERON-TB Gold In Tube ; nakon inkubacije krvi sa specifičnim antigenima za My. tuberculosis (ESAT-6, CFP10 i TB7.7) uz pozitivnu mitogen kontrolu. Za tuberkulinski test su korištene 2 U PPD (RT23), a veličina induracije očitana je nakon 72 sata. Rezultati: Pozitivan nalaz INF-γ imalo je 12 (30%) djelatnika dok je pozitivan tuberkulinski test (≥ 5 mm) imalo 33 (83%) djelatnika, odnosno 14 (35%) djelatnika su hiperreaktori (≥ 15 mm). Svi djelatnici s pozitivnim nalazom INF-γ imali su pozitivan tuberkulinski test, a njih 8 su hiperreaktori. U skupini A) svi djelatnici su imali pozitivan tuberkulinski test, a 6 (43%) djelatnika imalo je pozitivan INF-γ . U skupini B) tuberkulinski test je pozitivan u 73%, a INF-γ u 23% djelatnika. Zaključci: Određivanjem INF-γ moglo bi se unaprijediti otkrivanje LTI, ali za konačno vrednovanje ove metode potrebno je ispitati veći broj djelatnika, pratiti promjene rezultata kroz određeno razdoblje te dodatno obraditi hiperreaktore.

Davorka treba unijeti tekst.

Citokini, važni međustanični posrednici upalnog odgovora, se nalaze i u oku bolesnika s uveitisom. Enzimskim imunotestom određivana je razina interleukina (IL)-6 i solubilnog receptora za interleukin 6 (sIL-6R) u uzorcima očne vodice i seruma bolesnika s različitim oblicima uveitisa (37 bolesnika, 41 oko), te u 10 kontrolnih ispitanika (senilna mrena). Uzorci s vrlo visokom razinom IL-6 i/ili sIL-6R, dodatno su, istom metodom, testirani na prisustvo čimbenika tumorske nekroze-beta (TNF-beta), interferona gama (IFN-gama) i transformirajućeg čimbenika rasta-beta2 (TGF-beta2). U očnoj vodici bolesnika s uveitisom, nađene su povišene razine IL-6 i s IL-6R, a najviše vrijednosti zabilježene su u skupini bolesnika s egzogenom etiologijom uvetisa (srednja koncentracija = 2186,0, odnosno 3323,0 pg/ml), što vjerojatno potvrđuje da su IL-6 i njegov solubilni receptor posrednici u intraokularnoj upali. Pozitivna korelacija razine sIL-6R i TGF-beta2 u uzorcima oče vodice ukazuje na njihovu međuovisnost u intraokularnoj citokinskoj mreži.

Biokemijski mehanizmi prijenosa signala kojima su posredovani učinci interferona-gama (IFN-gama) na diferencijaciju stanica humane leukemije HL-60 nisu u potpunosti razjašnjeni. Nedavna su istraživanja utvrdila postojanje sfingomijelinskog (SM) kruga koji se aktivira u odgovoru na vezanje IFN-gama u stanicama HL-60, ali nije istražen mehanizam kojim IFN-gama pobuđuje hidrolizu SM. U ovome radu istražuju se rana biokemijska zbivanja koja posreduju učinak IFN-gama na SM pregradnju, te njihova uloga u diferencijaciji stanica HL-60. Izlaganje stanica IFN-gama ne utječe na koncentraciju 1,2-diacilglicerola, unutarstaničnog kalcija i aktivnost fosfolipaze D. IFN-gama pobuđuje rano otpuštanje arahidonske kiseline (AA) iz stanica HL-60, a učinak se poništava prethodnim izlaganjem stanica toksinu pertusisa što upućuje na uključenost G_i-proteina osjetljivog na toksin pertusisa u posredovanju učinaka IFN-gama na aktivaciju fosfolipaze A_2(PLA_2). 4-120 h nakon podraživanja stanica s IFN-gama zamijećen je vjerodostojni porast aktivnosti u membranama i citosolu, te odgovarajući porast količine imunoreaktivnog proteina cPLA_2 u oba stanična odjeljka. IFN-gama rano pobuđuje hidrolizu SM, a najopsežnija hidroliza (približno 30%) zamjećuje se nakon 30 minuta. Melitin, aktivator PLA_2, i AA oponašaju učinke IFN-gama na hidrolizu SM. Prethodno izlaganje stanica bromofenacil-bromidu (BPB), inhibitoru PLA_2, poništava učinak IFN-gama na hidrolizu SM, a učinak se prevladava dodatkom AA. Dugotrajno izlaganje (5 dana) stanica HL-60 IFN-gama uzrokuje porast aktivnosti redukcije NBT i nespecifičnih esteraza (NSE) te povećava izraženost FcgamaRI (CD64) bez vjerodostojnih učinaka na broj stanica, adherenciju ili fagocitnu aktivnost. Inkubacija stanica s AA ili melitinom pobuđuje izraženost CD64, NBT i NSE u istoj mjeri kao i IFN-gama, a kombinacije IFN-gama i AA ili IFN-gama i melitina ne pokazuju dodatnog učinka. Izlaganje stanica indometacinu, inhibitoru ciklo-oksigenaze, i NDGA, inhibitoru lipo-oksigenaze nije imalo vjerodostojnog učinka. Ova istraživanja upućuju na ključnu ulogu PLA_2/AA, kao ranog biokemijskog zbivanja potaknutog zauzećem receptora IFN-gama, u posredovanju učinaka IFN-gama na pobuđivanje SM kruga i fenotipskih promjena prispodobivih diferencijaciji stanica HL-60 ka monocitnoj liniji.