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There are several factors affecting global milk production leading to severe economic losses. Mastitis and leukosis are highly prevalent diseases especially in Brazilian cattle herds. The present study aimed to evaluate the correlation between mastitis and the bovine leukemia virus (BLV) infection in naturally infected cows belonging to dairy herds in Minas Gerais State. Additionally, the prevalence of both diseases, pathogens causing mastitis, and their association with BLV infection and persistent lymphocytosis were evaluated. The prevalence of BLV was determined using the agar gel immunodiffusion test (AGID) in 1,392 lactating cows from ten dairy herds. From the AGID results, 240 cows were selected and divided into two experimental groups: A case group composed of 160 BLV-positive cows (BLV-P) and the control group of 80 BLV-negative cows (BLV-N). Based on serological and leucocytic evaluations, the animals were classified into three subgroups: BLV-N, BLV-P without persistent lymphocytosis (BLV-PWPL), and BLV-positive with persistent lymphocytosis (BLV-PPL). The California Mastitis Test (CMT) was performed on days 0 (D0) and 60 (D60) in the subgroups and the milk from CMT-positive glands were analyzed. BLV infection was present in 100% of herds, with an overall prevalence of 80.9% in cows older than 24 months. Among BLV-P animals, 74% were classified as BLV-PWPL and 26% as BLV-PPL. Coagulase-negative Staphylococcus (73.30%), Corynebacterium spp. (12.04%), Streptococcus agalactiae (8.90%), and Staphylococcus aureus (5.76%) were predominant (61.41%). There were no statistical differences among the scores of clinical or subclinical mastitis with the pathogen type (contagious or environmental) in the BLV-PWPL or BLV-PPL subgroups. However, BLV-P animals showed higher CMT scores than BLV-N animals, suggesting a higher predisposition to subclinical mastitis in cows affected by leukosis. Tendo em vista a relevância econômica e social da produção de leite e a ampla ocorrência da leucose e mastite em rebanhos brasileiros, foi proposto o presente estudo com o objetivo de avaliar a correlação entre a mastite e a infecção pelo vírus da leucose bovina em vacas leiteiras naturalmente infectadas de 10 rebanhos leiteiros da região sul do estado de Minas Gerais. Além disso, foi avaliada a prevalência de ambas as doenças e dos patógenos causadores de mastite e sua associação com infecção por BLV e linfocitose persistente. A prevalência do VLB foi avaliada pelo teste de imunodifusão em gel de ágar (IDGA) em 1.392 vacas em lactação nos rebanhos estudados. De acordo com os resultados do IDGA, 240 vacas foram selecionadas para compor dois grupos experimentais: 1-caso: composto por 160 vacas BLV positivas (BLV-P) e 2-controle: composto por 80 vacas BLV negativas (BLV-N). De acordo com as avaliações sorológicas e leucocitárias, os animais foram classificados em três subgrupos: BLV-N; BLV-P sem linfocitose persistente (BLV-PWPL) e BLV positivos com linfocitose persistente (BLV-PPL). O California Mastitis Test (CMT) e a cultura do leite das glândulas CMT positivas foram realizados nos dias 0 (D0) e 60 (D60). A leucose foi detectada em 100% dos rebanhos com prevalência média de 80,9%. Entre os animais BLV-P, 74% foram classificados como BLV-PWPL e 26% como BLV-PPL. Staphylococcus coagulase negativos (73,30%), seguido por Corynebacterium spp. (12,04%), Streptococcus agalactiae (8,90%) e Staphylococcus aureus (5,76%) foram os agentes predominantes. Não houve diferença estatística entre os escores de mastite clínica ou subclínica e nem entre o tipo de patógeno (contagioso ou ambiental) nos subgrupos de animais BLV-PWPL ou BLV-PPL relacionados ao BLV-N. No entanto, animais BLV-P apresentaram escores mais elevados no CMT em relação aos animais BLV-N, sugerindo maior predisposição à mastite subclínica em vacas com leucose.

The aim of the present study was to evaluate the antibacterial behavior of polypyrrole nanoparticles (PPy-NPs) in water against biofilm producer or not S. aureus isolated from cows and goats with mastitis. One hundred and thirty-eight isolates of S. aureus were initially evaluated for biofilm formation by spectrophotometry in microplates. In addition, the minimum inhibition concentration (MIC) and minimum bactericidal concentration (MBC) of PPy-NPs in water for planktonic S. aureus were determined. From the bovine samples analyzed, 5 (4.46%) S. aureus isolates showed a strong biofilm production, 17 (15.18%) moderate production, 36 (32.14%) with weak production and 54 (48.21%) did not produce biofilms. Strains from goats (26) showed no biofilm production in 18 (69.23%) strains and weak biofilm production in 8 (30.76%) strains. The MIC and MBC of S. aureus to PPy-NPs were found in the same concentration (125µɡ/mL) in all strains tested, regardless of biofilm production or not. This finding provides a new insight into the interaction between PPy-NPs and S. aureus, and will offer potential benefits for the control of mastitis.

The objective of this study was to evaluate the efficacy of the antibiotic therapy associated with vaccination on the microbiological cure rate of subclinical mastitis caused by Staphylococcus aureus in lactating dairy cows. A total of five herds, from which 72 cows (120 mammary quarters - MQ) were diagnosed with S. aureus subclinical mastitis, were included in this study. Cows were randomly allocated to one of three treatment groups: a) Control (no treatment); b) ATB (antibiotic therapy); and c) ATB+VAC (antibiotic therapy plus vaccination against S. aureus). Intramammary treatment consisted of twice-daily infusion of ampicillin 75mg + cloxacillin 200mg, for 5 days. Parenteral treatment was done by injection of a single dose (7.5mg/kg) of enrofloxacin, on the first day of the treatment protocol. Vaccinated cows received three doses of a commercial vaccine 14 days before treatment (d-14), on the first day of treatment protocol (d1), and 14 days after the treatment protocol (d+14). Non-treated cows had a lower cure rate (0.06) than cows treated with ATB (0.84) and ATB+VAC (0.85). No difference in cure rate was observed between cows treated with ATB and ATB+VAC. On the other hand, vaccinated cows had lower somatic cell count (SCC) after 28 days of the treatment protocols (4.76 log10) than non-treated cows (5.37 log10). In conclusion, treatment with intramammary ampicillin and cloxacillin, associated with intramuscular enrofloxacin presented a high cure rate for SCM caused by S. aureus during lactation. The use of vaccination against S. aureus in association with antibiotic therapy did not increase the cure rate of MQ during lactation, but it was effective in reducing the SCC when compared to non-treated MQ. Although to ensure that the decrease of the SCC in ATB+VAC group was associated with the vaccination, the study should have included an additional group of only vaccinated cows, without antimicrobial therapy, with was not done in the present study, and therefore is one of the limitations of the experimental protocol used. RESUMO: O objetivo deste estudo foi avaliar a eficácia da antibioticoterapia associada à vacinação sobre a taxa de cura microbiológica de mastite subclínica causada por Staphylococcus aureus em vacas leiteiras em lactação. Foram selecionados 5 rebanhos, dos quais 72 vacas (120 quartos mamários, QM) foram diagnosticadas com mastite subclínica por S. aureus e foram alocadas aleatoriamente em um de três grupos de tratamento: a) Controle (sem tratamento); b) ATB (antibioticoterapia); e c) ATB+VAC (antibioticoterapia mais vacinação contra S. aureus). O tratamento intramamário consistiu em infusão de ampicilina 75 mg + cloxacilina 200 mg duas vezes ao dia, durante 5 dias. O tratamento parenteral foi feito por injeção de uma dose única (7,5 mg/kg) de enrofloxacina, no primeiro dia do protocolo de tratamento. As vacas vacinadas receberam três doses de uma vacina comercial, 14 dias antes do tratamento (d-14), no primeiro dia do protocolo de tratamento (d1) e 14 dias após o protocolo de tratamento (d+14). A taxa de cura das vacas não tratadas foi menor (0,06) do que das vacas tratadas com ATB (0,84) e ATB+VAC (0,85). Não foi observada diferença de taxa de cura entre vacas tratadas com ATB e ATB+VAC. Por outro lado, as vacas vacinadas apresentaram menor a contagem de células somáticas (CCS) após 28 dias de tratamento (4,76 log10) do que em vacas não tratadas (5,37 log10). Em conclusão, o tratamento com ampicilina e cloxacilina intramamária, associados à enrofloxacina intramuscular, apresentou alta taxa de cura para MSC causada por S. aureus durante a lactação. A utilização da vacinação contra S. aureus associada à antibioticoterapia não aumentou a taxa de cura dos QM durante a lactação, mas foi eficaz na redução do CCS quando comparada à QM não tratados. Entretanto, para ter certeza que a diminuição da CCS no grupo ATB+VAC estivesse associada à vacinação, o estudo deveria ter incluído um grupo adicional de apenas vacas vacinadas, sem terapia antimicrobiana, o que não foi feito no presente estudo e, portanto, é um das limitações do protocolo experimental utilizado.

A mastite é a principal doença de bovinos leiteiros em todo o mundo e tem como principais agentes as bactérias, entre as quais Streptococcus agalactiae. Esse agente se destaca por ser altamente contagioso e pelos reflexos que causa na incidência de casos clínicos e no incremento da contagem de células somáticas do leite do tanque. Para o controle desta enfermidade, destacam-se a terapia de vacas secas e o tratamento de casos clínicos, medidas que requerem o conhecimento do perfil de sensibilidade dos agentes causais aos antimicrobianos. Este estudo teve como objetivo avaliar os perfis de suscetibilidade a antimicrobianos em 89 amostras de S. agalactiae isoladas de casos de mastite bovina em rebanhos da região de Campo das Vertentes, Minas Gerais, no período de 2004 a 2008. A técnica de difusão em discos foi utilizada e os antimicrobianos correntemente empregados na terapia da mastite foram testados. Os testes de suscetibilidade antimicrobiana apontaram 100% de susceptibilidade para cloranfenicol, ceftiofur, cefotaxima, enrofloxacina e cefquimona. Níveis elevados de susceptibilidade (>95%) foram observados para os betalactâmicos, florfenicol, gentamicina, lincomicina, nitrofurantoína e sulfametoprim. Altas frequências de resistência foram observadas para neomicina (15,74%) e tetraciclina (21,35%). Dois isolados multirresistentes (2,25%) foram encontrados. Os resultados apontaram variações nos perfis se suscetibilidade aos antimicrobianos na população analisada, indicando a importância do uso do antibiograma para a escolha mais criteriosa dos antibacterianos a serem utilizados para o tratamento da mastite bovina causada por S. agalactiae. As altas frequências de resistência detectadas para alguns dos antimicrobianos comumente utilizados para o tratamento de mastite e outras patologias, tais como a neomicina e a tetraciclina, salientam a necessidade de monitoramento permanente do perfil de suscetibilidade aos antimicrobianos e do uso mais criterioso dos mesmos nos rebanhos leiteiros. Bovine mastitis is the most important disease of dairy herds worldwide. Its main etiologic agents are bacteria, including Streptococcus agalactiae. The importance of this agent in bovine mastitis is because it is highly contagious and has a high impact on the occurrence of clinical mastitis cases and in the increase of the bulk milk somatic cell counts. The dry cow therapy and the treatment of the clinical mastitis cases stand out among the measures to control intramammary infections in cows. However, these strategies require knowledge about the antimicrobial susceptibility of the causal microorganisms. Thus, this study aimed to evaluate the antimicrobial susceptibility of 89 S. agalactiae strains isolated from bovine mastitis between the years 2004 and 2008 in dairy herds from Campo das Vertentes region, Minas Gerais State, Brazil. The disc diffusion technique was used and the antimicrobials currently used in mastitis therapy were tested. The isolates tested showed 100% susceptibility to chloramphenicol, ceftiofur, cefotaxime, enrofloxacin, and cefquinome. High frequencies of susceptibility (>95%) were also observed for the beta-lactams (penicillin G, ampicillin, and oxacillin), cephalosporins (cephalotin, ceftiofur, cefotaxime, cefoperazone, and cefquinome), florfenicol, gentamicin, lincomycin, nitrofurantoin, and sulfamethoprim. The strains showed high frequencies of resistance to neomycin (15.74%), and tetracycline (21.35%). Multidrug resistance was detected in 2.25% of the tested isolates. The results pointed to variations in the antimicrobial susceptibility profiles of the studied strains and the importance of the use of the susceptibility tests to determine the correct antimicrobial to be applied in the treatment of bovine mastitis caused by S. agalactiae. The high frequencies of resistance observed to some antimicrobials, such as neomycin and tetracycline, commonly used in the treatment of mastitis and other pathologies, highlighted the need for more judicious use of antimicrobials on dairy farms.

RESUMO O objetivo do presente trabalho foi avaliar diferentes indicadores inflamatórios no diagnóstico da mastite em bovinos. Desta forma, a contagem de células somáticas (CCS) o California Mastitis Test (CMT), a concentração hidrogeniônica (pH), a condutividade elétrica (CE), e o conteúdo de cloretos de 321 amostras de leite provenientes de quartos mamários negativos à prova de fundo escuro e sem nenhuma alteração clínica evidente foram analisadas. Os valores preditivos foram calculados pela sensibilidade, especificidade, valor preditivo positivo, valor preditivo negativo e razão de probabi lidades utilizando diferentes valores de corte, e considerando o exame bacteriológico como “padrão ouro”. O exame bacteriológico resultou em 46,73% das amostras positivas, sendo o Staphylococcus sp. o principal gênero isolado. A CCS e o CMT apresentaram-se como os melhores testes para o diagnóstico indireto da mastite. No entanto, o pH, a condutividade elétrica e o conteúdo de cloretos não se mostraram como métodos diagnóstico seguros quando utilizados isoladamente. ABSTRACT The aim of this trial was to evaluate and compare the distinct indictors of inflammation in the diagnosis of mastitis. The somatic cell count (SCC), the California Mastitis Test score, the electrical conductivity, the hydrogen ion concentration (pH), the chloride content and the bacteriological status of 321 milk samples from mammary glands without any clinical signs were analyzed. Their predictor value as an indicator of inflammation was calculated considering the bacteriologic examination as the gold standard test. Then, the sensitivity, specificity, positive predictive value, negative predictive value and likelihood ratio at various cut-off values were established. The bacteriologic exam resulted in 46.73% of the samples being positive, with Staphylococcus sp. the main genus isolated. The SCC and CMT proved to be the best predictors. On the other hand, pH, electrical conductivity and chloride content did not prove to be reliable diagnostic indicators when used in isolation.

Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2022-11-23T22:21:51Z No. of bitstreams: 1 Guilherme Santana de Moura.pdf: 1828119 bytes, checksum: 5bb2f219b84e07b44ffb1dc27a034c31 (MD5) Made available in DSpace on 2022-11-23T22:21:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Guilherme Santana de Moura.pdf: 1828119 bytes, checksum: 5bb2f219b84e07b44ffb1dc27a034c31 (MD5) Previous issue date: 2020-02-27 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES The present work traced the epidemiological profile of intramammary infections (IMI) caused by staphylococci in Santa Inês sheep using molecular biology tools covering the following aspects: 1) to investigate the incidence of intramammary infection (IMI) in meat ewes in the post-partum and the persistence of infection during lactation, and its effect on lamb growth. In this study, 38 ewes and 44 lambs were followed from birth until weaning at 90 days. The lambs were weighed at birth and every 15 days, and the microbiological examination and identification of Mycoplasma agalactiae by polymerase chain reaction (PCR) of the sheep's milk samples were performed at respective times. It was observed that 14 (36.8%; 5 by Mycoplasma agalactiae; 5 by Staphylococcus sciuri, 2 by Staphylococcus aureus and 2 by Staphylococcus simulans) and 20 (31.6%) sheep present persistent and transient IIM, respectively. Therefore, 63.26% of IMIs, all due to non-aureus staphylococci, did not persist during lactation, suggesting opportunistic profiles of some species. The survival rate of lambs from sheep with persistent IMI (33.3%) was much lower than healthy animals (100%) or with transient IMI (91.7%). In addition, there was a difference in weight gain for lambs from sheep persistently infected at 90 days in relation to the other groups. Despite the negative impact of mastitis on Santa Inês sheep on lamb performance and death, the etiologic agent and its potential to cause persistent IMI should be considered. 2) to report a sporadic case of gangrenous mastitis caused by multi-resistant Staphylococcus haemolyticus in Santa Inês sheep. The microbiological examination, the antimicrobial resistance profile and the presence of virulence factors were investigated. Staphylococcus haemolyticus isolates showed multidrug resistance to antimicrobials and were positive for two staphylococcal enterotoxygenic genes and fibronectin-binding protein (fnbA). 3) investigate whether the staphylococci isolated from clinical and subclinical mastitis, from apex of sheep and lambs' tonsils are genetically distinct, and have genes related to the production of enterotoxins and resistance to methicillin and penicillin. 78 staphylococcus isolates from Santa Inês sheep were used (Study 1). Staphylococcus isolates were identified by MALDI-TOF MS, and PCR was performed to identify the virulence and antimicrobial resistance genes. In addition, the isolates were genotyped by random amplification of polymorphic DNA (RAPD). It was observed that S. aureus isolated from milk samples differ from those isolated from extra-mammary niches, differently from non-aureus staphylococcus species. S. aureus hosted most virulence and resistance genes. An isolate of S. aureus and other of Staphylococcus sciuri shown methicillin-resistance. Therefore, the present study provided more detailed information on the epidemiology of staphylococci associated with sheep. 4) to report the presence of Staphylococcus sciuri carrying the methicillin resistance gene mecC, being, therefore, the first report in Brazil. Resistance to cefoxitin and oxacillin was determined by the minimum inhibitory concentration, and the resistance genes were confirmed by PCR, and sequencing of PCR products. O presente trabalho traçou o perfil epidemiológico das infecções intramamárias (IIM) causadas por estafilococos em ovelhas Santa Inês através de ferramentas de biologia molecular contemplando os seguintes aspectos: 1) investigar a incidência de infecção intramamária (IIM) em ovelhas de corte no período pós-parto e a persistência da infecção durante a lactação, e seu efeito no crescimento de cordeiros. Neste estudo, 38 ovelhas e 44 cordeiros foram acompanhados do parto até o desmame aos 90 dias. Os cordeiros foram pesados ao nascimento e a cada 15 dias, e o exame microbiológico e identificação de Mycoplasma agalactiae pela reação da cadeia da polimerase (PCR) das amostras de leite das ovelhas foram realizados nos respectivos momentos. Observou-se que 14 (36,8%; 5 por Mycoplasma agalactiae; 5 por Staphylococcus sciuri, 2 por Staphylococcus aureus e 2 por Staphylococcus simulans) e 20 (31,6%) ovelhas apresentam IIM persistente e transiente, respectivamente. Portanto, 63,26% das IIM, todas por estafilococos não aureus, não persistiram durante a lactação, sugerindo perfil oportunistas de algumas espécies. A taxa de sobrevivência de cordeiros de ovelhas com IIM persistente (33,3%) foi bem menor que dos animais sadios (100%) ou com IIM transiente (91,7%). Além disto, houve diferença no ganho de peso para cordeiros de ovelhas persistentemente infectadas os 90 dias em relação aos demais grupos. Apesar do impacto negativo da mastite nas ovelhas Santa Inês sobre o desempenho e a morte de cordeiros, o agente etiológico e seu potencial para causar IIM persistente devem ser considerados. 2) relatar um caso esporádico de mastite gangrenosa causada por Staphylococcus haemolyticus multirresistente em ovelha Santa Inês. O exame microbiológico, o perfil de resistência a antimicrobianos e presença de fatores de virulência foram investigados. Os isolados de Staphylococcus haemolyticus apresentaram multirresistência a antimicrobianos, e foram positivos para dois genes enterotoxigênicos estafilocócicos e proteína B de ligação à fibronectina (fnbA). 3) investigar se os estafilococos isolados de mastite clínica e subclínica, do ápice das ovelhas e tonsilas de cordeiros são geneticamente distintos, e possuem genes relacionados à produção de enterotoxinas e resistência a meticilina e penicilina. Foram utilizados 78 isolados de estafilococos proveniente de ovelhas Santa Inês (Estudo 1). Os isolados de estafilococos foram identificados por MALDI-TOF MS, e a PCR foi realizada para identificação dos genes de virulência e resistência a antimicrobianos. Além disso, os isolados foram genotipados através de amplificação aleatória de DNA polimórfico - RAPD. Observou-se que S. aureus isolados de amostras de leite diferem daqueles isolados de nichos extramamários, diferentemente das espécies de estafilococos não-aureus. S. aureus hospedou a maioria dos genes de virulência e resistência. Detectou-se um isolado de S. aureus e um Staphylococcus sciuri isolados do ápice do teto resistente a meticilina. Portanto, o presente estudo forneceu informações mais detalhadas da epidemiologia dos estafilococos associados à ovelha. 4) relatar a presença de Staphylococcus sciuri portadores do gene de resistência a meticilina mecC, sendo, portanto, o primeiro relato no Brasil. A resistência a cefoxitina e oxacilina foram determinadas pela concentração inibitória mínima, e os genes de resistência foram confirmados por PCR, e sequenciamento dos produtos da PCR.

A Zona da Mata de Minas Gerais possui uma cadeia especializada de produção de leite de cabra. O leite de cabra é superior em qualidade em comparação com o leite de outras espécies domésticas, e a demanda por leite e produtos lácteos do público tem aumentado. Os dados sobre o sistema de criação de cabras leiteiras em Minas Gerais são escassos e relativamente antigos, e essa falta de informação limita a implementação de medidas profiláticas, especialmente para a mastite, que representa o maior problema sanitário nos rebanhos leiteiros. Isso também causa problemas socioeconômicos e problemas de mercado para a criação de cabras leiteiras. O objetivo deste trabalho foi caracterizar a mastite e as bactérias associadas em cabras leiteiras na Zona da Mata de Minas Gerais. Um total de 539 cabras em lactação foi examinado e 268 amostras individuais (uma por teto) foram coletadas de animais positivos no teste da caneca de fundo escuro e/ou Califórnia Mastitis test (CMT). As culturas microbiológicas foram realizadas em meio Agar sangue e as bactérias foram submetidas a testes fenotípicos, genotípicos e testes de susceptibilidade antimicrobiana. A prevalência de mastite subclínica foi de 28,0% e a prevalência clínica foi de 2,8%. A multiplicação bacteriana foi obtida em 62,0% das amostras. Cento e oitenta e sete bactérias foram identificadas. As espécies mais identificadas foram: Staphylococcus aureus (60,4%), seguida de Staphylococcus epidermidis (9.1%,), Escherichia coli (6.9%), Staphylococcus saprophyticus (5.9%) e Staphylococcus caprae (4,3%) em ordem decrescente. As bactérias do gênero Staphylococcus apresentaram um perfil de resistência aos antimicrobianos pertencentes à classe de beta-lactâmicos - penicilina, ampicilina e oxacilina - além da tetraciclina, em contraste com os outros antimicrobianos testados. Doze por cento dos isolados apresentaram resistência múltipla a antibióticos (MDR) e foram encontrados em cinco microrregiões. Entre as bactérias com maior prevalência de MDR, 38,5% foram E. coli e 10,6% S. aureus. Os produtores da Zona da Mata de Minas Gerais são tecnificados, trabalham com raças leiteiras especializadas praticam e possuem bom manejo. No entanto, algumas medidas relacionadas à profilaxia e ao controle das doenças, como a vacinação, têm baixa adesão ou não são realizadas por falta de assistência veterinária. Este é o primeiro estudo com foco nesta região, que possui grande relevância na produção de leite de cabra no Brasil, fornecendo informações importantes que podem auxiliar na implementação de medidas de profilaxia e controle das doenças, e na manutenção de um fornecimento constante de produtos em quantidade e qualidade suficientemente adequada para a população consumidora. The Zona da Mata of Minas Gerais has a specialized goat milk production chain. Goat milk is superior in quality compared with milk of other domestic species, and the demand for milk and milk products for the public has increased. Data on dairy goat breeding in Minas Gerais are scarce and relatively old, and this lack of information has limited the implementation of prophylactic measures, especially for mastitis, which represents the biggest sanitary problem for dairy herds. The objective of this work was to characterize mastitis and bacteria associated with it in milking goats in the Zona da Mata of Minas Gerais. It also causes socioeconomic problems and market issues for dairy goat farming. A total of 539 lactating goats were examined and 268 individual samples (one for teat) were collected from animals positive for strip cup test and/or the California Mastitis Test (CMT). Microbiological cultures were carried out on blood agar medium and the bacteria were subjected to phenotypic, genotypic and antimicrobial susceptibility tests. The prevalence of subclinical mastitis was 28.0% and the clinical prevalence was 2.8%. Bacterial multiplication was obtained in 62% of samples. One hundred eighty seven total bacteria were identified. The most common species identified was Staphylococcus aureus (60%), followed Staphylococcus epidermidis (9.1%,), Escherichia coli (6.9%), Staphylococcus saprophyticus (5.9%) e Staphylococcus caprae (4.3%). Bacteria of the genus Staphylococcus presented a profile of resistance to antimicrobials belonging to the beta-lactam class (penicillin, ampicillin and oxacillin) in addition to tetracycline, in contrast to the other antimicrobials tested. Twelve percent of multidrug resistence (MDR) was found in five microregions. Among the bacteria with the highest prevalence of MDR, 38.5% were E. coli and 10.6% were S. aureus. The producers of the Zona da Mata of Minas Gerais are technicians who work with specialized dairy breeds and practise good management. However, some measures related to prophylaxis and control of diseases, such as vaccination, have low adherence or are not performed due to a lack of veterinary assistance. This is the first study focusing on this region, which is highly prominent in goat milk production in Brazil. It provides important information that can help in the implementation of measures for the prophylaxis and control of diseases, and for maintenance of a constant supply of products in sufficient quantities and of a quality suitable for the consumer population.

RESUMO: A contagem de células somáticas (CCS) é um parâmetro amplamente utilizado para monitorar a saúde do úbere e a qualidade do leite, porém não diferencia as distintas populações leucocitárias. Portanto, a diferenciação das populações celulares no leite pode aprimorar o diagnóstico da mastite bovina. Dessa forma, o objetivo do presente trabalho foi avaliar as diferentes técnicas de contagem diferencial de leucócitos no leite para diagnosticar precisamente a mastite. Para tal, foram utilizadas 31 vacas da raça holandesa preta e branca em lactação (124 quartos mamários). Foram empregadas a contagem automática de células somáticas, e a contagem diferencial de leucócitos pelas técnicas de citocentrifugação, contagem diferencial de leucócitos por esfregaço direto, e citometria de fluxo com a utilização de anticorpos monoclonais específicos para identificação de cada população leucocitária. Os resultados demonstraram correlação positiva e significativa entre a proporção de leucócitos polimorfonucleares pelas diferentes técnicas e a contagem automática de células somáticas, sendo observada uma correlação discretamente mais forte com a citometria de fluxo. Além disso, foi demonstrado que os macrófagos são a população predominante no leite oriundo de glândula mamária com baixa CCS. Observaram-se também diferenças na proporção das distintas populações leucocitárias entre as distintas técnicas, resultado da possível subjetividade do examinador na contagem diferencial de leucócitos pelas técnicas de citocentrifugação e contagem microscópica direta por esfregaços, o que reforça que a citometria de fluxo pode ser uma ferramenta confiável no controle e diagnóstico da mastite. ABSTRACT: Milk somatic cell count (SCC) is the basis of mastitis and milk quality control programs, however it not differentiate the distinct leukocyte populations which in turn can improve the diagnosis of mastitis. Thus, the present study aimed to evaluate different techniques used to measure the distinct leukocyte populations in milk in attempt to improve the diagnosis of mastitis. Here, milk samples from 31 dairy cows (124 quarter milk samples) were used. The differential leukocytes count was determined by cytocentrifugation, direct microscopy smears, and monoclonal antibodies by flow cytometry. The automatic SCC was also performed. The results showed a positive and significant correlation between the proportion of polymorphonuclear leukocytes determined by all techniques and automatic cell count; although a discrete higher correlation between flow cytometry and automatic SCC was found. Furthermore, the present study reinforces the idea that macrophages were the predominant cell type in mammary gland with low SCC. The proportion of each leukocyte population differ among techniques, probably due to the subjectivity of the examiner in the evaluation of the differential leukocyte counts by cytocentrifugation and direct microscopy smears, which emphasize that flow cytometry can be a useful and feasible tool in the diagnosis and control of mastitis.

Submitted by Fernanda Cristina de Campos Casale (fernanda.campos@unesp.br) on 2019-08-27T02:31:46Z No. of bitstreams: 1 TESE FERNANDA CASALE.pdf: 2659434 bytes, checksum: 997bc56cfba5157b9871dcb026901c5d (MD5) Approved for entry into archive by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br) on 2019-08-27T19:04:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 casale_fcc_dr_bot_par.pdf: 918841 bytes, checksum: 540ded3b69a8253b7660b60647dfc7eb (MD5) Made available in DSpace on 2019-08-27T19:04:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 casale_fcc_dr_bot_par.pdf: 918841 bytes, checksum: 540ded3b69a8253b7660b60647dfc7eb (MD5) Previous issue date: 2019-08-09 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) A mastite bovina é uma das doenças que mais causam prejuízos às propriedades leiteiras e, apesar dos programas de controle, Escherichia coli destaca-se como importante patógeno ambiental causador desta enfermidade na sua forma clínica. Isolados obtidos de infecções nas mamas são classificadas como E. coli patogênica mamária (MPEC). O objetivo deste estudo foi caracterizar geneticamente isolados de E. coli a partir de leite de vacas com mastite clínica utilizando técnicas moleculares, bem como investigar os padrões de aderência e resistência aos antimicrobianos dos isolados, para isso a investigação dos grupos filogenéticos, genes de virulência, presença de clones (por Pulsed field gel electrophoresis, PFGE), tipos de adesão em células HeLa, resistência aos antimicrobianos e genes relacionados com essa resistência foram realizados em 110 E. coli isoladas de leite de vacas com mastite clínica de diferentes fazendas dos estados de São Paulo, Minas Gerais e Paraná. De acordo com a presença dos genes específicos arpA, chuA, yjaA e TspE4.C2, os isolados foram classificados principalmente nos grupos comensais A (50,9 %) e B1 (38,2 %), seguidos dos grupos D (2,7 %), C (1,8 %) e B2/E/F/Escherichia clade I (0,9 %). Três isolados (2,7 %) não foram categorizados em nenhum desses grupos, classificados como de grupo filogenético desconhecido. Nenhum dos 110 isolados apresentou genes que caracterizam E. coli diarreiogênicas (DEC), entretanto os genes astA e shf, geralmente encontrados em E. coli enteroagregativa, foram identificados em 7,3 % (8/110) e 10,3 % (3/29) dos isolados, respectivamente. Entre os genes que caracterizaram E. coli extra-intestinal (ExPEC), fimH (93,6 %) foi o mais frequente, seguidos pelos genes traT (77,3 %), ompT (68,2 %), ecpA (65,5 %), irp2 (34,5 %), fimA (28,2 %), sitA (26,4 %), cdt (10 %), KpsMTII/iroN/iucD (3,6 %), hlyA/ireA/ibe10 (1,8 %) e papA/papC/sat/vat (0,9 %). Pela análise de PFGE, observou-se 103 pulsotipos e seis clones, quatro dos quais obtidos na mesma fazenda em animais diferentes e um no mesmo animal, em diferentes momentos da lactação, indicando casos de persistência de E. coli nas infecções intramárias. Segundo os parâmetros de adesão em células HeLa, 26 (23,6 %) isolados aderiram de forma agregativa, enquanto quatro (3,6 %) aderiram de forma difusa; o restante dos isolados foram caracterizados com aderência não característica, não aderentes ou promoveram o destacamento do tapete celular. Em relação à ação dos antimicrobianos, 19,1 % dos isolados foram resistentes à tetraciclina e a maioria (99,1 %), foram sensíveis à cefoxitina. Ainda, cinco (4,5 %) isolados foram produtores de ESBL em teste fenotípico, ocorrendo a presença dos genes blaTEM (31,8 %), blaCTX-M-2/ blaCTX-M-8 (1,8 %) e blaCTX-M-15 (0,9 %). O gene blaCMY-2 foi relatado em um (0,9 %) isolado de E. coli. Conclui-se que os isolados de E. coli de mastite clínica bovina foram bastante heterogêneos em suas identidades gênicas, não sendo possível apresentar um padrão de virulência característico para o patotipo MPEC, pois os genes ecpA, papA, shf, ibe10, ompT, ireA, cdt, sat e blaCTX-M-8, já descritos genericamente em ExPEC, foram observados nos isolados de mastite pela primeira vez nesse trabalho. Não foram identificadas DEC e por isso, os isolados de mastite apresentam pequeno potencial de risco zoonótico, transmissível pelo leite bovino, bem como os genes associados a processos diarreiogênicos não parecem não apresentar influência no estabelecimento de mastite clínica Além disso, embora grande parte dos isolados não tenham produzido β-lactamases no teste fenotípico, a presença de cepas carreadoras desses genes no ambiente representa preocupação em saúde pública, em virtude do aumento de resistência de E. coli obtidas de animais. Bovine mastitis is one of the diseases that most causes damage to dairy properties and, despite control programs, Escherichia coli stands out as an important environmental pathogen that causes this disease in its clinical form. Isolates obtained from breast infections are classified as mammary pathogenic E. coli (MPEC). The objective of this study was to genetically characterize E. coli isolates from milk of cows with clinical mastitis using molecular techniques, as well as to investigate the adhesion patterns and antimicrobial resistance of isolates, for this purpose the investigation of phylogenetic groups, virulence genes, presence of clones (by Pulsed field gel electrophoresis, PFGE), HeLa cell adhesion types, antimicrobial resistance, and genes related to this resistance were performed on 110 E. coli isolated from milk of cows with clinical mastitis from different state farms from São Paulo, Minas Gerais and Paraná. According to the presence of the specific genes arpA, chuA, yjaA and TspE4.C2, isolates were classified mainly in commensal groups A (50.9 %) and B1 (38.2 %), followed by groups D (2.7 %), C (1.8 %) and B2/E/F/Escherichia clade I (0.9 %). Three isolates (2.7 %) were not categorized in any of these groups, classified as unknown phylogenetic group. None of the 110 isolates presented genes that characterize diarrheagenic E. coli (DEC), however, the astA and shf genes, commonly found in enteroaggregative E. coli, were identified in 7.3 % (8/110) and 10.3 % (3/29) of the isolates, respectively. Among the genes that characterized extraintestinal pathogenic E. coli (ExPEC), fimH (93.6 %) was the most frequent, followed by traT (77.3 %), ompT (68.2 %), ecpA (65, 5 %), irp2 (34.5 %), fimA (28.2 %), sitA (26.4 %), cdt (10 %), KpsMTII/iroN/iucD (3.6 %), hlyA/ireA/ibe10 (1.8 %) and papA/papC/sat/vat (0.9 %). By PFGE analysis, 103 pulsotypes and six clones were observed, four of which were obtained from the same farm in different animals and one in the same animal at different times of lactation, indicating cases of E. coli persistence in intrammary infections. According to adhesion parameters in HeLa cells, 26 (23.6 %) isolates adhered aggregatively, while four (3.6 %) adhered diffusely; the remaining isolates were characterized with non-characteristic adherence, non-adherence or promoted detachment of the cell mat. Regarding the action of antimicrobials, 19.1 % of the isolates were resistant to tetracycline and most (99.1 %) were sensitive to cefoxitin. In addition, five (4.5 %) isolates produced ESBL in phenotypic test, with the presence of blaTEM (31.8 %), blaCTX-M-2/blaCTX-M-8 (1.8 %) and blaCTX-M-15 (0.9 %). The blaCMY-2 gene was reported in one (0.9 %) E. coli isolate. It was concluded that the isolates of E. coli from clinical bovine mastitis were very heterogeneous in their gene identities. It is not possible to present a characteristic virulence pattern for the MPEC pathotype, since the genes ecpA, papA, shf, ibe10, ompT, ireA, cdt, sat and blaCTX-M-8, already described generically in ExPEC, were observed in mastitis isolates for the first time in this work. No DEC were identified, therefore, mastitis isolates have little potential for zoonotic risk, transmissible through bovine milk, and genes associated with diarrhiogenic processes do not seem to have any influence on the establishment of clinical mastitis. In addition, although most isolates have not produced β-lactamases in the phenotypic test, the presence of carrier strains of these genes in the environment is a concern in public health, due to the increased resistance of E. coli obtained from animals. CAPES: 001

O presente trabalho é o relato do caso de uma cabra nulípara da raça Parda Alpina, de um ano de idade, pertencente ao Setor de Caprinocultura da Universidade Federal da Paraíba – Bananeiras - Brasil. Ambas as glândulas foram naturalmente infectadas por Staphylococcus simulans α-hemolítico. As glândulas mamárias apresentaram mastite aguda catarral com envolvimento sistêmico, respondendo positivamente ao tratamento sistêmico com gentamicina associada a amoxicilina. O presente relato sugere a importância do potencial patogênico de Staphylococcus não-aureus (SNA) como causador de mastite clínica também em animais nulíparos. O isolado mostrou resistência a tetraciclina e continha genes de produção de toxinas estafilocócicas (sec, seg e TSST-1). Além disso, tem sido relatado que Staphylococcus simulans é um patógeno emergente em seres humanos causando infecções cutâneas e osteoarticulares, principalmente naqueles que têm contato íntimo com animais de fazenda. Até onde sabemos, este é o primeiro relato de uma mastite clínica em uma cabra nulípara causada por Staphylococcus simulans. The present paper is a case report of a one-year old nulliparous Alpine Goat belonging to a dairy goat farm in semi-arid region of Brazil. Both glands were naturally infected by α-hemolytic Staphylococcus simulans and evolved similar clinical signs. The mammary glands presented an acute catarrhal mastitis with systemic clinical signs that responded positively to treatment with gentamicin associated with amoxicillin. The present report suggests the importance of the pathogenic potential of non-aureus Staphylococci strains (NAS) as a cause of clinical mastitis also in nulliparous animals. The isolate showed resistance to tetracycline and contained staphylococcal toxin production genes (sec, sec and TSST-1). Moreover, it has been reported that Staphylococcus simulans is an emerging pathogen in humans causing cutaneous and osteoarticular infections, mainly in those in close contact with farm animals. To the best of our knowledge, this is the first report of a clinical mastitis in a nulliparous goat caused by Staphylococcus simulans.

No presente estudo foram realizados três trabalhos em dois rebanhos de vacas mestiças (½ Holandês-Zebu e ¾ Holandês Zebu) que foram divididos em capítulos intitulados: Associação entre dados climáticos e zootécnicos com presença de novas infecções intramamárias em vacas mestiças (Capítulo 1); Dados climáticos e zootécnicos associados à ocorrência e etiologia da mastite em vacas ½ Holandês-Zebu (Capítulo 2); Genótipos de Staphylococcus aureus isolados de vacas com infecções intramamárias subclínicas transientes e persistentes e clínicas em dois rebanhos mestiços brasileiros (Capítulo 3). O objetivo do primeiro capítulo foi identificar variáveis zootécnicas e climáticas associadas com a presença de novas de infecções intramamárias em vacas mestiças ½ HZ e ¾ HZ. As variáveis ordem de parto, relação gordura e proteína (G/P), temperatura máxima e umidade relativa do mês da coleta foram significativamente associadas à novas infecções intramamárias, enquanto produção de leite demonstrou ser fator de proteção no rebanho de vacas ½ HZ. No rebanho de vacas ¾ HZ foi considerado como fator de risco, a variável relação G/P, diferentemente da variável ordem de parto que demonstrou ser um fator de proteção. Os patógenos mais frequentemente isolados nos dois rebanhos foram Staphylococcus aureus, Staphylococcus coagulase-negativo e o Corynebacterium sp. No segundo capítulo foram identificadas as variáveis zootécnicas e climáticas associadas com a presença dos patógenos causadores de mastite e com a alta celularidade no leite de vacas mestiças ½ HZ. O resultado deste estudo demonstrou que as variáveis ordem de parto, relação gordura e proteína, temperatura máxima e umidade relativa do mês da coleta são fatores de risco em relação à alta CCS, e as variáveis nitrogênio ureico do leite, produção de leite e precipitação do mês da coleta, fatores de proteção. Em relação à presença de patógenos, ordem de parto, temperatura máxima, índice temperatura e umidade e umidade relativa do mês foram considerados fatores de risco e temperatura mínima do mês foi fator de proteção. No terceiro capítulo, os genótipos de 124 amostras de S. aureus provenientes de vacas ½ e ¾ HZ com mastite subclínica persistente e transiente, de vacas que apresentaram mastite subclínica e clínica por S. aureus e de vacas que apresentaram mastite subclínica causada por outros patógenos e clínica por S. aureus foram avaliados por meio da técnica de Pulsed Field Gel Eletrophoresis (PFGE). O resultado do estudo demonstrou que a maioria dos casos de mastite bovina nos rebanhos deve-se a ocorrência de cinco pulsotipos predominantes (A, G, I, K e B) e três subtipos A1, G2 e A9. A identificação dos fatores que favorecem a ocorrência da mastite, assim como a determinação epidemiológica de S. aureus permitem implementar medidas que sejam efetivas no controle da mastite. In the present study three studies in two dairy herds of crossbred cows (Holstein-Zebu ½ and ¾ Holstein-Zebu) were performed and divided into chapters entitled: Association between climate and zootecnical data with the presence of new intramammary infections in crossbred cows (chapter 1); Climate and zootechnical data associated with the occurrence and etiology of mastitis in ½ Holstein-Zebu cows (Chapter 2) and Staphylococcus aureus genotypes isolated from cows with transient and persistent subclinical and clinical intramammary infections in two Brazilian crossbred dairy herds (Chapter 3). The aim of the first chapter was to identify production and climatic variables associated with the presence of new intramammary infections in crossbred cows ½ and ¾ HZ. The variables parity, the fat and protein (F/P), maximum temperature and relative humidity of the month of collection were significantly associated with new intramammary infections, while milk production was shown to be a protection factor in the herd of ½ HZ cows. In the herd of cows ¾ HZ were considered a risk factor to the variable F/P ratio, unlike the variable parity that was shown to be a protective factor. The most frequent pathogens in both herds were S. aureus, coagulase-negative Staphylococcus and Corynebacterium sp. In the second chapter, production and climatic variables associated with the presence of pathogens causing mastitis and high cellularity in milk of crossbred cows (½ HZ) were identified. The result of this study showed that the variables parity, fat and protein ratio, maximum temperature and relative humidity at the month of sampling collection were risk factors in relation to high SCC. Variables such as milk urea nitrogen, milk production and rainfall at the of sampling were protective factors. Regarding the presence of pathogens, the variables parity, maximum temperature, index temperature and humidity and relative humidity of the month were considered as risk factors and as a protection factor the minimum temperature variable at the month of sampling. In the third chapter, we compare Staphylococcus aureus genotypes from transient and persistent subclinical and clinical intramammary infections in two crossbreed dairy herds. A total of 124 samples were evaluated using the technique of Pulsed Field Gel Electrophoresis (PFGE). The majority of bovine mastitis cases were related to five predominant pulse types (A, G, I, K e B) and to three subtypes A1, G2 e A9. The identification of the factors that improve the risks of mastitis and the epidemiological determination of S. aureus allow effective measures to control this disease.

The aim of the present study is to assess the antibacterial potential of plants from the Caatinga biome of the semi-arid region of Pernambuco, against Staphylococcus spp. isolates from cases of subclinical mastitis in small ruminants, such as goats and ewes. Ethanolic extracts of the following plants from the Caatinga biome were used: Encholirium spectabile Mart., Bromelia laciniosa Mart., Neoglaziovia variegata Mez., Amburana cearensis (Fr. Allem.) A. C. Smith, Hymenaea martiana Hayne, and Selaginella convoluta Spring. The presence of phenolic components, flavonoids, steroids, and terpenoids was verified for all the tested extracts. The mean minimal bactericide concentrations of the extracts of E. spectabile, B. laciniosa, and N. variegate were 11,379, 11,405, and 11,995 µg/mL, respectively. The highest inhibitory activities were observed for A. cearensis and H. martiana, which inhibited 88.1 and 99.4% of the isolates, respectively. Other studies focusing on in vitro and in vivo activities should be undertaken. RESUMO Objetivou-se avaliar o potencial antibacteriano de plantas do bioma Caatinga do semi-árido pernambucano contra Staphylococcus spp. isolados de casos de mastite subclínica em pequenos ruminantes. Foram utilizados seis extratos etanólicos de plantas existentes no bioma Caatinga do semiárido Pernambucano, como Encholirium spectabile Mart., Bromelia laciniosa Mart., Neoglaziovia variegata Mez., Amburana cearensis (Fr. Allem.) A.C.Smith, Hymenaea martiana Hayne. e Selaginella convoluta Spring. Observou-se a presença de compostos fenólicos, flavonoides, esteroides e terpenoides em todos os extratos avaliados neste estudo. Observou-se que os extratos da E. spectabile, B. laciniosa e N. variegata apresentaram atividade antimicrobiana, com as seguintes médias para a concentração bactericida mínima: 11.379, 11.405 e 11.995 µg/ mL, respectivamente. Observou-se maior atividade inibitória para as espécies A. cearensis e H. martiana, que inibiram 88,1 e 99,4 % dos isolados, respectivamente. O extrato etanólico da S. convoluta apresentou o menor percentual de inibição, sendo igual a 15% (n=24/160). Considerando o potencial antibacteriano destas plantas do bioma Caatinga frente à Staphylococcus isolados de casos de mastite subclínica em caprinos e ovinos, outros estudos sobre a atividade in vivo devem ser realizados.

The most acceptable criteria for diagnosing bovine intramammary infections include results of bacteriological culture and measures of inflammation. Therefore, information on the diagnostic characteristics of the procedures used to identify infected quarters is required. Thus, this study was designed to evaluate a set of criteria to classify the infectious status of an udder at the quarter (single and duplicate milk samples) and cow (composite milk sample) levels, and to compare the infectious status with somatic cell counts (SCCs) of the samples. Here, the SCC thresholds determined by receiver operating characteristic curve analysis had a higher Youden index using mammary quarter duplicate milk samples as the gold standard for testing compared with single quarter and composite milk samples, especially for samples for which at least one of the duplicates was microbiologically positive, regardless of the mastitis pathogen isolated. The kappa coefficient for bacteriological results of the single quarter milk samples (single S1 and S2) was 0.85±0.019, indicating that single quarter milk sampling can be useful in mastitis control programs. Therefore, the use of composite milk samples to detect mastitis pathogens may be limited to the detection of major pathogens, given their predictive values. Thus, our findings suggest that the milk SCCs and microbiological examinations, although regarded as the most reliable indicators of ongoing mastitis, should be used in an integrated manner in mastitis control programs. Furthermore, the accuracy of single, duplicate and composite microbiological analyses to diagnosis mastitis should be considered for its implications in mastitis control strategies. Resumo: Os critérios mais aceitáveis para o diagnóstico das infecções intramamárias em bovinos incluem tanto os resultados da cultura bacteriológica e dos indicadores de inflamação. Portanto, a informação sobre os procedimentos mais adequados a serem utilizados para identificação dos quartos infectados é necessária. Assim, o objetivo do presente estudo foi avaliar um conjunto de critérios para identificação da infecção intramamária em bovinos pelo exame microbiológico (amostras individuais de leite simples ou em duplicata, e amostras de leite compostas), e comparar o isolamento do patógeno nas amostras de leite coletadas por distintos critérios com a contagem de células somáticas (CCS). Os valores de corte da CCS determinados pela curva de característica de operação do receptor demonstraram que a coleta de amostras de leite em duplicata apresentou o maior valor do índice de Youden, especialmente quando considerou-se o quarto mamário infectado se pelo menos uma das amostras de leite da duplicata apresentou resultado bacteriológico positivo independentemente do patógeno isolado. O coeficiente kappa dos resultados do exame microbiológico das amostras de leite individuais (amostra simples S1 e S2) foi de 0,85±0,019, indicando que a coleta de amostras de leite individual, ou seja, a coleta de uma amostra de leite por quarto mamário, pode ser utilizada nos programas de controle de mastite. Por outro lado, a coleta de amostras de leite compostas para detectar patógenos causadores de mastite deve ser limitada à detecção dos patógenos principais, considerando os valores preditivos encontrados no presente estudo. Portanto, os resultados do presente estudo indicam que a CCS e o exame microbiológico do leite, embora considerados como os critérios mais aceitos para o diagnóstico da mastite, devem ser utilizados de forma integrada em programas de controle de mastite. Além disto, os critérios de coleta de amostras de leite para o diagnóstico da mastite pelo exame microbiológico e seus valores preditivos devem ser considerados nos programas de controle de mastite.

The aim of the present study was to assess two diagnostic techniques (California mastitis test (CMT) and the somatic cell count (SCC)) that can diagnose mastitis in dairy goats. Experimental infection was conducted using 20 mammary glands, a strain of Staphylococcus aureus, an infectious dose of 1.2x108CFU mL-1 and a volume of 1mL per mammary gland. The CMT and the SCC were used to detect subclinical mastitis. Bacterial culture (BC) was performed immediately after milk collection and was used as the gold standard. Four experimental time points were established (0, 24, 48 and 72 hours post-inoculation). Analysis of the ROC curve confirmed that the best combination of sensitivity and specificity were obtained with a cutoff point of 405.5, 6030.0 and 729.5x103 cells mL-1, respectively at M1, M2 and M3. Furthermore, considering the drop in sensitivity throughout the experimental time points, the use of serial bacterial cultures are recommended, particularly in herds with a high prevalence of S. aureus. RESUMO: Neste trabalho, objetivou-se avaliar duas técnicas diagnósticas (California mastitis test (CMT) e a contagem de células somáticas (CCS)) disponíveis para o diagnóstico da mastite em cabras leiteiras. Realizou-se infecção experimental em 20 metades mamárias, utilizando-se cepa de S. aureus, em uma dose infectante de 1,2x108 UFC mL-1 e um volume de 1mL/metade mamária. Para detecção da mastite subclínica, foi utilizado o CMT e a CCS. A cultura bacteriológica (CB) foi empregada como padrão ouro, sendo realizada logo após a coleta do leite. Foram estabelecidos quatro momentos experimentais (0, 24, 48 e 72 horas pós-infecção). A análise da curva de ROC confirmou que a melhor combinação (sensibilidade e especificidade) foi obtida com ponto de corte de 405,5, 6030,0 e 729,5x103 cells mL-1, respectivamente, em M1, M2 and M3. Ademais, levando em consideração a queda da sensibilidade ao longo dos momentos experimentais, é relevante a realização da cultura bacteriológica seriada, principalmente em rebanhos com elevada prevalência de S. aureus.

Objetivou-se neste estudo, avaliar a dinâmica da infecção intramamária de ovelhas por meio da avaliação clínica, da contagem de células somáticas e do isolamento de bactérias envolvidas na infecção mamária ao longo de toda a lactação, bem como o perfil de sensibilidade destes isolados frente a antimicrobianos. Foram avaliadas 34 ovelhas da raça Santa Inês criadas em sistema semi-intensivo e submetidas ao mesmo manejo higiênico-sanitário e nutricional acompanhadas antes e durante o período de lactação: aproximadamente 10 dias que precedeu ao parto, 15 dias pós-parto (dpp), 30 dpp, 60 dpp e 90 dpp (secagem). Nestes momentos foi realizado o exame clínico da glândula. A contagem de células somáticas (CCS) e o CMT foram realizados nos momentos seguintes ao parto (15dpp, 30dpp, 60dpp e 90dpp), assim como a análise bacteriológica, realizada além dos momentos citados anteriormente, também no momento que precedeu ao parto. A colheita do leite foi realizada por ordenha manual. Todas as ovelhas foram submetidas à sorologia para lentivírus. Os dados da variável CCS foram submetidos ao teste de normalidade segundo Kolmogorov-Smirnov e por não atender a premissa de normalidade, foram transformados em log de base 10 (Log10). Por conseguinte efetuou-se a análise de variância e contraste de médias pelo teste de Tukey com nível de significância de P

O objetivo deste trabalho foi identificar espécies de Staphylococcus (n=100) isoladas de mastite em rebanhos bovinos do Estado de Minas Gerais. Para esta finalidade foram utilizadas reações de PCR empregando oligonucleotídeos iniciadores descritos anteriormente para amplificar genes específicos de S. aureus (femA), S. intermedius (rDNA 16S) e S. hyicus (rDNA 16S-23S) e o sequenciamento do rDNA 16S. De acordo com as reações de PCR, 83 isolados foram identificados como S. aureus, 13 isolados como S. intermedius, dois como S. hyicus e dois isolados não foram identificados. Foram submetidos ao sequenciamento do rDNA 16S seis isolados identificados como S. aureus e os 17 restantes. Os seis isolados identificados como S. aureus confirmaram essa identificação. Dos outros 17 isolados, 13 foram identificados como S. chromogenes e quatro como S. hyicus, com similaridade igual ou superior a 99%. Baseando-se nos resultados da reação de PCR do gene femA e do sequenciamento do rDNA 16S, foram identificados 83 S. aureus, 13 S. chromogenes e quatro S. hyicus. Neste estudo os oligonucleotídeos iniciadores empregados na reação de PCR para S. intermedius não foram específicos, pois amplificaram também S. chromogenes; e os empregados na reação de PCR para S. hyicus não foram sensíveis, pois falharam na identificação de dois isolados de S. hyicus. A identificação definitiva das duas últimas espécies somente foi possível pelo sequenciamento do rDNA 16S. The objective of this study was to identify the species of 100 isolates of Staphylococcus from mastitis in dairy cows from herds located in the state of Minas Gerais, Brazil. PCR reactions were carried out using specific primers described previously for S. aureus (femA gene), S. intermedius (16S rDNA) and S. hyicus (16S-23S rDNA spacer region). In addition, products of amplification of variable regions of the 16S rDNA gene of the strains were sequenced. According to the results of the PCR, 83 strains were identified as S. aureus, 13 as S. intermedius, two as S. hyicus and two isolates were not identified. The sequencing of 16S rDNA was applied to 23 strains identified by PCR amplifications: six S. aureus and the strains identified as S. intermedius (n=13), S. hyicus (n=2) or not identified (n=2). The sequencing of 16S rDNA confirmed the six strains as S. aureus. The others 17 strains were identified as S. chromogenes (13 isolates) and S. hyicus (four isolates). Each sample was related to a specie according to the smallest E-value and highest similarity (> 99%). The identification of S. hyicus and S. chromogenes was accomplished only by 16S rDNA sequencing.

Mastite, geralmente definida como a inflamação da glândula mamária, é a enfermidade de maior custo para a pecuária leiteira mundial. O maior obstáculo para reduzir da incidência da mastite, e consequentemente as implicações na produção e qualidade do leite, é a implementação de medidas efetivas no controle da mastite nas fazendas leiteiras, que depende principalmente da melhor compreensão da complexa interação patógeno-hospedeiro. A interação patógeno hospedeiro é uma importante e ampla área de pesquisa básica e clínica. Desta forma, o presente trabalho buscou elucidar alguns aspectos da interação patógeno-hospedeiro: 1) revisão sobre a importância dos receptores do tipo Toll na mastite bovina, especialmente considerando os patógenos: Escherichia coli e Staphylococcus aureus; 2) avaliação do diagnóstico da infecção intramamária pelo exame microbiológico do leite de amostras individuais por quarto, em duplicata por quarto e compostas e sua relação com a contagem de células somáticas; 3) avaliação por citometria de fluxo da interdependência dos quartos mamários pela função neutrofílica e perfil linfocítico; 4) estudo da função neutrofílica e perfil linfocítico em quartos mamários infectados por Streptococcus dysgalactiae; 5) determinação a capacidade de aderência e internalização em células epiteliais mamárias por S. aureus, S. fleurettii, e duas cepas de S. chromogenes; e 6) efeito da vacinação sobre a dinâmica da infecção intramamária por S. aureus e estafilococos coagulase-negativo. Mastitis, generally defined as the inflammation of the mammary gland, is the most costly of the infectious, endemic diseases to affect dairy cows and other dairy species. The greatest obstacle to reduce mastitis is the implementation of effective mastitis control measures in dairy farmers, which mainly depends on a better understanding of the complex interaction between an infecting pathogen and the host immune system. Host-pathogen interaction is a broad, important area of research encompassing both basic and clinical sciences. Thus, here it was addressed some aspects of the host-pathogen interactions, as follows: 1) Review of the role of pattern-recognition receptors in the innate immunity of bovine mastitis with focuses on the major mastitis pathogens: Escherichia coli and Staphylococcus aureus; 2) Determine a set of rules for classifying the infection status of an udder at quarter (single and duplicate milk samples) and cow (composite milk sample) levels and compare with distincts somatic cell count (SCC) thresholds (at quarter and cow levels); 3) Evaluation of the interdependence of the quarters by evaluating milk neutrophil function and milk lymphocyte profiles in uninfected quarters from infected and uninfected udders by flow cytometry analysis; 4) Function of milk neutrophils and the milk lymphocyte profile in Streptococcus dysgalactiae-infected mammary glands; 5) Capacity of S. aureus, S. fleurettii, and two dissimilar strains of S. chromogenes species to adhere and internalize into bovine mammary epithelial cells; 6) Efficacy of a commercial vaccine under field condition in two dairy herds with high bulk milk somatic cell count (SCC) and a high prevalence of IMIs by S. aureus.

A mastite em ovelhas da raça Santa Inês apresenta-se como um problema de grande proporção e gravidade e é dificilmente tratada com sucesso. O objetivo deste estudo foi caracterizar aspectos clínicos, epidemiológicos e etiológicos da mastite clínica em ovelhas de corte criadas no norte do Paraná. O presente estudo foi realizado entre os meses de outubro de 2009 a setembro de 2010 envolvendo 54 rebanhos de ovinos de corte de diferentes raças. Durante as visitas às propriedades, um questionário foi preenchido com a finalidade de caracterizar o problema. Setenta ovelhas com mastite clínica foram examinadas e amostras de secreção láctea foram colhidas para exame microbiológico. A mastite foi considerada um problema relevante em 39 propriedades (72,3%), com frequência média de 6,74%. Casos crônicos e agudos de mastite foram observados em 69% e 31% das ovelhas examinadas, respectivamente. Em ambos os casos, a mastite flegmonosa foi a forma mais encontrada (65,5% dos casos). O agente etiológico mais prevalente foi Staphylococcus coagulase negativo (54,5%), seguido por S. aureus e A. pyogenes (11,5% cada). Mannheimia haemolytica foi isolada em dois casos. Sistema de criação não extensivo e raça Santa Inês foram identificados como fatores de risco para o desenvolvimento de mastite clínica. Secagem das fêmeas após 120 dias de lactação e separação de fêmeas doentes do rebanho foram associadas com menor ocorrência da doença. Recomenda-se a limpeza adequada das instalações e a secagem mais tardia, principalmente em rebanhos Santa Inês. Mastits is infrequent in meat ewes. However Santa Ines ewes have a high incidence of this disease and it is severe and difficult to treat. The goal of this study was to characterize clinical, epidemiological and etiological aspects of clinical mastitis in meat ewes reared in the north of Parana, Brazil. Fifith four farms were visited from October 2009 to September 2010. The surveyed data included frequency, breeds of sheep affected, lamb mortality rates, main clinical signs, attempts and outcome of treatment, method and period of weaning and management features. Seventy ewes with clinical mastitis were fully examinated and samples of mammary secretion were asseptically taken for bacteriological culture. Mastitis was identified in 39 farms (72.3%) as a relevant problem (mean frequency was 6,74%). Chronic and acute mastitis were observed in 69% and 31% of the examinated ewes, respectively. In both cases, phlegmonous mastitis was the most prevalent form (65.5%). Coagulase negative Staphylococccus (CNS) was the main isolated microorganism (54.5%), followed by Staphylococcus aureus and Arcanobacterium pyogenes (11.5%, each one). Mannheimia haemolytica was found in two cases. The risk factors for clinical mastitis were intensive management system and Santa Ines breed. Weaning after 120 days of lactation and isolation of affected ewes were associated with lower frequency of mastitis. Preventive measures recommended are daily cleaning of facilities and delayed weaning, mainly in Santa Ines flocks.

The purpose of this research was to evaluate the effects of evaporative cooling in freestall on mastitis occurrence, milk production, and composition, as well as cortisol, T3 (triiodothyronine), and T4 (thyroxin) levels in lactating dairy cows. Twenty-eight multiparous cows averaging 70 ± 10 day postpartum were used in four treatments from January to March 2003. The treatments were: Day (cooling from 7:00 a.m. to 7:00 p.m.); Night (cooling from 7:00 p.m. to 7:00 a.m.); 24-hour (cooling 24-hour); and Control (no cooling). Wired cup test was used for clinical mastitis diagnosis, and the California Mastitis Test (CMT) was used to identify subclinical mastitis. Blood and milk samples were taken weekly for microbiological and hormonal analyses. The cortisol levels were higher than normal values in all treatment groups, suggesting stress conditions, but T3 and T4 levels remained normal in all groups. The occurrence of subclinical mastitis was lower in Day and Night groups than in Control and 24-hour groups. Regarding the microbiological analyses, in all groups the isolation of Corynebacterium sp. from milk samples increased while negative coagulase staphylococci (CNS) declined as etiological agents of subclinical mastitis. However, in Day and 24-hour groups, coagulase positive staphylococci (CPS) increased mainly Staphylococcus aureus (49.8% and 47.7% respectively). The Night group showed a decrease in subclinical mastitis occurrences. Our data indicate that all animals subjected to treatments presented high levels of cortisol, indicating a stress condition. The Night treatment presented a reduction in microbial isolation, suggesting a reduced susceptibility to mastitis. O trabalho teve como objetivo avaliar a eficiência do sistema de resfriamento adiabático evaporativo, acionado em diferentes horários, em instalação do tipo freestall e seus reflexos sobre a ocorrência de mastite, produção e composição do leite e respostas hormonais de vacas em lactação. Foram utilizadas 28 vacas em lactação (70±10 dias), multíparas, das raças Holandesa Preta e Branca e Pardo Suíça, com produção média diária de 23±2,3 kg leite/dia. O período experimental de 56 dias teve início em 20 de janeiro de 2003. Os tratamentos foram: Controle (sem resfriamento); Dia (resfriamento 7 as 19 h); Noite (resfriamento 19 às 7 h) e 24 horas (resfriamento durante 24 h). A temperatura de bulbo seco (TBS), umidade relativa do ar (UR) e a temperatura de globo negro (TGN) foram mensuradas ao longo das 24 horas. A ordenha foi realizada às 7 h e 19 h. Amostragens semanais de leite e sangue foram realizadas para análise da composição do leite (gordura, proteína, lactose e contagem de células somáticas) e determinações hormonais de cortisol, tiroxina (T4) e triiodotironina (T3). Para avaliação da ocorrência de mastite clínica e subclínica foram feitos exames semanais de TAMIS (caneca de fundo preto) e California Mastitis Test (CMT). Foram colhidas amostras de leite de todos os quartos para identificação microbiológica dos agentes causais da mastite. O tratamento Dia diminuiu (P0,05) para a produção e composição do leite. Nos animais do tratamento Os níveis de cortisol mostraram-se acima (P

Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2017-02-10T14:31:41Z No. of bitstreams: 1 Vania Freire Lemos.pdf: 1507844 bytes, checksum: cbb75eb979bd39586c08dadf5aea6579 (MD5) Made available in DSpace on 2017-02-10T14:31:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vania Freire Lemos.pdf: 1507844 bytes, checksum: cbb75eb979bd39586c08dadf5aea6579 (MD5) Previous issue date: 2013-02-11 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq The objective of this work was to evaluate dynamics of the proteinogram of blood serum and whey protein of Santa Ines sheep breed following the antipartum period and during lactation, and to compare/to quantify proteins detected at eletrophoresis of the whey protein from healthy and infectious mammary glands in different phases of lactation. Thrirty four sheeps submitted to half-intensive system with same sanitary and nutritional management has been followed. For accomplishment of proteinogram of the sheep, they had been investigated during approximately 10 days from antipartum and 15, 30, 60 and 90 days postpartum, moments where clinical examination of mammary gland was carried through. Blood serum was evaluated at antipartum moment and proteinogram of whey protein at subsequent moments. Bacteriological culture and biochemist characterization of milk samples for confirmation of healthy and infected glands was performed. Separation of protein fractions was carried through using sodium dodecil sulphate polyacrylamide gel eletrophoresis (SDS-PAGE). For the blood serum it was observed quantification of nine proteins with significant influence in IgG. At whey protein, influence of the phases of lactation was identified eigth proteins, having albumin, IgG and β - lactoglobulin.. Comparing healthy and infected glands it was verified that hatptoglobin and α-1 acid glycoprotein, lactoferrin, albumin and immunoglobulins IgA and IgG in whey protein act as potentials biomarkers of infection in mammary gland of ovine species. Objetivou-se neste trabalho avaliar a dinâmica do proteinograma do soro sangüíneo e lácteo de ovelhas da raça Santa Inês acompanhadas no período que antecedeu o parto e durante a lactação e comparar/quantificar as proteínas detectadas no traçado eletroforético do soro lácteo de glândulas mamárias sadias e infectadas em diferentes fases da lactação. Foram acompanhadas 34 ovelhas submetidas ao sistema de criação semi-intensivo, com mesmo manejo higiênico, sanitário e nutricional. Para a realização do proteinograma as ovelhas foram investigadas durante, aproximadamente 10 dias que precedeu o parto e 15, 30, 60 e 90 dias após o parto, momentos em que foi realizado o exame clínico da glândula mamária. O proteinograma sangüíneo foi efetuado a partir do momento pré parto e o proteinograma do soro lácteo nos momentos subseqüentes. Realizou-se o cultivo bacteriológico e a caracterização bioquímica das amostras de leite para confirmação de glândulas sadias e infectadas. A separação das frações protéicas foi realizada utilizando-se eletroforese em gel de poliacrilamida contendo dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE). Para o soro sanguíneo observou-se a quantificação de nove proteínas observando influência significativa somente na IgG; no soro lácteo identificou-se oito proteínas havendo influência das fases de lactação na albumina, IgG e β - lactoglobulina. Ccomparando glândulas sadias e infectadas verificou-se que a hatptoglobina, α-1 glicoproteína ácida, lactoferrina, albumina e as imunoglobulinas IgA e IgG presentes no soro lácteo atuam como biomarcadores de infecção na glândula mamária na espécie ovina.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-08-17T12:45:26Z No. of bitstreams: 1 Eduardo Levi Sousa Guarana.pdf: 2109954 bytes, checksum: f0acb1cbcb8908ca98a1cd46800161e4 (MD5) Made available in DSpace on 2016-08-17T12:45:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Eduardo Levi Sousa Guarana.pdf: 2109954 bytes, checksum: f0acb1cbcb8908ca98a1cd46800161e4 (MD5) Previous issue date: 2011-02-18 Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq This study aimed to evaluate the dynamics of the intramammary infection on different stages of lactation (beggining, middle and ending) and its impact in the physical-chemical composition of milk from Santa Inês ewes. Thirty four primiparous and multiparous Santa Inês ewes raised under semi-intensive and submitted to the same sanitary and nutritional management during all lactation period were studied. The moments of evaluation and sampling were approximately 10 days before parturition (colostrum formation phase), 15 days postpartum (dpp), 30 dpp, 60 dpp and 90 dpp (weaning), moments in which it was conducted clinical examination of the mammary gland. The bacteriological and susceptibility profile of isolates were performed at all times; and in the postpartum moments also perform the direct counting of somatic cells (SCC) and physico-chemical evaluation of milk (fat, protein and lactose contents, density, Dornic acidity, electric conductivity, pH and chloride content). Based on bacterial growth samples were characterized as being from healthy (G1) or infected mammary glands (G2) in the respective moments. Variance analysis was employed and the F statistics with its respective level of significance (p) was calculated; in the descriptive study of the variables studied it was used a frequency distribution (%).All ewes were seronegative for lentiviruses. It was observed an elevation (P

Objetivou-se com este trabalho estudar a etiologia da mastite em ovelhas na região nordeste do Pará, além de estabelecer o perfil de sensibilidade das bactérias isoladas frente a antimicrobianos. Foram examinadas 176 ovelhas da raça Santa Inês, em lactação, mantidas em sistema semi-intensivo, pertencentes a sete propriedades especializadas na criação de ovinos. Foi realizado o exame clínico da glândula mamária, o exame macroscópico da secreção láctea por meio do Teste da Caneca Telada, o California Mastitis Test (CMT), o exame microbiológico do leite e o antibiograma. Das 352 metades mamárias estudadas (176 ovelhas), 21 (5,97%) apresentaram mastite clínica, 26 (7,39%) apresentaram mastite subclínica e 305 (86,64%) metades mamárias foram negativas. A maioria dos animais acometidos pela mastite estava no terço médio da lactação, com menor número de crias e maior número de lactações. Na mastite clínica (MC) as bactérias isoladas foram Staphylococcus spp. coagulase negativo (42,9%); Staphylococcus aureus (9,52%); Streptococcus spp. (4,76%) e Escherichia coli (4,76%). As associações observadas foram Staphylococcus aureus e Streptococcus spp. (4,76%); Staphylococcus spp. coagulase negativo não hemolítica, Staphylococcus spp. coagulase negativo hemolítica e Staphylococcus spp. coagulase negativo pigmento não hemolítica (4,76%). Já na mastite subclínica (MSC), as bactérias isoladas foram Staphylococcus spp. coagulase negativo (26,9%); Staphylococcus aureus (15,4%); Streptococcus spp. (7,69%); Escherichia coli (7,69%) e Citrobacter freundii (11,5%). A associação observada foi Staphylococcus spp. coagulase negativo não hemolítica e Staphylococcus spp. coagulase negativo hemolítica (3,85%). Os antimicrobianos com maior eficácia contra os agentes isolados Gram positivos foram penicilina/novobiocina (100%), cefalotina (100%) e florfenicol (100%) e contra o Citrobacter freundii foram a ampicilina (100%) e florfenicol (100%). Já em relação a Escherichia coli, 66,7% dos isolados mostraram-se resistentes à ampicilina, cefalotina, florfenicol e tetraciclina. A mastite está presente em ovelhas no estado do Pará, havendo a necessidade de estimar, em estudos futuros, as perdas econômicas causadas por essa enfermidade. O CMT apresentou resultados satisfatórios, podendo ser recomendado como teste de triagem para o diagnóstico de casos individuais de mastite subclínica em ovinos, uma vez que apresentou boa relação com o exame microbiológico. No antibiograma foi observado que a maioria dos agentes isolados apresenta-se sensível aos diferentes antimicrobianos testados, sendo os antibióticos com melhor eficiência o florfenicol e a cefoxitina. The objective of this paper was to study the etiology of mastitis in sheep at northeastern Pará, and to establish the sensitivity of isolated bacteria to antibiotics. A total of 176 Santa Inês nursing sheep kept in semi-intensive system from seven properties were examined. The mammary gland was clinically examined and the milk was submitted to the Caneca Telada Test, the California Mastitis Test (CMT), bacteriological examinations and antibiograms. Out of the 352 mammary halves (176 sheep), 5.9% (21/352) had clinical mastitis and by the CMT test, 7.39% (26/352) had subclinical mastitis and 86.64% (305/352) mammary halves did not have mastitis. Most of the animals with mastitis were in the second third of the lactation period, had less kids and more lactation periods. The following bacteria were isolated from the clinical mastitis Staphylococcus spp. coagulase negative (42,9%); Staphylococcus aureus (9.52%); Streptococcus spp. (4.76%) and Escherichia coli (4.76%). Were observed associations of Staphylococcus aureus and Streptococcus spp. (4,76%); Staphylococcus spp. coagulase negative nonhemolytic, Staphylococcus spp. coagulase negative hemolytic and Staphylococcus spp. coagulase negative non hemolytic pigment (4.76%). Already in subclinical mastitis the bacteria isolated were Staphylococcus spp. coagulase negative (26.9%); Staphylococcus aureus (15.,4%); Streptococcus spp. (7.69%); Escherichia coli (7.69%) and Citrobacter freundii (11.5%). Were observed associations of Staphylococcus spp. coagulase negative nonhemolytic and Staphylococcus spp. coagulase negative hemolytic (3.85%). The most efficient antibiotics for the Gram positive agents were penicile/novobiocine (100%), cefalotine (100%) and florfenicol (100%) and for the Citrobacter freundii were ampicilina (100%) and florfenicol (100%). In relation to Escherichia coli, 66.7% of isolates to ampicillin, cephalothin, florfenicol and tetracycline were resistant. Mastitis is present in sheep in the State of Pará, and it's necessary to estimate, in future studies, the economic losses caused by this disease. The CMT show satisfactory results and can be recommended as a screening test for diagnosing individual cases of subclinical mastitis in sheep, once had a good relationship with the microbiological examination. In the antibiogram where most of the isolated agents appear sensitive to different antibiotics tested, the antibiotics with the best efficiency were florfenicol and cefoxitin.