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Made available in DSpace on 2022-04-29T08:46:34Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2022-01-01 Recurrence of COVID-19 in recovered patients has been increasingly reported. However, the immune mechanisms behind the recurrence have not been thoroughly investigated. The presence of neutralizing antibodies (nAbs) in recurrence/reinfection cases suggests that other types of immune response are involved in protection against recurrence. Here, we investigated the innate type I/III interferon (IFN) response, binding and nAb assays and T-cell responses to severe acute respiratory distress syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2) with IFN gamma (IFNγ) enzyme-linked spot assay (ELISPOT) in three pairs of young adult monozygotic (MZ) twins with previous confirmed COVID-19, one of them presenting a severe recurrence four months after the initial infection. Twin studies have been of paramount importance to comprehend the immunogenetics of infectious diseases. Each MZ twin pair was previously exposed to SARS-CoV-2, as seen by clinical reports. The six individuals presented similar overall recovered immune responses except for the recurrence case, who presented a drastically reduced number of recognized SARS-CoV-2 T-cell epitopes on ELISPOT as compared to her twin sister and the other twin pairs. Our results suggest that the lack of a broad T-cell response to initial infection may have led to recurrence, emphasizing that an effective SARS-CoV-2-specific T-cell immune response is key for complete viral control and avoidance of clinical recurrence of COVID-19. Human Genome and Stem Cell Research Center (HUG-CELL) Biosciences Institute Universidade de São Paulo, SP Laboratory of Immunology Heart Institute (InCor) Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo (HCFMUSP), SP Institute for Investigation in Immunology Instituto Nacional de Ciência e Tecnologia - Iii-INCT, SP Division of Clinical Immunology and Allergy Department of Medicine Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo (FMUSP), SP Department of Microbiology Immunology and Parasitology Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP/EPM), SP Department of Parasitology Biosciences Institute Universidade de São Paulo, SP School of Medicine Universidade Estadual Paulista (UNESP), SP Fleury Laboratory, SP School of Medicine Universidade Estadual Paulista (UNESP), SP

We herein analyzed all available protein-protein interfaces of the immune complexes from the Protein Data Bank whose antigens belong to pathogens or cancers that are modulated by fever in mammalian hosts. We also included, for comparison, protein interfaces from immune complexes that are not significantly modulated by the fever response. We highlight the distribution of amino acids at these viral, bacterial, protozoan and cancer epitopes, and at their corresponding paratopes that belong strictly to monoclonal antibodies. We identify the "hotspots", i.e. residues that are highly connected at such interfaces, and assess the structural, kinetic and thermodynamic parameters responsible for complex formation. We argue for an evolutionary pressure for the types of residues at these protein interfaces that may explain the role of fever as a selective force for optimizing antibody binding to antigens.

Accurate and timely diagnosis of primary immunodeficiencies (PID) is an ongoing effort. Individuals with PID can be severely impacted by their disease and many experience chronic complications, treatment burden, and reduced quality of life (QoL). This review focuses on the impact of delayed diagnosis and treatment burden on patient QoL and outcomes. Adults tend to experience longer delays in diagnosis than pediatric populations. The median diagnostic delay has reduced over recent decades, but remains high for some antibody deficiency variants, such as common variable immunodeficiency. The largest burden impacting QoL tends to be poorly controlled disease and persistent chronic conditions rather than treatment burden. Hospitalization, physician/emergency room visits, and bronchiectasis were the most expensive PID complications prior to diagnosis and cost analyses estimate cost reductions once appropriate treatment is initiated. A combination of poor awareness, lack of infrastructure, and resources supporting national registries play a major role in delayed diagnosis.

Orientador: Mariana Freitas Nery Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Apesar dos constantes desafios microbianos do meio ambiente, o corpo humano evita infecções por um sistema específico e incrivelmente diverso que pode combater uma miríade de patógenos. O sistema imune adaptativo (AIS) é um mecanismo de defesa muito complexo. O AIS possui dois grupos diferentes de células e moléculas, denominados linfócitos B e T, que se defendem contra micróbios extracelulares e intracelulares. Os linfócitos B sintetizam exclusivamente anticorpos - chamados coletivamente de imunoglobulinas (IG) - produzidos em grande variedade, cada um com diferentes sequências de DNA e, consequentemente, diferentes sítios de ligação ao antígeno. O complexo de genes ativadores de recombinação 1 (RAG1) e 2 (RAG2) catalisa a montagem aleatória de segmentos gênicos variáveis ??(V), diversidade (D) e junção (J) que estão presentes no genoma em inúmeras cópias e geram a enorme variedade dos anticorpos montados e receptores de antígeno. Acredita-se que a origem dos RAGs deve ter sido crucial para a imunidade adaptativa, já que todos os genes BCR e TCR usam o mesmo mecanismo de rearranjo V(D)J. A ocupação de novos ambientes é um cenário favorável ao surgimento e diversificação de novas espécies. A transição dos tetrápodes da terra para a água é um exemplo clássico da ocupação de novos ambientes, caracterizados por grandes transformações morfológicas e fisiológicas. Cetáceos e sirênios constituem modelos interessantes de espécie a serem estudados considerando suas mudanças ambientais da terra para a água, bem como sua segunda radiação de ambientes marinhos para fluviais. A fim de aprofundar nosso conhecimento sobre o sistema imune adaptativo de mamíferos aquáticos por meio de uma perspectiva evolutiva considerando diferentes transições ambientais, o Capítulo 1 traz análises evolutivas dos genes RAG1 e RAG2 em Cetáceos, demonstrando que os genes RAG1 e RAG2 permaneceram bastante conservados entre os tetrápodes, e evolução diferencial acontecendo nesses genes intimamente ligados na linhagem dos cetáceos, com RAG1 sendo menos conservado quando comparado a outros mamíferos da filogenia. O capítulo 2 é a primeira caracterização do locus da cadeia leve da imunoglobulina em Trichechus manatus e Trichechus inunguis, mostrando que o número de segmentos codificados genomicamente e, consequentemente, a diversidade segmentar é limitada nos peixes-boi. Os peixes-boi parecem ter apenas alguns pseudogenes V dentro da cadeia lambda organizados de maneira diferente como visto na maioria dos tetrápodes, permitindo que os peixes-boi criem muito pouca diversidade de anticorpos através da região da cadeia leve da imunoglobulina Abstract: Despite the constant microbial challenges from the environment, the body prevents infections by a specific and incredibly diverse system that can fight myriad pathogens. The adaptive immune system (AIS) is a very complex defense mechanism. The AIS has two different groups of cells and molecules, called B and T lymphocytes, that defend against extracellular microbes and intracellular microbes. B lymphocytes exclusively synthesize antibodies - collectively called immunoglobulins (IG) - produced in great variety, each with different DNA sequences and, consequently, different antigen-binding sites. Recombination-activating genes 1 (RAG1) and 2 (RAG2) genes complex catalyzes random assembly of variable (V), diversity (D), and joining (J) gene segments that are present in the genome in numerous copies and generate the enormous variety of the assembled antibodies and antigen receptors. It is believed that the RAGs origin must have been crucial for adaptive immunity, as all of the BCR and TCR genes use the same mechanism of V(D)J rearrangement. The occupation of new environments is a favorable scenario for the emergence and diversification of new species, and the molecular changes taking place in the genome of organisms during this occupation have ceased to be a mystery. Tetrapods’ transition from land to water is a classic example of the occupation of new environments, characterized by great morphological and physiological transformations. Cetaceans and sirenians make an interesting model species to study considering their environmental changes from land to water, as well as their second radiation from marine to fluvial environments. In order to deepen our knowledge about the adaptive immune system of aquatic mammals through an evolutionary perspective considering different environmental transitions, Chapter 1 brings evolutionary analyses of the RAG1 and RAG2 genes in Cetaceans, demonstrating that RAG1 and RAG2 genes remained fairly conserved among tetrapods, and differential evolution happening in these closely linked genes in the Cetacea lineage, with RAG1 being less conserved when compared to other mammals of the phylogeny. Chapter 2 is the first characterization of both Trichechus manatus and Trichechus inunguis immunoglobulin light chain locus, showing that the number of genomically encoded segments and, consequently, the segmental diversity is limited in manatees. Manatees seem to have only a few V pseudogenes within the lambda chain organized in a different manner as seen in most tetrapods, enabling manatees to create very little antibody diversity through the immunoglobulin light chain region Mestrado Genética Animal e Evolução Mestra em Genética e Biologia Molecular FAPESP 2017/14831-2 CAPES 001

Background Sickle cell disease (SCD), one of the most common single-gene disorders, is caused by mutations in the hemoglobin s-chain gene. Clinical presentation is heterogeneous, and inflammation is a common condition. Thereby, we hypothesized that inflammasome and related cytokine IL-1s could represent significant SCD pathogenesis contributors. Material and methods 161 SCD (SS/Sβ) patients were enrolled for the study. Seven single nucleotide polymorphisms (SNPs) in 5 inflammasome genes (NLRP1, NLRP3, NLRC4, CARD8, IL1B) were selected based on minor allele frequency. Total peripheral blood mononuclear cells (PBMC) and monocytes were isolated from 10 out of 161 SCD patients (HbSS) and 10 healthy donors (control group, Ctrl) for inflammasome analysis. Results SCD patients presented a functional impairment of inflammasome, with monocytes and peripheral blood mononuclear cells (PBMC) exhibiting a different NLRP3 inflammasome activation rate. Gain-of-function variants in NLRP1 and IL1B genes resulted associated with a mild SCD clinical presentation. Discussion Our results can contribute to the understanding of SCD inflammation. SCD patients showed possible exhaustion of monocytes due to chronic inflammation, moreover others cells in PBMC can contribute to the NLRP3 inflammasome activation. NLRP1 gain-of-function was associated with mild clinical presentation, suggesting that other inflammasome receptors can be involved in SCD. This is the first study reporting a significant contribution of inflammasome SNPs in SCD.

The immune system can recognize microbes and sterile tissue damage. Among the damage-associated molecular patterns (DAMPs), uric acid is considered a major component which can trigger inflammation. It represents a breakpoint in the evolutionary history of humans as our ancestors lost the uricase gene, the enzyme responsible for its cleavage. High soluble uric acid (sUA) concentration is able to increase IL-1β in murine, but not human macrophages. We observed that sUA increased the mRNA expression of Naip1 in murine macrophages, and, therefore, we hypothesized that the recognition of sUA can be made by a Naip1-Nlrp3 inflammasome platform. Additionally, we used genome-wide transcriptome analysis, functional analyses and structural modeling predictions and observed that virus-transduction of murine Naip1 into human macrophages induced IL-1β after sUA stimulus, besides leading to fatty acid production and an inflammation-related response. Moreover, pharmacologic inhibition and genetic loss of Nlrp3 led to decreased IL-1β production upon sUA stimulus. Surface plasmon resonance and quartz crystal microbalance showed that sUA is able to interact with Naip1. Naip could be a lost receptor for sUA in the evolutionary process and a better understanding of the immune modulatory function of sUA could lead to design rational novel anti-hyperuricemic therapies.

The aim of this study was to evaluate the expression of human leukocyte antigen G (HLA-G) in leprosy. Biopsy and serum samples were collected from 18 patients presenting with leprosy and from healthy controls. Samples were analyzed using immunohistochemistry and ELISA techniques. HLA-G expression was observed in biopsy samples of all patients. The healthy control samples were consistently negative for HLA-G expression. Control plasma samples displayed significantly higher HLA-G expression than those from the patients (p

The tumor microenvironment (TME) is complex, and its composition and dynamics determine tumor fate. From tumor cells themselves, with their capacity for unlimited replication, migration, and invasion, to fibroblasts, endothelial cells, and immune cells, which can have pro and/or anti-tumor potential, interaction among these elements determines tumor progression. The understanding of molecular pathways involved in immune escape has permitted the development of cancer immunotherapies. Targeting molecules or biological processes that inhibit antitumor immune responses has allowed a significant improvement in cancer patient’s prognosis. Autophagy is a cellular process required to eliminate dysfunctional proteins and organelles, maintaining cellular homeostasis. Usually a process associated with protection against cancer, autophagy associated to cancer cells has been reported in response to hypoxia, nutrient deficiency, and oxidative stress, conditions frequently observed in the TME. Recent studies have shown a paradoxical association between autophagy and tumor immune responses. Tumor cell autophagy increases the expression of inhibitory molecules, such as PD-1 and CTLA-4, which block antitumor cytotoxic responses. Moreover, it can also directly affect antitumor immune responses by, for example, degrading NK cell-derived granzyme B and protecting tumor cells. Interestingly, the activation of autophagy on dendritic cells has the opposite effects, enhancing antigen presentation, triggering CD8+ T cells cytotoxic activity, and reducing tumor growth. Therefore, this review will focus on the most recent aspects of autophagy and tumor immune environment. We describe the dual role of autophagy in modulating tumor immune responses and discuss some aspects that must be considered to improve cancer treatment.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento, Florianópolis, 2020. Modelos animais são amplamente utilizados para tentar entender como os mecanismos neurobiológicos reagem a um agente estressor, o que pode ajudar na identificação de tratamentos seguros e eficazes para algumas patologias humanas. As linhagens Lewis (LEW) e Spontaneously Hypertensive Rats (SHR) são consideradas modelos genéticos para o estudo comportamental da emocionalidade por serem linhagens isogênicas que apresentam diferentes respostas comportamentais quando submetidos aos mesmos estímulos estressores. O objetivo desse estudo foi investigar, através de uma revisão metodológica, quais fatores ambientais e genéticos influenciam no comportamento diferencial das linhagens LEW e SHR. Os estudos encontrados através das buscas no banco de dados totalizaram 255 artigos, 8 deles removidos por duplicidade, 13 excluídos por serem capítulos de livros e revisões e 198 excluídos após análise do texto na íntegra. Os resultados demonstraram que os efeitos de algumas drogas foram contrastantes entre as linhagens como também entre os sexos e que a razão desse contraste ainda não foi elucidada. Além disso, a linhagem LEW apresenta pouca disposição ao exercício físico e maior hipersensibilidade intestinal quando comparada a SHR. Através desses estudos é possível sugerir uma provável diferença nos sistemas gabaérgico e dopaminérgico das linhagens LEW e SHR, o que influenciaria na diferença comportamental dessas linhagens. Quanto a influência genética pode ser observada que os QTL posicionados nos cromossomos 4 e 7 estão relacionados ao comportamento diferencial entre as linhagens. O QTL Anxrr16 apresentou grande importância nas pesquisas por conta de sua influência no comportamento de ansiedade/emocionalidade e segundo o Rat Genome Database ele tem como gene- candidato o Tacr1 Abstract: Animal models are widely used to try to understand how neurobiological mechanisms react to a stressor, which may help in identifying safe and effective treatments for some human pathologies. The Lewis (LEW) and Spontaneously Hypertensive Rats (SHR) strains are considered genetic models for the study of emotionality once they are isogenic strains that present different behavioral responses when subjected to the same stressors. This study aimed to investigate, through a methodological review, which environmental and genetic factors influence the differential behavior of LEW and SHR strains. The studies found after the database searches totaled 255 articles, 8 of them removed by duplicity, 13 excluded because they were book chapters and reviews and 198 excluded after full-text analysis. The results showed that the effects of some drugs were contrasting between the strains as well as between the sexes and that the reason for this contrast remains unclear. Besides, the LEW strain is less likely to exercise and presents more intestinal hypersensitive compared to SHR. Considering these studies, it is possible to observe a difference that could be related to gabaergic and dopaminergic systems of LEW and SHR strains, which may influence the behavioral difference of these strains. As for the genetic influence, it can be observed that the QTL positioned on chromosomes 4 and 7 are related to the differences observed between strains. The QTL Anxrr16 was of great importance in the research because of its influence on anxiety/emotionality behavior and according to the Rat Genome Database, it has the candidate gene Tacr1.

Systemic lupus erythematosus (SLE) is a complex autoimmune disorder involving heterogeneous clinical manifestations and numerous susceptibility genes. Several findings evidence the critical role of inflammasomes in the predisposition to autoimmune diseases and in SLE. We investigated whether inflammasome polymorphins could affect susceptibility to develop and/or severity SLE. Moreover, differences in inflammasome activation in peripheral blood were also evaluated in SLE patients and controls. The distribution of 13 SNPs in eight inflammasome genes was evaluated. To assess inflammasome priming in peripheral blood monocytes of SLE and controls, differential expression of selected inflammasome genes and IL-1ß production was analyzed in resting condition as well as after LPS and ATP stimulation. Results showed that the gain-of-function variant rs10754558 (NLRP3) was significantly more frequent in SLE patients with nephritis, reinforcing the concept of a key role of NLRP3 inflammasome not only in SLE but also especially in kidney disease. SLE monocytes in resting condition showed a higher level of IL-1ß expression and produced higher levels of IL-1ß when stimulated with LPS+ATP comparing to controls. The stimulation induced a significant expression of NLRP1, AIM2, CASP1, and IL1B genes, suggesting that the NLRP1 inflammasome is responsible for the IL-1ß production observed in monocytes. These data emphasized once more the important contribution of inflammasome in SLE-associated inflammation.

Objective: To study the genetic susceptibility to neuromyelitis optica (NMO) as well as the relationship between HLA genotypes and susceptibility to the disease in the southern Brazilian population. Methods: We analyzed patients with NMO, who met criteria for Wingerchuk's diagnosis of NMO, with detected serum anti-AQP4-IgG antibody. The HLA genotyping was performed by high-resolution techniques (Sanger sequencing) in patients and controls. The HLA genotypes were statistically compared with a paired control population. Results: The HLA genotyping revealed the diversity of the southern Brazilian population whose HLA profile resembled European and Asian populations. Some alleles had statistical correlations with a positive association (increased susceptibility) with NMO, particularly the HLA-DRB1*04:05 and *16:02. Conclusions: In our study, the HLA genotype was different to that previously reported for other Brazilian populations. Although our study had a small cohort, HLA genotypes were associated with increased susceptibility to NMO for HLA-DRB1*04:05 and *16:02. The alleles of HLA class I HLA-A*02:08 and *30:09, HLA-B*08:04 and *35:04 showed an association before the Bonferroni correction. RESUMO Objetivo: Estudar a suscetibilidade genética a neuromielite óptica (NMO) assim como sua relação com o genótipo HLA na população do sul do Brasil. Métodos: Nós analisamos pacientes com NMO que preenchiam os critérios diagnósticos de Wingerchuk para NMO, com presença do anticorpo anti-AQP4-IgG no soro. O genótipo HLA foi realizado usando técnicas de alta resolução (sequenciamento de Sanger) em pacientes e controles. Genótipos HLA foram estatisticamente comparados com uma população controle pareada. Resultados: Genotipagem HLA revelou a diversidade da população sul brasileira cujo perfil HLA lembra as populações europeia e asiática. Alguns alelos tiveram correlação estatística com associação positiva (suscetibilidade aumentada) com NMO, particularmente o HLA-DRB1*04:05 e *16:02. Conclusões: Em nosso estudo, o genótipo HLA foi diferente do previamente relatado em outras populações brasileiras. Embora o número de pacientes tenha sido pequeno, HLA específicos foram associados com suscetibilidade aumentada a NMO para HLA-DRB1*04:05, *16:02. Os alelos HLA classe I HLA*02:08 e *30:09, HLA-B*08:04 e *35:04 tiveram associação antes da correção de Bonferroni.

A ativação da imunidade adaptativa mediada por linfócitos T citotóxicos (LTC) e células natural killer (NK) é controlada pela expressão de receptores e moléculas inibitórias, que atuam prevenindo a exacerbação imunológica e apoptose por excesso de ativação. As células tumorais são capazes utilizar estes mesmos ligantes como mecanismo de escape tumoral, inibindo o reconhecimento e ativação das células efetoras, levando-as ao estado de irresponsividade. Alterações no funcionamento do sistema imune podem interferir diretamente na sobrevida do paciente. Por isso, informações a respeito do perfil imunológico são necessários para o desenvolvimento de uma terapia individualizada para o tratamento destas doenças. Neste estudo foi avaliada a expressão gênica de receptores e moléculas inibitórias e de proteínas citolíticas em pacientes com linfoma não-Hodgkin (LNH) e mieloma múltiplo (MM) em comparação a indivíduos saudáveis. O aumento na expressão gênica de granzima B associado a redução na expressão de Fas-L e PD-L1 demonstrou a ativação do sistema imunológico em pacientes com LNH. A redução dos níveis das moléculas inibitórias atuou como fator ativador da resposta imune, que poderia acarretar na inibição da autorregulação das células efetoras, levando-as a maior ativação e atividade citotóxica do sistema imunológico. Por sua vez, na ausência de expressões significativas, a redução do sistema imunológico em pacientes com MM pode ser comprovada pelas correlações inversamente proporcionais entre as proteínas citolíticas e receptores ou moléculas inibitórios. Neste cenário, o aumento na expressão das moléculas inibitórias atua simultaneamente às células tumorais, promovendo uma regulação negativa do sistema imunológico, auxiliando no processo de imunorregulação. A próxima etapa deste estudo é correlacionar a expressão destes fatores tanto no sangue periférico quanto no microambiente tumoral, em conjunto com a análise de sobrevida, para um melhor entendimento destes mecanismos na resposta imune. The activation of adaptive immunity mediated by cytotoxic T lymphocytes (CTL) and natural killer (NK) is controlled by expression of inhibitory receptors and molecules, which act by preventing exacerbation and immune activation by excessive apoptosis. Tumor cells are able to use these same ligands as a mechanism of tumor escape, by inhibiting the recognition and activation of effector cells, leading to the state of irresponsiveness. Changes in the functioning of the immune system can directly interfere with therapeutic response and / or prognosis of the disease. Therefore, information regarding the immunological profile is necessary for the development of an individualized therapy for the treatment of these diseases. In this study, we evaluated the gene expression of cytolytic protein and inhibitory receptors or molecules in patients with non-Hodgkin's lymphoma (NHL) and multiple myeloma (MM) compared to healthy individuals. The increase in granzyme B gene expression associated with reduced expression of Fas-L and PD-L1 demonstrated the activation of the immune system in patients with NHL. The reduction in the levels of inhibitory molecules served as activating factor immune response, which could result in inhibition of self-regulation of effector cells, leading to greater activation and the cytotoxic activity of the immune system. In turn, in the absence of significant expressions, the reduction of the immune system in MM patients can be proved by the inversely proportional correlations between cytolytic proteins and inhibitory receptors or molecules. In this scenario, the increase in the expression of the inhibitory molecules acts simultaneously to the tumor cells, promoting a negative regulation of the immune system, aiding in the process of immunoregulation. The next step of this study is to correlate the expression of these factors in both peripheral blood and in the tumor microenvironment in conjunction with survival analysis for a better understanding of these mechanisms in the immune response. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais

The importance of inflammasome, and related cytokines IL-1ß and IL-18, in host defense against pathogens is well documented, however, at the same time, dysregulation of inflammasome has been associated to multifactorial diseases characterized by chronic inflammation (i.e.: metabolic disorders, cardiovascular diseases, neurodegenerative diseases, autoimmunity, cancer). Inflammasome activation has been described in response to HIV-1 and possibly contributes to the resistance against virus establishment, however, on the other hand, when viral infection becomes chronic, independently from antiretroviral therapy, the increase constitutive activation of inflammasome has been eventually associated to a worse prognosis, raising the question about the role played by inflammasome and/or some specific receptors in this context. Due to the chance to imply targeted therapies that inhibit inflammasome activation and/or cytokines release, it will be important to define the impact of the complex in the pathogenesis of HIV. The purpose of this review is to depict the double-faced inflammasome role in HIV-1 infection, trying to unveil whether besides its role in first line defense against the virus, it exerts a harmful effect during the chronic phase of infection.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento, Florianópolis, 2019 O câncer de colo de útero (CCU), também conhecido como câncer cervical, é o terceiro tipo mais frequente na população feminina e a segunda causa de mortalidade de mulheres no mundo. O sistema imune tem um papel essencial no controle de neoplasias, que se desenvolvem através do mecanismo de escape tumoral. Um gene imunorregulador com papel nesse mecanismo é o HLA-G. Esse gene possui sítios de variação (SNV) em regiões regulatórias, 5´URR e 3´UTR. Além disso, apresenta variações em sua região codificadora, como a deleção que gera o alelo nulo G*0105N e impede a expressão de algumas isoformas proteicas. Essas SNV podem influenciar na expressão do gene. O presente estudo teve como principal objetivo avaliar associações de 20 SNV da 5?URR e 10 da 3?UTR, assim como a presença do alelo G*0105N,em mulheres que apresentavam lesão de colo de útero de alto grau (LCU) (n=28) e CCU (n=32), contrastados com dois grupos controle, mulheres sem a presença de LCU (SLU) (n=52) e um grupo populacional de mulheres sem evidência da doença (POP) (n=253), visando compreender o papel dessas SNV do HLA-G no desenvolvimento de LCU e de CCU. Após análises das sequências, foram realizadas cálculos de associação. Dez sítios da 5?URR apresentaram associação com a presença de LCU ou CCU, sendo eles: -725G>C>T, -689A>G, -646A>G, -509C>G, -477C>G, -443G>A, -400G>A, -391G>A, -369C>A e -284G>A. Os haplótipos 5'URR-6 e 5'URR-8 e as combinações haplotípicas 5'URR-1 + 5'URR-6, 5'URR-1 + 5'URR-9, 5'URR-4+5'URR-5, 5'URR-5+5'URR-7, 5'URR-5+5'URR-8, 5'URR-6+5'URR-6, 5'URR-6+5'URR-9, 5'URR-7+5'URR-8 e 5'URR-9+5'URR-9 foram associados ao risco de desenvolvimento de CCU. A combinação haplotípica 5'URR-1+5'URR-1 foi associada ao menor risco no desenvolvimento da doença. Para a 3?UTR, os sítios 14pbDel/In, +3001T/C, +3027A/C e +3196G/C apresentaram associação com suscetibilidade ou proteção ao CCU. O haplótipo UTR-1 foi associado ao menor risco para o desenvolvimento da doença e o UTR-2 como fator de risco para o CCU. O G*0105N foi detectado em três mulheres do grupo caso (CCU=2; LCU=1), sendo todas heterozigotas.Concluímos que há SNV de regiões regulatórias do HLA-G associadas ao maior ou menor risco para o desenvolvimento LCU e CCU. Assim, estudos de associação genética são importantes para identificação de SNV para futuros estudos funcionais. Abstract: Cervical cancer (CCU), also known as cervical cancer, is the third most frequent type in the female population and the second leading cause of death among women worldwide.The immune system plays an essential role in the control of neoplasias, which develop through the tumor escape mechanism.An immunoregulatory gene with role in this mechanism is HLA-G. This gene has variation sites (SNV) in regulatory regions, 5'URR and 3'UTR.In addition, there are variations in its coding region, such as the deletion that generates the null allele G * 0105N and prevents the expression of some protein isoforms.These SNVs may influence gene expression. The aim of the present study was to evaluate the associations of 20 SNV of 5'URR and 10 of 3'UTR, as well as the presence of the G * 0105N allele in women with high grade uterine cervix (LCU) lesion (n = 28) and CCU (n = 32), in contrast to two control groups, women without LCU (n = 52) and a population group of women with no evidence of disease (POP) (n = 253) aiming to understand the role of these HLA-G SNV in the development of LCU and CCU.After analysis of the sequences, association calculations were performed. Ten sites of 5'URR were associated with the presence of LCU or CCU, being: -725G> C> T, -689A> G, -646A> G, -509C> G, -477C> G, -443G> A , -400G> A, -391G> A, -369C> A and -284G. The haplotypes 5'URR-6 and 5'URR-8 and the haplotype combinations 5'URR-1 + 5'URR-6, 5'URR-1 + 5'URR-9, 5'URR-4 + 5'URR -5, 5'HRR-5 + 5'RHR-7, 5'RHR-5 + 5'RHR-8, 5'RHR-6 + 5'RHR-6, 5'RHR-6 + 5'RHR-9 , 5'URR-7 + 5'URR-8 and 5'URR-9 + 5'URR-9 were associated with the risk of developing CCU. The haplotypic combination 5'URR-1 + 5'URR-1 was associated with lower risk of disease development. For 3'UTR, the 14pbDel / In, + 3001T / C, + 3027A / C and + 3196G / C sites were associated with susceptibility or protection to CCU. The UTR-1 haplotype was associated with the lowest risk for the development of the disease and UTR-2 as a risk factor for CCU. G * 0105N was detected in three women in the case group (CCU = 2; LCU = 1), all of which were heterozygous. We conclude that there are SNV of HLA-G regulatory regions associated with greater or lesser risk of developing LCU and CCU. Thus, genetic association studies are important for the identification of SNV for future functional studies.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento, Florianópolis, 2019. Artrite Reumatoide (AR), Lúpus Eritematoso Sistêmico (LES) e Psoríase são doenças inflamatórias crônicas, de origem autoimune. As três doenças possuem uma patogênese complexa, etiologia multifatorial e são desencadeadas em indivíduos geneticamente suscetíveis, expostos a determinados fatores ambientais. Vários genes têm sido associados com a suscetibilidade às Doenças Autoimunes (DAs), entre eles os que codificam proteínas envolvidas na imunomodulação. Os genes TNFRSF1A e IL28Ra têm ganhado destaque na autoimunidade pois codificam receptores que medeiam a ação de citocinas inflamatórias. A presença de polimorfismos nestes genes pode afetar a atividade inflamatória de suas respectivas citocinas, resultando em uma resposta imune anormal e contribuindo com a autoimunidade. Estudos prévios demonstraram associações dos SNPs rs1800693 (gene TNFRSF1A) e rs4649203 (gene IL28Ra) com algumas DAs, principalmente em populações de origem Europeia e Chinesa. O presente estudo teve como principal objetivo verificar uma possível associação dessas variantes com AR, LES e Psoríase e suas manifestações clínicas na população Brasileira, visando contribuir com a melhor compreensão da patogênese dessas doenças. Através de um estudo caso-controle, um total de 426 pacientes (AR, LES e Psoríase) e 194 indivíduos sem histórico de DAs foram genotipados para os polimorfismos rs1800693 e rs4649203 através do ensaio TaqMan® SNP genotyping por qPCR. As frequências alélicas e genotípicas e as análises de associação foram calculadas e analisadas entre casos e controle através do software Unphased. No estudo com TNFRSF1A, a presença do alelo rs1800693-C foi associada à suscetibilidade de AR e Psoríase e conferiu proteção para o teste de ESR elevado em AR. Em LES, demonstrou ser um fator de risco para Eritema Malar e casos de DA na família e protetivo para presença do Anti-Cardiolipina. No estudo com IL28Ra, rs4649203-G foi relacionado a proteção de LES e a suscetibilidade de AR no sexo masculino. Conferiu fator protetor para Serosite em LES e para Vasculite Reumatoide, Nódulos Reumatoides, ESR elevado e Proteína C reativa em pacientes com AR. Na Psoríase, foi relacionada ao risco de desenvolver Psoríase Gutata. O rs4649203-AG conferiu risco para o Eritema Malar em LES. Concluímos que as variantes estudadas estão associadas à suscetibilidade de AR, LES e Psoríase, bem como à determinadas manifestações clínicas. Abstract: Rheumatoid Arthritis (RA), Systemic Lupus Erythematosus (SLE) and Psoriasis are chronic inflammatory diseases with autoimmune origin. The three diseases have a complex pathogenesis, multifactorial etiology and are triggered in genetically susceptible individuals, exposed to certain environmental factors. Several genes have been associated with Autoimmune Disease (AD) susceptibility, including those that encode proteins involved in immunomodulation. The TNFRSF1A and IL28Ra genes have gained prominence in autoimmunity because they encode receptors that mediate the action of inflammatory cytokines. The presence of polymorphisms in these genes can affect the inflammatory activity of their respective cytokines, resulting in an abnormal immune response and potentially contributing to autoimmunity. Previous studies have demonstrated the association of SNPs rs1800693 (TNFRSF1A gene) and rs4649203 (IL28Ra gene) with some ADs, especially in European and Chinese populations. The present study had as main objective to verify a possible association of these variants with RA, SLE and Psoriasis and their clinical manifestations in the Brazilian population, aiming to contribute to a better understanding of disease pathogenesis. Through a case-control study, a total of 426 well characterized patients (RA, SLE and Psoriasis) and 194 individuals without history of AD were genotyped for the polymorphisms rs1800693 and rs4649203 through TaqMan® SNP genotyping assays by qPCR. Allele and genotype frequencies were calculated and analyzed between cases and controls by Unphased software. In the study with TNFRSF1A, rs1800693-C was associated with susceptibility to the development of RA and Psoriasis and conferred protection to elevated ESR in RA. In SLE, it was shown to be a risk factor for Malar Rash and cases of AD in family as well as a protective factor for the presence of Anti-Cardiolipin autoantibody. In the study with IL28Ra, rs4649203-G allele was associated to protection of SLE and susceptibility of RA in males. In addition, it was shown to be a protective factor Serositis in SLE patients and for Rheumatoid Vasculitis, Rheumatoid Nodules, elevated ESR and C- reactive protein in RA patients. In Psoriasis, was associated with the risk of developing Guttate Psoriasis. The rs4649203-AG confered risk for Malar Rash in SLE. We conclude that the variants are associated with susceptibility to RA, SLE and Psoriasis as well as to certain clinical manifestations.

International audience; Inherited IL-12Rβ1 and TYK2 deficiencies impair both IL-12- and IL-23-dependent IFN-γ immunity and are rare monogenic causes of tuberculosis, each found in less than 1/600,000 individuals. We show that homozygosity for the common TYK2 P1104A allele, which is found in about 1/600 Europeans and between 1/1000 and 1/10,000 individuals in regions other than East Asia, is more frequent in a cohort of patients with tuberculosis from endemic areas than in ethnicity-adjusted controls (P = 8.37 × 10-8; odds ratio, 89.31; 95% CI, 14.7 to 1725). Moreover, the frequency of P1104A in Europeans has decreased, from about 9% to 4.2%, over the past 4000 years, consistent with purging of this variant by endemic tuberculosis. Surprisingly, we also show that TYK2 P1104A impairs cellular responses to IL-23, but not to IFN-α, IL-10, or even IL-12, which, like IL-23, induces IFN-γ via activation of TYK2 and JAK2. Moreover, TYK2 P1104A is properly docked on cytokine receptors and can be phosphorylated by the proximal JAK, but lacks catalytic activity. Last, we show that the catalytic activity of TYK2 is essential for IL-23, but not IL-12, responses in cells expressing wild-type JAK2. In contrast, the catalytic activity of JAK2 is redundant for both IL-12 and IL-23 responses, because the catalytically inactive P1057A JAK2, which is also docked and phosphorylated, rescues signaling in cells expressing wild-type TYK2. In conclusion, homozygosity for the catalytically inactive P1104A missense variant of TYK2 selectively disrupts the induction of IFN-γ by IL-23 and is a common monogenic etiology of tuberculosis.

We evaluated the possible association between FCGR3A V/F (158) polymorphism and SLE susceptibility and clinical phenotype in 305 sequentially retrieved SLE patients and 300 healthy controls from the southeastern part of Brazil by allele-specific polymerase chain reaction. Our results showed no association between FCGR3A 158V/F alleles and susceptibility to SLE in this series of patients albeit the heterozygous genotype was strongly associated with the disease. RESUMO Avaliou-se a possível associação entre o polimorfismo FCGR3A V/F (158) e a suscetibilidade e o fenótipo clínico do lúpus eritematoso sistêmico (LES) em 305 pacientes com LES admitidos sequencialmente e 300 controles saudáveis da Região Sudeste do Brasil por reação em cadeia da polimerase alelo-específica. Os resultados do presente estudo mostraram não haver associação entre os alelos FCGR3A 158 V/F e a suscetibilidade ao LES nessa série de pacientes, ainda que o genótipo heterozigoto tenha sido fortemente associado à doença.

CNPq FACEPE A falha imunológica em pacientes portadores do Vírus da Imunodeficiência Adquirida (HIV) decorre da não recuperação de células T CD4+, mesmo nos indivíduos que apresentam carga viral baixa. A morte celular exacerbada apresenta-se como um dos principais mecanismos de falha, sendo a piroptose a principal via de morte observada no processo de infecção pelo HIV-1. O objetivo do estudo foi avaliar a influência da morte celular por piroptose na falha imunológica de indivíduos HIV-1 positivos submetidos à terapia antirretroviral. Foram recrutados 248 pacientes. Variantes em cinco genes da via da piroptose foram avaliadas por genotipagem utilizando sondas Taqman. Variáveis clínicas, epidemiológicas e laboratoriais dos indivíduos foram consideradas para associação. A imunofenotipagem das células foi avaliada por citometria de fluxo. Os resultados demonstraram que os polimorfismos rs10754558 (NLRP3), rs2043211 (CARD8), rs1143634 (IL1B) e rs6940 no gene IFI16 não demonstraram associação com a falha imunológica. O polimorfismo rs187238 (IL18) demonstrou associação do alelo C (p

FACEPE O diabetes mellitus (DM) é uma doença metabólica, caracterizada pela hiperglicemia sendo relacionada com uma série de fatores genéticos e ambientais. As células dendríticas (DCs) induzem a resposta imunológica por sua capacidade de capturar, processar e apresentar antígenos a linfócitos T. O reconhecimento dos diferentes microrganismos pelas DCs é feito por receptores expressos em sua membrana que interagem com padrões moleculares presentes em patógenos como por exemplo, os açúcares. O DCSIGN é um desses receptores capaz de reconhecer moléculas de manose e fucose, sendo a glicose similar estruturalmente à manose, principal tipo de açúcar reconhecido pelo receptor. O objetivo deste trabalho é avaliar a ativação do DC-SIGN pela molécula de glicose, bem como as funções preditas para os polimorfismos rs735239 e rs4804803, encontrados na região promotora do gene. As análises de expressão gênica foram realizadas em amostras de sangue total de pacientes DM e controles saudáveis, sendo, posteriormente, as culturas celulares estimuladas com glicose. As análise foram realizadas pelo método 2⁻ΔΔᶜᵀ. Identificamos expressão diferencial do CD209 entre os indivíduos com DM e o grupo controle, estando o gene mais expresso nos indivíduos com DM (2,66/DM1 e 3,24/DM2). Posteriormente, a análise da ativação desse gene pela molécula de glicose, também demonstrou uma expressão diferencial de 11,97 vezes do CD209 nas culturas estimuladas com glicose. Nossos resultados indicam que a glicose pode modular a expressão do CD209. Diabetes Mellitus (DM) is a metabolic disease characterized by hyperglycemia being associated with several genetic and environmental factors. Dendritic cells (DCs) induce the immune response by their ability to capture, process and present antigens to T lymphocytes. The recognition of different microorganisms by DCs is done through receptors expressed in the membrane of these cells that interact with molecular patterns found in pathogens, as for example, the sugars. DC-SIGN is one of these receptors capable of reconizing molecules of mannose and fucose – sugars with similar structures to glucose. The aim of this study is to evaluate the activation of DC-SIGN by the molecule of glucose, as well as the predicted functions for the polymorphisms rs735239 and rs4804803, found in the promoter region of these gene. The gene expression analysis were performed in blood samples of DM patients and healthy controls, and subsequently cell cultures were stimulated with glucose. We identified differential expression of CD209 between individuals with DM and the control group, being the gene overexpressed in individuals with DM (2.66/DM1 and 3.24/DM2). Afterwards, the analysis of CD209 gene activation by the molecule of glucose, also showed a differential expression of 11.97 times overexpressed in cultures stimulated with glucose. Our results indicate that glucose can modulate the expression of CD209.

Introdução: Testes de histocompatibilidade são indispensáveis para viabilizar o transplante renal. A prova cruzada por citotoxicidade dependente de complemento (CDC) tem sido a técnica padrão para avaliar risco imunológico pré-transplante, no entanto, a prova cruzada por citometria de fluxo (FCXM) possui benefícios adicionais, como maior sensibilidade e análise semi-quantitativa através do Median Channel Shift (MCS). Objetivo: Definir pontos de corte de MCS baseado em correlação inter-técnicas e desfechos clínicos pós-transplante. Método: Estudo retrospectivo com pacientes candidatos a transplante renal no Hospital de Clínicas de Porto Alegre, entre janeiro/2016-agosto/2017. Foram avaliadas 1705 provas cruzadas e 221 pacientes submetidos ao transplante. Resultados: A FCXM, relacionada ao CDC, apresentou sensibilidade=87%(FCXM-T) e 90%(FCXM-B), e VPN=98% para ambos. FCXM-B apresentou especificidade=43%, relacionada aos casos CDC-/FCXMB+. FCXM-T e -B detectaram 53% e 76% dos casos de DSA≥5001 (Donor Specific Antibody). MCS apresentou desempenho satisfatório em detectar CDC+ (AUC/IC): MCST=0,909(0,886-0,933) e MCSB=0,775(0,724-0,826). Pontos de corte de MCST=245 e MCSB=282 apresentaram melhor predição de CDC+. Não houve diferença na função do enxerto de pacientes transplantados com FCXM+. Apenas 30% das FCXM+ estiveram diretamente relacionadas com DSA pré-tx. No entanto, episódios de rejeição foram mais frequentes no grupo FCXM+vs.FCXM- (95%vs.86%, p=0,04). Conclusão: É possível calibrar o MCS baseado no CDC+, no entanto, significa um risco em termos da não detecção de anticorpos de baixo título. A FCXM+, em curto prazo, não deve ser por si só um fator impeditivo para o transplante. A análise conjunta do MCS e DSA parece ser uma boa ferramenta de seleção dos receptores renais. Introduction: Histocompatibility tests are indispensable for enable the renal transplantation. Crossmatching tests for complement dependent cytotoxicity (CDC) has been a standard technique for assess pre-transplant immunological risk, however, the flow cytometry crossmatching test (FCXM) has additional benefits, such as increased sensitivity and semi-quantitative analysis through the Median Channel Shift (MCS). Objective: Define MCS cutoff values based on inter-technical correlation and post-transplant clinical outcomes. Methods: A retrospective study with renal transplant candidates at the Hospital de Clínicas of Porto Alegre, between January/2016-August/2017. A total of 1705 crossmatching and 221 patients submitted to transplantation were evaluated. Results: The FCXM, related to CDC, resulted in sensitivity=87% (FCXM-T) and 90% (FCXM-B), and NPV=98%, for both. FCXM-B resulted in specificity=43%, related to cases CDC-/FCXMB+. FCXM-T and -B detected 53% and 76% of cases of DSA≥5001 (Donor Specific Antibody). The MCS showed satisfactory performance in detecting CDC + (AUC/IC): MCST=0.909(0.886-0.933) and MCSB=0.775(0.724-0.826). Cutoff values of MCST=245 and MCSB=282 showed better prediction of CDC+. There was no difference in the graft function of patients transplanted with FCXM+. Only 30% of FCXM + were directly related to pre-tx DSA. However, rejection episodes were more frequent in the group FCXM+vs.FCXM- (95%vs.86%, p=0,04). Conclusion: it is possible to calibrate MCS based on CDC +, however, that means a risk in terms as to the non-detection of low-titre antibodies. The FCXM+, in the short term, should not be by itself an impediment to transplantation. Joint analysis of MCS and DSA seems to be a good tool for selection of renal receptors.

Purpose: The aim of the present study was to investigate the HLA phenotype in Dupuytren’s contracture (DC) patients in order to verify the correlation of these alleles with risk factors for development of DC in the Brazilian population. Methods: This was a case-controlled study of 25 DC patients and 443 healthy individuals with no history of HLA-associated diseases. HLA class I and class II typing was performed using the polymerase chain reaction sequence-specific primer method. Results: The HLAB*18 phenotype was observed in 32% of the patients and 10.5% of controls. However, P values did not remain significant after correction. Discussion: Although we observed an increased tendency of DC patients to possess the HLA-B*18 allele, the results were not statistically significant after correction. This allele was higher in patients of Italian and/or Spanish ethnicity, localities with frequencies higher than 18.0% and 14.0% respectively. Further investigation with a larger cohort of DC patients is required to confirm the potential role of HLA in this disease.

CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior O câncer é compreendido como um conjunto de doenças com características semelhantes, mas com grande heterogeneidade que ocorre de maneira aleatória e abrange tanto as células tumorais quanto células inflamatórias e imunitárias. Os tumores gástricos, no Brasil e notavelmente no Estado do Pará, apresentam alta incidência. Em geral o câncer gástrico apresenta etiologia multifatorial. A comunicação e sinalização celular que regulam o sistema imunológico são facilitados pelas interleucinas que representam pequenas e específicas proteínas, apresentam funções diversificadas, estas controlam genes, regulam fatores de transição, governam a inflamação, diferenciação, proliferação e secreção de anticorpos. Polimorfismo de um único nucleotídeo, em particular a do gene da interleucina pró-inflamatória IL-1B, estão associado a resposta imunológica a infecção por H. pylori. Com isso, variações dentro dos genes das família da IL-1 foram associados com a suscetibilidade para o desenvolvimento de câncer gástrico. Neste estudo do tipo caso-controle, foram investigados se os polimorfismos IL-1BF1 (rs16944) e IL-1BE1 (rs1143627) têm associação com o risco ao desenvolvimento de câncer gástrico em uma população do norte do Brasil; comparados com seus respectivos genótipos, haplótipos, controlados pela ancestralidade genética. Os SNPs foram genotipados, por meio de sondas marcadas com fluoróforo VIC/FAM (real Time PDR, Life Technologies, CA, USA). As análises bioestatísticas evidenciaram que para as variáveis demográficas, houve diferenças significantes entre os grupos de ancestralidades europeia e africana. Para a distribuição das frequências genotípicas, alélicas e dos haplótipos do gene da IL-1B não houve diferenças estatisticamente significante entre os grupos. Necessita-se de estudos e análises mais abrangentes, para auxiliar o melhor entendimento dos motivos pelos quais nesta população estudada, tais poliforfismos parecem não ter associação com o desenvolvimento da doença em questão. Cancer is understood as a set of diseases with similar characteristics, but with great heterogeneity that occurs in a random manner and covers both tumor and inflammatory and immune cells. Gastric tumors, in Brazil and notably in the State of Pará, have a high incidence. In general, gastric cancer has a multifactorial etiology. Communication and cellular signaling that regulate the immune system are facilitated by interleukins that represent small, specific proteins, have diverse functions, they regulate transcription factors, role genes, inflammation, differentiation, proliferation, and secretion of antibodies. Single polymorphism nucleotide, in specific IL-1B proinflammatory interleukin gene, is associated with the immune response to H. pylori infection. Thefore variations within the IL-1 family genes were associated with susceptibility to the development of gastric cancer. In this case-control study, we investigated whether the polymorphisms IL-1BF1 (rs16944) and IL-1BE1 (rs1143627) are associated with the risk of developing gastric cancer in a population from the north of Brazil; Compared to their respective genotypes, defined haplotypes and these related to ancestry and their rates. SNPs were genotyped by VIC / FAM (Real Time PCR, Fluorescent, Life Technologies, CA, USA) labeled probes. The biostatistical analyzes showed that for the demographic variables, there were significant differences between the groups in European and African ancestry. The distribution of the genotypic, allelic and haplotype frequencies of the IL-1B gene was not statistically significant between the groups. More comprehensive studies and analyzes are needed to help understand better why these polymorphisms in this population do not appear to be associated with the development of the disease in question.

CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico IEC - Instituto Evandro Chagas A dengue é a arbovirose mais prevalente no mundo, causada pelo vírus dengue (DENV) está presente em todos continentes. Por mais de três décadas tem sido um constante problema de saúde pública frequentemente fatal nos casos de dengue hemorrágica (DHF). A patogenia da dengue é intimamente relacionada à resposta imune do hospedeiro, atingindo quadros de inflamação exacerbada e autoimunidade transitória onde todos tecidos são atingidos, sendo o fígado um dos mais importantes no contexto de evolução dos quadros graves devido a intensa replicação viral nesse órgão e sua função significativa no metabolismo. O estudo de microRNAs (miRNA) como elementos regulatórios do metabolismo e da resposta imune durante a infecção é crucial para o entendimento dos mecanismos de regulação da expressão gênica durante a infecção pelo DENV, e pode auxiliar no desenvolvimento de métodos diagnósticos e terapias anti-virais. Utilizamos a abordagem de miRA-Seq, utilizando a plataforma MySeq (Illumina) para identificar o perfil de miRNAs expressos no tecido hepático parafinizado de dez casos de óbito por DHF, comparando com cinco amostras de tecido sem infecção por DENV. Oito miRNAs apresentaram expressão diferencial no fígado de pacientes com DHF, sendo o miR-126-5p (molécula de regulação da proliferação de células endoteliais), e miR-133a-3p, regulados positivamente na DHF e miR-122-5p (um miRNA hepatoespecífico), miR-146a-5p (regulador de Interferon), miR-10b-5p, miR-204-5p, miR-148a-5p, e miR-423-5p regulados negativamente. A análise funcional de vias KEGG e GO, a partir dos genes alvo preditos dos miRNAs superexpressos, identificou a maioria de vias de regulação daapoptose e da resposta imune com envolvimento de genes MAPK, RAS, CDK e FAS e da resposta imune com destaque para NF-kB, famílias CC e CX, Il e TLR. A mesma análise dos genes alvo dos miRNAs sub-expressos também identificou na maioria vias de apoptose e biossintéticas. No nosso conhecimento, essa é a primeira descrição in vivo do perfil de miRNAs no tecido hepático de pacientes com DHF. Os resultados em conjunto mostram uma provável relação dos miRNAs: miR-126-5p, miR-122-5p e miR-146a-5p com a patogenia do DENV no fígado no quadro de DHF através da regulação do reparo endotelial e permeabilidade vascular, controle da homeostase do fígado e regulação da expressão de citocinas inflamatórias. Dengue is the most prevalent arbovirosis in the world caused by Dengue virus (DENV) and is present in all continents, for more than three decades has been a constant public health concern and often fatal by dengue hemorrhagic fever (DHF). The pathogenesis of dengue is closely related to the host immune response, reaching exacerbated inflammation and transient autoimmunity. All tissues are affected, which liver is one of the most important in severe conditions, due its intense viral replication and its significant role in metabolism. The study of microRNAs (miRNA) as regulatory elements of metabolism and immune response during infection is crucial to understanding the regulatory mechanisms of gene expression on DENV infection, and can help in diagnostic development of anti-viral therapies. We sequenced the miRNoma in MySeq platform (Illumina) to identify the miRNAs profile expressed in FFPE liver tissue, ten DHF fatal cases were compared to five control cases. Eight miRNAs exhibited differential expression in DHF liver, miR-126-5p, a regulatory molecule of endothelial cells, and miR-133a-3p are upregulated in dengue and miR-122-5p, a liver-specific miRNA, miR- 146a-5p, interferon regulator, miR-10b-5p, miR-204-5p, miR-148a-5p and miR-423-5p were downregulated. Functional analysis of KEGG pathways and GO terms with predicted target genes of overexpressed miRNAs found regulatory pathways of apoptosis and immune response, involving MAPK gene, RAS, CDK and FAS; immune response pathways showed NF- kB, CC and CX families, IL and TLR. The same analysis with target genes of downregulated miRNAs also identified in most pathways of apoptosis and biosynthetic pathways of metabolism. In our knowledge, this is the first description of the liver miRNA profile in DHF, the results together show a feasible relationship of miR-126-5p, miR-122-5p and miR-146a-5p with liver pathogenesis of DHF, through endothelial repair and vascular permeability regulation, control of homeostasis and liver expression regulation of inflammatory cytokines.

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Um dos genes localizados nesse cromossomo, o FOXP3, codifica uma fator de transcrição que está diretamente relacionado à ativação e diferenciação de células T regulatórias. Tais células constituem um importante mecanismo relacionado ao controle de doenças alérgicas. Diversos polimorfismos já foram descritos nas regiões codificante e regulatória do FOXP3, o que sugere que os mesmos possam ter um impacto funcional sobre a proteína correspondente. Desta forma, fatores genéticos que afetam o gene FOXP3 podem determinar diferenças na susceptibilidade a doenças alérgicas, tais como a asma. Neste contexto, o presente trabalho teve como objetivo avaliar o impacto de polimorfismos em genes localizados no cromossomo X, a exemplo FOXP3, no desenvolvimento da asma e atopia. Para analisar a associação de polimorfismos presentes no cromossomo X e asma, foi realizado um X-WAS (Estudo da Associação Ampla do Cromossomo X). Já para verificar a associação de polimorfismos no gene FOXP3 com asma e atopia foi realizado um estudo de gene-candidato. Como resultados mais importantes destaca-se a associação do polimorfismo rs12007907 no gene IL1RAPL com sintomas de asma (P = 3.33x10-6; OR=0.49, 95% IC= 0.37 - 0.67) e níveis de produção de IL-13 (p = 0.045) no X-WAS; a associação dos polimorfismos no gene FOXP3 rs2232368 (OR = 1,95; 95% IC= 1.04 – 3,66) com sintomas de asma, rs2232368 (OR = 2,31; 95% IC= 1,16 – 4,59), rs3761549 (OR = 1,44; 95% IC= 1,028 – 2,018) e rs2280883 (OR = 0,836; 95% IC= 0,704 – 0,992) com atopia, além da interação entre o rs2280883 no FOXP3 e infecção com EBV no desenvolvimento de atopia definida por SPT (OR = 0,64; 95% IC: 0,47 – 0,87) e IgE específico para aeroalérgenos (OR = 0,62; 95% IC: 0,46 – 0,83). Estes achados sugerem que polimorfismos em genes do cromossomo X, dentre eles FOXP3 e IL1RAPL, possuem impacto no desenvolvimento de asma e alergia em nossa população. No entanto, novos estudos devem ser conduzidos na tentativa de elucidar melhor o impacto funcional destes polimorfismos aqui descritos no desenvolvimento de asma e alergia, além da replicação em outras populações. Asthma and atopy are conditions determined by genetic and environmental factors, which can act independently and in interaction. Several Genome Wide Association Studies has been conducted to try to understand which genetic components influence asthma. However, genes located on the X chromosome are often underrepresented. One of the genes located in this chromosome, the FOXP3, encodes a transcription factor that is directly related to the activation and differentiation of regulatory T cells. Such cells are an important mechanism related to the control of allergic diseases. Several polymorphisms have been described in coding and regulatory regions of the FOXP3, which suggests that they may have a functional impact on the corresponding protein. Thus, genetic factors affecting the FOXP3 gene can determine differences in susceptibility to allergic diseases such as asthma. In this context, this study aimed to assess the impact of polymorphisms in genes located on the X chromosome, such the FOXP3, in the asthma and atopy risk. To analyze the association between polymorphisms on chromosome X and asthma, it was carried out an X-WAS (Study of Wide Association of Chromosome X). To verify the association of polymorphisms in the FOXP3 gene with asthma and atopy, a gene-candidate study was conducted. The meaningful results were the association of rs12007907 polymorphism in IL1RAPL gene with asthma symptoms (p = 3.33x10-6; OR = 0.49, 95% CI = 0.37 - 0.67) and IL-13 production levels (p = 0.045) in X-WAS; furthermore we observed association of rs2232368 in the FOXP3 gene with asthma symptoms (OR = 1.95; 95% CI = 4.1 - 3.66) and a association with atopy for the rs2232368 (OR = 2.313; 95% CI = 1.16 to 4.59), the rs3761549 (OR = 1.44; 95% CI = 1.03 to 2.02) and rs2280883 (OR = 0.836, 95% CI = 0.70 to 0.99). In addition, we reported an interaction between the rs2280883 located on FOXP3 and infection with EBV in the atopy development defined by SPT (OR = 0.64; 95% CI: 0.47 - 0.87) and specifc IgE to allergens (OR = 0.62; 95% CI: 0.46 - 0.83). These findings suggest that polymorphisms in genes of the X chromosome, including FOXP3 and IL1RAPL, have potential impact on the development of asthma and allergy in our population. However, further studies should be conducted to elucidate the functional impact of these polymorphisms described in this study in the asthma and atopy, as well as replication in other populations.

Leprosy is a chronic infection caused by Mycobacterium leprae which affects skin and peripheral nerves. Various aspects related to genetic and phenotypic variability of the pathogenesis of immune response need to be further studied. In leprosy several polymorphisms of genes involved in the immune response of the host to pathogen were associated with leprosy per se and its clinical course. This present case-control study aimed to examine the possible association between polymorphisms rs2275913 of IL-17 and rs1024611 of MCP-1 with leprosy. The sample was composed of 199 patients and 85 healthy individuals unrelated households of the cases. The polymorphisms were analyzed using the PCR technique Taqman. For statistical analysis we used the software SPSS version 22.0 with employment of the Student T test for independent samples, Chi-square and Fisher's exact test where appropriate and analysis thereof. There were differences in the distribution of genotypes of MCP-1 and IL-17 between leprosy and contactant controls (p = 0.015 and p = 0.031 respectively) with greater frequency of genotype GG in the leprosy patients. The comparison of the distribution of genotypes between the groups stratified by multibacillary and paucibacillary clinical forms, did not show any difference in the distribution of genotypes of either MCP-1 or IL-17 in the patients with the operacional forms (p = 0.46 and p=0.14 respectively). The analysis of sick and healthy individuals according to the variables age, sex and genotypes of MCP-1 and IL-17 allowed to discriminate five groups. Groups 1 and 5 were composed of patients who had only the GG genotype of IL-17 while the GG genotype of MCP-1 was more frequent in Group 1 which was composed of mostly patients (p = 0.0001). Possibly the presence of genotype GG of MCP-1 and IL-17 GG genotype contributed to the outcome of the disease in the studied subjects. A hanseníase é uma infecção crônica causada pelo Mycobacterium leprae o qual afeta pele e nervos periféricos. Vários aspectos genéticos relacionados à patogênese e à variabilidade fenotípica da resposta imune do hospedeiro precisam ser mais estudados em hanseníase uma vez que polimorfismos de genes envolvidos na resposta imune ao patógeno podem estar associados à manifestação ou não da doença e sua evolução clínica. Trata-se de um estudo de caso-controle que teve como objetivo analisar a possível associação entre os polimorfismos rs2275913 de IL-17 e rs1024611 de MCP-1 com a hanseníase. A amostra foi composta de 199 pacientes e 85 contactantes saudáveis não consanguíneos coabitantes dos casos. Os polimorfismos foram analisados utilizando a técnica de reação em cadeia de polimerase em tempo real Taqman. Para análise estatística foi utilizado o software SPSS versão 22.0 com emprego do teste T de Student para amostras independentes, teste do qui-quadrado e teste exato de Fisher quando apropriado e análise de agrupamentos. Houve diferença na distribuição de genótipos GG de MCP-1 (p=0,015) e GG de IL-17 (p=0,031) entre doentes e contactantes. Não houve diferença quando da comparação da distribuição dos genótipos de MCP-1 e IL-17 entre os doentes estratificados pelas formas clínicas paucibacilar e multibacilar (p=0,46 3 p=0,14 respectivamente). A análise dos indivíduos doentes e contactantes segundo as variáveis idades, sexo e genótipos de MCP-1 e IL-17 permitiu discriminar cinco grupos. Quando da análise de agrupamento segundo frequência genotípica e características clínicas, os grupos 1 e 5 foram constituídos por doentes que apresentavam somente o genótipo GG de IL-17 e maior frequência dos genótipos AG e GG de MCP-1 (p=0,0001). Possivelmente a presença do genótipo GG de MCP-1 e genótipo GG de IL-17 contribuíram para a manifestação da doença nos indivíduos estudados.

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Dendritic cells (DCs) are a highly specialized population of antigen-presenting cells that play a key role in the induction of adaptive immune responses against different pathogens and in the maintenance of peripheral tolerance [1, 2]. Since their discovery by Ralph Steinman in the 70s [3–6], much has been learned about their ontogeny, migration, and antigen presentation capacities in lymphoid and nonlymphoid organs [7]. Advances in flow cytometry allowed the selection of surface markers that help distinguish different DC subsets [8]. In addition, the identification of many receptors has added information on how these cells sense the environment and respond to different stimuli [9]. The role of DCs in the induction of immune responses and/or in peripheral tolerance has been extensively studied, particularly in mice, using different models that include infectious diseases and cancer, but also autoimmune diseases. In addition, progress has been made in our understanding of human DC subsets. In this special issue, a number of review articles will illustrate our current understanding of how DCs are affected in different contexts, ranging from inflammatory to more tolerogenic settings. For example, J. M. Motta and V. M. Rumjanek will discuss how different environments affect DC function. They focus especially on how DC function is modulated in the presence of tumors (a tolerogenic setting) or in the presence of organ transplantation (a more proinflammatory setting). The role of DCs following heart transplantation is also revised by M.-T. Dieterlen et al., when they additionally discuss in detail DC function in hypertension, atherosclerosis, and heart failure. On the other hand, S. Winning and J. Fandrey discuss how hypoxia modulates DC function. This is an important topic because antigen presentation normally takes place in organs and tissues that exhibit low oxygen tension, and we are just starting to recognize hypoxia as a key factor on the modulation of immune responses. On a more tolerant setting, we will learn from A. Steimle and J.-S. Frick how intestinal DCs interact constantly with different species of commensal bacteria and how these bacteria can regulate DC phenotype. DC function and tolerance break in systemic lupus erythematosus are addressed by X. Liao et al. Recent evidence suggests that DC activation by self-antigens contributes to tolerance breakdown and to the induction of lupus pathogenesis. The role of DCs in different contexts of infection is also the focus of three reviews in this special issue. N. A. Mabbott and B. M. Bradford address how prions may exploit conventional DCs to infect the host, while D. Feijo et al. and K. N. S. Amorim et al. focus on DC interactions with two different intracellular parasites. Interactions between DCs and parasites from the genus Leishmania are discussed by D. Feijo et al., while K. N. S. Amorim et al. overview the importance of DCs during Plasmodium infection and how they sense different parasite components. Finally, I. G. Zizzari et al. specifically address how a DC receptor recognizes modified glycoproteins expressed by tumors and highlight the importance of antigen structure in the modulation of DC mediated immune responses. New information is also provided by this special issue. T. Bertran et al. analyze interactions between Gardnerella vaginalis and human monocyte-derived DCs, while D. Clarke et al. study how DCs in contact with group B Streptococcus modulate activation of CD4+ T cells. In conclusion, this special issue highlights different functions of DCs in complex scenarios such as immunity and tolerance. Understanding how DCs help our immune system to deal with infections and to maintain the steady state is important, and such knowledge may be used in the design of better vaccines and in the treatment of autoimmune diseases. Silvia Beatriz Boscardin Daniela Santoro Rosa Alice O. Kamphorst Christine Trumpfheller

LipL32 is the major leptospiral outer membrane lipoprotein expressed during infection and is the immunodominant antigen recognized during the humoral immune response to leptospirosis in humans. In this study, we investigated novel aspects of LipL32. In order to define the immunodominant domains(s) of the molecule, subfragments corresponding to the N-terminal, intermediate, and C-terminal portions of the LipL32 gene were cloned and the proteins were expressed and purified by metal affinity chromatography. Our immunoblot results indicate that the C-terminal and intermediate domains of LipL32 are recognized by sera of patients with laboratory-confirmed leptospirosis. An immunoglobulin M response was detected exclusively against the LipL32 C-terminal fragment in both the acute and convalescent phases of illness. We also evaluated the capacity of LipL32 to interact with extracellular matrix (ECM) components. Dose-dependent, specific binding of LipL32 to collagen type IV and plasma fibronectin was observed, and the binding capacity could be attributed to the C-terminal portion of this molecule. Both heparin and gelatin could inhibit LipL32 binding to fibronectin in a concentration-dependent manner, indicating that the 30-kDa heparin-binding and 45-kDa gelatin-binding domains of fibronectin are involved in this interaction. Taken together, our results provide evidence that the LipL32 C terminus is recognized early in the course of infection and is the domain responsible for mediating interaction with ECM proteins.

Problem Augmented levels of IL-1s have been pointed out as an important pathogenic factor for preeclampsia development. Inflammasome is the cytoplasmic complex responsible for pro-IL1s cleavage and IL-1s secretion. Aim of the study was to evaluate the association between polymorphisms in inflammasome' genes and preeclampsia. Method of study Selected polymorphisms in inflammasome genes (NLRP1, NLRP3, CARD8, and IL1B) were analyzed in 286 Brazilian women with and 309 without preeclampsia. Results and Conlclusions The NLRP1 variant rs12150220 (L155H) was associated with the development of preeclampsia (OR = 1.58), suggesting a role of this inflammasome receptor in the pathogenesis of this multifactorial disorder.

Os antígenos plaquetários humanos são estruturas imunogênicas resultantes de alterações pontuais (SNP) que levam a substituição de um aminoácido a nível proteico. O objetivo deste estudo foi determinar a frequência alélica e genotípica do sistema HPA-1 a -5 e -15 em doadores de plaquetas do Estado do RS e comparar as frequências alélicas encontradas com as observadas em outras populações. A genotipagem HPA foi realizada através do método de PCR-SSP. Um total de 201 doadores de plaquetas foram incluídos no estudo sendo 167 caucasoides e 34 não caucasoides. O alelo “a” foi o mais frequente nos sistemas HPA-1 a -5 em ambos grupos. O genótipo HPA-15AB foi predominante sobre os genótipos homozigotos para este sistema. O teste exato de Fisher revelou diferença estatisticamente significativa para o sistema HPA-5. Houve maior prevalência do alelo HPA-5B no grupo não caucasoide. Para o grupo caucasoide, o método de neighbor-joining e a PCA revelaram proximidade genética entre este grupo e as populações europeias. De um modo geral, concluímos que as frequências alélicas para os sistemas HPA-1 a -5 e -15 encontradas em nosso grupo caucasoide são similares às descritas em populações europeias. Estes dados corroboram a formação étnica da população do RS. A maior frequência do alelo HPA-5b encontrada no grupo não caucasoide de nosso estudo indica a possibilidade de alosensibilização para pacientes que recebem transfusões de plaquetas não compatibilizadas geneticamente. Human platelet antigens are immunogenic structures that result from single nucleotide polymorphisms (SNPs) leading to single amino acid substitutions. The present study sought to determine the allele and genotype frequencies of HPA-1 through 5 and HPA-15 in platelet donors from the state of Rio Grande do Sul, Brazil, and compare their allele frequencies to those observed in other populations. HPA genotyping was performed via the single specific primer-polymerase chain reaction (PCR-SSP) method. The study sample comprised 201 platelet donors (167 Caucasians and 34 non-Caucasians). Allele “a” was that most commonly found for HPA-1 through 5 in both groups. The HPA-15AB genotype predominated over homozygous genotypes of this system. Fisher’s exact test revealed statistically significant differences for the HPA-5 system, with a greater prevalence of the HPA- 5B allele in non-Caucasians. The neighbor-joining method and principal components analysis (PCA) revealed genetic proximity between the Caucasian group and European populations. We conclude that the allele frequencies of HPA-1 through 5 and HPA-15 found in our Caucasian sample are similar to those reported for European populations. These findings corroborate the ethnic makeup of the population of Rio Grande do Sul. The higher frequency of the HPA-5b allele found in the non-Caucasian group of our sample suggests the possibility of allosensitization in patients who receive platelet transfusions from genetically incompatible donors.

La psoriasis, que afecta de 2% a 3% de la población mundial, es una de las enfermedades cutáneas más frecuentes, Se presenta en cualquier etapa de la vida. La psoriasis tipo I o temprana comienza antes de los 40 años en tanto que la tipo II es de inicio tardío, luego de los 40 años. Tiene una fuerte base genética y la probabilidad de heredarla cuando los dos padres están afectados es hasta del 50%. Se han descrito diferentes regiones de susceptibilidad asociadas a la psoriasis, que se denominan PSORS, de las que PSORS-1 es la más frecuente. PSORS-1 está en el cromosoma 6 en el que se localiza el HLA-Cw6, que es el gen hasta ahora más relacionado con la psoriasis. La función de HLA-Cw6 en la psoriasis no está completamente entendida, pero se ha asociado con la psoriasis tipo I, la psoriasis en gotas y la presentación antigénica de una gama de antígenos entre los que se encuentran los derivados de Streptococcus pyogenes. Por otra parte, algunos polimorfismos de nucleótido simple en genes que codifican para citocinas como IL-12, IL-23, TNF-α o sus receptores, se han relacionado con la inmunopatogénesis de esta enfermedad. Psoriasis is one of the most common skin diseases, affecting 2% to 3% of the world population. It occurs at any stage of life. ''Early'' psoriasis or type I manifests before 40 years, and ''late'' psoriasis or type II, after 40 years. It has a strong genetic basis and the probability of inheriting the disease when both parents are affected is up to 50%. Different susceptibility regions associated with psoriasis, called PSORS, have been described, PSORS-1 being the most frequent one. It is in chromosome 6 and in this region HLA-Cw6 is located, which is until now the gene more associated with psoriasis. The role of HLA-Cw6 in psoriasis is not fully understood, but it has a relationship with type I psoriasis, guttate psoriasis and the presentation of an array of antigens including those derived from Streptococcus pyogenes. Furthermore, some single nucleotide polymorphisms in genes encoding cytokines such as IL-12, IL-23, TNF-α or their receptors are associated with the immunopathogenesis of the disease. A psoríase, que afeta de 2% a 3% da população mundial, é uma das doenças cutâneas mais frequentes, Apresenta-se em qualquer etapa da vida. A psoríase tipo I ou precoce começa antes dos 40 anos enquanto a tipo II é de início tardio, depois dos 40 anos. Tem uma forte base genética e a probabilidade de herdá-la quando os dois pais estão afetados é até de 50%. Descreveram-se diferentes regiões de susceptibilidade associadas à psoríase, que se denominam PSORS, das que PSORS-1 é a mais frequente. PSORS-1 está no cromossomo 6 no que se localiza o HLA-Cw6, que é o gene até agora mais relacionado com a psoríase. A função de HLA-Cw6 na psoríase não está completamente entendida, mas se associou com a psoríase tipo I, a psoríase em gotas e a apresentação antigénica de uma gama de antígenos entre os que se encontram os derivados de Streptococcus pyogenes. Por outra parte, alguns polimorfismos de nucleótido simples em genes que codificam para citocinas como IL-12, IL-23, TNF-α ou seus receptores, relacionaram-se com a imunopatogênese desta doença.

Background PIDs are a heterogeneous group of genetic illnesses, and delay in their diagnosis is thought to be caused by a lack of awareness among physicians concerning PIDs. The latter is what we aimed to evaluate in Brazil. Methods Physicians working at general hospitals all over the country were asked to complete a 14-item questionnaire. One of the questions described 25 clinical situations that could be associated with PIDs and a score was created based on percentages of appropriate answers. Results A total of 4026 physicians participated in the study: 1628 paediatricians (40.4%), 1436 clinicians (35.7%), and 962 surgeons (23.9%). About 67% of the physicians had learned about PIDs in medical school or residency training, 84.6% evaluated patients who frequently took antibiotics, but only 40.3% of them participated in the immunological evaluation of these patients. Seventy-seven percent of the participating physicians were not familiar with the warning signs for PIDs. The mean score of correct answers for the 25 clinical situations was 48.08% (±16.06). Only 18.3% of the paediatricians, 7.4% of the clinicians, and 5.8% of the surgeons answered at least 2/3 of these situations appropriately. Conclusions There is a lack of medical awareness concerning PIDs, even among paediatricians, who have been targeted with PID educational programmes in recent years in Brazil. An increase in awareness with regard to these disorders within the medical community is an important step towards improving recognition and treatment of PIDs.

Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:27Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-27Bitstream added on 2015-04-09T12:47:32Z : No. of bitstreams: 1 000812646.pdf: 3278478 bytes, checksum: eebfd378cb8c54ce9d512fd14c333c5e (MD5) Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) A malária é uma das principais causas de morbidade e mortalidade nas áreas tropicais e subtropicais do mundo. O desenvolvimento de uma resposta imune eficaz é capaz de reduzir a mortalidade e os sintomas clínicos da doença. No entanto, este é um processo complexo, e um dos objetivos dos imunologistas é entender as razões pelas quais os indivíduos diferem em suas respostas imunes contra o parasito. O objetivo do presente estudo foi avaliar a influência de polimorfismos em genes coestimulatórios do sistema imune na resposta imune humoral contra proteínas de estágio sanguíneo do Plasmodium vivax, principal espécie causadora de malária no Brasil. Para tanto, nós genotipamos, pelo método de PCR-RFLP, nove SNPs em sete genes (CD28, CTLA4, ICOS, CD86, CD40, CD40L e BLYS). A amostra foi constituída por 227 indivíduos infectados com P. vivax no município de Goianésia do Pará, no Estado do Pará. As respostas de anticorpos IgG específicos contra as proteínas N- (ICB2-5) e C-terminal (MSP-119) da MSP-1, da DBP e da AMA-1 do P. vivax foram determinadas por ELISA. IgM e as subclasses de IgG contra a ICB2-5 também foram avaliadas. Para estudar os polimorfismos dos genes coestimulatórios, nós primeiramente investigamos o impacto da estratificação da população na distribuição dos polimorfismos com o auxilio de marcadores informativos de ancestralidade e demonstramos que a frequência dos SNPs ICOS +1564T>C, CD40L -726T>C e CD86 +1057G>A varia de acordo com a ancestralidade. Polimorfismos em genes coestimulatórios foram associados com a resposta de anticorpos contra proteínas do estágio sanguíneo do P. vivax, mais especificamente contra a DBP, e as porções N- e C-terminal da MSP-1. Além disso, haplótipos formados pelos genes CD28, CTLA4 e ICOS foram associados com a resposta de anticorpos IgG4 contra a região N-terminal da MSP-1. Este é o primeiro estudo de associação genética envolvendo polimorfismos em genes ... Malaria is one of the main causes of morbidity and mortality in the tropics and subtropics areas of the world. Although the immunity is only partial, it is important in reducing the amount of illness and death caused by malaria. However, the immunity against malaria is complex, and one of the main goals of vaccine developers is to understand why people differ in their immune response to the parasite. The present research aims to investigate the genetic mechanisms related to humoral immune response against P. vivax blood stages antigens, predominant malaria species in Brazil. Nine single nucleotide polymorphisms (SNPs) in 7 genes (CD28, CTLA4, ICOS, CD86, CD40, CD40L e BLYS) were determined by PCR-RFLP. A total of unrelated 227 individuals infected with P. vivax from the Goianésia do Pará, Pará state, participated in this study. Level and prevalence of IgG antibodies against N-terminal (ICB2-5) and C-terminal (MSP-119) regions of MSP-1, DBP and AMA-1 of P. vivax were measured by ELISA. First, we evaluate the influence of genomic ancestry on distributions of co-stimulatory genes polymorphisms in an admixed Brazilian population using ancestry informative markers. ICOS, CD40L and CD86 polymorphisms were associated with genomic ancestry. There were significant association between CD28 -372G>A, ICOS +1564T>C, and CD40L -726T>C SNPs with antibodies anti-DBP prevalence. Moreover, CD40 -1C>T and CD86 +1057G>A SNPs were associated with antibody levels anti-PvMSP-119. The CD28 -372G>A and CD40 -1C>T SNPs were associated with IgM prevalence against ICB2-5. Haplotypes formed by polymorphisms in CD28, CTLA4, and ICOS genes were associated with IgG4 antibodies against ICB2-5. This is the first study to associate polymorphisms in costimulatory genes with humoral immune response against P. vivax. These data may add important information for understanding the immunological aspects involved in vivax malaria

CAPES; CNPq; FACEPE Diabetes mellitus tipo 1 (DM1) é uma doença autoimune multifatorial caracterizada por danos e destruição de células-beta, nas Ilhotas de Langerhans no pâncreas, reduzindo ou inviabilizando a produção de insulina. Estudos apontam que infecções virais, principalmente enterovírus, têm sido consideradas um dos principais fatores ambientais associados com a DM1. A proteína codificada pelo gene Helicase C induzida por interferon tipo 1 (IFIH1) participa do reconhecimento de vírus de dsRNA e no desenvolvimento da DM1, o que sugere uma possível etiologia viral da DM1 e outras desordens autoimunes como a doença autoimune da tireóide (DAIT) e doença celíaca (DC). Este estudo teve como objetivo avaliar a associação entre os polimorfismos de base única (SNP) não-sinônimos do IFIH1 rs3747517, rs1990760 e rs10930046, além do tag-SNP rs6432714, com a DM1 e a insurgência de DC e DAIT nesses pacientes. Não foi observada associação desses SNPs com o desenvolvimento da DM1, nem com a insurgência de DC ou DAIT. Entretanto, o tag- SNP rs6432714 indicou uma tendência de associação apenas com o desenvolvimento da DM1 (P=0,0365). A Análise in silico do domínio helicase indicou um aumento na estabilidade da proteína, quando ocorre a mutação H460R, entretanto essa variação estrutural observada não parece ser suficiente para causar uma deficiência na detecção do dsRNA viral. Apesar da evidência de nãoassociação do rs1990760 na população estudada, uma meta-analise realizada confirma a associação dessa variante com a DM1.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento, Florianópolis, 2014. Introdução: O câncer de mama possui etiologia variada, sendo influenciada tanto por fatores genéticos quanto por fatores ambientais. Dentro do contexto genético, o papel de genes que codificam moléculas do sistema imunológico tem sido alvo de interesse pela importância que esse sistema possui para o desenvolvimento do processo tumoral. A Interleucina-18 é uma importante citocina pró-inflamatória e que possui indicações como possível alvo-terapêutico. Possui polimorfismos de um único nucleotídeo localizados na região promotora do gene e que possuem atividade funcional. As células Natural Killer (NK) fazem parte da resposta imune inata, sendo a primeira linha de defesa do organismo contra vírus, bactérias e tumores. Estas células induzem a morte da célula-alvo quando não há o reconhecimento das moléculas de antígenos leucocitários humanos (HLA) de classe I, através de seus receptores, chamados Killer cell Immunoglobulin-like. Receptor (KIR) ou os receptores NKG2D. Vários estudos demonstram o envolvimento dos genes que codificam receptores de células NK na patogênese do câncer. Objetivo: Avaliação do papel de polimorfismos em genes envolvidos na regulação da atividade das células NK e o desenvolvimento do câncer de mama em pacientes do Estado de Santa Catarina. Resultados: A presença dos genótipos variantes dos polimorfismos IL18 -607 (C/A) [rs1946518] e IL18 -137 (G/C) [rs187238] no presente estudo apresentou um risco significativo para o desenvolvimento do câncer de mama, sendo que o modelo de herança mais significativo foi o codominante para o IL18 -607 (C/A) [rs1946518] (CC vs AA, P = 0,004, OR = 2,782 95%CI [1,385-5,589]). E o recessivo para IL18 -137 (G/C) [rs187238]. Em relação à análise do polimorfismo do gene NKG2D [rs2255336], não foi encontrada uma diferença significativa na presença do alelo variante entre pacientes e indivíduos do grupo controle. Para os genes KIR foi encontrado um aumento de risco de 5,50 (P = 0,046; [1,02-33,36]) para o desenvolvimento da doença na presença do gene KIR2DL3 e de 5,62 (P ? 0,0001; [2,81- 11,33]) na presença do gene KIR2DL2. A presença desses dois genes em conjunto apresentou um risco de 6,86 (P ?0001; [2,83-13,18]). A presença do gene KIR2DL5 mostrou-se como um fator de proteção em relação ao desenvolvimento do câncer de mama (P = 0,001; [0,06-0,53]). Conclusão: Estes resultados indicam um potencial papel dos polimorfismos dos genes envolvidos na regulação da atividade das células NK na patogênese do câncer de mama, indicando que esses genes do sistema imunológico são possíveis marcadores preditivos de risco para câncer de mama na população estudada. Abstract : Introduction: Breast cancer has varied etiology, being influenced by both genetic factors and by environmental factors. Within the context of the genetic etiology, the genes that encode immune system molecules have been the target of interest because of the importance of this system in the development of tumor process. Interleukin-18 is an important pro-inflammatory cytokine and has possible indication as a therapeutic target. IL18 gene has some single nucleotide polymorphisms located in the promoter region of the gene that have functional activity on gene transcription. Natural Killer (NK) cells are part of the innate immune response, the first line of defense against viruses, bacteria and tumors. These cells induces death of the target cell when there is no recognition molecules in human leukocyte antigens (HLA) class I, through their receptors, called Killer cell immunoglobulin-like receptor (KIR) or NKG2D receptors. Several studies have shown the involvement of the genes encoding receptors of NK cells in the pathogenesis of cancer. Objective: Evaluation of the role of polymorphisms in genes involved in regulating the activity of NK cells and the development of breast cancer patients in the State of Santa Catarina. Results: The presence of genotype variants of IL18 polymorphisms -607 (C / A) [rs1946518] and IL18 -137 (G / C) [rs187238] in the present study showed a significant contribution to the development of breast cancer risk, and the most significant was the codominant inheritance model for the IL18 -607 (C / A) [rs1946518] (CC vs. AA, P = 0.004, OR = 2.782, 95% CI [1.385 to 5.589]). And the recessive model was for IL18 -137 (G / C) [rs187238]. Regarding the analysis of the NKG2D polymorphism (rs2255336) gene, a significant difference was not found in the presence of the variant allele between patients and control subjects. For KIRs genes we detected an increased risk of 5.50 (P = 0.046, 95% CI [1.02 to 33.36]) for the development of the disease in the presence of KIR2DL3 gene and 5.62 (P ? 0.0001; 95% CI [2.81-11.33]) for the presence of KIR2DL2 gene. The presence of both genes together increase the risk about 6.86 (P ?0001; 95% CI [2,83-13,18]). The presence of the KIR2DL5 gene introduced a protective factor in the development of breast cancer (P = 0.001, 95% CI [0.06 to 0.53]). Conclusion: These results indicate a potential role of polymorphisms in genes involved in regulating the activity of NK cells in the pathogenesis of breast cancer, indicating that these genes of the immune system, IL18, KIR2DL2 and KIR2DL3 are possible predictive risk markers for breast cancer in this population.

A base genética das reacções alérgicas a fármacos pode relacionar -se com genes nas vias de activação ou inactivação que afectam a farmacocinética ou farmacodinâmica, no reconhecimento e resposta do sistema imunológico (imunogenética) ou nos mecanismos de lesão e reparação tecidular. O objectivo deste trabalho é apresentar uma revisão actua lizada da imunogenética das reacções alérgicas a fármacos, de acordo com o provável mecanismo fisiopatológico envolvido, com particular ênfase na relação entre determinados polimorfismos do HLA e a alergia do tipo IV. Para além de uma melhor compreensão dos mecanismos imunológicos, esta é uma área com imediata aplicabilidade clínica, como no caso da prevenção primária de reacção de hipersensibilidade ao abacavir através do rastreio do HLA-B*5701 e a outros fármacos, como a carbamazepina nas populações asiáticas. Numa área em que, cada vez mais, a investigação assume um carácter de cooperação internacional, o papel do especialista em Imunoalergologia é essencial para o correcto diagnóstico dos doentes com alergias a fármacos e registo das reacções em bases nacionais e internacionais. The genetic basis of drug allergy can be related to activation or inactivation pathways that affect the pharmacokinetics or pharmacodynamics, in the immune system recognition and response, or in the lesion and tissue repair mechanisms. The aim of this article is to present an up-to-date review of drug allergy immunogenetics according to the probable physiopathological mechanism involved, with particular emphasis on the relation between several HLA polymorphisms and type IV allergy. Besides a better understanding of the immunological mechanisms, this is a field with immediate clinical applicability, as in the primary prevention of abacavir-mediated hypersensitivity reactions through HLA -B*5701 screening, and of other drugs as carbamazepine in the Asian population. In a field where, more and more, investigation is performed with the need for international cooperation, the role of the Allergy and Clinical Immunology specialist is essential for the correct diagnosis of patients with drug allergy and registry in national and international databases.

Resumo: As células natural killer (NK) são linfócitos granulares grandes suspeitos de estarem envolvidos nas causas do abortamento espontâneo recorrente (RSA), dado que estas células constituem a população linfocitária dominante na decídua e suas principais funções efetoras são citotoxicidad e produção de citocinas. A ativação das células NK resulta da integração de sinais induzidas pela interação de um altamente diversificado repertório receptores inibitórios e ativadores das células NK (NKRs) que ligam com ligantes expressos nas células alvo. Exemplo destes ligantes são as moléculas HLA de classe I. O trofoblasto não expressa moléculas HLA-A, HLA-B nem HLA de classe II, as principais estimuladoras da resposta imune dependente de células T. Contudo, estas células trofoblásticas expressam uma única combinação de moléculas HLA-Cw, HLA-G e HLA-E que são os ligantes específicos de NKRs como são os membros da família dos receptores tipo imunoglobulina das células NK (KIR), codificados por genes localizados no complexo de receptores leucocitários (LRC) no cromossomo 19q13.4. Dos 16 genes KIR conhecidos, sete codificam para os receptores inibitórios KIR2DL1-3, KIR2DL5 e KIR3DL1-3, seis codificam para os receptores ativadores KIR2DS1-5 e KIR3DS1, um codifica para o receptor ativador/inibitório que se encontra presente em todos os indivíduos e dois, KIR2DP1 e KIR3DP1 são pseudogenes, que não codificam para nenhum receptor funcional. Foi relatado que as interações entre as moléculas HLA de classe I expressas no trofoblasto e os receptores KIR estão intimamente envolvidas em diversos mecanismos regulatórios da reprodução tais como a iniciação da menstruação, o estrito controle da invasão do trofoblasto durante o desenvolvimento da placenta e na angiogênesis e estabilidade vascular do endométrio. Em vista da evidencia apresentada acima, o objetivo do presente trabalho foi investigar a associação entre os genes KIR, os genes de seus ligantes HLA de classe I com expressão trofoblástica (HLA-Cw e HLA-G) e o abortamento espontâneo recorrente em 68 casais pacientes com RSA e 68 casais controles férteis, todos de etnia caucasóide-brasileira. Os genes KIR e HLA-Cw foram tipados pela técnica PCR-SSO e os genes KIR2DL4 e HLA-G pela técnica de seqüenciamento automatizado. Com as freqüências obtidas foi realizado um estudo caso-controle. Nossos resultados indicam que os repertórios KIR com número elevado de genes KIR ativadores causariam predisposição ao RSA em mulheres. Subseqüentemente foi elaborado um modelo biológico do sistema de imuno-vigilância das células NK na interface materno-fetal, onde o mecanismo fisiológico que relaciona as cálulas NK e o RSA depende de um alto grau de ativação das células NK (devido à existência de uma alta quantidade de receptores KIR ativadores) ou a um menor grau de inibição destas células (devido a uma menor variedade de receptores inibitórios). O alelo de HLA-G HLA-G*010103 e o agrupamento alélico HLA-G*0101ª (HLAG* 010101 e HLA-G*010106) e o genótipo homozigótico para a presença do fragmento de 14 pares de bases (14/14) no éxon 8 de este gene mostraram um efeito protetor contra o RSA.

Resumo: O Laboratório de Imunogenética do Hospital das Clínicas (LIHC) da Universidade Federal do Paraná (UFPR) dispõe de um grande volume de dados de tipagens HLA de familiares de pacientes, que foram cadastrados em um banco com o objetivo de serem doadores de medula. Por esse motivo, é desejável que este banco de doadores teoricamente neutro e não viciado possa ser utilizado em estudos de genética de populações como banco de controle. O Laboratório de Genética Molecular Humana (LGMH) da UFPR possui um banco de dados de indivíduos do Paraná que é utilizado como controle. Este trabalho teve como propósito principal a unificação dos bancos de dados do LIHC com o banco de dados do LGMH, com o objetivo secundário de determinar se o banco do LIHC pode ser empregado como banco controle(grupo de indivíduos). Foram criadas páginas e scripts para unificação, classificação e limpeza dos dados. Foi utilizado banco de dados PostgreSQL e linguagem de programação PHP. Um perfil dos bancos foi traçado através do programa PyPop e Arlequin. Descobriu-se que o banco do LIHC pode ser usado como controle em virtude da análise realizada. Porém a análise demonstrou que houve diferença estatística somente para três especificidades distintas das 43 observada para a etnia branca e nenhuma para a etnia mulata. Este resultado foi obtido para o cálculo de frequências comparativas do genes HLA-DRB1 em comparativo com o banco controle do LGMH. Por fim, os scripts e páginas criados para separação e organização dos dados permitem a realização de pesquisas em tempo menor, bem como a garantia de dados padronizados no futuro.

A pré-eclâmpsia (PE) é uma doença multifatorial de etiologia ainda não completamente esclarecida. A hipertensão arterial sistêmica e proteinúria maciça que surgem após a 20ª semana de gestação são as características marcantes desta enfermidade. Fatores genéticos, endoteliais e imunológicos, além de taxa de apoptose alterada, falha na invasão trofoblástica e estresse psicossocial também estão envolvidos com o desenvolvimento de PE. Mulheres grávidas apresentam uma maior vulnerabilidade ao estresse, devido às constantes alterações hormonais durante a gestação. O hormônio cortisol, também chamado de hormônio do estresse, é produzido pela supra-renal e atua em várias células e tecidos, a partir da sua ligação com receptores específicos (receptores de glicocorticóide – GR). Níveis elevados de cortisol podem desencadear apoptose celular devido ao aumento do estresse oxidativo. O gene NR3C1 codifica o GR, essencial para a interação entre o cortisol e os diversos mecanismos fisiológicos. A presença de polimorfismos como o BclI (rs41423247) e ER22/23EK (rs6189/6190) já foi relacionada com uma maior ou menor sensibilidade ao cortisol, respectivamente. Dessa maneira, objetivamos investigar a frequência destes polimorfismos em gestantes saudáveis e com PE. Além disso, avaliamos também a presença de polimorfismos em genes que codificam proteínas chave na cascata de apoptose (rs1042522, rs2279744, rs929271 nos genes TP53, MDM2 e LIF respectivamente) e sua relação com a PE. O alelo A do polimorfismo ER22/23EK esteve mais presente no grupo controle, enquanto que o alelo G do polimorfismo BclI apresentou maior frequência em grávidas que desenvolveram a forma leve de PE. Nenhuma diferença entre mulheres com PE e o grupo controle foi observada em relação aos polimorfismos em genes de cascata apoptótica. Concluímos que alterações genéticas no gene codificador dos receptores de cortisol podem afetar a resposta frente ao estresse, aumentando a probabilidade para o desenvolvimento de PE. Porém, os genes envolvidos na via apoptótica aqui avaliados não parecem estar relacionados com esta desordem. Mais pesquisas devem ser realizadas buscando elucidar a complexa fisiopatologia da pré-eclampsia. Preeclampsia (PE) is a multifactorial disease which etiology is not fully elucidated. Systemic hypertension and massive proteinuria that arise after the 20th week of pregnancy are the hallmarks of this disorder. Genetic, endothelial and immune factors, modified rate of apoptosis, trophoblast invasion failure and psychosocial stress are also involved with PE development. Pregnant women have an increased vulnerability to stress due to constant hormonal changes during pregnancy. The cortisol hormone, also called the stress hormone, is produced by the adrenal and acts on several cells and tissues trough its binding to specific receptors (glucocorticoid receptor – GR). High cortisol levels may trigger apoptosis due to increased oxidative stress. The gene NR3C1 encodes the GR, essential for the interaction between cortisol and the various physiological mechanisms. The presence of polymorphisms as BclI (rs41423247) and ER22/23EK (rs6189/6190) has been associated with a higher and lower sensitivity to cortisol, respectively. Thus, we aimed to investigate the frequency of these polymorphisms in healthy and PE pregnant. Moreover, we also assessed the presence of polymorphisms in genes that encode key proteins in the apoptosis pathway (rs1042522, rs2279744, rs929271 in TP53, MDM2 and LIF genes) and its relationship with PE. The A allele of the ER22/23EK polymorphism was more frequent in the control group, while the G allele of the BclI polymorphism had a higher frequency in pregnant women who developed mild PE. No differences between women with PE and the control group were observed for polymorphisms in genes of apoptotic pathway. We conclude that genetic alterations of cortisol receptors may affect the response to stress, modulating the development of PE. However genes of apoptotic pathway evaluated here do not seem to be related to this disorder. More research should be done seeking to elucidate the complex pathophysiology of preeclampsia.