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Estudou-se a cinética de crescimento de Borrelia burgdorferi, por um período de 3 meses, utilizando os seguintes oito meios de cultivo : (1) BSK adicionado de soro de coelho, (2) BSK adicionado de soro de suíno, (3) BSK adicionado de soro de suíno + 5 fluorouracil, (4) PMR, (5) CTB, (6) Dubos, (7) Caldo Brucella e (8) BHI. Todos os meios foram preparados assepticamente e mantidos em tubos de ensaio com capacidade para 10 ml. Para cada meio, o inoculo foi padronizado para conter no início 10² espiroquetas para cada 0,1 ml de cultivo. O monitoramento do crescimento foi feito contando-se o total de espiroquetas em 0,1 ml do meio entre lâmina de microscopia e lamínula com dimen sões de 10x30mm, tendo sido utilizado microscópio de campo escuro. A contagem foi realizada durante 14 semanas, tendo sido diária nos primeiros 12 dias e semanal a partir desta data. Houve crescimento de B. burgdorferi em todos meios testados, com melhor performance para três deles: BSK adicionado de soro de coelho, BSK adicionado de soro de suíno + 5 fluorouracil e meio CTB. Observou-se crescimento de B. burgdorferi a partir da 4ª semana, atingindo o platô de crescimento entre a 8ª e 12ª semanas, quando começou a exaustão do meio de cultivo. Formas císticas de B. burgdorferi foram observadas em todos os meios testados. The cinetic of growth of Borrelia burgdorferi was studied during a 3-month period, using the following 8 culture media: (1) rabbit serum BSK, (2) swine serum BSK, (3) swine serum BSK+5 fluorouracil, (4) PMR, (5) CTB, (6) Dubos, (7) Brucella broth and (8) BHI. All media were prepared aseptically and were maintained in culture tubes of 10 ml capacity. For each medium, the inoculum was standardized to contain initially 10² spirochetes for each 0.1 ml of culture. The growth was monitorized by counting the total number of spirochetes in 0.1ml of medium in a dark field microscope, using a 10x30 mm cover slip. For the first 12 days, counting was done each 24 hours, and afterwards once a week during 14 weeks. There occurred growth of B. burgdorferi in all tested media, with the best performance of three of them: BSK with rabbit serum, BSK swine serum + 5 fluorouracil, and CTB medium. Growth of B. burgdorferi was seen from the 4th week on, reaching its maximum within 8-12 weeks, depleting the culture medium after this time. Cystic forms of B. burgdorferi were observed with all tested media.

The susceptibility of mobile and cystic forms of Borrelia burgdorferi to tinidazole (TZ) was examined. The minimal bactericidal concentration (MBC) of TZ against the mobile spirochetes was >128 µg/ml at 37°C in micro-oxic atmosphere when incubated for 14 days. TZ significantly reduced the conversion of mobile spirochetes to cystic forms during incubation. The MBC for older (10-months-old) cysts at 37°C in a micro-oxic atmosphere was >0.5 µg/ml, but >0.125 µg/ml for young (1-day-old) cysts. Acridine orange staining, dark-field microscopy and transmission electron microscopy revealed that, when the concentration of TZ was ≥ MBC, the contents of the cysts were partly degraded, core structures did not develop inside the young cysts, and the amount of RNA in these cysts decreased significantly. When cysts were exposed to TZ, both the spirochetal structures and core structures inside the cysts dissolved, and the production of blebs was significantly reduced. These observations may be valuable in the treatment of resistant infections caused by B. burgdorferi, and suggest that a combination of TZ and a macrolide antibiotic could eradicate both cystic and mobile forms of B. burgdorferi. Este estudio examina la susceptibilidad al tinidazol (TZ) de las formas móviles y císticas de Borrelia burgdorferi. La concentración bactericida mínima (CBM) de TZ para las espiroquetas móviles era >128 mg/ml a 37°C en atmosfera microóxica e incubación durante 14 días. El TZ redujo significativamente la conversión de espiroquetas móviles a la forma cística durante la incubación. La CBM para los cistos viejos (de 10 meses) a 37°C y en atmosfera microóxica era >0.5 mg/ml, mientras para los cistos jóvenes (de un día) era >0.125 mg/ml. La tinción con naranja de acridina, la microscopia de campo oscuro, y la microscopia electrónica de transmisión mostraron que cuando la concentración de TZ era ≥MBC el contenido de los cistos se degradaba parcialmente, no se desarrollaban las estructuras nucleares en el interior de los cistos jóvenes, y la cantidad de RNA en dichos cistos disminuía significativamente. Cuando los cistos se exponían a TZ, las estructuras espiroquetales y nucleares de su interior se disolvían, y la producción de vesículas se reducía significativamente. Estas observaciones pueden ser importantes en el tratamiento de infecciones resistentes causadas por B. burgdorferi, y sugieren que la combinación de TZ con un antibiótico macrólido podría erradicar tanto las formas císticas de B. burgdorferi como las móviles. Este estudo examina a susceptibilidade das formas móveis e císticas de Borrelia burgdorferi ao tinidazol (TZ). A mínima concentração bactericida (MCB) de TZ para as espiroquetas móveis foi >128 mg/ml a 37°C em atmosfera microóxica e incubação durante 14 dias. O TZ reduziu significantemente a conversão das espiroquetas móveis à forma cística, durante a incubação. A CBM para os cistos velhos (de 10 meses) a 37°C e em atmosfera microóxica era >0,5 mg/ml, enquanto que para os cistos jovens (de um dia) era >0,125 mg/ml. A coloração com acridina laranja, a microscopia de campo escuro e a microscopia eletrônica de transmissão mostraram que quando a concentração de TZ era ≥CBM o conteúdo dos cistos se degradava parcialmente, não se desenvolviam as estruturas nucleares no interior dos cistos jovens e a sua quantidade de RNA diminuía significantemente. Quando os cistos se expunham a TZ, as estruturas espiroquetais e as nucleares de seu interior se dissolviam e a produção de vesículas se reduzia significantemente. Estas observações podem ser importantes no tratamento de infecções resistentes causadas por B. burgdorferi e sugerem que a combinação de TZ com um antibiótico macrólido poderia erradicar tanto as formas císticas de B. burgdorferi como as móveis.