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A emergência de cepas de produtoras de carbapenemases é uma realidade em vários países, incluindo o Brasil. Estudos anteriores mostraram a habilidade de cepas do complexo Enterobacter cloacae em adquirirem o gene blaNDM-1 (New Delhi metalo β-lactamase). Devido à importância clínica deste gênero o objetivo do presente trabalho foi investigar fatores de virulência envolvidos no processo de adesão e na formação de biofilme em cepas de Enterobacter hormaechei subsp. oharae produtoras de NDM-1. O modelo de biofilme em macrocolônia foi utilizado para avaliar a suscetibilidade e a formação de biofilme das diferentes subpopulações geradas pela macrocolônia. In vitro, o perfil de suscetibilidade e a avaliação do sinergismo entre os antibacterianos (meropenem, rifampicina e polimixina B) foram determinados pelos métodos de concentração inibitória mínima (MIC) e checkerboard, respectivamente. Larvas de Galleria mellonella foram utilizadas para verificar a eficácia da terapia antibacteriana in vivo. A detecção de genes fimbriais foi feita pela técnica de PCR e a expressão das fimbrias tipo 1 e tipo 3 foi determinada por ensaios de aglutinação com diferentes eritrócitos na presença de manose. Para os experimentos de adesão celular, células epiteliais de bexiga (ATCC® 5637) foram infectadas com bactérias e a contagem de unidades formadoras de colônia foi determinada. Por fim, a construção de mutantes para as fímbrias foi realizada por troca alélica e o sequenciamento do DNA bacteriano foi feito em plataforma Illumina. As quatro subpopulações originadas da macrocolônia 798F (denominadas de 798-1S, 798-2S, 798-3S e 798-4S) apresentaram diferenças na formação de biofilme e na resposta ao tratamento com antibacterianos. Somente as subpopulações que produziam a fimbria tipo 3 (798-1S e 798-2S) foram capazes de formar biofilme, mostrando a importância desta fimbria na formação de biofilme de cepas de E. hormaechei subsp. oharae. As duas subpopulações (798-1S e 798-4S) avaliadas in vivo mostraram diferentes respostas à terapia com antibacterianos. Em uma das subpopulações (798-4S) a terapia tripla com meropenem, rifampicina e polimixina B e a monoterapia com meropenem foram capazes de aumentar a sobrevivência das larvas, entretanto, nenhum dos tratamentos testados mostrou efeito nas larvas infectadas com 798-1S. Outro achado interessante foi a discrepância encontrada entre os resultados de suscetibilidade aos antibacterianos in vitro e in vivo. A polimixina B não foi capaz de aumentar a sobrevida das larvas embora as subpopulações fossem suscetíveis in vitro. Apesar do efeito sinérgico da combinação tripla in vitro, ela só teve efeito contra 798-4S in vivo. Por outro lado, o tratamento com meropenem foi capaz de aumentar a sobrevivência das larvas inoculadas com 798-4S apesar da resistência in vitro. Devido à importância das fímbrias no processo de adesão bacteriana e na formação do biofilme, o papel desses fatores de virulência foi avaliado. De acordo com o ensaio de aglutinação aos eritrócitos, nove isolados de E. hormaechei subsp. oharae expressavam a fimbria tipo 1 e, apenas dois (798F e 977F) expressavam a fímbria tipo 3. As cepas mutantes para fímbria tipo 1 (997FΔfim) e para a fimbria tipo 3 (798FΔmrk) não foram capazes de formar biofilme em placa de poliestireno provando que ambas desempenham um papel fundamental na formação do biofilme. Entretanto, estas cepas mutantes não apresentaram diferenças na adesão às células epiteliais da bexiga quando comparadas às cepas selvagens. Importante ressaltar que as cepas de E. hormaechei subsp. oharae mostraram uma alta capacidade de adesão celular. O resultado do sequenciamento do DNA dos isolados 7F, 798F e 997F, juntamente com a análise do perfil dos plasmídeos, sugerem que o operon mrkABCDF, responsável pela codificação da fimbria tipo 3, esteja localizado em um plasmídeo. Com os resultados deste estudo podemos concluir que (i) macrocolônias de E. hormaechei subsp. oharae são capazes de gerar subpopulações com diferenças relacionadas à virulência e à resposta ao tratamento; (ii) os métodos utilizados para determinação da suscetibilidade in vitro apresentam limitações podendo levar à falha terapêutica; (iii) as fimbrias tipo 1 e tipo 3 são fundamentais para a formação de biofilme em placa de poliestireno; (iv) a habilidade em adquirir plasmídeos que codificam genes de virulência e/ou de resistência a antibacterianos confere benefícios ao gênero Enterobacter o que pode justificar sua alta prevalência em infecções bacterianas. Emergence of carbapenemase-producing Enterobacteriaceae represents a concern in many countries, including Brazil. Previous studies have shown that members of the Enterobacter cloacae complex are able to acquire resistance genes as blaNDM-1 (New Delhi metalo β-lactamase). Considering the clinical relevance of this genus the aim of this study was to evaluate virulence mechanisms involved in bacterial adhesion and biofilm formation of NDM-1 producing Enterobacter hormaechei subsp. oharae strains. Macrocolony model was used to evaluate susceptibility profile and ability to form biofilm in different subpopulations generated by the macrocolony. In vitro, antimicrobial susceptibility and synergistic effect of meropenem, rifampicin and polymyxin B alone or combined were determined by minimum inhibitory concentration and checkerboard, respectively. Galleria mellonella model was used to evaluate antimicrobial therapy efficacy in vivo. Fimbrial genes were investigated by PCR and type 1 and type 3 fimbriae expression was determined by specific agglutination of red blood cells from different animal species with mannose. Cell adhesion assay was performed with human bladder cancer-derived epithelial cell line ATCC® 5637 infected with bacteria and the number of colony forming units was calculated. Finally, fimbriae mutants were constructed by allelic exchange and whole-genome sequencing was performed using Illumina equipment. The four subpopulations generated from 798F macrocolony, termed as 798-1S, 798-2S, 798-3S e 798-4S, showed differences regarding biofilm formation and response to antimicrobial therapy. Only subpopulation expressing type 3 fimbriae (798-1S and 798-2S) were able to form biofilm, highlighting the importance of these fimbriae in biofilm formation of E. hormaechei subsp. oharae strains. Two subpopulations (798-1S e 798-4S) were evaluated in G. mellonella model and showed different antimicrobial therapy results. In 798-4S, triple therapy with meropenem, rifampicin and polymyxin B and meropenem alone were able to increase larvae survival; none of the treatment was effective against larvae infected with 798-1S. We also observed discrepancies between in vivo and in vitro antimicrobial susceptibility. Polymyxin B did not enhance larvae survival despite susceptible profile in vitro. Triple combination presented synergistic effect in vitro against 798-1S and 798-4S but, this treatment was not able to enhance survival rates in larvae infected with 798-1S. On the other hand, monotherapy with meropenem was able to increase the survival of larvae infected with 798-4S besides in vitro resistance. Because fimbriae are involved in bacterial adhesion to biotic and abiotic surfaces and are also important for biofilm formation we decided to study the role of these virulence mechanisms in E. hormaechei subsp. oharae strains. According, hemagglutination results, the nine clinical isolates evaluated expressed type 1 fimbriae whereas only two isolates (798F e 977F) expressed type 3 fimbriae. Type 1 fimbriae mutant (997FΔfim) and type 3 fimbriae mutant (798FΔmrk) did not produce biofilm in 96 well polystyrene plate proving that these fimbriae are essential for biofilm formation. However, the mutant strains did not show differences on adhesion to bladder epithelial cells comparing with wild type strains. It is important to highlight that E. hormaechei subsp. oharae strains showed a high ability to adhere to these cells. Genome sequencing and plasmid profile of 7F, 798F and 997F isolates suggest that type 3 fimbriae operon mrkABCDF is located on a plasmid. Taken together, these results indicate that (i) E. hormaechei subsp. oharae macrocolonies were able to generate subpopulations with distinct virulence and response to antimicrobial therapy characteristics; (ii) in vitro antimicrobial susceptibility testing methods showed limitations and may lead to therapeutic failure; (iii) type 1 and type 3 fimbriae are essential for biofilm formation in polystyrene plate; (iv) the ability to acquire plasmids encoding virulence and antimicrobial resistant genes confers benefits to Enterobacter genus and may explains its high prevalence in bacterial infection.

RESUMO Escherichia coli é reconhecida como causa freqüente de diarréia em suínos em todo o mundo. O objetivo do presente estudo foi caracterizar fenotipicamente os tipos fimbriais de 349 linhagens de E. coli isoladas de suínos com diarréia, em diferentes faixas etárias, utilizando os testes de microhemaglutinação e soroaglutinação, bem como determinar o perfil de suscetibilidade frente aos principais antimicrobianos utilizados em granjas de suínos. Do total de 159 linhagens de E. coli que não aglutinaram eritrócitos no teste de hemaglutinação manose-resistente (HAMR), 57 (35%) foram positivas para a expressão do antígeno fimbrial F6 no teste de soroaglutinação rápida em placa. Considerando a faixa etária e o fenótipo fimbrial, os sorotipos de E. coli, potencialmente patogênicos mais prevalentes até a terceira semana de idade, foram F5 (K99), F6 (987P), F42 e F41 em, respectivamente, 29%, 23%, 11% e 10% das linhagens. Em leitões com mais de 25 dias, predominaram fimbrias F4 (K88) em 44,6% (58) das linhagens. Os animais foram suscetíveis às cepas contendo F4, durante todas as faixas etárias, mas com maior predominância em idades mais avançadas, acima de 76 dias. Os maiores índices de resistência das linhagens foram observados para oxitetraciclina (84,0%), gentamicina (76,0 %) e amoxicilina (72,0%). Os menores valores de Concentração Inibitória Mínima (CIM) 50 e 90 foram observados para o ceftiofur.

The efficacy of three vaccines was evaluated in chickens for the control of experimental infection with Salmonella Enteritidis (SE) phage type 4. The vaccines were produced with bacterin, outer membrane proteins (OMP) and fimbriae crude extract (FE). The chickens were vaccinated intramuscularly with two doses of each vaccine at 12 and 15 weeks of age. The chickens were then orally challenged with 10(9) CFU/chicken Salmonella Enteritidis phage type 4 at 18 weeks of age. Fecal swabs were performed for the recovery of shedding SE, and SE was recovered from the liver and spleen. Additionally, antibody titers were measured in the serum by micro-agglutination test. The results indicated that the vaccine produced with bacterin yielded better results and resulted in reduction of fecal shedding and organ invasion by SE after oral challenge, although no vaccine was 100% effective for the control of SE experimental infection. A eficácia de três vacinas de Salmonella Enteritidis fagotipo 4, produzidas na forma de bacterina, proteínas de membrana externa (OMP) e extrato bruto de fímbrias (FE) foi avaliada para proteção de aves infectadas experimentalmente. As aves foram vacinadas por via intramuscular com duas doses de cada vacina as 12 e 15 semanas de idade e desafiadas com 10(9) UFCs de Salmonella Enteritidis fagotipo 4 às 18 semanas de idade, por via oral. A eficácia foi determinada através do reisolamento da bactéria nas fezes e no fígado e baço, e os anticorpos foram mensurados no soro. Os resultados demonstraram que a vacina produzida com a bacterina foi mais eficaz em comparação às outras vacinas examinadas, para reduzir a excreção fecal e a invasão de órgãos após o desafio por SE.

Porphyromonas gingivalis is implicated in chronic and aggressive periodontitis. This bacterium has numerous virulence factors and one is the fimbriae, which is quite important for bacterial colonization. Fimbriae are appendices that anchor to the bacterial wall and are comprised of the protein fimbriline encoded by the fimA gene. Thus far, six genotypes have been identified, fimA I to V and Ib. Genotypes II and IV are associated with periodontal disease, while genotype I is related to gingival health. Genotype identification of P. gingivalis fimA in periodontitis would be important to confirm the pathogenic genotypes and to establish risk at population level. This review is about the P. gingivalis fimA genotype prevalence worldwide. A systematic search using Pubmed, Hinary, and Science Direct within the following descriptors: Porphyromonas gingivalis, bacterial adhesion, periodontitis, fimbriae, fimA, genotipification was performed to April 2011. Porphyromonas gingivalis es un microorganismo implicado en la periodontitis crónica y agresiva. Dentro de sus factores de virulencia, se encuentran las fimbrias, las cuales están compuestas por una proteína denominada fimbrillina, que está codificada por el gen fimA, del cual existen 6 genotipos (I, II, III, IV, V, Ib), según la secuencia de nucleótidos. Los genotipos II y IV han sido relacionados con periodontitis, mientras el I con salud periodontal. Identificar los genotipos de fimA de P. gingivalis en pacientes con periodontitis podría generar nuevas estrategias que conlleven a suprimir los genotipos más patogénicos para prevenir el desarrollo de la periodontitis en portadores sanos. Se revisó la prevalencia de los genotipos de fimA de P. gingivalis en diferentes países del mundo, para lo cual se realizó una búsqueda sistemática en bases de datos de Pubmed, Hinary y Science Direct usando los descriptores: Porphyromonas gingivalis, adhesión bacteriana, periodontitis, fimbrias, fim A, y genotipificación hasta abril del 2011.

Virulence factors and antimicrobial resistance patterns of Escherichia coli isolates were evaluated. A total of 80 E. coli isolates were evaluated, being 64 from clinical samples (intestinal content and fragments of organs from diarrheic piglets), seven from feces of clinically healthy piglets and sows, and nine environmental samples (five from facilities, two from feed, one from insect, and one from waste). Molecular characterization was performed by PCR detection of fimbriae and toxin genes and plasmid content determination. The isolates were also characterized according to their resistance or sensitivity to the following drugs: ampicillin, trimethoprim:sulfamethoxazole, tetracycline, amikacine, colistin, norfloxacin, florfenicol, enrofloxacin, cefalexin, trimethoprim, neomycin, chloramphenicol, and gentamicin. From 80 E. coli isolates, 53.8% were classified as enterotoxigenic E. coli (ETEC), 2.5% were shiga toxin-producing E. coli (STEC), and 43.8% showed a non specific pattern and were unclassified. One fecal isolate from non-diarrheic piglet was classified as ETEC by PCR. Clinical isolates showed resistance mainly for tetracycline and trimethoprim:sulfamethoxazole. Plasmidial DNA was observed in 70 isolates, being 78.5% of clinical isolates, 8.57% of non-diarrheic feces, and 12.8% of environment. Os fatores de virulência e a resistência aos antimicrobianos foram avaliados em Escherichia coli. Um total de 80 isolados de E. coli, sendo 64 de amostras clínicas (conteúdo intestinal e fragmentos de órgãos de leitões diarreicos), sete das fezes de porcas e leitões saudáveis e nove de amostras ambientais (cinco de instalações, dois de alimentos, um de inseto e um de esterqueira). A caracterização molecular feita pela PCR objetivou detectar fimbrias e toxinas, bem como a determinação do conteúdo de plasmídeos. Os isolados foram caracterizados quanto à resistência ou sensibilidade às seguintes drogas: ampicilina, sulfazotrim, tetraciclina, amikacina, colistina, norfloxacina, florfenicol, enrofloxacina, cefalexina, trimetoprim, neomicina, cloranfenicol e gentamicina. Dos 80 isolados, 53,8% foram classificados como E. coli enterotoxigênica (ETEC), 2,5% como E. coli produtora de shiga toxina (STEC) e 43,8%, por não apresentarem padrão específico, não foram classificadas. Pela PCR, um isolado de fezes de suíno sem diarreia foi classificado como ETEC. Os isolados das amostras clínicas foram principalmente resistentes à tetraciclina e à sulfazotrim. Em 70 isolados, observaram-se DNA plasmidial, destes 78,5% foram obtidos de amostras clínicas, 8,57% de leitões sadios e 12,8% de amostras ambientais.

Existen algunos datos epidemiológicos que demuestran que, en poblaciones rurales, la frecuencia de lesiones inflamatorias de origen infeccioso en el riñón es mayor en individuos expuestos a pesticidas. Estudios previos han demostrado que el herbicida 2,4- D altera las propiedades de adherencia bacteriana a riñón, mediada por fimbrias de Escherichia coli uropatógena, si bien aún no se ha estudiado el mecanismo que podría estar involucrado. El 2,4-D demostró capacidad de generar uniones covalentes a proteínas de bacilos gram negativos. Debido a este hallazgo, se hipotetizó que la unión del herbicida a proteínas involucradas en la síntesis, exportación o ensamble de las subunidades fimbriales podía alterar la expresión de las fimbrias. En este trabajo se demuestra una unión covalente del herbicida a proteínas de membrana externa de Escherichia coli uropatógena y paralelamente una disminución de la fimbriación, determinada por tres técnicas diferentes: hemoaglutinación, cuantificación de proteínas de superficie y microscopía electrónica. Una conclusión importante está referida a que la exposición accidental de trabajadores rurales al 2,4-D en muy bajas dosis y durante un corto período de tiempo tendría un efecto protector de la pielonefritis por disminución de la fimbriación; mientras que los altos niveles de exposición predispondrían a la recurrencia del proceso infeccioso en el modelo de la pielonefritis ascendente no obstructiva en ratón (Balagué et al 2002). Probablemente los estudios epidemiológicos que asocian exposición a los herbicidas e infección renal estén relacionados con este último tipo de exposiciones. Epidemiological data demonstrate, on rural populations, that the frequency of inflammatory lesions in renal tissue is higher for individuals exposed to pesticides. Previous studies demonstrated that the herbicide 2,4-D altered the bacterial adherence properties to renal tissue, mediated by fimbriae in uropathogenic Escherichia coli, but the mechanism involved is still unknown. The acid 2,4- D has the ability to perform covalent bonds to proteins in gram-negative bacteria. Because of this fact, we hypothesized that the 2,4-D acid binds proteins involved in the synthesis, export or ensemble of fimbrial subunits, modifying fimbrial expression. In this work we demonstrated a covalent bond of the herbicide to outer membrane proteins in uropathogenic E. coli and a parallel decrease of fimbriation, assayed by three different methods: hemmaglutination, surface protein quantification and electron microscopy. An important conclusion is that the accidental exposure of rural workers to 2,4-D may have a protective effect by a decrease in fimbriation, when it is used in low doses and during a short period of exposure. But, it must be considered that high doses and several days of exposure had adverse effects, like recurrence of infection, in the mouse model of ascending pyelonephritis (Balagué et al, 2002). Probably, the epidemiological studies that associate the herbicide exposure with renal infection were due to the last kind of exposure described.

La presente investigación se realizó con el propósito de evaluar los efectos patológicos de cepas enteropatógenas de E. coli que expresan antígenos fimbriales F4, F5, F6 y F41, administradas oralmente a cerdos neonatos que no ingirieron calostro. Los cerdos inoculados experimentalmente con las cuatro cepas enteropatógenas de E. coli presentaron diarrea acuosa y de color amarilla a las 4 h.p.i. Las lesiones macroscópicas se caracterizaron por congestión y abundante contenido acuoso, apreciándose diferencias solo en la intensidad lesional entre los diferentes grupos inoculados. Microscópicamente, el íleon fue el segmento más afectado, observándose congestión, adherencia bacteriana, vacuolización epitelial de las vellosidades intestinales, atrofia, infiltrados de neutrófilos y necrosis linfoide en placas de Peyer, siendo la cepa E. coli F4 responsable de las lesiones de mayor severidad. Los resultados de la presente investigación confirman la importancia de los antígenos fimbriales como factor de adhesión de cepas enteropatógenas de E. coli al intestino delgado de cerdos lactantes y permite proyectar a futuro metodologías que utilicen las propiedades antigénicas de las fimbrias no solo como métodos de diagnóstico sino también en la elaboración de inmunógenos los cuales evitarían la adhesión bacteriana y la presentación de cuadros de colibacilosis, enfermedad responsable de cuantiosas pérdidas económicas en la explotación porcina en la actualidad A study to evaluate the degrees of lesions caused by different enteropathogenic strains of E. coli was carried out. Newborn piglets without calostrum were innoculated with enteropathogenic strains of E. coli which contained F4, F5, F6 and F41 fimbriae in order to characterize the macro and microscopic lesions to the duodenum, jejunum and ilium. The pigs experimentally innoculated with the four enteropathegenic strains of E. coli presented watery, yellowish diarrhea four hours p.i. The macroscopic lesions were characterized by congestion and abundant liquid content; only the intensity of the lesions among the different innoculated groups was different. Microscopically, the íleon was the most affected segment, presenting congestion, bacteria adhesion, epitelial vacuolization of the intestinal villus, athrophy, neutrophilic infiltration and linfoid necrosis in the Payer plaques, being E. coli F4 that caused the most severe lesions. These results confirm the importance of antigens fimbrial as adhesion factors on enteropathogenic E. coli in the small intestine of pigs and the actions of another pathogenic factors. Thus, it opens projections for future methologies which, using the antigenic properties of the fimbriae in the elaboration of immunogenes will contribute to control colibacillosis, avoiding the adhesion of enteropathogenic E. coli

Con el propósito de evaluar dos técnicas inmunohistoquímicas (IHQ), Inmunofluorescencia Indirecta (IFI) y Streptavidina-Biotina-Peroxidasa (LSAB) para la identificación de antígenos fimbriales de E. coli y su correlación con el Test de Aglutinación, se realizó una inoculación experimental con cepas enteropatógenas de E. coli que expresaban antígenos fimbriales F4, F5, F6 y F41 en cerdos neonatos, los cuales no ingierieron calostro y se mantuvieron aislados de sus madres. El antígeno F4 se distribuyó en duodeno, yeyuno e íleon, en cambio los antígenos F5, F6 y F41 se visualizaron en íleon y con menor frecuencia en yeyuno y duodeno. El Test de Aglutinación fue eficaz en la identificación de antígenos F4 y F5, no así para F6 y F41. Los resultados del presente estudio demuestran que tanto LSAB en tejidos embebidos en parafina como IFI en secciones obtenidas en crióstato, son igualmente efectivas para identificar antígenos fimbriales de E. coli y pueden ser utilizadas como un método rápido de diagnóstico en cerdos lactantes con cuadro de colibacilosis y en estudios epidemiológicos de diarreas neonatales A study to evaluate two Inmunohistochemistry (IHC) techniques (Indirect Immunoflourescense IFI and Streptavidina-Biotine-Peroxidase LSAB) to identify the antigen fimbrial of different enteropathogenic strains of E. coli was done, correlating the results with the Aglutination test. Newborn piglets without calostrum were innoculated with enteropathogenic strains of E. coli which contained F4, F5, F6 and F41. Piglets were analysed to microbiologically isolate and identify the antigen fimbrial in the small intestine with IHC and Aglutination test. The IHC techniques , identified F4 fimbriae was in the three intestinal segments ; However, the Ag F5, F6 and F41 were found in the ileon and jejunum with lesser frequency than in the duodenum. The aglutination test identified antigen F4 and F5 but was not able to identify F6 and F41. These results suggest that IFI in cryostat-microtome sections and LSAB in paraffin embedded tissues, are effective and may be useful for a rapid analysis and for epidemiological studies of suckling pigs with diahrroea for E. coli

El presente trabajo se realizó con el propósito de considerar a las técnicas inmunohistoquímicas como método de diagnóstico seguro y rápido para la identificación de antígenos fimbriales de E. coli en intestino delgado de cerdos lactantes con cuadro diarreico. Se realizó aislamiento microbiológico e inmunohistoquímica en duodeno, yeyuno e íleon de 50 cerdos lactantes infectados naturalmente. E. coli sola (34%) así como asociada (24%) a otros microorganismos fue el agente etiológico mas frecuentemente diagnosticado en cerdos lactantes con diarrea, seguido de Salmonella sp., Rotavirus y Campylobacter sp. Mediante IHQ se identificó antígenos fimbriales en 10 cerdos con aislamiento de E. coli, en 1 con Salmonella sp. y en 5 sin diagnóstico etiológico. El antígeno fimbrial más frecuentemente encontrado fue F41 en 8 cerdos entre 1 y 35 días de edad, seguido de la asociación de F4-F41 en 5 animales de 15 a 28 días y, finalmente, F4 en 3 cerdos entre 8 y 35 días. E. coli F4 fue identificado en los tres segmentos intestinales, mientras que E. coli F41 colonizó principalmente íleon y yeyuno. Los resultados de la presente investigación confirman la importancia de E. coli en los cuadros de diarrea en cerdos lactantes, así como la efectividad de las técnicas IHQ para la identificación de antígenos fimbriales en cortes de intestino embebidos en parafina. Sin embargo, se debe resaltar la posible presentación de otros factores de adhesión de E. coli a los enterocitos, lo que permite proyectar futuras investigaciones A study to evaluated the inmunohistochemistry techniques (IHC) as dignosis the E. coli fimbrial antigens in intestines of sucklings pigs with diarrhea, was carried out. Fifty suckling pigs, naturally infected, with diarrhoea were analyzed to microbiologically isolate and identify the antigen fimbrial in the small intestine with Inmunohistochemistry (Indirect Inmunofluorencence and Streptavidin-Biotin-Peroxidase) and aglutination test. The most commonly diagnosed etiological agent in suckling pigs with diarrhea was E. coli (34% alone and 24% associated), followed by Salmonella sp, Rotavirus and Campylobacter sp. IHC identified antigen with the isolation of E. coli, in ten pigs, in one with Salmonella sp and in five without ethiological diagnosis. The most frequent fimbrial antigen found was F41 in eight pigs aged 1 to 35 days, followed by the association F4-F41 in five animals with ages ranging between 15 to 28 days and finally, F4 in three pigs between 8 and 35 days. The results confirm the importance of fimbrial antigens as adhesion factor on enteropathogenic E. coli in the small intestine of suckling pigs, since the effectiveness of inmunohistochemistry for identity the fimbrial antigen in paraffin embedded intestines

Virulence factors and antimicrobial resistance patterns of Escherichia coli isolates were evaluated. A total of 80 E. coli isolates were evaluated, being 64 from clinical samples (intestinal content and fragments of organs from diarrheic piglets), seven from feces of clinically healthy piglets and sows, and nine environmental samples (five from facilities, two from feed, one from insect, and one from waste). Molecular characterization was performed by PCR detection of fimbriae and toxin genes and plasmid content determination. The isolates were also characterized according to their resistance or sensitivity to the following drugs: ampicillin, trimethoprim:sulfamethoxazole, tetracycline, amikacine, colistin, norfloxacin, florfenicol, enrofloxacin, cefalexin, trimethoprim, neomycin, chloramphenicol, and gentamicin. From 80 E. coli isolates, 53.8% were classified as enterotoxigenic E. coli (ETEC), 2.5% were shiga toxin-producing E. coli (STEC), and 43.8% showed a non specific pattern and were unclassified. One fecal isolate from non-diarrheic piglet was classified as ETEC by PCR. Clinical isolates showed resistance mainly for tetracycline and trimethoprim:sulfamethoxazole. Plasmidial DNA was observed in 70 isolates, being 78.5% of clinical isolates, 8.57% of non-diarrheic feces, and 12.8% of environment.Os fatores de virulência e a resistência aos antimicrobianos foram avaliados em Escherichia coli. Um total de 80 isolados de E. coli, sendo 64 de amostras clínicas (conteúdo intestinal e fragmentos de órgãos de leitões diarreicos), sete das fezes de porcas e leitões saudáveis e nove de amostras ambientais (cinco de instalações, dois de alimentos, um de inseto e um de esterqueira). A caracterização molecular feita pela PCR objetivou detectar fimbrias e toxinas, bem como a determinação do conteúdo de plasmídeos. Os isolados foram caracterizados quanto à resistência ou sensibilidade às seguintes drogas: ampicilina, sulfazotrim, tetraciclina, amikacina, colistina, norfloxacina, florfenicol, enrofloxacina, cefalexina, trimetoprim, neomicina, cloranfenicol e gentamicina. Dos 80 isolados, 53,8% foram classificados como E. coli enterotoxigênica (ETEC), 2,5% como E. coli produtora de shiga toxina (STEC) e 43,8%, por não apresentarem padrão específico, não foram classificadas. Pela PCR, um isolado de fezes de suíno sem diarreia foi classificado como ETEC. Os isolados das amostras clínicas foram principalmente resistentes à tetraciclina e à sulfazotrim. Em 70 isolados, observaram-se DNA plasmidial, destes 78,5% foram obtidos de amostras clínicas, 8,57% de leitões sadios e 12,8% de amostras ambientais.