de Moura, Francyelle Borges Rosa, 1990, Tomiosso, Tatiana Carla, 1978, Aro, Andrea Aparecida de, Calábria, Luciana Karen, Costa, Raquel Alves, Lino Junior, Ruy de Souza, Universidade Estadual de Campinas. Instituto de Biologia, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Estrutural, and UNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINAS
Orientador: Tatiana Carla Tomiosso Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Ao ser danificada, a pele passa pelo processo de cicatrização, um evento fisiológico que conta com as etapas de hemostasia, inflamação, proliferação e remodelamento. O prejuízo destes estágios pode comprometer a cicatrização, afetando a saúde e a qualidade de vida do paciente. Tratamentos com ação cicatrizante, antioxidante, anti-inflamatório, assim como intervenções terapêuticas com a capacidade de modular a atividade de metaloproteinases de matriz (MMPs), angiogênese e deposição de colágeno são frequentemente utilizados. Parte destas atividades têm sido observadas para compostos obtidos de Annona crassiflora e o uso de nanocompostos de prata e óxido de zinco. Desta forma, neste estudo avaliou-se a atividade cicatrizante de frações enriquecidas em polifenóis obtidas da casca do fruto de A. crassiflora (FPAC) e de um nanocomposto (Ag-ZnO/AgO-NPs) como tratamentos individuais e associados (grupo MIX). Os tratamentos foram avaliados por ensaio in vitro quanto a sua segurança sobre ensaio de viabilidade celular sobre queratinócitos e fibroblastos. Para a avaliação in vivo, quatro feridas de 5 mm foram induzidas na região dorsal de camundongos BALB/c e o fechamento foi mensurado após 3, 7, 14 e 21 dias de tratamento. Após o tratamento, as amostras de ferida foram direcionadas para as avaliações histológicas e bioquímicas. Para a avaliação histológica, utilizou-se as colorações de hematoxilina e eosina, tricômico de gomori, azul de toluidina e picrosirius red para avaliar respectivamente, a morfologia geral dos tecidos, a quantificação de vasos sanguíneos, quantificação de mastócitos e quantificação e organização de colágeno. A inflamação foi avaliada através da atividade indireta de neutrófilos e macrófagos e a atividade antioxidante foi obtida a partir da atividade das enzimas catalase e superóxido dismutase, lipoperoxidação e atividade antioxidante total. A atividade das MMPs foi mensurada por ensaio de zimografia. Em ensaio de viabilidade, FPAC foi mais eficaz no tratamento de fibroblastos, enquanto Ag-ZnO/AgO-NPs e MIX apresentou maior segurança sobre os queratinócitos. Os tratamentos com FPAF e Ag-ZnO/AgO-NPs aceleraram o fechamento das feridas após 7 dias de tratamento, enquanto o uso tópico com o MIX atrasou o fechamento da ferida após 3 dias. Ambos os tratamentos individuais (FPAF e Ag-ZnO/AgO-NPs) apresentaram atividade anti-inflamatória, antioxidante e pró-fibrogênica além de modularem a atividade das MMP-2 e 9 na área da ferida. Feridas tratadas com FPAC e Ag-ZnO/AgO-NPs apresentaram uma maior organização da derme e epiderme. Somente o tratamento com o MIX apresentou atividade pro-angiogênica. A partir dos resultados, conclui-se que as atividades observadas com os tratamentos individuais não foram cumulativas, tendo o MIX apresentado menor potencial que estes tratamentos. No grupo MIX, sugere-se que houve uma interação entre os grupos funcionais dos polifenóis com o nanocomposto. Os polifenóis apresentam atividade antioxidante e anti-inflamatória, sendo estas atividades direcionadas aos grupos hidroxilas. Uma interação com estes grupos funcionais poderia minimizar a ação encontrada nos tratamentos individuais. Desta forma, sugere-se que FPAC e Ag-ZnO-AgNPs, mas não o MIX podem ser vistos como uma nova abordagem para o uso tópico em formulações de fármacos para o tratamento de feridas, sendo as atividades anti-inflamatórias, antioxidantes, e pro-fibrogênicas responsáveis em parte por esta indicação Abstract: When damaged, the skin passes through the healing process, a physiological event that includes the stages of hemostasis, inflammation, proliferation and remodeling. The impairment of these stages can compromise healing, affecting the patient's health and quality of life. Treatments with healing, antioxidant, anti-inflammatory actions, as well as therapeutic drugs with the ability to modulate the activity of matrix metalloproteinases (MMPs), angiogenesis and collagen deposition are frequently used. Part of these activities have been observed for compounds obtained from Annona crassiflora and the use of silver and zinc oxide nanocompounds. Thus, in this study, the healing activity of fractions enriched in polyphenols obtained from the A. crassiflora fruit peel (FPAC) and of a nanocompound (Ag-ZnO / AgO-NPs) as individual treatments and associateds (MIX group) was evaluated. The treatments were evaluated by in vitro assay for their safety in cell viability assay on keratinocytes and fibroblasts. For in vivo evaluation, four 5 mm wounds were induced in the dorsal region of BALB/c mice and closure was measured after 3, 7, 14 and 21 days of treatment. After treatment, wound samples were directed for histological and biochemical evaluations. For histological evaluation, hematoxylin and eosin, gomori trichrome, toluidine blue and picrosirius red stains were used to evaluate, respectively, the general morphology of tissues, the quantification of blood vessels, quantification of mast cells and quantification and organization of collagen. Inflammation was evaluated through the indirect activity of neutrophils and macrophages and the antioxidant activity was obtained from the activity of catalase and superoxide dismutase enzymes, lipoperoxidation and total antioxidant activity. The activity of MMPs was measured by zymography assay. Considering the viability assay, FPAC was more effective in the treatment of fibroblasts, while Ag-ZnO/AgO-NPs and MIX showed greater safety on keratinocytes. Treatments with FPAF and Ag-ZnO/AgO-NPs accelerated wound closure after 7 days of treatment, while topical use with MIX delayed wound closure after 3 days. Both individual treatments (FPAF and Ag-ZnO/AgO-NPs) showed anti-inflammatory, antioxidant and pro-fibrogenic activity in addition to modulating the activity of MMP-2 and 9 in the wound area. Wounds treated with FPAC and Ag-ZnO/AgO-NPs showed a greater organization of the dermis and epidermis. Only MIX treatment showed pro-angiogenic activity. From the results, it is concluded that the activities observed with the individual treatments were not cumulative, with the MIX showing less potential than these treatments. In the MIX group, it is suggested that there was an interaction between the functional groups of polyphenols with the nanocompound. Polyphenols have antioxidant and anti-inflammatory activities, and these activities are directed to hydroxyl groups. An interaction with these functional groups could minimize the action found in individual treatments. It is suggest that FPAC and Ag-ZnO-AgNPs, but not MIX, can be seen as a new approach for topical use in drug formulations for the treatment of wounds, with anti-inflammatory, antioxidant, and pro-fibrogenic agents responsible in part for this indication Doutorado Biologia Celular Doutora em Biologia Celular e Estrutural CAPES 001