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Traballo Fin de Grao en Medicina. Curso 2020-2021 Introducción: La alergia al veneno de la avispa asiática (Vespa velutina nigrithorax) se ha convertido en la causa más frecuente de anafilaxia frente al veneno de los himenópteros en nuestra área. No existe ninguna prueba diagnóstica rutinaria que permita estudiar la actividad biológica de este veneno en los sujetos sensibilizados. Objetivos: El objetivo principal del presente estudio fue el de comprobar si los basófilos de los pacientes con antecedente clínico de anafilaxia tras la picadura de Vespa velutina nigrithorax y con IgE específica positiva frente a dicho veneno, se activan al exponerse al veneno de este insecto y a sus principales componentes moleculares. Pacientes y métodos: Se incluyó a un total de 7 pacientes con antecedente clínico de anafilaxia tras picadura de Vespa velutina nigrithorax y con IgE positiva frente a este veneno que acudieron al Servicio de Alergología de la EOXI de Santiago de Compostela entre septiembre y diciembre de 2020. La prueba de activación de basófilos empleada fue el BasoStep Kit ®. Se utilizaron cuatro concentraciones distintas de veneno completo de Vespa velutina nigrithorax y de sus componentes moleculares Vesp v 1 y Vesp v 5. La prueba se consideró positiva cuando, al menos, el 15% de los basófilos expresaron CD63 en su superficie. Resultados: Cinco pacientes presentaron una prueba positiva frente al veneno completo de Vespa velutina nigrithorax. La concentración mínima necesaria para conseguir esa activación fue de 1μg/ml. Con concentraciones superiores se observó, en algún caso, saturación de la respuesta de los basófilos. En relación a Vesp v 1 y Vesp v 5 se utilizaron dos rangos diferentes de concentración tras analizar los primeros 4 pacientes. Para Vesp v 1, cinco pacientes tienen resultados positivos frente a seis que se activan con Vesp v 5. Uno de los pacientes que no presentaron activación con el veneno completo, sí reaccionó ante sus dos componentes moleculares. Conclusiones: La mayoría de los pacientes estudiados (6/7) presentaron, al menos, una prueba de activación positiva frente al veneno completo o sus componentes moleculares por lo que se puede concluir que el BasoStep Kit ® es una prueba útil para confirmar la capacidad de activación de basófilos en los pacientes con antecedente de anafilaxia e IgE positiva frente al veneno de Vespa velutina nigrithorax Introdución: A alerxia ao veleno da avespa asiática (Vespa velutina nigrithorax) converteuse na causa máis frecuente de anafilaxe fronte ao veleno dos himenópteros na nosa área. Non existe ningunha proba diagnóstica de rutina que permita estudar a actividade biolóxica deste veleno nos suxeitos sensibilizados. Obxectivos: O obxectivo principal do presente estudio foi o de comprobar se os basófilos dos pacientes con antecedentes clínicos de anafilaxe tras a picadura de Vespa velutina nigrithorax e con IgE específica fronte a dito veleno, actívense ao expoñerse ao veleno deste insecto e aos seus principais compoñentes moleculares. Pacientes e métodos: Incluíronse un total de 7 pacientes con antecedentes clínicos de anafilaxe tras a picadura de Vespa velutina nigrithorax e con IgE positiva fronte a este veleno que acudiron ao Servizo de Alergoloxía da EOXI De Santiago de Compostela entre setembro e decembro de 2020. A proba de activación de basófilos utilizada foi o BasoStep Kit ®. Utilizáronse catro concentración distintas de veleno completo de Vespa velutina nigrithorax edos seus compoñentes moleculares Vesp v 1 y Vesp v 5. A proba considerouse positiva cando, polo menos, o 15% dos basófilos expresaron o CD63 na súa superficie. Resultados: Cinco pacientes presentaron unha proba positiva fronte ao veleno completo de Vespa velutina nigrithorax. A concentración mínima necesaria para conseguir dita activación foi de 1 μg/mL. Con concentracións superiores observouse, nalgún caso, saturación da resposta dos basófilos. En relación a Vesp v 1 e Vesp v 5 utilizáronse rangos diferentes deconcentración tras analizar aos catro primeiros pacientes. Para Vesp v 1, cinco pacientes teñen resultados positivos fronte a 6 que se activan fronte a Vesp v 5. Un dos pacientes que non presentou activación co veleno completo, si que o fixo fronte aos dous componentes moleculares. Conclusións: A maioría dos pacientes estudiados (6/7) presentaron, polo menos, unha proba de activación positiva fronte ao veleno completo ou ao seus compoñentes moleculares polo que se pode concluír que BasoStep Kit® é unha proba útil para confirmar a capacidade de activación de basófilos nos pacientes con antecedentes de anafilaxe e IgE positiva fronte ao veleno de Vespa velutina nigrithorax Introduction: The allergy to the venom of the Asian wasp (Vespa velutina nigrithorax) has become the most frequent cause of anaphylaxis to the venoms of the hymenoptera of our region. There are no routine diagnostic tests that support the biological activity of this venom in sensitized subjects. Aim of the study: The main objective of the present study was to compare if the basophils of patients with a clinical precedent of anaphylaxis to the bite of the Vespa velutina nigrithorax and with specific positive IgE to said venom, are activated on exposure to the venom of this insect and to its main molecular components. Patients and methods: A total of 7 patients with a clinical precedent of anaphylaxis after being bitten by the Vespa velutina nigrithorax and with a positive IgE against said venom who went to the Allergology Services of the EOXI in Santiago de Compostela between September and December of 2020 were included. The activation test used was the BasoStep kit®. A total of Four different concentrations of the complete venom of the Vespa velutina nigrithorax and its molecular components Vesp v 1 and Vesp v 5 were used. The test was considered positive when, at least, 15% of the basophils expressed CD63 in their surface. Results: Five patients presented a positive test result to the complete venom of the Vespa velutina nigrithorax. The minimum necessary concentration to achieve this activation was 1/mL. With superior concentrations, in some cases, a saturation of the basophils response could be observed. In relation to the Vesp v 1 and Vesp v 5 two different ranges of concentration were used after analyzing the first 4 patients. To Vesp v 1, five patients had positive results versus 6 which activated with Vesp v 5. One of the patients that didn’t present activation with the complete venom, presented reaction to the two molecular components. Conclusions: The majority of the studied patients (6/7) presented, at least, one positive activation test to the complete venom or its molecular components, by which result we can conclude that the BasoStep kit® is a useful test to confirm the capacity of the basophilsactivation in patients with a precedent of anaphylaxis and a positive IgE to the venom of the Vespa velutina nigrithorax

Immunotoxins appear as promising therapeutic molecules, alternative to allergen-specific-immunotherapy. In this work, we achieved the development of a protein chimera able to promote specific cell death on effector cells involved in the allergic reaction. Der p 1 allergen was chosen as cell-targeting domain and the powerful ribotoxin α-sarcin as the toxic moiety. The resultant construction, named proDerp1αS, was produced and purified from the yeast Pichia pastoris. Der p 1-protease activity and α-sarcin ribonucleolytic action were effectively conserved in proDerp1αS. Immunotoxin impact was assayed by using effector cells sensitized with house dust mite-allergic sera. Cell degranulation and death, triggered by proDerp1αS, was exclusively observed on Der p 1 sera sensitized-humRBL-2H3 cells, but not when treated with non-allergic sera. Most notably, equivalent IgE-binding and degranulation were observed with both proDerp1αS construct and native Der p 1 when using purified basophils from sensitized patients. However, proDerp1αS did not cause any cytotoxic effect on these cells, apparently due to its lack of internalization after their surface IgE-binding, showing the complex in vivo panorama governing allergic reactions. In conclusion, herein we present proDerp1αS as a proof of concept for a potential and alternative new designs of therapeutic tools for allergies. Development of new, and more specific, second-generation of immunotoxins following proDerp1αS, is further discussed.

Cow’s milk protein allergy is the main allergic problem during the first year of life, possibly owing to immune and gastrointestinal systems poor maturation. To prevent allergic reactions, the content and type of proteins in infant formulas resemble those of breast milk. We believe that reactions are due rather to the amount than to the type of protein. Objective: To design a new formula with cow’s milk that provides the infant with the main nutrients at an affordable cost and with lower risk for the development of allergies. Methods: Three-phase project: product design, industrial production and ex vivo assay to assess for anemia and type I allergic reaction by CD63 expression in basophils. Results: For every 100 calories, the content of protein was 2.0 g, carbohydrates 7.2 g and fat 0.5 g, which is higher than the indicated maximum value (4.5 g). Microbiologically, it was an innocuous food. CD63 expression was low in 57.1% of the babies and high in 42.9%. Conclusion: The new formula did not trigger any allergenic responses and can therefore be supplied to non-atopic infants. RESUMEN: La alergia a las proteínas de la leche de vaca es el principal problema alérgico durante el primer año de vida, debido a la poca maduración de los sistemas inmunológico y gastrointestinal. Para evitar reacciones alérgicas, el contenido y tipo de proteínas de las fórmulas infantiles se asemejan a los de la leche materna. Conforme un principio de alergología, probablemente las reacciones se deben a la cantidad de proteínas más que al tipo. Objetivo: Diseñar una nueva fórmula con leche de vaca que aporte al lactante los principales nutrientes, a un bajo costo y con menor riesgo de padecer alergias. Métodos: Proyecto realizado en 3 fases: diseño del producto, producción industrial y ensayo ex vivo para evaluar mediante la expresión del CD63 en basófilos la presencia de anemia y reacción alérgica tipo I en lactantes. Resultados: Por cada 100 calorías, el contenido de proteínas fue de 2 g, de carbohidratos de 7.2 g y de grasa de 0.5 g, mayor al valor máximo indicado (4.5 g). Microbiológicamente, la fórmula láctea propuesta se trató de un alimento inocuo. La expresión del CD63 fue baja en 57.1 % de los lactantes y alta en 42.9 %. Conclusión: La nueva fórmula no desencadenó respuesta alergénica, por lo tanto, puede suministrarse a lactantes no atópicos.

Objetivo: Determinar los niveles de plomo en sangre, niveles de hemoglobina y punteado basófilo de los hematíes en los vendedores de periódicos de la Av. Abancay donde se encuentra la mayor concentración vehicular de la ciudad de Lima. Material y método: Es un estudio descriptivo, prospectivo, de corte transversal; el tamaño de la población de estudio fue de 20 personas. Se utilizó como técnica la encuesta y se aplicó como instrumento el cuestionario elaborado por las investigadoras, además se consideró la toma de muestra sanguínea a cargo de un laboratorio clínico debidamente calificado, supervisado por las investigadoras. Se utilizaron técnicas estadísticas descriptivas para variables cuantitativas (X +- S), cálculo de medias y desviaciones estándar. La información recolectada se almacenó en el programa Microsoft Office Excel 2010, resultados en tablas y gráficos estadísticos y el análisis estadístico se realizó con el programa STATA V10. Los resultados de laboratorio fueron: Plomo en Sangre, nivel mínimo 0.70 µg/dl y nivel máximo 5.30 µg/dl. Hemoglobina, nivel mínimo 10.50 g/dl y nivel máximo 15.60 g/dl. No se detectó punteado basófilo. Conclusiones: El total de la población no presenta niveles altos de plomo en sangre que excedan a los valores dados por el MINSA, esto se puede deber al ordenamiento vehicular del 2012, tipo de alimentación, y que no habría una exposición aguda sino crónica que probablemente estaría almacenado a nivel de los huesos.

The increase in the prevalence of adverse reactions to foods and drugs represents a constant challenge to the development of new methods of diagnosis. A meta-analysis on published studies concerning the clinical usefulness of the Basophil activation test (BAT) in these reactions was performed. High sensibilities and specificities can be achieved if certain technical requirements are observed. BAT results have a positive and high significant correlations with other routine diagnostic methods such as skin tests, serum specific IgE and oral controlled challenge. Efficacy of diagnosis can be improved with the combined use of BAT and other techniques. In order to achieve a well-conducted evaluation on the diagnosis of hypersensitivity reactions to foods and drugs the best options should be

La infección de garganta es uno de los problemas más comunes durante la infancia. El Streptococcus pyogenes está presente en la mayoría de los casos de amigdalitis pultácea. El propósito de este estudio ha sido profundizar en el conocimiento de la respuesta inmune durante la crisis aguda y el período intercrisis de la amigdalitis pultácea. Veinte niños se diagnosticaron de amigdalitis aguda recurrente (más de 4 brotes por año durante más de 1 año) con indicación de amigdalectomía con o sin adenoidectomía. Durante la crisis aguda de la amigdalitis pultácea apareció leucocitosis con neutrofilia y cultivos positivos para Streptococcus pyogenes en el 55% de los casos. También se constató un aumento importante de la tasa de anticuerpos antiestreptolisina O y antidesoxirribonucleasa B, durante la evolución del proceso. La infiltración leucocitaria amigdalar durante la crisis aguda fue a expensas de neutrófilos (incrementaron 23 veces), eosinófilos (incrementaron 18 veces) basófilos (incrementaron 10 veces) y monocitos (incrementaron 5 veces) cuando se compararon con los leucocitos amigdalares del período intercrisis, existiendo un incremento mucho más importante de la infiltración de basófilos (incrementaron 40 veces) en amígdalas durante la crisis aguda, cuando se comparó con los leucocitos de sangre periférica de la misma crisis aguda. En la respuesta inmune amigdalar aguda juegan un papel primordial las células inflamatorias: neutrófilos, eosinófilos, basófilos y monocitos. A la vista de los hallazgos presentados, proponemos tratamientos racionales de la amigdalitis pultácea a través de la modulación de la inflamación, aparte de su tratamiento antibiótico, lo que requiere hasta su completa validación más trabajo experimental y clínico.

La infección de garganta es uno de los problemas más comunes durante la infancia. El Streptococcus pyogenes está presente en la mayoría de los casos de amigdalitis pultácea. El propósito de este estudio ha sido profundizar en el conocimiento de la respuesta inmune durante la crisis aguda y el período intercrisis de la amigdalitis pultácea. Veinte niños se diagnosticaron de amigdalitis aguda recurrente (más de 4 brotes por año durante más de 1 año) con indicación de amigdalectomía con o sin adenoidectomía. Durante la crisis aguda de la amigdalitis pultácea apareció leucocitosis con neutrofilia y cultivos positivos para Streptococcus pyogenes en el 55% de los casos. También se constató un aumento importante de la tasa de anticuerpos antiestreptolisina O y antidesoxirribonucleasa B, durante la evolución del proceso. La infiltración leucocitaria amigdalar durante la crisis aguda fue a expensas de neutrófilos (incrementaron 23 veces), eosinófilos (incrementaron 18 veces) basófilos (incrementaron 10 veces) y monocitos (incrementaron 5 veces) cuando se compararon con los leucocitos amigdalares del período intercrisis, existiendo un incremento mucho más importante de la infiltración de basófilos (incrementaron 40 veces) en amígdalas durante la crisis aguda, cuando se comparó con los leucocitos de sangre periférica de la misma crisis aguda. En la respuesta inmune amigdalar aguda juegan un papel primordial las células inflamatorias: neutrófilos, eosinófilos, basófilos y monocitos. A la vista de los hallazgos presentados, proponemos tratamientos racionales de la amigdalitis pultácea a través de la modulación de la inflamación, aparte de su tratamiento antibiótico, lo que requiere hasta su completa validación más trabajo experimental y clínico.