Search

Os polioxometalatos (POMs) têm sido referidos como potenciais anticancerígenos do futuro. Assim, este trabalho focou-se em estudar os efeitos anticancerígenos de um POM sobre o qual pouco se sabe – o P2W15. Começou-se por determinar um valor de inibição de 50% da atividade (IC50) da Ca2+-ATPase, conhecida como sendo um potencial alvo molecular para o tratamento de várias doenças, de 0,6 μM (um dos mais baixos para esta bomba iónica até agora). Adicionalmente, verificou-se um tipo de inibição mista que sugere que o P2W15 pode-se ligar ao local ativo e/ou a um local alostérico. Um estudo com incubações de 60 min sugere que o composto não se decompõe noutras espécies, mostrando estabilidade. Determinou-se, pela primeira vez, o IC50 (> 100 μM) de um POM (P2W15) para aquaporinas (AQP3) que também são conhecidas como potenciais alvos para o tratamento de várias doenças (incluindo o cancro). Estudos antiproliferativos com o P2W15 em células de carcinoma pancreático, BxPC3, demonstraram uma percentagem de fecho de ferida de 81%, menos 12% que o controlo (P > 0,05). Adicionalmente, testou-se a capacidade do P2W15 afetar a viabilidade celular das células BxPC3 e obteve-se um IC50 ≈ 40 μM. Por último, testou-se a capacidade antioxidante do P2W15, em conjunto com 6 outros POMs, obtendo-se um valor de 4%. Em conclusão, o P2W15 inibe diferentemente a Ca2+-ATPase e a AQP3. O efeito inibitório nas células de carcinoma pancreático sugere que o P2W15 poderá ser um agente promissor no tratamento de cancro. Polyoxometalates (POMs) have been described as potential anticancer drugs of the future. Therefore, this work was focused on studying the anticancer effects of a POM of which not that much is known – P2W15. First, it was determined a value of inhibition of 50% of the activity (IC50) of Ca2+-ATPase, known as a potential molecular target for the treatment of several diseases, of 0,6 μM (one of the lowest to this ionic pump until now). Furthermore, it was observed a mixed type inhibition that suggests that P2W15 can bind to the active site and/or to an allosteric site. A study done with incubations of 60 min suggests that the compound doesn’t decompose into other species, showing it’s stability. It was determined, for the first time, the IC50 (> 100 μM) of a POM (P2W15) to aquaporins (AQP3), that are also known as potential targets for the treatment of several diseases (including cancer). Antiproliferative studies done with P2W15 in pancreatic carcinoma cells, BxPC3, showed a percentage of wound closing of 81%, minus 12% than the control (P > 0,05). Additionally, the capacity of P2W15 affecting the cell viability of BxPC3 cells was tested, obtaining an IC50 of ≈ 40 μM. Finally, the antioxidant capacity of P2W15 was tested, along with 6 other POMs, and a result of 4% was obtained. In conclusion, P2W15 inhibits Ca2+-ATPase and AQP3 differently. The inhibitory effect on the pancreatic carcinoma cells suggests that P2W15 might be a promissing agent in the treatment of this type of cancer.

[ES] En un contexto de calentamiento global, el estrés abiótico se ha convertido en una de las mayores amenazas para la productividad agrícola. El estrés por frío es uno de estos factores limitantes. Por lo tanto, estudiar a nivel molecular la respuesta de la planta a este tipo de estrés e identificar los genes o los microRNAs cuya función es determinante en la resistencia a este tipo de estrés puede aportar información fundamental para desarrollar plantas tolerantes a frío y así poder aumentar la producción de alimentos en condiciones ambientales adversas. En esta tesis pretendemos dar un enfoque transversal para poder identificar genes implicados en la respuesta a estrés. Por un lado utilizamos un enfoque de biología molecular clásica, y por otro una visión basada en la biología de sistemas y en la secuenciación a gran escala. Mediante esta estrategia hemos sido capaces de identificar y caracterizar el gen BvCOLD1 de Beta vulgaris que codifica una aquaporina localizada en el retículo endoplásmico y que al ser sobrexpresado en plantas de Arabidopsis thaliana confiere tolerancia a frío y a condiciones limitantes de Boro (B). Por lo que demostramos que es un gen fundamental para el transporte de este oligoelemento esencial. En paralelo desarrollamos un abordaje de biología de sistemas a partir de plantas de melón (Cucumis melo) sometidas a estrés por frío. Lo que nos permitió identificar 20 familias de miRNA implicadas en la respuesta en condiciones de frío. En el tercer capítulo profundizamos en la regulación de uno de estos miRNA (miR319) y descubrimos que el frío induce el procesamiento de una forma alternativa de esta molécula., [CA] En un context d'escalfament global, l'estrès abiòtic s'ha convertit en una de les majors amenaces per a la productivitat agrícola global. L'estrès per fred és un d'aquests factors limitants. Per tant, Estudiar a nivell molecular la resposta de la planta a fred i identificar els gens o els microRNA la funció dels quals és determinant en aquestes condicions pot aportar informació fonamental per desenvolupar plantes tolerants a aquest estrès i així poder augmentar la producció d'aliments en condicions adverses. En aquesta tesi hem utilitzat un enfocament transversal per poder identificar gens implicats en la resposta a estrès. D'una banda hem fet servir mètodes de biologia molecular clàssica, que ens ha permès identificar i caracteritzar el gen BvCOLD1 de Beta vulgaris que codifica una aquaporina localitzada en el reticle endoplasmàtic i que en ser sobrexpresada en plantes d'Arabidopsis thaliana conferia tolerància a fred i a condicions limitants de bor. Pel que hem demostrat que és un gen fonamental per al transport d'aquest oligoelement essencial. En paral·lel hem desenvolupat un abordatge de biologia de sistemes a partir de plantes de meló (Cucumis melo) sotmeses a estrès per fred. El que ens va permetre identificar 20 famílies de miRNA implicades en la resposta en condicions de fred. Hem aprofundit en la regulació d'un d'aquests miRNA (el mi319) i hem descobert que el fred indueix la formació d'una forma alternativa d'aquesta molècula., [EN] In a context of global warming, abiotic stress has become one of the greatest threats to global agricultural productivity. Cold stress is one of these limiting factors. Therefore, Studying the plant response at the molecular level and identifying the genes or microRNAs whose function is determinant in these conditions can provide fundamental information to develop plants tolerant to this stress and thus be able to increase the production of food under adverse conditions. In this Ph.D. Thesis we have used a transversal approach to identify genes involved in stress response. We have used two different approaches. First we used classical molecular biology methods, which has allowed us to identify and characterize the BvCOLD1 gene of Beta vulgaris that encodes an aquaporin located in the endoplasmic reticulum and which upon overexpression in Arabidopsis thaliana conferred tolerance to cold and limiting conditions of Boron. So we showed that it is a fundamental gene for the transport of this essential trace element. In parallel, we undertook a systems biology approach based on melon plants (Cucumis melo) subjected to cold stress. This allowed us to identify 20 families of miRNA involved in the response to cold conditions. We have further studied the regulation of one of these miRNAs (miR319) and discovered that cold induces the alternative processing of its precursor.

[EN] In this report we have identified BvCOLD1, a novel aquaporin from sugar beet (Beta vulgaris) which is only conserved in the Chenopodioideae family. BvCOLD1 is expressed in all plant organs investigated and located in the endoplasmic reticulum. Transport experiments in yeast indicated that BvCOLD1 is able to transport glycerol and boron, the most limiting oligoelement for sugar beet cultivation. Overexpression of BvCOLD1 in Arabidopsis thaliana plants conferred tolerance to cold, to different abiotic stresses and the ability to grow under boron limiting conditions, therefore this novel aquaporin may be an important target to design new crops with enhanced boron homeostasis and abiotic stress tolerance., Ministerio de Economia y Competitividad, Grant/Award Number: BIO2016-77776-P; Secretaria de Estado de Investigacion, Desarrollo e Innovacion, Grant/Award Number: AGL2013-47886-R; Direccion General Investigacion Cientifica; MINECO, Grant/Award Numbers: BIO2014-61826 and BIO2016-77776-P; Universitat Politecnica de Valencia, Grant/Award Number: PAID-06-10-1496

This study evaluated a recombinant aquaporin 1 protein of Rhipicephalus (Boophilus) microplus (RmAQP1) as antigen in a vaccine against R. sanguineus. Five dogs were immunized with RmAQP1 (10 µg) + adjuvant (Montanide) (G1), and five were inoculated with adjuvant only (G2), three times. Twenty-one days after the last immunization, animals of both groups were challenged with R. sanguineus larvae, nymphs and adults, and their biotic potential was compared. Blood samples were collected before each immunization and every 28 days after the last immunization for 10 weeks. Serum antibody titers (IgG) were assessed by ELISA. We observed that: engorgement period of adult females from G1 was 12% shorter than G2; larvae from G1 had 8.7% longer engorgement period than G2 and weighed 7.2% less; nymphs from G1 had 4.5% shorter engorgement period than G2 and weighed 3.6% less; although the antibody titers increased following the second immunization, they rapidly decreased after the third immunization. Results indicated low immunoprotection of RmAQP1 against adult R. sanguineus ticks, and possible efficacy on larvae and nymphs fed on immunized dogs. Further studies should be performed for a full evaluation of the immunoprotection of RmAQP1 against R. sanguineus infestations in dogs. Resumo Este estudo avaliou a proteína recombinante (aquaporina) do carrapato Rhipicephalus (Boophilus) microplus como antígeno em vacina contra Rhipicephalus sanguineus. Cinco cães foram imunizados com RmAQP1 (10 µg) + adjuvante (G1) e cinco foram inoculados apenas com adjuvante (G2), três vezes. 21 dias após a última imunização todos os animais foram desafiados com larvas, ninfas e adultos de R. sanguineus, e potencial biótico dos carrapatos foi comparado. Amostras de sangue foram coletadas antes de cada imunização e a cada 28 dias após a última imunização, durante 10 semanas. Títulos de anticorpos dos soros dos cães foram avaliados por ELISA. Resultados: o período de ingurgitamento das fêmeas do G1 foi 12% mais curto que o período de ingurgitamento de G2; o período de ingurgitamento das larvas do G1 8,7% foi mais longo e o peso 7,2% menor que no caso de G2; o período de ingurgitamento das ninfas do G1 4,5% foi mais curto e peso 3,6% menor que no caso do G2; aumento dos títulos de anticorpos do G1 após a segunda imunização e declínio após a terceira imunização. Os resultados indicaram baixo potencial de imunoproteção de RmAQP1 contra R. sanguineus adultos, e possível eficácia contra larvas e ninfas, na dose testada. Sugere-se desenvolver novos estudos para melhor avaliação da eficácia de RmAQP1 contra R. sanguineus em cães.

Submitted by PATRICIA MARTINEZ ÉVORA null (patievora@hotmail.com) on 2017-02-13T00:31:17Z No. of bitstreams: 1 tese_Patricia_Martinez_Evora.pdf: 3202311 bytes, checksum: bdd0b7d86607bed23a99de4afecc5b35 (MD5) Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2017-02-15T19:06:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 evora_pm_dr_jabo.pdf: 3202311 bytes, checksum: bdd0b7d86607bed23a99de4afecc5b35 (MD5) Made available in DSpace on 2017-02-15T19:06:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 evora_pm_dr_jabo.pdf: 3202311 bytes, checksum: bdd0b7d86607bed23a99de4afecc5b35 (MD5) Previous issue date: 2017-01-23 Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) O controle de carrapatos à base de acaricidas químicos tem levado a seleção de ectoparasitos resistentes além de contaminação ambiental e de produtos de origem animal. Frente a isso, há crescente incentivo na busca por alternativas de controle do ectoparasito, como o desenvolvimento de vacinas. O presente estudo teve como objetivo avaliar a utilização de uma proteína recombinante da aquaporina do Rhipicephalus (Boophilus) microplus como antígeno em uma vacina contra R. sanguineus, em cães domésticos. A investigação foi realizada em cooperação científica com o United States Department of Agriculture/Agricultural Research Service (USDA/ARS). Os efeitos da vacina foram avaliados nos diferentes estádios do ectoparasito em cães previamente vacinados com o antígeno + adjuvante (Montanide) (G1) e em animais de um grupo controle inoculados apenas como adjuvante (G2). Foram avaliados: i. potencial biótico (parâmetros biológicos) dos carrapatos; ii. Título de anticorpos séricos (IgG) de cães por meio do ensaio imunoenzimático indireto (Teste ELISA) pós imunização; iii. Avaliação histopatológica do sitio de fixação dos carrapatos em diversos momentos pós-fixação na pele dos hospedeiros, incluindo a contagem de células inflamatórias migradas para o foco inflamatório; iv. Histologia do ovário dos carrapatos para observação de possíveis danos causados pela ação do imunógeno; v. locais de ação do antígeno no corpo do carrapato por meio de ensaio imunohistoquímico. Os principais resultados obtidos foram: 1) O período de ingurgitamento das fêmeas adultas do grupo imunizado foi 12% menor que o do grupo controle; 2) as larvas do grupo imunizado apresentaram período de ingurgitamento 8,7% maior que as do grupo controle e pesaram 7,2% menos; 3) as ninfas do grupo imunizado apresentaram período de ingurgitamento 4,5% menor e pesaram 3,6% menos que as do grupo controle; 4) apesar de os animais apresentarem um aumento na titulação de anticorpos pós-segunda imunização, estes títulos rapidamente diminuíram; 5) As alterações histopatológicas gerais observadas incluíram espessamento da epiderme (hiperplasia), infiltração celular inflamatória, edema de derme e neovascularização, dentre outros, o que representa aspectos inespecíficos presentes em uma reação inflamatória; 6) processo inflamatório moderado foi observado nos animais do grupo imunizado em todos os tempos avaliados; 7) O infiltrado inflamatório presente no tegumento dos cães era composto majoritariamente por linfócitos, plasmócitos e macrófagos, seguido de neutrófilos, observando-se também a presença esporádica de eosinófilos e de raros mastócitos ainda íntegros, não degranulados; 8) Histologia dos ovários de fêmeas alimentadas em cães imunizados demonstrou maior quantidade de vacuolização em ovócitos II e III, e maior número de deformações em ovócitos IV e V em relação ao grupo controle; 9) Ensaio imunohistoquímico em carrapatos adultos mostrou resultado negativo, ou seja, nenhuma marcação foi evidenciada no tecido do ectoparasito. Os resultados, analisados em conjunto, indicam um baixo potencial imunogênico do RmAQP1 contra carrapatos R. sanguineus adultos na dose testada e possível, ainda que baixa, eficácia contra larvas e ninfas. Sugere-se que novos estudos sejam desenvolvidos com dose maior de RmAQP1 para observação de seu potencial imunogênico contra R. sanguineus em cães. FAPESP: 2013/09792-7

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior The age polyethism of Apis mellifera workers is related to morphological and physiological changes in many systems, including the digestive system, and to diet change of the bees, younger workers consuming mainly pollen and older bees consuming honey. The aquaporins are membrane proteins that have been identified in different organs of the digestive tract of insects and are responsible for transmembrane transport of water. This study evaluated whether there are differences in the expression of aqp-4-like, a gene for aquaporin in A. mellifera bees between nurses and foragers workers. The Malpighian tubules, crop, midgut, ileum and rectum of workers with different tasks were used to perform qPCR. The results showed that in nurse bees aqp-4-like mRNA was greater expressed in Malpighian tubules and ileum, while in the forager the highest expression occurred in the crop and rectum. The midgut was the only organ that showed no difference in expression between nurses and foragers, but it was the organ with the highest expression of aqp-4-like compared to the Malpighian tubules. These data show that AQP-4-like is differentially expressed in various organs of the digestive tract of nurses and foragers workers due to its different diets and physiology. The differential expression of the gene is related to osmoregulation in the Malpighian tubules, ileum and rectum. Also, the dehydration of the food content in the crop and midgut by this aquaporin avoids the digestive enzymes dilution, ensuring the completion of digestion. O polietismo etário das operárias de Apis mellifera está relacionado a alterações morfofisiológicas de diversos sistemas, incluindo o sistema digestório, e à mudança da dieta das abelhas, sendo que operárias mais jovens consomem principalmente pólen e as mais velhas mel. As aquaporinas são proteínas de membrana identificadas em diferentes órgãos do trato digestório de insetos e são responsáveis pelo transporte transmembrana de água. Este trabalho avaliou se há diferença na expressão de aqp-4-like, um gene para aquaporina de A. mellifera, entre abelhas nutridoras e campeiras. Os túbulos de Malpighi, papo, intestino médio, intestino fino e reto de operárias exercendo diferentes funções foram utilizados na realização de qPCR. Os resultados demonstraram que em abelhas nutridoras houve maior expressão de mRNA para aqp-4-like nos túbulos de Malpighi e no intestino fino, enquanto que nas campeiras ocorreu maior expressão no papo e reto. O intestino médio foi o único órgão que não apresentou diferença de expressão entre nutridoras e campeiras, mas foi o órgão com maior expressão de aqp-4-like quando comparado aos túbulos de Malpighi. Estes dados mostram que a AQP-4-like é diferencialmente expressa em vários órgãos do trato digestório de operárias nutridoras e campeiras devido às diferentes dietas e fisiologia. A expressão diferencial do gene está relacionada à osmorregulação nos túbulos de Malpighi, intestino fino e reto. A desidratação do alimento no papo e intestino médio por esta aquaporina evita a diluição de enzimas digestivas, garantindo a realização da digestão.

[spa] La hidratación de los oocitos de teleósteos marinos que producen huevos pelágicos es clave para la supervivencia de los embriones en el océano. Estudios previos han descu-bierto el papel de una acuaporina específica de teleósteos (Aqp1b) durante este proceso, pero se carece todavía de evidencias experimentales directas, así como información sobre la regulación molecular de la Aqp1ab. En la presente tesis, estudios iniciales con el fletan Atlántico (Hippoglossus hippoglossus) confirman que los parálogos aqp1aa y -1ab de teleósteos han surgido probablemente por duplicación génica en tándem, y han demostrado el papel esencial de la Aqp1ab durante la hidratación del oocito. Para investigar el control transcripcional del gen aqp1ab en los oocitos de la dorada (Sparus aurata) se ha aislado su región promotora, la cual contiene elementos cis-reguladores de unión al receptor nuclear de progestinas (Pgr), como la 17α,20β-dihidroxi-4-pregnen-3-ona (17,20β-P), y factores de transcripción Sox. Estudios de localización subcelular indican que el Pgr aparece en el citoplasma de las oogonias, así como en el núcleo de oocitos en crecimiento primario (pre-vitelogénicos) coincidiendo con la activación de la expresión de aqp1ab. En este estadio también se expresan cuatro isoformas diferentes del Pgr, dos de las cuales pueden inhibir la transcripción mediada por el Pgr de forma dominante negativa. Las oogonias también expresan sox3 y -8b, mientras que el sox9b aparece en el estadio de alveolo cortical, cuando se reduce la expresión de aqp1ab. Ex-perimentos de transactivación indican que el Pgr activa la transcripción de aqp1ab, con Sox3 y -8b actuando de forma sinérgica, mientras que el Sox9b reprime este mecanismo. El papel del Pgr se ha investigado sobre explantes ováricos pre-vitelogénicos incubados in vitro, lo cual ha demostrado que la 17,20β-P, producida en las células de la granulosa en respuesta a la hormona folículo estimulante, activa el promotor de aqp1ab en el oocito induciendo la síntesis de Aqp1ab. Los resultados de esta tesis revelan por primera vez una estricta regulación transcripcional del gen aqp1ab durante la oogénesis de teleósteos marinos, lo cual remarca la función fisiológica esencial de este canal de agua durante la formación de los huevos pelágicos, [eng] In marine teleosts that spawn pelagic eggs (pelagophils), the process of oocyte hydration that occurs during meiosis resumption is a key physiological process for the survival of the eggs in the ocean. Previous studies have discovered the role of a teleost-specific aquaporin water channel (Aqp1b) during fish oocyte hydration, but direct experimental evidence for the function of Aqp1b in oocytes is still lacking. In addition, the molecular regulation of the Aqp1b-mediated mechanism remains poorly understood. In this context, the main objectives of the present thesis were to investigate the evolutionary origin of aqp1ab in teleosts, to provide functional evidence of the role of Aqp1b during oocyte hydration, and to begin to dissect the molecular mechanisms involved in the transcriptional regulation of aqp1b in the oocyte of marine teleosts. By integrating the molecular phylogeny with synteny and structural analyses we show that the teleost aqp1aa and -1ab paralogs (previously annotated as aqp1a and -1b, respectively) arose by tandem duplication, and that the Aqp1ab C-terminus is the most rapidly evolving subdomain within the vertebrate aquaporin superfamily. The functional role of Aqp1ab was investigated in Atlantic halibut (Hippoglossus hippoglossus), a marine acanthomorph teleost that spawns one of the largest pelagic eggs known. Using immunological inhibition of Aqp1ab in halibut oocytes and artificial expression of the halibut paralog Aqp1aa, we demonstrate that Aqp1ab is required for full hydration of oocytes undergoing meiotic maturation. To investigate the aqp1ab transcriptional regulation in oocytes, we isolated the 5’-flanking region of the gilthead seabream (Sparus aurata) aqp1ab gene which contains regulatory cis-elements for the nuclear progestin receptor (Pgr) and SOX transcription factors. The Pgr, as well as sox3 and -8b transcripts, are co-expressed in seabream oo-gonia, whereas in primary growth oocytes, when aqp1ab mRNA and protein are synthesized, the Pgr is translocated into the nucleus. In contrast, sox9b is highly expressed in more advanced oocytes showing the depletion of aqp1ab transcripts. In the seabream, four different pgr transcript variants are expressed in primary growth ovaries which are generated by alternative pre-mRNA splicing. Seabream wild-type Pgr shows the highest transactivation response to progestins such as 17α,20β-dihydroxy-4-pregnen-3-one (17,20β-P) and 17α,20β,21-trihydroxy-4-pregnen-3-one (17,20β,21-P), whereas two of the N-terminally truncated Pgr isoforms regulate novel nuclear and cytosolic mechanisms of dominant-negative repression of Pgr-mediated transcription. Transactivation assays on the aqp1ab promoter demonstrated that aqp1ab transcription is dependent on wild-type Pgr, with Sox3 and -8b acting synergistically, while Sox9b acts as a repressor. Incubation of primary ovarian explants in vitro with 17,20β-P, followed by chromatin immunoprecipitation, confirmed that 17,20β-P-activated Pgr enhanced aqp1ab promoter activation. The production of 17,20β-P in seabream primary growth ovaries in vivo was consistent with the expression of P450c17-II (Cyp17a2) and 20β-hydroxysteroid dehydrogenase (Cbr1), enzymes needed for progestins synthesis, in granulosa cells associated with primary growth oocytes, and with a high concentration of 17,20β-P. Incubation of primary ovarian explants with recombinant piscine follicle-stimulating hormone (rFsh) in vitro stimulated 17,20β-P synthesis, which was reduced in the presence of Cbr1 inhibitors. The rFsh-mediated production of 17,20β-P correlated with the up-regulation of cyp17a2 and cbr1 transcription, as well as of wild-type pgr mRNA and protein levels. Altogether, these data suggest that aqp1ab transcription in seabream primary growth oocytes is under Fsh regulation through the synthesis of progestins. The results of this thesis show that the Aqp1ab mediated mechanism for oocyte hy-dration is likely conserved in marine teleosts. In addition, the tight transcriptional reg-ulation of Aqp1ab during oogenesis highlights the essential physiological role of this water channel and opens new research avenues for understanding the molecular basis of egg formation in marine fish.

L'obesitat incrementa les possibilitats de patir altres malalties com la diabetis mellitus tipus 2 (DM2), la dislipèmia, la hipertensió, entre d'altres. Per tal de poder avançar en noves dianes terapèutiques que millorin aquestes malalties és necessari conèixer millor la biologia del teixit adipós i els seus components. El teixit adipós blanc, a més a més d'emmagatzemar la major part de les reserves energètiques, és capaç de tenir activitat metabòlica i endocrina. Cal tenir en compte que un adequat metabolisme lipídic en l'adipòcit és clau també per aconseguir un equilibri en l'homeòstasi del metabolisme glucídic en l'ésser humà. En aquest treball hem analitzat el paper de dues proteïnes implicades en la lipòlisi del teixit adipós, d'una banda el canal de glicerol aquaporina 7 (AQP7) i per altra l'adipoquina glicoproteïna Zinc-α 2 (ZAG), en el context de l'obesitat, la síndrome metabòlica i la DM2.Així, en aquesta tesi doctoral, hem pogut arribar a les següents conclusions:1. L'expressió del canal de glicerol AQP7, en teixit adipós, es troba disminuïda en pacients afectes d'obesitat mòrbida.2. La DM2 no sembla afectar l'expressió d'aquesta aquagliceroporina en el teixit adipós.3. Ambdues aquagliceroporines, AQP7 (al teixit adipós) i AQP9 (al teixit hepàtic) mantenen un estreta relació en pacients obesos mòrbids.4. La glicoproteïna Zinc-α 2 (ZAG) sembla tenir un paper rellevant en l'homeòstasi del teixit adipós amb un fort lligam amb altres adipoquines, especialment l'adiponectina., Obesity increases the chances to suffer from other diseases such as type 2 diabetes mellitus (T2DM), hyperlipidemia, hypertension, and others. In order to get into new therapeutic targets to improve these conditions, a best knowledge of the biology of adipose tissue and its components is needed. In addition to storing the most of energy reserves, white adipose tissue is able to have metabolic and endocrine activity. It is necessary to consider that an appropriate lipid metabolism in the adipocyte is also essential to achieve a balance in the homeostasis of glucose metabolism in humans. In this study we have examined the role of two proteins involved in adipose tissue lipolysis, first glycerol channel aquaporin 7 (AQP7) and on the other hand adipokine Zinc-α 2 glycoprotein (ZAG), in the context of obesity, metabolic syndrome and T2DM. Thus, in this thesis, we have reached the following conclusions: 1. The glycerol's channel AQP7 expression, in adipose tissue, is decreased in patients with morbid obesity. 2. The DM2 does not appear to affect the expression of this aquaglyceroporin in adipose tissue. 3. Both aquaglyceroporins, AQP7 (in adipose tissue) and AQP9 (in liver tissue) have a close relationship in morbidly obese patients. 4. The Zinc-α 2 glycoprotein (ZAG) seems to play an important role in the homeostasis of adipose tissue with a strong bond with other adipokines, particularly adiponectin.

O diabetes insipidus nefrogênico (DIN) é uma doença rara caracterizada pela incapacidade do rim de concentrar a urina, a despeito de concentrações normais ou aumentadas do hormônio antidiurético arginina-vasopressina (AVP). Recentes avanços da fisiopatologia renal mostraram que, após a ligação do AVP ao seu receptor AVPR2 (receptor de vasopressina tipo 2), uma cascata de eventos culmina com a reabsorção de água no túbulo coletor, por meio de canais permeáveis exclusivamente à água e localizados nas membranas apicais do túbulo coletor, sendo o mais importante deles a aquaporina-2 (AQP2). A identificação, caracterização e análise mutacional dos genes AVPR2 e AQP2 permitiram estabelecer as bases moleculares de vários tipos hereditários de diabetes insipidus nefrogênico. Aproximadamente 90% desses pacientes apresentam mutações do AVPR2, 8% apresentam mutações no AQP2 e o restante não tem causas identificadas. Nessa revisão apresentamos exemplos de alterações genéticas e sugerimos que o uso de técnicas de biologia molecular pode minimizar as complicações dessa doença heterogênea mas com fenótipo bastante semelhante. Nephrogenic diabetes insipidus (NDI) is a rare disease characterized by the kidney failure to concentrate urine despite normal or increased plasma concentrations of the antidiuretic hormone arginine vasopressin (AVP). Recent advances in kidney physiopathology demonstrate that, after AVP binding to its receptor AVPR2 (vasopressin type 2 receptor), a cascade of events leads to water reabsorption in the collecting duct through channels exclusively permeable to water and localized at the apical membranes of these collecting ducts, the most important being aquaporin-2 (AQP2). The identification, characterization and mutational analysis of genes AVPR2 and AQP2 helped to establish the molecular basis of the various types of hereditary nephrogenic diabetes insipidus. Approximately 90% of patients present with mutations of AVPR2, 8% have mutations of AQP2 and the remaining do not have any identifiable causes. In this review, we present examples of such genetic alterations and suggest that the use of molecular biology techniques can minimize the complications of this heterogeneous disease that presents with similar phenotype.