Search

The Colorectal Cancer (CRC) is one of the most prevalent neoplastic diseases in the world and is one leading cause of death. Irinotecan is a drug used as first line treatment for CRC and its liver metastases and has markedly improved the overall survival of patients. However, irinotecan-related side-effects, which include intestinal mucositis (IM), have impacted negatively on therapeutic outcome, leading to delayed chemotherapy cycles, dose reductions and treatment interruption. IM and life-threatening diarrhea may affect up to 15-25% of patients under irinotecan-based cancer chemotherapy regimens. Aims: To study the intestinal barrier function and the mechanisms involved in the IM induced by irinotecan and its active metabolite, SN-38. Methods: Male C57BL/6 mice (WT, n=6-8) were divided into groups and injected with saline (5 mL/kg, i.p.) or irinotecan (IRI, 75 mg/kg, i.p.) for 4 days. Body weight, diarrhea and blood leukocyte count were assessed on days 5 [D5] and 7 [D7]. Following euthanasia, intestinal samples were collected for histopathology, morphometry, mieloperoxidase and imunohistochemistry assays. In addition, in vivo intestinal permeability and perfusion tests were performed. Bacteremia and bacterial translocation to mesenteric lymph node and liver were further carried out. Additionally, the participation of toll-like receptors 2 (TLR2), 4 (TLR4) and 9 (TLR9), the adaptor protein MyD88 and NOD1 receptor in the pathogenesis of IM were investigated by the use of WT mice and knockout with target gene disruptions. Furthermore, the in vivo and in vitro effects of SN-38 were studied. Data analysis was performed with ANOVA/Bonferroni’s test or Kruskal Wallis/Dunn’s test. P0.05) versus saline injected mice. Besides, cultured intestinal cells (IEC-6) incubated with SN-38 presented morphological changes in comparison to DMEN-cultured cells. Conclusions: IRI induced functional alterations in the gut and also bacteremia and bacterial translocation to peripheral organs. TLR2 and MyD88 deficiency prevented IRI-related intestinal damage and the diarrhea. However, NOD1 deficiency was protective only against diarrhea development. In addition, SN-38 might be responsible for the intestinal inflammatory reaction without affecting gut secretion of liquids. O câncer colorretal (CCR) é uma das neoplasias mais prevalentes em todo o mundo, sendo uma das principais causas de óbito por câncer. Dentre as drogas utilizadas como primeira linha no tratamento do CCR e do CCR metastático hepático, o irinotecano apresenta destaque pelo impacto sobre o aumento da sobrevida dos pacientes. Contudo, o surgimento de efeitos colaterais associados ao irinotecano (IRI), como a mucosite intestinal (MI), tem impactado negativamente no curso terapêutico do paciente, observando-se atrasos nos ciclos subsequentes de quimioterapia, redução de doses e, por vezes, interrupção do tratamento. A MI e a diarréia grave são efeitos colaterais frequentes que pode atingir de 15-25% dos pacientes em quimioterapia. Objetivos: Estudar os parâmetros funcionais da barreira intestinal e os mecanismos envolvidos na mucosite intestinal induzida pelo Irinotecano e seu metabólito ativo, SN-38. Métodos: Camundongos C57BL/6 machos (WT), 20-25g, foram divididos em grupos (n=6-8), administrados por 4 dias com salina (5 mL/Kg, i.p) ou com irinotecano (IRI, 75 mg/Kg, i.p). Os animais foram analisados no 5º dia [D5] ou 7º dia [D7] quanto ao peso corpóreo, escores de diarreia, contagem de leucócitos. Após sacrifício, uma amostra de intestino foi coletada para dosagem de mieloperoxidase, análise histopatológica, morfométrica, e imunohistoquímica para TLR4. Adicionalmente, realizou-se o teste de permeabilidade e perfusão intestinal in vivo. Avaliou-se também a bacteremia e a translocação bacteriana em linfonodo mesentérico e fígado. Em adição, a participação de receptores Toll-like 2 (TLR2), 4 (TLR4) e 9 (TLR9) da proteína adaptadora MyD88 e NOD1 na mucosite intestinal foi verificada pelo uso de camundongos knockout com deleção gênica específica para aqueles receptores e seus respectivos camundongos selvagens (WT). Adicionalmente, realizou-se a avaliação dos efeitos in vivo e in vitro do SN-38. Os dados foram analisados com ANOVA/teste de Bonferroni ou Kruskal Wallis/teste de Dunn. P0.05) versus o grupo injetado com salina. O SN38 foi capaz de induzir alterações morfológicas nas células intestinais de ratos (IEC-6). Conclusão: O IRI induziu alteração dos parâmetros funcionais, detectadas pelo teste de permeabilidade e de perfusão intestinal. O IRI induziu uma bacteremia e translocação bacteriana para órgãos periféricos. Além disso, a deficiência do receptor Toll-like do tipo 2, e da proteína MyD88 previniu o dano intestinal e a diarreia induzida pelo IRI. Contudo, a deficiência de receptores NOD1 somente melhorou a diarreia. Adicionalmente, o SN38 foi associado a um aumento da infiltração de neutrófilo, sem alteração da secreção intestinal no modelo de alça isolada.

Two drugs are considered pharmaceutically equivalent when both contain the same drug (base, salt or ester of the same active ingredient), at the same dosage and pharmaceutical form determined in vitro. In Brazil, the allopathic drugs are classified into three cathegories when registered in the Brazilian health surveillance agency (Agência Nacional de Vigilância Sanitária): new, similar or generic drugs. This work aimed to determine the pharmaceutical equivalence of Carbamazepine 200 mg (CBZ) and Diazepam 10 mg (DZP) marketed in the Brazil Popular Pharmacy program, discussing the importance of drugs for public health. Carbamazepine SQR and Diazepam SQR were used as reference drugs with 99.6 and 99.9% declared content, respectively. Physicochemical studies, such as mean weight, disintegration, hardness, friability, content, content uniformity and dissolution profile were performed in accordance to Brazilian Pharmacopeia 4th edition. The results indicated a lower hardness of DZP Popular Pharmacy tablets. Despite the dissolution profile of CBZ, the ANOVA test presented significant statistical difference (p

Colorectal cancer (CRC) is a disease with high incidence and mortality. Irinotecan is an anticancer drug used as first and second-line therapy for CRC. Conversely, irinotecan-associated side effects include intestinal mucositis and severe diarrhea, which affect approximately 20-40% of patients undergoing chemotherapy, reducing patients’ quality of life. The pathophysiology of mucositis is not completely known, the reason why no specific treatment is available. Then, the investigation of the underlying pathophysiological mechanisms can provide new disease biomarkers and/or novel therapeutic strategies. Previous studies report the involvement of the Toll-like receptor 4 (TLR4) in the regulation of intestinal homeostasis. However, the role of TLR4 in the pathogenesis of intestinal mucositis is still to be investigated. Objective: To evaluate the role of TLR4 and its receptor polymorphisms in the pathogenesis of experimental and clinical intestinal mucositis. Methods: C57BL/6 (WT, 20-25g) or TLR4 knockout mice (TLR4-/-) were injected with saline (5 ml/kg, i.p.) or irinotecan (45 mg/kg, i.p.) once daily/4 days for induction of intestinal mucositis. Animals were daily weighted and, on the seventh day post first dose of chemotherapy, diarrhea severity was assessed. The animals were killed and an ileum sample was harvested for myeloperoxidase assay and histopathological and morphometric analysis. In a clinical approach, the impact of TLR4 polymorphisms on mucositis development was verified through a genotyping cohort study in CRC patients. The study consisted on the analysis of single nucleotide polymorphisms (SNP) Asp299Gly (rs 4986790) and Thr399Ile (rs 4986791) for TLR4 in patients with CRC who underwent irinotecan-based chemotherapy. Data were analyzed with ANOVA / Bonferroni test or Kruskal Wallis / Dunn test. For genotyping, analyzes were performed through the Hardy-Weiberg equilibrium and logistic regression. Results: Irinotecan injection caused a significant body weight loss and increased diarrhea associated with neutrophil infiltration in the intestine, morphometric changes and destruction of the villi and crypts architecture in TLR4-/- mice versus WT animals, which showed no signs of intestinal injury. In addition, the genotyping study indicated that the Asp299Gly polymorphism was associated with the homozygous wild-type A/A genotype and with a decreased risk of CRC. However, there was no association of Asp299Gly or Thr399Ile polymorphism with diarrhea, abdominal pain and nausea. Conclusion: TLR4 is essential for the maintenance of intestinal homeostasis and to protect from irinotecan-related intestinal damage. O câncer de colorretal (CCR) é umas das principais neoplasias atualmente, tanto devido a sua incidência quanto a sua mortalidade. Uns dos principais tratamentos para o CCR consiste no uso do irinotecano. Entretanto, esse quimioterápico pode desencadear um efeito colateral conhecido como mucosite intestinal, que cursa com uma intensa diarreia, afetando de forma direta a qualidade de vida do paciente, podendo acometer cerca de 20-40% dos pacientes em quimioterapia. Ainda não é totalmente esclarecida a fisiopatologia da mucosite, para a qual não existe tratamento específico. Assim, a investigação de mecanismos fisiopatológicos pode contribuir para a descoberta de biomarcadores ou novas estratégias terapêuticas. Estudos anteriores apontam o envolvimento no Toll-like receptor 4 (TLR4) no equilíbrio da homeostase intestinal. Contudo, o papel do TLR4 na patogênese da mucosite intestinal ainda não é compreendido. Objetivo: Avaliar o papel do TLR4 e polimorfismos desse receptor na patogênese da mucosite intestinal experimental e clínica. Métodos: Camundongos C57BL/6 machos (WT, 20-25g) ou deletados geneticamente para o receptor TLR4 (TLR4-/-), receberam salina (5 ml/kg, i.p.) ou irinotecano (45 mg/kg, i.p.), uma vez ao dia/4 dias, para indução da mucosite intestinal. Os animais foram pesados diariamente e os escorres de diarreia foram medidos no sétimo dia após o início do tratamento. Após o sacrifício, uma amostra de intestino foi retirada para dosagem de mieloperoxidase e análise histopatológica e morfométrica. Clinicamente, o impacto de polimorfismos de TLR4 no curso da mucosite foi avaliado em pacientes com câncer colorretal. Para tanto, realizou-se um estudo coorte de genotipagem para os polimorfismos de nucleotídeo único (SNP) Asp299Gly (rs 4986790) e Thr399Ile (rs 4986791) do TLR4 em pacientes com CCR que faziam tratamento quimioterápico a base de irinotecano. Os dados obtidos foram analisados por ANOVA/teste de Bonferroni ou Kruskal Wallis/teste de Dunn. Para genotipagem, as análises foram feitas através do Equilíbrio de Hardy-Weiberg e regressão logística. Resultados: A administração de irinotecano causou uma significativa perda ponderal e diarreia, associada a uma pronunciada infiltração de neutrófilos no intestino, alterações morfométricas e destruição da arquitetura das vilosidades e criptas em camundongos TLR4-/- quando comparados aos WT, nos quais não se verificaram tais alterações. Adicionalmente, os resultados da genotipagem indicaram para o polimorfismo Asp299Gly uma associação do genótipo homozigoto selvagem A/A com uma diminuição de risco de desenvolvimento de CCR. Entretanto, não foi encontrada uma associação significativa dos polimorfismos Asp299Gly e Thr399Ile com variáveis clínicas como diarreia, dor abdominal e náusea. Conclusão: O TLR4 é essencial para manutenção da homeostase do intestino e proteção contra a toxicidade do irinotecano.