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Submitted by Boris Flegr (boris@uerj.br) on 2021-01-05T18:08:20Z No. of bitstreams: 1 Andre Rodrigues da Cunha Barreto Vianna Tese completa.pdf: 3111094 bytes, checksum: fb5514c05e81971a42db633425273f93 (MD5) Made available in DSpace on 2021-01-05T18:08:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Andre Rodrigues da Cunha Barreto Vianna Tese completa.pdf: 3111094 bytes, checksum: fb5514c05e81971a42db633425273f93 (MD5) Previous issue date: 2017-06-28 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior The uncontrolled neuroinflammation is a key mechanism in the onset and progression of neurodegenerative diseases, and are related to insulin resistance. The glucagon-like peptide (GLP) -1 agonists, such as liraglutide, are well-known for their effects on glucose homeostasis and insulin sensitization they have been developed for use in the treatment of type 2 diabetes. Many evidences suggest that the GLP-1 analogues cross the blood brain barrier and acts as a neuroprotective agent. The liraglutide, despite its already known neuroprotective effects, has not yet been tested in a model of palmitate-induced neuroinflammation. Mice received intracerebroventricular infusion (ICV) of palmitate for 4 weeks and were treated for 2 weeks with liraglutide. We performed analyzes on body mass, carbohydrate metabolism, such as oral glucose tolerance test (TOTG) and intraperitoneal insulin tolerance test (TITI) and measurement of the insulin and GLP-1 plasmatic hormones. In the hypothalamus and adipose tissues, brown (BAT) and white, we evaluated by western blotting, RT-PCR and microscopy relating to neuroinflammation and metabolism (energy balance, thermogenesis, lipogenesis and lipolysis). In the hippocampus (CA1 and dentate gyrus regions) we evaluated markers related to neuroinflammation and, through confocal microscopy, we performed the morphological and molecular analysis of microglia and astrocytes. The ICV infusion of palmitate increased the body mass, decreased the glucose tolerance, and increased the insulin resistance. In the hypothalamus, palmitate increased the expression of the inflammatory markers: interleukin (IL)-1β, tumor necrosis factor (TNF)-α and altered the energetic balance, where we observed increased levels of neuropeptide Y (NPY) and decreased levels of pro-opiomelanocortin (POMC), in addition to hypothalamic insulin resistance. It was observed that palmitate increased the lipogenesis and the sectional area of white adipocytes and decreased the lipolysis. In BAT, palmitate increased the proteins related to fat accumulation and decreased thermogenesis. Liraglutide was effective in attenuating or reversing the hypothalamic effects associated with palmitate infusion, restoring energy control, attenuating neuroinflammation and insulin resistance, stimulating lipolysis and increasing thermogenesis in BAT. In the hippocampus, the ICV infusion of palmitate resulted in pronounced neuroinflammation, microgliosis and reactive astrogliosis. The microglia were present in higher density, had ameboid and hypertrophied morphology, and reduced the number of branches and junctions, besides expressing in more histocompatibility complex (MHC) -II. We observed in the hippocampus of the palmitate-infused groups an elevation in the levels of proinflammatory cytokines TNF-α and IL-6. The liraglutide induced the neuroprotective phenotype of the microglia, characterized by an increase in the complexity morphology of the microglia. This neuroprotective morphology was accompanied by a significant reduction in TNF-α and IL-6 expression. The study provides evidence that liraglutide may be a suitable treatment against the palmitate-induced neuroinflammation, which it is characterized by the impaired energy balance, intense expression of proinflammatory cytokines, reactive microgliosis and astrogliosis, which has been described as one of the primary causes of several pathologies of the central nervous system. A neuroinflamação descontrolada desempenha um mecanismo chave no surgimento e progressão das doenças neurodegenerativas, que muitas vezes estão relacionadas à resistência central à insulina. Os agonistas do hormônio peptídeo similar ao glucagon (GLP) -1, como a liraglutida, são mais conhecidos pelos seus efeitos sobre a homeostase da glicose e sensibilização da cascata da insulina e, como tal, foram desenvolvidos para uso no tratamento de diabetes mellitus tipo 2. Muitas evidências sugerem que os análogos do hormônio GLP-1 atravessam a barreira hematoencefálica e atuam como agentes neuroprotetores. A liraglutida, apesar de sua já conhecida ação neuroprotetora, ainda não foi testada em modelo de neuroinflamação induzida por palmitato. Camundongos receberam infusão intracerebroventricular (ICV) por 4 semanas de palmitato e foram tratados por 2 semanas com liraglutida. Fizemos análises relativas a massa corporal dos animais, ao metabolismo de carboidratos, como teste oral de tolerância à glicose (TOTG) e teste intraperitoneal de tolerância à insulina (TITI) e aferição dos hormônios insulina e GLP-1 no plasma. No hipotálamo e tecidos adiposos, marrom (BAT) e branco, avaliamos por western blotting, RT-PCR e microscopia parâmetros relacionados à inflamação e metabolismo (balanço energético, termogênese, lipogênese e lipólise). No hipocampo (regiões CA1 e giro denteado) avaliamos marcadores relacionados à neuroinflamação e, através da microscopia confocal, realizamos a análise morfológica e molecular das micróglias e astrócitos. A infusão ICV de palmitato aumentou a massa corporal, diminuiu a tolerância à glicose e gerou resistência à insulina. No hipotálamo, o palmitato aumentou a expressão dos marcadores inflamatórios: interleucina (IL)-1β e fator de necrose tumoral (TNF)-α, e comprometeu o balanço energético, onde observamos aumento dos níveis de neuropeptídio Y (NPY) e diminuição dos níveis de pró-opiomelanocortina (POMC), além de resistência hipotalâmica à insulina. Observamos que o palmitato aumentou a área dos adipócitos brancos, aumentou a lipogênese e diminuiu a lipólise. No BAT, o palmitato aumentou as proteínas relativas ao acúmulo de gordura e diminuiu a termogênese. A liraglutida foi efetiva em atenuar ou reverter os efeitos hipotalâmicos associados à infusão de palmitato, restaurando o controle energético, atenuando a neuroinflamação e a resistência à insulina, além de estimular a lipólise e aumentar a termogênese no BAT. No hipocampo a infusão ICV de palmitato resultou em pronunciada inflamação, microgliose e astrogliose reativas. As micróglias estavam presentes em maior densidade, possuíam morfologia ameboide, hipertrofiadas e com diminuição no número de ramos e junções, além de expressarem em maior quantidade o complexo de histocompatibilidade (MHC)-II. Observamos no hipocampo dos grupos infundidos com palmitato, uma elevação nos níveis das citocinas pró-inflamatórias: TNF-α e IL-6. A liraglutida induziu o fenótipo neuroprotetor da micróglia, caracterizado por um aumento da complexidade dessas células. Esta morfologia neuroprotetora foi acompanhada por uma redução significativa na expressão de TNF-α e IL-6. Em conclusão, o presente estudo demonstrou que a liraglutida possui potencial para atuar no combate a neuroinflamação induzida por palmitato, a qual é caracterizada por intensa expressão de citocinas pró-inflamatórias e alteração no balanço energético, além de microgliose e astrogliose reativas, descritos como uma das causas primárias de várias patologias do sistema nervoso central.

Os cardiomiócitos são sustentados e inseridos em um esqueleto de tecido conjuntivo, este possui distribuição desigual de acordo com as propriedades das distintas regiões em que se encontra. O propósito deste estudo foi quantificar a proporção de tecido conjuntivo em relação à disposição de cardiomiócitos dos ventrículos direito e esquerdo e no septo interventricular do miocárdio de seis equinos subnutridos, adultos, sendo quatro machos e duas fêmeas, sem raça definida e utilizados para tração. Com auxílio de paquímetro eletrônico digital, avaliou-se a altura do ventrículo esquerdo, a largura do coração, assim como sua circunferência, as espessuras das paredes livres dos ventrículos e do septo interventricular. Os fragmentos relativos ao terço médio do septo interventricular e das paredes livres dos ventrículos foram submetidos à técnica histológica convencional. Os blocos foram cortados com espessura de 5µm e corados com Picrosirius Red, Tricromo de Gomori e Tricromo de Azan para evidenciação do tecido conjuntivo. As lâminas foram analisadas com uso do microscópio óptico digital acoplado ao programa de análise de imagens Image-Pro Plus®. A proporção média de tecido conjuntivo no ventrículo esquerdo foi de 6,1±3,7%, no septo interventricular foi obtida a média de 6,8±3,6% e no ventrículo direito a média foi de 6,1±3,1%. Ao aplicarmos teste H de Kruskal-Wallis, verificamos que ocorreu diferença estatística entre os diferentes corantes utilizados em relação às regiões avaliadas. No teste de correlação de Pearson, não foi encontrado padrão de correlação entre a espessura das regiões analisadas e a proporção de tecido conjuntivo. Cardiomyocytes are sustained and inserted into a connective tissue skeleton that has different distribution depending up on the properties of the region in which it stands. The purpose of this study was to quantify the proportion of connective tissue in relation to the arrangement of cardiomyocytes of left and right ventricles and interventricular septum in myocardium of six mixed breed, ill trifted adult horses, of both sexes, used for traction. With hearts still fresh and with the aid of a digital caliper, it was estimated the height of left ventricle, the heart's width, the heart's circumference and the thickness of the ventricular free walls and interventricular septum. The fragments on the middle third of the interventricular septum and free walls of the ventricles were subjected to conventional histological technique. The blocks were cut with thickness of 5µm and stained with Picrosirius Red, Gomori Trichrome and Azan Trichrome to show the connective tissue. The slides were analyzed using optical microscope coupled to a digital analysis program Image-Pro Plus®. The average proportion of connective tissue in the left ventricle was 6.1+3.7%, in the interventricular septum and it was observed a mean of 6.8+3.6%. In the right ventricle the average was 6.0+3.0%. Applying the H test of Kruskal-Wallis, it was found that there was statistical difference between the different dyes used for each region. In the Pearson correlation test it was not found pattern correlation between the thickness of the regions analyzed and the proportion of connective tissue

O presente estudo avaliou os aspectos morfoquantitativos e qualitativos da glândula pineal em fêmeas de ovinos da raça Santa Inês em atividade reprodutiva e anestro fisiológico. Foram utilizados sete ovinos, fêmeas e adultas, coletados em frigoríficos da região de Brasília-DF. Estes não apresentavam sinais clínicos relacionados a afecções do sistema nervoso. Os encéfalos foram retirados e suas dimensões mensuradas. Posteriormente foram seccionados para expor a glândula pineal e mensurar suas dimensões. Os fragmentos do diencéfalo, contendo a glândula pineal, foram submersos em solução aquosa a 20% de formaldeído e posteriormente submetidos a técnicas histológicas convencionais. Para a avaliação morfoquantitativa desta glândula, foram empregadas as colorações Hematoxilia-Eosina, Azul de Toluidina e Tricrômio de Gomori. O encéfalo teve um comprimento médio de 67,25 ± 1,75 mm e a largura média de 58,97 ± 4,0 mm. Já a glândula pineal apresentou o comprimento médio de 6,98 ± 0,79 mm e a largura média de 6,40 ± 1,35 mm. Diante da análise microscópica, foi obtida uma média de 86,27 ± 30,44 pinealócitos por campo. Ao ser aplicado o teste de correlação de Pearson, o número de pinealócitos apresentou fraca correlação linear negativa (r = -0,11) em relação ao comprimento da glândula pineal e uma fraca correlação linear positiva (r = 0,39) em relação à largura da mesma. Portanto o número de pinealócitos apresenta uma maior correlação com a largura da glândula do que com o seu comprimento. Mastócitos estiveram presentes em apenas um animal (14,28%) e as concreções calcareas foram observadas em dois animais (28,57%). A glândula se mostrou envolta por uma cápsula de tecido conjuntivo com ausência de projeções para o parênquima. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT This study examined morphologic aspects of the pineal gland in Santa Ines sheep in anoestrus physiological and reproductive activity. Seven female adult sheep were collected at slaughterhouses in the region of Brasilia-DF, with no clinical signs related to diseases of the nervous system were used. The brains were removed and their dimensions were measured. The brains were sectioned to expose and measure the pineal gland. The fragments of the diencephalon containing the pineal gland were immersed in 20% formaldehyde solution. Subsequently, the fragments were submitted to conventional histological techniques. The Hematoxylin-eosin, Toluidine blue and Gomori trichrome staining were used for a morphoquantitative analysis. The brain had an average length of 67.25 ± 1.75 mm and average width of 58.97 ± 4.0 mm. The pineal gland had an average length of 6.98 ± 0.79 mm and average width of 6.40 ± 1.35 mm. The quantitative analysis showed an average 86.27 ± 30.44 of pinealocytes per field. According to the Pearson correlation test, the number of pinealocytes showed a weak negative linear correlation (r = -0.11) with the length of the pineal gland and a weak positive linear correlation (r = 0.39) with the width. Therefore, the number of pinealocytes has a stronger correlation with the width of the gland compared to the length. Mastocytes were present in only one animal (14.28%). Calcareous concretions were observed in two animals (28.57%). The connective tissue formed the capsule surrounding the gland with no projections into the parenchyma.

Para ampliar as informações sobre a morfologia comparativa, foram estudados, em aves (Gallus gallus domesticus) da linhagem Master Gris Cou Plumé, dados sobre o número de lobos tímicos, as origens, o número e a forma de distribuição das artérias que promoveram o suprimento sanguíneo deste órgão. Foram utilizadas 30 aves, 15 machos e 15 fêmeas, de aproximadamente seis semanas de idade, doadas, após morte natural, por criatórios do Distrito Federal. Os contingentes arteriais foram marcados com solução aquosa, a 50%, de Neoprene Látex “450”, corada com pigmento específico. Posteriormente, as aves foram fixadas e conservadas em solução aquosa, a 10%, de formaldeído, mediante aplicações intramusculares profundas, subcutâneas e intracavitárias e mantidas submersas na mesma solução. Foram encontrados de quatro a nove lobos tímicos cervicais e de um a dois lobos torácicos no antímero esquerdo; já no antímero direito, encontraram-se de três a sete lobos tímicos cervicais e de um a dois lobos torácicos. Verificou-se que os lobos tímicos foram supridos por ramos indiretos das artérias carótida comum, ingluvial, tireóidea caudal, tireóidea cranial, esofágica ascendente, comum do nervo vago e occipital, e ainda de ramos cutâneos. Foram supridos ainda por ramos diretos provindos das artérias ingluvial, tireóidea cranial e comum do nervo vago. Foi possível verificar que as aves desta linhagem apresentaram características próprias reforçadas ainda pelo fato das mesmas terem arranjos particulares para cada um dos indivíduos. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT Seeking to expand information on the comparative morphology of poultry (Gallus gallus domesticus) of the Máster Gris Cou Plumé lineage, a study was conducted to provide data on the number of lobes of the thymus in addition to origin, number and distribution of the arteries that promoted the sanguineous supply of this organ. To this end 30 poultry (15 males and 15 females) were used. They were about six week old and were donated after natural death by poultry farms of the Federal District. The arterial supply was injected with a “450” Neoprene Latex stained solution. Subsequently, the poultry were fixed in a 10% formoldehyde aqueous solution by means of deep intramuscular, subcutaneous and intracaviteous applications and were kept in the same solution. Four to nine cervical lobes were found, in addition to one or two thoracic lobes on the left side. On the right side, three to seven cervical lobes and one or two thoracic lobes were found. The lobes were supplied indirectly by branches coming from the common carotidal artery, the cranial and caudal thyroidal arteries, the ascending esophageal artery, the ingluvial artery, the common vagus nerve artery, the occipital artery and the cutaneous branches. They were also supplied by direct by branches from the ingluvial artery, cranial thyroidal artery and common vagus nerve artery. It was possible to verify that poultry of this breed not only possessed characteristics that were defining for the breed as such, but also demonstrated particular arrangements for each of the individuals.