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Made available in DSpace on 2016-02-05T18:29:50Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-11-07. Added 1 bitstream(s) on 2016-02-05T18:33:55Z : No. of bitstreams: 1 000856555_20161231.pdf: 775185 bytes, checksum: 33a10066608b881bcb1a54b01ef02bf3 (MD5) Bitstreams deleted on 2017-01-02T15:03:52Z: 000856555_20161231.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2017-01-02T15:05:09Z : No. of bitstreams: 1 000856555.pdf: 4072099 bytes, checksum: bf31ef2e26f6adc6f49a96b1e2bbecfd (MD5) Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) O presente estudo foi desenvolvido sobre aplicações tecnológicas da dextrana produzida pela bactéria Leuconostoc mesenteroides FT045B. Para que fosse possível trabalhar com a enzima, desenvolveu-se metolodogia para purificação com polietilenoglicol (PEG), seguida de filtração em gel cromatográfico. Após análise por SDS-PAGE, foi constatado que a enzima dextranasacarase FT045B apresenta massa molar de aproximadamente 136 kDa. Resultados obtidos pela análise de variância (ANOVA) mostraram que o experimento com 10% de PEG 1500 e 20% de PEG 4000 apresentou melhor purificação da enzima dextranasacarase. Foi confirmado que a enzima dextranasacarase purificada é uma glicosiltransferase e não uma frutosiltransferase, pela análise de atividade em gel de acrilamida sob condições não denaturantes. O ácido ascórbico α-glicosídeo foi sintetizado, pela reação de transglicosilação catalisada pela dextranasacarase previamente purificada, e estruturalmente caracterizado após purificação, por espectrofotômetro de massas. Também com a dextranasacarase purificada, foi realizado um delineamento composto central para otimizar as condições de temperatura, concentração de sacarose e atividade enzimática para a produção de dextrana de massa molar controlada, sendo que o ponto ótimo obtido foi estabelecido em 4,27% de Tween 80 e 1,83g de agitação. O composto, Bromo-dextrana, foi sintetizado pela reação de acetobromação de dextrana, seguido de purificação com etanol, secagem e identificação Development on technological applications of dextran produced by the bacterium Leuconostoc mesenteroides FT045B. Enzyme dextransucrase was purified with polyethyleneglycol (PEG), followed by gel filtration chromatography. After analysis by SDS-PAGE revealed that the enzyme presents dextransucrase FT045B molar mass of approximately 136 kDa. Results obtained by analysis of variance (ANOVA) showed that the experiment with 10% PEG 1500 and 20% PEG 4000 showed better dextransucarase enzyme purification. It was confirmed that the purified enzyme is a glycosyltransferase, but not a fructosyltransferase by activity on acrylamide gel under non denaturants conditions. The α-glycoside ascorbic acid was synthesized by transglycosylation reaction catalyzed by dextransucarase previously purified, and structurally characterized after purification by mass spectrometer ESI-MS. A central compositio design was also purified with dextransucarase performed to optimize the conditions of temperature, concentration and enzyme activity of sucrose to produce dextran of molecular weight controlled, and the optimal point obtained was set at 4.27% Tween 80 and 1,83g of agitation. The compound Bromo-dextran was synthesized by the reaction of acetylation followed by bromation of dextran, and purification with ethanol, drying and identification

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:24Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-04-08Bitstream added on 2014-06-13T19:56:05Z : No. of bitstreams: 1 vettori_mhpb_me_rcla.pdf: 4230401 bytes, checksum: 697ffea88f1331e4f1ec9a0411f4d879 (MD5) Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) Um estudo comparativo de onze métodos para determinação da atividade da dextranasacarase e de enzimas relacionadas foi realizado. Atualmente existem dois métodos usualmente empregados na determinação da atividade da dextranasacarase. Um método relativamente difundido para a reação da enzima com a sacarose consiste na medição dos valores redutores da D-frutose pelo reagente 3,5-dinitrosalicilato (DNS). Outro método é a reação da enzima com 14Csacarose, pela adição de uma alíquota da reação em papel de filtro Whatman 3MM, que posteriormente é lavado com metanol para a remoção da 14C-D-frutose e da 14C-sacarose não reagida, seguido da quantificação de 14C-dextrana por contador de cintilação líquida (CCL). Foi mostrado, pelo estudo realizado, que ambos os métodos geram dados errados. O método por quantificação do valor redutor proporciona resultados extremamente altos devido à oxidação tanto da D-frutose quanto da dextrana, e o método do 14C-papel gera resultados significativamente baixos devido à remoção de parte da 14C-dextrana do papel, pela lavagem em metanol. Neste trabalho, foram testados onze métodos, dentre os quais, dois apresentaram resultados idênticos, sendo considerados métodos confiáveis de medição da atividade da dextranasacarase. Este trabalho também reporta a caracterização físico-química de uma nova dextrana produzida por Leuconostoc mesenteroides FT045B. A estrutura química do polímero foi caracterizada por Espectroscopia de Infravermelho com Transformada de Fourier e por Espectroscopia de 1H Ressonância Magnética Nuclear. A dextrana produzida foi hidrolisada por endodextranase e seus produtos da reação do aceptor com maltose foram analisados por cromatografia em camada delgada e comparados com a dextrana comercial B512F obtida da Sigma Company. A massa molecular media e o grau de polimerização da dextrana produzida... A comparative study of nine assay methods for dextransucrase and related enzymes has been made. A relatively widespread method for the reaction of the enzyme with sucrose, is the measurement of the reducing value of D-fructose by alkaline 3,5- dinitrosalicylate (DNS). Another method is the reaction with 14C-sucrose, with the addition of an aliquot to Whatman 3MM paper squares that are washed 3-times with methanol to remove 14C-D-fructose and unreacted 14C-sucrose, followed by counting of 14C-dextran on the paper by liquid scintillation counting (LSC). It is shown that both methods give erroneous results. The reducing value method gives extremely high values due to over-oxidation of both D-fructose and dextran, and the 14C-paper square method gives significantly low values due to the removal of some of the 14Cdextran from the paper, by the methanol washes. In the present study, we have examined nine methods and find two that give values that are identical and are an accurate measurement of the dextransucrase reaction. This work also reports the physical and chemical characterization of a new dextran produced by Leuconostoc mesenteroides FT045B. The chemical structure of the polymer was characterized through Fourier transform infrared spectroscopy and 1H nuclear magnetic resonance spectroscopy. The dextran produced was hydrolyzed by endodextranase and its products from the acceptor reaction with maltose were analyzed using thin layer chromatography and compared with those of a commercial native dextran B512-F obtained from the Sigma Company. The average molecular weight and degree of polymerization of the dextran produced were determined through the measurement of the reducing value using the copper bicinchoninate method and the measurement of the total carbohydrates using the phenol-sulfuric acid method. All data revealed a very similar structure to that of the commercial dextran B512F from... (Complete abstract click electronic access below)