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The development of novel vaccines requires the design of new adjuvants able to give long lasting immune responses. Our aim was to obtain cationic liposomes as adjuvants by an industry-suitable method, and evaluate them using bovine serum albumin (BSA) as immunogen and CpG oligonucleotides with phosphodiesther bonds, as immunostimulants. Liposomes (Lip) were prepared with dipalmitoylphosphatidylcholine, cholesterol and stearylamine by Ethanol Injection method. Immune response was assessed by immunization of Balb/c mice with: Lip+BSA, Lip+BSA+CpG, CpG+BSA or aluminium hydroxide (Al(OH)3+BSA). Liposomal formulations were able to induce high antibody levels. Lip+BSA+CpG led to higher IgG levels than Lip+BSA (p

Nucleic acids-based therapies have recently developed as next-generationagents for treating and preventing viral infection, cancer, and genetic disorders,but their use is still limited due to its relatively poor delivery into targetedcells. We designed and synthesized new amphiphilic amino acid derivatives(cysteine-based) of low molecular weight, formed by the same pentapeptide(AG2: WWCOO) N-acylated, with different hydrophobic chains containingfrom 12 to 18 carbons, named AG2-Cn (N), which dimerize by oxidationin the presence of pLenti-CMV-GFP Puro plasmid (P) in the respectivegemini. We determined transfection efficiency, critical micelle concentration,particle size, ζ-potential and cytotoxicity for the derivatives obtained. Wefound that all the synthesized compounds were active for DNA delivery andhad greater ability to transfect CHO-K1 cells. In particular, AG2-C18 is apromising carrier for gene delivery because it showed no cytotoxicity and itsactivity was greater than or equal to the commercial actives currently used. Fil: Peña, Lucía Carolina. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas; Argentina Fil: Argarañá, María Fernanda. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas; Argentina Fil: de Zan, María Mercedes. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas; Argentina Fil: Giorello, Antonella. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Santa Fe. Instituto de Investigaciones en Catálisis y Petroquímica "Ing. José Miguel Parera". Universidad Nacional del Litoral. Instituto de Investigaciones en Catálisis y Petroquímica "Ing. José Miguel Parera"; Argentina Fil: Antuña, Sebastián. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas; Argentina Fil: Prieto, Claudio. Universidad Nacional del Litoral; Argentina Fil: Veaute, Carolina Melania Isabel. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas; Argentina Fil: Muller, Diana. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas; Argentina

This study aimed to determine the clonal relationship among 137 Streptococcus uberis isolates from bovine milk with subclinical or clinical mastitis in Argentina and to assess the prevalence and conservation of pauA and sua genes. This information is critical for the rational design of a vaccine for the prevention of bovine mastitis caused by S. uberis. The isolates were typed by random amplified polymorphic DNA (RAPD) analysis and by pulsed-field gel electrophoresis (PFGE). The 137 isolates exhibited 61 different PFGE types and 25 distinct RAPD profiles. Simpson's diversity index was calculated both for PFGE (0.983) and for RAPD (0.941), showing a high discriminatory power in both techniques. The analysis of the relationship between pairs of isolates showed 92.6 % concordance between both techniques indicating that any given pair of isolates distinguished by one method tended to be distinguished by the other. The prevalence of the sua and pauA genes was 97.8 % (134/137) and 94.9 % (130/137), respectively. Nucleotide and amino acid sequences of the sua and pauA genes from 20 S. uberis selected isolates, based on their PFGE and RAPD types and geographical origin, showed an identity between 95 % and 100 % with respect to all reference sequences registered in GenBank. These results demonstrate that, in spite of S. uberis clonal diversity, the sua and pauA genes are prevalent and highly conserved, showing their importance to be included in future vaccine studies to prevent S. uberis bovine mastitis. Este estudio pretendió determinar la relación clonal entre 137 aislamientos de S. uberis obtenidos de leche de bovinos con mastitis clínica o subclínica en la Argentina, como así también la prevalencia y la conservación de los genes sua y PauA entre dichos aislamientos. Esta información es crítica para el diseño racional de una vacuna que prevenga la mastitis bovina por S. uberis. Los aislamientos se tipificaron molecularmente por amplificación al azar del ADN polimórfico (RAPD) y mediante electroforesis de campos pulsados (PFGE). Los 137 aislamientos mostraron 61 pulsotipos mediante PFGE y 25 tipos de RAPD diferentes. Los índices de Simpson calculados fueron 0,983 por PFGE y 0,941 por RAPD; esto evidencia el elevado poder discriminatorio de ambas técnicas. El análisis de la relación entre pares de aislamientos mostró un 92,6 % de concordancia entre ambas técnicas, lo que indica que cualquier par de aislamientos que fue distinguido por un método tendió a ser distinguido por el otro. La prevalencia de los genes sua y puaA fue del 97,8 % (134/137) y 94,9 % (130/137), respectivamente. Las secuencias de nucleótidos y de aminoácidos codificados por los genes sua y pauA de los 20 aislamientos de S. uberis seleccionados sobre la base de su tipo de PFGE y RAPD y origen geográfico tuvieron un porcentaje de identidad de entre 95 % y 100 % con respecto a todas las secuencias de referencia registradas en GenBank. Estos resultados demuestran que, a pesar de la diversidad clonal de S. uberis, los genes sua y pauA son prevalentes y están altamente conservados y deberían ser incluidos en futuros estudios de vacunas para prevenir mastitis bovina causada por S. uberis. EEA Rafaela Fil: Perrig, Melina Soledad. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas. Laboratorio de Tecnología Inmunológica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina Fil: Ambroggio, Maria Belen. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas. Laboratorio de Tecnología Inmunológica; Argentina Fil: Buzzola, Fernanda R. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones en Microbiología y Parasitología Médica. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones en Microbiología y Parasitología Médica; Argentina Fil: Marcipar, Ivan Sergio. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas. Laboratorio de Tecnología Inmunológica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina Fil: Calvinho, Luis Fernando. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Rafaela; Argentina. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentina Fil: Veaute, Carolina Melania Isabel. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas. Laboratorio de Tecnología Inmunológica; Argentina Fil: Barbagelata, Maria Sol. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas. Laboratorio de Tecnología Inmunológica; Argentina

La interacción entre las células somáticas y entre las gametas involucra una serie de eventos moleculares que no han sido dilucidados totalmente. Nuestro grupo de investigación ha desarrollado proyectos dirigidos a profundizar el conocimiento de dichos eventos. Los estudios han comprendido el análisis de moduladores de la funcionalidad espermática (ej. efecto de la temperatura de incubación, las concentraciones del ión calcio, los anticuerpos antiespermáticos de fluidos biológicos en la motilidad, la capacitación y la exocitosis acrosomal). Asimismo, hemos caracterizado componentes del espermatozoide (ej. CaM Kinasa IV, proacrosina/acrosina) y de secreciones del tracto femenino (ej. Grp78/BiP), evaluado su rol en el desarrollo de capacidad fecundante y, en algunos casos, investigado su relación con la infertilidad. En años recientes, nuestros proyectos se han extendido al estudio de las cadherinas en eventos de adhesión celular durante la fecundación; hemos caracterizado la expresión de cadherina epitelial y neural en tejidos reproductivos y gametas y evaluado su participación en la fecundación. Dada su reconocida relevancia en el cáncer, hemos abordado estudios en diversos modelos tumorales. Nuestras investigaciones han contribuido a la comprensión de los eventos de interacción de las gametas durante la fecundación así como entre las células somáticas durante la progresión tumoral. Cell-cell interaction between somatic cells as well as gametes involves molecular events that have not been completely elucidated. Our research group has developed projects aimed at studying proteins and mechanisms participating in these interactions. Several modulators of sperm functions have been analyzed (i.e. incubation temperature, calcium ion concentration, and antisperm antibodies present in biological fluids upon sperm motility, capacitation and acrosomal exocytosis). In addition, proteins from spermatozoa (i.e. CaM Kinase IV, proacrosin/acrosin) and from secretions of the female tract (Grp78/BiP) have been characterized, and their role in the development of sperm fertilizing ability assessed. In some cases, their relationship with infertility was evaluated. In recent years, our projects have been extended to study members of the cadherin superfamily and related proteins; in particular, the expression of epithelial and neural cadherin in reproductive tissues and gametes was characterized and evidence of their participation in fertilization-related cell-cell adhesion events shown. Based on the vast evidence of the role of these proteins in tumor progression, our current research also involves studies of cancer models. Our projects have contributed to the understanding of the molecular basis of cell-cell interaction during fertilization as well as during tumor progression. A interação entre as células somáticas e entre os gametas envolve uma série de eventos moleculares que não têm sido elucidados totalmente. Nosso grupo de pesquisa tem desenvolvido projetos encaminhados a aprofundar o conhecimento de tais eventos. Os estudos têm compreendido a análise de moduladores da funcionalidade espermática (ex. efeito da temperatura de incubação, as concentrações do íon cálcio, os anticorpos antiespermáticos de fluidos biológicos na motilidade, a capacitação e a exocitose acrossomal). Do mesmo modo, caracterizamos componentes do espermatozoide (ex. CaM Kinase IV, proacrosina /acrosina) e de secreções do trato feminino (ex. Grp78/BiP), avaliamos seu papel no desenvolvimento de capacidade fecundante e, em alguns casos, investigamos sua relação com a infertilidade. Em anos recentes, nossos projetos se têm estendido ao estudo das caderinas em eventos de adesão celular durante a fecundação; temos caracterizado a expressão de caderina epitelial e neural em tecidos reprodutivos e gametas e avaliamos sua participação na fecundação. Dada sua reconhecida relevância no câncer, temos abordado estudos em diversos modelos tumorais. Nossas pesquisas têm contribuído à compreensão dos eventos de interação dos gametas durante a fecundação bem como entre as células somáticas durante a progressão tumoral Fil: Vazquez, Monica Hebe. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental (i); Argentina Fil: Furlong, Laura I.. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental (i); Argentina Fil: Marin Briggiler, Clara Isabel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental (i); Argentina Fil: Veaute, Carolina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental (i); Argentina Fil: Veiga, Maria Florencia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental (i); Argentina Fil: Matos, María L.. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental (i); Argentina Fil: Lapyckyj, Lara. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental (i); Argentina Fil: Gabrielli, Nieves María. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental (i); Argentina Fil: Rosso, Marina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental (i); Argentina Fil: Arzondo, María M.. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental (i); Argentina Fil: Edelsztein, Nadia Yasmín. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental (i); Argentina Fil: Besso, María José. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental (i); Argentina

Entre totes les proteïnases espermàtiques semblants a la tripsina estudiades, l'acrosina (EC 3.4.21.10) ha estat identificada en totes les espècies estudiades, i ha estat associada amb el potencial fertilitzador de l'esperma. En aquesta breu revisió, volem presentar els principals aspectes cell. ulars, moleculars i bioquímics del sistema proacrosina/acrosina definits pel nostre grup de recerca i per molts altres equips de recerca del camp de la biologia de la reproducció. Com a resultat de tots aquests estudis, presentem el model putatiu de la interacció del sistema proacrosina/ acrosina amb les glicoproteïnes de la zona pell. úcida i la demostració de l'activació del proenzim i la seva activitat com a proteïnasa., Among all of the sperm acrosomal trypsin-like proteinases studied, acrosin (EC 3.4.21.10) has been identified in all of the species evaluated and has been associated with human sperm fertility potential. In this report, a brief overview of cellular, biochemical, and molecular aspects related to the human proacrosin/acrosin system, has been compiled from studies performed by our research team, as well as contributions by numerous groups from the clinical and basic field of reproductive biology. As a result of these studies, a putative model for the interaction between the proacrosin/acrosin system and the zona pellucida glycoproteins, in association with proenzyme activation and proteinase activity, is presented.

Fil: Veaute, Carolina M. I.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Fil: Gaydou, Luisa. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas; Argentina. Células del sistema inmune poseen enzimas esteroidogénicas, y se demostró síntesis estrogénica por parte de células inmunes tisulares en diversas enfermedades. La Leucemia Linfocítica Crónica (LLC) es la leucemia más común en nuestra sociedad. Dada su mayor incidencia y peor pronóstico en varones, se ha estudiado el rol de hormonas sexuales en la patología. No hay estudios sobre la síntesis de hormonas esteroideas dentro de células mononucleares en LLC. La epigenética es relevante en oncogénesis. El ADN de pacientes con LLC está hipometilado, pero genes asociados a pronóstico favorable están hipermetilados. Nuestro objetivo fue estudiar la esteroidogénesis en células mononucleares de individuos normales y con LLC, relacionarla con la expresión de interleuquinas, y evaluar su regulación epigenética. Células mononucleares de sangre periférica (CMSP) de individuos sanos expresan enzimas esteroidogénicas. Se observó disminución del ARNm de enzimas del metabolismo de testosterona en CMSP de pacientes con LLC (CMSP-LLC). Ensayos en cultivo indicarían que en CMSP de individuos sanos, la testosterona actuaría como regulador positivo de la expresión de 5-alfa reductasa 1. Esto no ocurre en CMSP-LLC, sugiriendo que la vía androgénica no estaría activa, o que el receptor de andrógenos estaría inactivo o ausente. La mayoría de las citoquinas analizadas presentan menor ARNm en CMSP-LLC de varones, y estarían relacionadas con la expresión de ARNm de enzimas esteroidogénicas. En mujeres con LLC, modificaciones del promotor de 5-alfa reductasa 1 se asociarían con menor expresión proteica. En conclusión, la esteroidogénesis, principalmente la androgénesis, podría ser crítica para el normal funcionamiento de CMSP. Studies show that various steroidogenic enzymes are present in healthy immune cells. Local production of estrogens from tisular immune cells has been implicated in disease pathogenesis. Chronic Lymphocytic Leukemia (CLL) is the most common form of leukemia in our society. Given the higher incidence and worse disease prognosis in males, authors have studied the possible role of sex steroids in CLL. However, there are no studies regarding sex steroid synthesis in mononuclear cells of patients with the disease. Epigenetic alterations are relevant in oncogenesis. DNA from CLL patients is mostly hypomethylated, yet genes associated with favorable prognosis display a hypermethylated status. Our goal was to study steroidogenesis in mononuclear cells of healthy individuals and with CLL, associate it with interleukin expression and evaluate possible epigenetic regulatory mechanisms. Healthy peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) expressed many steroidogenic enzymes. PBMCs from CLL patients had diminished mRNA expression of enzymes associated with testosterone metabolism. Experiments with cultured cells indicated that in healthy PBMCs testosterone could act as positive regulator of 5-alpha reductase 1 gene expression. This does not occur in CLL, implying that androgenic pathway might not be active, or that androgen receptor could be absent or inactive. Most cytokines studied evidenced lower mRNA expression in males with CLL, and seemed to be associated to mRNA expression of some steroidogenic enzymes. In females with CLL, alterations of 5-alpha reductase 1 promoter could be associated with lower protein expression. In conclusion, intracellular steroidogenic pathways, mainly androgenic, might be critical for correct functioning of PBMCs. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas Universidad Nacional del Litoral

Fil: Reidel, Ivana Gabriela. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas; Argentina. Se estima que la bacteria Staphylococcus aureus, es la responsable del 20-25% de las infecciones intra-hospitalarias. Por otra parte, la mastitis bovina es un claro ejemplo de los efectos de este patógeno en el ámbito veterinario. Staphylococcus aureus fue incluido en la lista de “patógenos prioritarios” resistentes a antibióticos publicada por la OMS, convirtiendo al desarrollo de una vacuna contra esta bacteria en una prioridad mundial. La combinación apropiada de antígenos y adyuvantes resulta clave en la formulación de vacunas eficaces contra S. aureus. Entre los adyuvantes de nueva generación se encuentran los liposomas, vesículas fosfolipídicas capaces de transportar al antígeno junto con moléculas inmunoestimulantes. En la presente tesis se estudió, por un lado, la respuesta inmune generada en terneras, vaquillonas y vacas preñadas tras la inmunización con una vacuna a subunidades, que incluyó distintos antígenos recombinantes de S. aureus, formulados con adyuvantes liposomales previamente evaluados en ratón por nuestro grupo. Por otro lado, se generaron diversas formulaciones liposomales que contenían distintos inmunoestimulantes junto a un antígeno de superficie de S. aureus recombinante y se estudió su capacidad de inducir una respuesta inmune eficiente en un modelo experimental murino. Asimismo, se evaluó la capacidad de las distintas formulaciones liposomales como vehículo y adyuvante en la administración transdérmica e intradérmica de vacunas. Los resultados obtenidos demuestran que los liposomas catiónicos constituyen un sistema adyuvante de gran versatilidad, que permite la selección de los inmunoestimulantes a incluir, en función de las características de la respuesta inmune que se necesita inducir. It is estimated that Staphylococcus aureus is responsible for 20-25% of nosocomial infections. In addition, bovine mastitis is a clear example of the effects of this pathogen in the veterinary field. Staphylococcus aureus was included in the global priority list of antibiotic-resistant bacteria published by the WHO, making the development of a vaccine against it, a prime concern. The appropriate combination of antigens and adjuvants becomes crucial to formulate an effective vaccine against S. aureus. One of the new generation adjuvants are liposomes, phospholipid vesicles able to promote the development of specific immune responses, by transporting the antigen together with immunostimulant molecules. Considering this background, we work on two main objectives. Firstly, the induced immune response was studied in calves, heifers and pregnant cows after immunization with a subunit vaccine, which included different recombinant S. aureus antigens, formulated with the liposomal adjuvants previously evaluated in mice by our group. Secondly, various liposomal formulations containing different immunostimulants were generated, in combination with the recombinant S. aureus surface antigen. Then, their ability to induce an efficient immune response in a murine experimental model was studied. Moreover, the liposomal formulations capacity as carrier and adjuvant in transdermal and intradermal vaccine administration was evaluated. The results presented in this thesis, demonstrate that cationic liposomes constitute a versatile adjuvant system, which allows the selection of the proper immunostimulants, depending on the needed immune response characteristics. Agencia Nacional de Promoción Científica y Tecnológica Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas Universidad Nacional del Litoral Université de Poitiers Ministerio de Ciencia, Tecnología e Innovación Productiva Ministère des Affaires Étrangères et du Développement International

Fil: Russi, Romina Cecilia. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas; Argentina. La infertilidad es un problema mundial de salud pública. Las infecciones de transmisión sexual (ITS) son una causa de infertilidad. El objetivo general fue investigar la relación entre la respuesta inmune asociada con la infección por Chlamydia trachomatis, Mycoplasma hominis y Ureaplasma urealyticum e infertilidad, y contribuir al diseño de vacunas preventivas contra C. trachomatis. Respecto al análisis de prevalencia, los resultados indicaron que el 29,9% de los 193 pacientes infértiles analizados presenta alguna de estas tres ITS. Los resultados obtenidos sugieren que los anticuerpos antiespermáticos no serían los principales factores que contribuyen a la infertilidad. Sin embargo, tanto los pacientes infértiles con y sin estas ITS presentaron alteraciones en citoquinas y factores de transcripción maestros de linfocitos T helper (con predominio de un ambiente proinflamatorio) tanto en lavado vaginal como en plasma seminal. Por otro lado, las tres formulaciones vacunales evaluadas (con y sin el empleo de adyuvantes), generaron una robusta respuesta humoral, tanto sistémica como en mucosa vaginal en un modelo murino empleando una estrategia de prime-boost sin exhibir alteraciones en la fertilidad. El presente trabajo de tesis permitió comprender los factores locales que regulan la inmunidad de las mucosas en pacientes infértiles con y sin infecciones genitales y diseñar, desarrollar y evaluar diversas formulaciones vacunales para lograr inmunidad contra C. trachomatis sin alterar la fertilidad. En conjunto este trabajo brinda elementos para una mejor comprensión de los trastornos reproductivos y aporta herramientas para la prevención de una ITS con gran impacto en la salud reproductiva y neonatal. Infertility is a public health problem that affects people worldwide. Sexually Transmitted Infections (STI) are a common cause of human infertility. The general objective was to investigate the relationship between the immune response associated with Chlamydia trachomatis, Mycoplasma hominis and Ureaplasma urealyticum infections and infertility, and to contribute to the design of vaccines to prevent C. trachomatis infection. A prevalence analysis showed that 29.9% of the 193 infertile patients analyzed have any of these three STI. The study of the immune factors suggests that antisperm antibodies (ASA) would not be the main contributing factor to infertility in the patients studied. However, infertile patients (with and without STI) presented alterations the cytokines and master transcription factors expression in vaginal washing and seminal plasma. Taken together, these results support the hypothesis that STI produce alterations in the immune environment that could negatively impact fertility. Immunization assays using a prime-boost strategy against the Polymorphic membrane protein D (PmpD) from C. trachomatis, using different adjuvant formulations, generated a robust humoral response, both systemic and local (in vaginal mucosa) in a murine model, without negative effects upon fertility parameters. This work allowed understand the local factors that regulate the immunity in infertile patients and to design, develop, and evaluate various vaccine formulations to achieve protective immunity against C. trachomatis. Taken together, this work provides elements for a better understanding of reproductive disorders and provides possible tools for the prevention of STI with a great impact on reproductive and neonatal health. Agencia Santafesina de Ciencia, Tecnología e Innovación Secretaría de Políticas Universitarias de la Nación Universidad Nacional del Litoral Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas

Fil: Perrig, Melina Soledad. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas; Argentina. La mastitis bovina es una enfermedad importante del ganado lechero. Es responsable de grandes pérdidas económicas para los agricultores y la industria láctea, una de las principales actividades económicas de la Argentina. Streptococcus uberis es un patógeno ambiental que no puede ser controlado con las medidas establecidas por los organismos internacionales y nacionales. La alta incidencia de este patógeno en Argentina y otros países del mundo y la falta de tratamiento antibiótico eficaz durante los períodos de mayor incidencia, centran el problema en la búsqueda de terapias alternativas que tiendan a disminuir el uso de antibióticos, tales como terapias Inmunoprofilácticas. El principal objetivo de este trabajo fue desarrollar un inmunógeno específico para la prevención de la mastitis bovina causada por S. uberis. Este estudio permitió determinar que dos factores de virulencia: PauA y SUAM, son altamente conservados y prevalentes en aislamientos de S. uberis de Argentina, y constituyen candidatos vacunales capaces de generar una respuesta inmune significativa. Además, los resultados indican una región dentro de la molécula SUAM, que tendría un papel importante en el mecanismo patogénico de esta bacteria. La inmunización bovina con el prototipo de la vacuna indican que ambas proteínas, formuladas con el adyuvante adecuado, pueden generar una respuesta inmune que es prometedora para futuros ensayos de vacunas contra S. uberis. Bovine mastitis is an important disease of dairy cattle. It is responsible for great economic losses for farmers and the dairy industry, one of the main economic activities in Argentina. Streptococcus uberis is an environmental pathogen for which the control measures established by international and national entities have no success. The high incidence of this pathogen both in Argentina and other countries toghether with the lack of effective antibiotic therapy during periods of increased incidence, focus the problem in the search for an alternative therapy tending to reduce the use of antibiotics, such as an imunoprophylactic therapy. The main objective of this work was to develop a specific immunogen for the prevention of bovine mastitis caused by S. uberis. This study allowed us to determine that two virulence factor: PauA and SUAM are highly conserved and prevalent, and are vaccine candidates able to induce a significant immune response. Furthermore, the results suggest a region within the SUAM molecule, having an important role in the pathogenic mechanism of this microorganism. Bovine immunization with the vaccine prototype indicate that both proteins, formulated with the adequate adjuvant, can generate an immune response and they are promising for future trials of vaccines against S. uberis infection. Fundacion Nuevo Banco de Santa Fe Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas Agencia Nacional de Promoción Científica y Tecnológica

Fil: Baldi, Cecilia Josefina. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentina. Ciertos factores antropogénicos y/o ambientales pueden ocasionar diferentes tipos de estrés influyendo sobre el sistema inmune de animales silvestres. La valoración del estado inmunitario de estos individuos es fundamental para dilucidar la ecoepidemiología de enfermedades que afectarían la salud del hombre y los animales. En el presente trabajo, fueron evaluados componentes del sistema inmune innato (Anticuerpos naturales (AcN) y citocinas: TNF-alfa, IL-1beta e IL-10) e índices genéricos de salud (condición corporal y parámetros hematológicos), a partir de un modelo experimental de estrés en carpinchos (Hydrochoerus hydrochaeris). El objetivo fue establecer si estos marcadores eran sensibles al estrés crónico (estrés nutricional y psico-físico). Los resultados mostraron un impacto negativo de ambos tipos de estrés en la condición corporal de los individuos y un efecto positivo en componentes inmune no específicos (eosinófilos y AcN). La determinación de la expresión de ARNm de las citocinas evaluadas no se vio modificada por el estrés. Estos resultados sugieren que durante períodos prolongados de estrés los carpinchos invierten en componentes del sistema inmune como: AcN y eosinófilos, lo cual podría ser considerado una profilaxis dependiente del estrés. Estos marcadores constituirían una importante herramienta para el estudio de la dinámica de salud en poblaciones silvestres de carpinchos. Some anthropogenic and/or environmental factors may cause different kinds of stress influencing the immune system of wild animals. Assessing the immune-competence of these individuals is crucial to elucidate the eco-epidemiology of many diseases of importance for humans and animals. In this work, two components of innate immune system: natural antibodies (NAb) and cytokines (TNF-alpha, IL-1beta and IL-10) and generic indices of health (body condition and hematological parameters) were assessed as markers in stressed capybara (Hydrochoerus hydrochaeris) from an experimental model. The goal was to assess the effect of two types of chronic stress -food restriction and physical restraint- on these markers. The results showed that both stress treatments had a marked negative impact on body condition, but they had a significant positive effect on some components of the immune system (eosinophil and NAb). Expression of cytokines messenger ribonucleic acid levels has not been affected by both types of stress. These results suggest that during prolonged periods of stress capybaras preventively invest in some components of their innate defenses: NAb and eosinophils, which could be considered a stress-dependent prophylaxis. These markers have the potential to be an important tool for the study of dynamics of health in wild populations of capybaras. Agencia Nacional de Promoción Científica y Tecnológica Secretaría de Estado de Ciencia, Tecnología e Innovación de la Provincia de Santa Fe

Fil: Rodríguez, Fernanda Mariel. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentina. La enfermedad quística ovárica (COD) es uno de los trastornos reproductivos más frecuentes en vacas lecheras de alta producción. Alteraciones en la funcionalidad del eje hipotálamo-hipofisario-gonadal serían responsables del desarrollo de la COD. Considerando al sistema factores de crecimiento análogos a insulina (IGF) como importantes reguladores del crecimiento y funcionalidad folicular, evaluamos la participación de componentes del sistema IGF que podrían asociarse al desarrollo de la COD. Se evidenció una disminución del ARNm IGF1 en la granulosa de quistes respecto a folículos controles. Si bien no hubo cambios en la expresión proteica de las proteínas de unión a IGF (IGFBP) 2 y 3, la expresión del ARNm disminuyó en la granulosa de quistes respecto a folículos controles. La actividad de IGFBP3 en líquido folicular (LF) fue superior a las restantes IGFBPs, mientras que para IGFBP2 se mantuvo constante. La expresión génica y proteica de IGFBP4 y 5 en células de la granulosa y la actividad en LF disminuyó en quistes respecto a folículos terciarios del grupo control. El ARNm de IGFR1 y PAPP-A fue menor en la granulosa de folículos controles respecto a quistes. A nivel proteico, IGFR1 aumentó en la granulosa de quistes respecto a folículos terciarios controles y la PAPP-A aumentó en el LF de quistes comparados con los folículos terciarios controles. No se detectó expresión y actividad de IGFBP1 y 6. Estos resultados evidenciarían que alteraciones en los componentes del sistema IGF afectarían al normal funcionamiento del ovario participando en el desarrollo de la COD en bovinos. Cystic ovarian disease (COD) is one of the more frequent reproductive disorders in dairy cows. Alterations in the function of the hypothalamic-hypophysis-gonadal axis would be responsible for developing the COD. Considering that the insulin like growth factor (IGF) system is an important regulator of the follicular growth and functionality, the involvement of members of the IGF system that could be associated to the development of COD was evaluated. A decrease in mRNA of IGF1 in granulosa cells of cysts was detected compared to control follicles. While protein expression of IGF binding proteins (IGFBP) 2 and 3 was not changed, mRNA expression in granulosa of cysts was decreased related to control follicles. A higher level of IGFBP3 activity in follicular fluid (FF) was detected compared to other IGFBPs, and IGFBP2 activity was constant. The gene and protein expression of IGFBP4 and 5 in granulosa cells, and their activity in FF was decreased in cysts related to control tertiary follicles. Decreased levels of mRNA of IGFR1 and PAPP-A in granulosa cells of control follicles compared to cysts was detected. IGFR1 protein was higher in granulosa cells of cyst than in control tertiary follicles and PAPP-A was increased in FF of cysts respect to controls. No expression and activity of IGFBP1 and 6 was detected. These results would demonstrate that alterations in components of the IGF system could alter the normal ovarian function participating in the development of the COD in cattle. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas