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Varroa destructor (Anderson and Trueman) is known as a major pest of Apis mellifera L, especially in the Northern Hemisphere where its effects can be deleterious. As an obligate parasite, this mite relies entirely on its host to reproduce and complete its cycle. Studies focusing on isolated organs are needed to better comprehend this organism. To conduct such targeted molecular or physiological studies, the dissection of V. destructor mites is crucial as it allows the extraction of specific organs. Here, we propose a technical article showing detailed steps of females V. destructor dissection, illustrated with pictures and videos. These illustrated guidelines will represent a helpful tool to go further in V. destructor research.

Resume Introduction Au premier juillet 2020, l’epidemie de SARS-CoV2 avait concerne plus de 200 pays, infecte 10 millions de personnes et etait la cause de 508 000 deces dans le monde. Peu de donnees existent concernant les plus de 75 ans, notamment lorsqu’ils ont des troubles cognitifs et du comportement. Objectif Presenter les caracteristiques des symptomes observes dans deux populations de patients hospitalises : les patients en unites protegees « Alzheimer » et les patients « standards » hospitalises en unite dediee COVID, et comparer les taux de mortalite. Materiel et methode Etude retrospective incluant les patients de plus de 65 ans hospitalises a Paul-Brousse du 13 mars au 15 avril 2020 en unite Alzheimer et en unite COVID, et ayant une infection au Sars-CoV2 confirmee par RT-PCR ou serologie. Recueil de donnees a partir des dossiers medicaux concernant le terrain du patient, les traitements pris au long cours, les donnees cliniques et biologiques pendant l’infection. Resultats Cent soixante-dix-huit patients (87 ans [82 ; 91], 67 % de femmes) ont ete inclus dont 60 patients « Alzheimer » (86 ans [81 ; 88,25], 68 % de femmes) et 118 patients « standards » (88 ans [83,25 ; 92], 66 % de femmes). Le groupe standard etait plus âge et avait un score de Charlson plus eleve. Le taux de mortalite n’etait pas significativement different entre les 2 groupes (p = 0,09). Cliniquement, le groupe « standard » presentait une infection plus grave que le groupe « Alzheimer » : le score qSOFA et le debit d’oxygene maximum necessaire etaient plus eleves. De meme, biologiquement, le groupe « standard » presentait une lymphopenie non observee dans le groupe « Alzheimer ». En revanche, les patients du groupe « Alzheimer » consommaient significativement plus de neuroleptiques. Conclusion Le taux de mortalite etait le meme chez les patients en unites Alzheimer et en unite COVID, avec cependant une tendance a y avoir plus de deces dans le groupe « standard » (27 % vs 17 %, p = 0,09). Une etude plus puissante serait necessaire pou evaluer l’eventuel role protecteur des neuroleptiques.

Dendritic cells (DCs) encompass several cell subsets that collaborate to initiate and regulate immune responses. Proper DC localization determines their function and requires the tightly controlled action of chemokine receptors. All DC subsets express CXCR4, but the genuine contribution of this receptor to their biology has been overlooked. We addressed this question using natural CXCR4 mutants resistant to CXCL12-induced desensitization and harboring a gain of function that cause the warts, hypogammaglobulinemia, infections, and myelokathexis (WHIM) syndrome (WS), a rare immunodeficiency associated with high susceptibility to the pathogenesis of human papillomavirus (HPV). We report a reduction in the number of circulating plasmacytoid DCs (pDCs) in WHIM patients, whereas that of conventional DCs is preserved. This pattern was reproduced in an original mouse model of WS, enabling us to show that the circulating pDC defect can be corrected upon CXCR4 blockade and that pDC differentiation and function are preserved, despite CXCR4 dysfunction. We further identified proper CXCR4 signaling as a critical checkpoint for Langerhans cell and DC migration from the skin to lymph nodes, with corollary alterations of their activation state and tissue inflammation in a model of HPV-induced dysplasia. Beyond providing new hypotheses to explain the susceptibility of WHIM patients to HPV pathogenesis, this study shows that proper CXCR4 signaling establishes a migration threshold that controls DC egress from CXCL12-containing environments and highlights the critical and subset-specific contribution of CXCR4 signal termination to DC biology.

International audience; The ecology of the young stages of allis shad Alosa alosa is poorly documented, although they can be exposed to many pressures during their freshwater phase and their downstream migration. When passing through systems such as the Gironde-Garonne-Dordogne watershed (GGD, SW France), they can be subjected to high temperatures and low levels of oxygen (hypoxia). The aim of this work is to assess the tolerance of young Alosa alosa at four ages (c. 10, 30, 60 and 85 days old) by challenging them to different temperatures (18, 22, 26 and 28C) together with decreasing oxygen saturation levels (from 100% to 30%). Survival of the 10-day-old individuals was not influenced by oxy-thermic conditions, but high stress levels were detected and perhaps this age class was too fragile regarding the constraint of the experimental design. Survival at 30 and at 60 days old was negatively influenced by the highest temperatures tested alone (from 26C and from 28C, respectively) but no effect was detected at 85 days old up to 28C. A combined effect of temperature and oxygen level was highlighted, with heat accelerating survival decrease when associated with oxygen level depletion: essentially, survival was critical (

Simple Summary Varroa destructor (Anderson and Trueman) is known as a major pest of Apis mellifera L. Research about this parasite is very active and dynamic, yet only a few studies focus on an organ in particular. These targeted works are very important as they can enhance our comprehension of the mite, as they did for its host. Dissection is unavoidable when trying to isolate a specific organ. This technical article aims to give illustrated guidelines to conduct female V. destructor dissection. Thanks to photos and videos, this work will constitute a helpful tool to anyone interested in V. destructor dissection, anatomy, or organ function. Abstract Varroa destructor (Anderson and Trueman) is known as a major pest of Apis mellifera L, especially in the Northern Hemisphere where its effects can be deleterious. As an obligate parasite, this mite relies entirely on its host to reproduce and complete its cycle. Studies focusing on isolated organs are needed to better comprehend this organism. To conduct such targeted molecular or physiological studies, the dissection of V. destructor mites is crucial as it allows the extraction of specific organs. Here, we propose a technical article showing detailed steps of females V. destructor dissection, illustrated with pictures and videos. These illustrated guidelines will represent a helpful tool to go further in V. destructor research.

Simple Summary Varroa destructor is a parasitic organism feeding and living among honeybees. It transmits viruses like the Deformed Wing Virus which can lead to the decline and death of the colony. Many treatments have been developed over the years like formamidine amitraz, pyrethroid tau-fluvalinate, organophosphate coumaphos or even acids like formic and oxalic to control the spread of the mite. However, none of this solution provides long-term sustainability for honeybees and no resistance from V. destructor. Therefore, the development of alternative tools remains open. This will require the combination of both laboratory and field results through an integrative approach based on the identification of V. destructor health biomarkers. Here we review what has been done and what can be done from the laboratory to the field against the parasitic pressure held on honeybees. Abstract Varroa destructor is a real challenger for beekeepers and scientists: fragile out of the hive, tenacious inside a bee colony. From all the research done on the topic, we have learned that a better understanding of this organism in its relationship with the bee but also for itself is necessary. Its biology relies mostly on semiochemicals for reproduction, nutrition, or orientation. Many treatments have been developed over the years based on hard or soft acaricides or even on biocontrol techniques. To date, no real sustainable solution exists to reduce the pressure of the mite without creating resistances or harming honeybees. Consequently, the development of alternative disruptive tools against the parasitic life cycle remains open. It requires the combination of both laboratory and field results through a holistic approach based on health biomarkers. Here, we advocate for a more integrative vision of V. destructor research, where in vitro and field studies are more systematically compared and compiled. Therefore, after a brief state-of-the-art about the mite’s life cycle, we discuss what has been done and what can be done from the laboratory to the field against V. destructor through an integrative approach.

Understanding the mechanisms by which dendritic cells (DC) regulate immunity is essential. DC reside in peripheral tissues, including the skin. Within their tissue of residence, immature DC alternate non-oriented migration phases with antigen capture (AG) phases. In this context, migration is in competition for actin stocks with AG capture processes, such as macropinocytosis. Once activated in response to danger signals, macropinocytosis is inhibited and DC become able to migrate rapidly and in a chemokine-dependent way (e.g. toward CXCL12/CCL21) to lymphoid organs (LO). During my thesis, I characterized the contribution of the Glucocorticoid Induced Leucine Zipper (GILZ) protein and the chemokine receptor CXCR4 to the control of DC migration, the mechanisms associated with this control and the pathophysiological consequences of a deregulation of the expression or function of these factors. I have used two mouse models: 1- A model of Glucocorticoid-Induced Leucine Zipper Protein (GILZ) deletion in DC (GILZko). The previous work of my team has shown that the level of GILZ expression in DC controls their macropinocytosis. 2- A murine model of gain of function for the chemokine receptor of CXCL12: CXCR4. Therefore, I wondered if the GILZko DC and the CXCR4 gain of function DC (CXCR4+/1013) showed an alteration in their in vivo migration capacity. In FITC painting experiments, I demonstrated that GILZko DC and CXCR4+/1013 DC migrate less efficiently than Control DC (CTRL) to the LO. This observation is associated with a constitutive defect in the number of migrating DC in LO in CXCR4+/1013 mice, but not in GILZko mice. To better characterize the impact of GILZ deletion, I studied the migration speed and the ability of GILZko DC to respond to chemokine gradients in vitro. I demonstrated that immature GILZko DC migrate slower than their controls, in direct correlation with increased macropinocytosis. In addition, GILZko DC respond less well to CXCL12 (immature DC) and CCL21 (activated DC) chemokines than CTRL DC. As cytosolic calcium entry into DC is a central process in the regulation of chemotaxis and cell motricity, I the investigated the role of GILZ in controlling the cytosolic calcium entry into these cells. I have shown, for the first time in DC, that GILZ deletion reduces cytosolic calcium concentration and influx. This phenotype is reproducible in CTRL DC by pharmacological inhibition of a glucocorticoid-induced kinase. Finally, the analysis of the consequences of reduced migration from skin DC to LO in our models revealed a worsening of skin inflammation in models of delayed hypersensitivity or chronic inflammation. In conclusion, my work provides new insights on a key process in the establishment of tolerance and immune responses. It demonstrates on the one hand the importance of desensitization of CXCR4 in cutaneous DC to allow them to leave the skin, and on the other hand the involvement of GILZ in regulating the speed and direction of DC migration, according to a mechanism that might depend on the control of calcium responses. Thus, the decrease in GILZ expression in DC, particularly during inflammation, might inhibit their calcium-dependent function. The increased expression of GILZ in DC is known to promote the accumulation of regulatory T cells at the expense of effector T cells. My work suggests that decreasing GILZ expression in DC may not be sufficient to make them efficient in activating T cells in vivo.; Comprendre par quels mécanismes les cellules dendritiques (DC) régulent l’immunité est essentiel. Les DC résident dans les tissus périphériques et notamment la peau. Au sein de leur tissu de résidence, les DC immatures alternent des phases de migration non orientée avec des phases de capture des antigènes (AG). Dans ce contexte, la migration est en compétition pour les stocks d’actine avec les processus de capture des AG, comme la macropinocytose. Une fois activées en réponse à des signaux de danger, la macropinocytose est inhibée et les DC deviennent capables de migrer rapidement et de manière orientée, dépendante de chimiokines (e.g. CXCL12/CCL21), vers les organes lymphoïdes (OL). Au cours de ma thèse, j’ai caractérisé la contribution la protéine Glucocorticoid Induced Leucine Zipper (GILZ) et du récepteur de chimiokine CXCR4 au contrôle de la migration des DC, les mécanismes associés et les conséquences physiopathologiques d’une dérégulation de l’expression ou de la fonction de ces facteurs. J’ai utilisé deux modèles murins : 1- Un modèle de délétion de la protéine Glucocorticoid-Induced Leucine Zipper (GILZ) dans les DC (GILZko). Les travaux de mon équipe avaient précédemment démontré que le niveau d’expression de GILZ dans les DC contrôle leur macropinocytose. 2- Un modèle murin de gain de fonction du chimiorécepteur à CXCL12 : CXCR4. Ainsi, j’ai cherché à savoir si les DC GILZko et les DC CXCR4 gain de fonction (CXCR4+/1013) présentaient une altération de leur capacité de migration in vivo. Dans des expériences de FITC painting j’ai démontré que les DC GILZko et CXCR4+/1013 migrent moins efficacement que les DC contrôles (CTRL) aux OL. Cette observation est associée à un défaut constitutif du nombre de DC migrantes dans les OL des souris CXCR4+/1013 mais pas ceux des souris GILZko. Pour mieux caractériser l’impact de la délétion de GILZ, j’ai étudié d’une part la vitesse de migration et d’autre part la capacité à répondre aux gradients de chimiokines des DC GILZko. J’ai démontré que les DC GILZko immatures migrent moins vite que leurs contrôles, en corrélation directe avec une macropinocytose accrue. De plus, les DC GILZko répondent moins bien aux chimiokines CXCL12 (DC immatures) et CCL21 (DC activées) que les DC CTRL. L’entrée calcique cytosolique dans les DC étant un processus central pour la chimiotaxie et la motricité des cellules, j’ai ensuite étudié le rôle de GILZ dans le contrôle de l’influx calcique cytosolique de ces cellules. J’ai montré, pour la première fois dans les DC, que la délétion de GILZ réduit les concentration et influx calciques cytosoliques, selon un mécanisme pharmacologiquement reproductible dans les DC CTRL par l’inhibition d’une kinase induite par les glucocorticoïdes. Finalement, l’analyse des conséquences de la réduction de la migration des DC vers les OL dans nos modèles a révélé une aggravation de l’inflammation cutanée dans des modèles d’hypersensibilité retardée ou d’inflammation chronique. En conclusion, mes travaux apportent de nouvelles connaissances sur un processus clé dans la mise en place de la tolérance et des réponses immunitaires. Ils démontrent d’une part l’importance de la désensibilisation de CXCR4 dans les DC cutanée pour leur permettre de quitter la peau et d’autre part l’implication de GILZ dans la régulation de la vitesse et de l’orientation de la migration des DC, selon un mécanisme qui pourrait dépendre du contrôle des flux calciques. Ainsi, la diminution de l’expression de GILZ dans les DC, notamment aux cours d’inflammation, pourrait inhiber leur fonction dépendante du calcium. L’expression accrue de GILZ dans les DC est connue pour favoriser l’accumulation de lymphocytes T régulateurs au détriment des effecteurs. Mes travaux tendent à montrer que faire diminuer l’expression de GILZ dans les DC pourrait ne pas suffire à les rendre efficaces pour activer les lymphocytes T in vivo.

Understanding the mechanisms by which dendritic cells (DC) regulate immunity is essential. DC reside in peripheral tissues, including the skin. Within their tissue of residence, immature DC alternate non-oriented migration phases with antigen capture (AG) phases. In this context, migration is in competition for actin stocks with AG capture processes, such as macropinocytosis. Once activated in response to danger signals, macropinocytosis is inhibited and DC become able to migrate rapidly and in a chemokine-dependent way (e.g. toward CXCL12/CCL21) to lymphoid organs (LO). During my thesis, I characterized the contribution of the Glucocorticoid Induced Leucine Zipper (GILZ) protein and the chemokine receptor CXCR4 to the control of DC migration, the mechanisms associated with this control and the pathophysiological consequences of a deregulation of the expression or function of these factors. I have used two mouse models: 1- A model of Glucocorticoid-Induced Leucine Zipper Protein (GILZ) deletion in DC (GILZko). The previous work of my team has shown that the level of GILZ expression in DC controls their macropinocytosis. 2- A murine model of gain of function for the chemokine receptor of CXCL12: CXCR4. Therefore, I wondered if the GILZko DC and the CXCR4 gain of function DC (CXCR4+/1013) showed an alteration in their in vivo migration capacity. In FITC painting experiments, I demonstrated that GILZko DC and CXCR4+/1013 DC migrate less efficiently than Control DC (CTRL) to the LO. This observation is associated with a constitutive defect in the number of migrating DC in LO in CXCR4+/1013 mice, but not in GILZko mice. To better characterize the impact of GILZ deletion, I studied the migration speed and the ability of GILZko DC to respond to chemokine gradients in vitro. I demonstrated that immature GILZko DC migrate slower than their controls, in direct correlation with increased macropinocytosis. In addition, GILZko DC respond less well to CXCL12 (immature DC) and CCL21 (activated DC) chemokines than CTRL DC. As cytosolic calcium entry into DC is a central process in the regulation of chemotaxis and cell motricity, I the investigated the role of GILZ in controlling the cytosolic calcium entry into these cells. I have shown, for the first time in DC, that GILZ deletion reduces cytosolic calcium concentration and influx. This phenotype is reproducible in CTRL DC by pharmacological inhibition of a glucocorticoid-induced kinase. Finally, the analysis of the consequences of reduced migration from skin DC to LO in our models revealed a worsening of skin inflammation in models of delayed hypersensitivity or chronic inflammation. In conclusion, my work provides new insights on a key process in the establishment of tolerance and immune responses. It demonstrates on the one hand the importance of desensitization of CXCR4 in cutaneous DC to allow them to leave the skin, and on the other hand the involvement of GILZ in regulating the speed and direction of DC migration, according to a mechanism that might depend on the control of calcium responses. Thus, the decrease in GILZ expression in DC, particularly during inflammation, might inhibit their calcium-dependent function. The increased expression of GILZ in DC is known to promote the accumulation of regulatory T cells at the expense of effector T cells. My work suggests that decreasing GILZ expression in DC may not be sufficient to make them efficient in activating T cells in vivo., Comprendre par quels mécanismes les cellules dendritiques (DC) régulent l’immunité est essentiel. Les DC résident dans les tissus périphériques et notamment la peau. Au sein de leur tissu de résidence, les DC immatures alternent des phases de migration non orientée avec des phases de capture des antigènes (AG). Dans ce contexte, la migration est en compétition pour les stocks d’actine avec les processus de capture des AG, comme la macropinocytose. Une fois activées en réponse à des signaux de danger, la macropinocytose est inhibée et les DC deviennent capables de migrer rapidement et de manière orientée, dépendante de chimiokines (e.g. CXCL12/CCL21), vers les organes lymphoïdes (OL). Au cours de ma thèse, j’ai caractérisé la contribution la protéine Glucocorticoid Induced Leucine Zipper (GILZ) et du récepteur de chimiokine CXCR4 au contrôle de la migration des DC, les mécanismes associés et les conséquences physiopathologiques d’une dérégulation de l’expression ou de la fonction de ces facteurs. J’ai utilisé deux modèles murins : 1- Un modèle de délétion de la protéine Glucocorticoid-Induced Leucine Zipper (GILZ) dans les DC (GILZko). Les travaux de mon équipe avaient précédemment démontré que le niveau d’expression de GILZ dans les DC contrôle leur macropinocytose. 2- Un modèle murin de gain de fonction du chimiorécepteur à CXCL12 : CXCR4. Ainsi, j’ai cherché à savoir si les DC GILZko et les DC CXCR4 gain de fonction (CXCR4+/1013) présentaient une altération de leur capacité de migration in vivo. Dans des expériences de FITC painting j’ai démontré que les DC GILZko et CXCR4+/1013 migrent moins efficacement que les DC contrôles (CTRL) aux OL. Cette observation est associée à un défaut constitutif du nombre de DC migrantes dans les OL des souris CXCR4+/1013 mais pas ceux des souris GILZko. Pour mieux caractériser l’impact de la délétion de GILZ, j’ai étudié d’une part la vitesse de migration et d’autre part la capacité à répondre aux gradients de chimiokines des DC GILZko. J’ai démontré que les DC GILZko immatures migrent moins vite que leurs contrôles, en corrélation directe avec une macropinocytose accrue. De plus, les DC GILZko répondent moins bien aux chimiokines CXCL12 (DC immatures) et CCL21 (DC activées) que les DC CTRL. L’entrée calcique cytosolique dans les DC étant un processus central pour la chimiotaxie et la motricité des cellules, j’ai ensuite étudié le rôle de GILZ dans le contrôle de l’influx calcique cytosolique de ces cellules. J’ai montré, pour la première fois dans les DC, que la délétion de GILZ réduit les concentration et influx calciques cytosoliques, selon un mécanisme pharmacologiquement reproductible dans les DC CTRL par l’inhibition d’une kinase induite par les glucocorticoïdes. Finalement, l’analyse des conséquences de la réduction de la migration des DC vers les OL dans nos modèles a révélé une aggravation de l’inflammation cutanée dans des modèles d’hypersensibilité retardée ou d’inflammation chronique. En conclusion, mes travaux apportent de nouvelles connaissances sur un processus clé dans la mise en place de la tolérance et des réponses immunitaires. Ils démontrent d’une part l’importance de la désensibilisation de CXCR4 dans les DC cutanée pour leur permettre de quitter la peau et d’autre part l’implication de GILZ dans la régulation de la vitesse et de l’orientation de la migration des DC, selon un mécanisme qui pourrait dépendre du contrôle des flux calciques. Ainsi, la diminution de l’expression de GILZ dans les DC, notamment aux cours d’inflammation, pourrait inhiber leur fonction dépendante du calcium. L’expression accrue de GILZ dans les DC est connue pour favoriser l’accumulation de lymphocytes T régulateurs au détriment des effecteurs. Mes travaux tendent à montrer que faire diminuer l’expression de GILZ dans les DC pourrait ne pas suffire à les rendre efficaces pour activer les lymphocytes T in vivo.