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This study describes the in vitro seed germination and micropropagation of Plukenetia volubilis (sacha inchi), an oilseed crop rich in omega-3 fatty acids, with health benefits and several industrial applications. Seed germination was evaluated in different culture media (MS and 1/2 MS), seed coat presence/absence and culture temperature (18 °C and 28 °C). Micropropagation was performed using axillary bud development (ABD) on nodal segments from in vitro seedlings. KIN, BAP and 2-ip were evaluated for ABD, and the effect of modified MS in 453 mg L-1 CaCl2 and 351.62 mg L-1 MgSO4 on ABD and shoot survival was assessed to improve the process. Finally, six treatments were evaluated to optimize ABD and shoot leaf formation. Seed germination of 91.6 % was achieved in MS at 28 °C when the seed coat was removed. ABD was obtained in 45 % and 40 % with 0.4 mg L-1 KIN and 0.6 mg L-1 2-ip, respectively, with the least CAL. The modification in 453 mg L-1 CaCl2 then allowed 76 % ABD and 82 % explant survival. ABD response was optimized to 95 % and 2.45 leaves with MS medium + CaCl2 modification + 10 % coconut water + 0.4 mg L-1 KIN. The same results were obtained by replacing the latter with 0.6 mg L-1 2-ip. Rooting was achieved in MS without PGR, and acclimatization was successful. The results indicate that plant production via germination and vegetative propagation is effective for commercial purposes. RESUMEN Este estudio describe la germinación in vitro y micropropagación de Plukenetia volubilis, un cultivo oleaginoso rico en omega-3 benéfico para la salud y con múltiples aplicaciones industriales. Se evaluó en la germinación diferentes medios de cultivo (MS y 1/2 MS), presencia-ausencia de testa y temperatura de cultivo (18 ° C y 28 ° C). La micropropagación se realizó vía yemas axilares (ABD) de plántulas in vitro. Se evaluó el efecto de KIN, BAP y 2-ip sobre ABD, seguidamente, para mejorar el proceso se evaluó el efecto de MS modificado en 453 mg L-1 CaCl2 y 351.62 mg L-1 MgSO4 sobre ABD y supervivencia del brote. Finalmente, se evaluaron seis tratamientos para optimizar ABD y la formación de hojas. Se logró una germinación 91,6 % en MS a 28 °C cuando se retiró la testa. Se obtuvo 45 % y 40 % de ABD con 0,4 mg L-1 KIN y 0,6 mg L-1 2-ip respectivamente, ambos con la menor CAL. Posteriormente, la modificación de CaCl2 permitió 76 % ABD y 82 % de supervivencia. Se optimizó ABD al 95 % con 2,45 hojas por brote con el medio: MS + modificación de CaCl2 + 10 % de agua de coco + 0.4 mg L-1 KIN, los mismos resultados se obtuvieron cambiando este último con 0,6 mg L-1 2-ip, se logró enraizamiento en MS sin PGR, y la aclimatización fue exitosa. Los resultados indican que la producción de plantas vía germinación y propagación vegetativa es efectiva con fines comerciales.

Theobroma cacao L. and its products are consumed worldwide. Those products are of great research interest due to antioxidant properties of some of their polyphenolic constituents. The amount of these polyphenols and polysaccharides has shown that can interfere with the high quality and quantity of nucleic acids for molecular research. Therefore, cocoa DNA extraction protocols can require a large amount of plant material and optimization time according with plant material source. The aim of this study was to evaluate the quality and quantity of DNA isolated from field plant leaves at different developmental stages from TSH565 genotype using different DNA extraction protocols. In addition, DNA extraction protocol was evaluated for small amount of young leaf tissue collected from in vitro plantlets from CCN51 and TSH565 genotype. Subsequently, the selectivity of different polymerase enzymes for PCR amplification using the obtained DNA was evaluated. This study revealed that D stage of development in field leaves was efficient for extraction of high-quality genomic DNA using the PowerPlant® Pro Kit modified (183.80 ngμL-1 (1.98 A260/A280-1.98 A260/A230)). Highest DNA concentrations were obtained for FPL with 128.68 ng. μL-1 and 114.42 ng μL-1 for CCN51 and TSH565 respectively and with IVL, which was obtained 54.24 ngμL-1 for CCN51 and 56.52 ngμL1 for TSH565 per 0.1 g of leaf tissue. Taq DNA Polymerase recombinant of Thermo Scientific® showed the highest performance specifically for this study, contributing to the undoubted amplification of molecular markers like microsatellites (SSRs). The results obtained have allowed improvements in genetic analyses and molecular studies using a reduced amount of plant tissue. Resumen Theobroma cacao L. y sus productos se consumen en todo el mundo. Esos productos son de gran interés para la investigación debido a las propiedades antioxidantes de algunos de sus componentes polifenólicos. La cantidad de estos polifenoles y polisacáridos ha demostrado que puede interferir con la alta calidad y cantidad de ácidos nucleicos para la investigación molecular. Por lo tanto, los protocolos de extracción de ADN de cacao pueden requerir una gran cantidad de material vegetal y tiempo de optimización de acuerdo con la fuente de origen del material vegetal. El objetivo de este estudio fue evaluar la calidad y la cantidad de ADN aislado de hojas de plantas de campo en diferentes etapas de desarrollo a partir del genotipo TSH565 utilizando diferentes protocolos de extracción de ADN. Además, se evaluó el protocolo de extracción de ADN para una pequeña cantidad de tejido foliar joven recogido de plántulas in vitro de genotipo CCN51 y TSH565. Posteriormente, se evaluó la selectividad de diferentes enzimas polimerasas para la amplificación por PCR usando el ADN obtenido. Este estudio reveló que la etapa D del desarrollo foliar en condiciones de campo fue eficiente para la extracción de ADN genómico de alta calidad usando el kit PowerPlant® Pro modificado (183.80 ngμL-1 (1.98 A260 / A280-1.98 A260 / A230)). Las concentraciones más altas de ADN se obtuvieron para FPL con 128.68 ngμL-1 y 114.42 ngμL-1 para CCN51 y TSH565, respectivamente y con IVL, que se obtuvo 54.24 ngμL1 para CCN51 y 56.52 ngμL1 para TSH565 por 0.1 g de tejido foliar. Taq ADN polimerasa recombinante de Thermo Scientific® mostró el mayor rendimiento específicamente para este estudio, lo que contribuye a la amplificación indudable de marcadores moleculares como los microsatélites (SSR). Los resultados obtenidos han permitido mejoras en análisis genéticos y estudios moleculares utilizando una cantidad reducida de tejido vegetal.

Given the importance and potential development of avocado (Persea americana Mill.) cultivation in Colombia and its problems for an efficient field cultivation, which includes the genetic variability of propagated material and adverse phytosanitary conditions, the aim of this study was to develop a method for in vitro clonal propagation for avocado cv. Hass. In vitro introduction of apical explants and nodal segments was carried out from grafted parent plants. Etiolation pretreatment effect on the number of shoots formed and in vitro phenolization was evaluated in grafted parent plants and in explants under in vitro conditions, subject to photoperiod (12/12 hours) and darkness. Darkness conditions reduced significantly plant phenolization, and these in turn formed new shoots, which were higher and were also formed in a shorter time. During multiplication stage, using a WPM culture medium an effective control of phenolization was obtained. During subculturing there was a decreasing in apical explant elongation, but there was a significant induction of new shoots from nodal segments. However, only some segments reached the required height to keep the multiplication rate throughout subcultures. Finally, 82% survival rate of vitroplants was obtained during hardening. Resumen Teniendo en cuenta la importancia y el potencial de desarrollo del cultivo de aguacate (Persea americana Mill.) en Colombia, y los problemas que se presentan para el cultivo eficiente en campo, principalmente por la variabilidad genética del material de propagación y por condiciones fitosanitarias adversas, el presente trabajo tuvo como finalidad desarrollar una metodología para la propagación clonal in vitro del cultivar "Hass". La introducción in vitro de explantes apicales y segmentos nodales se realizó a partir de plantas madres injertadas. El efecto del pretratamiento de etiolación sobre el número de brotes desarrollados y el porcentaje de fenolización in vitro, se evaluó sometiendo las plantas madre y los explantes introducidos in vitro a condiciones de fotoperiodo (12/12h) y oscuridad; esta última condición es la que redujo significativamente la fenolización de los explantes, y estos a su vez formaron un mayor número de brotes nuevos con mayor altura y en menor tiempo. En la etapa de multiplicación en el medio de cultivo WPM se obtuvo un efectivo control del proceso de fenolización. Durante los subcultivos hubo disminución de elongación de los explantes apicales, y a partir de los segmentos nodales, se logró una inducción importante de nuevos brotes; sin embargo, solo algunos alcanzaron la altura requerida para mantener la tasa de multiplicación a través de los subcultivos. Finalmente durante el endurecimiento, se obtuvo un 82 % de supervivencia de las vitroplantas.

Psychotria ipecacuanha is a medicinal plant endangered in Colombia, due to the indiscriminate exploitation suffered several decades ago for its therapeutic importance. Its great medicinal value is due to emetine production and its derivatives, mainly in the roots. Given these concerns, the aim of this research was to evaluate different parameters for in vitro conservation of P. ipecacuanha by a limited plant growth, using as in vitro explants plant nodes. Plant growth response to 18, 23 and 25°C with and without addition to MS basal culture medium 15 and 30 gL-1 of mannitol osmotic regulator was evaluated. Registration of plant survival data (%), plant height (cm), plant development of axillary shoots, number of leaves, callus formation and vigour of developed buds and was initially performed at 3 months and then every two months until 12 months. The explants conserved for 9 months in culture medium without mannitol osmotic regulator and temperature of 18°C, showed response after transferring and reculturing in recovery culture medium for 6-8 weeks, this process had not achieved any effect on plant growth and vigour in the recovery phase. In addition, the critical parameters in the acclimatization process were determined. Resumen Psychotria ipecacuanha es una especie medicinal amenazada en Colombia, debido a la explotación indiscriminada que varias décadas atrás sufrió por su importancia terapéutica. Su gran valor medicinal se debe a la producción de emetina y sus derivados, principalmente en las raíces. Ante este panorama, el presente estudio tuvo como objetivo evaluar diferentes parámetros para la conservación in vitro de P. ipecacuanha por crecimiento limitado, usando como explantes nudos de plantas in vitro. Se evaluó la respuesta de crecimiento a 18, 23 y 25°C sin y con la adición al medio de cultivo basal MS del regulador osmótico manitol a 15 y 30 gL-1. El registro de los datos de supervivencia (%), altura (cm), desarrollo de brotes axilares, número de hojas, formación de callo y vigor de los brotes desarrollados, se realizó inicialmente a los 3 meses y luego cada dos meses hasta completar 12 meses. Una temperatura de 18°C, sin la adición del regulador osmótico manitol al medio cultivo basal MS, permitió mantener vitroplantas de esta especie hasta por nueve meses, sin verse afectado el crecimiento y vigor en la etapa de recuperación. Además se logró determinar los parámetros críticos en el proceso de aclimatización.

In order to understand the causes of lack of regeneration in cacao somatic embryos, two cacao varieties with different responses to regeneration potential were described based on their capacity to store different compounds. It is well known that seed reserves play a central role in the regenerative capability of somatic embryos; thus, we followed histochemical changes and reserve fluctuations of proteins, polysaccharides and polyphenols during somatic embryogenesis (SE) in the two cacao varieties. The study showed that, in somatic embryos of the regenerating variety, polyphenols were localized mainly in the periphery of the embryo (epidermal cells) and proteins were the main storage substance in the embryo expression medium, while the non-regenerating variety had a high presence of polysaccharides with random distribution of polyphenols at the end of the embryo induction step. Dos variedades de cacao con diferentes respuestas a la regeneración fueron descritas en función de su capacidad para almacenar diferentes compuestos, con el fin de aproximarse al entendimiento de las causas de la falta de regeneración en embriones somáticos de cacao. Es bien sabido que las reservas de semillas desempeñan un papel central en la capacidad de regeneración de embriones somáticos; por tanto, se realizó un seguimiento de cambios histoquímicos y fluctuaciones de reserva de proteínas, polisacáridos y polifenoles durante la embriogénesis somática (SE) en dos variedades de cacao. El estudio mostró que, en los embriones somáticos de la variedad regenerante, los polifenoles se localizaron principalmente en la periferia del embrión (células de la epidermis) y las proteínas fueron el componente principal de almacenamiento en el medio de expresión de embriones, mientras que la variedad no regenerante tenía una alta presencia de polisacáridos y una distribución aleatoria de los polifenoles en el final de la etapa de inducción de embriones.

A pesar de sus propiedades farmacológicas, alimenticias e industriales y su gran potencial de mercado, Curcuma longa L. no ha sido comercializada en la medida en que se esperaría. La dificultad de propagación de la especie, que se da exclusivamente por vía vegetativa al ser un triploide estéril, aunada a las exigencias ambientales de su cultivo y su alta susceptibilidad al ataque de distintos patógenos han sido las causas por las cuales no se ha dado un aprovechamiento acorde a las propiedades y potenciales de la planta. Como estrategia para la obtención de gran cantidad de germoplasma con características fitosanitarias óptimas, se han implementado diferentes técnicas de cultivo in vitro, incluyendo la formación de microrrizomas y la micropropagación de plantas. Sin embargo, aún no se dispone de métodos eficientes para la inducción de procesos de organogénesis y embriogénesis somática. En el presente estudio se reporta el efecto de diferentes reguladores de crecimiento vegetal y sus combinaciones sobre segmentos de hojas, bases de hoja y capas delgadas de células (thin cell layers - TCL) de Curcuma longa L. para la inducción de callos y embriones. Los tejidos evaluados mostraron una respuesta diferencial de acuerdo con sus características y los reguladores de crecimiento vegetal adicionados. En las bases de hoja y TCLs se obtuvo particularmente una respuesta embriogénica. De otro lado, fue posible inducir morfogénesis caulinar y radicular simultáneamente en todos los tejidos evaluados. Las plantas regeneradas a partir de las bases de hoja fueron mucho mas vigorosas que las de los otros tejidos. In spite of its pharmacological, nutritional and industrial properties and its great potential market, Curcuma longa L. has not been commercialized to the extent that would be expected. The difficulty of propagation of the species, which is provided exclusively by vegetative to be a sterile triploid, coupled with the environmental requirements of the crop and its high susceptibility to attack by different pathogens, have been the causes for which has not been given a use according to the properties and potential of the plant. As a strategy for obtaining large numbers of germplasm with optimal phytosanitary characteristics, different techniques have been implemented in vitro culture, including the formation of microrrizomas and micropropagation of plants. However, not yet available efficient methods for somatic embryogenesis and organogenesis induction processes. In this study, we report the effect of different plant growth regulators and their combinations on the leaf segments, leaf bases and thin cells layers (TCL) of Curcuma longa L. for the callus and embryos induction. The evaluated tissues showed a differential response, according to its characteristics and the plant growth regulators added. Embryogenic response was particularly obtained in leaf bases and TCL. On the other hand, it was possible to induce cauline and root morphogenesis simultaneously in all evaluated tissue. Regenerated plants from leaf bases were more vigorous than the others tissues.

In a farm in the municipality of Andes (Antioquia, Colombia), parcels were planted with Dominico Hartón plantain associated with Caturra-type coffee, where weevil damage (Insecta: Coleoptera: Curculionidae) occurred in 100% of the plantain plants, corms of approximately 2 kg were planted under the same association system. From the sowing until harvest, six types of products were applied every two months on these plantations: chemical of the region (Clorpirifos and Carboxin + Thiram), Carbofurán, Beauveria bassiana, and jatropha, pepper, and neem extracts. As a control, corms without any application of chemicals were used. For the statistical analysis, a randomized complete block design was employed with seven treatments, four replicates, and six plants as experimental units. At the moment of harvest no signi cant statistical differences were found among treatments for these variables: height, diameter, number of cluster branches, total weight, and percentages in the extra and second quality plantains. Statistically signi cant differences were found in: weeks from sowing to harvest, with the control and B. bassiana presenting the highest and lowest average times (75.3 and 69.3 weeks, respectively); functional leaves at the time of harvest, in which the chemical of the region and Carbofurán presented the highest and lowest values (approximately 8 and 7); and the percentage in rst quality plantain, in which the control presented the highest value and was statistically different from the extracts. RESUMEN: En una nca del municipio de Andes (Antioquia, Colombia), estuvieron sembrados lotes con plátano Dominico Hartón asociado con café variedad Caturra y en los cuales se registraron daños por picudos (Insecta: Coleoptera: Curculionidae) en el 100% de las plantas de plátano, se sembraron cormos de aproximadamente 2 kg, bajo el mismo sistema de asocio. A los cormos se les aplicó desde la siembra y cada dos meses hasta la cosecha del racimo, seis productos distintos para el manejo de estos insectos: químico de la región (Clorpirifós y Carboxin + Thiram), Carbofurán, Beauveria bassiana y extractos de jatrofa, ají y neem. Como testigo se utilizaron cormos sin aplicación de productos para el manejo de picudos. Para el análisis estadístico se empleó un diseño de bloques completos al azar, con siete tratamientos, cuatro repeticiones y seis plantas como unidad experimental. Al momento de la cosecha, no se encontraron diferencias estadísticas signi cativas entre tratamientos para las variables: altura, diámetro, número de manos, peso del racimo y porcentajes en la calidad extra y segunda del plátano. Se presentaron diferencias estadísticas signi cativas para: número de semanas desde la siembra hasta la cosecha, donde el testigo y Beauveria bassiana fueron los de mayor y menor tiempo promedio (75,3 y 69,3 semanas, respectivamente); hojas funcionales al momento de la cosecha, donde el químico de la región y el Carbofurán presentaron el valor más alto y bajo (aproximadamente 8 y 7); y porcentaje en la calidad primera del plátano, donde el testigo presentó el valor más alto y fue diferente estadísticamente a los extractos. RESUMEN

The bromeliads are a promissory resource in our Neotropical forests. However, due to their uncontrolled harvest and the devastation of their habitats, some populations of these plants have declined drastically to the point that many are threatened with extinction. Thus, ef cient propagation techniques such as tissue culture constitute an aid to conservation and sustainable management strategies for these resources, as in the case of Aechmea veitchii Baker and Racinaea crispa Baker. To this end, leaf segments of eld plants, and apical buds and leaf segments of plantlets cultured in vitro, were used as explants. The effect of different combinations and concentrations of auxin and cytokines on callus formation, type of callus and shoot regeneration were evaluated, using MS medium with half and complete salt concentrations as basal medium. Results showed that there was no response when using explants from eld plants; however, in vitro seedlings, adventitious buds were developed on the apical buds of A. veitchii, in MS medium with IBA (1.0 mg/l), TDZ (0.5, 1.0, 1.5 and 2.0 mg/l) with IBA (0.1 mg/l) and BAP (5.0 mg/l) with ANA (0.2 mg/l) induced malformed buds and shoot clusters. A low percentage of adventitious shoots and bud clusters were obtained from the basal region of the young leaves of A. veitchii; however, in MS medium supplemented with kinetin and 2,4D nodular, callus formation was obtained. In vitro propagation of R. crispa from seeds was possible, but its response to the growth regulators evaluated was poor and no plants were regenerated. RESUMEN: Las bromelias son un recurso promisorio presente en nuestros bosques neotropicales. Sin embargo, debido a su extracción no controlada y a la intervención de sus hábitats, algunas poblaciones de estas plantas han disminuido drásticamente, al punto que muchas de ellas se encuentran en grado de amenaza de extinción. Por lo que técnicas de propagación eficientes como el cultivo de tejidos, constituyen un aporte a las estrategias de conservación y manejo sostenible de este recurso, como en el caso de las especies Aechmea veitchii (Baker) y Racinaea crispa (Baker). Con este propósito se utilizaron como explantes porciones de hojas de plantas de campo, y yemas apicales y porciones de hojas de plántulas obtenidas in vitro, a partir de semillas. Se evaluó el efecto de diferentes combinaciones y concentraciones de auxinas y citoquininas sobre la formación de callo embriogénico o no embriogénico y la regeneración de brotes, utilizando como medio basal las sales MS con los macronutrientes a media y completa concentración. Los explantes provenientes de plantas de campo no presentaron respuesta; por el contrario las yemas apicales de plántulas germinadas in vitro de A. veitchii, con IBA (1,0 mg/l), formaron brotes adventicios, las combinaciones TDZ (0,5, 1,0, 1,5 y 2,0 mg/l) con IBA (0,1 mg/l) y BAP (5 mg/l) con ANA (0,2 mg/l) indujeron malformaciones en los brotes desarrollados y multiyemas. Las bases de hojas de A. veitchii presentaron menor respuesta a la formación de brotes adventicios y multiyemas; sin embargo, en el medio suplementado con KIN más 2,4-D se presentó formación de callo. Fue posible el establecimiento in vitro de R. crispa a partir de semillas, sin embargo la respuesta a las combinaciones hormonales fue incipiente. COL0001084

One of the important characteristics of the plant species Curcuma longa L. is its chemical composition that makes it commercially attractive, because in addition to its pigments, which are used as food dyes or in medicines, it contains acetones and alcohols that give avor to its rhizomes, making useful as a spice. Curcuma propagation is mainly conducted asexually, with low propagation rates; in addition, the rhizomes are susceptible to disease, making their storage dif cult. Plant tissue culture offers, among other alternatives, microrhizome production, facilitating management in the greenhouse and eld, transportation, exchange, and conservation. The goal of this project was to introduce and multiply C. longa plants in vitro, and induce microrhizome formation. After standardization of a disinfection protocol, the height and coef cient of multiplication of the established apexes were evaluated as response indeces to differing bencilaminopurine concentrations. Vitroplants of 10 cm were used to induce microrhizomes, and their formation, mean number, and morphological characteristics were evaluated. The results obtained suggested that MS medium with 2 mg/l bencilamonopurine (BAP) is adequate for producing a good quantity and quality of new plants. Conditions of total darkness and a sugar concentration above 60 g/l were key factors in the induction of microrhizomes. RESUMEN: Curcuma longa L. es una especie cuya composición química la hace atractiva al mercado, ya que además de los pigmentos, utilizados como colorante y medicinal, contiene cetonas y alcoholes que le dan sabor al rizoma, por tanto es utilizado como especia. La propagación de C. longa se realiza principalmente por vía asexual, con bajas tasas de propagación, además los rizomas son vulnerables a enfermedades, dificultando su almacenamiento. El cultivo de tejidos vegetales brinda entre otras alternativas, la producción de microrrizomas, facilitando el manejo en invernadero y campo, el transporte, intercambio y la conservación. El objetivo de este trabajo fue introducir y multiplicar in vitro plantas de C. longa, e inducir la formación de microrrizomas. Después de estandarizar el protocolo de desinfección, para los ápices establecidos se evaluó la altura y coeficiente de multiplicación como índice de respuesta a diferentes concentraciones de bencilaminopurina. Para la inducción de microrrizomas se usaron vitroplantas de 10 cm, evaluando la formación de estos, el número promedio y características morfológicas. Los resultados obtenidos sugieren que el medio MS con 2 mg/l de bencilaminopurina (BAP) es adecuado para producir buena cantidad y calidad de nuevas plantas. Condiciones de oscuridad y la concentración de sacarosa por encima de 60 g/l fueron factores determinantes en la inducción de los microrrizomas. COL0122947 COL0001084

RESUMEN: Se describe una metodología para el establecimiento, la multiplicación y la obtención in vitro de callos de Lippia dulcis (Verbenaceae). adicionalmente, se logró el establecimiento de una suspensión celular. se utilizaron como explantes iniciales yemas apicales y segmentos nodales de plantas mantenidas en casa malla. el tratamiento más efectivo para el establecimiento y multiplicación de L. dulcis a partir de yemas apicales o segmentos nodales fue el medio Ms libre de reguladores de crecimiento. para lograr la textura y color adecuados, el medio para formación y multiplicación de callos (Ms suplementado con 2,4d 0,1 mg/l) requiere ser renovado cada 20 días. el estable-cimiento de la suspensión celular, con alto porcentaje de viabilidad, fue posible en el medio de cultivo Ms y la combinación hormonal 2,4 d (0,5 mg/l) + Kinetina (0,1 mg/l). ABSTRACT: A methodology for in vitro establishment, multiplication and callus formation of Lippiadulcis (Verbenaceae) is described. furthermore, an essay for establishment of cellular suspension was realized. initial explants shoot tips and nodal segments from plants grown under greenhouse were used. the treatment more effective for induction and multiplication of L. dulcis from shoot tips or nodal segments was Ms medium free of growth regulators. to achieve the colour and adequate texture, the medium for callus formation and multiplication (Ms by adding 2,4d 0,1 mg/l) needs to be renew each 20 days. the cellular suspension establishment, with a high percentage of viability, was possible in Ms medium and the hormonal combination 2,4 d (0.5 mg/l) + Kinetina (0.1 mg/l). COL0001084

RESUMEN: El propósito de este trabajo fue estandarizar una metodología de formación de callos embriogénicos e inducción de mutaciones y la regeneración de somaclones a partir de poblaciones de callos irradiados de Heliconia psittacorum. En esta especie ornamental, de los dos tipos de explantes evaluados, las yemas de inflorescencias no respondieron positivamente a la inducción de embriones, en las bases de hojas por el contrario, se logró la formación de callo embriogénico, en cantidad y apariencia similar en los tres medios de cultivo evaluados. Para la etapa de multiplicación, se encontró que en el medio basal MS suplementado con biotina y 2,4-D, se alcanzó una consistencia más friable de los callos y estados proembrionarios bien definidos. La regeneración de embriones alcanzó mejor respuesta (60-70%)en el medio MS suplementado con aminoácidos y vitaminas. En cuanto al efecto de diferentes dosis de radiación sobre la multiplicación de los callos, no se encontraron diferencias significativas entre las dosis utilizadas, sin embargo, 50 y 75 Gy tuvieron los valores promedio más bajos. En la etapa de regeneración el porcentaje se incrementó significativamente en el tratamiento con 30 Gy, un segundo grupo de respuesta se formó con el control y las dosis 10 y 20 Gy; mientras que 50 y 75 Gy presentaron los porcentajes de regeneración más bajos. Teniendo en cuenta la radiosensibilidad de los callos embriogénicos y algunos aspectos del desarrollo, se seleccionó 40 Gy como dosis adecuada para la inducción de variabilidad genética en callos embriogénicos en H. psittacorum. ABSTRACT: The purpose of this study was the standardization of a methodology of mutation’s induction and regeneration of somaclones from an embryogenic callus population of Heliconia psittacorum. In this ornamental species, of two of kind explants evaluated, the inflorescences buds did not show a positive response to embryo induction. Nevertheless, in the leaves base, we noticed the formation of embryogenic callus, similar in size and appearance in the three culture media evaluated. In the multiplication stage was found that in the basal medium MS supplemented with biotin and 2,4-D, was observed a more friable and consistence callus and will defined pro-embryonic stages. The embryos regeneration was better (60-70%) in the MS supplemented with amino acid and vitamins. Related to the effect of the different doses in the callus multiplication, it was not found significant differences among the different doses, however, 50 and 75 Gy had the lowest average values. In the regeneration stage, the percentage with 30 Gy increased significantly, a second group formed by the control, 10, and 20 Gy. While the 50 and 75 Gy doses showed the lowest regeneration percentage. Taking into account the embryogenic callus radio-sensibility and some developmental aspects, we selected 40 Gy as the appropriated doses for the genetic variability induction in embryogenic callus H. psittacorum. COL0001084

RESUMEN: Se evaluó el efecto del filtrado crudo del hongo Phytophthora infestans, agente causal del tizón tardío de la papa, y la respuesta de resistencia en callos en dos variedades de papa: Diacol Capiro (susceptible) y Diacol Monserrate (con resistencia de campo). También se estandarizaron en estas dos variedades los procesos de inducción, multiplicación de callos y regeneración de vitroplantas a partir de los mismos. Con la combinación hormonal 2,4D (1 mg/l) y BAP (2 mg/l) se obtuvo la mejor respuesta para inducir la formación de callos a partir de bojas jóvenes en los dos genotipos. La adición de tiosulfato de plata (1.0 mg/l) y ácido cítrico (50 mg/l) fue muy importante para la multiplicación de los callos de la variedad Diacol Capiro, tanto para incrementar el crecimiento como para evitar la muerte del tejido. El porcentaje de regeneración de plantas a partir de los callos fue superior en Diacol Monserrate. Sin embargo, ambas variedades mostraron buena capacidad regenerativa de los calles hasta los cuatro subcultivos evaluados. La dilución del filtrado crudo (concentrado veinte veces en rotoevaporador) que permitió la diferenciación de las variedades por la respuesta de resistencia a nivel de callos fue una parte del filtrado y cinco de medio de cultivo (1:5). Con este trabajo se propone un esquema de selección in vitro a partir de callos para ser usado en programas de mejoramiento para la resistencia a Phytophthora infestans. ABSTRACT: The effect of the culture filtrate of Phytophthora infestans fungus, which is the causal agent of potato late bligth, and the resistance response at the callus level of two potatoes varieties, Diacol Capiro (susceptible) and Diacol Monserrate (field resistance), was evaluated. Whith the hormonal combination 2,4D (1 mg/l) and BAP (2 mg/l) was the best to induce callus formation of young leaves for the two genotypes. To the callus multiplication the addition of silver thiosulfate (1.0 mg/l) and citric acid (50 mg) was very important in Diacol Capiro to increase the growth and to avoid tissue death. The percent of the regeneration was higher in Diacol Monserrate but both varieties showed good regenerative capacity in callus with four subcultures. The dilution of the culture filtrate (twenty times rotoevapored) that best show the differential response resistance was 1:5. With this work we are presenting a scheme of in vitro selection to use in breeding programs to Phytophthora infestans resistance. COL0001084 COL0008227

RESUMEN: En la incidencia de enfermedades sobre el cultivo de la papa, el tizón tardío causado por el hongo Phytophthora infestans es notablemente marcado en el ámbito mundial. En este trabajo se realizaron experimentos dirigidos a evaluar diferentes parámetros para la selección in vitro de plántulas de papa empleando el medio derivado del hongo y a estudiar la posibilidad de usar esta metodología como herramienta para la selección de resistencia en clones nuevos de papa. La cepa del hongo empleada fue caracterizada con los genes de virulencia 1, 2, 3, 4, 6, 7, 8, 9, 11. Se evaluaron para este patógeno las condiciones de crecimiento en cultivo líquido (se estudió la composición del medio y el tiempo de incubación) y para el filtrado del hongo la termoestabilidad y la concentración apropiada para inducir la respuesta de resistencia. El efecto fitotóxico del filtrado del hongo se determinó mediante el método de inmersión de raíces de vitroplantas de las variedades Diacol Monserrate y Diacol Capiro, reportadas como resistente y susceptible, respectivamente. De acuerdo con los resultados el mejor crecimiento del hongo se alcanzó con el medio MS modificado según Dieter (1986), a los veinte días de cultivo, 21 "C y oscuridad constante. Se corroboró además el carácter termoestable del medio derivado y se encontró que la dilución adecuada pura la selección de las vitroplantas fue 47 ml/100 ml del cultivo filtrado concentrado veinte veces, la cual permitió elaborar una escala de evaluación de acuerdo con las afecciones en las variedades de papa estudiadas. ABSTRACT: In the incidence of disease on the potato crop, the late blight caused by the fungus Phytophthora infestans is notably marked in the world. In this work we carried out experiments to evaluate the parameters for the in vitro selection of potato seedlings using the culture filtrate of the pathogen and it was evaluated to study the possibility of using this methodology as a tool to the selection of resistant in new clones of potato. The strain of the fungus with 1, 2, 3,4,6,7,8,9,11 genes of virulence were characterized. For this pathogen we evaluated the conditions of growing in liquid culture (we studied the composition of the medium and incubation time) and for the culture filtrate we analyzed the thermostability and adequate concentration to induce response of resistance. The fitotoxic effect of the culture filtrate was determined using roots immersion method from vitroplants of two varieties of potatoes. the Diacol Capire which is reported susceptible and Diacol Monserrate which is resistant. According to the result the best fungi growth was reached with MS medium modified by Dieter (1986), at the 20th day after culture, under 21 °C and constant darkness. We ascertained the thermostable character in the culture filtrate and it was found that the best dilution for the selection was 47 mi/100 ml of the culture filtrate concentrated twenty times, which allowed us to elaborate a scale of evaluations according with the affections of the potato varieties that we studied. COL0001084