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Se partió de tres formulaciones liofilizadas, conteniendo la cepa vacunal anticolérica 638, denominadas F1 (compuesta por lactosa, peptona y sorbitol), F9 (leche descremada, peptona y sorbitol) y FN (extracto de levadura, peptona y sorbitol). Se determinó por calorimetría diferencial de barrido que presentaban respectivamente, temperaturas de transición vítrea de 39°C, 42°C y 33°C, por lo que FN resultó la de mayor tendencia al ablandamiento con el incremento de la temperatura y F9 resultó la más rígida. Debido a que las tres formulaciones liofilizadas presentaron contenidos de humedad muy similares (alrededor del 2%), se concluye que con el incremento de la humedad, FN será la que tendrá también mayor tendencia a colapsar durante el almacenamiento. Se ensayó el efecto de la adición de lactosa monohidratada cristalina, a cada una de las tres formulaciones y se determinaron las isotermas de adsorción correspondientes, a 25°C. Se constató una significativa disminución de la adsorción de agua en cada caso con relación a la formulación base correspondiente y un buen ajuste de los valores obtenidos a la expresión de Guggenhein-Anderson-De Boer (GAB). Se evaluó la pérdida de viabilidad de las tres formulaciones con y sin adición de lactosa, sometidas 3 días a 25°C y a humedades relativas de 11, 33 y 43%, en presencia de oxígeno, comprobándose que F1 y FN mantienen inalterable la viabilidad al cabo de 3 días bajo 11% de humedad relativa, pero en ningún caso la adición de lactosa ayuda a proteger a la cepa del efecto de la humedad, aunque mejore el aspecto y la solubilidad de la formulación. [ABSTRACT FROM AUTHOR]

It has been accepted that an effective vaccine against cholera must be orally supplied. Therefore, the conservation of the involved microorganisms at fixed concentrations for long periods of time must be studied. Viability and colonization ability of strains are very important factors for immunogenicity and efficiency of vaccines. Although lyophilization seems to be suitable for this goal, drastic losses of microbial viability have been observed during the process. The use of lipo-protecting substances may minimize such undesirable effects. In the present work, the vaccine strain 638, Vibrio cholerae O1, El Tor Ogawa was lyophilized as follows: formulations F1 (lactose, peptone, skim milk) and F9 (skim milk, peptone, sorbitol). Both formulations were kept at 8 and - 20°C, for 6 months and a year. Samples from the above formulations and conditions were evaluated for viability loss and colonization ability as well as cellulolytic activity (gene celA). It was observed that the viability was slightly lower for the formulation F9 at different temperatures and periods of time. Furthermore, celA activity was expressed in all colonies analyzed under the above conditions. On the other hand, intestines of most mice were colonized by the strain 638 after 24 hours of inoculation, except for F9, 8°C and a year. However, maximal levels of colonization were detected at 120 hours, being similar to previous non-lyophilization assays. These results led us to assume that both formulations F1 and F9, stored up to a year, are suitable and must be considered for future vaccine development using strain 638. [ABSTRACT FROM AUTHOR]