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CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico As lesões mais frequentes envolvendo o bulbo ocular são de natureza neoplásica e as melanocíticas são as mais comuns na úvea dos cães e na íris dos gatos. Podem ser classificadas como melanocitomas (benignas) e melanomas (malignas). Para melhor compreensão do comportamento biológico de neoplasias melanocíticas uveais em cães e gatos, foram utilizadas ferramentas histológicas e imuno-histoquímicas em 32 bulbos oculares, 27 de cães e cinco de gatos. As neoplasias dos bulbos oculares destes animais foram classificadas em benignas (19/27 - cães) ou malignas (8/27 - cães; 5/5 - gatos), e a localização das estruturas oculares envolvidas foi descrita. Determinaram-se, também, os tipos celulares destas neoplasias, os quais foram denominados como epitelioides, fusiformes e mistas, bem como tipos especiais, como de células balonosas, células gigantes multinucleadas e células em anel de sinete. Além disso, foram caracterizadas porcentagem de células com melanina, intensidade de melanina nas células, anisocitose e anisocariose, índice mitótico, presença de inflamação e necrose intratumoral, invasão vascular e desenvolvimento de glaucoma secundário à neoplasia. Para a confirmação da origem melanocítica, foi realizada imuno-histoquímica com os anticorpos anti-PNL2 (29/32) e anti-melan-A (3/3). O índice proliferativo foi verificado, utilizando-se o anticorpo anti-Ki-67, que variou de 2,8 a 12% em melanocitomas de cães, com média de 6,45 ± 4,1 e de 15,8 a 70% em melanomas de cães, com média de 38,3 ± 25,21. Os melanomas em gatos tiveram variação do índice proliferativo de 10,8 a 30,4%, com média de 18,96 ± 7,36. Também foi avaliado o índice apoptótico, utilizando o anticorpo anti-caspase-3, que variou de 3,8 a 50% em melanocitomas de cães, com média de 16,62 ± 13,26 e de 30 a 84% em melanomas de cães, com média de 58,04 ± 24,25. Nos gatos, o índice apoptótico variou de 3,6 a 92%, com média de 23,16 ± 38,62. A proteína BAP1, cujo padrão de marcação poderia refletir a agressividade tumoral, similar ao relatado para neoplasias oculares melanocíticas em seres humanos, foi também avaliada, e todas as neoplasias uveais do presente estudo foram imunomarcadas. As características histológicas e imuno-histoquímicas encontradas nas neoplasias melanocíticas uveais em cães e gatos deste estudo ampliaram o conhecimento sobre o uso destas ferramentas como fatores prognósticos; entretanto, recomenda-se mais estudos com acompanhamento da sobrevida do animal após o diagnóstico. The most frequent lesions involving the eye are of neoplastic nature and melanocytic lesions are the most common in the uvea of dogs and in the iris of cats. They can be classified as melanocytomas (benign) and melanomas (malignant). For a better understanding of the biological behavior of uveal melanocytic neoplasms in dogs and cats, histological and immunohistochemical tools were applied to 32 eyes, 27 from dogs and five from cats. The ocular neoplasms of these animals were classified as benign (19/27 - dogs) or malignant (8/27 - dogs; 5/5 - cats), and the location of the involved ocular structures was described. The cell types of these neoplasms were also determined, including epithelioid, spindle and mixed, as well as special types, such as balloon cells, multinucleated giant cells and signet rings cells. In addition, the percentage of cells with melanin, the intensity of melanin within the cells, anisocytosis and anisokaryosis, the mitotic index, the presence of intratumoral inflammation and necrosis, vascular invasion and the development of secondary glaucoma were determined. To confirm the melanocytic origin, immunohistochemistry was performed with anti-PNL2 (29/32) and anti-melan-A (3/3) antibodies. The proliferative index in dogs was verified using the anti-Ki-67 antibody, which varied from 2.8 to 12% in melanocytomas, with an average of 6.45 ± 4.1 and from 15.8 to 70% in melanomas, with an average of 38.3 ± 25.21. The proliferative index for cats varied from 10.8 to 30.4%, with an average of 18.96 ± 7.36. The apoptotic index was also evaluated for both species, using the anti-caspase-3 antibody. For dogs, the apoptotic index varied from 3.8 to 50% in melanocytomas, with an average of 16.62 ± 13.26 and from 30 to 84% in melanomas, with an average of 58.04 ± 24.25. For cats, the apoptotic index ranged from 3.6 to 92%, with an average of 23.16 ± 38.62. The BAP1 protein, the marking pattern of which might influence tumor aggressiveness as reported for melanocytic ocular neoplasms in humans, was also evaluated in all uveal neoplasms in the present study. The histological and immunohistochemical characteristics found in uveal melanocytic neoplasms in dogs and cats in this study expanded the knowledge about the use of these tools as prognostic factors; however, further studies with animal survival follow-up after diagnosis are recommended.

CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Mastocitomas são neoplasias cutâneas frequentes em cães que apresentam comportamento biológico e prognóstico variável. A avaliação de características do tumor e do paciente ajudam o clínico a determinar sua conduta. O objetivo deste trabalho foi comparar a apresentação das principais características histológicas, imunohistoquímicas e genéticas avaliadas nos mastocitomas em tumores primários e sua respectiva metástase em linfonodo. Para tanto, foram incluídos animais atendidos no serviço de Oncologia do Hospital Veterinário da UFMG com diagnóstico histopatológico de mastocitoma e metástase em linfonodo comprovada histopatologicamente. Foram avaliadas as graduações dos mastocitomas pelos sistemas de Kiupel e Patnaik, o índice mitótico, a fração de crescimento estimada pelo valor percentual de Ki-67, o padrão de expressão do receptor KIT e o status mutacional do exon 11 do gene c-KIT. Não foi encontrada correlação significativa entre as características do linfonodo e do tumor primário para nenhum dos fatores avaliados, demonstrando a necessidade de avaliar as duas lesões quando houverem, para melhor definição do prognóstico e do tratamento. Também foi encontrado uma incidência de duplicações internas em tandem no exon 11 do gene c-KIT de 35%, maior do que a média relatada em outros estudos, sugerindo que a presença de mutações é mais frequente em pacientes de estadio avançado e prognóstico pior. Também foi demonstrada a necessidade de avaliar os fatores prognósticos em conjunto, pois isoladamente podem levar o clínico a subestimar ou superestimar a agressividade de um mastocitoma. Concluiu-se que em casos de mastocitoma com metástase em linfonodo, é importante avaliar um conjunto amplo de fatores prognósticos no tumor primário e no linfonodo. Mast cell tumors are one of the most important cutaneous malignancies in dogs, and can present with variated biological behaviour and prognostic. Gathering and evaluating tumor and patient prognostic characteristics can be of great value in the decision making process for the clinical oncologist. The goal of this research was to compare the presentation of the main histological, imunohistochemical and genetical characteristics evaluated commonly in mast cell tumors, in both the cutaneous mass and its lymphonodal methastasis. To achieve that, patients referred to the Oncology sector of Federal University ou Minas Gerais (Brazil) that presented with histologically diagnosed mast cell tumor with also histologically detected lymphonodal methastasis were evaluated. The evaluated characteristics included histological graduation bt the Kiupel and Patnaik systems, mitotic index, growth fraction estimated by the percentage of Ki-67, KIT receptor pattern and mutational status in exon 11 of the c-KIT oncogene. No correlation was found between the cutaneous mass and its lymphonodal methastasis regarding the evaluated features, thus showing the need to perform these analysis in both locations, when affected, to better determine the prognostic and course of treatment for the patient. It was also noted a greater incidence of internal tandem duplications in exon 11 of the c-KIT oncogene, which happened in 35% of cases, suggesting that patients of advanced clinical staging and worse prognosis have these mutations more frequently. The study also demonstrated a need to evaluate a panel of prognostic characteristics, and not any of the aspect individually, under risk of underestimating or overestimating the aggressiveness of a mast cell tumor. The conclusion was that, in cases of metastatic mast cell tumors, it is important to evaluate a comprehensive panel of prognostic characteristics in the primary tumor but also in the metastatic lymphnode.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) O modelo canino é indicado para aplicações translacionais com humanos, devido à alta incidência de tumores espontâneos, exposição aos mesmos fatores ambientais e porque o desenvolvimento da doença apresenta características muito similares. Portanto, é possível presumir que as alterações estruturais observadas no mapeamento de tumores caninos podem ser comparadas ao câncer humano. O espalhamento de raios X em médio ângulo (WAXS) fornece informações a respeito na organização molecular dos tecidos, que podem contribuir para o entendimento da infiltração de tumores, levando a diagnósticos precisos e técnicas terapêuticas mais eficazes. O objetivo desse trabalho foi mapear as características estruturais de tecidos adjacentes a tumores mamários caninos, benignos e malignos, a fim de se determinar a abrangência de alterações estruturais, utilizando a microdifração de raios X em médio ângulo. Cinco amostras foram investigadas, incluindo um adenoma simples, um adenoma policístico, um carcinoma sólido e dois adenocarcinomas. Foram conservadas em formalina em temperatura ambiente e cobertas com uma fina camada de filme \textit{Kapton} durante as medidas. Em seguida, as amostras foram liofilizadas e novamente submetidas ao experimento, a fim de se determinar a influência da água no processo de espalhamento elástico. Foi utilizado um difractômetro D8 Discover da Bruker, com uma fonte de microfoco de cobre (Ka = 8,04 keV) e um detector de área Vantec 500. O momento transferido analisado foi de 5,8 nm-1a 41,3 nm-1com passos de 0,005º para as amostras fixadas em formalina e 8,7 nm-1a 39,1 nm-1, com passos de 0,01º para as liofilizadas, ambos com 600 segundos de exposição por passo. Fatores de correção relacionados à atenuação pela própria amostra e contribuições espúrias foram aplicados. Regiões de tecido fibroglandular apresentaram um pico principal em torno de q = 19,8 nm-1, associado à distância entre moléculas de água vizinhas. Um pico menos intenso em q = 30 nm-1também é observado, tanto nos perfis predominantemente glandulares quanto nos adiposos, e pode corresponder à conexão de hidroxilas entre moléculas de água ou ao espalhamento harmônico do pico de ácidos graxos. Tecidos adiposos apresentaram um pico mais estreito em torno de q = 13,8 nm-1, correspondente ao espaçamento da cadeia de ácidos graxos. Foi possível concluir que diferentes pontos de uma mesma amostra apresentaram perfis bastante variados, provando o quão heterogêneos são os tecidos ao redor do tumor. A redução da intensidade nas medidas pós-liofilização foi variada de ponto para ponto, mostrando que a perda de água é proporcional à quantia de tecido fibroglandular na região. A supressão do pico em q = 19,8 nm-1nas amostras liofilizadas comprova a relação deste com as moléculas de água. Canine mammary tumors have been suggested as a model to study humans due to its high incidence rates, exposure to the same environmental factors and because both present similar development characteristics. Therefore, it is possible to assume that structural changes found in canine tumor monitoring can be extended to human cancer. Wide-angle X-ray scattering (WAXS) provides information regarding the molecular organization of tissues, which can increase the understanding of cancer infiltration and thus aid in its diagnosis and treatment. The purpose of this study was to map the structural changes in canine mammary tissues surrounding benign and malign tumors, using X-ray microdiffraction. Five samples were investigated, including simple and polycystic adenoma, solid carcinoma and two adenocarcinomas. These were stored in formalin at room temperature and covered with a thin layer of Kapton film during the experiment. After measuring five points in each sample, these were lyophilized, in order to study the influence of water in the scattering process. Measurements were carried out in a D8 Discover Bruker Diffractometer, with a microfocus source (Ka = 8.04 keV), and a 2D Vantec 500 detector. The momentum transfer ranged from 5.8 nm-1 to 41.3 nm-1, with steps of 0.005º for samples fixed in formalin, and from 8.7 nm-1 to 39.1 nm-1, with 0.01º steps for the lyophilized ones, both with 600 seconds of exposition per step. Correction factors related to self-attenuation in the sample and external contributions were applied. Regions of glandular tissue peaked at q = 19.8 nm-1, which is related to the distance between oxygen particles in neighboring water molecules. A less intense peak around q = 30.0 nm-1 is also noticeable, both in glandular and adipose tissues, and can be related either to the connection of hydroxyl groups between water molecules or to the harmonic scattering of the fatty acids’ peak. Adipose tissue presented a narrower peak at q = 13.9 nm-1, consistent with the fatty acids chain. In conclusion, the analyzed spots presented very different profiles, proving how heterogeneous the tumoral sample is. By analyzing the lyophilized samples, it is observed that points containing more fibroglandular tissue lose more hydric content than others. In these samples the peak q = 19.8 nm-1 was supressed, reinforcing its link to water molecules.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) A expectativa de vida canina cresceu significativamente na última década. Como consequência, observou-se um aumento no aparecimento de doenças relacionadas à idade, como as neoplasias. Para as cadelas, neoplasias mamárias são o tipo de câncer mais comum, e aproximadamente 50% delas são malignas. Uma vez que os tumores são causados por alterações químicas e físicas nas células, estudos que caracterizem essas anormalidades são essenciais. A fluorescência de raios X (XRF) é uma das técnicas mais utilizadas para determinar a composição elementar dos tecidos. A técnica de espalhamento Compton, por sua vez, permite o cálculo da densidade eletrônica das amostras, fornecendo informações sobre a matriz tecidual. Neste sentido, o objetivo deste trabalho foi estudar as variações nas concentrações de elementos-traço (Fe, Cu e Zn) e densidade eletrônica, em amostras de tecido mamário canino normais e neoplásicos, combinando técnicas de XRF e espalhamento Compton. Inicialmente, foram realizadas simulações computacionais visando a otimização das condições experimentais. Após as simulações, treze amostras foram analisadas no Instituto de Física Gleb Wataghin (IFGW), utilizando um arranjo de fluorescência de raios X por dispersão de energia (ED-XRF), para se obter simultaneamente as concentrações dos elementos-traço e as densidades eletrônicas das amostras. Outras sete amostras foram analisadas no Laboratório Nacional de Luz Síncrotron (LNLS), em dois experimentos separados. Primeiramente, aplicou-se a técnica de microfluorescência de raios X (µ-XRF) para mapear a distribuição espacial de Fe, Cu e Zn ao redor dos tumores. Em seguida, medições de espalhamento Compton foram feitas em pontos selecionados das amostras, com o intuito de se obter valores de densidade eletrônica nesses pontos. Os resultados das simulações permitiram otimizar as condições experimentais, proporcionando um melhor uso do tempo de feixe para os experimentos realizados no LNLS. Os resultados obtidos nos experimentos com o arranjo de ED-XRF, apesar das flutuações percentuais, serviram como base para uma estimativa dos valores de concentração de Cu e Zn e de densidade eletrônica das amostras. Os experimentos de µ-XRF forneceram mapas com as distribuições espaciais dos elementos Fe, Cu e Zn ao redor dos tumores, que foram comparados aos laudos das lâminas histológicas e aos valores de densidade eletrônica encontrados no experimento de espalhamento Compton. Observou-se uma concentração elevada do elemento Cu em uma amostra de tumor benigno (adenoma simples), e aumento de Fe em regiões próximas a tumores, e o Zn estava distribuído de maneira homogênea em grande parte das amostras. Quanto às densidades eletrônicas, verificou-se concordância com outros trabalhos presentes na literatura, com valores mais altos em regiões tumorais, e menores nas áreas de tecido adiposo. Dessa forma, observa-se que a combinação das técnicas de XRF e espalhamento Compton é uma forma eficaz de se obter informações complementares em estudos com tumores mamários caninos. Canine life expectancy has increased significantly in the last decade. Consequently, there was a higher incidence of age-related diseases, such as neoplasms. For female dogs, breast neoplasms are the most common type of cancer, and approximately 50% of them are malignant. Once tumors are caused by chemical and physical changes in the cell, studies that characterize these abnormalities are essential. X-Ray Fluorescence (XRF) is one the most common technique used for determining the elemental composition of tissues. The Compton scattering technique, on the other hand, allows determining the electron density of samples, providing information about the tissue matrix. In this sense, the objective of this work was to study the variations in trace elements (Fe, Cu and Zn) concentration and electron density, in normal and neoplastic canine mammary tissues, combining XRF and Compton scattering techniques. Initially, computational simulations were carried out aiming the optimization of the experimental conditions. After the simulations, thirteen samples were analyzed at the Instituto de Física Gleb Wataghin (IFGW), using an energy dispersive X-ray fluorescence (ED-XRF) arrangement, to obtain the trace elements concentrations and the electron densities of the samples, simultaneously. Another seven samples were analyzed at the Laboratório Nacional de Luz Síncrotron (LNLS), in two separate experiments. First, the micro X-ray fluorescence (µ-XRF) technique was applied for mapping the spatial distribution of Fe, Cu and Zn around the tumors. Then, the Compton scattering measurements were performed at selected points of the samples, in order to obtain values of electron density at these points. The simulations results optimized the experimental conditions, providing a better use of the beam time for the experiments carried out at the LNLS. The results obtained in the experiments with the ED-XRF arrangement, despite the percentage fluctuations, served as the basis for an estimation of the concentration values of Cu and Zn and the sample's electron densities. The µ-XRF experiments provided maps with the spatial distributions of Fe, Cu and Zn around the tumors, which were compared to the histological slides and the electron density values found in the Compton scattering experiment. A higher concentration of Cu was observed in a benign tumor sample (simple adenoma), and increased Fe in regions close to tumors, and Zn was homogeneously distributed in most of the samples. Regarding the values of electron density, there was agreement with other works present in the literature, with higher values in tumor regions, and smaller in the areas of adipose tissue. Therefore, it is observed that the combination of XRF and Compton scattering techniques is an effective way for obtaining complementary information in studies with canine mammary tumors.

CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico A maioria dos tumores mamários caninos são malignos, fazendo com que o animal venha a óbito. Um dos fatores envolvidos nessa patogênese é a alteração no nível de expressão do gene P21, que codifica uma proteína que pode inibir a iniciação e a progressão tumoral. Um evento que pode afetar o nível celular da proteína p21 e o perfil de metilação desse gene, podendo ocasionar um silenciamento gênico ou uma superexpressão dele. Considerando a importância funcional desse gene, este estudo tem o objetivo de avaliar o perfil de metilação e expressão do gene P21 em tumores mamários de cadelas do estado do Pará, com o intuito de identificar marcadores moleculares de diagnóstico precoce, sobrevida e prognóstico. Para isso, 83 amos-tras de tecidos tumoral e não tumoral foram coletadas no Hospital Universitário Mário Dias Teixeira, em Belém. O DNA e RNA de cada amostra foram extraídos utilizando kits específi-cos. Para as análises de metilação, o DNA obtido foi submetido ao processo de modificação, com posterior técnica de Bisulfite Sequencing PCR, utilizando iniciadores específicos para re-gião e posterior visualização em gel de agarose 2%. Os resultados do sequenciamento foram analisados no software BiQ Analyzer a fim de avaliar o padrão de metilação. Para análise de expressão gênica, foi realizada a quantificação do mRNA do gene-alvo utilizando a técnica de PCR em tempo real, utilizando como controles constitutivos os genes GAPDH e HPRT1. Com análise estatística feita por meio dos testes Exato de Fisher, Odds Ratio e Mann-Whitney no programa GraphPad Prism, considerando os resultados significativos quando p ≤0.05, com in-tervalo de confiança 95%. Para avaliação do perfil de metilação, foi realizada a caracterização das ilhas CpGs do gene P21, sendo que a ilha 1 está localizada em um íntron e possui 34 sítios CGs, enquanto que a ilha 2 foi identificada no éxon 2, com 22 sítios CGs. Na ilha 1 não foi detectada metilação, enquanto que a ilha 2 estava metilada, contudo o perfil de metilação não foi diferente entre as amostras tumorais, não tumorais e controles, não sendo possível correla-cionar os valores de metilação com os dados clínicos e de expressão. Os níveis de expressão das amostras tumorais foram baixos quando comparados com as amostras não tumorais e con-trole, demostrando que o papel de p21 nesses tumores pode se apresentar alterado. No entanto, nenhuma correlação estatisticamente significativa foi observada entre a expressão e os dados clínicos e histopatológicos dos pacientes. Apesar disso, foi observada uma expressão reduzida em animais com sobrevida >1 ano de idade, e uma expressão elevada em animais com sobrevida < 1 ano de idade, sugerindo a influência de p21 como um marcador de prognóstico. Ainda são necessários estudos mais detalhados do gene P21 para verificar se essas alterações poderão ser utilizadas como marcadores moleculares, e assim colaborar no prognóstico e detecção do câncer na espécie. The most of canine mammary tumors are malignant and associated with the animal death. One of the factors involved in this pathogenesis is the change in the expression level of the gene P21, which in turn encodes a protein that can inhibit tumor initiation and tumor progression. The methylation profile of gene can affect the cellular level of p21 and lead gene silencing or overexpression. Whereas the functional importance of the P21 gene, this study aimed to evalu-ate the methylation profile and expression in mammary tumors of dogs, in order to identify molecular markers of early diagnosis, survival and prognosis. Therefore, 83 tumor and non-tumor tissue samples were collected from dogs, undergoing surgery at the Veterinary Hospital "Mário Dias Teixeira”, in Belém -Pará. the DNA and RNA from each sample were submitted to extraction using a commercial kit. For the methylation analyzes, the obtained DNA was sub-mitted to the modification process, with a subsequent technique of Bisulfite Sequencing PCR, using region-specific primers and subsequent visualization in 2% agarose gel. The sequencing results were analyzed in BiQ Analyzer software in order to evaluate the methylation pattern. For gene expression analysis, the target gene mRNA was quantified using the real-time PCR technique using the GAPDH and HPRT1 genes as constitutive controls. Statistical data was performed using the Fisher Exact, Odds Ratio and Mann-Whitney tests in the GraphPad Prism program, considering the significant results when p ≤0.05, with a 95% confidence inter-val. In order to evaluate the methylation profile, the CpG islands of the P21 gene were characterized. The island 1 is located in an intron with 34 CGs, while an island 2 was identified in the exon, with 22 CGs. Both amplified generating a fragment of ~ 300bp. At island 1 no methylation was detected, whereas island 2 was methylated, but the island methylation profile was not different between the tumor, non-tumor and control samples. With these results was impossible compare the methylation values with clinical and expression data, suggesting that these regions are not altered. The expression levels of the tumor samples were low when compared to the non-tumor samples and control, with p (0.0001), show that the role of p21 in these tumors may be altered but not statistically significant when correlated with clinical histopathological data of patients. However, a reduced expression in the survival of animals> 1 year of age was observed, and a high expression in animals with survival

Os tumores de mama têm grande importância na clínica de animais de companhia e são as neoplasias mais frequentes nas cadelas. O linfonodo sentinela é definido como o primeiro linfonodo de uma cadeia linfática regional a drenar a linfa do sítio neoplásico. A possibilidade de identificação do linfonodo axilar sentinela com o corante azul patente tem auxiliado na determinação de metástase regional, definindo prognóstico, sobrevida e terapias adjuvantes necessárias. O objetivo desse estudo foi avaliar o linfonodo axilar de cães com neoplasia mamária submetidas à mastectomia, avaliar o método de identificação pela técnica do azul patente e correlacionar a presença de metástase em linfonodo com alguns fatores prognósticos e tipos histológicos das neoplasias. Foram avaliados 50 cães (49 fêmeas e um macho) provenientes da rotina clínico-cirúrgica do Hospital Veterinário da UFMG de abril/2015 a maio/2017 com tumores mamários em mamas de localização de drenagem linfática axilar, estadiamento clínico II ou III e linfonodo axilar não palpável. Todos os animais foram submetidos à mastectomia e aplicação de azul patente 2,5% para identificação do linfonodo axilar. Em 38 animais (76%) foi possível a identificação do linfonodo corado, nos demais casos o linfonodo não foi identificado. A probabilidade de encontrar o linfonodo axilar não diferiu quando correlacionada ao tamanho do tumor e peso do animal e nenhum animal apresentou reação ao corante. Dos 38 animais com linfonodo axilar avaliados histologicamente, 14 (36,84%) possuíam metástase. Não houve diferença significativa (p>0,05) entre a probabilidade de encontrar metástase e a localização do tumor, a presença de aderência e o tipo histológico da neoplasia. No entanto, a probabilidade de encontrar metástase foi significativa (p 0.05) between the likelihood of finding metastasis and the location of the tumor, the presence of adhesion and the histological type of the neoplasm. However, the probability of finding metastasis was significant (p

CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior O complexo Polycomb (PcG) é constituído por fatores multiproteicos que medeiam a repressão de diversos genes no organismo. As proteínas PcG são divididas em dois complexos distintos, PRC1 e PRC2, sendo que PRC1 tem atividade ligase E3, catalisando a mono-ubiquitinação da histona H2A nos resíduos de lisina na posição 119 (H2AK119ub), enquanto PRC2 tem atividade metiltransferase, mediando a mono, di, e trimetilação na histona H3 nos resíduos de lisina na posição 27 (H3K27me2/3). Sabe-se que PRC1 é subdivido em complexos não canônicos e canônicos, sendo este último composto por proteínas CBX (CBX2, CBX4, CBX6, CBX7 ou CBX8). Já PRC2, compreende três proteínas centrais: SUZ12, EED e EZH1 ou EZH2, que é a proteína metiltransferase responsável por conferir a principal atividade enzimática ao complexo PRC2. Sabe-se que a desregulação das proteínas PcG pode alterar vias relacionadas ao desenvolvimento, ocasionando um aumento desordenado de proliferação celular, inibição da apoptose, e aumento das células tumorais. Dentre os tumores com alteração na expressão de PcG, estão os tumores mamários. Em caninos, este tipo de tumor é a neoplasia mais frequente em cadelas. Dessa forma, este trabalho teve como objetivo avaliar o padrão de metilação e expressão dos genes CBX2 e CBX7 (PRC1), e EED, EZH2 e SUZ12 (PRC2) em tumores de mama em cadelas do estado do Pará. Para isso, foram avaliadas 83 amostras de tecido neoplásico e não-neoplásico, provenientes de 40 animais, coletadas no Hospital Veterinário da Universidade Federal Rural da Amazônia. Para a análise do padrão de metilação, as amostras foram convertidas por ação do bissulfito de sódio e submetidas à técnica de Bissulfite sequence PCR para detecção das possíveis áreas metiladas. Para a análise da expressão de RNA, foi feita a conversão a cDNA e posterior quantificação dos transcritos usando a detecção por sonda Taqman. A emissão da fluorescência foi captada com o auxílio do ABI PRISM 7500 Sequence Detection System. As análises estatísticas foram realizadas pelos testes Kruskal-Wallis e Teste T Mann Whitnae, para avaliar as associações dos padrões de metilação com os níveis de expressão, e destes com progressão tumoral e demais características clinicopatológicas, sendo os resultados considerados significativos quando p< 0,05. The Polycomb complex (PcG) consists of multiprotein factors that mediate the repression of various genes in the body. PcG proteins are divided into two distinct complexes, PRC1 and PRC2, with PRC1 having E3 ligase activity, catalyzing the mono-ubiquitination of histone H2A at lysine residues at position 119 (H2AK119ub), while PRC2 has methyltransferase activity, mediating mono, di, and trimethylation on histone H3 at lysine residues at position 27 (H3K27me2 / 3). It is known that PRC1 is subdivided into non-canonical and canonical complexes, the latter being composed of CBX proteins (CBX2, CBX4, CBX6, CBX7 or CBX8). Already PRC2, it comprises three central proteins: SUZ12, EED and EZH1 or EZH2, which is the methyltransferase protein responsible for conferring the main enzymatic activity to the PRC2 complex. It is known that deregulation of PcG proteins may alter developmental pathways, causing a disordered increase in cell proliferation, inhibition of apoptosis, and increase of tumor cells. Among the tumors with altered expression of PcG are mammary tumors. In canines, this type of tumor is the most frequent neoplasm in bitches. Thus, the objective of this study was to evaluate the methylation and expression pattern of the CBX2 and CBX7 (PRC1), and EED, EZH2 and SUZ12 (PRC2) genes in breast tumors in dogs from the state of Pará. Samples of neoplastic and non-neoplastic tissue from 40 animals collected at the Veterinary Hospital of the Federal Rural University of Amazônia. For the analysis of the methylation pattern, the samples were converted by sodium bisulfite and submitted to the Bissulfite sequence PCR technique to detect possible methylated areas. For analysis of RNA expression, cDNA conversion and subsequent quantification of transcripts were performed using Taqman probe detection. Fluorescence emission was captured with the aid of the ABI PRISM 7500 Sequence Detection System. Statistical analyzes were performed using the Kruskal-Wallis test and the Mann Whitnae test to evaluate the associations of methylation patterns with expression levels, and those with tumor progression and other clinicopathological characteristics. The results were considered significant when p

As neoplasias mamárias são o terceiro tipo mais frequente de neoplasias em felinos e a busca por fatores prognósticos para este tipo de tumor nas gatas tem se intensificado nos últimos anos, dada sua alta frequência e relevância na clínica de felinos. Dentre os marcadores imunohistoquímicos utilizados para prognóstico destaca-se o receptor do fator de crescimento epidérmico humano tipo 2 (Human Epidermal Growth Factor Receptor type 2 – Her-2) que em mulheres está associado a um pior prognóstico. Objetivou-se avaliar a expressão de Her-2 em hiperplasias e neoplasias mamárias, benignas e malignas, de gatas e relacionar a expressão ao tipo e grau histológico dos carcinomas mamários. Foram selecionados 38 casos de neoplasias e hiperplasias mamárias de gatas, no período de 2006 a 2016. A partir dos protocolos selecionados obteve-se informações epidemiológicas e características macroscópicas das lesões nas mamas. Os tumores foram individualmente classificados e graduados histologicamente por dois patologistas. A expressão de Her- 2 foi determinada por imunohistoquímica, por meio de análise semi quantitativa das lâminas conforme escore recomendado pelo Herceptest (Dako). Utilizou-se Teste Quiquadrado (χ2) para avaliação da relação entre expressão de Her-2 e tipo de lesão mamária, tipos histológicos de carcinoma e grau histológico (P

Orientador : Prof. Dr. Fabiano Montiani-Ferreira Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Ciências Veterinárias. Defesa: Curitiba, 31/03/2017 Inclui referências ao final de cada capítulo Resumo:Os estudos, investigações e publicações sobre as alterações clínicas e histopatológicas das doenças que afetam as pálpebras de cães são muito escassos. Isso provavelmente se deve ao fato de as pálpebras serem estruturas que pertencem à área de atuação comum a duas especialidades médicas: a dermatologia e a oftalmologia, não se encaixando completamente em nenhuma delas. Tanto os dermatologistas não se sentem confortáveis em tratar de uma área que pertence ao olho; quanto os oftalmologistas, hesitam em abordar uma região tão ligada à dermatologia. Certamente o diagnóstico e consequente tratamento exitoso das afecções palpebrais exige conhecimentos sólidos de cada umas dessas especialidades. Assim sendo, estudos mais aprofundados e específicos das alterações patológicas palpebrais e que incluam conhecimentos e experiências das duas especialidades têm grande relevância no desenvolvimento da clínica veterinária de pequenos animais. Além disso, é importante que aqueles responsáveis pelo diagnóstico histopatológicos das alterações palpebrais, os patologistas, sejam apresentados a essa área de intersecção de especialidades e, uma vez habituados e conhecedores dela, tornem-se aliados dos oftalmologistas e dermatologistas no diagnóstico das afecções palpebrais. A presente tese de doutorado está dividida em dois capítulos. O primeiro capítulo trata-se de um estudo retrospectivo de 290 casos de adenomas e epiteliomas da glândula tarsal em cães. Nele determina-se a frequência destas neoplasias palpebrais em dois laboratórios de Patologia Veterinária que recebem amostras de todo o Brasil. Além disso, discutem-se os aspectos histopatológicos dessas duas neoplasias e propõe-se uma nova forma de diferenciação entre elas. Este estudo deu origem a um artigo publicado no periódico Brazilian Journal of Veterinary Pathology. O segundo capítulo avalia os achados histopatológicos e imuno-histoquímicos das lesões despigmentantes das pálpebras de cães. O estudo sugere que a despigmentação palpebral acompanhada do padrão histopatológico de dermatite de interface é uma manifestação localizada do lúpus eritematoso discoide. Além disso, o demonstra que o lúpus eritematoso discoide localizado pode ser restrito às pálpebras de cães e propõe o termo blefarite lupoide para essa manifestação. O estudo também avaliou a expressão da proteína p53 nas pálpebras despigmentadas com dermatite de interface. A correlação entre a expressão da proteína p53 com a presença de dermatite de interface em pálpebras despigmentadas pode ajudar no entendimento dos mecanismos das dermatopatias que levam à despigmentação, resultando em diagnósticos e prognósticos mais precisos. Esse artigo será publicado em periódico direcionado a clínicos veterinários dermatologistas ou oftalmologistas. Palavras-chave: pálpebra, adenoma, epitelioma, dermatite de interface, blefarite lupoide, p53. Abstract: Studies, investigations and publications about clinical and histopathological alterations of diseases affecting the eyelids in dogs are very scarce. This is probably because the eyelids are structures belonging to an area common to two medical fields: dermatology and ophthalmology, and do not totally fit into neither. Dermatologists usually do not feel confident to treat an area belonging to the eye; and ophthalmologists hesitate to approach an area so connected to dermatology. Certainly, the diagnosis and consequent successful treatment of palpebral conditions demand solid knowledge from each of these specialties. Therefore, it is clear the need of deeper and more specific studies of palpebral diseases including knowledge and experience from both specialties. Besides, it is important that the pathologists themselves should be more familiar with this intersection area of specialties and make the connection between ophthalmologists and dermatologists in the diagnosis of eyelid diseases. The present doctorate thesis was divided into two chapters. The first one is about a retrospective study of 290 cases of adenomas and epitheliomas of the tarsal gland in dogs. In this chapter, the frequency of these eyelid neoplasias was determined in two Veterinary Pathology laboratories that receive samples from all over Brazil. Besides, the histopathological aspects of both neoplasias have been discussed and a new form of differentiation between them has been proposed. This study gave origin to an article published in the Brazilian Journal of Veterinary Pathology. The second chapter evaluates the histopathological and immunohistochemical findings on the depigmenting lesions in eyelids of dogs. The study suggests that depigmented eyelids with interface dermatitis are, in fact, a clinical manifestation of localized discoid lupus erythematosus. Besides, the study demonstrates that localized discoid lupus erythematosus can be restricted to the eyelids of dogs and proposes the term lupoid blepharitis for those cases. The expression of p53 protein in depigmented eyelids with interface dermatitis also was investigated. The results of this study may help to better understanding of the mechanisms behind the disorders that lead to depigmentation, resulting in more precise diagnosis and prognosis. The manuscript will be published in a periodical with the focus directed to veterinary clinicians specialized in dermatology or ophthalmology. Keywords: eyelids, adenoma, epithelioma, interface dermatitis, lupoid blepharitis, p53.

Orientadora : Profª Drª Giseli Klassen Coorientadora : Profª Drª Edneia A. S. R. Cavalieri Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Microbiologia, Parasitologia e Patologia. Defesa: Curitiba, 29/03/2017 Inclui referências : f. 52-58 Resumo: O câncer de mama é o tipo de câncer mais incidente em cadelas não castradas e dentre os fatores envolvidos em sua patogênese está a exposição ao estrógeno e a ação de seu receptor. O receptor de estrógeno-? (RE?) é uma proteína, codificada pelo gene ESR1, amplamente utilizada como marcador molecular de prognóstico para o câncer de mama em mulher, porém na cadela ainda é pouco utilizado. Um dos mecanismos envolvidos na regulação do gene ESR1 em neoplasias mamárias em mulheres é a metilação do DNA, um evento epigenético onde há a adição de um grupamento metil em citosinas ao lado de guaninas. Nos últimos anos vem aumentando o número de trabalhos investigando a expressão da proteína RE? em cadelas, entretanto, ainda são poucos os estudos buscando entender os mecanismos moleculares de regulação do gene ESR1 nestes animais. Neste trabalho, foi avaliada a expressão do gene ESR1 e da proteína em amostras de mama normal, tumores mamários benignos e malignos, bem como verificada a influência da metilação na regulação da expressão deste gene. Neste estudo foram utilizadas quatro amostras de mama normal, oito tumores benignos e nove malignos. Observou-se uma menor expressão do gene ESR1 (p < 0,05) e da proteína RE? (p=0,0037) nos tumores malignos em relação às mamas normais e aos tumores benignos. Embora a correlação encontrada entre mRNA e proteína seja forte e positiva (rho=0,72 e p < 0,05), três das seis amostras RE? negativas (escore zero) apresentaram níveis de mRNA semelhantes aos das amostras RE? positivas classificadas como escore 2 na imuno-histoquímica. Os resultados do sequenciamento evidenciaram um baixo percentual de metilação, sendo observados 2,5% no grupo de mamas normais, 1,9% no grupo receptor de estrógeno positivo e 2,6% no grupo receptor de estrógeno negativo, não havendo diferença estatística entre os grupos (p>0,05). Como não foi evidenciada diferença significativa na metilação entre os três grupos é possível inferir que no câncer de mama canino o gene ESR1 provavelmente não é silenciado por metilação, entretanto estudos com maior número amostral são necessários. Palavras chave: câncer de mama canino, receptor de estrógeno ?, ESR1, metilação do DNA, epigenética Abstract: The mammary cancer is the most prevalent cancer type in no spayed bitches. Exposure to estrogen and its receptor action is a factor involved in mammary carcinogenesis. The estrogen receptor-? (ER?) is a protein encoded by the gene ESR1 widely used as prognostic biomarker in women breast cancer but poorly used in canine mammary tumor. The DNA methylation is a regulatory mechanism of the gene ESR1 in women breast cancer. It is an epigenetic event where the methyl group is added to a cytosine next to a guanine. In the past few years it has been increasing the number of studies about the ER? expression in bitches, however it still few researches investigating the molecular mechanisms of the ESR1 gene regulation in these animals. The goal of this study was to evaluate the protein and mRNA expression of the ESR1 gene in samples of normal mammary gland, benign and malignant tumors and identify the role of DNA methylation in this gene regulation. It was used samples of four normal mammary gland, eight benign tumors and nine malignant tumors. It was observed a significant lower expression of ER? mRNA (p0,05). We can infer that in canine mammary tumors the gene ESR1 probably is not silenced by DNA methylation. Further studies with higher number of samples are needed. Key words: canine mammary cancer, estrogen receptor ?, ESR1, DNA methylation, epigenetic

Orientadora : Profª. Drª. Rosângela Locatelli Dittrich Coorientadora : Profª. Drª. Ananda Portella Felix Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Ciências Veterinárias. Defesa: Curitiba, 27/03/2017 Inclui referências ao final de cada capítulo Resumo: Nas últimas décadas foram crescentes os estudos em humanos a respeito da concentração sérica da vitamina D na saúde sistêmica. No entanto, na medicina veterinária ainda há pouco conhecimento sobre isso e não há um consenso em relação aos seus valores de referência. Estudos em cães associam a deficiência de vitamina D a maior predisposição para o desenvolvimento de neoplasias, em humanos os resultados sãos mais consistentes e já relacionam essa deficiência ao pior prognóstico e menor sobrevida. Porém, não existe nenhum estudo em cães que relacione as concentrações séricas de 25(OH)D como fator de risco para neoplasia mamária. A presente dissertação está dividida em uma breve descrição e atualização sobre a vitamina D e em dois capítulos. O capítulo I determina valores de referência para 25(OH)D em cães saudáveis e avalia as concentrações séricas de 25(OH)D em relação ao sexo, a faixa etária (adultos e filhotes) e ao tipo de dieta. Foram selecionados 59 cães saudáveis, população total (G), dividido em dois grupos: Grupo 1 (G1): Beagles, faixas etárias distintas (adultos e filhotes), dieta padronizada e Grupo 2 (G2): raças variadas, mesma faixa etária (adultos) e dietas variadas. O intervalo de referência obtido na população total (G) tem limite inferior de 12,2 ng/ml e superior de 74,4 ng/ml. Não foi observada diferença nos níveis séricos de 25(OH)D entre machos e fêmeas. No G1 os filhotes apresentaram uma concentração de 25(OH)D mediana (30,6 ng/ml) inferior aos adultos (34,9 ng/ml). No G2 não foi observada diferença significativa entre os cães que recebiam diferentes tipos de dieta. A ausência de correlação significativa entre a ingestão de vitamina D por quilograma de peso corporal e a concentração de 25(OH)D (G1) sugere que outros fatores podem influenciar nessa relação. O capítulo II aborda a relação entre os níveis séricos de 25(OH)D e o risco de desenvolvimento de neoplasia mamária em cadelas, o prognóstico e a sobrevida. Os cães foram separados em grupo controle (GC) e grupo com neoplasia mamária (GN). Para o GC foram selecionadas 78 cadelas adultas, saudáveis. No GN foram incluídas 65 cadelas, adultas, diagnosticadas com tumor mamário. As cadelas do GN apresentaram níveis significativamente inferiores de 25(OH)D (24,9 ng/ml) em relação ao GC (43,7 ng/ml). As cadelas com valores séricos de 25(OH)D menores que 26,2 ng/ml apresentaram um risco 6,2 vezes maior de desenvolver neoplasia mamária. Fatores prognósticos como malignidade, grau histológico do tumor, presença de metástase não apresentaram relação significativa com as concentrações séricas de 25(OH)D. Porém em cadelas com níveis séricos inferiores a 26,2 ng/ml o risco de mortalidade aumentou em mais de 5 vezes e a curva de sobrevivência foi significativamente menor. Ainda não é possível definir quais os níveis séricos de 25(OH)D são considerados adequados para cães, mas a deficiência de vitamina D pode ser um fator de risco para neoplasia mamária em cadelas e estar relacionada uma menor sobrevida. Palavras-chave: vitamina D, cão, dieta, valor de referência, tumor de mama, mortalidade, sobrevida. Abstract: In recent decades there has been a growing number of studies in humans regarding serum vitamin D concentration in systemic health. However, in veterinary medicine there is still not much data about this and there is no consensus regarding its reference values. Studies in dogs associate vitamin D deficiency with a greater predisposition to the development of neoplasias. In humans results are more consistent and have already related this deficiency to worse prognosis and lower survival. However, there is no study in dogs that correlates serum concentrations of 25(OH)D as a risk factor for breast cancer. This dissertation is divided in a brief description and update about vitamin D and in two chapters. The chapter I determines reference values for 25(OH)D in healthy dogs, and evaluates serum 25(OH)D levels in relation to gender, age (adult and pups), and type of diet. A total of 59 healthy dogs were selected, divided into two groups: Group 1 (G1): Beagles, different age groups (adults and puppies), standardized diet and Group 2 (G2): varied breeds, same age group (adults) and various diets. The reference range obtained in the total population (G) has a lower limit of 12.2 ng/mL and higher of 74.4 ng/mL. No difference was observed in the serum levels of 25(OH)D between males and females. In G1 puppies had a mean 25(OH)D concentration (30.6 ng/mL) lower than adults (34.9 ng/mL). In G2, no significant difference was observed between dogs receiving different types of diet. The absence of a significant correlation between vitamin D intake per kilogram of body weight and the concentration of 25(OH)D (G1) suggests that other factors may influence this relation. Chapter II discusses the relationship between serum 25(OH)D levels and the risk of developing breast cancer in bitches, prognosis and survival. The dogs were separated in control group (CG) and group with mammary neoplasia (GN). For GC, 78 adult, healthy bitches were selected. In GN 65 adult bitches diagnosed with breast tumor were included. In GN bitches showed significantly lower levels of 25(OH)D (24.9 ng/mL) than GC (43.7 ng/mL). Bitches with serum values of 25(OH)D lower than 26.2 ng/ mL had a 6.2-fold higher risk of developing breast cancer. Prognostic factors such as malignancy, histological grade of the tumor, presence of metastasis did not show significant relation with the serum concentrations of 25(OH)D. However, in bitches with serum levels below 26.2 ng/mL the risk of mortality increased more than five fold and the survival curve was significantly lower. It is not yet possible to determine which serum levels of 25(OH)D are considered suitable in dogs, but vitamin D deficiency may be a risk factor for breast cancer in bitches and may be associated with decreased survival. Keywords: Vitamin D, dog, diet, reference value, breast tumor, mortality, survival

O mastocitoma é a neoplasia cutânea maligna de maior frequência em cães. Apesar do estudo e do desenvolvimento de diversos marcadores prognósticos na tentativa de prever o comportamento biológico deste tipo de neoplasia, a graduação histológica continua sendo utilizada como principal delineador prognóstico para os animais acometidos, mesmo não conseguindo prever o comportamento de mastocitomas de diferenciação intermediária. Diferentes marcadores de proliferação e atividade celular vêm sendo testados com resultados promissores, entretanto, em sua maioria, demandam técnicas específicas de coloração e imuno-histoquímica que, ainda hoje, são de alto custo e muitas vezes não estão facilmente disponíveis. O índice mitótico é um método indireto de mensuração da atividade proliferativa celular, que pode ser contabilizado em uma lâmina comum de avaliação histológica e estudos vêm determinando-o como importante marcador prognóstico para o mastocitoma canino. Dada a recente publicação sugerindo nova graduação em dois graus (alto e baixo) e indisponibilidade das técnicas específicas utilizadas na determinação de outros fatores prognósticos, objetivou-se avaliar o poder prognóstico das diferentes classificações, associando-as à sobrevida destes animais e comparando com o índice mitótico. Apesar de isoladamente ambas as classificações histológicas apresentarem associação com a sobrevida (P0,05). O índice mitótico foi o fator prognóstico mais confiável para sobrevida, independente do ponto de corte utilizado (P0,05), and the mitotic index was the most significant prognostic factor for survival, regardless of the cut-off point used (P

Essa tese teve como objetivo avaliar a eficiência de fatores prognósticos e de diferentes abordagens terapêuticas do mastocitoma canino, considerando à elevada incidência e heterogeneidade de apresentação clínica e comportamento biológico dessa neoplasia, consituindo um guia para prognóstico e tratamento. Foram incluídos cães referenciados ao Hospital Veterinário (Universidade Federal de Minas Gerais, Brasil) e Queen's Veterinary School Hospital (University of Cambridge, Reino Unido), com diagnóstico histopatológico de mastocitoma. Foram avaliados fatores prognósticos clínicos, anátomo-patológicos, imuno-histoquímicos e genéticos, resultando na realização de cinco estudos distintos. O estudo 1 (n = 62) demonstrou elevada taxa de resposta aos glicocorticóides (64,5%), no tratamento de doença mensurável, e evidenciou o impacto negativo no prognóstico, na ausência de resposta a esses fármacos. No estudo 2 (n = 149), foi avaliada a importância dos diferentes fatores prognósticos, com a proposta de uma modificação no estadiamento clínico preconizado pela Organização Mundial de Saúde, definição de novos valores de corte para o índice mitótico e percentual de Ki-67. O estudo 3 (n = 98) evidenciou o benefício da quimioterapia em dose maxima tolerada, no controle do mastocitoma de alto risco, enquanto o estudo 4 (n = 21), demonstrou elevada eficácia da radioterapia adjuvante no controle, a longo prazo, de mastocitomas de risco intermediário. Por fim, ficou demonstrada, no estudo 5 (n = 31), a eficácia dos inibidores tirosina-quinase em pacientes com risco elevado, no tratamento de doença mensurável, inoperável, mas também no cenário adjuvante, embora o uso de glicocorticóides e agentes antineoplásicos possa comprometer essa resposta. The objective of this thesis was to evaluate the effectiveness of prognostic factors and different therapeutic approaches towards canine mast cell tumour, considering its high incidence and heterogeneity in clinical presentation and biological behavior, representing a guideline for prognosis and treatment. It included dogs referred to the Veterinary Hospital (Universidade Federal de Minas Gerais, Brazil) and Queen's Veterinary School Hospital (University of Cambridge, United Kingdom), with histological diagnosis of mast cell tumour. Evaluated prognostic factors included clinical, histological, immunohistochemical and genetic features, resulting in five distinct studies. Study 1 (n = 62) demonstrated high response rate to glucocorticoids (64.5%) in the treatment of measurable disease, and showed a negative impact on prognosis in the absence of response to these drugs. In study 2 (n = 149), the importance of different prognostic factors was evaluated, with a proposal of a modification for the World Health Organization´s recommended clinical staging, definition of new cut-off values for mitotic index and Ki-67. Study 3 (n = 98) showed the benefit of chemotherapy at maximum tolerated dose, in the control of high-risk mast cell tumours, while the study 4 (n = 21) demonstrated a high efficacy of adjuvant radiotherapy in the long-term control, of mast cell tumours of intermediate risk. Finally, it was demonstrated in the study 5 (n = 31), the effectiveness of tyrosine kinase inhibitors in patients at high risk, in the treatment of gross, unresectable disease, but also in the adjuvant setting, although the use of glucocorticoids and antineoplastic agents may compromise such response.

Eletroquimioterapia é uma modalidade de tratamento local contra o câncer em que a administração de quimioterápicos não penetrantes à membrana plasmática é associada à aplicação de pulsos elétricos com parâmetros bem estabelecidos, que abrem poros na membrana plasmática e facilitam a entrada destes fármacos nas células, aumentando sua citotoxicidade e reduzindo efeitos colaterais. A avaliação dos efeitos da eletroquimioterapia sobre o desenvolvimento do tumor sólido de Ehrlich em camundongos Swiss neste trabalho teve como objetivo testar o uso in vivo do aparelho eletroporador desenvolvido pelo Departamento de Engenharia Elétrica da Escola de Engenharia da UFMG para, em procedimentos futuros, aplicar a técnica no Hospital Veterinário da Escola de Veterinária da UFMG. Para tanto, foram utilizados 40 camundongos fêmeas da linhagem Swiss, nos quais foram inoculadas células de tumor de Ehrlich, para o desenvolvimento do tumor na forma sólida. Após 21 dias, os camundongos foram submetidos ao protocolo de tratamento específico e 17 dias depois foram eutanasiados e seus tumores coletados para análise histopatológica. A eletroquimioterapia induziu perda de peso discreta e uma resposta inflamatória no tumor que não foi observada nos outros grupos. O grupo tratado com bleomicina apenas apresentou maior porcentagem de necrose. Ambos os grupos apresentaram menor índice de proliferação celular. A partir desse estudo pode-se concluir que o tratamento sob anestesia foi bem tolerado pelos animais e que o aparelho eletroporador desenvolvido pela Escola de Engenharia da UFMG é adequado para utilização em um protocolo de eletroquimioterapia Electrochemotherapy is a local anticancer treatment in which non-permeant chemotherapeutic drugs are associated with electric pulses of well-established parameters. The electric pulses cause pores to open on the plasma membrane and facilitate drug transport, enhancing cytotoxicity and reducing side effects. Assessment of electrochemotherapy effects on Ehrlich solid tumor development in this work aims to evaluate in vivo usage of the electroporator device developed by Electric Engineering Department of Escola de Engenharia of UFMG, so it can be used on future procedures on Hospital Veterinário of Escola de Veterinária of UFMG. Therefore, 40 Swiss mice were inoculated with Ehrlich tumor cells, and developed the tumor in solid form. After 21 days, mice were subjected to specific treatment protocols and 17 days later they were euthanized and the tumors collected for histopathology analysis. Electrochemotherapy induced discrete weight loss and an inflammatory response in the tumor, which was not seen on the other treatment groups. Bleomycin alone induced necrosis. Both groups showed lower cellular proliferation rates. From this study, it was concluded that the animals tolerated well electrochemotherapy treatment under anesthesia and the electroporator device developed by Escola de Engenharia of UFMG was adequate when used in an electrochemotherapy protocol.

Orientador : Profª. Drª. Tilde Rodrigues Froes Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Ciências Veterinárias. Defesa: Curitiba, 15/03/2016 Inclui referências : f. 34-46;59-60;76-79 Área de concentração : Ciências Veterinárias Resumo: O presente trabalho buscou contribuir com informações sobre a aplicabilidade do diagnóstico por imagem em cães e gatos com neoplasias, especialmente abordando a utilização da ultrassonografia como técnica de estadiamento e diagnóstico em animais com suspeita de câncer. O trabalho foi subdividido em três capítulos independentes. No primeiro capítulo foi apresentada uma breve revisão de literatura sobre a utilização das técnicas mais usuais de diagnóstico por imagem (radiografia simples e ultrassonografia) na oncologia de pequenos animais. O enfoque da revisão foi apresentar de forma aplicada como estas técnicas podem contribuir em todas as etapas da abordagem ao paciente com neoplasia, desde a triagem oncológica até o seguimento clínico após o tratamento. Desta forma, demonstrou-se uma sistemática de tomada de decisões na escolha do melhor método de imagem abordando contribuições e limitações da técnica durante a investigação das principais neoplasias de cães e gatos. O segundo capítulo discorre sobre a utilização da ultrassonografia intraoperatória em nove cães com suspeita de neoplasia intra-abdominal. Neste estudo, a performance da ultrassonografia durante o ato cirúrgico foi especialmente avaliada em pacientes com neoplasia hepática e esplênica, verificando-se que é possível a realização da técnica de ultrassonografia intraoperatória em cães de forma muito semelhante à realizada na medicina (em pessoas), evidenciando-se lesões que não podem ser visualizadas ou palpadas pelo cirurgião. No terceiro capítulo foram apresentados os resultados de um estudo retrospectivo sobre os achados ultrassonográficos abdominais no momento do diagnóstico clínico de neoplasia mamária em 201 cadelas. Neste trabalho, observou-se que 78% dos animais apresentaram alguma anormalidade ultrassonográfica abdominal, sendo baço, útero e fígado os órgãos com maior frequência de alterações. Ainda, verificou-se que a identificação ultrassonográfica de linfonodos intra-abdominais aumentados está associada com menor sobrevida e com a presença de metástase em linfonodo regional (inguinal ou axilar). Em associação, os três capítulos contribuíram com abordagens inéditas, e direcionadas à aplicabilidade na rotina clínica, do diagnóstico por imagem no paciente oncológico veterinário. Palavras-chave: cão, estadiamento, neoplasia hepática, neoplasia mamária, ultrassonografia Abstract: The goal of the present study was contribute with information about the applicability of diagnostic imaging in dogs and cats with tumors, particularly using the ultrasonographic exam for staging and diagnosis in animals with suspected cancer. Therefore, the study was divided into three independent chapters. In the first chapter was presented a brief reviewed about the main diagnosis imaging methods (simple radiographic and ultrasonographic) available in small animal oncology. The aim of the reviewed was to present the applicability of the radiographic and ultrasonographic methods in all times of the approach to the oncology patient, from the screening to the follow-up after the treatment. Thus, it was demonstrated the steps to making decisions in choosing the best imaging method, advantages and limitations during the investigation and treatment of the main tumors of dogs and cats. The second chapter discussed about intraoperative ultrasonography in nine dogs with intra-abdominal suspected tumor. The performance of ultrasonography during the surgical procedure was evaluated specially in dogs with hepatic and splenic neoplasms. It was observed that intraoperative ultrasonography in dogs is similar to that used in medicine, evidencing lesions non-palpable by the surgeon. In the third chapter were presented the results of a retrospective study concerning abdominal ultrasonographic changes in 201 female dogs with mammary tumor. In this study, it was observed that 78% of the dogs had some ultrasonographic abnormality. Spleen, uterus and liver were the organs with the highest frequency of changes. The ultrasonographic evidence of enlargement intra-abdominal lymph nodes was associated with regional metastasis and decreased survival after unilateral mastectomy. In association, all the three chapters contributed with new approaches targeted to the applicability of imaging diagnosis in clinical routine of the veterinary cancer patient. Keywords: dog, staging, hepatic tumor, mammary tumor, ultrasound

Made available in DSpace on 2016-04-01T17:55:20Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-11-20. Added 1 bitstream(s) on 2016-04-01T18:01:21Z : No. of bitstreams: 1 000860377.pdf: 2435020 bytes, checksum: 6715f67910c92671c2473b587aa60da5 (MD5) O tumor venéreo transmissível canino (CTVT) é um câncer transmissível que propaga-se, naturalmente, entre os cães pela transferência alogênica de células tumorais, principalmente, durante o coito. Trata-se da mais antiga linhagem tumoral conhecida na natureza e uma de suas características marcantes é a habilidade de se desenvolver e se evadir da rejeição imunológica, como enxerto alogênico, apesar da estrita e contínua vigilância do sistema imunológico. Há a hipótese de que as células do CTVT não expressam MHC-II, como um mecanismo de escape à detecção imune, e que a positividade detectada em muitas amostras tumorais possa ser atribuída à infiltração de células do hospedeiro no sítio do tumor. Objetivou-se avaliar a expressão gênica e proteica e a caracterização genotípica do loco DLADQA-1 (MHC-II) em tumores venéreos transmissíveis de ocorrência espontânea em cães. Adicionalmente, detectar a interação entre anticorpos séricos e antígenos tumorais específicos do CTVT. Para tanto, foram incluídos neste estudo 20 cães provenientes de São José do Rio Preto, São Paulo, Brasil, com CTVT de ocorrência natural. As amostras tumorais foram coletadas antes do tratamento quimioterápico (M1) e três semanas após o início da quimioterapia (M2). A análise de expressão gênica foi realizada pelo método de qPCR e de expressão proteica de CD3, CD79, MAC387, Ki67 e MHC-II, pelo método de imuno-histoquímica. Foi realizado sequenciamento por capilaridade para caracterização genotípica e estudo dos antígenos tumorais pela técnica de Western Blotting. Amostras de CTVT e de seus hospedeiros provenientes de outros países foram empregados para estudos comparativos. Foi observada diferença significativa de células imunomarcadas para MHC-II e CD3 entre M1 e M2 detectando-se maior expressão em M2. Não houve expressão gênica de DLADQA-1 em nenhuma amostra de CTVT em M1 e M2. O elevado grau de... The canine transmissible venereal tumor (CTVT) is a transmissible cancer that is spread between dogs by the allogeneic transfer of living cancer cells during coitus. It is the oldest cancer lineage known in nature and one of the most remarkable features of CTVT is its ability to develop and evade the immune rejection, as an allogeneic graft, despite the strict and continuous surveillance of the immune system. It has been hypothesized that CTVT cells do not express MHC-II as an escape mechanism to immune detection, and MHC-II positivity detected in tumor samples can be attributed to infiltrating host cell at the tumor site. The aims of this study were: evaluate gene and protein expression and genotypic characterization of DLADQA-1 locus (MHC-II) in spontaneous transmissible venereal tumours in dogs. Additionally, to detect the interaction between serum antibodies and specific tumor antigens of CTVT. For this, 20 dogs from São José do Rio Preto, São Paulo, Brazil with naturally occurring CTVT were included and samples were collected before chemotherapy (M1) and three weeks after starting chemotherapy (M2). The gene expression analysis was performed by qPCR method and protein expression of CD3, CD79, MAC387, Ki67 and MHC-II by immunohistochemistry method. Sequencing was performed by capillary method and the study of tumor antigens by the Western Blotting technique. CTVT samples and their hosts from other countries have been used for comparative studies. Significant differences were observed in MHC-II and CD3 immunostained cells between M1 and M2 with higher expression in M2. There was no gene expression of DLADQA-1 in any sample of CTVT in M1 and M2. The genotypic similarity between tumor samples, which differ from their respective hosts, is consistent with a clonal origin of this tumour. There was no significant difference between the genotypes of hosts and control dogs. The detection of two protein bands in different CTVT from Brazil ...

Made available in DSpace on 2016-07-01T13:10:27Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-08-13. Added 1 bitstream(s) on 2016-07-01T13:13:45Z : No. of bitstreams: 1 000866002.pdf: 1774918 bytes, checksum: 7a85fafd4477aa0f0f75ad8c323e976f (MD5) Os tumores mamários constituem a neoplasia mais comum das cadelas, sendo que mais da metade são consideradas malignas e com muitos animais apresentando morte associada à doença. Estes tumores geralmente são tratados cirurgicamente por meio de mastectomia, porém os resultados frequentemente não são satisfatórios. Visto que novas abordagens terapêuticas são necessárias nos tumores mamários caninos, especialmente no que diz respeito ao tratamento adjuvante e à terapia alvo, o conhecimento acerca de possíveis componentes relacionados com a resistência à fármacos e que funcionem como possíveis alvos moleculares para a terapia deve ser garantido. Em vista disso, o objetivo da pesquisa descrita nesta tese foi caracterizar o papel da família de receptores do fator de crescimento epidermal (EGFR) e da superfamília de transportadores ligadores de ATP (ABC) nos tumores mamários caninos como biomarcadores do câncer e sua relação com o desfecho da doença para caracterizar sua patobiologia. Neste estudo, os receptores tirosina cinase EGFR/HER1, HER2, HER3 e HER4, assim como as proteínas da família ABC glicoproteína-P/MDR1, MRP1 e MRP2 foram avaliadas por meio de imunoistoquímica, sendo os resultados relacionados com características clinicopatológicas em 43 tumores. A expressão simultânea de todos os membros da família e a coexpressão de EGFR/HER1, HER2 e HER4 se mostraram associadas com um desfecho desfavorável para a doença. A expressão de glicoproteína-P e MRP1 se apresentaram relacionadas com características clinicopatológicas nos tumores estudados, ao passo que a expressão de MRP1 foi caracterizada como um indicador prognóstico independente nestes tumores. Em síntese, esta tese fornece novas informações acerca da expressão da família EGFR nos tumores mamários caninos e associa os transportadores ABC com um desfecho desfavorável para a doença, consequentemente sugerindo que eles também podem estar... Mammary tumors comprise the most common neoplasms in female dogs with more than half with malignat characteristics. Such tumors are usually treated using surgical mastecty, but results are frequently not satisfying. Since new therapeutical approaches are needed in canine mammary tumors, especially regarding adjuvant therapy and targeted therapy, an understanding regarding possible cellular components related to drug resistance and that work as possible targets for therapy is straightforward to achieve. Accordingly, the aim of the research described in this thesis was to study the possible role of epidermal growth factor receptor family (EGFR) and ATP-binding cassete (ABC) superfamily members in canine mammary tumors as cancer biomarkers and its relation with disease outcome in order to better characterize their pathobiology looking forward the future improve in canine mammary cancer treatment. In this study, tyrosine kinase receptors EGFR/HER1, HER2, HER3, and HER4, as well ABC transporters P-glycoprotein/MDR1, MRP1, and MRP2 were immunohistochemically evaluated and results were related with clinicopathologic characteristics and overall survival in 43 tumors. Expression of all family members and simultaneous expression of EGFR/HER1, HER2, and HER4 were related with a poor disease outcome. P-glycoprotein and MRP1 expression showed to be related with clinicopathologic features and MRP1 was characterized as a independent prognostic indicator in such tumors. In summary, this thesis provides new information about EGFR family expression in canine mammary tumors and associates ABC transporters with a poor disease outcome, consequently suggesting that they may also be related to prognosis in patients with mammary cancer

Made available in DSpace on 2015-09-17T15:25:59Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-04-10. Added 1 bitstream(s) on 2015-09-17T15:46:17Z : No. of bitstreams: 1 000845406.pdf: 1146282 bytes, checksum: 60f04846ef59edc815960a1c18e29bf7 (MD5) A inflamação é um componente crítico para a progressão de tumores e sua malignidade está correlacionada com a resposta inflamatória induzida por citocinas e leucócitos infiltrados no sítio tumoral. O presente estudo teve por objetivo caracterizar, por imuno-histoquímica, o infiltrado inflamatório e citocinas pró e anti-inflamatórias nos carcinomas mamários caninos e determinar a identidade molecular dos tumores em luminal A ou B, C-erbb-2 ou basal. Para isso fez-se a imunodetecção de macrófagos, linfócitos (CD4, CD8, Treg), citocinas (MIF, IL-10, IL-4 e TGF-β e IFN-ɣ), além de C-erbb-2, receptor de estrógeno e receptor de progesterona e avaliou-se as médias das imunomarcações por meio do Teste T e análise de variância nos tecidos mamários com ou sem carcinomas. Houve diferença estatística (p

Made available in DSpace on 2016-01-13T13:27:52Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-01-26. Added 1 bitstream(s) on 2016-01-13T13:33:22Z : No. of bitstreams: 1 000856441.pdf: 618033 bytes, checksum: 7a27adb2d522a5bde6dd4aaa8ff06bed (MD5) Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) A doxorrubicina (DOX), quimioterápico da família das antraciclinas, é utilizada no tratamento de diversos tumores sólidos em animais e seres humanos, e é fármaco de segunda escolha para o tratamento, em cães, do tumor venéreo transmissível (TVT) resistente a outros quimioterápicos. Seu uso terapêutico é limitado em decorrência da cardiotoxicidade e mielossupressão, efeitos dose-dependentes. A cardiotoxicidade da DOX já foi constatada em cães hígidos, porém, o perfil farmacocinético e os efeitos tóxicos neste modelo animal submetido ao regime posológico para o tratamento do TVT ainda não foram investigados. Ainda, têm sido propostas novas formulações contendo o quimioterápico com o intuito de melhorar sua eficácia e diminuir a toxicidade. Este trabalho teve como objetivo investigar o perfil farmacocinético da DOX administrada na forma de cloridrato na dose de 30 mg/m2 a cada 21 dias, em quatro ciclos, por infusão contínua por 30 minutos, em cães com TVT (n=10) assim como avaliar efeitos tóxicos através de parâmetros bioquímicos, hematológicos e de urinálise de amostras colhidas antes e após a exposição ao quimioterápico. Ainda, neste trabalho, propôs-se avaliar o perfil farmacocinético e toxicidade sistêmica da DOX veiculada em sistema microemulsionado em cães com TVT tratados sob o mesmo regime posológico da DOX cloridrato. Para a investigação do perfil farmacocinético, em ambos os grupos, um método bioanalítico por cromatografia líquida de ultra eficiência (CLUE) para a determinação de DOX foi desenvolvido e validado. O método bioanalítico apresentou limites de confiança adequados para sua aplicação na investigação do perfil farmacocinético, com limite de quantificação (LIQ) de 19 ng/ml e limite de detecção (LD) de 9 ng/ml. Os parâmetros farmacocinéticos da DOX calculados a partir da administração da formulação... Doxorubicin (DOX), the anthracycline family of chemotherapy is used in the treatment of various solid tumors in animals and humans, and is a second-line drug for the treatment of dogs, transmissible venereal tumor (TVT) resistant to other chemotherapeutic agents. Its therapeutic use is limited due to cardiotoxicity and myelosuppression, dose-dependent effects. The cardiotoxicity of DOX has been observed in healthy dogs, however, the pharmacokinetics and toxicity in this animal model subjected to the dosing regimen for the treatment of TVT have not been investigated. Also, there have been proposed new formulations containing the drug with the aim to improve efficacy and decrease toxicity. This study aimed to investigate the pharmacokinetic profile of DOX administered as hydrochloride at a dose of 30 mg / m2 every 21 days, in four cycles, by continuous infusion for 30 minutes in dogs with TVT (n = 10) as well as assess toxic effects through biochemical, hematological and urinalysis samples taken before and after exposure to chemotherapy.Still, this work proposed to evaluate the pharmacokinetic profile and systemic toxicity of DOX conveyed in microemulsion system in dogs with TVT treated under the same dose of DOX hydrochloride regime. For the investigation of the pharmacokinetic profile in both groups, a bioanalytical method performance liquid chromatography ultra efficiency (CLUE) for determining DOX was developed and validated. The bioanalytical method was appropriate confidence limits for application in the investigation of the pharmacokinetic profile, with limit of quantitation (LLQ) of 19 ng / mL and detection limit (LLD) of 9 ng / ml. Pharmacokinetic parameters of DOX calculated from the administration of the hydrochloride formulation, the first and fourth treatment cycle were: elimination half-life 30.7 and 19.16 hours; volume of distribution 652.18 and 397.45 L/kg and ...

Orientador : Prof. Dr. Ricardo Guilherme D'Otaviano de Castro Vilani Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Ciências Veterinárias. Defesa: Curitiba, 29/07/2015 Inclui referências : f. 34-39;-57-60;80-82 Área de concentração : Ciências Veterinárias Resumo: Pacientes com neoplasias mamárias sofrem de dor tanto pela própria neoplasia quanto pelo seu tratamento cirúrgico, a mastectomia. A mastectomia é um procedimento cirúrgico bastante agressivo que frequentemente causa sensibilização central devido a estímulos repetidos aos nociceptores periféricos, levando, consequentemente, à dor neuropática. Tendo em vista maior conforto e qualidade na cirurgia e na recuperação destes pacientes, faz-se necessário o uso de um protocolo analgésico adequado ao nível de dor ao qual o paciente é submetido, considerando tanto a doença quanto o procedimento. Os opioides apresentam-se como uma boa alternativa, uma vez que apresentam potente atividade analgésica e estabilidade hemodinâmica durante a manutenção da anestesia, além de diminuírem a dose necessária de propofol para a manutenção. São escassos os estudos que envolvem a utilização de anestesia intravenosa total com propofol associada à infusão contínua de opioides bem como outras técnicas analgésicas para mastectomia em cães. Por isso, são necessários estudos que avaliem a eficácia analgésica destes opioides tanto no transoperatório como no pós-operatório e a sua influência no requerimento de propofol para a manutenção do plano anestésico, proporcionando alívio da dor aos animais e redução do volume de anestésico utilizado durante a cirurgia. Os opioides apresentam-se como uma boa alternativa, uma vez que apresentam potente atividade analgésica e estabilidade hemodinâmica durante a manutenção da anestesia, além de diminuírem a dose necessária de propofol para a manutenção. A pesquisa foi dividida em 2 etapas. A primeira avaliou e comparou a associação de fentanil, alfentanil, sufentanil e remifentanil com propofol em mastectomia unilateral em cães. A segunda avaliou e comparou a associação de fentanil, cetamina e lidocaína ou a peridural alta com ropivacaína e morfina com propofol em mastectomia unilateral em cães. Quando comparado com a infusão de fentanil, as infusões de sufentanil e alfentanil reduziram o requerimento de propofol. Sufentanil, alfentanil e remifentanil permitiram reduzir o requerimento de propofol precocemente, indicando a possibilidade da não realização de um bolus inicial. O remifentanil esteve associado a menores escores de dor durante as primeiras 24 horas após a cirurgia quando comparado ao fentanil e ao alfentanil. Palavras-chave: TIVA, dor, mastectomia, cão, analgesia. Abstract: Patients with breast cancer suffer from pain originated from neoplasia and for their surgical treatment, mastectomy. Mastectomy is a very aggressive surgical procedure that often causes central sensitization due to repeated stimuli to the peripheral nociceptors, leading consequently to neuropathic pain. Looking for comfort and quality during surgery and recovery of these patients, it is necessary to use an appropriate analgesic protocol considering the level of the pain which the patient is subjected, considering both disease and the procedure. Opioids are presented as a good alternative, since they have potent analgesic activity and hemodynamic stability during maintenance of anesthesia as well as they decrease the required dose of propofol for maintenance. There are few studies involving the use of total intravenous anesthesia with propofol associated with continuous infusion of opioid analgesics, as well as other analgesic techniques for mastectomy in dogs. Therefore, studies are needed to evaluate the analgesic effectiveness of opioids both during surgery and in the postoperative period and its influence on propofol requirement for the maintenance of anesthesia, providing pain relief and reducing the volume of anesthetic used during surgery. Opioids are presented as a good alternative, since they have potent analgesic activity and hemodynamic stability during maintenance of anesthesia as well as they decrease the required dose of propofol for maintenance. The research was divided into two stages. The first evaluated and compared the association of fentanyl, alfentanil, sufentanil and remifentanil with propofol for unilateral mastectomy in dogs. The second evaluated and compared the association of fentanyl, ketamine and lidocaine or high ropivacaine and morphine epidural with propofol for unilateral mastectomy in dogs. When compared with fentanyl infusion, the infusion of sufentanil and alfentanil reduced propofol application. Sufentanil, alfentanil and remifentanil have reduced the propofol requirement earlier, indicating the possibility of avoiding a loading dose. The remifentanil was associated with lower pain scores during the first 24 hours after surgery when compared to fentanyl and alfentanil. No difference was observed in the propofol requirement using cranial morphine ropivacaine epidural analgesia or continuous intravenous infusion of remifentanil, ketamine and lidocaine in dogs underwent mastectomy. However, the anesthetic recovery was faster and the application of analgesic rescues was lower when used intravenous technique. Keywords: TIVA, pain, mastectomy, dog, analgesy

Made available in DSpace on 2015-05-14T16:53:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-11-21Bitstream added on 2015-05-14T16:58:55Z : No. of bitstreams: 1 000827166.pdf: 2711198 bytes, checksum: 14a654bafad8ddebe5152c38e41bb114 (MD5) Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) Associação Ibero-Americana de Pós-grados (AUIP) O tumor venéreo transmissível – TVT é objeto de numerosas investigações, apesar disso, existem lacunas que necessitam estudos. Há TVTs com graus variados de agressividade, portanto, alguns não respondem aos protocolos terapêuticos convencionais. Dando a entender que há modificações progressivas do seu perfil biológico. Técnicas como cultura celular, citometria de fluxo e a biologia molecular oferecem subsídios para se identificar e quantificar essas modificações, inclusive predizer comportamento biológico de tumor. O objetivo foi quantificar a expressão dos genes BAX, BCL2, TP53 e MDR1 em células de TVT primário e in vitro antes e depois da vincristina, a fim de identificar modificações quanto à resistência a agressividade e o tratamento. Foram obtidas 18 amostras de TVT caninos, para se estabelecer 8 culturas primárias. Logo depois se realizou testes de citotoxicidade, sobrevivência, apoptose, curva de crescimento e análise de expressão dos genes BAX, BCL2, TP53 e MDR1. Quando se comparou as células de TVT tratadas com vincristina, com aquelas que não receberam o tratamento, houve diferença estatística em relação às taxas de citotoxicidade, sobrevivência, e fases do ciclo celular, G1, Sub G1 e S. Sobre a expressão do gene MDR-1 a mesma diferença foi observada quando se comparou grupos de células tratadas e não tratadas. Nessa situação, o que se espera encontrar seria a baixa expressão do gene TP53, entretanto, ocorreu o oposto, qual seja alta expressão do gene TP53. Nessa situação acredita-se que tenha ocorrido o mecanismo regulador de apoptose. Quanto aos genes BAX e BCL-2 não foram observadas diferença estatística entre os grupos. Nesse caso, parecer não ter ocorrido a regulação esperada, do BAX pelo TP53. Acredita-se que houve mutação do TP53. Dados pouco relatados em TVT. Apesar de dados iniciais, podem concluir que estão relacionados à malignidade do tumor e resistência a quimioterapia Transmissible venereal tumor - TVT has been subject of numerous investigations, despite this, there are gaps that need studies. There TVTs with varying degrees of aggressiveness, so some do not respond to conventional treatment protocols. Implying that there is progressive alteration of their biological profile. Techniques such as cell culture, flow cytometry and molecular biology offer subsidies to identify and quantify these changes, including predicting the biological behavior of the tumor. The objective was to quantify the gene expression BAX, BCL2, TP53 and MDR1 in primary TVT cells and in vitro before and after vincristine, in order to identify changes regarding the aggressiveness and resistance to therapy. 18 samples of TVT canines were obtained to establish 8 primary cultures. After was performed cytotoxicity tests, survival, apoptosis, growth curve and analysis of expression of genes BAX, BCL2, p53 and MDR1. When comparing the TVT cells treated with vincristine, with those who did not receive treatment, there was statistical difference in relation to cytotoxicity rates, survival, and cell cycle phases, G1, Sub G1 and S. About the MDR-1 gene expression, the same difference was observed when comparing cells treated and untreated groups. In this situation, what would be expected at the low expression of the TP53 gene, however, was the opposite, in other words high expression of TP53 gene. In this situation it is believed that there has been a regulatory mechanism of apoptosis. In BAX and BCL-2 genes were not observed statistical difference between the groups, in this case, appears to have not occurred the regulation expected of BAX by TP53. It is believed that there TP53 mutation. Data low reported on TVT. Although initial, data may conclude that are related to tumor malignancy and chemotherapy resistance FAPESP: 2012/19285-2

Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-09-12Bitstream added on 2015-04-09T12:47:37Z : No. of bitstreams: 1 000813963.pdf: 1487478 bytes, checksum: fb3becb720045d493ff87037feef8aaf (MD5) A pele exposta à luz UV sofre alteração nas funções e características morfológicas, isto influencia a produção local de citocinas e prejudica o reconhecimento e processamento de antígenos. A cronicidade a exposição solar na pele de cães com idades de oito a dez anos, de pelame curto e claro, com pouca pigmentação e glabra, usualmente evolui para ceratose actínica (CA) e culmina em carcinoma de células escamosas (CCE) cutâneo. Parte essencial do fenótipo maligno é a angiogênese, que tem como promotor o Fator de Crescimento do Endotélio Vascular (VEGF) que atua nas células endoteliais. Adicionalmente a angiogênese, o crescimento das células neoplásicas requer o aumento de proteínas da membrana celular envolvidas na nutrição, como o Transportador de Glicose 1 (GLUT 1), que é essencial para a sobrevivência e proliferação das células tumorais. Assim, se propôs investigar o valor do VEGF e do GLUT 1 na progressão tumoral empregando-se para isso pele de cães que apresentavam concomitantemente a CA (Grupo CA), CCE (Grupo CCE) e pele ausente de dermatopatias (Grupo Distante de lesões), comparando-as com a pele de cães sadios sem alterações histopatológicas (Grupo Controle); também avaliar se o tratamento com anti-inflamatórios não esteroidais (AINEs) poderia interferir nas marcações dos anticorpos, bem como avaliar se a intensidade dessas marcações diferia na pele de cães que apresentaram recidiva tumoral dos que não apresentaram. Para isso, foram selecionados 15 cães com lesões de CA e CCE e pele distante de lesões e outros 15 cães com peles normais. A intensidade da expressão do VEGF e do GLUT 1 foi investigada pelo uso da imuno-histoquímica e os resultados avaliados estatisticamente. Os Grupos CA e Distante das lesões apresentaram comportamento semelhante quanto à intensidade de marcação do VEGF; enquanto a intensidade do GLUT 1 foi semelhante nos Grupos CA e CCE. Nas amostras do grupo CA ... The skin exposed to UV light undergoes changes in morphology and function, this influences the local production of cytokines and impairs the antigen recognition and processing. The chronic sun exposure on the skin of dogs with ages of eight to ten years, short hair coat and clear, with little pigmentation and glabra, usually progresses to actinic keratosis (AK) and culminates in cutaneous squamous cell carcinoma (SCC). Essential part of the malignant phenotype is angiogenesis, which is the promoter Vascular Endothelial Growth Factor (VEGF) that plays on endothelial cells. Additionally angiogenesis, the growth of neoplastic cells requires increasing cell membrane proteins involved in nutrition, as the Glucose Transporter 1 (GLUT 1), which is essential for survival and proliferation of tumor cells. Thus, we proposed to investigate the value of VEGF and GLUT 1 in tumor progression employing for this skin of dogs concomitantly presented the AK (AK group), SCC (SCC Group) absent from skin diseases and skin (Lesions distant Group), comparing them with the skin of healthy dogs without histopathological changes (Control Group); also evaluate whether treatment with nonsteroidal anti-inflammatory drugs (NSAIDs) may interfere with markings of antibodies, as well as evaluating the intensity of these markings differed in the skin of dogs with tumor recurrence of which did not. For this, 15 dogs were selected with AK and SCC lesions and with lesions distant skin and 15 dogs with normal skin. The intensity of expression of GLUT 1 and VEGF was investigated by use of immunohistochemistry and the results were evaluated statistically. The AK and Lesions distant Groups showed similar behavior as the intensity staining of VEGF; while the intensity of GLUT 1 was similar in AK and SCC Groups. Samples from the AK Group who did not receive NSAIDs, VEGF showed higher intensity staining than the AK group receiving NSAID; already in dogs with tumor recurrence ...

Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-06-26Bitstream added on 2015-04-09T12:47:49Z : No. of bitstreams: 1 000814099.pdf: 1099789 bytes, checksum: 35da07dc8f564c92e438ab64715aa4f3 (MD5) O presente estudo buscou avaliar as alterações glomerulares e tubulares associadas com o carcinoma mamário em cadelas. Para tanto foram utilizadas 11 fêmeas caninas como controle e 32 com diagnóstico de carcinoma mamário, atendidas pelo Serviço de Oncologia e Obstetrícia do Hospital Veterinário “Governador Laudo Natel” da Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias - UNESP, câmpus de Jaboticabal, SP. O protocolo experimental incluiu a obtenção de histórico clínico e exames inerentes ao hemograma, bioquímica sérica, excreção fracionada de sódio, eletroforese de proteínas séricas e urinárias e pressão arterial sistêmica em conjunto da avaliação do tecido renal obtido por tru-cut logo após a realização da ováriohisterectomia (OH), os quais foram avaliados por microscopia de luz, imunofluorescência e microscopia eletrônica de transmissão. Vale ainda ressaltar que exames sorológicos, PCR e testes hormonais foram utilizados para exclusão/inclusão de animais nos seus respectivos grupos. O grupo carcinoma apresentou maior concentração de globulinas, haptoglobina e transferrina séricas, indicando provável estímulo e produção de substâncias provenientes do carcinoma mamário. A proteinúria associada a maior frequência no aparecimento de proteínas urinárias de baixo, médio e alto pesos moleculares e sua relação com as alterações da microscopia de luz evidência que existem tanto alterações glomerulares quanto tubulares. Ademais a associação desses achados ao depósito de diferentes classes de imunoglobulinas e complemento C3 (C3) na imunofluorescência renal, e a presença de depósitos eletrodensos subendoteliais no glomérulo confirmam a existência de importantes alterações renais relacionados ao carcinoma mamário em cadelas The present study evaluated the glomerular and tubular alterations associated with mammary carcinoma in bitches. Eleven animals was used for control and 32 bitches with diagnosis of mammary carcinoma was assisted by Oncology and Obstetrics Service of the Veterinary Teaching Hospital Governador Laudo Natel of Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias - UNESP, câmpus de Jaboticabal. The experimental protocol included obtaining clinical history and examination inherent to the blood count, serum biochemistry, urinary fractional excretion of sodium, electrophoresis of serum and urinary protein and blood pressure in combination with the evaluation of renal tissue obtained by tru-cut after the achievement of ovariohysterectomy (OH), which were evaluated by light, immunofluorescence and transmission electron microscopy (TEM). Serological tests, PCR and hormonal tests were used for animal’s exclusion or inclusion in their respective groups. Carcinoma group had higher concentration of globulins, haptoglobin and serum transferrin, indicating probable stimulation and production of substances from mammary carcinoma. Proteinuria associated with higher frequency of low, medium and high molecular weights of urinary proteins and their relationship with glomerular and tubular alterations evidenced by light microscopy and the association of these findings to the deposit of different classes of immunoglobulins and complement C3 (C3) in renal immunofluorescence, and the presence of subendothelial electron-deposits in the glomerulus might support the hypothesis of existence of renal alterations associated with mammary carcinoma

Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-06-20Bitstream added on 2015-04-09T12:47:47Z : No. of bitstreams: 1 000814346.pdf: 1337951 bytes, checksum: 9ed960afb83960e3296a726e4541f251 (MD5) A literatura cita que 1 a 5% dos casos de tumor venéreo transmissível (TVT) primário são metastáticos. Sendo assim, é importante estudar os mecanismos que colaborem para a invasão metastática assim como para sua implantação. Dentre estes mecanismos as metaloproteinases (MMP-2 e MMP-9) e seus inibidores (TIMP-1 e TIMP-2), assim como o ATM, COX-2, VEGF e CDH-1 podem explicar a implantação tumoral no sítio primário e a ocorrência da invasão metastática do TVT no cão. O objetivo do presente trabalho é avaliar a expressão gênica dos marcadores acima e correlacionar a sua expressão com o poder de implantação e invasão metastática no TVT. Para este estudo foram avaliadas 32 amostras tumorais, que foram congeladas e delas extraídos RNAm. Utilizou-se o método de qRT-PCR para todos os transcritos. Os resultados foram comparados com sangue periférico de 10 cães saudáveis (grupo controle) com o teste de Mann Whitney. A expressão gênica de MMP-2 e TIMP-1 foi significativamente maior do que o grupo controle (p < 0,001; p = 0,037; respetivamente). A expressão dos transcritos dos genes MMP-9 e TIMP-2 não apresentou diferença estatística entre o TVT e grupo controle (p = 0,535; p = 0, 906; respetivamente). A avaliação de expressão de transcritos do ATMapresentou aumento significativo (p < 0,0001) de sua expressão no tecido tumoral (TVT) quando comparado com o grupo controle, enquanto a expressão dos transcritos do gene TP53 não apresentou diferença estatística entre os grupos (p = 0,26). Na avaliação da COX-2, VEGF, CDH-1 foi verificado aumento significativo (p < 0,0001; p < 0,0001; p = 0,04, respectivamente) da expressão de transcritos dos genes no tecido tumoral (TVT) em relação ao grupo controle. A super-expressão de MMP-2 e o TIMP-1 pode explicar a capacidade de implantação das células tumorais assim como a maior expressão de VEGF e COX-2 pode explicar o crescimento rápido local do tumor e ... The literature reports that 1-5% of cases of primary trasmissible venereal tumor (TVT) are metastatic. Thus, it is interesting to study the mechanisms that collaborate to the metastatic invasion and implantation of TVT. Among these mechanisms, the metalloproetinases (MMP-2 and MMP-9) and their inhibitors (TIMP-1 and TIMP-2), as well as ATM, COX-2, VEGF and CDH-1 may explain the tumoral implantation in the primary site and metastatic invasion of TVT in dogs. The objectives of this study are to evaluate the gene expression of these markers and to correlate their expression with the high ability of deployment and metastatic invasion of TVT. For this study, 32 tumor samples were frozen and their mRNA were extract using the qRT-PCR method for all transcripts. The results were compared with peripheral blood of 10 healthy dogs (control group) using the Mann Whitney test. The expression of MMP-2 and TIMP-1 were significantly higher than the control group (p

Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-28Bitstream added on 2015-04-09T12:47:46Z : No. of bitstreams: 1 000813877.pdf: 1968360 bytes, checksum: ba893fb51a41ad4d26fafd388f7a43d2 (MD5) A via PI3K/AKT/mTOR está relacionada com a proliferação, síntese proteica, sobrevivência e motilidade das células. Mutações nesta via tem sido associadas com o processo carcinogênico de diferentes tipos tumorais. Atualmente, inibidores específicos de proteínas como a PI3K, AKT, mTOR, vem sendo testados com o intuito de otimizar a terapia antitumoral em seres humanos e animais. Além de potenciais alvos terapêuticos, o aumento da expressão de algumas destas proteínas tem sido associado a tumores de pior prognóstico em seres humanos. Em cães, o mastocitoma (MCT) é um tumor cutâneo extremamente comum, de comportamento bastante variável e etiologia ainda não esclarecida. Diante disso, o objetivo deste estudo, foi avaliar a imunomarcação dos componentes proteicos da via PI3K/AKT/mTOR, por meio da técnica de imuno-histoquímica e em um segundo momento, associar esses resultados com os parâmetros clínicos dos pacientes, com as características morfológicas e biológicas dos tumores e com o tempo de sobrevida dos pacientes, visando determinar possíveis marcadores prognósticos para esta neoplasia. Para tal 46 MCTs caninos foram utilizados. Todos os tumores apresentaram positividade na avaliação imuno-histoquímica para as proteínas analisadas. As proteínas p-AKT Thr 308 e p-S6K1 apresentaram forte intensidade de imunomarcação, quando comparadas a parâmetros associados a piores prognósticos. Esses resultados indicam que a forte intensidade de imunomarcação de p- AKT Thr 308 e p-S6K1 está relacionada a um pior prognóstico para os cães acometidos pelo MCT cutâneo The PI3K/AKT/mTOR pathway is related to proliferation, protein synthesis, cell motility and survival. Mutations in this pathway have been associated with the carcinogenic process in diferent tumor types. Currently, specific inhibitors of some proteins such as PI3K, AKT, mTOR, are being tested in order to optimize antitumor therapy in humans and animals. Apart from potential therapeutic targets, increased in immunostaining of some of these proteins have been associated with poorer prognostic in humans tumors. In dogs, mast cell tumor (MCT) is an extremely common skin tumor, which presents a highly variable behavior and unclear etiology. Therefore, the aim of this study was to evaluate the immunostaining of the protein components of PI3K/AKT/mTOR pathway, through the technique of immunohistochemistry, and in a second stage, correlate this results with clinical parameters of patients, with morphological and biological tumor characteristics and the survival time of patients to determine possible prognostic markers for this disease. For this, 46 canine MCTs were used. All tumors were positive in immunohistochemical analysis for the proteins analyzed. Proteins p-AKT Thr 308 and p-S6K1 showed increases in the intensity of immunostaining compared to parameters associated with worse prognosis. These results suggest that the increase in the intensity of immunostaining of p-AKT Thr 308 and p-S6K1 are related to a worse prognosis for dogs affected by cutaneous MCT

Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:18Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-27Bitstream added on 2015-04-09T12:47:46Z : No. of bitstreams: 1 000814081.pdf: 1987109 bytes, checksum: 47dd59d6b8353b90c284ba6c5e9f8b0a (MD5) A neoplasia mamária é o tumor mais frequente nas cadelas e seu comportamento biológico assemelha-se com o que ocorre nas mulheres, com isso as cadelas podem ser um excelente modelo natural para estudos em oncologia comparada. A descoberta de proteínas com valor preditivo é importante como alvos terapêuticos específicos para cada tipo de câncer. Os objetivos deste estudo foram avaliar a expressão gênica e proteica de COX-2 e c-KIT em mamas normais, lesões benignas, carcinomas mamários não metastáticos e carcinomas metastáticos de cadelas e correlacioná-las com as variáveis clínicas e epidemiológicas. Para tanto foram utilizadas 124 cadelas portadoras de lesões mamárias e 13 cadelas sem lesões mamárias. Foram formados quatro grupos: G1= mamas normais; G2 = lesões mamárias benignas; G3 = carcinomas mamários não metastáticos e G4= carcinomas mamários metastáticos. A análise de expressão gênica foi realizada pelo método de RT-qPCR e de imunomarcação pelo método de imuno-histoquímica. Foi verificada diferença no nível de transcritos do gene COX-2 nas mamas normais e nos carcinomas metastáticos (p < 0,05) quando comparado com as amostras dos quatro grupos. Na análise do c-KIT não foi verificada diferença estatística do nível de transcritos entre os quatro grupos. Na imunomarcação, quando avaliado o escore final dos grupos na expressão de COX-2 e c-KIT foi observada diferença significativa entre os grupos com p=0,0002 e p=0,0003, respectivamente. A alta expressão de c-KIT ocorreu principalmente nas mamas normais, havendo uma diminuição da expressão do c-KIT com o aumento da malignidade do tecido. O contrário foi observado para a imunomarcação da COX-2 visto que a expressão aumentou com a malignidade do tecido. O marcador COX-2 pode ser um bom indicador prognóstico e preditivo nas neoplasias mamárias de cadelas, porém o c-KIT não pode ser utilizado como marcador independente Mammary tumors is the most frequent neoplasm in bitches and its biological behavior is similar to those that occur in womens, making bitches an excellent model to comparative studies. Discovery of proteins with predictive value is important to determine specifi therapeutic targets for each tumor type. The aims of this study were to evaluate gene and protein expression of COX-2 and c-KIT in normal mammary glands, benign lesions and mammary carcinomas with and without metastasis to correlate then with clinical and epidemiological variables. To this, were used 124 bitches with mammary lesions and also 13 bitches with no history of mammary tumors. Four groups were formed: G1 = normal mammary glands; G2= benign lesions; G3= non-metastatic mammary carcinomas and G4= metastatic mammary carcinomas. Gene expression analysis was conducted by RT-qPCR method and protein expression was assessed by immunohistochemistry. Difference on transcripts COX-2 level was observed in normal mammary glands and metastatic carcinomas (p

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-06-26Bitstream added on 2014-06-13T20:44:53Z : No. of bitstreams: 1 vieira_mc_dr_jabo_parcial.pdf: 230581 bytes, checksum: 370cbb0fd08855627320be1ca3cf4cf1 (MD5) Bitstreams deleted on 2014-08-22T14:57:12Z: vieira_mc_dr_jabo_parcial.pdf,Bitstream added on 2014-08-22T15:02:12Z : No. of bitstreams: 1 000722350.pdf: 831666 bytes, checksum: 908bc0e88d23bbb61b91491924d7841a (MD5) O linfoma é o tumor de tecido hemolinfopoiético mais comum nos cães e um dos tumores malignos de maior ocorrência na referida espécie. Um importante complemento ao seu diagnóstico é a investigação imunofenotípica da subpopulação de linfócitos envolvida e caracterização do subestádio do tumor, estabelecida pela Organização Mundial de Saúde (OMS). Adicionalmente a avaliação das proteínas séricas em cães com neoplasias, poderia auxiliar o diagnóstico, prognóstico e monitoramento da doença. Inflamações, infecções, doenças imunológicas e neoplasias, podem estimular a resposta de fase aguda (RFA), que inclui alterações nas concentrações de determinadas proteínas, chamadas proteínas de fase aguda (PFA). A avaliação das PFA em cães com linfoma poderia auxiliar o diagnóstico, prognóstico e monitoramento da doença. Este ensaio foi concebido para avaliar as proteínas séricas totais e suas frações, através da técnica de SDS-PAGE, correlacionando-as aos fatores prognósticos do linfoma canino, tais como imunofenotipagem dos linfócitos, resposta ao tratamento e estadiamento clínico da doença. Para tanto, foram avaliados 30 cães, machos ou fêmeas, sendo 10 hígidos e 20 acometidos por linfoma multicêntrico, atendidos junto ao Hospital Veterinário “Governador Laudo Natel” da FCAV/UNESP, Campus de Jaboticabal/SP. Os animais foram distribuídos em três grupos, sendo um grupo controle (GC) constituído de cães hígidos (n=10), um grupo de cães acometidos por linfoma B (GLB) (n=12) e um grupo de cães acometidos por linfoma T (GLT) (n=8). Os animais foram avaliados em três diferentes momentos: M0 (diagnóstico), M5 (5ª semana de quimioterapia) e MR (recidiva da doença). As proteínas séricas totais e suas frações não apresentaram correlação com a imunofenotipagem, nem com a resposta ao tratamento, nos... Lymphoma is the tumor of hematolymphopoietic tissue most common in dogs and one of the most frequent malignant tumors in that specie. An important adjunct in diagnosis is to investigate the subpopulation involved and the immunophenotypic characterization of the tumor subtype stated by the World Health Organization (WHO). In addition, the valuation of serum proteins in dogs with cancer, could aid in the diagnosis, prognosis and monitoring of disease. Inflammations, infections, autoimmune diseases and cancers, can stimulate acute phase response, including abnormal levels of certain proteins called acute phase proteins (APP). This trial was designed to evaluate the serum total protein and its fractions by SDS-PAGE technique, and relate if to prognostic factors in canine lymphoma, such as immunophenotyping of lymphocyte, clinical stage of disease and response to treatment. Therefore, we evaluated 30 dogs, males or females, being 10 healthy and 20 affected by multicentric lymphoma, treated with the Veterinary Hospital Governor Laudo Natel, FCAV / UNESP, Jaboticabal / SP. The animals were divided into three groups, one control group (GC) formed by healthy dogs (n = 10), a group of dogs with B lymphoma (GLB) (n = 12) and a group of dogs with T lymphoma (GLT) (n = 8). The animals were evaluated at three different moments: M0 (at diagnosis), M5 (5th week of chemotherapy) and MR (disease recurrence). Serum total proteins and its fractions did not correlate with immunophenotype, or the response to treatment in dogs with lymphoma. Albumin correlated with staging and clinical substaging lymphoma. Some APP were more elevated in the GLB and others in the GLT, therefore these proteins showed significant... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-05-24Bitstream added on 2014-06-13T20:36:38Z : No. of bitstreams: 1 castanheira_tll_me_jabo.pdf: 1011727 bytes, checksum: 6802e0d2b98dfe51ff07bd14ac18d497 (MD5) O microambiente do tecido mamário é regido desde o seu desenvolvimento embrionário por uma complexa rede de citocinas, como o TNF-, o IFN-, a IL-4 e a IL-10, e de componentes celulares. O desequilíbrio entre a resposta destas citocinas e a presença de células inflamatórias como macrófagos e linfócitos T estão correlacionados com a malignidade dos tumores de mama em mulheres, auxiliando na progressão e metastatização dos carcinomas mamários. O objetivo deste estudo foi caracterizar a malignidade dos tumores de mama na espécie canina, por meio da expressão destas citocinas pela técnica quantitativa de RT-PCR em tempo real e da densidade de células inflamatórias pela técnica de imuno-histoquímica. A expressão das citocinas e a densidade do infiltrado inflamatório foram comparadas em cada um dos grupos experimentais, através de análise de variância, utilizando-se como teste de comparação de médias, contrastes ortogonais, com nível de significância de 5%. O coeficiente de correlação de Spearman foi empregado para a análise de correlação entre as variáveis das citocinas, leucócitos e outros dados secundários. As maiores expressões de TNF-, IL-4 e IL-10 e a presença de macrófagos e linfócitos T ocorreram nos carcinomas mamários, demonstrando que este conjunto de citocinas e células inflamatórias quando presentes no microambiente tumoral favorecem a progressão e malignização tumoral The microenvironment of the breast tissue is governed since his embrionary development by a complex cytokine network including TNF-, IFN-, IL-4 and IL-10, and cellular components. The imbalance between the response of these cytokines and inflammatory cells such as macrophages and lymphocytes had been correlated with the malignancy of breast tumors in women aiding in the progression and metastasis of breast carcinomas. The aim of this study was to characterize the malignancy of breast tumors in dogs through the expression of these cytokines by the technique of quantitative real time RT-PCR and the density of the inflammatory cells in canine mammary tissues by immunohistochemistry. The cytokine expression and density of inflammatory infiltrate were compared in each experimental groups, using analysis of variance, taking as tests of comparison of means, orthogonal contrasts, with a significance level of 5%. The Spearman rank correlation coefficient was used to analyze the correlation between the variables of cytokines, leukocyte, and others secondary data. The highest expression of TNF-, IL-4 and IL-10 and the presence of macrophages and T lymphocytes occurred in breast carcinomas, demonstrating that this set of cytokines and inflammatory cells present in the tumor microenvironment can promote tumor progression, and malignancy

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:42Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-28Bitstream added on 2014-06-13T18:51:08Z : No. of bitstreams: 1 semolin_lms_me_jabo.pdf: 459480 bytes, checksum: a04688b37ebdfeff1509f159e7641c20 (MD5) O linfoma é uma doença linfoproliferativa caracterizada pela multiplicação clonal de linfócitos malignos no seio dos órgãos linfóides, afetando principalmente os linfonodos, ou outros órgãos viscerais sólidos, com prognóstico dependente de vários fatores, incluindo invasão tecidual. Enzimas proteolíticas MMP-2 e MMP-9 estão sendo estudadas quanto à importância neste processo de progressão tumoral por propiciarem a penetração e infiltração celular. Considerando a importância atual destas enzimas e o papel ainda não fundamentado nas neoplasias hematopoiéticas, avaliou-se a expressão de MMP-2 e MMP-9 em cães acometidos por linfoma multicêntrico e cães hígidos, através de técnica imuno-histoquimica de linfonodo e eletroforese zimográfica de linfonodo e soro, estabelecendo a relação entre a expressão destas enzimas e os fatores prognósticos como estadiamento, imunofenotipo e grau histopatológico da neoplasia e resposta ao tratamento. Observou-se maior expressão tecidual de MMP-9 nos animais com linfoma, através de técnica imuno-histoquimica, sem correlação exata com prognóstico. Eletroforese zimográfica do linfonodo demonstrou correlação da MMP-9 com imunofenótipo T e animais em doença progressiva, inferindo possível prognóstico negativo quanto à sobrevida. Valores de MMP-2 não apresentaram relação clara com o processo tumoral, assim como os valores séricos das duas enzimas. Desta forma, a MMP-9 demonstrou participação no processo neoplásico, porém sem determinação prognóstica exata Lymphoma is a lymphoproliferative disease characterized by clonal proliferation of malignant lymphocytes within lymphoid organs, mainly affecting the lymph nodes, or other solid visceral organs, with prognosis depends on several factors, including tissue invasion. Proteolytic enzymes MMP-2 and MMP-9 have been studied as to the importance of tumor progression in this process by propitiate the penetration and cellular infiltration. Considering the current importance of these enzymes and the role not grounded in hematopoietic malignancies, we evaluated the expression of MMP-2 and MMP-9 in dogs affected by multicentric lymphoma and healthy dogs by immunohistochemistry technique of lymph node and zymography electrophoresis of lymph node and serum, establishing the relationship between the expression of these enzymes and prognostic factors such as tumor staging, immunophenotyping, histological grade and response to treatment. We observed increased expression of MMP-9 tissue in animals with lymphoma by immunohistochemistry technique, no exact correlation with prognosis. Zymography electrophoresis of lymph node demonstrated correlation of MMP-9 with T-cell phenotype and progressive disease, inferring possible negative prognosis regarding survival. Values of MMP-2 showed no clear relation with the tumoral process as well as serum levels of the two enzymes. Thus, MMP-9 demonstrated involvement in the neoplastic process, but without accurate prognostic determination

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:42Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-22Bitstream added on 2014-06-13T19:50:43Z : No. of bitstreams: 1 varallo_gr_me_jabo.pdf: 706691 bytes, checksum: 794ec257eb79d62a52eb6aa5fd7bb36d (MD5) A glândula mamária é o sítio neoplásico primário mais frequente em cadelas. A apresentação clássica da doença é caracterizada por pacientes idosas não castradas ou castradas tardiamente e com múltiplas nodulações. O diagnóstico definitivo das lesões é dado pelo exame histopatológico. Nos dias atuais, especialmente em oncologia veterinária, a determinação precoce de um estado neoplásico pode alterar o curso da doença. Nesse âmbito, a citologia com agulha fina possui grande valia, pois permite a diferenciação entre processos inflamatórios, formações neoplásicas benignas e malignas de forma rápida, precisa e segura. Entretanto, a aplicação nos tumores mamários, em medicina veterinária, possui inúmeras controvérsias, em virtude da diversidade histológica. O presente estudo teve como objetivo comparar os exames citológicos e histopatológicos em cadelas e, assim, avaliar a acurácia da citologia por capilaridade com agulha de insulina nas lesões neoplásicas de mama. Para tanto, estudou-se 69 lesões mamárias obtidas de pacientes atendidas no Setor de Oncologia Veterinária da Unesp, Câmpus de Jaboticabal, e no Instituto Veterinário Dr. Daleck. A punção por capilaridade foi realizada em quatro áreas diferentes do tumor com agulhas de insulina. Os esfregaços citológicos foram corados com May Grünwald Giemsa. Já os fragmentos tumorais colhidos para o exame histopatológico foram fixados imediatamente em formol tamponado a 10% durante 48 horas e, após o processamento, foram corados com hematoxilina - eosina e classificados segundo Cassali et al., 2011. Os resultados obtidos revelaram 83,9% de sensibilidade, 100% de especificidade, 100% de valor preditivo positivo (VPP), 9,1 % de valor preditivo negativo (VPN) e 84,1% de acurácia da técnica citológica em detectar neoplasias mamárias malignas. A citologia por... The mammary gland is the most common primary neoplasm site in female dogs. The classic presentation of the disease is characterized by elderly patients not spayed or later neutered with multiple nodules. Definitive diagnosis of lesions is given by histopathological examination. Nowadays, especially in veterinary oncology, the early detection of a neoplastic state can alter the course of disease. In this context, fine-needle cytology has great value because it allows differentiation between inflammatory processes, benign and malignant neoplastic formations quickly, accurately and safely. However, the application mammary tumors in veterinary medicine has several controversies, due to the diverse histology. The present study aimed to compare the cytological and histological bitches and thus evaluate the accuracy of cytology by capillarity with insulin needle in neoplastic lesions of the mammary glands. Therefore, we studied 69 breast lesions obtained from patients treated at the Service of Oncology Veterinary, Unesp Jaboticabal, and Veterinary Institute Dr. Daleck. The capillary puncture was performed in four different areas of the tumor with insulin needles. The cytology smears were stained with May Grünwald Giemsa. Already tumor fragments harvested for histologic examination were fixed immediately in 10% buffered formalin for 48 hours and, after processing, were stained with hematoxylin - eosin and classified according Cassali et al., 2011. The results showed 83.9% sensitivity, 100% specificity, 100% positive predictive value (PPV), 9.1% negative predictive value (NPV) of 84.1% and accuracy of cytological technique to detect cancers malignant breast. Cytology by capillarity with insulin needle, in this test, proved to be a superior technique to aspiration for diagnosis of malignant mammary gland tumors in female dogs because it allowed... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:45Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-18Bitstream added on 2014-06-13T20:51:02Z : No. of bitstreams: 1 raposo_tmm_me_jabo.pdf: 892758 bytes, checksum: 10e4c41a76227a07c380bb667b45bc74 (MD5) O tumor de mama é o principal tumor que acomete as cadelas e seu comportamento biológico se assemelha com o que ocorre nas mulheres; com isso as cadelas podem ser um excelente modelo comparativo para o estudo do processo carcinogênico desta neoplasia. A metástase é uma consequência comum e a principal causa de mortalidade por esta doença. A identificação de marcadores tumorais pode ser uma ferramenta útil para a determinação do prognóstico pelo câncer de mama. Assim, os objetivos deste estudo foram avaliar a expressão gênica e proteica do ATM, p53 e VEGF na glândula mamária de cadelas e tentar correlacioná-las com a evolução tumoral e possível envolvimento metastático. Com isso foram utilizadas 53 amostras de glândula mamária de cadelas divididas em quatro grupos: G1= mamas normais, G2 = lesões mamárias benignas, G3 = carcinomas mamários não metastáticos e G4 = carcinomas mamários metastáticos. A análise de expressão gênica foi realizada pelo método de RT-qPCR e de expressão proteica pelo método de imuno-histoquímica. Baixa regulação de transcritos do ATM foi observada entre as neoplasias e as mamas normais, além da diminuição de níveis proteicos, sendo esta diminuição maior no grupo 4 quando comparado com o grupo 1. Os transcritos de TP53 e VEGF não apresentaram diferença estatística entre os grupos analisados. Entretanto, verificou-se diminuição proteica da p53 e aumento da proteína VEGF nos carcinomas mamários metastáticos em comparação com a mama normal. As expressões gênica e proteica do ATM apresentaram comportamento semelhante ao observado em mulheres, assim, o processo de desenvolvimento de metástase do carcinoma mamário pode ser semelhante em ambas as espécies. O aumento da expressão proteica do VEGF e a diminuição do ATM estavam principalmente relacionados com... Canine mammary tumor is the major tumor that affects bitches and their biological behavior is similar to what occurs in women, so bitches can be an excellent comparative model for the study of the carcinogenic process in this type of neoplasm. Metastasis is a common consequence and the major cause of death by the tumor. Identification of tumor markers can be a useful tool for determining the prognosis of mammary gland cancer. So, the objectives of this study were to evaluate ATM, p53, and VEGF gene and protein expression in canine mammary tissues and try to correlate them with tumor development and metastatic involvement potential. Therefore 53 bitches mammary gland tissue samples were used divided in four groups: G1 = normal mammary glands, G2: benign mammary lesions, G3 = non-metastatic mammary gland carcinomas and G4 = metastatic mammary gland carcinomas. Gene expression analysis was performed by RT-qPCR and protein expression by immunohistochemistry. Down-regulation of ATM transcripts was observed between tumor tissue and normal mammary gland and protein levels were also reduced, it was mainly observed in group 4 when compared to group 1. TP53 and VEGF markers did not show statistical difference in gene expression among the groups. However, it was observed lower level of p53 protein in malignant tumors and higher level of VEGF protein in tumor tissues. ATM showed similar behavior when compared to women, so tumorigenesis process of breast cancer may be similar in both species. The increase in VEGF protein expression and ATM decrease were mainly related in poor prognosis tumors... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:45Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-18Bitstream added on 2014-06-13T20:11:35Z : No. of bitstreams: 1 jark_pc_me_jabo.pdf: 485119 bytes, checksum: 92130707f3de0df30e2b62db8d3bbcfb (MD5) O mastocitoma é a neoplasia cutânea de maior incidência nos cães e embora existam diversos fatores prognósticos, o comportamento clínico e biológico altamente variável desta neoplasia, faz como que a previsão da evolução e a escolha do melhor tratamento a ser utilizado sejam ainda um desafio. Desta forma, a utilização de técnicas moleculares que avaliam uma grande quantidade de genes envolvidos no processo neoplásico, pode ser uma ferramenta importante na determinação do prognóstico e até mesmo na eleição de genes candidatos a terapia alvo molecular. Uma das formas de se identificar os genes associados ao desenvolvimento ou a progressão tumoral é a investigação das alterações numéricas e estruturais em DNA isolado de células neoplásicas através da técnica de CGHarray (hibridação genômica comparativa baseada em arrays). Este estudo foi delineado com o objetivo de comparar as alterações do número de cópias gênômicas (ganhos/perdas) em mastocitomas cutâneos caninos de animais que sobreviveram um período menor que seis meses (SV12). Para isto foram selecionados 10 cães com mastocitoma cutâneo. A técnica de CGHarray foi utilizada em 4 mastocitomas do grupo SV>12 e em 6 do grupo SV12 apresentaram média de CNA de 11,25, enquanto que os tumores do grupo SV 12). For this, 10 animals were selected. The CGH array technique was used in 4 mast cell tumor from group SV> 12 and six animals from group SV 12 present an average of 11.25 CNA while the SV 12 show 24 genes with copy number gain and there were no loss in this group. The mast cell tumors with a worse... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-01-25Bitstream added on 2014-06-13T19:23:20Z : No. of bitstreams: 1 bezerril_je_dr_jabo.pdf: 759171 bytes, checksum: 619eba0d2ebb51754f4c7541da07b6e7 (MD5) Os tumores mamários representam aproximadamente 52%, de todas as neoplasias observadas em cadelas. Lecitinas são proteínas naturais de origem não imune, que se ligam a carboidratos. Por existir um grande número de lecitinas com capacidade de ligação com diferentes carboidratos, esta versátil molécula tem sido utilizada em diversos segmentos da pesquisa biológica. O presente trabalho tem por objetivo investigar, em tecido mamário canino, receptores das lecitinas UEA - Ulex europaeus (carqueja), PNA - Arachis hypogaea (amendoim), HPA - Helix pomatia (caracol romano) e DBA - Dolichos biflorus (faveira) presentes em tecido mamário normal, em neoplasias mamárias e em metástases dessas neoplasias. Para tanto, foram utilizadas 125 amostras de mama, classificadas de acordo com Cassali et al., (2011). Para a quantificação da frequência da marcação foram aleatoriamente selecionados quatro campos por corte e estabelecido um valor para o percentual de células marcadas, utilizando-se objetiva de 40x. Os resultados foram submetidos às análises de variância e à comparação de médias pelo teste de Tukey (p

A cirurgia é o tratamento de escolha no controle regional das neoplasias mamárias da cadela. Inúmeras técnicas cirúrgicas podem ser utilizadas, contanto que se respeite a anatomia da glândula mamária, as drenagens linfáticas conhecidas e os fatores prognósticos já descritos na literatura. O estudo dos aspectos relacionados ao pós-operatório dos pacientes submetidos à mastectomia regional e radical, neste trabalho, tem como objetivo demonstrar as desvantagens clínicas conferidas ao paciente, quando técnicas cirúrgicas agressivas são realizadas com intenção profilática. Para tanto, dezoito cadelas foram devidamente selecionadas para cada técnica cirúrgica. Os pacientes foram avaliados quanto a dor (nocicepção) pós-cirúrgica, alterações hematológicas, complicações pós-operatórias e impacto na qualidade de vida. Além de ter sido submetido a um maior tempo cirúrgico, o grupo tratado com a mastectomia radical apresentou alterações fisiológicas mais intensas e pontuações superiores nas escalas de nocicepção, sendo observado maior ocorrência de complicações pós-operatórias e maior impacto na qualidade de vida. A partir desse estudo foi possível concluir que, uma vez que não existem informações suficientes que apontem um maior risco para o desenvolvimento de novas lesões malignas em cadelas com histórico de câncer de mama, os tumores mamários devem ser tratados com o procedimento cirúrgico mais simples, necessário para a remoção completa da lesão e do tecido linfático associado, priorizando assim a recuperação pós-operatória e a qualidade de vida do paciente. Surgery is the treatment of choice in regional control of mammary neoplasms in female dogs. Numerous surgical techniques may be used, as long they respect the anatomy of the mammary gland of the bitch, the lymphatic drainage and the known prognostic factors previously described in the literature. In this work, the study of the aspects related to postoperative of patients that underwent radical and regional mastectomy, aims to demonstrate the clinical disadvantages conferred to the patient when aggressive surgical techniques are performed with prophylactic intent. Therefore, eighteen dogs were properly selected for each technique. Patients were evaluated for pos-surgical pain (nociception), hematological, postoperative complications and impact on quality of life. Besides being subjected to a longer surgical time, the group treated with radical mastectomy showed more intense physiological changes and higher scores on scales of nociception, being observed higher incidence of postoperative complications and greater impact on quality of life. From this study it was concluded that, since there are not sufficient data that suggested an increased risk for the development of new malignant lesions in dogs with a history of breast cancer, mammary tumors should be treated with the simplest surgical procedure necessary for the complete removal of the tumor and associated lymphoid tissue, thereby furthering the postoperative recovery and quality of life of the patient.

Orientador : Prof. Dr. Peterson Triches Dornbusch Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Ciencias Veterinárias. Defesa: Curitiba, 18/02/2013 Bibliografias : fls. 19-25, 64-67 Resumo: O tumor de mama é uma das neoplasias mais frequentes em cadelas. Os estudos sobre essa enfermidade tem aumentado devido sua alta incidência e por apresentar grandes similaridades aos tumores de mama em mulheres. O diagnóstico precoce do tumor primário e de possíveis metástases é a chave do sucesso na terapia e melhora do prognóstico dos pacientes. Essa dissertação compreende três estudos sobre exames auxiliares no diagnóstico e estadiamento do tumor de mama em cadelas. O primeiro estudo é uma revisão de literatura que aborda os exames que podem ser utilizados desde o diagnóstico do tumor primário, até identificação de metástases à distância. Sendo descrito as principais características, vantagens e acessibilidade de cada ferramenta diagnóstica na veterinária, comparando o uso dessas ferramentas em mulheres com tumor de mama. No segundo estudo o lavado broncoalveolar é proposto como ferramenta auxiliar na pesquisa de metástases pulmonares, sendo realizada a diferenciação celular entre grupos de animais saudáveis e com tumor de mama e relacionados os resultados citológicos do lavado broncoalveolar com as alterações radiográficas torácicas encontradas. O terceiro estudo procura avaliar a o uso da termografia infravermelha tanto em mamas hígidas como em mamas com neoplasia e verificar sua aplicabilidade na rotina clínica veterinária. Os três artigos foram formatados segundo as normas da Revista Archives of Science Veterinary da Universidade Federal do Paraná. Abstract: The mammary tumor is one of the most common neoplastic diseases in bitches. Studies about this subject have increased due to its high incidence and to have many similarities to breast tumors in women. Early diagnosis of the primary tumor and possible metastases is the key of success in the therapy and to improve the prognosis of the patients. This dissertation consists of three studies about ancillary tests in the diagnosis and staging of mammary cancer in female dogs. The first study is a literature review that discusses the tests that can be used from diagnosis of the primary tumor, to identify distant metastases. Have been described the main features, benefits and accessibility of each diagnostic tool in veterinary medicine, comparing the use of these tools in women with breast cancer. In the second study bronchoalveolar lavage is proposed as an auxiliary tool in the research of lung metastasis, cell differentiation have been done between groups (healthy and breast tumor) and related the results of bronchoalveolar lavage cytology with chest radiographic changes found. The third study evaluates the use of infrared thermography in both healthy mammary tissue and in mammary cancer, to evaluate its applicability in clinical routine. All three papers were written according to the Archives of Veterinary Science Journal of the Federal University of Paraná norms.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:07Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-07-30Bitstream added on 2014-06-13T19:06:33Z : No. of bitstreams: 1 lopes_ra_dr_botfmvz.pdf: 300433 bytes, checksum: c6f07cc6185e02ec7e9c62d7c9a101a7 (MD5) Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) O presente trabalho tem por objetivos identificar a expressão dos genes supressores de tumor TP53 e p63, dos genes Bax e PUMA e dos marcadores da apoptose Caspase-2, Caspase-3, Bcl-2 e Anexina-V em tumores de anexos oculares espontâneos em cães. Foram utilizadas 20 casos de tumores dos anexos oculares no período de 1998 a 2009 de dois arquivos dos Serviços de Patologia Veterinária da UNESP campus de Araçatuba, e UNESP campus de Jaboticabal.Os cortes foram obtidos a partir dos blocos de parafina e submetidos à análise anatomopatológica e imunoistoquímica. Do total de 20 amostras foram diagnosticados 13 casos de carcinoma de células escamosas, 3 casos de carcinoma sebáceo, 2 caso de carcinoma basocelular e 2 casos de adenoma sebáceo. Todos as amostras apresentaram imunomarcação para as proteínas TP53 e p63, caspase 2, Bcl2, e Bax. Nas amostras com diagnóstico de neoplasia maligna com melhor diferenciação a imunomarcação é mais acentuada para estes marcadores os marcadores This aim of this study is to identify the expression of the tumor suppressor genes TP53 and p63, genes Bax and PUMA and apoptosis markers Caspase-2, Caspase-3, Bcl-2 and Annexin-V in spontaneous tumors in ocular adnexa dogs. 20 cases of tumors of the ocular adnexa in the period 1998 to 2009 were used of two files of the Veterinary Pathology of UNESP campus Araçatuba and UNESP campus Jaboticabal. The sections were obtained from the paraffin embedded and subjected to histopathological analysis and immunohistochemistry. From those 20 samples, were diagnosed 13 cases of squamous cell carcinoma, 3 cases of sebaceous carcinoma, 2 cases of basal cell carcinoma and 2 cases of sebaceous adenoma. All samples showed immunostaining for proteins P53 and P63, caspase 2, Bcl2, and Bax. In samples with a diagnosis of malignancy with better differentiation is more pronounced immunostaining for these markers markers

Os objetivos desse trabalho foram determinar a prevalência em cães dos tumores cutâneos, relacionar o tipo histológico com a localização anatômica e utilizar a imuno-histoquímica (IHQ) para diferenciação dos tumores de células redondas. Foi avaliada a expressão do CD117 nos mastocitomas comparando-a com os graus histológicos nos mastocitomas primários e também nas mestástases, quando encontradas. Os cães diagnosticados com neoplasia de células redondas atendidos no Hospital Veterinário da UFMG durante o período de 2009 a 2010 foram também investigados sobre o tratamento, recidivas e/ou ocorrência de metástases. A avaliação foi realizada pela análise dos protocolos de biópsia de pele e fichas de necropsia que constavam tumores cutâneos do Laboratório de Patologia Veterinária da Escola de Veterinária, durante o período de 1996 a 2010. Os marcadores CD117, CD3, CD79a, CD45, vimentina, E-caderina e citoqueratina AE1/AE3 foram utilizados nesse estudo. Nesse intervalo foram encontradas 1882 neoplasias cutâneas, de um total de 1762 cães. Os tumores mais frequentes nos animais jovens foram o histiocitoma, o mastocitoma e o papiloma. A localização anatômica em ordem decrescente de frequência foi cabeça (18,25%), períneo (10,23%), tórax (8,76%), membro pélvico (7,71%), membro torácico (7,45%), abdômen (6,30%), dorso (5,35%), escroto (3,36%), pescoço (2,94%), prepúcio (2,57%) e cauda (1,57%). Cerca de 8,50% dos animais tinham tumores multicêntricos. As neoplasias malignas foram mais frequentes que as benignas. Cerca de 45,59% dos tumores eram mesenquimais, 42,74% eram epiteliais, 8,91% eram melanocíticos e 1,57% eram hematopoéticos. Após o uso da IHQ, a frequência das neoplasias de células redondas foi modificada na contagem total de tumores. Foram diagnosticados 315 mastocitomas, 40 linfomas, 38 histiocitomas cutâneos, 13 tumores venéreos transmissíveis (TVT), 9 plasmocitomas e 6 sarcomas histiocíticos localizados. Os dez tipos tumorais mais prevalentes foram: mastocitoma (16,73%; 315/1882), melanoma (9,03%; 170/1882), lipoma (7,49%; 141/1882), adenoma sebáceo (6,53%; 123/1882), carcinoma de células escamosas (6,42%; 121/1882), adenoma hepatóide (5,89%; 111/1882), hemangiossarcoma (4,94%; 93/1882), hemangioma (3,77%; 71/1882), tricoblastoma (2,39%; 45/1882) e fibrossarcoma (2,12%; 40/1882). Dos 78 mastocitomas sem metástase submetidos à IHQ, 43,59% foram classificados na histologia como grau I; 34,62% como grau II e 21,79% como grau III. Simultaneamente, 53,85% foram classificados na IHQ como padrão KIT I, 30,77% padrão KIT II e 15,38% padrão KIT III. Não foram observadas diferenças estatisticamente significantes entre os graus histológicos em relação aos três padrões KIT nesses 78 mastocitomas avaliados. O padrão KIT de 16 mastocitomas metastáticos também foi avaliado não sendo observadas diferenças estatísticas significantes entre o tumor primário e suas metástases. A correlação entre o padrão KIT do tumor primário e sua respectiva metástase foi de 78%. O periodo médio livre de recidiva nos 25 animais com mastocitoma acompanhados foi de 325 dias, independente do grau histológico, padrão KIT ou tratamento. O tempo médio de sobrevida livre da doença nos cinco animais diagnosticados com linfoma T foi de 225 dias. The objectives of this study were to determine the prevalence of skin tumors in dogs, to relate the histological type with the anatomical location, and to use the immunohistochemistry (IHC) to differentiate the "round cell tumors. Also, was evaluated the expression of CD117 in mast cell tumors (MCT) and compare it with the histological grades, in primary and metastatic MCT. The dogs diagnosed with round cell tumors in the Veterinary Hospital of UFMG during 2009 to 2010 period were also investigated about treatment, recurrence and/or metastases. The evaluation was performed by analysis of the protocols of a skin biopsy and necropsy records of skin tumors archived in the Veterinary Pathology Laboratory of the Veterinary School during 1996 to 2010 period. The markers CD117, CD3, CD79a, CD45, vimentin, E-cadherin and cytokeratin AE1/AE3 were used in this study. A total of 1762 dogs and 1882 skin tumors were found. The most common tumors in young animals were histiocytoma, MCT and papilloma. The anatomical location in descending order of frequency was head (18.25%), perineum (10.23%), thorax (8.76%), pelvic limb (7.71%), forelimb (7.45%), abdomen (6.30%), back (5.35%), scrotum (3.36%), neck (2.94%), prepuce (2.57%) and tail (1.57%). Approximately 8.50% of the animals had multifocal tumors. Malignant neoplasms were more frequent than benign. Approximately 45.59% of the neoplasms were mesenchymal, 42.74% were epithelial, 8.91% were melanocytic and 1.57% were hematopoietic. After IHC tests, the frequency of round cells tumors was modified. Thus, 315 were diagnosed as MCT, 40 as lymphomas, 38 as cutaneous histiocytomas, 13 as transmissible venereal tumors (TVT), 9 as plasm cell tumors and 6 as localized histiocytic sarcomas. The ten most prevalent tumor types were: MCT (16.73%, 315/1882), melanoma (9.03%, 170/1882), lipoma (7.49%, 141/1882), sebaceous adenoma ( 6.53%, 123/1882), squamous cell carcinoma (6.42%, 121/1882), hepatoid adenoma (5.89%, 111/1882), hemangiosarcoma (4.94%, 93/1882), hemangioma (3.77%, 71/1882), trichoblastoma (2.39%, 45/1882) and fibrosarcoma (2.12%, 40/1882). Of 78 MCT without metastasis identified by the IHC, 43.59% were classified histologically as grade I, 34.62% as grade II and 21.79% as grade III. Simultaneously, 53.85% were classified as standard KIT I, 30.77% as standard KIT II and 15.38% as standard KIT III. In these 78 MCT evaluated, there were no statistical significant differences between the histological grades for the three standards KIT. The standard KIT of 16 metastatic MCT was also evaluated and no statistical significance between the primary tumor and metastases was detected. The correlation between the pattern of KIT and its corresponding primary tumor metastasis was 78%. The average of recurrent free period in 25 animals diagnosed with MCT was 325 days, regardless of grade, standard KIT or treatment. The mean disease-free survival time in the five animals diagnosed with T cell lymphoma was 225 days.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-08-17Bitstream added on 2014-06-13T19:04:10Z : No. of bitstreams: 1 sanches_oc_dr_botfmvz.pdf: 1031367 bytes, checksum: 31652d18eb0eb85dfe96eb3f8e2db066 (MD5) Universidade Estadual Paulista (UNESP) O presente trabalho teve como objetivo quantificar e avaliar presença dos mastócitos nos diferentes tipos de neoplasias malignas da glândula mamária da cadela. Através de estudo retrospectivo, foi empregado à coloração histoquímica do azul de toluidina, para detecção de mastócitos, e a técnica imunoistoquímica, usando os anticorpos Ki-67 para proliferação celular e a caspase-3 para identificar as células em apoptose. As amostras (n= 102) foram descritas conforme a Classificação Histopatológica para Neoplasia Mamária do Cão e do Gato da Organização Mundial de Saúde. Os animais sem raça definida apresentaram o maior número de casos, e entre os animais com raça definida, a raça Poodle foi a que apresentou o maior número de casos. A idade média das cadelas foi de 8,6 anos. Os tipos morfológicos de neoplasias encontradas foram o carcinoma in situ com 0,98%, carcinoma complexo com 45,09%, carcinoma simples com 35,29%, carcinossarcoma com 10,78% e os tipos especiais de carcinomas que representaram 7,89% dos casos. Os mastócitos estavam presentes no foco neoplásico em 96,08% das amostras. 99% das amostras apresentaram marcação positiva para o anticorpo Ki-67 (MIB-1). Já a imunomarcação pela caspase-3 revelou marcação positiva em 95% dos casos. Foi observada correlação significativa positiva entre o número de mastócitos e o índice de proliferação (Ki-67) (p˂0,05) nos carcinomas do tipo complexo. Os mastócitos mostraram influência na proliferação das células dos carcinomas complexos, contudo, é necessário mais estudos para elucidar o papel destas células no índice de proliferação The presented study aimed to quantify and evaluate the presence or absence of mast cells in different types of malignancies in the mammary gland of the female dogs. For this, it was used the blue toluidine in the histochemical colours with the purpose of detecting mast cells, and immunohistochemical techniques, using the antibodies Ki-67 to the proliferation of the cells and caspase-3 antibody to identify undergoing cells in apoptosis. All samples were put according to the pathological classification for dog’s and cat’s breast cancer in the World Health Organization. About the racial pattern, it was observed a higher number of cases in animals without breed, and in the animals with breed, the Poodle was the one with the largest number of cases. The average age of the female dogs was 8.6 years old. The morphological types of neoplasm founded were: carcinoma in situ with 0.98% (1/102), complex carcinoma with 45.09% (46/102), simple carcinoma in 35.29% (36/102) carcinosarcom in 10.78% (11/102) and special types of carcinomas that were represented with 7.89% (08/102) of the total number of cases. The mast cells were presented in the neoplasic focus with 96.08% (98/102), and it prevailed in areas where there are lots of human tissues, especially around the vessels. About the immune numbers of samples using the Ki-67 (MIB-1), it was conclude that 99% (101/102) showed positive results. However, using the caspase-3 it was showed positive results in 95% (97/102). About the influence of mast cells in the proliferation of neoplasic cells, it was observed a significant positive correlation between the number of mast cells and the proliferation (Ki-67) for the complex carcinoma (p 0.05). The correlation between death and cells proliferation showed a negative significant relation in spindle cells carcinomas, between the apoptotic number (Caspase-3) and the proliferation number (NORs). How bigger is the number

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-08-13Bitstream added on 2014-06-13T20:16:18Z : No. of bitstreams: 1 jimenez_cd_me_botfmvz.pdf: 2023223 bytes, checksum: 0d707644d193ee36e94427b90363ca22 (MD5) Universidade Estadual Paulista (UNESP) O intuito deste estudo foi determinar se os sinais neurológicos apresentados por cães com suspeita de neoplasia intracraniana foram compatíveis com a localização anatômica do tumor determinada com a utilização da tomografia computadorizada. Foram estudados 20 cães submetidos a avaliação neurológica e exame tomográfico encefálico. Estes cães foram divididos em 3 grupos de acordo com a área anatômica envolvida. Grupo I (n=14) animais com lesão em telencéfalo, diencéfalo e síndrome cerebral. Grupo II (n=4) lesão em tronco encefálico e cerebelo com síndrome cerebelar e de tronco encefálico. Grupo III (n=2) cães com lesão em diencéfalo compatível com tumor hipofisário apresentando síndrome cerebral. Aproximadamente 65% dos cães apresentaram sinais neurológicos compatíveis com a localização da lesão tumoral, evidenciada na tomografia. Nos outros animais (35%) todos pertencentes do grupo I foram observados sinais clínicos não associados à lesão tumoral primária estando provavelmente associados aos efeitos secundários decorrentes da lesão, tais como edema peritumoral, hemorragia, hidrocefalia, aumento de pressão intracraniana, processos inflamatórios dentre outros The purpose of this study was to determine if neurological signs shown by dogs with suspected intracranial neoplasm were consistent with the anatomical location of the tumor determined using computed tomography. We studied 20 dogs underwent neurological evaluation and brain CT scan. These dogs were divided into three groups according to the anatomic area involved. Group I (n = 14) animals with lesions in the telencephalon, diencephalon and brain syndrome. Group II (n = 4) lesion in brain stem and cerebellum with cerebellar syndrome and brainstem. Group III (n = 2) in dogs with injuries consistent with diencephalon pituitary tumor presenting brain syndrome. Approximately 65% of dogs had neurologic signs consistent with the location of the tumor, shown on CT. In other animals (35%) all belonging to group I showed no clinical signs associated with primary tumor and is probably associated with side effects resulting from injury, such as peritumoral edema, hemorrhage, hydrocephalus, increased intracranial pressure, inflammatory processes and others

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005Bitstream added on 2014-06-13T18:59:53Z : No. of bitstreams: 1 silva_sb_me_botfmvz.pdf: 1275136 bytes, checksum: c4961a43687de964361a407adaa3c185 (MD5) Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) Fundação para o Desenvolvimento da UNESP (FUNDUNESP) O tumor venéreo transmissível (TVT) é a segunda neoplasia de maior prevalência nos cães atendidos no Hospital Veterinário de Botucatu. Na associação entre o comportamento biológico do tumor e a clínica desses animais, há fortes diferenças em relação às apresentadas na literatura especializada no assunto. O TVT desperta, no meio científico, o interesse pela sua origem, modo de transmissão e questionável regressão espontânea, fato atribuído ao comportamento versátil desse tumor, diferindo dos mecanismos de outras neoplasias. Investigações têm sugerido fenômenos semelhantes aos que ocorrem nos tumores de outras espécies, inclusive no homem. A quimioterapia para o TVT é a mais indicada. Porém, traz efeitos colaterais extremamente tóxicos às células desses animais. Pesquisadores relatam a propriedade antitumoral in vitro da própolis sobre o grau de agressividade do TVT. Para tal, foram utilizadas células neoplásicas de 77 animais, sem distinção por raça, sexo e idade. Os animais foram provenientes do Hospital Veterinário da FMVZ - UNESP, Campus de Botucatu. As neoplasias foram divididas em três Grupos: TVT linfocitóide; TVT plasmocitóide e TVT misto. Nestas neoplasias, o índice de proliferação celular foi verificado pelo AgNOR e CEC, para auxiliar a averiguar o grau de agressividade do tumor. No final do estudo, foi possível observar que a própolis apresenta atividade antitumoral tempo-dose dependente sobre as células de TVT, incluindo nas do grupo plasmocitóide (considerada a de maior agressividade), onde, após 48 horas e na concentração de 100 æg, a atividade antitumoral é efetiva. Concluímos também que os marcadores de proliferação (AgNOR e CEC) mostram-se eficientes para monitorar a evolução do TVT e que, a avaliação clínica, morfológica e o estudo in vitro auxiliam no diagnóstico, na conduta terapêutica e na monitoração do TVT. The transmissible venereal tumor is the second most common neoplasia among the dogs attended in the Veterinary Hospital of Botucatu. When neoplastic biological behavior and clinical findings are associated, intense differences were presented with the literature. In the scientific environment, interest in the origin of this tumor, the means of transmissible and questionable spontaneous regression, since this tumour has a versatile behavior, differs from that in other neoplasias. Studies have been done that show similar phenomena occurring in human neoplasias. Chemotherapy is advised for transmissible venereal tumor, but it has extreme toxicity for other cells. Investigators have related the antitumoral properties of propolis; so, this study aimed to verify the supposed antitumoral effect on the transmissible venereal canine tumor, in order to minimize the toxicity caused by chemotherapy. Seventy-seven animals from Veterinary Hospital of Botucatu, were used. Based on the cellular morphology stained with Giemsa, new nomenclature was created and the animals were divided into three groups: lymphocyte-like transmissible venereal tumor, plasmocyte-like transmissible venereal tumor and mixed transmissible venereal tumor. Proliferation markers (AgNOR and CEC) were used to verify whether there were malignancies, in different morphological groups and in the sensitivity to propolis, were studied in vitro. In this study, we saw that propolis showed activity on transmissible venereal tumor. After 48 hours and with 100 æg of propolis, the antitumoral activity was effective, including the plasmocyte-like transmissible venereal tumor, that showed cytotoxic effect only with the greatest dose and the longest time.