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Introduction: Congenital hypogonadotropic hypogonadism (CHH) can present alone or in association with anosmia or other congenital malformations. More than 30 genes have been identified as being involved in the pathogenesis of CHH with different patterns of inheritance, and the increasing availability of next generation sequencing (NGS) has increased the diagnostic yield. Methods: We analysed the diagnostic yield of NGS in patients with CHH using the clinical exome filtered with virtual panels. We also assessed whether designing panels based on the presence/absence of microsmia increased the diagnostic yield. Results: The use of a 34-gene virtual panel confirmed the diagnosis of CHH in 5 out of 9 patients (55%). In 2 out of 9 (22%), the findings were inconclusive. Applying the presence/absence of microsmia criterion to choose genes for analysis did not improve the diagnostic yield. Conclusions: The approach to the genetic study of patients with CHH varies depending on the resources of each healthcare facility, so the sensitivity of testing may vary substantially depending on whether panels, clinical exome sequencing or whole exome sequencing (WES) are used. The analysis of every genes related to CHH regardless of the presence/absence of microsmia seems to be the best approach., Introducción: El hipogonadismo hipogonadotropo congénito (HHC) puede presentarse de manera aislada o acompñado de anosmia o de malformaciones congénitas. Más de 30 genes han sido implicados en la patogénesis de HHC; además, se han descrito varios patrones de herencia asociados a esta entidad. La creciente disponibilidad de técnicas de secuenciación masiva (NGS) ha permitido que aumente el rendimiento diagnóstico del estudio de esta patología. Pacientes y métodos: Evaluamos el rendimiento diagnóstico del estudio mediante NGS de pacientes con HHC, usando la secuenciación del exoma clínico filtrado por paneles virtuales. Además, se analizó si el diseño de estos paneles, basándose en la presencia/ausencia de microsmia/anosmia aumentaban este rendimiento diagnóstico. Resultados: Usando un panel virtual compuesto de 34 genes pudimos confirmar el diagnóstico de HHC en cinco de nueve pacientes (55%). En dos de nueve individuos (22%) estudiados se obtuvieron resultados no concluyentes. La ausencia/presencia de microsmia para la elección de genes a estudiar no mejora el rendimiento diagnóstico. Conclusiones: El abordaje del estudio genético de pacientes con HHC puede variar en función de las técnicas disponibles en cada centro, por lo que la sensibilidad del test utilizado variará, dependiendo si se utiliza secuenciación de paneles, exoma clínico o exoma completo. El análisis de todos los genes relacionados con HHC independientemente de la presencia/ausencia de microsmia pareciera el abordaje con mejor rendimiento., This study was supported by the Department of Genomic Medicine of the Universidad Autónoma de Madrid-Fundación Jiménez Díaz (file 081800).

Tesis doctoral inédita leída en la Universidad Autónoma de Madrid, Facultad de Medicina, Departamento de Pediatría. Fecha de lectura: 05-09-2019, La pubertad es un proceso biológico complejo a través del cual se desarrollan los caracteres sexuales secundarios, se obtiene la maduración sexual completa y se alcanza la talla adulta. El hecho que marca el inicio puberal es la regularización e intensificación de la secreción pulsátil de hormona liberadora de gonadotropinas (GnRH) por parte de las neuronas neurosecretoras hipotalámicas. Las alteraciones de este proceso se pueden manifestarse, entre otros, como: i) Pubertad precoz central idiopática (PPCI), cuando el proceso se inicia prematuramente a nivel hipotalámico, sin ninguna causa anatómica distinguible. ii) Hipogonadismo hipogonadotropo permanente congénito (HHPc), cuando a nivel hipotalámico el proceso no se inicia a la edad estipulada o su progresión se estanca. Existen factores del individuo y del ambiente que pueden influir en estas alteraciones, entre ellos, factores genéticos que determinan la aparición de una u otra alteración. Nuestro objetivo principal fue estudiar los genes relacionados con la producción de GnRH en pacientes con el diagnóstico de PPCI y en pacientes afectados de HHPc para determinar si existían alteraciones genéticas que pudiesen explicar el fenotipo de estos pacientes. Observamos que en el grupo de pacientes con PPCI la prevalencia de alteraciones genéticas es muy baja. Por el contrario, la prevalencia de estas alteraciones en los pacientes de HHPc es lo suficientemente alta como para justificar su estudio en la práctica clínica diaria., Puberty is a complex biological process. This process leads to the development of secondary sexual characteristics, reproductive capacity and final adult height. The fact that initiates puberty is the regularization and intensification of the pulsatile production of gonadotropin release hormone (GnRH) in hypothalamic neurosecretory neurons. Alterations in this process may present in multiple ways, two of them are: i) Idiopathic central precocious puberty (PPCI), this happens when the process is initiated prematurely in the hypothalamus without any distinguishable anatomical lesion. ii) Congenital permanent hypogonadotropic hypogonadism (HHPc), this happens when the process fails to be initiated at the hypothalamus or arrested at initial phases. There are individual and environmental factors that can lead to these alterations, between them, genetical factors that causes any of the alterations mentioned. Our principal aim was to study genes related to the production of GnRH in patients diagnosed of PPCI and in patients affected of HHPc to determine if there was any genetic alteration that could explain the phenotype of these patients. We observed that the prevalence of genetic alterations in patients with PPCI was very low. Instead, the prevalence of these alterations in patients with HHPc was high enough to consider this kind of studies in the clinical routine.

Tesis doctoral inédita leída en la Universidad Autónoma de Madrid, Facultad de Ciencias, Departamento de Biología. Fecha de lectura: 22-01-2016, Esta tesis tiene embargado el acceso al texto completo hasta el 22-07-2017, Instituto de Investigación Sanitaria. Fundación Jiménez Díaz, Las displasias esqueléticas son un amplio campo de estudio que requiere unidades disciplinares de las distintas especialidades involucradas en su desarrollo. Esta tesis, basada en un trabajo principalmente asistencial, ha intentado dar respuesta al mayor número de demandas solicitantes de displasias esqueléticas recogidas en dos periodos: desde su inicio a 2006, y tras la concesión de un proyecto específico, de 2007 a 2012. En ese intento se han puesto a punto nuevos genes y nuevas herramientas diagnósticas que han permitido caracterizar mutaciones familiares que han facilitado la realización de un asesoramiento genético individual, familiar y reproductivo, fin último del estudio genético. Ante alteraciones ecográficas el gen FGFR3 juega un papel importante en el diagnóstico, con una sensibilidad de hasta el 60% en los fetos con hipoplasia torácica y micromelia. El estudio de las craneosinostosis aisladas sindrómicas requiere de un primer cribado del exón 7 del gen FGFR3 así como de los exones 7 y 8 del gen FGFR2, seguido de la aplicación de la secuenciación masiva en una segunda aproximación diagnóstica. El estudio de la talla baja disarmónica requiere de la secuenciación seriada del gen FGFR3, gen SHOX y gen COMP. Existen otras tallas bajas disarmónicas con fenotipos característicos reconocibles que dirigen el estudio molecular de forma concreta (genes RMRP y COMP). La puesta a punto del gen SLC26A2 se realizó ante un resultado molecular no concluyente en una pareja y su hija afecta. El estudio de la talla baja idiopática se centra en las alteraciones en el gen SHOX. La selección de los pacientes y la aplicación de una escala clínica que cribe los pacientes a estudio es necesaria para optimizar recursos y expectativas diagnósticas. Una buena exploración y recogida de datos, así como dar una explicación detallada de las alteraciones encontradas, es un requisito imprescindible para orientar el estudio molecular y, ante un primer resultado negativo, tener la información para poder proponer otros diagnósticos diferenciales. Esta premisa es independiente de la técnica molecular que se utilice: desde la robusta y conocida secuenciación de sanger hasta las nuevas herramientas diagnósticas de secuenciación masiva.

Tesis doctoral inédita leída en la Universidad Autónoma de Madrid. Facultad de Ciencias, Departamento de Biología. Fecha de lectura: 21-06-2013