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Multiple endocrine neoplasia type 2 (MEN2) is an autosomal dominant inherited tumor syndrome caused by RET proto-oncogene germline mutations (RET). Here we tested the Conformation Sensitive Gel Electrophoresis (CSGE) as a screening method for RET hot-spot mutations. Seven MEN2 families were studied by direct sequencing analysis, CSGE and Single Strand Conformational Polymorphism (SSCP). Using CSGE/SSCP, we were able to detect four out of five types of RET mutations verified by sequencing analysis: Cys620Arg, Cys634Arg, Cys634Tyr, and Met918Thr, furthermore a missense substitution at codon 648 (Val648Ile). RET polymorphisms 691 and 769 were also verified. Data obtained using CSGE/SSCP were fully concordant. We conclude that CSGE showed to be a sensitive, fast, low-cost, and simple procedure to detect RET mutations in codons which are reported as the most prevalent RET variants (~ 95%) in large MEN2 series. As to the Val804Met mutation, this method still needs to be optimized. A neoplasia endócrina múltipla tipo 2 (NEM2) é uma síndrome tumoral herdada por mutações germinativas no proto-oncogene RET (RET). Analisamos a aplicação do método Eletroforese em Gel Sensível à Conformação (CSGE) no rastreamento de mutações hot spots do RET. Sete famílias com NEM2 foram rastreadas pelo seqüenciamento gênico, CSGE e análise do Polimorfismo Conformacional de Cadeia Simples (SSCP). Usando ambas as metodologias de rastreamento, identificamos quatro dos cinco tipos de mutações verificadas pelo seqüenciamento: Cys620Arg, Cys634Arg, Cys634Tyr e Met918Thr, além da variação gênica Val648Ile. Das análises englobando mutações hot spots do RET, 90,6% concordaram com o seqüenciamento genético (incluindo a variação gênica Val648Ile). Polimorfismos nos códons 691 e 769 foram documentados. Os dados obtidos por CSGE/SSCP foram totalmente concordantes. Concluímos que o CSGE revelou ser metodologia sensível, rápida, de fácil execução e baixo custo no rastreamento de mutações nos códons associados à grande maioria (~ 95%) dos pacientes com NEM2.

A neoplasia endócrina múltipla tipo 2 (NEM-2) é uma síndrome tumoral hereditária que compreende: carcinoma medular de tireóide, hiperparatiroidismo primário, feocromocitoma e outras doenças não-endócrinas. Desde a identificação das primeiras mutações missense no RET associadas ao NEM-2, a detecção de mutações no RET adquiriu grande impacto no tratamento clínico da NEM-2, tais como o pronto diagnóstico e tratamento do CMT. Atualmente a tireoidectomia total possibilita real cura dos casos de CMT nos quais os diagnósticos moleculares foram efetuados precocemente. Depois de identificadas as mutações no RET, os demais familiares devem ser rastreados para esta mutação utilizando-se métodos como DGGE, SSCP, enzima de restrição, seqüenciamento e mini-seqüenciamento gênico. Apresentamos uma breve revisão da nossa experiência com seqüenciamento gênico direto do RET e DGGE. Em 50 pacientes com NEM-2 analisados por ambas as técnicas, não encontramos falsos resultados, sugerindo que o DGGE é uma metodologia de rastreamento adequada para mutações no proto-oncogene RET.

Multiple endocrine neoplasia type 2 (MEN2) is an autosomal dominant disease characterized by the presence of medullary thyroid carcinoma, primary hyperparathyroidism, and pheochromocytoma. Multiple endocrine neoplasia type 2 is still an underdiagnosed, or late-diagnosed condition in many areas of the world. Since 1993, when the first missense RET proto-oncogene (RET) mutations were reported in MEN2, up to 46 different RET-causing disease mutations have been described. Since a strong genotype-phenotype correlation exists for MEN2, the detection of RET mutations has produced a major impact in early recognition and treatment of MTC and MEN2. Presently, RET mutation analysis should be performed for all MEN2 cases and their at-risk familial relatives. Further, prophylactic total thyroidectomy is indicated in all cases harboring activating gametic RET mutations. In most RET mutation carriers, prophylactic total thyroidectomy is indicated at ages as early as a few months to 4 years of age, promoting longer survival and improvement of quality of life or even definitive cure. We discuss the large impact of RET proto-oncogene analysis on the clinical management of MEN2 and the role of early RET molecular DNA diagnosis in providing clinicians and surgeons with valuable information that enables them to indicate early total thyroidectomy. A neoplasia endócrina múltipla tipo 2 (NEM2) é caracterizada pela ocorrência do carcinoma medular de tireóide (CMT), hiperparatiroidismo primário (HPT) e feocromocitoma (FEO).1-12 Desde 1993, quando as primeiras mutações do tipo missense no proto-oncogene RET (RET), associadas a NEM2 foram identificadas, 46 diferentes mutações causadoras de doenças foram descritas.13-17 Como há uma forte correlação genótipo-fenótipo na NEM2, a detecção de mutações no RET adquiriu grande impacto no tratamento precoce do CMT e NEM2. A NEM2 persiste como uma doença subdiagnosticada e/ou tardiamente diagnosticada em várias áreas geográficas do globo. A análise de mutações do RET deve ser realizada em todas os casos de NEM2 e atualmente, a tireoidectomia total profilática é indicada para todos os indivíduos portadores de mutações no RET.¹ Para a grande maioria dos portadores de mutações gaméticas ativadoras no RET este procedimento cirúrgico é indicado nos primeiros anos de vida, promovendo melhora na qualidade de vida, aumento da sobrevida ou mesmo levando à cura definitiva.¹ Discutimos nesta revisão, o impacto da análise do proto-oncogene RET na conduta clínica da neoplasia endócrina múltipla tipo 2. Além disso, o diagnóstico molecular do RET fornece à clínicos e cirurgiões a mais valiosa das informações, permitindo indicação de tireoidectomia total profilática.