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Die vorliegende Arbeit soll zu einem besseren Verständnis des Einflusses des löslichen Proteins Jam-A auf die Funktion der Thrombozyten führen. Dazu wurden sowohl das natürlich vorkommende Jam-A D1/D2 als auch das künstlich geschaffene Protein mit nur einer Domäne, das Jam-A D1, untersucht. Es wurde im Vorfeld vermutet, dass sich Anhaltspunkte finden würden, die bestätigen, dass Jam-A die Entstehung und das Fortschreiten der Arteriosklerose steigern würde. Die vorliegenden Ergebnisse wurden mittels Aggregometrie, Durchflusszytometrie, Flusskammer, Lichtmikroskopie, Konfokalmikroskopie und Zellkultur gewonnen. Insgesamt ließ sich feststellen, dass das künstliche Jam-A D1 einen stärkeren Effekt als das natürlich vorkommende Jam-A D1/D2 zeigte. Die Aggregometrie ergab eine signifikante Steigerung der Thrombozytenaggregation in Kombination mit dem Agonisten ADP. Allein zeigte Jam-A keinen Effekt. Diese Ergebnisse bestätigten sich auch in der Flusskammer, wo sich in Kombination mit ADP wenige, aber sehr großflächige und voluminöse Thromben bildeten. Jam-A allein führte zu zahlreichen, winzigen, flachen Thromben. Die Thrombozytenadhäsion auf Endothelzellen nahm in Kombination mit ADP, aber auch in geringem Maße allein durch Jam-A, ebenfalls zu. Einen fördernden Einfluss zeigte Jam-A weiterhin auf die Monozyten-Makrophagen-Differenzierung. In Kombination mit TRAP steigerte Jam-A die Bildung von Thrombozyten-Monozyten-Aggregaten. Jam-A D1 verstärkte überdies die Aktivierung und Degranulation von Thrombozyten. Förderlich auf die Apoptose wirkte sich vor allem die Kombination von TRAP und Jam-A D1 aus. Jam-A löste eine vergleichbare Thrombozytenspreizung aus wie die Positivkontrolle Collagen. Zusammenfassend lässt sich feststellen, dass die Einzelergebnisse dafür sprechen, dass Jam-A die Entstehung und das Voranschreiten der Arteriosklerose unterstützt. Daher könnte es sinnvoll sein, in-vivo-Versuche anzuschließen, die die Übertragbarkeit auf den lebenden Organismus prüfen und gegebenenfalls die Wirksamkeit eines blockierenden Antikörpers gegen Jam-A zu überprüfen.

Das menschliche Gehirn ist durch den umgebenden Liquor und die Schädelkalotte geschützt. Eine schnelle intrakranielle Drucksteigerung führt aufgrund der engen Verhältnisse allerdings frühzeitig zu teils irreversiblen Parenchymschäden. Blutungen stellen neben dem Hirnödem eine Haupt¬ursache für Hirndruckerhöhungen dar. Eine präoperative Detektion einer erhöhten Blutungsneigung wäre daher insbesondere vor intrakraniellen Eingriffen wünschenswert. Störungen der primären Hämostase, wie beispiels¬weise die von-Willebrand-Erkrankung mit einer Prävalenz von 1 - 2 % in der Normalbevölkerung, sind häufig unerkannte Ursachen für vermehrte Blutungsneigung. Zur Beurteilung der primären Hämostase wurde von Kundu et. al. 1995 der auf einem Versuchsaufbau von Kratzer und Born basierende PFA-100® entwickelt. Dieses einfach zu bedienende Gerät der Firma Dade Behring® simuliert die Thrombozytenadhäsion und -aggregation bei hohen Scherraten und findet mittlerweile Anwendung in vielen Gerinnungslabors. In der Klinik für Neurochirurgie der Universität Marburg wurde der PFA-100® im April 2005 als Screeningtest vor jeder großen elektiven, intrakraniellen Operationen eingeführt. In dieser Studie wurde retrospektiv untersucht, ob daraufhin eine Verbesserung des Outcomes und eine Verminderung der Blutungskomplikationen stattgefunden hat. Dazu wurden insgesamt 102 Patienten, die in den neun Monaten vor der Einführung des PFA operiert wurden, mit 93 Patienten, die innerhalb der ersten neun Monate nach der Einführung ein PFA-Screening erhalten haben und operiert wurden, verglichen. Dabei fanden sich keine wesentlichen Abweichungen in der Gruppenzusammensetzung. Hinsichtlich der demografischen Werte Alter, Größe, Gewicht, BMI und Geschlecht konnte kein signifikanter Unterschied festgestellt werden. Auch bezüglich des durchschnittlichen präoperativen Gesundheits- und Bewusstseinszustandes der Patienten (beurteilt anhand des ASA- Wertes und des präoperativen GCS) unterschieden sich die Gruppen nicht signifikant. In beiden Gruppen waren die verschiedenen Tumorentitäten (nach WHO) weitgehend ähnlich häufig vertreten. Eine Thrombozytopenie als Ursache für eine gestörte Hämostase konnte bei einem Patienten identifiziert werden, die durchschnittliche Thrombozytenzahl war in beiden Gruppen vergleichbar. Auch die übrigen erfassten Parameter zur groben Beurteilung der Gerinnung (INR, aPTT, Fibrinogen) und von Organfunktionen (Kreatinin) und der Hb-Wert wiesen keine signifikanten Unterschiede auf. Schließlich gab es auch keine wesentlichen Differenzen bei der Verteilung des Erfahrungsgrades des Operateurs. Die Ausgangssituation in den Gruppen war somit vergleichbar. Als Resultat konnten keine Hinweise für eine vermehrte intraoperative Blutungsneigung in einer Gruppe festgestellt werden. Die dazu erhobenen Parameter postoperativer Hb-Wert, OP- und Anästhesiedauer und Transfusionsrate von EKs, FFPs, Thrombozytenkonzentraten, und die Anwendung von Gerinnungsfaktorkonzentraten wie Fibrinogen und PPSB unterschieden sich nicht signifikant. Die Operateure waren angehalten, eine subjektiv empfundene vermehrte Blutungsneigung des Patienten im OP-Bericht zu erwähnen, wobei auch hier bei geringer Anzahl der Vermerke (insgesamt 10) kein signifikanter Unterschied in den Gruppen festgestellt werden konnte. Der einzige signifikante Unterschied (p = 0.045) findet sich in der Applikation von DDAVP (Minirin®, Desmopressin), das in der PFA-Gruppe deutlich häufiger verabreicht wurde. Die potenziellen Nebenwirkungen des Medikamentes sollten bei fraglicher Verbesserung des Outcomes berücksichtigt werden. Das wichtigste untersuchte Kriterium dieser Studie ist die relevante (lebensbedrohliche, ggf. revisionsbedürftige) postoperative Einblutung. Es kam nur bei 4 Patienten zu solchen relevanten Einblutungen, je zwei in jeder Gruppe und somit nicht signifikant. Bei drei dieser Patienten wurde eine Revisionsoperation zur Hämatomentlastung durchgeführt. Das postoperative Outcome der Patienten wurde anhand des postoperativen GCS, der GCS-Reduktion präoperativ-postoperativ, dem GOS und der Aufenthalts¬dauer der Patienten auf der Intensivstation beurteilt, wobei beiden Gruppen durchgängig vergleichbar sind. Es ergibt sich somit keine Bestätigung des PFA-100®-Screenings als suffizientes Verfahren zur Reduktion von Blutungskomplikationen bei elektiven intrakraniellen Eingriffen. Allerdings kann aufgrund der geringen Fallzahl ein Fehler 2. Art nicht ausgeschlossen werden. Eine randomisierte, prospektive Studie wäre für die Entscheidung über ein dauerhaftes Fortsetzen oder Einstellen des PFA-Screenings sinnvoll., Background: Based on the clinical experience perioperative bleeding in complex neurosurgery can be related to an unidentified impairment of primary haemostasis. The Platelet Function Analyzer (PFA-100) has been evaluated as a screening tool for disorders of primary haemostasis. This study investigates whether the inclusion of the PFA-100 in the preoperative screening of neurosurgery patients might help reducing perioperative bleeding complications. Methods: Beginning in April 2006, patients with intracranial space occupying lesions who were scheduled for complex neurosurgical interventions underwent routine preoperative PFA-100 testing. Patients suffering from vascular mal-formations or intracranial aneurysms were excluded. In case of abnormal PFA, patients were further evaluated and/or received prophylactic treatment with desmopressin. Post-operative outcomes were compared to patients operated before introduction of PFA testing. The patients were enrolled consecutively over an 18-month period. Preoperative PFA-testing was introduced after 9 months. Inclusion criteria remained unchanged during the study period. Results: 102 patients were enrolled in the 9-month period before PFA introduction (non-PFA group), and 93 patients were enrolled thereafter (PFA group). The groups were highly comparable in terms of basic patient characteristics (age, gender, height, weight, BMI, ASA, Hb) and the spectrum of intracranial pathologies. Duration of anaesthesia or surgery, as well as experience of the operating surgeons were not significantly different between the two groups. Four patients (3.9 %) in the non-PFA group and six patients (6.5 %) in the PFA group experienced an increased intraoperative bleeding tendency according to a subjective assessment of the respective surgeon (p = 0.42). Two patients (2.0 %) in the non-PFA group and two patients (2.2 %) in the PFA group experienced a clinically relevant intracranial bleeding complication confirmed by postoperative computed tomography (odds ratio (OR) 1.05, 95% confidence intervall (95%-CI) 0.39-2.82; p = 1.0). Red blood cell, plasma or platelet transfusions were not significantly different between the two groups. Administration of coagulation factors (only fibrinogen concentrate was administered) or antifibrinolytic agents was also not significantly different between the groups. Five patients (4.9 %) in the non-PFA group and thirteen patients (14.0 %) in the PFA-group received desmopressin infusions perioperatively (OR 3.2, 95%-CI 1.1-9.2; p = 0.045). Conclusion: Prophylactic haemostatic treatment based on preoperative screening with the PFA-100 did not reduce the occurrence of perioperative bleeding complications related to complex intracranial surgical interventions, but resulted in a significant increase in the administration of desmopressin. A larger prospective randomized trial is needed to definitely determine the real clinical benefit of this approach.

In 1985, Kratzer and Born introduced a new technique to simulate the process of primary haemostasis. Under a constant pressure, a capillary and a collagen coated nitrocellulose aperture, soaked with ADP, are perfused with anticoagulated blood. Platelets occlude the ap-erture and decrease the blood flow. The resulting flow is measured with a sensitive feedback device. Analogous to the in vivo bleeding time a closure time (CT) and the blood volume (BV) passing the aperture during that time can be measured ex vivo. The principle of this in vitro bleeding test (IVBT) was turned into a practical application with the "Thrombostat 4000" (VDG, von der Goltz, Seeon, Germany) which mainly was used for scientific purposes. A further development of this method has recently become available with the "PFA-100" (Dade Behring, Marburg, Germany). Numerous studies have shown that dis-turbances of non-vascular haemostasis can be detected with high degree of sensitivity and specificity by the IVBT. However, the PFA-100 shows still too high variability under routine conditions and limited applicability. An integral part of the device is a capillary, which mimics the resistance of the arteriole sys-tem during primary haemostasis. The present paper shows that the exchange of the capillary with an "electronic capillary" (clamp technique) clearly improves the method., Mit dem Platelet Function Analyzer (PFA-100®), einer Weiterentwicklung des In-vitro-Blutungstests(IVBT), steht schon seit mehreren Jahren, ein Screening-Test für die Diagnostik von thrombozytär bedingten Hämostasestörungen zur Verfügung. Das System simuliert die primäre Hämostase in einem kleinen Blutgefäß. Durch eine drei Zentimeter lange Stahlkapillare, mit einem Innnendurchmeser von 200 µm, wird Zitratblut mit einem kontinuierlichen Sog von 40 mmHg angesaugt. Dabei passiert das Blut eine zentrale Apertur, von 150 µm Durchmesser, innerhalb einer mit Thrombozyteninduktoren (Kollagen/Epinephrin (Kol/Epi) oder Adenosindiphosphat (Kol/ADP) beschichteten Membran. Infolge von Anlagerung und Aggregation kommt es zum Verschluß der Membranöffnung. Die Verschlusszeit ermöglicht quantitative Aussagen über die primäre Hämostase. Nach dem Gesetz von Hagen-Poiseuille resultiert unter diesen Bedingungen, aus einer Ametrie des Kapillarinnendurchmessers, eine Varianz des Volumenstroms im Verhältnis eins zu fünf. Obwohl aufwendig produzierte und kostenintensive Präzisionskapillaren zum Einsatz kommen, ist die Variabilität des Verfahrens noch zu hoch. In der vorliegenden Arbeit, wird in einem modifizierten In-vitro-Blutungstest, dem „Virtual Capillary Prototype“ (VCP), die konventionelle Stahlkapillare durch eine modulierbare, elektronisch simulierte „virtuelle“ Kapillare ersetzt. Unter diesen Bedingungen wird der Einfluss der Hämodynamik auf den Volumenstrom weitestgehend kontrolliert. Das Ziel der Arbeit bestand darin, anhand einer Pilotstudie zu überprüfen, ob die Reproduzierbarkeit des Verfahrens entsprechend verbessert und Störungen der primären Hämostase ausreichend empfindlich nachgewiesen werden können. Die Variation der Ergebnisse sowie meßtechnische Fehler insbesondere bei erniedrigten Thrombozyten-/Hämatokritwerten und nach Hämodilution sollten reduziert werden. Es wurde erprobt, ob Modifikationen der virtuellen Kapillare, die Eignung des Verfahrens in Hinblick auf bestimmte klinische Fragestellungen verbessern können.

Ziel der Arbeit war, die Einflüsse zwei verschiedener Hydroxyethylstärkelösungen und Ringer-Lösung bzw. NaCl 0,9% auf die Thrombozytenfunktion zu untersuchen. Dabei sollte geklärt werden, ob HES (130/0,4) durch ihren reduzierten Substitutionsgrad, veränderte C2/C6 ratio und durch eine engere Molekulargewichtsverteilung einen günstigeren Einfluss auf die Aktivität der Thrombozyten hat als HES (200/0,5). Changes in thrombocyte function after volume substition with hydroxyethylstarch have been demonstrated. The clinical relevance of this finding is controversial. We investigated the influence of two preparations of hydroxyethylstarch and Ringer's solution, respectively normal saline, on thrombocyte function. The goal of our study was to determine whether HES (130/0,4) with its lower degree of substitution, different C2/C6 ratio and lower mean molecular weight has less impact on thrombocyte function than HES (200/0,5).

Gegenstand der vorliegenden Arbeit war die Charakterisierung der Thrombozytenfunktion und der Thrombozyten-Leukozyten Adhäsion (TLA) im Rahmen von Koronarinterventionen unter einer Therapie mit dem Thienopyridin Clopidogrel. Untersucht wurden die Expression aktivierungsab-hängiger membranständiger Thrombozytenrezeptoren, die Thrombozytenadhäsion an Leukozyten und die Aggregation bei 40 Patienten mit koronarer Herzerkrankung, die vor geplanter Koronar-intervention mit Clopidogrel (300mg Aufsättigungsdosis, 75mg/d Erhaltungsdosis) behandelt wurden. Bereits 6 Stunden nach Therapiebeginn war eine signifikante Hemmung der durch Adenosin-diphosphat (ADP) induzierten Expression der Membranrezeptoren P-Selektin und Glykoprotein (GP) 53 zu beobachten, deren Ausmaß unter der Erhaltungsdosis bestehen blieb. Auch die durch das Thrombin Rezeptor aktivierende Peptid (TRAP) induzierte Rezeptorexpression war unter Clopidogrel signifikant vermindert. Daneben wurde eine vermehrte Hemmung der Internalisierung des GP Ib Rezeptors und eine deutliche Hemmung der thrombozytären Fibrinogenbindung beobachtet. Auch wurde die Rekrutierung von GP IIb/IIIa Rezeptoren auf der Zelloberfläche und die Expression aktivierter GP IIb/IIIa Rezeptoren signifikant gehemmt. Neben der verminderten Thrombozyten-rezeptorexpression war die Thrombozytenadhäsion an Neutrophile und an Monozyten unter Clopidogrel deutlich vermindert. Auch hier konnte bereits nach 6 Stunden eine signifikante Hemmung der ADP-induzierten TLA-Bildung verzeichnet werden, die im weiteren Verlauf erhalten blieb. Das Ausmaß der TLA-Bildung vor Therapiebeginn und unter Clopidogrel korrelierte signifikant mit der Expression des thrombozytären P-Selektin. Die Thrombozytenaggregation wurde ebenfalls rasch und signifikant durch Clopidogrel gehemmt. Neben der Hemmung der ADP-induzierten Aggregation war auch die TRAP-induzierte Aggregation leicht vermindert. Unter der Clopidogrel-Therapie wurde postinterventionell kein signifikanter Anstieg der Expression thrombozytärer Membranrezeptoren, der TLA-Bildung oder der Thrombozytenaggregation beobachtet. Clopidogrel führt als Aufsättigungsdosis zur raschen Hemmung der Thrombozytenfunktion, welche die agonisten-induzierte Expression der intrazellulär gespeicherter Membranrezeptoren P-Selektin und GP 53, die Internalisierung des GP Ib, die Rekrutierung und Expression aktivierter GP IIb/IIIa Rezeptoren sowie die Fibrinogenbindung und die Thrombozytenaggregation beinhaltet. Darüber hinaus wird die Thrombozytenadhäsion an zirkulierende Leukozyten signifikant gehemmt. Das Ausmaß der Funktionshemmung bleibt unter der Erhaltungsdosis bestehen. Durch die Therapie mit Clopidogrel scheint eine Passivierung der Thrombozytenfunktion ohne signifikanten reaktiven Anstieg der Expression membranständiger Rezeptoren oder der Aggregation nach elektiver Koronar-intervention induziert zu werden.