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Universidade Federal da Bahia. Faculdade de Medicina da Bahia. Salvador, BA, Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil Universidade Federal da Bahia. Faculdade de Medicina da Bahia. Salvador, BA, Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil Universidade de São Paulo. Faculdade de Ciências Farmacêuticas. Departamento de Análises Clínicas, Toxicológicas e Bromatológicas . São Paulo, SP, Brasil Universidade Federal da Bahia. Faculdade de Medicina da Bahia. Salvador, BA, Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil Universidade Federal da Bahia. Faculdade de Medicina da Bahia. Salvador, BA, Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil Universidade Federal da Bahia. Faculdade de Medicina da Bahia. Salvador, BA, Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil Universidade Federal da Bahia. Faculdade de Medicina da Bahia. Salvador, BA, Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil Universidade Federal da Bahia. Faculdade de Medicina da Bahia. Salvador, BA, Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / Instituto de Investigação em Imunologia. São Paulo, SP, Brasil Universidade Federal da Bahia. Faculdade de Medicina da Bahia. Salvador, BA, Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / Instituto de Investigação em Imunologia. São Paulo, SP, Brasil Universidade Federal da Bahia. Faculdade de Medicina da Bahia. Salvador, BA, Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / Instituto de Investigação em Imunologia. São Paulo, SP, Brasil Universidade Federal da Bahia. Faculdade de Medicina da Bahia. Salvador, BA, Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil Universidade Federal da Bahia. Faculdade de Medicina da Bahia. Salvador, BA, Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil Universidade Federal da Bahia. Faculdade de Medicina da Bahia. Salvador, BA, Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil A protective or deleterious role of CD8þT cells in human cutaneous leishmaniasis (CL) has been debated. The present report explores the participation of CD8þT cells in disease pathogenesis as well as in parasite killing. CD8þT cells accumulated in CL lesions as suggested by a higher frequency of CD8þCD45ROþT cells and CD8þCLAþT cells compared with peripheral blood mononuclear cells. Upon Leishmania braziliensis restimulation, most of the CD8þT cells from the lesion expressed cytolytic markers, CD107a and granzyme B. Granzyme B expression in CL lesions positively correlated with lesion size and percentage of TUNEL-positive cells. We also observed a significantly higher percentage of TUNEL-positive cells and granzyme B expression in the biopsies of patients showing a more intense necrotic process. Furthermore, coculture of infected macrophages and CD8þ T lymphocytes resulted in the release of granzyme B, and the use of granzyme B inhibitor, as well as z-VAD, Fas:Fc, or anti-IFN-g, had no effect upon parasite killing. However, coculture of infected macrophages with CD4þT cells strongly increased parasite killing, which was completely reversed by anti-IFN-g. Our results reveal a dichotomy in human CL: CD8þ granzyme BþT cells mediate tissue injury, whereas CD4þIFN-gþT cells mediate parasite killing.

Submitted by PMBqBM null (pmbqbm@ufba.br) on 2021-11-30T18:19:21Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_microRNA COMO BIOMARCADORES PARA IDENTIFICAÇÃO DE INDIVÍDUOS COM PRÉ-DIABETES E DIAGNÓSTICO PRECOCE DO DIABETES_Victor de Barros Serrano Neves.pdf: 1279373 bytes, checksum: 3f0a9241661baab62a2a238069f55542 (MD5) Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2021-12-20T19:52:14Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação_microRNA COMO BIOMARCADORES PARA IDENTIFICAÇÃO DE INDIVÍDUOS COM PRÉ-DIABETES E DIAGNÓSTICO PRECOCE DO DIABETES_Victor de Barros Serrano Neves.pdf: 1279373 bytes, checksum: 3f0a9241661baab62a2a238069f55542 (MD5) Made available in DSpace on 2021-12-20T19:52:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_microRNA COMO BIOMARCADORES PARA IDENTIFICAÇÃO DE INDIVÍDUOS COM PRÉ-DIABETES E DIAGNÓSTICO PRECOCE DO DIABETES_Victor de Barros Serrano Neves.pdf: 1279373 bytes, checksum: 3f0a9241661baab62a2a238069f55542 (MD5) FAPESB Introdução: O diabetes mellitus (DM) é uma doença crônica decorrente de defeitos na produção, secreção ou sinalização da insulina. Pré-diabetes é um estado sem sintomas onde o indivíduo apresenta níveis de glicemia de jejum entre 100 - 120mg/dl e hemoglobina glicada entre 5,7 e 6,5%. Antes definido como um estado latente, atualmente é definido como um período de risco para nefropatia, neuropatia e destruição das células β-pancreáticas. Neste contexto, torna-se relevante a identificação de marcadores biológicos, tais como microRNA (miRNA), para este estado patológico contribuindo para o diagnóstico precoce. Os miRNA são pequenos RNA que não codificam proteínas, mas são considerados importantes reguladores pós-transcricionais. São apontados como potenciais biomarcadores, uma vez que tem seus níveis de expressão alterados em função do desenvolvimento ou do grau de severidade de diversas doenças como diabetes, câncer e esquizofrenia. No presente estudo, visamos identificar um perfil de expressão de miRNA que pode viabilizar o diagnóstico precoce do pré-diabetes. Resultados: Após o levantamento dos transcriptomas publicamente disponíveis em NCBI GEO dataset, um transcriptoma atendeu aos critérios de inclusão deste estudo. A partir deste, foram identificados trinta e três miRNA com perfil de expressão aumentado no grupo pré-diabético em relação ao controle (FC≥1,5 p-valor≤ 0,05) e dois no grupo diabético (FC≥1,5 p-valor≤ 0,05). A rede de interação gerada pelo programa Cytoscape mostrou os miRNAs selecionados e seus alvos diferencialmente expressos no transcriptoma de validação. Cinco destes miRNA apresentaram maiores valores de centralidade na rede de interação miRNA-mRNA (let-7a, Let-7b, miR-106b, miR-93 e miR-17). Estes miRNA apresentaram maior sensibilidade e especificidade para o pré-diabetes (AUC = 0,794). Conclusão: Os cinco miRNA identificados estão envolvidos em diversas vias intracelulares relacionadas à resistência insulínica e destruição das células βpancreática e estão diferencialmente modulados no transcriptoma analisado neste estudo, podendo ser apontados como biomarcadores exploratórios promissores para diagnóstico precoce de DM2. Introduction: Diabetes Mellitus (DM) is a chronic disease due to impairment in insulin signaling, secretion or production. Prediabetes is an asymptomatic state in which subjects fasting glucose is between 100-120mg/dl and glycated hemoglobin is at the range of 5,7-6,5%. Previously defined as a latent state, now it is recognized as a risk factor for nephropathy and neuropathy development, and also for β-cell destruction. In this context, the identification of biological markers that have disrupted expression in pathological states can contribute to an early diagnosis. microRNAs (miRNA) are noncoding RNA, considered important in the post-translation regulation of genes. They are pointed out as potential biomarkers, since their expression level becomes altered due to the development or aggravation of many diseases such as diabetes, cancer, and schizophrenia. The present study aimed to identify a miRNA expression profile able to ensure an accurate early diagnosis of prediabetes. Publicly available transcriptomes were analyzed through bioinformatics tools. Results: After screening conducted at NCBI GEO datasets, one dataset matched our inclusion criteria. From which thirtythree miRNA were significantly upregulated in prediabetic subjects versus control (FC>1,5 p-valor≤ 0,05) and two were upregulated in the diabetic versus control group (FC>1,5 p-valor≤ 0,05). A miRNA-mRNA network was created using the upregulated miRNA and its regulated targets in the validation transcriptome using the Cytoscape software. Five miRNAs presented a greater centrality score from the miRNA-mRNA network. In which two (miR-93 and Let-7a) had better values for sensibility and specificity (AUC =0,829 e 0,824 respectively). Conclusion: The five miRNAs identified are involved in several intracellular pathways related to insulin resistance, destruction of β-pancreatic cells and are differentially expressed in the dataset analyzed in this study, which can be proposed as promising exploratory biomarkers for the early diagnosis of prediabetes.

Submitted by PMBqBM null (pmbqbm@ufba.br) on 2021-11-30T18:19:21Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_microRNA COMO BIOMARCADORES PARA IDENTIFICAÇÃO DE INDIVÍDUOS COM PRÉ-DIABETES E DIAGNÓSTICO PRECOCE DO DIABETES_Victor de Barros Serrano Neves.pdf: 1279373 bytes, checksum: 3f0a9241661baab62a2a238069f55542 (MD5) Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2021-12-20T19:52:14Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação_microRNA COMO BIOMARCADORES PARA IDENTIFICAÇÃO DE INDIVÍDUOS COM PRÉ-DIABETES E DIAGNÓSTICO PRECOCE DO DIABETES_Victor de Barros Serrano Neves.pdf: 1279373 bytes, checksum: 3f0a9241661baab62a2a238069f55542 (MD5) Made available in DSpace on 2021-12-20T19:52:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_microRNA COMO BIOMARCADORES PARA IDENTIFICAÇÃO DE INDIVÍDUOS COM PRÉ-DIABETES E DIAGNÓSTICO PRECOCE DO DIABETES_Victor de Barros Serrano Neves.pdf: 1279373 bytes, checksum: 3f0a9241661baab62a2a238069f55542 (MD5) FAPESB Introdução: O diabetes mellitus (DM) é uma doença crônica decorrente de defeitos na produção, secreção ou sinalização da insulina. Pré-diabetes é um estado sem sintomas onde o indivíduo apresenta níveis de glicemia de jejum entre 100 - 120mg/dl e hemoglobina glicada entre 5,7 e 6,5%. Antes definido como um estado latente, atualmente é definido como um período de risco para nefropatia, neuropatia e destruição das células β-pancreáticas. Neste contexto, torna-se relevante a identificação de marcadores biológicos, tais como microRNA (miRNA), para este estado patológico contribuindo para o diagnóstico precoce. Os miRNA são pequenos RNA que não codificam proteínas, mas são considerados importantes reguladores pós-transcricionais. São apontados como potenciais biomarcadores, uma vez que tem seus níveis de expressão alterados em função do desenvolvimento ou do grau de severidade de diversas doenças como diabetes, câncer e esquizofrenia. No presente estudo, visamos identificar um perfil de expressão de miRNA que pode viabilizar o diagnóstico precoce do pré-diabetes. Resultados: Após o levantamento dos transcriptomas publicamente disponíveis em NCBI GEO dataset, um transcriptoma atendeu aos critérios de inclusão deste estudo. A partir deste, foram identificados trinta e três miRNA com perfil de expressão aumentado no grupo pré-diabético em relação ao controle (FC≥1,5 p-valor≤ 0,05) e dois no grupo diabético (FC≥1,5 p-valor≤ 0,05). A rede de interação gerada pelo programa Cytoscape mostrou os miRNAs selecionados e seus alvos diferencialmente expressos no transcriptoma de validação. Cinco destes miRNA apresentaram maiores valores de centralidade na rede de interação miRNA-mRNA (let-7a, Let-7b, miR-106b, miR-93 e miR-17). Estes miRNA apresentaram maior sensibilidade e especificidade para o pré-diabetes (AUC = 0,794). Conclusão: Os cinco miRNA identificados estão envolvidos em diversas vias intracelulares relacionadas à resistência insulínica e destruição das células βpancreática e estão diferencialmente modulados no transcriptoma analisado neste estudo, podendo ser apontados como biomarcadores exploratórios promissores para diagnóstico precoce de DM2. Introduction: Diabetes Mellitus (DM) is a chronic disease due to impairment in insulin signaling, secretion or production. Prediabetes is an asymptomatic state in which subjects fasting glucose is between 100-120mg/dl and glycated hemoglobin is at the range of 5,7-6,5%. Previously defined as a latent state, now it is recognized as a risk factor for nephropathy and neuropathy development, and also for β-cell destruction. In this context, the identification of biological markers that have disrupted expression in pathological states can contribute to an early diagnosis. microRNAs (miRNA) are noncoding RNA, considered important in the post-translation regulation of genes. They are pointed out as potential biomarkers, since their expression level becomes altered due to the development or aggravation of many diseases such as diabetes, cancer, and schizophrenia. The present study aimed to identify a miRNA expression profile able to ensure an accurate early diagnosis of prediabetes. Publicly available transcriptomes were analyzed through bioinformatics tools. Results: After screening conducted at NCBI GEO datasets, one dataset matched our inclusion criteria. From which thirtythree miRNA were significantly upregulated in prediabetic subjects versus control (FC>1,5 p-valor≤ 0,05) and two were upregulated in the diabetic versus control group (FC>1,5 p-valor≤ 0,05). A miRNA-mRNA network was created using the upregulated miRNA and its regulated targets in the validation transcriptome using the Cytoscape software. Five miRNAs presented a greater centrality score from the miRNA-mRNA network. In which two (miR-93 and Let-7a) had better values for sensibility and specificity (AUC =0,829 e 0,824 respectively). Conclusion: The five miRNAs identified are involved in several intracellular pathways related to insulin resistance, destruction of β-pancreatic cells and are differentially expressed in the dataset analyzed in this study, which can be proposed as promising exploratory biomarkers for the early diagnosis of prediabetes.

Submitted by PMBqBM null (pmbqbm@ufba.br) on 2021-11-26T18:55:41Z No. of bitstreams: 1 TESE Pamela S Daltro_PMBqBM UFBA.pdf: 2934190 bytes, checksum: b2daa5b258e251d443e279afc0984d91 (MD5) Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2021-11-29T15:07:25Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TESE Pamela S Daltro_PMBqBM UFBA.pdf: 2934190 bytes, checksum: b2daa5b258e251d443e279afc0984d91 (MD5) Made available in DSpace on 2021-11-29T15:07:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TESE Pamela S Daltro_PMBqBM UFBA.pdf: 2934190 bytes, checksum: b2daa5b258e251d443e279afc0984d91 (MD5) FAPESB Hábitos alimentares com altos teores de gordura e o estilo de vida sedentário são fatores desencadeantes da obesidade, diabetes mellitus tipo 2 (DM2) e insuficiência cardíaca. Células mesenquimais (MSC) surgem como uma ferramenta terapêutica capaz de melhorar o quadro de doenças cardiovasculares, mas também de outras condições degenerativas, devido ao seu efeito regenerativo induzido pela sua ação parácrina. Com base nisso, os fatores secretados no meio condicionado (MC) destas células também são investigados na regeneração tecidual. Este estudo visou avaliar o potencial terapêutico das MSC e do seu MC no tratamento das complicações cardíacas em modelo experimental de obesidade e diabetes induzidas por dieta com alto teor de gordura (HFD). Avaliações bioquímicas, murinométricas e funcionais cardíacas foram realizadas nos períodos: pré-indução da obesidade, pós-indução e póstratamento. Após 36 semanas de uso da HFD, esta foi substituída pela dieta padrão seguida pelo tratamento: MSC, MC e DMEM. A disfunção metabólica foi avaliada através de parâmetros bioquímicos e índice de massa corpórea. A função cardíaca foi avaliada por eletrocardiografia, ecocardiografia e teste ergométrico. A presença de fibrose no miocárdio foi avaliada por análise histopatológica. Os mecanismos de ação da terapia celular foram investigados no tecido cardíaco por qRT-PCR. A caracterização do MC foi realizada por protein array que revelou a presença de 19 proteínas incluindo citocinas e fatores de crescimento. Os camundongos alimentados com HFD apresentaram arritmias cardíacas, expressão alterada de genes cardíacos e fibrose do miocárdio, refletindo na redução da capacidade de efetuar esforço físico. A administração da MSC ou MC reverteu as arritmias e recuperou a capacidade de realizar exercício físico. Na primeira etapa deste estudo, observouse a melhora funcional cardíaca em consonância com a normalização da expressão dos genes GATA4, conexina 43 e COL1A1 nos corações de camundongos tratados com MSC ou MC. A expressão dos genes troponina I, adiponectina, TGF-β1, PPARγ, IGF-1, SOCS3, MMP9 e TIMP1 normalizaram após o tratamento com MSC, mas não com o MC. Além disso, a administração de MSC ou MC reduziu o percentual de área com fibrose. A fim de elucidar a melhora significativa alcançada pelas MSC, na segunda etapa deste estudo, aprofundou-se a investigação dos mecanismos moleculares envolvidos neste efeito terapêutico. Foi investigada a expressão de genes relacionados ao remodelamento tecidual (SPARC, CTGF e SMAD7), à inflamação (CCL2 e CHI3L3), bem como, à sobrevivência e proliferação celular (PTEN e STAT3) por qRT-PCR. Elevados níveis da expressão gênica do SMAD7, SPARC, CTGF, CCL2, CHI3L3, STAT3 e PTEN foram detectados apenas no grupo tratado com MSC. Os resultados apresentados neste estudo sugerem que MSC e CM têm um efeito benéfico sobre os distúrbios cardíacos decorrentes da obesidade e DM2, corroborando com a ação parácrina das MSC através da modulação de elementos envolvidos em processos de regeneração tecidual, tais como desenvolvimento de fibrose. High fat eating habits and sedentary lifestyle are triggering factors of obesity, diabetes mellitus type 2 (DM2) and heart failure. Mesenchymal cells (MSC) appear as a therapeutic tool capable of improving cardiovascular disease, but also other degenerative conditions, due to its regenerative effect induced by its paracrine action. Based on this, the factors secreted in the conditioned medium (CM) of these cells are also investigated in tissue regeneration. This study aimed to evaluate the therapeutic potential of MSC and its CM in the treatment of cardiac complications in an experimental model of obesity and diabetes induced by high fat diet (HFD). Biochemical, murinometric and cardiac functional evaluations were performed in the following periods: pre-induction of obesity, post-induction and post-treatment. After 36 weeks of use of HFD, it was replaced by the standard diet followed by treatment: MSC, MC and DMEM. Metabolic dysfunction was assessed by biochemical parameters and body mass index. Cardiac function was assessed by electrocardiography, echocardiography and treadmill test. The presence of myocardial fibrosis was assessed by histopathological analysis. The action mechanisms of cell therapy were investigated in cardiac tissue by qRT-PCR. CM characterization was performed by protein array which revealed the presence of 19 proteins including cytokines and growth factors. HFD-fed mice had cardiac arrhythmias, altered expression of cardiac genes, and myocardial fibrosis, reflecting the reduced ability to exercise. MSC or CM administration reversed arrhythmias and regained the ability to exercise. In the first stage of this study, cardiac functional improvement was observed in line with normalization of GATA4, connexin 43 and COL1A1 gene expression in the hearts of mice treated with MSC or CM. The expression of troponin I, adiponectin, TGF-β1, PPARγ, IGF-1, SOCS3, MMP9 and TIMP1 genes normalized after treatment with MSC, but not with CM. In addition, administration of MSC or CM reduced the percentage of fibrosis area. In order to elucidate the most significant improvement achieved by MSC, in the second stage of this study, the investigation of the molecular mechanisms involved in this therapeutic effect was deepened. The expression of genes related to tissue remodeling (SPARC, CTGF and SMAD7), inflammation (CCL2 and CHI3L3), as well as cell survival and proliferation (PTEN and STAT3) by qRT-PCR were investigated. High levels of SMAD7, SPARC, CTGF, CCL2, CHI3L3, STAT3 and PTEN gene expression were detected only in the MSC treated group. These results suggest that MSC and CM have a beneficial effect on cardiac disorders due to obesity and DM2, corroborating to the paracrine action of MSCs by modulating elements involved in tissue regeneration processes, such as fibrosis development.