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The formation of microbial biofi lms in materials used in the industrial production of dairy may lead to deterioration of these foods. Yarrowia lipolytica biofi lms are widely found in dairy products and can modify the fi nal characteristics of these products. Thus, this study investigated the effectiveness of hygienization by detergents and sodium hypochlorite on the formation of Y. lipolytica biofi lms in different utensils usually employed during industrial cheese production, like polypropylene, hoses, and nylon/polyethylene. The utensils were sanitized using solutions of mild and alkaline detergents, and sodium hypochlorite, according to the cheese industry Standard Operation Procedure. Results showed that in all coupons there was biofi lm formation with Y. lipolytica isolates. The contact angle measurements were favored to promote the adhesion of the biofi lm in the evaluated surfaces. Even after treatment with sanitizers, a signifi cant survival rate of planktonic cells was observed in all coupons tested. These results indicate that Y. lipolytica biofi lms show a signifi cant ability to adhere to polypropylene, presenting an important impact on the quality of colonial cheese.

A erva-mate (Ilex paraguariensis) é uma espécie nativa da região meridional do Brasil, cujas folhas, após o processamento, são utilizadas como bebida pelas populações do Brasil, Argentina, Paraguai e Uruguai. O objetivo deste trabalho foi verificar a qualidade sanitária da erva-mate processada (presença de bactérias mesófilas, termófilas, bolores, leveduras, Salmonella sp. e coliformes) e avaliar a diversidade microbiana (bactérias e leveduras) nas amostras in natura e após processamento. As coletas das amostras foram realizadas no município de Vargeão, Santa Catarina, Brasil. Foram utilizados métodos oficiais para as contagens de bactérias e fungos, assim como para o isolamento de bactérias e leveduras das folhas e da erva-mate processada. A identificação das bactérias e leveduras foi realizada por meio de testes bioquímicos, fisiológicos e pelo sequenciamento do gene do rDNA de cada amostra. O termófilo mais encontrado tanto na erva-mate processada quanto nas folhas foi o Bacillus licheniformis. Os mesófilos que predominaram nas folhas foram: Pantoea ananatis, Staphylococcus sciuri e S. epidermidis. Já na erva-mate processada os mesófilos mais frequentes foram: Bacillus megaterium, B. amyloliquefaciens e Klebsiella pneumoniae. As principais leveduras identificadas nas folhas foram: Aureobasidium pullulans e Sympodiomycopsis sp. Na erva-mate processada as leveduras identificadas foram: Rhodosporidium kratochvilovae, Rhodotorula mucilaginosa, Sporobolomyces nylandii. Verificou-se que todos os parâmetros microbiológicos para a erva-mate processada atenderam tanto à legislação brasileira vigente, como também aos parâmetros estabelecidos pela Organização Mundial da Saúde. Yerba mate (Ilex paraguariensis) is a native plant of southern Brazil, whose leaves, after processing, are used as a beverage by the population of Brazil, Argentina, Paraguay and Uruguay. This study assessed the sanitary quality of the processed yerba mate (presence of thermophilic and mesophilic bacteria, molds and yeasts, Salmonella sp. and coliforms), and evaluated the microbial diversity (bacteria and yeasts) in leaves and in the processed yerba mate. Samples were collected in a yerba mate plantation field (leaves) and from local shops (processed yerba mate) of Vargeão city, Santa Catarina state, Brazil. Standard methods were used to determine the bacteria and fungi counts, as well as to isolate bacteria and yeasts from leaves and processed yerba mate. Bacteria and yeasts were identified through biochemical and physiological assays, and by rDNA gene sequencing. The main thermophilic bacterium found in both processed yerba mate and leaves was Bacillus licheniformis. The predominant mesophilic bacteria in leaves were Pantoea ananatis, Staphylococcus sciuri and S. epidermidis, while in processed yerba mate the predominant species were Bacillus megaterium, B. amyloliquefaciens and Klebsiella pneumoniae. The yeasts most frequently identified in leaves were Aureobasidium pullulans and Sympodiomycopsis sp., and those identified in the processed yerba mate were Rhodosporidium kratochvilovae, Rhodotorula mucilaginosa and Sporobolomyces nylandii. All microbiological parameters for processed yerba mate were in line with the current Brazilian legislation, as well as with the parameters established by the World Health Organization.

Óleo microbiano pode ser considerado uma fonte de ácidos graxos monoinsaturados (MUFAs) e poli-insaturados (PUFAs). Em trabalhos prévios, foi demonstrado que a levedura Candida zeylanoides QU 33 produziu uma grande quantidade de MUFAs e PUFAs em meio de cultura contendo glicose como fonte de carbono e (NH4 )2 SO4 como fonte de nitrogênio. O presente trabalho objetivou determinar os melhores parâmetros para o acúmulo de lipídeos pela levedura C. zeylanoides QU 33, sabendo-se que a razão carbono nitrogênio (C:N) nos meios de cultivo, assim como o pH e a temperatura de incubação são os parâmetros que mais influenciam a produção de lipídios microbianos. Para a otimização, foi aplicada a Metodologia de Superfície de Resposta, aplicando os níveis das variáveis temperatura (20 a 28 ºC), pH (6,0 a 8,0) e concentração de glicose (8 a 20 % p/v). Apesar de nenhuma das variáveis ter tido influência significativa, houve tendência a um maior acúmulo de lipídeos em altas concentrações do açúcar (acima de 16%), temperaturas medianas (23-26 ºC) e pH neutro. Microbial oil can be considered a source of monounsaturated (MUFAs) and polyunsaturated (PUFAs) fatty acids. Previous research has shown that the yeast Candida zeylanoides QU 33 produces large amounts of MUFAs and PUFAs in culture media containing glucose as carbon source and (NH4)2SO4 as nitrogen source. This study aimed to determine the best parameters for the accumulation of lipids by C. zeylanoides QU 33, knowing that the carbon-to-nitrogen ratio (C:N) in the culture media, as well as pH and temperature, are the parameters that most affect the production of microbial lipids. For optimization, the Response Surface Methodology was applied, using levels of the variables temperature (20-28 ºC), pH (6.0 to 8.0), and glucose concentration (08-20 % w/v). Although no variable showed significant influence, there was a tendency towards lipid accumulation under conditions of high sugar concentrations (above 16%), mid temperatures (23-26º C) and neutral pH.

O uso de óleo microbiano está se tornando uma alternativa ao aumento do custo de óleos vegetais, e podendo ser utilizado para várias aplicações, como a produção de biodiesel e a suplementação de alimentos. Em particular, as leveduras oleaginosas, sendo unicelulares, desprovidas de endotoxinas e adequadas para a fermentação em grande escala, são particularmente atrativas para abordagens biotecnológicas. Este trabalho teve como objetivo identificar, por meio de técnicas moleculares, dezesseis cepas de leveduras e analisar o perfil lipídico e a potencial atividade antimicrobiana do óleo produzido por elas. Todas as cepas foram identificadas como Yarrowia lipolytica, uma promissora produtora de óleo microbiano. Nenhuma atividade antimicrobiana foi encontrada para o óleo analisado, porém, o perfil lipídico dos óleos apresentaram resultados interessantes. Os principais ácidos graxos identificados foram oléico (18:1n9) e linoléico (18:2n6c) e os ácidos graxos em menor quantidade foram o palmítico (C16:0), palmitoléico (C16:1), heptadecanóico (C17:1), esteárico (C18:0) e α -linolênico (C18:3n3). Este último ácido graxo ômega-3 foi identificado em duas cepas (QU22 e QU137), o que pode permitir que o óleo produzido por estas cepas seja utilizado em aplicações alimentares. Além disso, o óleo das demais leveduras oleaginosas analisadas neste estudo parece ser adequado para a produção de biodiesel, uma vez que o seu perfil lipídico é semelhante ao dos óleos vegetais, largamente utilizados para este fim. Microbial oil is becoming an alternative to the increasing cost of vegetable oils, and it can be used for many applications, as biodiesel production and food supplementation. In particular, oleaginous yeasts, being unicellular, devoid of endotoxins, and suitable for large-scale fermentation, are particularly attractive for biotechnological approaches. This work aimed to identify, by molecular analyses, sixteen yeast strains as well as analyze the lipid profile and potential antimicrobial activity of the oil produced by them. All strains were identified as Yarrowia lipolytica, a promising single-cell-oil producer. No antimicrobial activity was found for the oil analyzed, although the lipid profile showed interesting results. The major fatty acids identified were oleic (18:1n9) and linoleic (18:2n6c) and the minor fatty acids were palmitic (C16:0), palmitoleic (C16:1), heptadecanoic (C17:1), estearic (C18:0) and α-linolenic (C18:3n3). This last omega-3 fatty acid was identified on two strains (QU22 and QU137), enabling the oil produced by them to be used for dietary applications. Moreover, the oil of the other oleaginous yeasts analyzed in this study appears to be suitable for biodiesel production, since their lipid profiles are similar to the vegetable oils, widely used for that end.

As infecções causadas por Dipodascus capitatus são raras e de difícil tratamento. Aqui se relata um caso em paciente com leucemia mielocítica aguda. O isolamento fúngico ocorreu a partir de hemocultura e a identificação fenotípica baseou-se em métodos micológicos clássicos; a identificação genotípica foi realizada através do sequenciamento da região D1/D2 do 26 rDNA. Os testes de suscetibilidade foram realizados através do Etest® e microdiluição em caldo. A antifungicoterapia foi ineficaz, registrando-se óbito da paciente no 17° dia após o diagnóstico. Os autores comparam o caso com relatos similares e discutem a emergência destas infecções bem como suas dificuldades diagnósticas e terapêuticas. The infections caused by Dipodascus capitatus are rare, and the treatment is difficult. We reported a case of a patient with acute myeloid leukemia. The fungus was first isolated from hemocultures, and the phenotypic identification was based on mycological methods. The genotyping was carried out by sequencing the region D1/D2 from 26 rDNA. The susceptibility tests were assayed by Etest® and by the microdilution technique. None of the antifungal treatments employed were effective. The patient died on day 17 after the mycological diagnosis. The authors discussed the emergence of such infections as well as the difficulty regarding the diagnosis and treatment.

A cepa Trichosporon japonicum QU139 mostrou atividade antimicrobiana contra vários fungos patogênicos, tendo um bom potencial para o desenvolvimento de um novo agente antimicrobiano. O objetivo do trabalho foi a otimização da produção e detecção do composto antimicrobiano. O efeito antimicrobiano foi avaliado pelo método de poços contra células sensíveis de Cryptococcus gattii C20 em meios GYP e YM em diferentes pH. O meio GYP, em pH 4.5 ± 0.5 e 24h de incubação a 25ºC e 150 rpm, foram definidos como o melhor meio e condições de cultivo. As metodologias empregadas para isolamento e concentração do composto antimicrobiano foram negativas para atividade antimicrobiana, sugerindo que ele possa não ter natureza protéica. A natureza do composto precisa ser mais bem explorada e outras metodologias, especialmente as utilizadas em purificação de glicolipídeos, devem ser empregadas para obter um composto purificado visando aplicações biotecnológicas. Strain Trichosporon japonicum QU139 showed antimicrobial activity against several pathogenic fungi, and has good potential for being used in the development of a new antimicrobial agent. The objective of this work was to optimize the conditions for the production and detection of the antimicrobial compound produced by this strain. The antimicrobial effect was evaluated by the well method against sensitive cells of Cryptococcus gattii C20 in GYP and YM media at different pH values. GYP medium at pH 4.5 ± 0.5 and 24h of incubation, at 25ºC and 150 rpm, were defined as the best medium and cultivation conditions. The methodologies employed for the isolation and concentration of the antimicrobial compound were negative for antimicrobial activity, suggesting that it may not have a protein nature. The nature of the compound needs to be fully explored, and other methodologies, especially the ones for purification of glycolipids, must be employed in order to obtain a purified compound for biotechnological purposes.

The objective of this study was to evaluate the phylloplane of tropical plants as a source of yeasts capable of producing industrially relevant enzymes. A total of 446 yeast and yeast-like strains were isolated from the phylloplanes of Hibiscus rosa-sinensis (Malvaceae), Coussapoa microcarpa (Urticaceae), and species of Ficus (Moraceae) and Bromeliaceae, which were collected in southern Brazil and tested for the production of extracellular enzymes. Esterase activity was predominant (202 strains), while 71 isolates had amylase activity, 170 were caseinolytic, and 72 degraded gelatin. Only three strains were capable of producing all enzymes. The phylloplane appears to be a good substrate to look for and isolate yeasts with enzyme production potential. There were differences in yeast enzyme profiles among the plants analyzed: gelatinase was more common among the isolates from H. rosa-sinensis (36.6%), while esterase was predominant among the isolates from C. microcarpa and the species of Ficus (71.3%). This study suggests the phylloplane as a new potential source of yeasts with industrially interesting properties., O objetivo deste estudo foi avaliar o filoplano de plantas de habitats tropicais como fonte de leveduras capazes de produzir enzimas de relevância industrial. Um total de 446 cepas de leveduras e fungos semelhantes a leveduras foram isoladas do filoplano de Hibiscus rosa-sinensis, bromélias e figueiras, coletadas no Sul do Brasil, e testadas para a produção de enzimas extracelulares. A atividade de esterase foi predominante (202 cepas), enquanto 71 isolados tiveram atividade amilolítica, 170 foram caseinolíticos e 72 degradaram gelatina. Apenas três cepas foram capazes de produzir todas as enzimas. O filoplano parece ser um bom substrato para o isolamento de leveduras com potencial de produção de enzimas. Existiram diferenças nos perfis enzimáticos das leveduras entre as plantas analisadas: gelatinase foi mais comum entre os isolados de H. rosa-sinensis (36,6%), enquanto esterase foi predominante entre os isolados de figueiras (71,3%). Esse estudo chama a atenção para o filoplano como uma nova fonte potencial de leveduras com propriedades de interesse industrial.

O controle de produtos de origem animal está diretamente associado à sanidade animal e à saúde pública. Na suspeita de mastite, tanto bacteriana quanto micótica, o congelamento de amostras de leite permite aumentar o período de tempo para análise microbiológica, permitindo um correto diagnóstico laboratorial. As leveduras são os principais agentes ambientais envolvidos na mastite micótica. O objetivo do presente trabalho foi verificar se o congelamento afeta a recuperação de leveduras potencialmente presentes no leite. Foram utilizados seis isolados: Rhodotorula sp. (L1), Geotrichum sp. (L2), Cryptococcus sp. (L3), Candida tropicalis (L4) e Candida albicans (L5), oriundos de leite in natura, e um isolado de C. parapsilosis (ATCC 22019). Após a inoculação experimental, as amostras foram congeladas durante 10 dias, 3, 6 e 8 semanas. O congelamento do leite por períodos superiores a 10 dias causou redução no número de células viáveis. Sugerimos que sejam utilizados períodos mais curtos de congelamento para a análise micológica do leite. The control of animal products is directly linked to the animal sanity and public health. When suspecting mastitis, either bacterial or mycotic, freezing milk samples increases the period of time for a microbiological analysis, thus allowing a correct laboratorial diagnosis. Yeasts are the main environmental agents involved in mycotic mastitis. The objective of the present work was to verify if freezing affects the recovery of yeasts present in the milk. Six isolates were used: Rhodotorula sp. (L1), Geotrichum sp. (L2), Cryptococcus sp. (L3), Candida tropicalis (L4) and Candida albicans (L5), isolated from milk in natura, and one C. parapsilosis (ATCC 22019) isolate. After experimental inoculation, the samples were frozen during 10 days, 3, 6 and 8 weeks. Milk freezing for periods longer than 10 days caused a reduction in the number of viable cells. We suggest that shorter freezing periods are used for the mycological analysis of milk.

O leite in natura é geralmente considerado um meio ideal para o crescimento de muitos microorganismos devido a sua riqueza nutritiva. Apesar de haver numerosos relatos da ocorrência de leveduras em produtos lácteos em todo o mundo, poucos tentaram determinar a diversidade desses microorganismos em amostras de leite in natura, principalmente no Brasil. Trinta e seis amostras foram coletadas de vinte e cinco produtores localizados em diferentes municípios do Rio Grande do Sul, durante um período de cinco meses. Um total de oitenta isolados foram obtidos e identificados de acordo com a metodologia convencional. Desses, 63 cepas corresponderam a leveduras verdadeiras (51 com afinidade ascomicética e 12 com basidiomicética) e 17 isolados foram reconhecidos como fungos semelhantes a leveduras. A distribuição das leveduras foi desigual entre os produtores analisados. As leveduras mais freqüentes isoladas neste estudo pertencem aos gêneros Kluyveromyces, Rhodotorula, Candida, Geotrichum e Trichosporon. A alta frequência de isolamento de Geotrichum e Trichosporon a partir do leite in natura é preocupante. Cerca de 79% dos nossos isolados foram lipolíticos, enquanto apenas 6% foram proteolíticos. Apesar de não ser esperado que esses microorganismos sobrevivam aos tratamentos de pasteurização / esterilização empregados durante o processamento do leite, sua atividade enzimática pode alterar os constituintes do leite e afetar sua qualidade. Raw milk is generally considered an ideal environment for the growth of many microorganisms because of its nutrient richness. Although there have been numerous reports on the occurrence of yeasts in dairy products in the world, few have attempted to determine the diversity of these microorganisms in samples from raw milk, mainly in Brazil. Thirty six samples were collected from 25 dairy farms located at different districts of Rio Grande do Sul, during a period of 5 months. A total of 80 isolates were obtained and identified according to standard methods. Of these, 63 strains corresponded to true yeasts (51 with ascomycetic and 12 with basidiomycetic affinity), and 17 isolates were recognized as yeast-like strains. Yeast distribution was uneven among the producers analyzed. The most frequent yeasts isolated in this study belong to the genera Kluyveromyces, Rhodotorula, Candida, Geotrichum, and Trichosporon. The high frequency of isolation of Geotrichum and Trichosporon from raw milk is of great concern. Almost 79% of our isolates were lipolytic, while only 6% were proteolytic. Although these microorganisms are not expected to survive the pasteurization/sterilization treatments applied during milk processing, their enzymatic activities may alter milk constituents and affect its quality.

A fermentação é diretamente influenciada por microrganismos presentes no mosto. As ferramentas de biologia molecular têm apresentado grande potencial para a identificação taxonômica de microrganismos e têm se popularizado nos meios científicos e nas empresas de tecnologia que utilizam microrganismos. Saccharomyces cerevisiae é a principal espécie utilizada para o processo de fermentação do mosto para elaboração vinhos. Em vista disso, o objetivo principal deste trabalho é definir o método mais eficiente para discriminar linhagens da espécie Saccharomyces cerevisiae. Foram utilizadas linhagens da Coleção de Microrganismos de Interesse Agroindustrial (CMIA), da Embrapa Uva e Vinho. Avaliaram-se características como habilidade de fermentação, produção de H2S, produção de fator killer efetivo, sensibilidade e neutralidade ao fator killer. Os primers avaliados para discriminar linhagens de Saccharomyces cerevisiae foram os seguintes: M13, (GACA)4, (GTG)5, (GAC)5, OPA-11, primer 28 e os pares δ 2-12 e δ 12-21, associados a técnicas de biologia molecular, dentre elas: RAPD, SSR e retrotransposons Ty. Os resultados serão apresentados por meio de um dendrograma empregando distâncias euclidianas e mostrando o coeficiente de correlação cofenética. Embora as linhagens tenham apresentado valores de evolução de CO2 variados, todas mostraram potencial fermentativo adequado, sem a produção de H2S. Dentre elas, quatro produziram a proteína killer efetiva, duas foram sensíveis e as demais consideradas neutras. A discriminação das linhagens, por outro lado, só foi efetiva no uso dos pares de primer δ 12-21 relacionados com os elementos Ty. O coeficiente de correlação cofenética foi 0,96. Microorganisms present in the grape must influence directly the fermentation process. Molecular biology tools have showed great potential for the taxonomic identification of microorganisms and have become popular in the scientific circles and among the biotechnology companies. Saccharomyces cerevisiae is the main species used for the fermentation process of must for wine making. Therefore, the main objective of this work is to define the most efficient method to discriminate strains of the species Saccharomyces cerevisiae. Strains from the Collection of Microorganisms of Agroindustrial Interest (CMIA), from Embrapa Grape and Wine were utilized. Characteristics such as fermentation ability, H2S formation, and production of effective killer factor, sensitivity and neutrality to the killer factor were evaluated. The primers used to differentiate Saccharomyces cerevisiae strains were the following: M13, (GACA)4, (GTG)5, (GAC)5, OPA-11, primer 28 and pairs δ2- δ12 and δ12- δ21, associated to the molecular biology techniques, among them: RAPD, SSR and Ty retrotransposons. The results are presented through a dendrogram employing Euclidean distances and showing the coefficient of cophenetic correlation. Although the strains presented variation in the CO2 evolution values, they all showed adequate fermentation potential, without the production of H2S. Among the strains, four produced the effective killer protein, two were sensitive and the others were considered neutral. The discrimination of the strains, on the other hand, was only effective using the pairs of primer δ12-δ21 related to the elements Ty. Cophenetic correlation coefficient was 0.96.

A presença de leveduras em ambientes aquáticos, associada à contaminação desses ambientes, tem sido evidenciada com maior frequência nas últimas décadas. A Laguna Tramandaí apresenta como característica a movimentação de nutrientes e de sedimentos, devido a sua ligação com o rio Tramandaí e com a Lagoa do Armazém. Isso faz dela uma região modelo para avaliação do impacto antrópico na diversidade de leveduras ambientais e sua suscetibilidade a agentes antifúngicos. Com base nesses aspectos, o objetivo geral deste trabalho foi avaliar a resistência a agentes antifúngicos em leveduras isoladas da Laguna Tramandaí-RS. Foram selecionadas, então, 16 amostras destas, mantidas na coleção de culturas do Departamento de Microbiologia, Imunologia e Parasitologia da UFRGS, por apresentarem resistência aos agentes antifúngicos em outros estudos do nosso grupo de pesquisa. Inicialmente, essas amostras foram submetidas ao teste de suscetibilidade frente aos antifúngicos azólicos fluconazol (FLZ), itraconazol (ITZ), voriconazol (VCZ), posaconazol (PSZ) e cetoconazol (CTZ), conforme normas e breakpoints estabelecidos pela CLSI (2008 e 2012). Posteriormente, elas foram analisadas na presença de um inibidor de bomba de efluxo, o verapamil (VRP). Cepas M04, M10 e M11 de Candida spp. apresentaram concentrações inibitórias mínimas (CIM) acima dos breakpoints estabelecidos em todos os antifúngicos testados, com exceção do CTZ, enquanto que os demais isolados deste gênero (LT03, M02, M06 e M09) tiveram suas CIM elevadas apenas para FLZ e ITZ. Todos os isolados do gênero Rhodotorula apresentaram altas CIMs frente ao FLZ e ao ITZ, assim como a Yarrowia lipolytica M08. R. taiwanensis LT15 foi sensível apenas ao CTZ. Papiliotrema laurentii LT19, único isolado de Papiliotrema que fez parte das análises, apresentou CIM elevada frente a todos os antifúngicos testados. A adição do inibidor VRP reduziu em 50% a CIM de alguns isolados frente a pelo menos um antifúngico (LT03: CTZ; M01: FLZ; M02: ITZ e CTZ; M09: ITZ e PSZ; M10 e M11: VCZ e CTZ). Outros isolados apresentaram redução igual ou menor que 25% (LT28: CTZ; M02: PSZ; M04:CTZ; M10: FLZ e PSZ). Alguns isolados, mesmo na presença do VRP, apresentaram CIM maiores – tal evento pode ter ocorrido em função do fenômeno trailing. Com isso, o presente estudo sugere que o mecanismo de resistência das leveduras isoladas da Laguna Tramandaí é a presença de bombas de efluxo devido à redução das CIMs em presença do inibidor VRP. In the last decades, the presence of yeasts associated to the contamination of aquatic environments, have been evidenced more frequently. The Tramandaí Lagoon is characterized by the movement of nutrients and sediments, due to its connection with the Tramandaí River and the Armazém Lagoon. It turns the region into a model for the anthropic impact evaluation on the diversity of environmental yeasts and their susceptibility to antifungal agents. Based on these aspects, the main aim of this work was to evaluate the resistance to antifungal agents in isolated yeasts from Tramandaí Lagoon - RS. Sixteen yeast samples isolated from Tramandaí Lagoon were selected, maintained in the cultures collection of UFRGS Department of Microbiology, Immunology and Parasitology, which have showed resistance to antifungal agents in other studies of our research group. First, these samples were tested for susceptibility to azole antifungals as fluconazole (FLZ), itraconazole (ITZ), voriconazole (VCZ), posaconazole (PSZ) and ketoconazole (CTZ) according to standards and breakpoints established by CLSI (2008 and 2012). Thereafter, they were analyzed in the presence of an efflux pump inhibitor called verapamil (VRP). M04, M10 and M11 strains of Candida spp. showed minimal inhibitory concentrations (MICs) above the breakpoints established in all antifungal drugs tested, except for CTZ, while the other isolates belonging to Candida species (LT03, M02, M06 and M09) had their high MICs only for FLZ and ITZ. All isolates of the genus Rhodotorula presented high MICs in front of FLZ and ITZ, as well as Yarrowia lipolytica M08. R. taiwanensis LT15 was sensitive only to CTZ. Papiliotrema laurentii LT19, the only isolate of Papiliotrema that was part of the analysis, presented high MIC compared to all antifungal agents tested. The addition of the VRP inhibitor reduced the MIC of some isolates by 50% against at least one antifungal agent (LT03: CTZ; M01: FLZ; M02: ITZ and CTZ; M09: ITZ and PSZ; M10 and M11: VCZ and CTZ). Other isolates showed a reduction equal to or less than 25% (LT28: CTZ; M02: PSZ; M04: CTZ; M10: FLZ and PSZ). Other samples, even in the presence of VRP, presented higher MICs - this event may have occurred due to the trailing phenomenon. Thus, the present study suggests that the mechanism of resistance of the isolated yeasts of Tramandaí Lagoon is the presence of efflux pumps due to the reduction of MICs in the presence of the VRP inhibitor.

A micorremediação consiste na aplicação de fungos no tratamento de poluentes. Este tipo de biorremediação é apresentada como uma alternativa promissora para o tratamento de efluentes industriais. No processo de manufatura de couro, são produzidos efluentes da etapa de tingimento contendo corantes sintéticos que podem ser uma ameaça para o meio ambiente e para a saúde humana. Neste estudo, a cepa nativa do fungo Trametes villosa SCS-10, foi avaliada por sua capacidade na micorremediação de corantes para couro a partir de soluções aquosas, efluentes de tingimento e matrizes sólidas. Na primeira etapa, foi avaliada a biodescoloração e biodegradação dos corantes Vermelho Ácido 357, Preto Ácido 210 e Azul Ácido 161, em solução aquosa. Em uma segunda etapa, o fungo foi avaliado pelo seu potencial de micorremediação de efluentes reais de tingimento contendo os corantes Vermelho Ácido 357 e Laranja Ácido 142. Nas etapas em meio líquido, a cepa apresentou alta eficiência de biodescoloração, obtendo mais de 90% de remoção de cor para os corantes e efluentes avaliados. Durante o tratamento, T. villosa tolerou altas concentrações de corantes (até 1000 mg L−¹) e uma ampla faixa de pH (4,0 – 8,0). No processo, foram observados picos notáveis de atividade da enzima lacase (até 1550 U L−¹). A inibição da lacase reduz a eficiência de biodescoloração, indicando que a biodegradação enzimática foi a principal responsável pela remoção de cor. Os experimentos in vitro e as análises no espectro visível (UV - Vis) e no infravermelho (FT - IR) confirmaram a ocorrência de biodegradação. No tratamento dos efluentes, T. villosa mostrou mais de 80% de remoção da demanda química de oxigênio e carbono orgânico total, e 50 – 70% de biodetoxificação. Na etapa final, foi avaliada a eficiência de um tratamento combinado, usando adsorção e cultivo em fase sólida, sobre o corante Azul Ácido 161. Biocarvão produzido a partir de resíduos de madeira foi eficiente na adsorção do corante. O corante retido no material foi tratado mediante biodegradação por cultivo em fase sólida com Trametes villosa SCS - 10. A cepa atingiu 91.36 ± 1.32% de biodegradação, associada aos picos de atividade lacase (1000 U L−¹). Os resultados promissores obtidos neste estudo demostraram que o fungo T. villosa SCS – 10 é adequado para o tratamento de efluentes de tingimento de couro. São necessários mais estudos para melhorar a aplicabilidade em grande escala. Mycoremediation refers to the use of fungi in the treatment of pollutants. This kind of bioremediation is presented as a promising alternative for the treatment of industrial wastewaters. In the leather manufacturing process, dye - containing wastewaters are produced, which could be a threat to the environment and human health. In the current study, a native strain of Trametes villosa SCS - 10 was evaluated for its ability in the treatment of leather dyes from aqueous solutions, real wastewaters and solid matrices. In the first step, it was evaluated the biodecolourisation and biodegradation of the dyes Acid Red 357, Acid Blue 161 and Acid Black 210, from aqueous solution. In a second step, the strain was evaluated for its mycoremediation potential over real wastewaters containing Acid Red 357 and Acid Orange 142 dyes. In the liquid media assays, the strain showed high efficiency of biodecolourisation, obtaining more than 90% colour removal for the dyes and effluents assessed. During treatment, T. villosa tolerated high concentrations of dyes (up to 1000 mg L−¹) and a wide pH range (4.0 – 8.0). In the process, remarkable peaks of laccase activity (over 1550 U L−¹) were observed. Inhibition of laccase reduced the colour removal efficiency, indicating that biodegradation was the main responsible for the biodecolourisation. In the in vitro assays, UV – vis and FT – IR analyses confirmed the occurrence of biodegradation via laccase. In the treatment of the wastewaters, T. villosa showed more than 80% of reduction of chemical oxygen demand and total organic carbon, and 50 – 70% of biodetoxification. In the final step, the biodegradation efficiency of a combined treatment, using adsorption and solid - state fermentation, over Acid Blue 161 was evaluated. Wood - chip biochar was efficient in the adsorption of the dye. The retained dye onto the adsorbent was treated by solid state fermentation biodegradation with Trametes villosa SCS-10. The strain reached 91.36 ± 1.32% of biodegradation, related with peaks of laccase activity (1000 U L−¹). The promising results obtained in this study demonstrated that the fungus T. villosa SCS - 10 is suitable for the treatment dye - containing wastewaters from the leather industry. Further studies are needed to improve the applicability on a large scale.

O interesse por leveduras oleaginosas tem crescido muito nos últimos anos, principalmente pela possibilidade do potencial renovável do uso do óleo microbiano para diversas finalidades tais como a produção de biocombustíveis e a aplicação nas indústrias farmacêutica e alimentícia. Entretanto, as metodologias para lise celular e extração do óleo são consideradas etapas críticas e determinantes para a produção em escala industrial. Portanto, este projeto tem por objetivo avaliar diferentes metodologias para a lise celular para a extração de lipídeos das leveduras Yarrowia lipolytica QU21 e Meyerozyma guilliermondii BI281, selecionadas previamente. As duas cepas foram cultivadas em tanque biorreator de 5L em meio à base de glicose e sais inorgânicos, em 120 horas, agitação de 400 rpm e temperatura de 26 ºC. Após o cultivo a biomassa gerada foi submetida a três pré-tratamentos (úmida, seca, liofilizada) e três processos diferentes de extração de lipídeos (Turrax, Sonicador e Braun e bead milling). O tratamento que apresentou o maior percentual de óleo foi a extração com o Sonicador ultrassônico 20% na BI281 em biomassa seca, seguida do Turrax 16% na QU21 em biomassa liofilizada, e o valor de rendimento lipídico menos expressivo foi a extração com o homogenizador Braun e bead milling 4% na BI281 nos três pré-tratamentos (úmida, seca, liofilizada). The interest for oleaginous yeast has grown significantly in recent years, mainly due to the possibility of the renewable potential use of microbial oil for various purposes such as the production of biofuels and the applications in the pharmaceutical and food industries. However, the methodologies for cell lysis and lipids extraction are considered critical and determinant steps for industrial scale production. Therefore, this project aims to evaluate different methods for cell lysis for the oil extraction from Yarrowia lipolytica QU21 and Meyerozyma guilliermondii BI281, previously selected. The two strains were cultivated in a 5L bioreactor tank in glucose and inorganic salts medium for 120 hours, at 400 rpm and temperature of 26ºC. After the cultivation the biomass was submitted to three pre-treatments (wet, dry, lyophilized) and three different lipid extraction processes (Turrax, Sonicador and Braun and bead milling). The treatment with the highest percentage of ruptured cells was the extraction with ultrasonic sonicator 20% in BI281 in dry biomass, followed by Turrax 16% in QU21 in lyophilized biomass, and the least expressive lipid yield was the extraction with the Braun homogenizer and bead milling 4% BI281 in the three biomass pre-treatments (wet, dry, lyophilized).

As leveduras utilizadas na produção de cerveja são principalmente do gênero Saccharomyces. Porém, com o advento do crescimento das microcervejarias, em especial no Brasil, outras espécies e linhagens de leveduras têm se mostrado interessantes, demonstrando potencial em contribuir com o sabor, o perfil aromático da cerveja e as novas exigências do consumidor. Apesar disso, poucos estudos investigam o isolamento de novas leveduras para a produção de cerveja. O objetivo deste estudo foi o isolamento, seleção e caracterização de linhagens de leveduras selvagens com potencial para a produção de cerveja. As leveduras foram isoladas a partir de cinco frutos e selecionadas através de testes de exclusão para fermentação de açúcares, produção de H2S, tolerância ao estresse osmótico e por etanol. O total de 92 isolados foi obtido, resultando em 13 leveduras selecionadas pelos testes de exclusão. As leveduras selecionadas foram identificadas pelo sequenciamento do domínio D1/D2 (LSU rDNA) ou da região ITS1-5.8S-ITS2 e caracterizadas por testes bioquímicos e morfológicos, análise dos compostos voláteis por cromatografia gasosa, análise do perfil de floculação, crescimento em diferentes temperaturas e em etanol, velocidade de fermentação, atenuação aparente e açúcar redutor. A produção de toxina killer foi testada para a avalição de uma futura cultura mista entre CB341 e uma levedura comercial. Por fim, foi realizada a produção de cerveja, seguida pela análise sensorial descritiva realizada por nove avaliadores treinados. Foram identificadas três diferentes espécies (Saccharomyces cerevisiae, Wickerhamomyces anomalus e Kurtzmaniella sp. nov.). As leveduras CL011, PB111, PB113, PA511 (S. cerevisiae) e CB341 (W. anomalus) apresentaram os perfis aromáticos mais interessantes e foram escolhidas para a produção de cerveja. Os resultados deste estudo demonstraram potencial para utilização dos isolados na produção de cerveja. Yeasts used in the production of beer belong to the genus Saccharomyces. However, with the flourishing of the microbreweries, especially in Brazil, other species and strains have proved interesting, demonstrating potential for contributing to the flavor, the aromatic profile of the beer and the new demands of the consumer. Although, few studies investigate the isolation of new yeasts for brewing. The aim of this study was the isolation, selection and characterization of wild strains of yeasts for brewing. Yeasts were isolated from five different fruits and selected from exclusion tests for carbohydrate fermentation, H2S production, tolerance to osmotic and ethanol stress. A total of 92 isolates were obtained, resulting in 13 yeasts selected. Yeasts selected were identified by sequencing the D1/D2 domain (LSU rDNA) or ITS1-5.8SITS2 region and characterized by biochemical and morphological tests, volatile compound analysis by gas chromatography, flocculation profile, growth at different temperatures and in ethanol, fermentation velocity, apparent attenuation and reducing sugar. The production of killer toxin was tested for the evaluation of a future mixed culture between CB341 and a commercial yeast. Finally, the beer production was carried out followed by sensorial analysis by nine well-trained evaluators. Three different species were identified (Saccharomyces cerevisiae, Wickerhamomyces anomalus e Kurtzmaniella sp. nov.). Yeasts strains CL011, PB111, PB113, PA511 (S. cerevisiae) and CB341 (W. anomalus) showed the most interesting aromatic profiles and were chosen for brewing. Results of this study showed potential for utilization of the selected isolates in brewing.

Leveduras oleaginosas possuem a capacidade de sintetizar grande quantidade de lipídeos em suas células, gerando produtos de alto valor agregado através de um processo sustentável. Um perfil de ácidos graxos poli-insaturados é de grande interesse por parte das industrias alimentícia e farmacêutica e têm sido alvo de diversos estudos em relação à sua produção e efeitos benéficos à saúde. O presente trabalho teve como objetivo produzir ácidos graxos poli-insaturados pela levedura Meyerozyma guilliermondii BI281 utilizando glicose, glicerol residual e permeado de soro de queijo como fontes de carbono. Avaliou-se o metabolismo da levedura em meios de cultivo com diferentes composições (“meio A” e “base YM”) e comparou-se o seu desempenho em razões C/N 100: 1 e 50:1. A levedura foi capaz de metabolizar todos os substratos testados e o meio de cultivo “A” com glicerol residual e razão C/N 50:1 mostrou-se o mais adequado, obtendo valores de 5,67 g.L-1 de biomassa e 1,04 g.L-1 de lipídeos, representando aproximadamente 18 % do peso da massa seca de biomassa. Esta condição foi escalonada para biorreator de 2 L, onde condições de aeração e controle de pH puderam ser avaliadas, apresentando quantidade semelhante de lipídeos (1,08 g.L-1) e uma maior produção de biomassa (7,05 g.L-1). Os ácidos graxos sintetizados apresentaram em sua composição ácido láurico (C12:0), ácido mistírico (C14:0), ácido palmítico (C16:0), ácido pamitoleico (C16:1), ácido esteárico (C18:0), ácido oleico (C18:1 n-9), ácido linoleico (C18:2 n-6) e ácido linolênico (C18:3 n-3). Oleaginous yeasts are able to synthesize high amounts of lipids in their cells, producing high added-value products through a sustainable process. Food and pharmaceutical companies have great interest in polyunsaturated fatty acids depending on their profiles and many studies related to their production and health benefits have been carried out. The aim of this study was to produce polyunsaturated fatty acids by the yeast Meyerozyma guilliermondii BI281A using glucose, crude glycerol, and cheese whey permeate as carbon sources. Yeast metabolism was evaluated in different compositions of culture media (“A” and “YM”) and at different C/N ratios (100:1 and 50:1). The yeast was able to assimilate all substrates tested, and medium “A” with crude glycerol as carbon source at a C/N ratio of 50:1 had the most efficient result with biomass production of 5.67 g.L-1 and lipid production of 1.08 g.L-1, which represented 18 % of dry cell weight. This composition was scaled-up to a 2 L bioreactor, where it was possible to measure pH and aeration conditions, and showed similar lipid production (1.08 g.L-1) and higher biomass production (7.05 g.L-1). Fatty acids profile obtained was composed by lauric acid (C12:0), myristic acid (C14:0), palmitic acid (C16:0), palmitoleic acid (C16:1), stearic acid (C18:0), oleic acid(C18:1), linoleic acid (C18:2 n-6), and linolenic acid (C18:3 n-3).

O biodiesel de terceira geração, cuja matéria prima é obtida a partir de microrganismos, é a alternativa promissora para substituir grandes cultivos com finalidade combustível. Os organismos oleaginosos mais estudados são microalgas e leveduras, onde a levedura mostra algumas vantagens que conferem viabilidade e potencial para ser aplicada em nível industrial. Porém, o esforço de triagem de leveduras selvagens com capacidade acumuladora de lipídio não é suficiente e novas metodologias devem ser desenvolvidas para acelerar o processo de seleção. Além disso, a biodiversidade de leveduras do Rio Grande do Sul (Brasil) tem sido pouco explorada, apesar dos relatos na literatura do grande potencial de acúmulo de lipídios em leveduras da região. Neste sentido, o objetivo principal desta tese foi avaliar a habilidade de acumulação de lipídios em leveduras de uma coleção, cujas fontes de isolamento foram (1) estruturas de plantas bromélias do parque Itapuã (Viamão, RS), e (2) plantas macrófitas associadas a marismas da lagoa dos Patos, Rio Grande (RS). De 55 leveduras recuperadas e avaliadas, quatro linhagens mostraram capacidade oleaginosa a partir de determinação gravimétrica, observação em microscopia de fluorescência e leituras de cinética do acúmulo de lipídios usando intensidade de fluorescência. Três linhagens foram identificadas como Papiliotrema flavescens (BI281, BI283, BI296) e uma linhagem como Vishniacozyma sp. BI237. Estas espécies são descritas pela primeira vez como oleaginosas. Foi testado o corante fluorescente 2-(1,3-benzothiazol-2-yl)-5-(N,N-dyethylamino)phenol, denominado nessa tese como “Gaúcho Dye (GD)”. Este corante foi comparado com o vermelho de Nilo em duas leveduras oleaginosas e uma levedura não oleaginosa. Os resultados sugerem que o corante GD é lipofílico, marca fluorescência nas gotas lipídicas, e em espectrofluorimetria mostra duas bandas de emissão, o que é relacionado com a sua natureza química. O mecanismo de transferência de protons intramolecular no estado excitado (ESIPT em inglês) pode ser evidenciado de acordo com o solvente empregado e células com acúmulo de lipídios. Os resultados sugeriram a segunda banda de emissão com maior afinididade lipofílica à molécula. Por tudo isso, as propriedades espectroquímicas são vantajosas quando comparadas com o vermelho de Nilo, principalmente pela sua fotoestabilidade. Assim, esta tese envolveu a ampliação da lista de leveduras relatadas como acumuladoras de lipídios, a otimização da produção de lipídios em P. flavescens BI281 e obtenção do seu perfil lipídico. P. flavescens BI281 está sendo proposta como matéria prima para produção de biodiesel. Além disso, um novo corante para marcação de leveduras oleaginosas com propriedades fotoquímicas melhoradas foi avaliado. Third generation biodiesel, where the feedstock are oleaginous microorganisms, is an promissor alternative to replace vegetable crops to produce fuel. The most studied oleaginous organisms are microalgae and yeasts, where yeast showed advantages that offer economic viability and potential to be applied in industry. However, the effort of native yeast screening with lipid-accumulating ability is not enough, and new methodologies should be developed to accelerate the selection process. Moretheless, the yeast biodiversity in Rio Grande do Sul (Brazil) had been little explored besides reports literature of great potential lipid-accumulating ability in yeasts of the region. In this sense, the objective of this thesis was to assess the lipid-accumulating ability in our yeast collection, with focus in two isolation sources: (1) bromeliads plants and structures from Itapuã park (Viamão, RS), and (2) macrophyte plants associated to a marshland in “lagoa dos Patos”, Rio Grande (RS). From 55 recovered and assessed yeasts, four strains showed oleaginous ability using gravimetric determination, observation in fluorescence microscopy and fluorescence kinetics readings. Three strains were identified as Papiliotrema flavescens (BI281, BI283, BI296) and the other one as Vishniacozyma sp. BI237. These species are described for first time as oleaginous in this Thesis. We tested the fluorescent dye 2-(1,3-benzothiazol-2-yl)-5-(N,Ndyethylamino) phenol, and was called “Gaúcho Dye (GD)”. This dye was compared to Nile red in two oleaginous strains and one non-oleaginous strain. Our results suggested that “GD” dye is lipophilic, stain lipid droplets, presents ESIPT property only in presence of oleaginous yeast and showed advantageous characteristics when compared to Nile red., being photostable. Therefore, this thesis involved list expansion of novelty oleaginous species, optimization of lipid production in P. flavescens BI281 and obtained their lipid profile. P. flavescens BI281 is proposed as feedstock for biodiesel. Furthermore, a new fluorescent dye to stain oleaginous yeasts, called GD, with improved photochemical properties, was assessed.

Microorganisms are the more successful life form in the oceans, but little is known about the Fungi kingdom. In this environment, marine invertebrates are considered important microorganisms reservoirs and half the wealth of yeast that have been isolated from these invertebrates are associated with their tissues. Knowledge about that diversity is important to investigate ecological relationships and the potential that yeasts may have in biotechnology. The objective of this study was to isolate and identify cultivable yeasts associated with cnidarians belonging to Zoanthidae family. Samples of three species of soft corals, Palythoa variabilis, Palythoa caribaeorum and Zoanthus sociatus, were collected in the Ponta Verde coral reef and sandstone reef Sereia in 2014 and 2015. The samples were washed with steril sea water, macerated, diluted, plated on Wickerham's YM culture medium and incubated for up to 26 days at 22-25 ⁰C. The yeasts were stored in inclined agar GYMP covered with mineral oil maintained at a temperature of -4 °C and in microtubes containing modified YM medium at a temperature of -20 °C. The isolates had genomic DNA extracted and the region D1 / D2 LSU rDNA sequenced. A hundred thirty-nine isolates were obtained, with a prevalence of 67,62% of yeast belonging to the phylum Ascomycota within this phylum, the order Saccharomycetales was the most represented among the isolated. Basidiomycetes had the prevalence of a single order for the sandstone reef Sereia, already in Ponta Verde main orders were Microbotryomycetes and Tremellomycetes. A total of 18 of the 38 yeast species were classified as a new occurrence for the marine environment. The prevalence of the ascomycetous subphylum Saccharomycotina can be explained by being more tolerant species to environmental stress caused by the large input of organic matter derived from the urban environment that the reef gets. And can be influencing the presence of yeast with human pathogenic potential, where 84% identified isolated have this potential. Through data analysis, it is concluded that there are more species of yeast in association with marine cnidarians to be reported, including new species. As the cultivation technique is not capable of scanning all yeast species associated with soft corals during the sampling period, the sampling should be continued. Thus, the sampling should be continued in order to know the real wealth of species of cultivated yeasts in this habitat. CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico FAPEAL - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Alagoas Os micro-organismos são a forma de vida mais bem sucedidas dos oceanos, mas pouco é conhecido sobre o reino Fungi. Nesse ambiente, os invertebrados marinhos são considerados como importantes reservatórios de micro-organismos e metade da riqueza de leveduras que já foram isoladas desses invertebrados estão associadas ao seus tecidos. Conhecer essa diversidade é importante a fim de investigar relações ecológicas e o potencial que essas leveduras possam vir a ter na área de biotecnologia. O objetivo do trabalho foi isolar e identificar leveduras cultiváveis associadas a cnidários pertencentes a família Zoanthidae. Amostras de três espécies de corais moles: Palythoa variabilis, Palythoa caribaeorum e Zoanthus sociathus, foram coletadas no recife de coral da Ponta Verde e no recife de arenito da Sereia entre os anos de 2014 e 2015. As amostras foram lavadas com água do mar estéril, maceradas, diluídas, semeadas em meio de cultura Wickerham’s YM e incubadas por até 26 dias a 22-25⁰C. As leveduras foram estocadas em meio Ágar GYMP inclinado coberto com óleo mineral mantidas a uma temperatura de -4 ºC e também em meio YM modificado a uma temperatura de -20 ºC. Os isolados tiveram o DNA genômico extraído e a região D1/D2 LSU rDNA sequenciada. Foram obtidos 139 isolados, com prevalência de 67,62% de leveduras pertencentes ao filo Ascomycota, dentro desse filo a ordem Saccharomycetales foi a mais representada entre os isolados dos dois pontos. Quanto aos basidiomicetos não houve a prevalência de uma única ordem para o recife de arenito da Sereia, já na Ponta Verde as principais ordens foram Microbotryomycetes e Tremellomycetes. Um total de 18 das 38 espécies de leveduras encontradas foram classificadas como nova ocorrência para o ambiente marinho. A prevalência de ascomicetos do subfilo Saccharomycotina pode ser explicada por serem espécies mais tolerantes ao estresse ambiental causado pelo grande aporte de matéria orgânica oriundo do ambiente urbano que o recife recebe. O que pode influenciar na presença de leveduras com potencial patogênico humano, onde 84% dos isolados identificados apresentam esse potencial. Através da análise dos dados, concluiu-se que existem mais espécies de leveduras em associação aos cnidários marinhos a serem relatadas. A técnica de cultivo não foi capaz de inventariar todas as espécies de leveduras associadas aos corais moles durante o período de amostragem. Sendo assim, a amostragem deve ser continuada a fim de conhecer a real riqueza de espécies de leveduras cultiváveis nesse habitat.

O couro é um produto que tem uma crescente demanda mundial. O Brasil possui o maior rebanho comercial bovino do mundo, sendo um dos principais produtores e exportadores de couro a nível mundial. Assim, esse setor é um dos motores da economia do país. No estado do Rio Grande do Sul, essa indústria tem particular importância no desenvolvimento socioeconômico da região. No processo produtivo, a etapa de tingimento é importante para o acabamento do produto, empregando-se uma variedade de corantes para conferir cor uniforme e tonalidade de interesse aos artigos. No entanto, apenas uma porcentagem do corante fixa-se no couro, e uma quantidade residual fica no efluente. Nos ecossistemas, os corantes podem virar uma ameaça para o meio ambiente e a saúde humana. Os tratamentos físicos e químicos usuais desses efluentes são muitas vezes caros e complexos e têm limitações para o tratamento de certos compostos que, algumas vezes, não são totalmente removidos. Isso pode gerar problemas ambientais posteriores. No presente estudo, foi avaliado o potencial de fungos de podridão branca coletados na cidade de Santa Cruz do Sul, RS, para descolorir corantes para couro. O isolado SC10, caracterizado morfologicamente dentro do gênero Trametes, demonstrou a sua capacidade para produzir enzimas ligninolíticas extracelulares e para descolorir quatro corantes em meio sólido. Numa avaliação secundária em meio de cultura líquido, o isolado removeu 96,07 ± 0,56%, 90,96 ± 0,49%, 83,90 ± 0,57% e 95,88 ± 0,61% dos corantes Azul 161, Marrom 414, Preto 210 e Vermelho 357, respectivamente. Ensaios adicionais com o corante Vermelho 357, realizados para elucidar os mecanismos de descoloração, mostraram níveis notáveis de lacase durante o tratamento (2327,4 ± 144,0 UL-1), o que sugere o envolvimento dessa enzima na remoção do corante. Contudo, o mecanismo de biossorção também esteve associado à descoloração. Avaliações do efeito das condições operacionais mediante métodos monovariáveis demonstraram que os melhores rendimentos de descoloração obtiveram-se com maior agitação, 150-200 rpm, menor concentração de corante, 100-300 mg L-1, e na faixa de temperatura entre 25 a 30 Cº. O pH ideal esteve na faixa de 4,5 a 5,5, entretanto, um pH alcalino não influenciou nos rendimentos de descoloração. O uso de um planejamento experimental Delineamento Composto Central Rotacional e a aplicação da Metodologia de Superfície de Resposta, confirmaram os efeitos significativos da temperatura, da agitação e da concentração inicial de corante. A aplicação do ponto ótimo (25 °C, 100 mgL-1 de corante, pH 4,5 e 200 rpm) permitiu atingir 96,58 ± 0,61% de descoloração e 2549,63 ± 61,49 UL-1 de atividade lacase. Finalmente, o isolado SC10 foi identificado como Trametes villosa, mediante uma análise molecular da região ITS1-5.8S-ITS2. Esse fungo é considerado um bom candidato para o tratamento de águas residuais poluídas com corantes e banhos de tingimento da indústria coureira. Leather is a product with growing global demand. Brazil has the largest herd in the world and is one of the leading manufacturers and exporters of leather in the world. So this sector is an economic engine for this country. In State of Rio Grande do Sul, this industry has particular importance in the socioeconomic development of the region. Dyeing is an important step in leather manufacture process, in which different classes of dyes are used to provide a uniform color and a variety of hues in the product. However, many dyes suffer from incomplete exhaustion and a portion does not get fixed to the leather and is discharged with the effluent, which can become a threat to the environment and human health. Dye-containing wastewater is regularly treated by chemical and physical-chemical treatment processes but, due to the low biodegradability of dyes, these systems are usually complex, increase costs and/or present limited applicability. Sometimes, the dyes are not totally removed or degraded, which can lead to further environmental problems. Hence in the present study, an attempt has been made to assess the potential of native white-rot fungi, collected in Santa Cruz do Sul – RS, to decolorize tannery dyes. An isolate, strain SC10, was identified as a member of genus Trametes based on the morphological characteristics. In a first screening, this strain showed their ability to produce extracellular ligninolytic enzymes and decolorize four leather dyes in solid medium. In a secondary screening in liquid culture, the isolated removed 96.07 ± 0.56%, 90.96 ± 0.49%, 83.90 ± 0.57% and 95.88 ± 0.61% of Acid Blue 161, Acid Brown 414, Acid Black 210 and Acid Red 357, respectively. Additional tests with Acid Red 357, conducted in order to elucidate the mechanism involved in the dye decolorization process, showed remarkable levels of laccase activity (2327.4 ± 144.0 UL-1), suggesting the involvement of this enzyme on dye removal. However, the mechanism of biosorption was also associated with the decolorization process. Assessments of the effects of operating conditions, by single-variable method, indicated that the higher decolorization was reached with initial dye concentration at 100-300 mgL-1, pH at 4.0-5.0, temperature at 25-30 °C and agitation speed at 150-200 rpm. These, except initial pH, were all found to be important from dye removal. Actually, alkaline pH values did not affect the decolorization. Additionally, these operational factors were studied and optimized by using a Central Composite Design (CCD) and Response Surface Methodology (RSM). The maximum decolorization of 96,58 ± 0,61% and laccase activity of 2549,63 ± 61,49 UL-1 were obtained at optimum conditions: concentrations initial of dye 100 mgL-1, pH 4,5, temperature 25 °C and agitation 200 rpm. Further, the SC10 strain was identified as Trametes villosa based on ITS2-ITS1-5.8S rDNA gene sequence analysis. This fungus is considered a good candidate for the treatment of dye polluted wastewater from leather industry.

Os vinhedos estão entre as formas mais intensivas de plantio e a diversidade de leveduras associadas a estes vinhedos ainda não foram caracterizadas e, informações concernentes à ecologia e diversidade ainda é limitada. Neste contexto, o trabalho tem como objetivo estudar a diversidade e riqueza de leveduras associadas a regiões produtoras de vinho, selecionar linhagens do gênero Saccharomyces com fenótipos desejáveis para vinificação. As leveduras foram isoladas de três vinhedos localizados em Pinheiro Preto, Serra do Marari e Campos Novos no sul do Brasil. Em Pinheiro Preto, o mais antigo, foi coletado 20 pontos localizados nos vinhedos e na cantina para um estudo transversal, nos outros dois vinhedos foram coletados cachos de uvas. Após o isolamento em meio enriquecido (YPD), foram incubados por 48 horas a 28°C. Foi utilizado um procedimento de triagem consistindo de agrupamento de leveduras com o mesmo perfil obtido com (GTG)5 MSP-PCR fingerprinting, seguido de identificação por sequenciamento do domínio D1/D2 (LSU rDNA) ou região ITS1-5.8S-ITS2 de um ou alguns representantes selecionados de cada grupo de leveduras, porém espécies não relacionadas foram agrupados em um mesmo grupo. Resultando em sensibilidade alta e especificidade baixa de (GTG)5 MSP-PCR fingerprinting. Para análise da biodiversidade e riqueza de espécies foram sequenciados 106 linhagens identificadas em 22 espécies. Os índices de estimativas de riqueza aplicados variaram entre as espécies para cada vinhedo (ICE1, ACE, Jackknife 2, Bootstrap, p

Para melhor compreender o papel dos micro-organismos nas doenças da cavidade bucal, é necessário inicialmente avaliar a diversidade microbiana naturalmente existente em indivíduos saudáveis, além de sua distribuição espacial na cavidade bucal. Muitos estudos são conduzidos elucidando o papel do biofilme e das bactérias na saúde bucal, porém poucas pesquisas focaram na atuação das leveduras. Neste sentido, o objetivo do presente trabalho foi avaliar a diversidade e distribuição de leveduras do gênero Candida na microbiota bucal de indivíduos saudáveis. Foram coletadas amostras da boca pacientes adultos saudáveis. Foram obtidas amostras de 9 diferentes habitats da boca: bochechas direita e esquerda, assoalho da boca, palato, língua dorsal, língua ventral, dente molar, vestíbulo labial e saliva. Foram avaliados 100 pacientes com uma média de 28 dentes. Quarenta e nove indivíduos apresentaram leveduras na sua microbiota bucal. Candida albicans foi o micro-organismo mais prevalente (49%), seguido de Candida krusei, Candida parapsilosis, Meyerozyma guilliermondii (C. guilliermondii), Candida glabrata, Candida tropicalis e Candida dubliniensis. A associação das leveduras encontradas e os habitats bucais sugeriu que comunidades leveduriformes podem distinguir-se entre os diferentes tecidos da cavidade bucal. A língua (dorsal e ventral) apresentou colonização específica, caracterizada pelas espécies C. tropicalis e C. dubliniensis. De forma semelhante, a microbiota dos habitats revestidos por mucosa foi análoga. A microbiota da língua e dos tecidos duros assemelhou-se entre si em menor intensidade. Estes resultados introduzem a dimensão espacial desta diversidade microbiana que vem sendo estudada, complementando as informações obtidas nos estudos do microbioma humano. To better understand the role of microorganisms in the diseases of the oral cavity, first it is necessary to evaluate the natural microbial diversity in healthy individuals, as well as their spatial distribution in the oral cavity. Many studies are conducted elucidating the role of biofilms and bacteria in oral health, but few research has focused on the yeast’s performance. In this sense, the objective of this study was to evaluate the diversity and distribution of Candida species in the oral microbiota of healthy individuals. Samples were colleted from the mouth of healthy adults. Samples of 9 different mouth habitats were obtained: right and left cheeks, floor of the mouth, palate, dorsal tongue, ventral tongue, molar tooth, labial vestibule and saliva. We evaluated 100 patients with an average of 28 teeth. Forty-nine subjects had yeasts in their oral microbiota. Candida albicans was the most prevalent microorganism (49%), followed by Candida krusei, Candida parapsilosis, Meyerozyma guilliermondii (C. guilliermondii), Candida glabrata, Candida tropicalis and Candida dubliniensis. The association found between the yeasts and oral habitats suggested that communities can be distinguished by the different tissues of the oral cavity. The tongue (dorsal and ventral) presented specific colonization, characterized by the species C. tropicalis, and C. dubliniensis. Similarly, the microbiota of the mucous habitats was similar. The microbiota of the tongue and hard tissue resembled each other in a lesser degree. These results introduce the spatial dimension of the microbial diversity that has been studied, complementing the information obtained in the human microbiome research.

Marismas são ecossistemas úmidos costeiros de alta produtividade oriunda da decomposição das macrófitas que cobrem estes ambientes. O presente estudo avaliou a diversidade e o potencial biotecnológico das leveduras associadas aos detritos de Scirpus maritimus, Spartina alterniflora e Spartina densiflora numa marisma da Lagoa dos Patos/RS. A decomposição foi analisada aos 7, 14, 40, 100 e 220 dias pelo método de “litter bags”. As contagens variaram entre 2,3 e 6,36 log UFC leveduras.g-1 de detrito, observando-se um crescimento da comunidade até os 40 dias, com um posterior declínio até os 220 dias. S. alterniflora foi a macrófita melhor decomposta: o peso dos detritos reduziu-se em 62% ao final do estudo. As taxas de decomposição foram maiores na fase tardia (100 e 220 dias), mas não estiveram associadas a um aumento da quantidade ou diversidade de leveduras, embora algumas enzimas testadas tenham sido mais ativas neste período. Os 106 isolados de leveduras foram representados por 22 grupos distintos: S. densiflora apresentou a maior riqueza de espécies (n = 15), enquanto as outras macrófitas apresentaram 12 espécies cada uma. Acremonium sp., Aureobasidium pullulans, Bullera pseudoalba, Rhodotorula mucilaginosa, Sporobolomyces ruberrimus e Yarrowia lipolytica foram as principais espécies encontradas. Uma possível nova espécie de Tremella foi isolada. A composição específica variou conforme a macrófita e os tempos de decomposição. A atividade lipolítica foi verificada em todos os isolados. Os índices mais expressivos foram exibidos pelas lipases de Basidiomycota e celulases de A. pullulans, principalmente aos 7 e 14 dias de decomposição. Salt marshes are coastal wet ecosystems of high productivity originated from the decomposition of macrophytes covering these environments. The present study assessed the diversity and biotechnological potential of yeasts associated with debris of Scirpus maritimus, Spartina alterniflora and Spartina densiflora in a salt marsh of the Patos Lagoon/RS. The decomposition was analyzed at 7, 14, 40, 100 and 220 days through the method of litter bags. Counts ranged between 2.3 and 6.36 log CFU yeasts.g-1 detritus, noticing a growing community until the 40th day, with a subsequent decline at the 220th day. S. alterniflora was the most decomposed macrophyte: the weight was reduced by 62% at the end of the study. The decomposition rates were higher in late stage (100 and 220 days), but they were not associated with an increased yeast counts or diversity, although some enzymes tested were more active during this period. The 106 yeast isolates were represented by 22 different groups: S. densiflora showed the highest species richness (n = 15), while the other macrophytes had 12 species each. Acremonium sp., Aureobasidium pullulans, Bullera pseudoalba, Rhodotorula mucilaginosa, Sporobolomyces ruberrimus and Yarrowia lipolytica were the main species found. A possible new species of Tremella was isolated. Species composition varied according to macrophyte and time of decomposition. The lipase activity was observed in all isolates. Most significant indexes were displayed by lipases from Basidiomycota and cellulases of A. pullulans, especially at 7 and 14 days of decomposition.

A erva-mate (Ilex paraguariensis Saint Hillarie) é uma espécie nativa da região meridional do Brasil, cujas folhas, após o processamento, são utilizadas como bebida pelas populações do Brasil, Argentina, Paraguai, Uruguai e outros países da América do Sul. O objetivo deste trabalho foi verificar a presença de bactérias mesófilas, termófilas, bolores, leveduras e a diversidade de bactérias e leveduras nas amostras in natura e após processamento. Também de verificar a qualidade sanitária na erva-mate já processada. As coletas das amostras foram realizadas de janeiro a junho de 2013, no município de Vargeão, Santa Catarina. Foram utilizados os métodos oficiais de análises de alimentos da Association of Analytical Communities e do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento. O termófilo mais encontrado tanto na erva-mate processada quanto nas folhas foi o Bacillus licheniformis. Os mesófilos que predominaram nas folhas foram: Pantoea ananatis, Staphylococcus sciuri e Staphylococcus epidermidis. Já na erva-mate processada os mesófilos mais frequentes foram: Bacillus megaterium, Bacillus amyloliquefaciens e Klebsiella pneumoniae. As principais leveduras identificadas nas folhas foram: Aureobasidium pullulans e Sympodiomycopsis sp. Dois isolados do gênero Sympodiomycopsis foram sequenciados e trata-se de uma nova espécie. Na erva-mate processada as leveduras identificadas foram: Rhodosporidium kratochvilovae, Rhodotorula mucilaginosa, Sporobolomyces nylandii. E verificou-se que todos os parâmetros microbiológicos para a erva-mate processada atenderam tanto à legislação brasileira vigente, como também aos parâmetros estabelecidos pela Organização Mundial da Saúde. Yerba mate (Ilex paraguariensis Saint Hillarie) is a native species of the southern region of Brazil, whose leaves, after processing, are mainly used as a beverage by Brazilian, Argentine, Paraguayan and Uruguayan people. The purpose of this work was to verify the presence of thermophilic and mesophilic bacteria, molds and yeasts, and microbial diversity in leaves and in the products ready for the consumption and to determine the sanitary quality in processed yerba mate. The collection of the samples was carried out from January to June 2013, in the city of Vargeão, Santa Catarina, Brazil. Official methods of analysis of foods of the Association of Analytical Communities and of the Ministry of Agriculture, Livestock and Supply were used. The mainly thermophilic bacteria found in yerba mate and leaves were Bacillus licheniformis. The mesophilic bacteria that predominated in leaves were: Pantoea ananatis, Staphylococcus sciuri and Staphylococcus epidermidis. In yerba mate the most common mesophilic bacteria were: Bacillus megaterium, Bacillus amyloliquefaciens and Klebsiella pneumoniae. The main yeast identified in the leaves were Aureobasidium pullulans and Sympodiomycopsis sp. Two isolates of the genus Sympodiomycopsis were a new species. The yeasts identified in the yerba mate were: Rhodosporidium kratochvilovae, Rhodotorula mucilaginosa and Sporobolomyces nylandii. And it was found that all microbiological parameters for processed yerba mate attended both the current Brazilian legislation, as well as parameters established by the World Health Organization.

Ésteres produzidos por via biotecnológica são considerados e classificados como naturais e sua demanda tem aumentado. Várias leveduras podem produzir ésteres e seu método de seleção é altamente importante para inúmeros tipos de indústrias. Trinta e quatro cepas de leveduras, isoladas de vinhos tintos em barris de carvalho elaborados na Serra Gaúcha e de queijos artesanais do Sul do Brasil, foram utilizadas neste trabalho. Cada cepa foi inoculada na superfície de meio sólido inclinado rico em glicose e nitrogênio, diretamente no frasco utilizado para a microextração em fase sólida (SPME) seguida pela injeção num cromatógrafo gasoso com detecção por espectrometria de massas (GC/MS) e quantificação utilizando detector de ionização de chama (GC-FID). O método foi desenvolvido e validado, sendo que a fibra DVB/PDMS/CAR, temperatura de extração de 80˚C e 20 minutos de aquecimento da amostra antes da extração foram as condições ótimas estabelecidas. A metodologia de superfície e resposta foi usada para a otimização da produção de acetato de etila pela levedura Zygosaccharomyces bailii BCV 08, e um planejamento fatorial 22 foi aplicado para determinar as melhores condições de temperatura de cultivo (X1, 20 até 36 ˚C) e agitação (X2, 0 a 200 rev/min). Os melhores resultados foram obtidos com a temperatura de 28 ˚C e 0 rev/min, onde houve um aumento de 60% na produção de acetato de etila. Foram avaliados os efeitos das fontes de carbono (glicose e frutose) e do mosto de uva sobre a produção de acetato de etila. A máxima concentração de acetato de etila produzida foi de 71,11 mg/L, utilizando o mosto de uva como meio. Experimentos utilizando biorreatores de 4L levaram à produção máxima de 133,74 mg/L de acetato de etila, 14,57 mg/L de hexanoato de etila, 4.093,74 mg/L de octanoato de etila e 3.775,28 mg/L de decanoato de etila. Esters produced by biotechnological means are legally labeled as natural and there is an increasing demand for these products. Several yeasts can accumulate esters, and their selection is highly interesting for many industries. Thirty-four yeast strains isolated from red wine oak barrels of Serra Gaúcha winemaking region and from homemade cheeses of Southern Brazil were used in this research. The yeasts were inoculated in agar slants of a solid medium rich in glucose and nitrogen, directly inside the extraction transparent glass vials, using a headspace solid phase microextraction (SPME) method followed by injection of gas chromatography with mass spectrometric detection (GC/MS), and quantification by flame ionization detector (GC/FID). The analytical method was developed and validated, and the DVB/PDMS/CAR fiber, extraction temperature of 80˚C, and 20 minutes of sample heating time volatilization prior to the extraction step were the best conditions. A response surface methodology was used to optimize the production of ethyl acetate by Zygosaccharomyces bailii BCV 08, which was selected, and a 22 full factorial central composite design was applied to determine the best conditions for the cultivation temperature (X1, 20 to 36 ˚C) and stirring speed (X2, 0 to 200 rev/min). The best results were found with temperature of 28 ˚C and medium agitation of 0 rev/min, with a 60% increase in ethyl acetate production. We evaluated the effect of the carbon sources (glucose and fructose) and grape must on ethyl acetate formation; the maximal yield was reached with grape must and the highest concentration of ethyl acetate produced was 71.11 mg/L. Employing experiments on bioreactors of 4L, it was possible to improve the esters production by this yeast; a maximal production of 133.74 mg/L of ethyl acetate, 14.57 mg/L of ethyl hexanoate, 4093.74 mg/L of ethyl octanoate, and 3775.28 mg/L of ethyl decanoate was reached.

Atualmente o óleo microbiano está sendo intensivamente estudado com a intenção de suprir o mercado que o consome, principalmente tendo um grande interesse no emprego como uma fonte alternativa de biocombustível, sendo limpa e renovável. Com o objetivo de otimizar a produção do óleo microbiano, o presente trabalho avaliou a produção de biomassa, lipídeos e composição de ácidos graxos da levedura Candida zeylanoides QU 33 quando cultivada em diferentes fontes de carbono (lactose, glicose, glicerol e xilose), nitrogênio (sulfato de amônio, nitrato de amônio, peptona e extrato de levedura), assim como diferentes condições de cultivo (temperatura, agitação, pH e razão carbono/nitrogênio). Este trabalho também apresenta uma técnica de triagem de acumulo de lipídeo intracelular, com a metodologia do Vermelho de Nilo, na qual as células boas acumuladoras de lipídeo emitiram fluorescência amarelo-ouro. A composição de ácidos graxos do óleo produzido pela C. zeylanoides QU33 quando cultivada em glicose com diferentes fontes de nitrogênio apresentou potencial na utilização como matéria prima tanto para o biodiesel quanto para indústria de alimentos. O uso combinado de glicose com sulfato de amônio pela C. zeylanoides QU33 resultou na produção de óleo com elevado teor de ácidos graxos poli-insaturados. Feita a triagem dos fatores que mais interferiram na produção do óleo microbiano, foi delineado um modelo experimental usando a metodologia de superfície de reposta a fim de otimizar a produção de lipídeo intracelular por esta levedura. Currently, microbial oil is being intensively studied aiming to suply the consumer market, especially with a great interest in its use as an alternative source of biofuel, clean and renewable. Aiming the optimization of the production of microbial oil, in the present work it was evaluated the production of biomass, lipids and the fatty acid composition of the yeast Candida zeylanoides QU 33 when cultivated with different carbon sources (lactose, glucose, glycerol and xylose), nitrogen (ammonium sulfate, ammonium nitrate, peptone and yeast extract), as well as different culture conditions (temperature, shaking speed, pH and carbon/nitrogen ratio). A new screening methodology for the evaluation of intracellular lipid accumulation is also presented, using Nile Red, in which the cells that are good lipid producers present a golden-yellow fluorescence. The fatty acid composition of the oil produced by C. zeylanoides QU33 cultivated in glucose and different nitrogen sources presented potential for use as raw material for biodiesel production or at the food industry. The combined use of glucose and ammonium sulfate by C. zeylanoides QU33 resulted in the production of oil with elevated levels of polyunsaturated fatty acids. After the evaluation of the factors that mainly interfered in the production of microbial oil, an experimental model was designed using the response surface methodology for optimization of the production of intracellular lipids by this yeast.

Marismas são ecossistemas entremarés altamente produtivos que suportam grandes variações de salinidade e são cobertos por vegetação herbácea adaptada que abriga diversos microrganismos. Os objetivos do presente trabalho foram isolar e avaliar a diversidade e o potencial biotecnológico de leveduras associadas ao filoplano de macrófitas aquáticas de uma marisma da Ilha da Pólvora – RS. Foram realizadas cinco coletas de hastes e folhas de três espécies de macrófitas Scirpus maritimus, Spartina alterniflora e Spatirna densiflora entre junho de 2012 e janeiro de 2013. As amostras foram colocadas em solução de Tween 20 a 0,5% e incubadas a 200 rpm por 30 minutos. Em seguida foram realizadas diluições decimais seriadas (10-1, 10-2 e 10-3) e um volume de 0,1mL foi inoculado em ágar malte levedura acidificado ao pH 4.0 e suplementado com 0.04% de cloranfenicol e 0.01% de bifenila. As placas foram incubadas por 7 dias a 20 – 25 oC e as colônias isoladas e purificadas em meio Glucose Yeast Peptone. Isolados de leveduras e fungos leveduriformes foram agrupados de acordo com a morfologia de colônia e testados quanto a afinidade ascomicética ou basidiomicética em meio uréia/DBB. O potencial biotecnológico dos isolados foi avaliado por meio de testes enzimáticos para a produção das enzimas de interesse industrial amilase, esterase, caseinase, celulase, gelatinase e lipase. As leveduras que obtiveram maior produção também foram testadas quanto à capacidade de degradar o corante azóico Acid Red 357. Foram obtidos 102 isolados, 37 leveduras de afinidade basidiomicética, 27 leveduras de afinidade ascomicética e 38 fungos leveduriformes. Cinco linhagens tiveram as regiões D1/D2 e/ou região ITS do DNA sequenciadas, sendo duas delas pertencentes à espécie Hortaea werneckii, de importância clínica. Dos 102 isolados, todos produziram lipase, 63,7% esterase, 50% gelatinase, 47% amilase, 45% caseinase e 45% celulase. As linhagens testadas no meio com o corante azóico obtiveram crescimento muito rápido e foram capazes de clarear a cor do meio, porém devem ser futuramente testadas em outras concentrações de corante para uma melhor visualização do resultado. Os resultados do trabalho demonstram o grande potencial biotecnológico de leveduras e fungos leveduriformes associados ao filoplano de plantas de marismas e, portanto, sua capacidade de contribuir para o avanço da biotecnologia. Salt marshes are highly productive intertidal ecosystems that support large variations in salinity and are covered by herbaceous vegetation that home many microorganisms. The objectives of this study were to isolate and evaluate the diversity and the biotechnological potential of yeasts associated with phylloplane of aquatic weeds in a salt marsh on the island of Pólvora - RS. Five surveys were carried, between June 2012 and January 2013, and stems and leaves of three species of macrophytes, Scirpus maritimus, Spartina alterniflora and Spartina densiflora, were collected. The samples were placed in 0.5% Tween 20 solution and incubated at 200 rpm for 30 minutes. Decimal serial dilutions (10-1, 10-2 and 10-3) were performed, and a volume of 0.1 mL was inoculated onto YM acidified to pH 4.0 and supplemented with 0.04% chloramphenicol and 0.01% biphenyl. Plates were incubated for 7 days at 20 - 25 ° C, and colonies were isolated and purified in GYP medium. Isolates of yeasts and yeast-like fungi were grouped according to colony morphology, and tested for ascomycetous or basidiomycetous affinity in urease / DBB medium. The biotechnological potential of the isolates was assessed by enzymatic assays for the production of enzymes of industrial interest amylase, esterase, caseinase, cellulase, lipase and gelatinase. Yeasts with the greatest production were also tested for their ability to degrade azo dye Acid Red 357. 102 yeast isolates were obtained, 37 with basidiomycetous affinity, 27 with ascomycetic affinity and 38 yeast-like fungi. Five strains had the D1 / D2 regions and / or the ITS region of rDNA sequenced, two of which is Hortaea werneckii, a species of clinical importance. Of the 102 isolates, all produced lipase, 63.7% esterase, 50% gelatinase, 47% amylase, 45% caseinase and 45% cellulase. The strains tested in the medium with the azo dye grew very rapidly, and were able to lighten the color of the medium, but they must be further tested in other dye concentrations for a better evaluation of the result. Our results demonstrate the great biotechnological potential of yeasts and yeast-like fungi associated with the phylloplane of macrophytes, and therefore their ability to contribute to the advancement of biotechnology.

O tradicional biodiesel de 1ª geração (produzido a partir de óleo de origem vegetal, como soja ou canola) possui muitas desvantagens e limitações como sazonalidade, uso de grandes áreas de cultivo, competição com alimentos, dentre outras. Uma alternativa são os óleos produzidos por microrganismos. Com o objetivo de otimizar a produção do óleo microbiano, o presente trabalho avaliou a produção de biomassa, lipídios e composição de ácidos graxos da levedura Yarrowia lipolytica QU21 quando cultivada em diferentes fontes de carbono (glicose e glicerol), nitrogênio (sulfato de amônio, triptona, ureia, nitrato de amônio e extrato de levedura), assim como diferentes condições de cultivo (agitação, aeração e razão carbono/nitrogênio). Dois resíduos industriais, glicerina bruta e resíduo de indústria cervejeira (FYE) também foram testados como substitutos da fonte de carbono e nitrogênio, respectivamente. Este trabalho também apresenta uma técnica de triagem de leveduras oleaginosas, de forma a quantificar os lipídios utilizando solventes menos agressivos, tanto para o manipulador quanto para o meio ambiente. A composição de ácidos graxos do óleo produzido pela Y. lipolytica QU21 quando cultivada em glicerina bruta e sulfato de amônio apresentou potencial utilização como matéria prima para o biodiesel. O uso combinado dos dois resíduos industriais pela Y. lipolytica QU21 resultou na produção de óleo com elevado teor de ácidos graxos poliinsaturados. Além de tornar o óleo microbiano da levedura Y. lipolytica QU21 uma matéria prima competitiva para a produção de biodiesel, a utilização da glicerina bruta poderia atenuar problemas ambientais, como a disposição inadequada no meio ambiente. The traditional 1st generation biodiesel (produced from plant oils, such as soybeans and canola) has many drawbacks and limitations as season and climate-dependent cultivation, agricultural land competition for food, among others. Possible alternative oil sources is microbial oil produced by oleaginous microorganisms. With the purpose of optimizing the production of microbial oil, this study evaluated the production of biomass, lipid and fatty acid composition of the yeast Yarrowia lipolytica QU21 when grown on different carbon source (glucose and glycerol), nitrogen source (ammonium sulfate, tryptone, urea, ammonium nitrate and yeast extract) as well as different culture conditions (agitation, aeration and carbon/nitrogen ratio). Two industrial waste were also evaluated, crude glycerol and brewery waste (FYE) as surrogate carbon and nitrogen sources, respectively. This work also presents a technique for sorting oleaginous yeast in order to quantify the lipids using less aggressive solvent for both the handler and to the environment. The fatty acid composition of the oil produced by the Y. lipolytica QU21 growing on crude glycerol and ammonium sulfate showed potential use as a feedstock for biodiesel. The combined wastes resulted on microbial oil produced by Y. lipolytica QU21 with high polyunsaturated fatty acid content. Besides making the microbial oil a competitive feedstock for biodiesel production, the use of crude glycerol could mitigate environmental issues such as improper waste disposal.

A identificação das leveduras participantes no processo fermentativo de vinhos comerciais e artesanais permite inferir as propriedades organolépticas, concentração de álcool e qualidade do produto final. Assim, a construção de uma base de dados que permita discriminar e identificar leveduras associadas a vinhos é necessário para monitorar o processo fermentativo e controlar os seus contaminantes. A principal proposta deste trabalho foi avaliar a técnica MSP-PCR Fingerprinting usando o oligonucleotídeo iniciador (GTG)5 para discriminar espécies de leveduras associadas a vinho no sul do Brasil. O protocolo foi otimizado usando três cepas variando as concentrações de dNTPs, MgCl2, oligonucleotídeo iniciador e DNA. Foram analisadas 113 cepas de leveduras associadas a vinhos dos estados de Santa Catarina e Rio Grande do Sul (Brasil). A análise de clustering do tamanho e distribuição das bandas, baseada no algoritmo QAPgrid, usando distâncias euclidianas, gerou 20 agrupamentos com 22 perfis genéticos. A comparação das sequências da região D1/D2 do gene 26S rDNA e/ou região ITS com a base de dados Genbank usando o algoritmo Mega Blast permitiu identificar 10 espécies dos gêneros Saccharomyces, Dekkera, Candida, Pichia, Torulaspora, entre outros, associadas a vinhos. Assim, o algoritmo QAPgrid foi capaz de analisar a variabilidade inter e intraespecífica dos 113 isolados de forma não aleatória e dependente da similaridade genética. Se propõe o agrupamento molecular usando o primer (GTG)5 associado ao sequenciamento de 10% dos isolados dentro de cada grupo como ferramenta para identificar e monitorar as populações de leveduras de vinhos. The identification of yeasts involved in commercial and artisanal alcoholic fermentation allows inferences concerning the organoleptic properties and quality of the final product. Thus, the construction of a database that allows discriminating and identifying the wine yeasts is necessary to monitor the fermentation process and control their contaminants. The main purpose of this study was to evaluate the MSP-PCR fingerprinting technique using the primer (GTG)5 for discrimination of wine yeast species in Southern Brazil. The protocol was optimized using three strains varying concentrations of dNTPs mix, MgCl2, primer and DNA. We analyzed 113 strains of yeasts associated with wine from the states of Santa Catarina and Rio Grande do Sul (Brazil). The analysis of cluster size and distribution of bands, based on the QAPgrid algorithm using Euclidean distances generated 20 clusters with 22 genetic profiles. The comparison of sequences of the D1/D2 domain of the gene 26S rDNA and/or ITS region with the GenBank database using the Blast algorithm identified 10 species of the genera Saccharomyces, Dekkera, Candida, Pichia, Torulaspora, and others associated with the wine. The algorithm QAPgrid was able to analyze inter and intra-specific variability of 113 isolates in a non-random manner dependent on genetic similarity. We propose the molecular clustering using the primer (GTG)5 followed by sequencing of 10% of the isolates within each group can function as a tool for identifying and monitoring the wine yeast populations.

Lipases (E.C. 3.1.1.3) são serina-hidrolases e agem em sobre ésteres de ácidos graxos de cadeia curta. Elas exibem atividade específica e enantiosseletiva, e sendo assim, há vasto interesse comercial, em pesquisa e indústria de biotecnologia. Lipases microbianas são interessantes para indústria, devido à facilidade de purificação e alta produção que permitem. Muitas leveduras possuem capacidade de produzir naturalmente estas enzimas, permitindo a obtenção de lipases não-transgênicas e com maior rapidez. Este trabalho teve como objetivo avaliar a produção de lipase em leveduras selvagens e otimizar a sua produção em uma linhagem selecionada, bem como caracterizar esta enzima. Uma varredura inicial foi realizada em placas de Tween 80 e Ágar-óleo. Leveduras com crescimento positivo foram então cultivadas em meio mínimo sob agitação, suplementado com óleo de soja, e o sobrenadante teve a sua atividade enzimática testada sobre p-nitrofenil palmitato (pNPP). Foram testadas 133 linhagens provenientes de diferentes substratos, e treze apresentaram uma atividade lipolítica significativamente alta em comparação com as demais (p

O vinho é a bebida obtida por meio da fermentação alcoólica do mosto simples de uva sã, fresca e madura. Durante o processo fermentativo, realizado por leveduras Saccharomyces cerevisiae, ocorre uma sucessão de microrganismos. Espécies pertencentes aos gêneros Brettanomyces e Dekkera permanecem no produto final podendo influenciar de forma negativa ao produzirem compostos fenólicos voláteis. Estas leveduras apresentam como uma de suas características a lenta taxa de crescimento. Com isto, este trabalho teve como objetivo o desenvolvimento de meio de cultivo para isolamento e detecção destas leveduras e de metodologia molecular para detecção independente de cultivo. O meio de cultivo desenvolvido permitiu o isolamento e também a diferenciação de leveduras dos gêneros Brettanomyces e Dekkera das demais leveduras comumente encontradas em vinho. Uma metodologia molecular, baseada em PCR convencional, foi desenvolvida para a detecção dos gêneros em vinhos. Inicialmente foram construídos dois pares de oligonucleotídeos. Um par universal para leveduras e outro específico para D. bruxellensis. O primeiro par apresentou ampla aplicabilidade na avaliação da efetividade de diferentes processos de extração de DNA e na detecção de compostos inibidores presentes em amostras de vinho. A utilização de ambos os pares permitiu o desenvolvimento de um protocolo de extração e amplificação de DNA diretamente de amostras de vinho, facilitando a identificação de leveduras D. bruxellensis e permitindo a tomada de decisão em tempo hábil de evitar perdas econômicas. The wine is a beverage obtained by alcoholic fermentation of simple must of healthy, fresh and mature grape. During the fermentation process, carried out by Saccharomyces cerevisiae yeasts, these is a succession of microorganisms. Species belonging to the genera Brettanomyces and Dekkera remain in the final product can influence negatively by producing volatile phenolic compounds. These yeasts present as one the features of the slow rate of growth. This work aimed at the development of culture media for isolation and detection of these strains and molecular methods for detection of independent culture. The medium developed also allowed the isolation and differentiation of yeasts of the genera Brettanomyces and Dekkera yeasts from other commonly found in wine. A molecular approach, based on conventional PCR, was developed for the detection of genera in wines. Initially we constructed two sets of primers. A universal pair for yeast and other specific for D. bruxellensis. The first pair showed a broad applicability in evaluating the effectiveness of various procedures for DNA extraction and detection of inhibitory compounds present in wine samples. The use of both pairs allowed development of a protocol for extracting and amplifying DNA directly from wine samples, facilitating the identification of yeasts D. bruxellensis and allowing the decision-making in a timely manner to avoid economic losses.

Infecções fúngicas em humanos vem aumentando nos últimos anos e acometem principalmente pacientes imunocomprometidos, portadores do vírus HIV, transplantados ou com câncer. Os antifúngicos empregados no tratamento pertencem a poucos grupos de fármacos e o aparecimento de resistência antifúngica em muitos patógenos leva à necessidade de desenvolvimento de novos agentes antifúngicos. As cepas Trichosporon japonicum QU139 e Candida catenulata LV102 apresentam atividade killer sobre diversas leveduras patogênicas, apresentando bom potencial para desenvolvimento de novos agentes antimicrobianos. O objetivo do trabalho foi a otimização das condições para produção e detecção dos compostos antimicrobianos, para seu futuro uso terapêutico, e sua purificação. O efeito killer da cepa T. japonicum QU139 foi avaliado pelo método dos poços contra células sensíveis de Cryptococcus gattii C20 nos meios GYP, YM e Queijo em diferentes pH e temperaturas. A máxima atividade killer foi encontrada no meio GYP, pH 4,5 à 25°C após 24 horas de incubação para T.japonicum QU139 e C. catenulata LV102. Não foi possível isolar o composto antimicrobiano produzido pela levedura T.japonicum QU139 pelos métodos de isolamento de proteína/glicoproteína, corroborando a hipótese de que a toxina seja um glicolipídeo. Human fungal infections have increased in the last years and affect mainly immunocompromised patients, carriers of HIV vírus, transplanted or with cancer. The antifungal agents used in treatment belong to a few groups of drugs and the increase of antifungal resistance in many pathogens leads to the necessity of developing new antifungal agents. Strains Trichosporon japonicum QU139 and Candida catenulata LV102 showed killer activity against several pathogenic yeasts, having a good potential for the development of new antimicrobial agents. The objective of the work was the optimization of conditions for production and detection of the antimicrobial compounds, aiming their future terapeutic use, and their purification. The killer effect of T. japonicum QU139 strain was evaluated by the well method against sensitive cells of Cryptococcus gattii C20 in media GYP, YM and Cheese in different pH and temperatures. The maximum killer activity was found in media GYP, pH 4.5, 25°C after 24 hours of incubation for T.japonicum QU139 and C. catenulata LV102. The isolation of the antimicrobial compound produced by the yeast T.japonicum QU139 was not possible by the methods for isolation of proteins/glicoproteins, corroborating the hypothesis that the toxin is a glycolipid.

Malassezia pachydermatis pode ser isolada da pele de cães saudáveis e daqueles com dermatites, porém, os critérios para o diagnóstico da malasseziose cutânea ainda não estão padronizados e a intensidade das lesões de pele entre portadores ou não dessas leveduras nunca foi investigada. O mecanismo que promove a mudança de status de organismo comensal para patógeno, também, ainda não está totalmente elucidado, embora fatores como diversidade genética e atividade enzimática sejam citados como possíveis causas. A presença de outras espécies de Malassezia na pele de cães já foi relatada, porém sem confirmação molecular. Este estudo objetivou identificar e quantificar a presença de Malassezia na pele de cães com e sem dermatopatias; avaliar a possível associação entre a presença e a quantidade destas leveduras na pele de cães dermatopatas e o grau de intensidade das lesões cutâneas; identificar os isolados por PCR-REA; identificar genótipos e subtipos genéticos de M. pachydermatis através do sequenciamento parcial do gene chs-2, e das regiões LSU e ITS-1 do rDNA, e avaliar sua possível associação com graus de comprometimento cutâneo e atividade fosfolipásica. Amostras para citologia e cultivo fúngico foram obtidas de 297 cães (180 saudáveis e 117 com lesões de pele), dentre os quais 28 (15,6%) dos animais saudáveis e 62 (52,9%) daqueles com dermatite foram isoladas colônias de Malassezia spp. (P 0,001). O cultivo fúngico apresentou maior sensibilidade para a detecção de leveduras na pele do que a citologia. A avaliação do grau de intensidade das lesões de pele nos cães com dermatite revelou que animais positivos e com maior densidade populacional de Malassezia spp. apresentaram maior grau de comprometimento cutâneo. A análise por PCR-REA identificou M. pachydermatis em 100% dos isolados de cães saudáveis e em 98,4% daqueles com dermatites. Em somente um cão com dermatite foi identificada M. furfur. Cento e sessenta e oito isolados de M. pachydermatis de 56 cães (28 saudáveis e 28 com dermatites – três isolados de cada animal) foram analisados por sequenciamento parcial do gene chs-2, e das regiões LSU e ITS-1 do rDNA. Foram identificados os genótipos e subtipos classificados como “A” e “C”. As diferenças de genótipos ou subtipos não foram significativas entre cães saudáveis e com dermatites, nem com a atividade fosfolipásica ou com grau de intensidade das lesões de pele nos cães com dermatite. O número de isolados de M. pachydermatis produtores de fosfolipase foi estatisticamente significante nos animais com dermatite. Malassezia pachydermatis can be isolated from the skin of healthy dogs and those with dermatitis, but the diagnostic pattern to Malassezia dermatitis has been not yet established and the severity of skin damage between carriers or not of these yeasts was never investigated. The mechanisms that allow the normally commensal yeast to become a pathogen are not also yet understood, although factors as genetic diversity and enzymatic activity have been cited as possible causes. The presence of other Malassezia species on dog skin have been related, but without molecular confirmation. The purpose of this study was to identify and quantify Malassezia yeasts on the skin of dogs with and without dermatitis; to evaluate the association between the presence and population size of theses yeasts with the severity of skin damage in dogs with dermatitis; to identify the isolates by PCR-REA; to identify M. pachydermatis genotypes and subtypes by partial sequencing of chs-2 gene and the LSU and ITS-1 of rDNA sequences; and to evaluate the possible association between genotypes/subtypes and severity of skin damage and phospholipase activity. Samples to cytology and fungal culture were taken from 297 dogs (180 healthy and 117 with skin lesions), from witch 28 (15.6%) healthy and 62 (52.9%) with skin lesions dogs were positive to Malassezia spp. (P 0,001). Fungal culture showed more sensitivity to detect yeasts on the skin than cytology. The evaluation of severity of skin damage in dogs with dermatitis showed that dogs with positive cultures and higher population sizes presented higher grades of skin damage than dogs with negative cultures. From healthy dogs all isolates were identified as M. pachydermatis and from dogs with dermatitis 98.4% were identified as M. pachydermatis, and one isolate yielded a restriction pattern compatible with M. furfur. One hundred-sixty-eight Malassezia isolates from 56 dogs (28 healthy; 28 with dermatitis - three from each dog) were analyzed by partial sequencing of chs-2 gene and LSU and ITS-1 of nuclear ribosomal DNA sequences. Genotypes and subtypes A and C were identified. No significant difference between genotypes/subtypes and healthy and diseased dogs, nor with severity of skin damage or phospolipase activity in dogs with dermatitis were found. The number of Malassezia pachydermatis isolates producing phospholipase was statistically significant in dogs with dermatitis.

Saccharomyces cerevisiae é uma levedura que possui papel fundamental na transformação do mosto em vinho. Durante a fermentação, a levedura selecionada transfere para o meio, componentes resultantes de seu metabolismo como etanol, aldeídos, enzimas, proteínas, entre outros. Existem algumas que possuem ação definida, como a proteína killer. Este trabalho teve como objetivo determinar as condições necessárias para a detecção e expressão do fator killer produzido por linhagens de levedura Sacch. cerevisiae isoladas de mosto de uva. Como linhagens killer, foram utilizadas as linhagens Sacch. cerevisiae Embrapa 91B, Sacch. cerevisiae Embrapa 1B, e uma linhagem comercial Sacch. cerevisiae K1 (Lallemand). Como linhagem sensível, foi empregada Sacch. cerevisiae Embrapa 26B. Para detecção do fator killer foram avaliados meios de cultura sólidos, preparados com diferentes concentrações de mosto de uva e extrato de levedura não comercial (ELNC). Para a produção do fator killer foram avaliados meios líquidos com diferentes concentrações de mosto de uva, ELNC e sacarose. Foi avaliada a produção do fator em condições aeróbicas e anaeróbicas de crescimento. O meio de cultura definido para detecção do fator killer foi o meio contendo 80 % de mosto de uva e 20 % de ELNC em sua composição. O meio líquido que proporcionou melhores condições de síntese do fator killer foi o meio preparado com 5% de mosto e 95 % de ELNC contendo 100 g/L de sacarose. A expressão do fator killer foi inibida em condições aeróbicas, exceto quando as linhagens foram cultivadas em meio líquido com elevada concentração de sacarose. The yeast Saccharomyces cerevisiae has a key role in the process of converting must into wine. During fermentation the selected yeast transfers to the medium compounds resulting from metabolism such as ethanol, aldehyde, enzymes and proteins. Some compounds have an antibiotic effect like killer proteins. The aim of this work was to verify the conditions for detection and expression of killer factor produced by Sacch. cerevisiae isolated from grape must. The killer yeast strains used for the experiments were Sacch. cerevisiae Embrapa 91B, Sacch. cerevisiae Embrapa 1B and a commercial yeast Sacch. cerevisiae K1 (Lallemand). The yeast Sacch. cerevisiae Embrapa 26B was used as sensitive strain. Solid media prepared with different concentrations of grape must and non-commercial yeast extract (ELNC), were used to detect the killer factor. Culture media prepared with different concentrations of grape must, ELNC and sucrose, were employed for killer factor expression. Synthesis of killer protein was evaluated under anaerobic and aerobic growth conditions. Detection of killer protein presented better results when using a culture medium prepared with 80 % of grape must and 20 % of ELNC. The liquid medium that provided the best conditions for killer factor expression was prepared with 5 % of grape must and 95 % of ELNC supplemented with 100 g/L of sucrose. Killer factor expression was inhibited under aerobic conditions, except when strains were growth in liquid media prepared with high concentrations of sucrose.

Durante o período de abril de 2004 a fevereiro de 2007, foram coletadas 73 amostras de folhas de bromélias do Parque de Itapuã, Viamão, RS, com o objetivo de descrever as espécies de leveduras presentes, elucidar a ecologia destes microrganismos nesse habitat e avaliar o perfil enzimático das leveduras isoladas. Fragmentos das folhas foram submetidos a lavagens sucessivas com 0,5% Tween 20. Diluições decimais seriadas da última lavagem, amostras de água dos tanques de bromélias e de flores foram inoculadas em meio YM (levedura-malte) modificado e incubadas a 25°C por 5-7 dias. Representantes dos diferentes morfotipos foram selecionados, purificados e mantidos a 4ºC até a caracterização molecular. Dos 178 isolados obtidos, 148 foram identificados por meio do seqüenciamento da região D1/D2 do rDNA e/ou ITS, sendo 6% de afinidade ascomicética e 94% de afinidade basidiomicética. Do total identificado, cerca de 61% são espécies ainda não descritas de leveduras. Os gêneros Cryptococcus e Rhodotorula foram predominantes, seguidos por Farysizyma gen. nov. e Sporobolomyces. Dentre as leveduras já descritas, as espécies Rhodotorula marina (n=12), e Cryptococcus flavescens (n=16) foram as mais freqüentes. A espécie de afinidade basidiomicética denominada Farysizyma itapuensis foi descrita no presente trabalho e demonstrou ser freqüente (n=18). Além dessa espécie, foi descrita uma nova espécie de levedura basidiomicética pigmentada: Cryptococcus bromeliarum sp. nov.. Entre os ascomicetos, duas espécies novas foram identificadas e descritas, Candida aechmeae sp. nov. e Candida vrieseae sp. nov.. Alguns isolados designados como Cryptococccus sp. nov. 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 e 11 e Rhodotorula sp. nov. 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, entre outros menos frequentes, também pertencem a novas espécies e estão em processo de descrição. A diversidade e a riqueza de leveduras, calculadas pelo índice de Shannon-Weaver, foram maiores na Praia da Fora (H=3,471 e S=41) que na Praia da Pedreira (H=3,007 e S=32). Cento e quinze isolados tiveram sua capacidade para produzir enzimas amilase, celulase, proteinase e pectinase testadas, 107 foram testadas para hidrólise de azeite e 114 para tween 80. Desses, cerca de 13% foram positivos para amilase, 35,5% para proteinase, 17% para celulase, aproximadamente 3% para hidrólise de azeite e 72% para tween 80. Nenhum isolado apresentou resultado positivo para pectinase. Os resultados obtidos revelaram o grande potencial do filoplano de bromélias como substrato para o estudo e identificação de novas espécies de leveduras, assim como um bom substrato para o isolamento de leveduras produtoras de enzimas de interesse industrial. From April 2004 until February 2007, 73 samples of leaves of bromeliads were collected in Itapuã Park, Viamão, RS, with the objective of describing the yeast species present, elucidating the ecology of these microorganisms in this habitat and evaluating the enzymatic profile of yeasts isolates. Leaf pieces were submitted to successive washings with 0.5%Tween 20. Decimal serial dilutions from the last washing, samples of tank water, and flowers were inoculated in modified YM medium, and incubated at 25°C for 5-7 days. Representatives of different morphotypes were selected, purified and stored at 4°C until molecular characterization. Of the 178 isolates obtained, 148 were identified by sequencing the D1/D2 region of rDNA and / or ITS, being 6% of ascomycetous affinity and 94% of basidiomycetous affinity. Of the total identified, about 61% are undescribed yeast species. The genus Cryptococcus and Rhodotorula were predominant, followed by Farysizyma gen. nov. and Sporobolomyces. Among the yeasts already described, Rhodotorula marina (n = 12) and Cryptococcus flavescens (n = 16) were the most frequent. The species of basidiomycetous affinity named Farysizyma itapuensis was described in this work and proved to be frequent (n = 18). Besides this species, a new species of basidiomicetous pigmented yeast was also described: Cryptococcus bromeliarum sp. nov.. Among the ascomycetes, two new species were identified and described, Candida aechmeae sp. nov. and Candida vrieseae sp. nov.. Some isolates designated as Cryptococccus sp. nov. 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 and 11 and Rhodotorula sp. nov. 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, among other less frequent, also belong to new species and are in the process of description. The diversity and richness of yeasts, calculated by the Shannon-Weaver index, were higher in Fora Beach (H = 3.471 and S = 41) than Pedreira Beach (H = 3.007 and S = 32). One hundred and fifteen isolates had their ability to produce amylase, proteinase, cellulase and pectinase tested, 107 isolates were tested for olive oil consumption and 114 for tween 80. Of these, 13% were positive for amylase, 35.5% for proteinase, 17% for cellulase, 3% for olive oil and 72% for Tween 80. No isolate was positive for pectinase. The results revealed the great potential of phylloplane bromeliads as a substrate for the study and identification of new species of yeasts, as well as a good substrate for the isolation of yeasts producing enzymes of industrial interest.

Leveduras do gênero Dekkera/Brettanomyces causam sérios problemas ao vinho, afetando as propriedades sensoriais do produto final. O objetivo deste trabalho foi investigar a capacidade de duas linhagens de Saccharomyces cerevisiae em inibir a atividade de Brettanomyces custersianus na vinificação em tinto e durante a fase inicial de envelhecimento, assim como investigar a capacidade deste microrganismo (Br. custersianus) em inibir a atividade metabólica de Sacch. cerevisiae. Foram realizadas vinificações com 4 inoculações diferentes. O tratamento 1 (T1) foi inoculado com a linhagem neutra Sacch. cerevisiae EMBRAPA 1vvt/97, T2-Sacch. cerevisiae EMBRAPA 91B/84 killer, T3-EMBRAPA 1vvt/97 e Br. custersianus, T4-EMBRAPA 91B/84 killer e Br. custersianus e T5-Br. custersianus. Também foram realizados, testes de velocidade fermentação, inibição ou estímulo do metabolismo e tolerância ao SO2. Durante a fase tumultuosa realizaram-se análises de açúcares redutores totais e etanol. Observou-se que durante todo o período da fermentação, o consumo de substrato de T1 e T2 foi mais rápido, do que em T3 e T4. A velocidade de fermentação da Br. custersianus (T5) foi muito inferior às demais linhagens. Mesmo com uma velocidade de crescimento baixa, a linhagem contaminante quando inoculada juntamente com Sacch. cerevisiae retarda a fermentação tumultuosa, podendo comprometer o processo de vinificação. Br. custersianus (T5) não teve sua atividade metabólica afetada na presença de 125 mg/L de SO2, logo conclui-se que as concentrações normalmente utilizadas no processo de vinificação, 30 a 70 mg/L, não seriam suficientes para impedir sua atividade. Dekkera/Brettanomyces yeasts cause serious problems to the wine, affecting the sensorial properties of the final product. The objective of this work was to investigate the capacity of two strains of Saccharomyces cerevisiae in inhibiting the activity of Brettanomyces custersianus in the vinification in red wine and during the early stage of aging of the wine, as well as to investigate the ability of this microorganism (Br. custersianus) to inhibit metabolic activity of Saccharomyces cerevisiae. Vinifications were performed with 4 different inoculations. Treatment 1 (T1) was inoculated with the neutral strain Sacch. cerevisiae EMBRAPA 1vvt/97, T2-killer Sacch. cerevisiae EMBRAPA 91B/84, T3-EMBRAPA 1vvt/97 and Br. custersianus, T4-EMBRAPA 91B/84 and Br. custersianus and T5-Br. custersianus. There were also carried out tests of speed fermentation, inhibition or stimulation of metabolism and tolerance to SO2. During the tumultuous phase analysis was performed of total reducing sugars and ethanol. It was observed that throughout the period of fermentation, the substrate consumption in T1 and T2 was faster than in T3 and T4. The speed of fermentation of Br custersianus (T5) was much lower than the other strains. Even with a low rate of growth, the strain contaminant when inoculated with Saccharomyces cerevisiae. delays the tumultuous fermentation, being able to compromise the vinification process. Br. custersianus (T5) did not have its metabolic activity affected in the presence of 125 mg/L of SO2, then it was concluded that the concentrations normally used in the vinification process, 30 to 70 mg/L, would not be enough to prevent their activity.

As figueiras são encontradas em abundância no Parque de Itapuã, onde interagem com diversos organismos superiores e, potencialmente, com microrganismos. Os objetivos do presente trabalho foram isolar, identificar e avaliar o potencial biotecnológico de leveduras e fungos semelhantes a leveduras associados ao filoplano de figueiras no Parque de Itapuã, Viamão, RS. Foram realizadas 6 coletas em diferentes pontos do Parque de Itapuã durante o ano de 2005 e 2006. Fragmentos das folhas foram submetidos a lavagens sucessivas com 0,5% Tween 20. Diluições decimais seriadas da última lavagem foram inoculadas em meio YM modificado e incubadas a 25°C por 5-7 dias. Representantes dos diferentes morfotipos foram purificados e identificados de acordo com características morfológicas e testes bioquímicos - fisiológicos. Foi testada a produção de enzimas de interesse industrial (amilase, celobiase, caseinase, gelatinase e esterase), além de toxinas “killer” pelos isolados. Dos 175 isolados obtidos, 125 são leveduras verdadeiras e 50 fungos semelhantes a leveduras. As 125 leveduras isoladas pertencem a 45 espécies, sendo oito de afinidade ascomicética e 37 de afinidade basidiomicética. Sete isolados tiveram as regiões D1/D2 do 26S rDNA seqüenciadas, sendo que quatro pertencem a duas espécies ainda não descritas do gênero Bullera. Dos 175 isolados 29,1% produziram amilase, 46,3% caseinase e 9,7% gelatinase. Foram testados 138 isolados para verificar a atividade de esterase, sendo 81,5% produtores da enzima. Das 126 cepas testadas para produção de celobiase, 74,8% produziram a enzima. Aproximadamente 4,5% dos isolados de leveduras e fungos semelhantes a leveduras apresentaram atividade “killer”. Assim sendo, o filoplano de figueiras demonstra ser um bom substrato para o isolamento de leveduras, inclusive de novas espécies. Estas leveduras demonstram ter potencial para contribuir efetivamente para a inovação biotecnológica. The fig trees are found in abundance in the Itapuã Park, where they interact with various higher organisms and, potentially, with microrganisms. The objectives of this study were to isolate, identify and evaluate the biotechnological potential of yeasts and yeast-like fungi associated with phylloplane of fig trees in the Itapuã Park, Viamão, RS. Six samples were performed at different points in the Itapuã Park during 2005 and 2006. Leaf pieces were submitted to successive washings with 0.5% Tween 20. Decimal serial dilutions from the last washing were inoculated in modified YM medium and incubated at 25° C for 5-7 days. Representatives of the different morphotypes were purified and identified according to morphological characteristics, physiological and biochemical tests. We tested the production of industrially interesting enzymes (amylase, cellobiase, caseinase, gelatinase and esterase), besides the production of killer toxins. Of the 175 isolates obtained, 125 are yeasts and 50 yeast-like fungi. The 125 yeasts isolated belong to 45 species, eight with ascomycetic affinity and 37 with basidiomycetic affinity. Seven isolates had their 26S rDNA D1/D2 regions sequenced and four belong to two yet undescribed species of the genus Bullera. Of the 175 isolates, 29.1% were positive for amylase, 46.3% for caseinase and 9.7% for gelatinase. One hundred and thirty-eight isolates were tested for esterase activity, and 81.5% were producers of the enzyme. Of the 126 strains tested for the production of celobiase, 74.8% produced the enzyme. Approximately 4.5% of the isolates of yeasts and yeast-like fungi had "killer" activity. Therefore, the phylloplane of fig trees demonstrates to be a good substrate for the isolation of yeasts, including new species. These yeasts have the potential to contribute effectively to the biotechnological innovation.

As leveduras, devido a sua versatilidade, facilidade de cultivo, menor propensão à contaminação e por oferecerem menor risco à saúde pública, têm sido alvo de inúmeras pesquisas direcionadas à produção de enzimas para aplicação em processos industriais. O presente estudo teve como objetivo avaliar a atividade catalítica de lipases produzidas por leveduras isoladas de folhas de bromélias no Parque de Itapuã visando sua aplicação na biossíntese de ésteres. Realizou-se a triagem das leveduras através das técnicas: crescimento em Tween 80 como única fonte de carbono, fluorimetria utilizando rodamina B e crescimento em meio de cultura contendo cloreto de cálcio. Para a levedura selecionada como melhor produtora lipase, foi feita a curva de crescimento e a caracterização da enzima. Após, a enzima foi submetida ao ensaio de imobilização em poliestireno comercial e em polipropileno poroso (sintetizado durante a pesquisa). Finalmente, foram selecionadas amostras de leveduras que apresentaram atividade lipolítica significativa e uma amostra de baixa atividade para a realização do ensaio de correlação entre o espectro de FT-IR da biomassa microbiana cultivada com ou sem rodamina B e a atividade lipolítica medida através de titrimetria. Verificou-se que leveduras isoladas de bromélias do parque de Itapuã, RS são boas fontes de lipases microbianas. A levedura Debaryomyces melissophilus B181 foi selecionada como a melhor produtora de lipase extracelular, a qual possui características de uma lipase neutra mesofílica com dependência de fatores nutricionais semelhante à Candida sp e com baixa estabilidade frente aos solventes de transesterificação metanol e etanol, porém com maior especificidade de substrato para o óleo de mamona, tornando-se atrativa para aplicação na obtenção de biodiesel a partir deste óleo. Comprovou-se a eficiência do polímero polipropileno poroso, usado como suporte para lipases, através da imobilização da lipase comercial PS AMANO, porém não foi possível imobilizar a lipase em estudo nas condições testadas. A técnica de FT-IR acoplada à quimiometria mostrou-se adequada para diferenciar as amostras de leveduras quanto ao seu perfil de impressão digital metabólico, porém não em relação ao tempo de cultivo. Yeasts, due to their versatility, culture facilities, less propensity to contamination and for being safer than other microorganisms to the human health, have been the aim of several researches about enzymes production for industrial applications. The aim of this project is to evaluate the catalytic activity of lipases produced by yeasts isolated from the phylloplane of bromeliads in Parque Itapuã for its application in the biosynthesis of esters. Yeasts were selected by the methods: growth using Tween 80 as the only carbon source; fluorimetry using rhodamin B; and growth in media with CaCl2. To the selected yeast as the best lipase producer, the growth curve and the enzyme characterization were performed. After that, the enzyme was submitted to the immobilization technique in commercial polystyrene and polypropylene synthesized during our work. Then, the yeasts samples that had shown a good lipolytic activity and one with a bad activity were selected to the experiment of correlation between the FT-IR spectrum of the microbial biomass cultivated with or without rhodamin B and the lipolytic activity measured by titrimetry. We verified that yeasts isolated from bromeliads from Parque Itapuã, RS, are a good source for microbial lipases. The yeast Debaryomyces melissophilus B181 was selected as the best extracellular lipase producer, which is characterized as a neutral and mesophylic lipase with nutritional dependence similar to Candida sp. The lipase show low stability to the transesterification solvents methanol and ethanol, but has high substrate specificity to castor oil, becoming attractive to biodiesel production from this oil. We proved the efficiency of the polypropylene synthesized through the immobilization of the commercial lipase PS AMANO, but we could not immobilize the Debaryomyces melissophilus B181 lipase in the tested conditions. The FT-IR technique coupled to chemometrics seemed to be appropriate to differentiate yeasts samples by their metabolic fingerprint profile, but not related to the cultivation period.

Uma das formas de se realizar estudos epidemiológicos de dispersão de patógenos é pela discriminação intra-específica (biotipagem) desses microrganismos em subgrupos (biotipos). Métodos fenotípicos que permitem a discriminação de linhagens clínicas são almejados principalmente pela facilidade de execução e por terem menor custo, quando comparados com os métodos moleculares. O sistema killer, baseado em padrões de sensibilidade à toxina, pode representar uma ferramenta simples, barata, sensível e reprodutível para biotipagem de microrganismos de importância clínica. Neste estudo, foi pesquisada a presença deste fenótipo em 595 isolados de alimentos e de fontes ambientais, de onde foram selecionadas 32 cepas para testes de identificação molecular, caracterização genética do fenótipo killer, caracterização morfológica do mecanismo de ação da toxina e aplicação em painéis de biotipagem.A linhagem KYQU89 (CBS10423), proveniente de queijo, foi detectada como uma espécie nova, com seqüência idêntica a dois isolados killer oriundos de insetos. As três linhagens demonstraram ser relacionadas ao clado Ovoides no gênero Trichosporon, sendo caracterizadas por sequenciamento da região D1/D2 do rDNA , da região interespaçadora ITS e perfil bioquímico. A espécie nova foi denominada Trichosporon insectorum. Vinte linhagens killer foram selecionadas para compor um painel de biotipagem sobre cem isolados clínicos e ambientais de Cryptococcus neoformans e Cryptococcus gattii. A partir dos padrões de sensibilidade à toxina, foi gerado um dendrogramademonstrando a total discriminação das linhagens. A ação letal da toxina sobre as células destas duas espécies de Cryptococcus foi observada por microscopia eletrônica de varredura e óptica, evidenciando que não houve a formação de poros na parede celular, mas sim uma provável interferência no ciclo celular da célula. Da mesma forma, um painel de 11 linhagens killer selecionadas foi utilizado para a biotipagem de cepas multi-resistentes de Staphylococcus epidermidis, provenientes de dois hospitais em Porto Alegre, RS, também sendo capaz de discriminá-las totalmente. One of the forms of performing epidemiological studies of dispersion of pathogenic microorganisms is by means of intra-specific discrimination (biotyping) of these microorganisms in sub-groups (biotype). Phenotypic methods that allow the clinical discrimination of strains are needed, especially because they are easy to perform and have low cost, when compared to molecular methods. The killer system, based on patterns of sensitivity towards the toxin, can represent a simple, cheap, sensible and reproductive tool for biotyping of microorganisms of clinical importance. In our study, the presence of this phenotype was evaluated in 595 isolates from natural environments and food and 32 killer strains were selected for molecular identification, genetic characterization of killer phenotype, morphologic characterization of the mechanism of action, and application in biotyping panels.The strain KYQU89 (CBS10423), isolated from cheese, was found to be a new species, with D1/D2 sequence identical to two killer isolates from insects. The three strains were shown to be related to the Ovoides clade of the genus Trichosporon, and were characterized bysequencing of the D1/D2 region of the LSU rDNA and physiological profiles the new species was called Trichosporon insectorum. Twenty killer strains were selected to compose a panel of biotyping against one hundred clinical and environmental isolates of Cryptococcus neformans and Cryptococcus gattii. Basedon the killer sensitivity patterns, a dendrogram demonstrating the total discrimination of the strains was done. The lethal action of the toxin on the cells of Cryptococcus was observed by means of optical and scanning electron microscopy, showing that there was no formation of pores on the cell surface of the sensitive cells in contact with the toxins, but a probable interference in the cell cycle. In the same way, a panel of 11 selected killer strains was used for the biotyping of multi-resistant Staphylococcus epidermidis strains, provenient from two hospitals in Porto Alegre, RS, being also capable of discriminating all the strains.

As bromélias abrigam uma grande diversidade de organismos. O objetivo do presente trabalho foi analisar a biodiversidade de leveduras e fungos leveduriformes presentes no filoplano de bromélias e avaliar seu potencial biotecnológico. Foram coletadas 50 amostras de folhas de bromélias no Parque Estadual de Itapuã/RS (Praia da Pedreira e Praia de Fora). Fragmentos das folhas foram submetidos a lavagens sucessivas com 0,5%Tween 20. Diluições decimais seriadas da última lavagem, amostras de água dos tanques de bromélias e de flores foram inoculadas em meio YM modificado e incubadas a 25°C por 5-7 dias. Representantes dos diferentes morfotipos foram purificados e identificados pela metodologia convencional. A análise da biodiversidade foi realizada através do índice de Shannon-Weaver. Dos 191 isolados obtidos, 182 foram identificados, sendo 11% leveduras de afinidade ascomicética, 67,6% de afinidade basidiomicética, 19,8% de fungos leveduriformes e 1,6% de algas. Doze isolados de leveduras tiveram as regiões ITS e D1/D2 do 26SrDNA sequenciadas e pertencem a uma espécie ainda não descrita do gênero Rhodotorula. A diversidade e a riqueza de leveduras foram maiores na Praia da Pedreira (H=3,225 e S=34) que na Praia de Fora (H=2,820 e S=26). Cento e noventa e um isolados tiveram sua capacidade para produzir enzimas testada. Desses, 40,2% foram positivos para amilase, 49,2% para caseinase, 14,8% para gelatinase, 58,0% para celobiase, 36,0% para lactase e 61,3% para esterase. O filoplano das bromélias apresentou uma grande biodiversidade de leveduras e fungos leveduriformes,.demonstrando ser um bom substrato para o isolamento de leveduras produtoras de enzimas de interesse industrial.

O filoplano do Hibiscus rosa-sinensis abriga uma enorme biodiversidade de leveduras e fungos semelhantes a leveduras cujo potencial biotecnológico ainda é desconhecido. Foram isoladas 84 cepas de leveduras de filoplano desta planta, sendo identificadas pela metodologia clássica. Do total de isolados 37% são de afinidade ascomicética, 36% de afinidade basidiomicética e 27% de fungos semelhantes a leveduras.