Search

Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq Amphetamine (AMPH) is a psychostimulant drug able to modify the neuroplasticity of areas related to the reward system; for instance, the mesocorticolimbic system. Besides the factors linked to the drug itself, addictive behaviors are also influenced by environment, stress and characteristics belonging to the person, which include sociability, social vulnerability, genetic conditions among others. Currently, the available approaches for the treatment of psychostimulant drug addiction are scarce and palliative, favoring relapses. Considering the external influences on drug addiction and the lack of efficient therapies, the current study evaluated the following factors that can interfere in AMPH addiction: I) the influence that the consumption of trans fatty acids (TFA) together with the practice of physical exercises, observing the drug addiction parameters. Such practice has been related to the reduction in the use of drugs, and the TFA intake has been associated to a higher risk of addictive behavior regarding AMPH. The supplementation with TFA (3g/kg, v.o.) happened before (3 months) and concomitantly to the AMPH conditioning and during the moderate physical exercise phase (running on the treadmill, 10m/s, for 1h, 5 times/week, for 5 weeks). In this experimental protocol, the sedentary animals conditioned with AMPH showed relapse behavior, while the ones that received the supplementation with TFA did not. In addition, the animals that consumed TFA and were AMPH conditioned showed higher anxiety, which was prevented by the physical exercise. These animals presented higher levels of TFA in the tegmental ventral area, striatum and pre-frontal cortex, II) the drug addiction treatment using m-trifluoromethyl-diphenyldiselenide has beneficial effects, which are related to its anxiolytic, antidepressant and antioxidant properties. In this protocol, it was observed that the 14-day treatment (0,01mg/kg) prevented the AMPH relapse without altering the working memory of the animals. The treatment reduced the serotonin uptake in the pre-frontal cortex and reduced the oxidative damages in this brain region as well; III) the use of ultra-diluted and dynamized AMPH (isoterapic), in centesimal scale (10-24 ). In this protocol, the AMPH relapse was reduced, the molecular parameters related to drug addiction (D1R, D2R, tyrosine hydroxylase and dopamine transporter) were modified; besides, the oxidative parameters in the pre-frontal cortex were modulated; IV) comparative evaluation of the moderate physical exercise protocol and the intense one. In this evaluation, the animals were submitted to the swimming test with or without extra weight load during 5 weeks. It was observed that the moderate exercise reduced the drug relapse and anxiety behaviors, while the intense exercise did not. Besides, the moderate exercise increased the levels of BDNF, pro-BDNF and TrkB in the hippocampus. On the other hand, it was observed that the intense exercise reduced D1R, tirosine hidroxilase and increased D2R. The four experimental protocols presented in this work (male, albino Wistar rats) were developed through the AMPH (4,0 mg/kg, i.p.) conditioning of the animals (male, albino Wistar rats). The behavioral analyses combined with the oxidative and molecular changes generate tools that can be useful for the treatment of AMPH addiction and in future contribute to anti-drug treatment protocols. A anfetamina (ANF) é uma droga psicoestimulante, cujo uso é capaz de modificar a neuroplasticidade de áreas relacionadas ao sistema de recompensa, como o sistema meso-cortico-límbico. Além dos fatores relacionados à droga em si, comportamentos aditivos são também influenciados por outros, como o ambiente, estresse e fatores do próprio indivíduo, incluindo sociabilidade, vulnerabilidade social, condições genéticas, entre outros. Atualmente as abordagens disponíveis para tratamento da toxicodependência por psicoestimulantes são escassos e paliativos, o que favorece as recaídas. Considerando as influências externas no contexto da drogadição e a carência de terapias eficientes, o presente estudo avaliou fatores que podem interferir nos mecanismos de adição por ANF, tais como: I) influência do consumo de ácidos graxos trans (AGT) juntamente com a prática de exercícios físicos, sobre parâmetros de dependência pela droga, desde que tal prática têm sido relacionada a redução do uso de drogas e a ingestão de AGT tem sido associada a um risco aumentando de comportamentos aditivos por ANF. A suplementação com AGT (3g/kg, v.o.) ocorreu previa (3 meses) e concomitantemente ao condicionamento com ANF e também durante a fase de execução do exercício físico moderado (corrida em esteira, 10m/s, por 1h, 5 vezes/semana, por 5 semanas). Neste protocolo experimental, animais sedentários e condicionados com ANF apresentaram comportamentos de recaída pela droga, mas não nos que receberam suplementação com AGT. Além disso, os animais que consumiram AGT e condicionados com ANF apresentaram maior ansiedade, que foi prevenida pelo exercício físico. Estes mesmos animais apresentaram maiores níveis de AGT na área tegmental ventral, striatum e córtex pré-frontal; II) tratamento da drogadição com o uso m-trifluorometil- difenildisseleneto, cujos efeitos benéficos estão relacionados às suas propriedades ansiolítica, antidepressiva e antioxidante. Neste protocolo, observou-se que o tratamento de 14 dias (0,01mg/kg) preveniu a recaída por ANF sem alterar a memória de trabalho nos animais. Também, o tratamento reduziu a captação da serotonina no córtex pré-frontal além de reduzir danos oxidativos nesta região cerebral; III) uso da ANF ultradiluída e dinamizada (isoterápico), em escala centesimal (10-24 ). Observou-se que o tratamento com o isoterápico reduziu a recaída ao uso da ANF, modificou parâmetros moleculares relacionados à drogadição (D1R, D2R, tirosina hidroxilase e transportador de dopamina) além de modular parâmetros oxidativos no córtex pré-frontal de ratos; IV) avaliação comparativa entre protocolos de exercício físico moderado e intenso. Neste protocolo os animais foram submetidos à natação com ou sem carga de peso adicional, durante 5 semanas. Foi observado que o exercício moderado reduziu a recaída pela droga e também reduziu comportamentos de ansiedade, enquanto que o exercício intenso não. Além disso, o exercício moderado aumentou os níveis de BDNF, pro-BDNF e TrkB no hipocampo dos animais. Por outro lado, observou-se que o exercício intenso reduziu D1R, tirosina hidroxilase e aumentou D2R. Tomados em conjunto, os quatro protocolos experimentais apresentados aqui, foram desenvolvidos através do condicionamento dos animais (ratos Wistar albinos machos) com ANF (4,0 mg/kg, i.p.). As análises comportamentais aliadas as alterações moleculares e oxidativas geram abordagens úteis no tratamento da toxicodependência pela ANF e futuramente contribuir para protocolos terapêuticos anti-drogadicção.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES Diptera of the Calliphoridae family play an important role in forensic analysis, veterinary and medical science. Its use in biotherapy is well known and important due to the biological activity of the larvae and the constituents of their secretion that help in tissue healing. An advantage of using larval secretion is the low toxicity in normal cells, little or no side effects with low production cost. This work evaluated the in vitro biological activity of larval secretion of L. cuprina and S. chlorogaster in protozoa and cell lines. In the first study, the secretion of L. cuprina was evaluated against L. amazonensis promastigotes, T. cruzi epimastigotes, B16-F10 tumor lineage and HFF-1 non-tumor cell lineage to evaluate cytotoxicity and safety. The results revealed that the secretion was effective in reducing the viability of parasites and tumor cells. It also proved to be safe against the fibroblast lineage. In the second study, secretions of L. cuprina and S. chlorogaster were evaluated against other tumor cell lines (A549, A375 and Hela), antiproliferative activity, DNA cleavage and identification of constituents by mass spectrometry. The results showed the ability of L. cuprina to reduce cell viability and increase reactive oxygen and nitrogen species against tumor cell lines A549, A375 and HeLa in all tests applied VN, ON, MTT, LDH, Adherence and DCFH-DA. Both secretions exerted antiproliferative activity and were able to cleave plasmid DNA. Regarding the analysis of the constituents, it was possible to identify components such as fatty acid, cembranoid valine, stearoylhistidine and tripeptide in the secretion of L. cuprina. The secretion of S. chlorogaster presented chemical structures not recognized in the database, suggesting the possibility of unpublished components. Taken together, the presented results demonstrate that dipteran secretion becomes an important resource to be analyzed due to its biological properties with in vitro action against protozoa and carcinomas. Dípteros da família Calliphoridae desempenham um papel importante em análises forenses, veterinárias e ciência médica. Seu uso em bioterapia é bem conhecido e importante devido à atividade biológica das larvas e aos constituintes da sua secreção que ajudam na cicatrização de tecidos. Uma vantagem do uso da secreção larval, é a baixa toxicidade em células normais, pouco ou nenhum efeito colateral com baixo custo para produção. Este trabalho avaliou a atividade biológica in vitro da secreção larval de L. cuprina e S. chlorogaster em protozoários e linhagens celulares. No primeiro estudo a secreção de L. cuprina foi avaliada frente à promastigotas de L. amazonensis, epimastigotas de T. cruzi, linhagem tumoral B16-F10 e não tumoral HFF-1 para avaliar citotoxicidade e segurança. Os resultados revelaram que a secreção foi eficaz em reduzir a viabilidade dos parasitas e células tumorais. Também mostrou-se segura frente à linhagem de fibroblastos. No segundo estudo foram avaliadas as secreções de L. cuprina e S. chlorogaster frente à outras linhagens de células tumorais (A549, A375 e Hela), atividade antiproliferativa, clivagem de DNA e identificação dos constituintes por espectrometria de massas. Os resultados mostraram a capacidade de L. cuprina em reduzir a viabilidade celular e aumentar de espécies reativas de oxigênio e nitrogênio frente às linhagens tumorais A549, A375 e HeLa, nas concentrações de 0,1, 0,25, 0,5, 1, 2, 5 e 10%, em todos os testes aplicados VN, ON, MTT, LDH, Aderência e DCFH-DA. Ambas as secreções exerceram atividade antiproliferativa e foram hábeis à clivar DNA plasmidial. Em relação à análise dos constituintes foi possível identificar componentes como ácido graxo, valina cembranoid, estearoil-histidina e tripeptídeo na secreção de L. cuprina. Já a secreção de S. chlorogaster apresentou estruturas químicas não reconhecidas no banco de dados, sugerindo possibilidade de componentes inéditos. Tomados em conjunto, os resultados apresentados demonstram que a secreção de dípteros torna-se um importante recurso a ser analisado devido a suas propriedades biológicas com ação in vitro contra protozoários e carcinomas.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES Periodontitis is an inflammatory, chronic and multifactorial disease that develops due to dysbiosis between the dental biofilm and the host's immune response, leading to a progressive destruction of dental attachment and support tissues. Initially, the inflammatory response is a local reaction that activates the innate immune system, stimulating the action of various types of pro-inflammatory cells, as well as tissue resident cells. The amplification of this initially localized response results in the release of a series of cytokines and other mediators and the spread of inflammation. Critical serum concentrations of pro-inflammatory cytokines influence leukocyte cells at the site of injury, playing a key role in the inflammatory process and, consequently, in the bone loss that occurs with the progression of periodontal disease. This study evaluated the adjunctive antimicrobial photodynamic therapy (aPDT) influence effects using methylene blue (MB) solubilized in ethanol on leukocyte defense and systemic inflammation of normoglycemic and diabetic rats with periodontitis. Rats were divided into two main groups: normoglycemics (n=25) and diabetics (n=25). After 14 days of the diabetes induction, each of the groups was subdivided into 5 (n=5), yielding 10 experimental groups, according to periodontal treatment in: negative control (NC; no periodontitis), positive control (PC; periodontitis; without any treatment); scaling and root planning (SRP; periodontitis); SRP plus aPDT with MB dissolved in water (aPDT I; periodontitis); and SRP plus aPDT with MB dissolved in ethanol (aPDT II; periodontitis). The ligature was removed from all animals after 7 days of its placement and periodontal treatments were performed. Seven days after periodontal treatments, the blood was collected for leukocyte and inflammatory profiles analysis. PC group showed higher leukocytes count and cytokines levels. aPDT indicated a protective influence observed by the decreased systemic inflammatory mediators. The aPDT as an adjunct to the SRP can induce the systemic protective response against inflammation periodontitis-induced, particularly when the MB is dissolved in hydroalcoholic solution and in the presence of diabetes. A Periodontite é uma doença inflamatória, crônica e multifatorial, que se desenvolve devido a disbiose entre o biofilme dentário e a resposta imune do hospedeiro, levando a uma destruição progressiva dos tecidos de inserção e suporte dentários. Inicialmente a resposta inflamatória é uma reação local que ativa o sistema imunológico inato, estimulando a ação de vários tipos de células pró-inflamatórias, bem como de células residentes do tecido. A amplificação desta resposta inicialmente localizada resulta na liberação de uma série de citocinas e outros mediadores e na disseminação da inflamação. Concentrações séricas críticas de citocinas próinflamatórias influenciam as células leucocitárias no local da lesão, desempenhando um papel fundamental no processo inflamatório e consequentemente, na perda óssea que ocorre com a progressão da doença periodontal. O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos da terapia fotodinâmica antimicrobiana adjuvante (aPDT) utilizando azul de metileno (MB) solubilizado em etanol sobre a defesa leucocitária e inflamação sistêmica de ratos normoglicêmicos e diabéticos com periodontite. Para isto, os ratos foram divididos em dois grupos principais: normoglicêmicos (n=25) e diabéticos (n=25). Após 14 dias da indução do diabetes, cada um dos grupos foi subdividido em 5 (n=5), originando 10 grupos experimentais, de acordo com o tratamento periodontal em: controle negativo (NC; sem periodontite), controle positivo (PC; periodontite; sem qualquer tratamento); raspagem e alisamento radicular (SRP; periodontite); SRP mais aPDT com MB dissolvido em água (aPDT I; periodontite); e SRP mais aPDT com MB dissolvido em etanol (aPDT II; periodontite). A ligadura foi retirada de todos os animais após 7 dias de sua colocação e foram realizados os tratamentos periodontais. Sete dias após os tratamentos periodontais, o sangue foi coletado para análise do perfil leucocitário (leucócitos totais, neutrófilos, eosinófilos, monócitos e linfócitos) e inflamatório (IL-1, IL-6, IL-10, INF-γ e TNFα). O grupo PC apresentou maior contagem de leucócitos e níveis de citocinas. A aPDT indicou uma influência protetora observada pela diminuição dos mediadores inflamatórios sistêmicos. A aPDT como adjuvante do SRP pode induzir a resposta protetora sistêmica contra a inflamação induzida por periodontite, principalmente quando o MB é dissolvido em solução hidroalcoólica e na presença de diabetes.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES Drug addiction is a chronic neuropsychiatric disorder characterized by the development of dependence, compulsion and frequent episodes of relapse, as available treatments are ineffective to prevent such a situation. Considering drug addiction, amphetamine (AMPH) exerts a potent psychostimulant action, by acting on dopaminergic receptors such as D1R, a transporter related to dopamine reuptake (DAT), and may also modulate transcription factors such as deltaFosB, with the main effect of increasing dopamine in the synaptic space, which is why it is often used for recreational purposes and is related to drug addiction and relapse.In the search for new therapeutic approaches to treat drug addiction and especially to prevent its recurrence, tactile stimulation (TS) is a technique that arouses interest due to its ability to exert neuroprotection, being beneficial in situations of stress and anxiety at different stages of development. The aim of the present study was to evaluate the influence of TS on drug addiction parameters in adult rats exposed to an AMPH-preference behavioral protocol. Two groups of male Wistar rats (50 days old) were exposed to the conditioned place preference (CPP) paradigm with saline (0.9% NaCl; n=20) or Amphetamine (AMPH - 4.0 mg/Kg; n=20). ) for 8 days. After conditioning and evaluation of drug preference behavior (CPP-1), half of the animals from each experimental group were submitted to the TS protocol, through by handling gently applied to the dorsal surface of the rat in the cranio-sacral direction for 8 days (15 min, 3x/day). From the 9th day, the animals were exposed again to AMPH or saline, for 3 additional days in the CPP to perform the drug relapse test (CPP-2). Working memory and locomotion were monitored in the Y-maze. Afterwards, the animals were euthanized and the nucleus accumbens (NAc) was dissected for molecular analysis by western blot. Behavioral observations showed that animals conditioned with AMPH showed a preference for the drug paired side in CPP-1, while working memory and locomotion showed no difference between the experimental groups, indicating that CPP was due to the hedonic effects of AMPH. It is noteworthy that in addition to preventing the drug relapse, as observed in the CPP-2 test, at the molecular level TS was able to modulate the dopaminergic system, by preventing the increase caused by AMPH in the immunoreactivity of D1 receptors (D1R) of dopamine, the dopamine transporter (DAT), and the enzyme tyrosine hydroxylase (TH). It also exerted this same effect on the transcription factor ΔFosB and on the levels of Mu-opioid receptors (MOR) in the NAc area. Through this study, it was possible to observe that TS was able to exert a neuroprotective influence on NAc, which is an important mesolimbic dopaminergic area of the central nervous system associated with the development and maintenance of drug addiction, preventing drug relapse. Thus, being a non-invasive manipulation and free from adverse effects, it can be inferred that TS can be an adjuvant or complementary therapeutic procedure in the treatment of drug addiction by psychostimulants such as AMPH. A drogadição é um transtorno neuropsiquiátrico crônico caracterizado pelo desenvolvimento de dependência, compulsão e frequentes episódios de recaída, já que os tratamentos disponíveis são ineficazes para prevenir tal situação. Considerando a drogadição, a anfetamina (ANF) exerce potente ação psicoestimulante, por atuar em receptores dopaminérgicos como D1R, transportador relacionado a recaptação de dopamina (DAT), podendo modular também fatores de transcrição como o deltaFosB, tendo como principal efeito o aumento de dopamina no espaço sináptico, sendo por isso frequentemente utilizada para fins recreacionais e relacionada à drogadição e recaída. Na busca de novas abordagens terapêuticas para tratar a drogadição e especialmente prevenir sua recorrência, a estimulação tátil (ET) é um manuseio que desperta interesse por sua capacidade de exercer neuroproteção em diferentes etapas do desenvolvimento. O objetivo do presente estudo foi avaliar a influência da ET sobre parâmetros de drogadição em ratos adultos expostos a um protocolo comportamental de preferência à ANF. Dois grupos de ratos Wistar machos (50 dias) foram expostos ao paradigma de preferência de lugar condicionado (PLC) com salina (NaCl 0,9%; n=20) ou Anfetamina (ANF - 4,0 mg/Kg; n=20) por 8 dias. Após o condicionamento e avaliação do comportamento de preferência pela droga (PLC-1), metade dos animais de cada grupo experimental foi submetida ao protocolo de ET, através de um manuseio aplicado gentilmente na superfície dorsal do rato no sentido crânio-sacal durante 8 dias (15 min, 3x/dia). A partir do 9º dia, os animais foram novamente expostos à ANF ou salina, por 3 dias adicionais no PLC para realização do teste de recaída à droga (PLC-2). A memória de trabalho e locomoção foram monitorados no labirinto em Y. Na sequência, os animais foram eutanasiados e o nucleus accumbens (NAc) foi dissecado para análises moleculares feitas através de western blot. As observações comportamentais mostraram que os animais condicionados com ANF apresentaram preferência pelo local em que receberam a droga no PLC-1, enquanto que a memória de trabalho e locomoção não mostraram diferença entre os grupos experimentais, indicando que a PLC foi decorrente dos efeitos hedônicos da ANF. Destaca-se que além de prevenir a recaída pela droga, como observado no teste de PLC-2, em nível molecular a ET foi capaz de modular o sistema dopaminérgico, por impedir o aumento ocasionado pela ANF na imunoreatividade dos receptores D1 (D1R) de dopamina, do transportador de dopamina (DAT), e da enzima tirosina hidroxilase (TH). Também exerceu esse mesmo efeito no fator de transcrição ΔFosB e nos níveis de receptores Mu-opioides (MOR) na área do NAc. Através desse estudo foi possível observar que a ET foi capaz de exercer influência neuroprotetora no NAc, a qual é uma importante área dopaminérgica mesolímbica do sistema nervoso central associada ao desenvolvimento e manutenção da drogadição, prevenindo a recaída à droga. Deste modo, sendo uma manipulação não invasiva e isenta de efeitos adversos, pode-se inferir que a ET pode ser um procedimento terapêutico adjuvante ou complementar no tratamento de drogadição por psicoestimulantes como a ANF.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio Grande do Sul - FAPERGS Depression is a common disease worldwide and although there are several drugs for the treatment of depression, the effectiveness of this pharmacotherapy still presents limitations, possibly due to the difficulty of understanding its pathophysiology. Tactile stimulation (TS) is a manual therapy applied both in early and in adult life. Studies have shown the benefits of TS in rodents in models of psychiatric disorders, including anxiety and addiction. In this study, our objective was to evaluate the influence of TS applied in the neonatal period or adult life in different animal models of depression. The first experiment of this study evaluated the possible positive response of TS on the reversion of depression-like behaviors in adulthood after reserpine administration. Adult female Wistar rats received reserpine once daily for three consecutive days (1mg/kg s.c.). The antidepressant imipramine (10mg/kg i.p.) was used as a positive control. Immediately after the reserpine last administration, the TS protocol started (15min/3xday, 8 days). Afterward, depression behavioral tests were performed and then the animals were euthanized for blood collection, for analysis of corticosterone and adrenocorticotrophic hormone (ACTH) levels in plasma, besides of and prefrontal cortex removal for quantification of BDNF, proBDNF, TrkB, GDNF, GFAP and glucocorticoid receptor (GR) immunoreactivity analyzed by western blotting. We observed that TS reverse the depression-like behaviors induced by reserpine. Besides, our results showed that TS reduced plasma levels of corticosterone and ACTH, and reduced adrenal weight, parameters which were increased by reserpine administration. In the PFC, TS increased BDNF, TrkB, GFAP, and GR immunoreactivity and reduced proBDNF levels. The second experiment of this study aimed to evaluate the effect of neonatal TS (10min/1xday, 8 days) on heterozygous serotonin transporter rats (SERT+/-) and evaluate anxiety and depression-like behaviors in adulthood. After the behavioral analyzes the animals were euthanized, and the basolateral amygdala was removed for the expression of BDNF and its isoforms, glutamatergic and gabaergic components as well as glucocorticoid (GR) and mineralocorticoid (MR) receptors and glucocorticoid responsive-genes. We observed that TS improved the anxiety, depressive-like and social behaviors in SERT+/- rats. In the molecular analyzes, only TS per se showed modifications in in the basolateral amygdala, which decreased BDNF and its isoforms IV and VI, the ratio of GR/MR, the glucocorticoid responsive-genes, as well as the ratio of VGLUT/VGAT, while TS increased the GAD67 levels. As a last section of the thesis, a systematic review was performed to evaluate the impact of TS in rats. A total of 55 studies were identified and we observed that TS in rats showed beneficial influences on behaviors, mainly on emotional behaviors. Also, the effects on the peripheric and central nervous system were observed, in which TS improved important stress markers, such as corticosterone levels and also improved neuroplasticity markers, hypothesizing that TS is an effective tool for the improvement of neurobiological and behavioral response in rats. Considering the results found in this thesis, we can conclude that TS exerts a positive influence on anxiety and depression-like behaviors, confirming the hypothesis that these beneficial effects are associated with HPA axis and neuroplasticity. Besides, the systematic review confirmed these hypotheses of the beneficial effects of TS in rats, especially those observed on neuropsychiatric disorders, such as depression and anxiety. A depressão é um transtorno mental que afeta milhões de pessoas em todo o mundo, e embora diferentes fármacos sejam utilizados para tratar a doença, a eficácia destes tratamentos ainda apresenta limitações. A estimulação tátil (ET) é uma terapia manual que pode ser aplicada desde o nascimento até a vida adulta, e evidências experimentais têm mostrado seus benefícios em diferentes modelos animais. O objetivo dos estudos que compõem esta tese foi avaliar a influência da ET aplicada durante o período neonatal ou na vida adulta de ratos expostos à diferentes modelos de depressão. O protocolo experimental 1 avaliou a influência da ET na idade adulta sobre comportamentos tipo depressivos em ratas. As fêmeas receberam administração de reserpina (1mg/kg/dia, s.c. 3 dias) para a indução de sinais de depressão. O fármaco antidepressivo imipramina (10mg/kg, i.p.) foi utilizado como controle positivo. Após a última administração de reserpina, o protocolo de ET foi realizado (15min/3xdia, 8 dias). Subsequentemente à eutanásia, biomarcadores de estresse foram quantificados no sangue, enquanto a expressão de BDNF, proBDNF, TrkB, GDNF, GFAP e GR foram quantificados através de eletroforese em gel em amostras do córtex pré-frontal (CPF). Os resultados mostraram que a ET reverteu os comportamentos tipo depressivo induzidos pela reserpina, reduzindo também os níveis plasmáticos de corticosterona e do hormônio adrenocorticotrófico, juntamente com menor peso das adrenais. No CPF, a ET aumentou a expressão do BDNF, TrkB, GFAP e GR, e reduziu os níveis de proBDNF. No segundo protocolo experimental avaliamos a influência da ET neonatal (10min/1xdia, 8 dias) aplicada em ratos heterozigotos para o transportador de serotonina (SERT+/-) a fim de determinar a influência deste manuseio sobre o desenvolvimento de comportamentos social, ansiedade e anedonia. Após a eutanásia, a amígdala basolateral foi coletada e a expressão de BDNF e suas isoformas, transportador vesicular de glutamato (VGLUT) e do GABA (VGAT), enzima GAD67, GR e MR, assim como genes responsivos aos glicocorticoides foram mensurados por RT-PCR. Observamos que em animais SERT+/-, a ET melhorou os comportamentos social e afetivos. Em nível molecular, somente a ET per se mostrou alterações na amígdala basolateral, na qual reduziu os níveis de BDNF e das isoformas IV e VI, a razão dos receptores GR/MR, dos genes responsivos aos glicocorticoides, e a razão VGLUT/VGAT, enquanto que aumentou os níveis da enzima GAD67. Por fim, uma revisão sistemática foi realizada para avaliar o impacto da ET em ratos. Após busca em um banco de dados, 55 estudos foram selecionados dentro dos critérios exigidos. De modo geral, observamos que a ET exerceu influências benéficas em diferentes comportamentos, modificando principalmente, comportamentos relacionados à cognição e à emoção. Além disto, alterações periféricas, observadas principalmente através dos níveis séricos de corticosterona como também sobre o SNC, sugerindo que a aplicação da ET constitui um protocolo de manipulação não invasivo e eficaz para melhorar funções neurobiológicas dos animais. A partir dos resultados obtidos nos protocolos experimentais descritos nesta tese, observavamos que a ET exerceu influência favorável sobre comportamentos do tipo depressivo e de ansiedade. Estes resultados confirmam nossa hipótese inicial sobre os benefícios da ET na redução da hiperatividade do eixo hipotalâmico-pituitária-adrenal, minimizando assim a liberação de corticosterona, e favorecendo a ativação de fatores neurotróficos e de outros sistemas relacionados à emocionalidade. Por fim, a revisão sistemática corroborou com os resultados experimentais apresentados, os quais em conjunto, confirmam os benefícios da ET em diferentes períodos da vida sobre aspectos neuroquímico-moleculares e comportamentais relacionados a diferentes transtornos psiquiátricos, tais como ansiedade e depressão.

Apical periodontitis, inflammatory process around the apex of a tooth root, is primarily a sequel to microbial infection of the pulp space of teeth and is a remarkably widespread problem. P-type ATPases, as Na+/K+-ATPase (NKA) and Ca2+-ATPase (CAA), create electrochemical potential gradients for the different ions essential for various cellular functions. Such transmembrane enzymes have an oxidative regulation and are associated with the pathogenesis of various systemic diseases. However, its relationship with apical periodontitis has not yet been reported. Considering that oxidative stress is related to the pathogenesis of apical periodontitis, this study was designed to evaluate the influence of apical periodontitis on oxidative stress parameters and ATPases activities in different organs of adult and young rats. Adult male Wistar rats were randomly assigned to two experimental groups: control (CT; no periapical lesion; n=8) and apical periodontitis (AP; with apical periodontitis; n=9). Apical periodontitis was induced by pulpal exposure of the right mandibular first molar. After 21 days of apical periodontitis induction, the rats were euthanized and the jaws dissected for radiographic and histological analysis. In addition, the heart, liver, pancreas and kidneys were collected for biochemical analyzes of NKA activity, reactive species (RS) generation and endogenous antioxidant content. Apical periodontitis increased NKA activity in the heart, liver and pancreas; increased RS generation only in the heart. However, the same influence was not observed in the kidney. While in the heart and pancreas was observed a reduction in endogenous antioxidant defenses, in the liver and kidney such levels were increased. NKA activity and endogenous antioxidant defense system modulations observed in this study suggest that alteration of cellular electrochemical gradient and antioxidant status may be involved in the pathophysiology of apical periodontitis. To continue the studies, to verify if there is influence of age and different pulp exposure times on the same parameters analyzed, a second experimental protocol was developed with young male Wistar rats that were also randomly assigned to two experimental groups: control (CT; no apical periodontitis; n = 21) and apical periodontitis (AP; with apical periodontitis; n = 24). Apical periodontitis was induced by pulpal exposure of the right mandibular first molar. After 7, 14 and 21 days of apical periodontitis induction, the rats were euthanized and the mandibles were dissected for radiographic analysis. In addition, the heart, liver, pancreas and kidney were collected for biochemical analyzes of the RS generation, levels of the lipoperoxidation and protein carbonyls, besides NKA and CAA activities. Apical periodontitis induced oxidative damage to the heart, liver and pancreas, observed mainly 21 days after pulp exposure. In addition, apical periodontitis was related to reduced activities in NAK and CAA in all organs analyzed, except the pancreas, in which an increase in CAA activity was observed at all times evaluated. The reduction in the activity of NKA and CAA, the modulation of the endogenous antioxidant defense system and the increase in oxidative damage observed in this study suggest that changes in the cellular electrochemical gradient and oxidative stress may be involved in the pathophysiology of apical periodontitis. A periodontite apical, processo inflamatório em torno do ápice da raiz de um dente, é uma sequela da infecção microbiana do espaço pulpar dos dentes e é um problema notavelmente disseminado. ATPases do tipo P, como a Na+/K+-ATPase (NKA) e a Ca2+-ATPase (CAA), criam gradientes de potencial eletroquímico para os diferentes íons essenciais para diversas funções celulares, variando desde a geração de potencial de membrana, até contração muscular e remoção de íons tóxicos das células. Tais enzimas transmembranares possuem uma regulação oxidativa e estão associadas à patogênese de várias doenças sistêmicas, como obesidade, diabetes, dislipidemia e aterosclerose. No entanto, sua relação com a periodontite apical ainda não foi relatada. Considerando que o estresse oxidativo está relacionado à patogênese da periodontite apical, este estudo foi desenvolvido para avaliar a influência da periodontite apical sobre parâmetros de estresse oxidativo e atividades d ATPases em diferentes órgãos de ratos adultos e jovens. Ratos Wistar machos adultos foram aleatoriamente designados a dois grupos experimentais: controle (CT; sem lesão periapical; n=8) e periodontite apical (AP; com periodontite apical; n=9). A periodontite apical foi induzida pela exposição pulpar do primeiro molar mandibular direito. Após 21 dias da indução da periodontite apical, os animais foram eutanasiados e as mandíbulas foram dissecadas para as análises radiográfica e histológica. Além disso, o coração, fígado, pâncreas e rins foram coletados para as análises bioquímicas da atividade da NKA, geração de espécies reativas (ER) e conteúdo de antioxidantes endógenos. A periodontite apical aumentou a atividade da NKA no coração, fígado e pâncreas; e aumentou a geração dos ER apenas no coração. No entanto, a mesma influência não foi observada nos rim. Enquanto no coração e no pâncreas foi observado uma redução das defesas antioxidantes endógenas, no fígado e no rim tais níveis foram aumentados. Na continuidade dos estudos, para verificar se existe influência da idade e de diferentes tempos de exposição pulpar sobre os mesmos parâmetros analisados, um segundo protocolo experimental foi desenvolvido com ratos Wistar machos jovens que foram também aleatoriamente designados a dois grupos experimentais: controle (CT; sem periodontite apical; n=21) e periodontite apical (PA; com periodontite apical; n=24). A periodontite apical foi induzida pela exposição pulpar do primeiro molar mandibular direito. Após 7, 14 e 21 dias da indução da periodontite apical, os ratos foram eutanasiados e as mandíbulas foram dissecadas para análise radiográfica. Além disso, o coração, fígado e o pâncreas foram coletados para as análises bioquímicas da geração de ER, níveis de lipoperoxidação e de carbonilação de proteínas, além das atividades da NKA e da CAA. A periodontite apical induziu danos oxidativos no coração, fígado e pâncreas, observados principalmente 21 dias após a exposição pulpar. Além disso, a periodontite apical foi relacionada à redução das atividades na NAK e da CAA em todos os órgãos analisados, exceto no pâncreas, no qual se observou um aumento na atividade da CAA em todos os tempos avaliados. A redução da atividade da NKA e da CAA, a modulação do sistema de defesa antioxidante endógeno e o aumento dos danos oxidativos observados nesse estudo sugerem que a alteração do gradiente eletroquímico celular e o estresse oxidativo podem estar envolvidos na fisiopatologia da periodontite apical.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES Addiction, which is characterized by the desire and the search for the drug, despite negative consequences, is a serious health problem, causing impairments to the individual, your family, and society. Thus, the developing of strategies to better understand neurobiological mechanisms related to this disorder are extremely relevant. Studies revealed that adverse experiences during the adolescence period could lead to neural circuit impairments facilitating neuropsychiatric disorders development, which could be manifested throughout life and even into adulthood. In this perspective, the inadequate use of licit prescribed psychostimulant drugs during adolescence has become a social concern nowadays. The objective of the current study was to evaluate the influence of modafinil (MOD) administration, a prescription drug, during adolescence on the conditioned place preference (CPP) for amphetamine (AMPH) in rats. The study is based on the hypothesis that prolonged MOD exposure during adolescence could modify the expression of molecular biomarkers related to memory (pro-BDNF, BDNF, Trk-B e GDNF) and targets of the mesolimbic dopaminergic pathway (D1R, D2R, DAT, TH e VMAT-2), affecting the cerebral oxidative status leading to behavioral alterations. From the pilot study (experimental protocol I), when we evaluate the MOD (64mg/kg p.o.) exposure influence on adolescent rats for 14 days, MOD improves short-term memory without causes changes in locomotor or anxiety parameters in the animals. Concerning the oxidative status, the MOD increased the catalase (CAT) activity decreasing oxidative damage markers in the prefrontal cortex, striatum and ventral tegmental área (VTA), as one exception the hippocampus, which MOD did not exert significative influence on the parameters evaluated. From the experimental protocol II, adolescent animals were exposed to MOD and consecutively conditioned with AMPH in the CPP paradigm in adulthood, when we observed that MOD reduced the preference for the drug, preventing locomotor alterations, anxiety-like symptoms, and memory impairments during withdrawal. MOD also showed antioxidant activity and beneficial influences on biomarkers related to memory (pro-BDNF, BDNF, and Trk-B), acting as a modulator of the hippocampal dopaminergic system (DAT, D1R, and D2R). The experimental protocol III was aimed to evaluate whether the same MOD beneficial influences would be repeated when these animals were AMPH-exposed still during adolescence. Again, MOD exposure reduced AMPH-CPP reducing the anxiety-like symptoms during withdrawal. Oxidative and molecular alterations in the dopaminergic system were observed in the VTA and striatum of this animals when MOD exerted an upregulation of striatal dopaminergic targets (TH, DAT, D1R, and D2R) after AMPH exposure, possibly preventing the decrease of dopamine levels during withdrawal and this could be reflected in the behaviors presented. From the experimental protocol IV, the MOD exposure occurred after AMPH-CPP was established, it was proposed as a treatment in the relapse. Such approach showed that MOD treatment prevented the AMPH relapse acting beneficially on memory. At the molecular level, the MOD caused beneficial changes in the dopaminergic system as well in neurotrophins related to the maintenance of this pathway upon AMPH exposure in the ventral striatum. In conclusion of these studies, it is possible to infer that MOD exerted beneficial behavioral effects on the preference and relapse for AMPH when administered during adolescence. Those behaviors occurred together with positive responses on oxidative status and molecular in brain areas related to addiction. So far, until this moment it is possible to propose that MOD could be acting as a modulator of the dopaminergic system against the damage caused by AMPH in rats. A adição, a qual é caracterizada pelo desejo e busca pela droga apesar das consequências negativas, é um grave problema de saúde pública causando prejuízos para o indivíduo, sua famíllia e para a sociedade. Dessa forma, o desenvolvimento de estratégias para o entendimento dos mecanismos neurobiológicos relacionados a esse transtorno são de extrema relevância. Estudos revelam que experiências adversas durante a adolescência, podem causar prejuízos aos circuitos neurais do indivíduo, facilitando o desenvolvimento de transtornos neuropsiquiátricos, que podem se manifestar ao longo da vida e até na idade adulta. Em vista disso, o uso inadequado de fármacos psicoestimulantes de uso lícito com prescrição médica durante a adolescência têm se tornado um assunto preocupante na sociedade atual. O presente estudo teve por objetivo avaliar a influência da administração de modafinil (MOD), um psicoestimulante de prescrição, durante a adolescência sobre a preferência de lugar condicionada (PLC) e sobre a recaída por anfetamina (ANF) em ratos. Tal estudo baseia-se na hipótese de que a exposição prolongada ao MOD durante a adolescência poderia modificar a expressão de biomarcadores relacionados à plasticidade sináptica (pro-BDNF, BDNF, Trk-B, GDNF), assim como, alvos da via mesolímbica dopaminérgica (D1R, D2R, DAT, TH, VMAT-2), afetando o status oxidativo cerebral em áreas mesocorticolímbicas, relacionadas com a recompensa e adição, resultando em alterações comportamentais. A partir de um estudo piloto (protocolo experimental I), Destinado a avaliar a influência da exposição de ratos adolescentes ao MOD (64mg/kg, per oral, p.o.) durante 14 dias, observou-se que o MOD melhorou a memória recente sem alterar parâmetros locomotores ou de ansiedade dos animais. Em relação ao status oxidativo, o MOD aumentou a atividade da catalase, e diminuiu marcadores de dano oxidativo no córtex préfrontal, estriado e área tegmental ventral (ATV), exceto no hipocampo, onde o MOD não exerceu influência significativa sobre os parâmetros avaliados. No protocolo experimental II, animais adolescentes foram expostos ao MOD e, posteriormente, condicionados com ANF no paradigma de PLC na idade adulta, quando observou-se que o MOD reduziu a preferência pela droga, prevenindo alterações locomotoras, sinais de ansiedade e prejuízos de memória recente no período de abstinência da droga. O MOD também mostrou atividade antioxidante e efeitos benéficos sobre os biomarcadores relacionados à memória (pro-BDNF, BDNF, Trk-B) agindo como um modulador do sistema dopaminérgico hipocampal (DAT, D1R e D2R). O protocolo experimental III foi realizado com o objetivo de verificar se as mesmas influências benéficas do MOD seriam observadas quando os animais fossem expostos à ANF ainda na adolescência. Novamente, a exposição ao MOD reduziu a PLC por ANF, reduzindo comportamentos de ansiedade durante a abstinência da droga. Alterações do status oxidativo e moleculares no sistema dopaminérgico foram observadas na ATV e estriado desses animais, quando o MOD exerceu uma suprarregulação de alvos estriatais dopaminérgicos (TH, DAT, D1R e D2R) após a exposição à ANF, possivelmente prevenindo a redução nos níveis de dopamina durante a retirada da droga, o que pode ter sido refletido sobre os comportamentos apresentados. No protocolo experimental IV, a exposição ao MOD ocorreu após a PLC por ANF já estar estabelecida, assim o MOD foi proposto como um tratamento à recaída. Tal abordagem mostrou que o MOD preveniu a recaída pela ANF agindo beneficamente sobre a memória. Em nível molecular, o MOD causou alterações benéficas tanto no sistema dopaminérgico como em neurotrofinas relacionadas a manutenção dessa via, no estriado ventral, após a exposição à ANF. Como conclusão desses estudos, é possível inferir que o MOD exerceu efeitos comportamentais benéficos frente à preferência e à recaída por ANF quando administrado durante a adolescência, os quais ocorreram juntamente a respostas positivas sobre o status oxidativo e molecular em áreas cerebrais relacionadas à adição. Até o presente momento é possível propor que o MOD poderia estar agindo como um modulador do sistema dopaminérgico frente ao dano causado pela ANF em ratos.