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Die Arbeit „Amplifikation von Prionen in vitro“ beruhte auf der Amplifikationsmethode die erstmals 2001 vorgestellt wurde (Saborio et al., 2001). Bei der PMCA wird erstmals PK-resistentes PrPres in ausreichender Menge in vitro hergestellt, welches molekularbiologisch dem Erreger spongiformer Enzephalopathien gleicht. Die PMCA erlaubt somit eine in vitro Untersuchung des pathologischen Umfaltungsprozess von PrPC zu PrPSc für diagnostische und therapeutische Studien. In dieser Arbeit wurden ausgiebig die Einzelschritte der PMCA Methode, insbesondere die Quantifikation der Western Blot Bande und die Auswirkungen der Sonifikationsleistung und der Inkubationszeit auf die Amplifikationseffizienz untersucht. Je nach Stärke der Sonifizierung ändert sich die Effizienz der PMCA Reaktion (Kap.‎3.1.2) . Eine Amplifikation ohne Sonifikation ist möglich, scheint aber nicht autokatalytisch aktives PrPres zu erzeugen und erfüllt somit nicht die Prion Hypothese ‎3.1.3 und ‎4.1). Neues PrPres kann als seed für weitere Amplifikationen dienen (Kap. ‎3.1.6). Parallelansätze zeigten die Reproduzierbarkeit der PMCA, so dass vergleichende Studien mit unterschiedlichen Reaktionsansätzen einen Vergleich der Amplifikationseffizienz ermöglichen (Kap ‎3.1.5). Die Intensitätsmessung von Western Blot Banden repräsentiert die Proteinmenge in vitro (Kap. ‎2.2.6). Es konnte gezeigt werden, dass PrPC und PrPSc essentiell für die Durchführung der Reaktion sind. Somit konnte gezeigt werden, dass die PMCA im Einklang mit der Prionhypothese steht, die besagt, dass ein pathogener PrPSc-Seed die Umfaltung von nativem PrPC initiiert. (Kap ‎3.1.4 und ‎3.2). Die molekulare Spezifität der PMCA Reaktion wurde hervorgehoben durch die Erkenntnis, dass rPrP die Amplifikation in vitro hemmt (Kap. ‎3.2, Bieschke et al., 2004). Prion Proteine binden Kupfer in vivo (Brown et al., 1997a) und in geringerer Affinität auch Ni, Mn und Zn (Jackson et al., 2001). Die Rolle von Metallen bei der Konversion von PrPC zu PrPSc ist noch nicht endgültig geklärt. In dieser Arbeit wurde erstmals gezeigt, dass bei Zugabe von Mn, Ni und Zink in ca. 10fach physiologischen Konzentrationen von 50µM und unphysiologischen 500µM die PrPres Amplifikation gefördert wird, während Cu keinen Effekt zeigt (Kap. ‎3.3.1). Gleichzeitig verringern alle Metallionen die Stabilität von neu entstandenem PrPres gegenüber PK (Kap. ‎3.3.2). Man kann sich den destabilisierten Zustand als ein Metallgebundenes PrP-Zwischenprodukt in der Umfaltung von PrPC zu PrPSc vorstellen (Sarafoff et al., 2005). Die PMCA Reaktion wie von Saborio et al. beschrieben hat einige Nachteile. Man arbeitet mit infektiösem Material in einem offenen System und verursacht eine Kontaminaton der Sicherheitswerkbank. Es wurden zwei Systeme zur automatischen Amplifikation im geschlossenen System entwickelt. Der Wasserbadamplifikator sonifizierte zyklisch das temperierte Becken in dem die Proben in einem Schwimmer genau positioniert wurden (Kap. ‎3.4.1). Es zeigte sich eine maximale Amplifikation von 14fach in der Mitte des Bades wohingegen die Konversionseffizienz zum Rand des Beckens hin gleichmäßig absank (Kap ‎3.4.2). Aufgrund der inhomogenen Ergebnisse mit dem Wasserbad wurde mit einem Microplate Horn der Munich Prion Cycler entwickelt, wo der gesamte Boden des Beschallungsbeckens vom Abstrahlkopf der Ultraschallsonotrode besteht, so dass eine homogene Leistungsverteilung erwartet wurde. Die Proben befanden sich in einer mit Plastikfolie versiegelten Mikrotiterplatte, so dass Verluste und Kontaminationen ausgeschlossen werden konnten (Kap. ‎3.4.3). Es konnte eine gleichmäßigere Amplifikation von 3,0 ± 0,7 gezeigt werden, wobei kein Abfall der Faktoren am Rand der Platte festzustellen war (Kap. ‎3.4.4). Es konnte mit den beiden hier vorgestellten Systemen zum ersten Mal eine Amplifikation von PrPres mit indirekter Sonifikation von verschlossenen Proben und dem Einfluss der Ultraschallleistung auf die Amplifikation gezeigt werden (Sarafoff et al., 2005). Dies zeigte auch, dass die Metalloberfläche der Sonotrode bei der manuellen PMCA keine katalytische Funktion bei der Konversion des Kupferbindenden PrPC zu PrPres innehat. Der Munich Prion Cycler ermöglicht eine homogene Amplifikation von Parallelproben im Mikrotiterformat. Die Entwicklung der ELISA Technologie zur Quantifizierung von PrP in Homogenaten wird in Zukunft ein limitierender Schritt in der Automatisierung der PMCA Reaktion sein (Kap. ‎2.2.7 und ‎4.4).

BACKGROUND: Patients receiving oral anticoagulation (OAC) who undergo drug-eluting stent (DES) implantation require additional dual antiplatelet therapy with aspirin and clopidogrel. Such triple therapy confers an elevated bleeding risk, and its optimal duration is not known.OBJECTIVES: The goal of this study was to evaluate whether shortening the duration of clopidogrel therapy from 6 months to 6 weeks after DES implantation was associated with a superior net clinical outcome in patients receiving concomitant aspirin and OAC.METHODS: In this randomized, open-label trial, we enrolled patients receiving OAC who underwent DES implantation at 3 European centers between September 2008 and December 2013. A total of 614 patients receiving concomitant aspirin and OAC were randomized to either 6-week clopidogrel therapy (n = 307) or 6-month clopidogrel therapy (n = 307). The primary endpoint was a composite of death, myocardial infarction (MI), definite stent thrombosis, stroke, or Thrombolysis In Myocardial Infarction (TIMI) major bleeding at 9 months.RESULTS: The primary endpoint occurred in 30 patients (9.8%) in the 6-week group compared with 27 patients (8.8%) in the 6-month group (hazard ratio [HR]: 1.14; 95% CI: 0.68 to 1.91; p = 0.63). There were no significant differences for the secondary combined ischemic endpoint of cardiac death, MI, definite stent thrombosis, and ischemic stroke (12 [4.0%] vs. 13 [4.3%]; HR: 0.93; 95% CI: 0.43 to 2.05; p = 0.87) or the secondary bleeding endpoint of TIMI major bleeding (16 [5.3%] vs. 12 [4.0%]; HR: 1.35; 95% CI: 0.64 to 2.84; p = 0.44).CONCLUSIONS: Six weeks of triple therapy was not superior to 6 months with respect to net clinical outcomes. These results suggest that physicians should weigh the trade-off between ischemic and bleeding risk when choosing the shorter or longer duration of triple therapy. (Triple Therapy in Patients on Oral Anticoagulation After Drug Eluting Stent Implantation [ISAR-TRIPLE]; NCT00776633).

Dies ist eine retrospektive Studie von 220 Patienten mit akutem Myokardinfarkt, die nach sechs Tagen eine kardiale Magnetresonanztomographie erhielten. Die Analyse der Elektrokardiogramme (EKG) ergab, dass Unterschiede in der Sensitivität der geläufigen EKG-Definitionen bei der Erkennung des akuten Myokardinfarkts bestehen. Zusätzliche linksdorsale und rechtspräkordiale EKG-Ableitungen erhöhten nicht die Gesamtsensitivität zum Nachweis eines Infarktes. Die Sensitivität der rechtspräkordialen Ableitungen zum Nachweis von rechtsventrikulären Infarkten war gering. Bei den meisten Patienten mit STEMI lag ein transmuraler Infarkt vor, aber auch bei der Hälfte der Patienten mit NSTEMI fand sich in der Magnetresonanztomographie das Bild eines transmuralen Infarktes. This is a retrospective study of 220 patients with acute myocardial infarction who underwent cardiac magnetic resonance imaging after six days. The analysis of the electrocardiogram (ECG) showed differences in the sensitivity of the standard ECG definitions in the detection of acute myocardial infarction. Additional extended posterior and right precordial leads did not improve the overall sensitivity for the detection of infarction. The sensitivity of right precordial leads for the detection of right ventricular infarction was low. Most patients with STEMI had a transmural infarction but also half of the patients with NSTMI showed a transmural infarction in the magnetic resonance imaging.