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Esta tesis muestra que los soportes activados con divinil sulfona (DVS) pueden ser muy útiles para conseguir la estabilización de enzimas por unión covalente multipuntual, los soportes son muy estables, reaccionan con diferentes grupos de las enzimas en diferenets condiciones, etc. Sin embargo, en ocasiones producen la inactivación de las mismas, o la inmovilización es muy lenta sugiriendo que la inmovilización no es tan sencilla como en otros soportes. El carácter moderadamente hidrofóbico del grupo introducido puede tener consecuencias. Se ha demostrado como la inmovilización puede realizarse a diferentes pHs, y que esto parece implicar diferentes áreas de las moléculas de proteína, ya que tras su incubación a pH 10 y posterior bloqueo, las propiedades son muy diferentes. Por otro lado, se confirma que las lipasas se pueden modular via inmovilización o modificación química o física posterior: no solo la estabilidad, sino también la especificidad y la selectividad pueden alterarse de forma muy significativa. Estos cambios no son predecibles y dependen del sustrato, condiciones experimentales, y en el caso de las modificaciones posteriores, del protocolo de inmovilización utilizado. También se ha mostrado un protocolo muy sencillo que permite “el bioimprinting” de la forma abierta de lipasas usando un detergente para forzar la apertura de las lipasas y estabilizando esta forma abierta por al adición de un polímero ionico que recubre la superfice de la protein. Este trabalho de tese apresenta suportes ativados com divilsulfona (DVS) como úteis para a estabilização de enzimas por ligação covalente multipontual, os suportes são muito estáveis, e reagem com diferentes grupos de enzimas em diferentes condições, etc. No entanto, em algumas ocasiões produzem a inativação das mesmas, ou a imobilização é muito lenta, sugerindo que a imobilização não é tão fácil como em outros suportes. O caráter moderadamente hidrofóbico do grupo introduzido pode ter consequências. Tem sido demonstrado que a imobilização pode ser realizada em diferentes valores de pH, e isto parece envolver diferentes áreas das moléculas da proteína, uma vez que após a incubação a pH 10 e subsequente bloqueio, as propriedades são muito diferentes. Além disso, confirmou-se a possibilidade de modular lipases através da imobilização ou subsequente modificação física ou química, que podem ser não só a estabilidade, mas também a especificidade e seletividade podem ser alteradas significativamente. Essas mudanças não são previsíveis e dependem do substrato, das condições experimentais, e em caso de alterações posteriores, ou do protocolo de imobilização utilizado. Também é mostrado um protocolo simples que permite "um bioimprinting" da forma aberta de lipases utilizando um detergente para forçar a abertura, e a estabilização desta lipase aberta é conseguida por meio da adição de um polímero iônico revestindo a superfície da proteína.

Biodiesel production by enzymatic esterification reaction using supercritical fluids can be used for the synthesis of biofuel. The objective of this study was to evaluate the operational parameters of enzymatic synthesis in supercritical medium. The 1st step was the preparation of the biocatalyst by immobilization of lipase from Candida antarctica type B (Calb) by covalent bond using chitosan as support. In the immobilization procedure, it was the following as activating agents: glycidol, glutaraldehyde and ethylenediamine (EDA). The 2nd step was the measurement of hydrolysis of the immobilized enzyme, this was evaluated by hydrolysis of butyrate p.nitrophenyl butyrate (PNPB). In order to determine the best operational conditions of the reacton, it was enzyme suport conducted a experimental design (2^3), in the following parameters: molar rather alcohol oil, temperature, and then the best result was obtained when using chitosan 5% (w/v) - glyoxyl -EDA-glutaraldehyde, of 18.95 U / g. In Step 3, we carried out the esterification reactions using oleic acid, ethanol and carbon dioxide as supercritical fluid. It should be noticed that the amount of oleic acid used in these reactions was constant, with 1 g of immobilized enzyme, corresponding to 10% by weight oleic acid. An experimental design was conducted to evaluate the operational conditions molar ratio, reaction time and temperature. The highest rate was 46.9% at a temperature of 29.9 °C, molar ratio ethanol: oleic acid equal to 4.50:1, and a reaction time of 6.50 hours. The temperature affected the conversion within the range studied. The parameter molar ratio alcohol: oleic acid in the intervals studied (2.5:1, 4.5:1, 6.5:1) showed that the values with the lowest ratio of molar ratio with the highest conversion rates. It was observed a lost of catalytic activity during the recycling procedure. Additionally, it should be mentioned that a low conversion of ethyl esters, might be solved with the use of zeolite to remove water from medium, once it believed that that the presence of water precludes the maximum conversion. A produção de biodiesel pela reação de esterificação enzimática por intermédio de fluidos supercríticos pode ser usado na síntese de biocombustíveis. O objetivo deste trabalho foi avaliar parâmetros operacionais de síntese enzimática de oleato de etila em meio supercrítico. A primeira etapa foi a preparação do biocatalisador através da imobilização da lipase de Candida antarctica tipo B (CalB), por ligação covalente, utilizando quitosana como suporte. No procedimento de imobilização, realizou-se a ativação do suporte, utilizando como agentes ativantes: glicidol, glutaraldeído e/ou etilenodiamina (EDA). O segundo passo consistiu da medida da hidrólise da enzima imobilizada, que foi avaliada pela hidrólise do butirato de para-nitrofenila (pNPB). Em ordem para determinar a melhor condição operacional da reação, foi conduzido um planejamento experimental (2^3), com os seguintes parâmetros: razão molar álcool:ácido graxo, temperatura, e tempo de reação, então o melhor resultado foi obtido usando quitosana 5% (m/V) - Glioxil-EDA-Glutaraldeído, de 18,95 U/g. No terceiro passo, realizou-se as reações de esterificação utilizando ácido oleico, álcool etílico e dióxido de carbono como fluido supercrítico. A quantidade de óleo usada nestas reações foi constante, com 1,0 g de biocatalisador correspondendo a 10% da massa de óleo. Um planejamento experimental foi realizado para se avaliar as condições operacionais (razão molar, tempo de reação e temperatura). O maior valor de conversão foi de 46,9% para uma temperatura de 29,9 °C, razão molar etanol: ácido oleico igual 4,50: 1 e tempo reacional de 6,5 horas. O aumento da temperatura influenciou a conversão positivamente, dentro do intervalo estudado. O parâmetro razão molar álcool: ácido oleico nos intervalos estudados (2,5:1; 4,5:1; 6,5:1) mostrou que os valores com a menor relação de razão molar possuem as maiores taxas de conversão. Ocorreu a perda de atividade catalítica durante os procedimentos de reciclo. Adicionalmente, a baixa conversão de ésteres etílicos pode ser solucionada com o uso de zeólita para remoção de água do meio, uma vez que se acredita que a presença de água impossibilita a máxima conversão.

Biolubricants have been gaining more market share given the increased interest in replacing the use of petroleum-based lubricants. They are produced using renewable raw materials such as vegetable oils, and lipases can be used as catalysts for their syntheses, making these processes more environmentally friendly. Among the innovations created with enzymatic engineering tools, lipase Eversa® Transform 2.0 appears as an enzymatic formulation, genetically modified, of lower cost, and has high activity for the production of biodiesel, fatty acids, and biolubricants. In addition to enzymatic engineering, computational tools, such as docking and molecular dynamics, can be allied in the development of competitive products with low environmental impact. These simulation tools make it possible to understand the reaction mechanism of a process, save on the expense of reagents, and support the choice of materials and conditions that can be used in real processes. Thus, this work proposed the modeling and analysis of synthesis reactions of biolubricants derived from oleic acid, using different types of alcohols and the lipase Eversa® Transform 2.0 as a catalyst for the reactions. From the molecular dockings, it was observed that the predominant interactions between the ligands and the amino acid residues that make up the active site of the lipase and its surroundings were Van der Waals or hydrophobic. In the molecular dynamics simulations, it was found that these interactions provided the stability of the lipase-ligand complex, given the low number of hydrogen bonds formed in the simulation times. Furthermore, the low variation in the position of the lipase/ligand complexes concerning their initial conformations in the production steps, attested that the chosen docking poses were adequate to describe the conformations of the ligands in the region of the active site of the lipase. These results provide a structural view of the interactions between lipase Eversa® and fatty esters used as lubricants and indicate which would possibly be the best alcohols used for the process, but they cannot reliably attest to the behavior of the proposed systems under experimental conditions, since many other variables, such as enzymatic activity, inhibition mechanisms of the catalyst, alteration of the reaction equilibrium, among others, can significantly alter the dynamics of the process. Biolubrificantes vem ganhando mais participação de mercado dado o aumento do interesse na substituição do uso de lubrificantes derivados de petróleo. Eles são produzidos usando matérias primas renováveis tais como óleos vegetais, e lipases podem ser utilizadas como catalisadores para suas sínteses, tornando estes processos mais ambientalmente amigáveis. Dentre as inovações criadas com ferramentas de engenharia enzimática, a lipase Eversa® Transform 2.0 surge como uma formulação enzimática, geneticamente modificada, de menor custo e possui alta atividade para produção de biodiesel, ácidos graxos e biolubrificantes. Além da engenharia enzimática, ferramentas computacionais, tais como a docagem e dinâmica molecular, podem ser aliadas no desenvolvimento de produtos competitivos e de baixo impacto ambiental. Estas ferramentas de simulação possibilitam o entendimento do mecanismo reacional de um processo, economizam no gasto de reagentes, e embasam a escolha dos materiais e condições que podem ser usados em processos reais. Desta forma, este trabalho propôs a modelagem e análise de reações de síntese de biolubrificantes derivados do ácido oleico, usando diferentes tipos de álcoois e a lipase Eversa® Transform 2.0 como catalisadora das reações. A partir das docagens moleculares foi observado que as interações predominantes entre os ligantes e os resíduos de aminoácidos que compõem o sítio ativo da lipase e seus arredores, foram de Van der Waals ou hidrofóbicas. Nas simulações de dinâmicas moleculares foi constatado que essas interações proporcionaram a estabilidade do complexo lipase-ligante, visto o baixo número de ligações de hidrogênio formadas nos tempos de simulação. Além disso, a pouca variação na posição dos complexos lipase/ligante em relação às suas conformações iniciais nas etapas de produção, atestaram que as poses de docagem escolhidas foram adequadas para descreverem as conformações dos ligantes na região do sítio ativo da lipase. Estes resultados proporcionam uma visão estrutural das interações entre a lipase Eversa® e ésteres graxos usados como lubrificantes e indicam quais possivelmente seriam os melhores álcoois usados para o processo, mas não podem atestar com segurança o comportamento dos sistemas propostos em condições experimentais, visto que muitas outras variáveis, tais como a atividade enzimática, mecanismos de inibição do catalisador, alteração do equilíbrio reacional, dentre outras, podem alterar significativamente a dinâmica do processo.

The aim of this work was to immobilize Lecitase Ultra ® (LU) onto Immobead-350 (IB-350) support through different immobilization protocols, using unmodified support and modified support (activated with functional groups by several strategies) and also through immobilization by cross-linking. The different immobilization strategies in this work were carried out in order to modulate enzyme properties and to evaluate the effects of three parameters in the final enzyme conformation and biocatalyst properties: incubation time; different pH values in the ionization of functional groups of the enzyme and of the support; and blocking stage. In addition, biocatalysts formed by immobilization of LU onto supports activated with aldehyde, divinylsulfone or glutaraldehyde groups were evaluated for their catalytic versatility versus two different substrates. The results showed that all biocatalysts were active versus the hydrolysis of p-nitrophenyl butyrate (p-NPB), but Leci-GLU showed the highest derivative activity (17.39 U / g) and was the most stable preparation both at 50 °C (1.9 h) and in the presence of 30% acetonitrile (42.6 h). The derivatives were also tested for operational and storage stability. In this first assay, the biocatalysts maintained 100 % of their initial activity during 10 consecutive reaction cycles, while in storage stability all the derivatives remained with 80 % of the initial activity in 30 days of storage at 4 °C, only Leci-DVS reduced about 50 % of its initial activity. In order to test catalytic versatility, biocatalysts were applied in hydrolysis (methyl mandelate substrate) and transesterification (acetylation of benzyl alcohol) reactions. The product obtained from this last reaction is known as jasmine aroma and has high commercial value, in addition, it can be used in detergent and perfume industry. In relation to methyl mandelate hydrolysis, the biocatalysts were tested at different reaction conditions (pHs 5, 7 and 9) and the highest activity was obtained with the Leci-crossA derivative at pH 7 (28.4 U / mg). In benzyl alcohol acetylation the biocatalyst with the highest activity was Leci-GLU (2.1 mg). A proposta desse trabalho foi imobilizar a Lecitase Ultra ® (LU) no suporte Immobead-350 (IB- 350) através de diferentes protocolos de imobilização, utilizando o suporte sem modificação e o suporte modificado (ativado com grupos funcionais por diversas estratégias) e, também, através da imobilização por cross-linking. Os diferentes protocolos foram executados com o intuito de modular as propriedades da enzima e avaliar o efeito que o tempo de incubação, a utilização de diferentes pHs na ionização dos grupos funcionais da enzima e do suporte, assim como a etapa de bloqueio, podem exercer na conformação final da enzima e nas propriedades dos biocatalisadores. Além disso, avaliou-se a versatilidade dos biocatalisadores imobilizados em suportes ativados com grupos epóxi, aldeído, divinilsulfona e glutaraldeído. Os resultados obtidos mostraram que todos os biocatalisadores produzidos foram ativos frente à hidrólise do p-nitrofenolbutirato (p-NPB), porém Leci-GLU apresentou a maior atividade do derivado (17,39 U/g) e foi a preparação mais estável na temperatura de 50 °C (1,9 h) e na presença de acetonitrila-30 % (42,6 h). Os derivados também foram testados quanto à estabilidade operacional e de estocagem. Nesse primeiro ensaio, os biocatalisadores mantiveram 100 % da sua atividade inicial durante 10 ciclos reacionais consecutivos, enquanto na estabilidade de estocagem, todos os derivados permaneceram com 80 % da atividade inicial em 30 dias de armazenamento a 4°C, exceto Leci-DVS que reduziu cerca de 50 % da sua atividade inicial. Para testar a versatilidade dos biocatalisadores, eles foram aplicados em reações de hidrólise (substrato mandelato de metila) e transesterificação (acetilação do álcool benzílico). O produto obtido dessa última reação é conhecido como aroma de jasmim e possui alto valor comercial, podendo ser utilizado na indústria de detergentes e perfumaria. Para esses ensaios, a hidrólise do mandelato de metila foi testada em diferentes pHs (5, 7 e 9) e a maior atividade foi obtida com o derivado Leci-crossA a pH 7 (28,4 U/mg), enquanto na acetilação do álcool benzílico o biocatalisador com maior atividade foi Leci-GLU (2,1 mg).

Lipase from Thermomyces lanuginosus (TLL) was immobilized on superparamagnetic iron oxide (Fe3O4) nanoparticles (SPMN) by different methods. Initially, the nanoparticles were prepared by the coprecipitation method. Then, the surface of magnetite was functionalized with polymers: 3-aminopropyltriethoxysilane (APTES) or branched polyethylenimine (PEI). Therefore, the enzyme immobilization was performed by two ways: by adsorption or by covalent attachment. In the adsorption way, the enzyme was immobilized by ionic affinity to the polymers attached to the SPMN surface. Previously the immobilization by covalent attachment, the support was activated with glutaraldehyde (GA) or divinylsulfone (DVS). Naturally, lipases catalyze the hydrolysis reactions. Thus, the developed biocatalysts were applied in some hydrolysis reactions of economic interest, for example, in the synthesis of a medicament precursor from the kinetic resolution of a racemate, obtaining the maximum conversion (50%) even after the second reaction cycle. However, lipases are able to catalyze esterification reactions in organic media; thus, the biocatalysts obtained after activation with DVS were applied in the esterification reaction of benzyl alcohol, obtaining up to 61% conversion after the seventh reaction cycle. Moreover, the preparations were characterized by different analysis: X-ray diffraction, vibrating sample magnetometry, infrared vibrational spectroscopy, zeta potential, among others. The SPMN presented superparamagnetic behavior even after the different enzymatic immobilization processes. The application conditions of the biocatalysts were also defined through studies of thermal, organic solvent, storage and operational stabilities. The DVS preparations had excellent operational stability, exhibiting more than 50% of the initial catalytic activity even after ten reaction cycles. On the other hand, the GA preparations presented greater thermal stability, reaching more than 7 hours of half-life at pH 7.0 at 70 °C. In general, these biocatalysts are thermostable, have high catalytic efficiency and good operational durability when applied under ideal reaction conditions. In addition, the economic interest reactions carried out in this work showed the potential applications of the developed biocatalysts in the pharmaceutical, cosmetic, biotechnology and fine chemical industries. Lipase de Thermomyces lanuginosus (TLL) foi imobilizada em nanopartículas superparamagnéticas (SPMN) de magnetita (Fe3O4) por diferentes métodos. Inicialmente, as nanopartículas foram sintetizadas pelo método de coprecipitação. Em seguida, a superfície dessas nanopartículas foi funcionalizada com polímeros: 3-aminopropiltrietoxisilano (APTES) ou polietilenoimina ramificada (PEI). Assim sendo, a imobilização da enzima ocorreu de duas formas: por adsorção ou por ligação covalente. Na adsorção, a enzima foi imobilizada por pseudo-afinidade aos polímeros ligados à superfície das SPMN. Antes da imobilização por ligação covalente, o suporte passou por uma etapa de ativação com glutaraldeído (GA) ou com divinilsulfona (DVS). Naturalmente, as lipases catalisam as reações de hidrólise. Logo, os biocatalisadores desenvolvidos foram aplicados em algumas reações de hidrólise de interesse econômico, como na síntese do intermediário de um fármaco a partir da resolução cinética de um racemato, obtendo a máxima conversão (50 %) mesmo após o segundo ciclo reacional. Entretanto, em meios orgânicos, as lipases são capazes de catalisar as reações de esterificação; assim sendo, os biocatalisadores obtidos após a ativação com DVS foram aplicados na reação de esterificação do álcool benzílico, obtendo até 61 % de conversão após o sétimo ciclo reacional. Além disso, os vários derivados foram caracterizados por diferentes análises: difração de raios X, magnetometria de amostra vibrante, espectroscopia vibracional no infravermelha, potencial zeta, entre outras. As SPMN apresentaram comportamento superparamagnético mesmo após os diferentes processos de imobilização enzimática. As condições de trabalho dos biocatalizadores também foram definidas através dos estudos de estabilidades térmica, em solvente orgânico, de estocagem e operacional. Os derivados ativados com DVS tiveram ótima estabilidade operacional, apresentando mais de 50% da atividade catalítica inicial mesmo após dez ciclos reacionais. Por outro lado, os derivados ativados com GA apresentaram maior estabilidade térmica, tendo alcançado mais de 7 horas de tempo de meia-vida em meio de pH 7.0 à 70 °C. De modo geral, esses biocatalisadores são termoestáveis, apresentam alta eficiência catalítica e boa durabilidade operacional quando aplicados dentro das condições ideais de reação. Ademais, as reações de interesse econômico realizadas neste trabalho mostraram o potencial de aplicação dos biocatalisadores desenvolvidos nas indústrias farmacêutica, cosmética, de biotecnologia e de química fina.

A new heterofunctional support, chitosan-divinylsulfone, is proposed in this study. The use of chitosan as a support for immobilization of enzymes is very promising since it has characteristics that make it ideal for this function as good mechanical and chemical resistance besides be a biodegradable polymer, renewable and low cost. The divinylsulfone (DVS) has been chosen as an activated agent because can interact with hydroxyl and amino groups of chitosan, in addition can interact with different groups of enzymes, such as: amino, phenol, imidazole or thiol. The support were prepared introducing 7.5 mL of divinylsulfone (DVS) at 10g of chitosan at three differents pHs (10, 12.5 and 14) of sodium carbonate buffer. The enzyme choosed was Lipase B from Candida antarctica (CALB) because has high stability and enantioselectivity being able to act in various reactions of industrial interest. In this context, the study of activation support chitosan with divinylsulfone (DVS) was conducted in order to immobilize CALB. The best results of immobilization were at pH 12.5 of activation conditions of chitosan with divinylsulfone (DVS). Under these conditions, it was obtained 2.87 ± 0.06 U/g of derivative activity, 79.37 % of immobilization yield and almost 50 % of recovery activity. However, the bests results for inactivating thermical was for immobilized enzymes on chitosan activated at pH 10, where the best results did not reach the half-life after 24 and 48 hours, been more than 480 times and 960 times more stable than the free enzyme, respectively. Finally some derivatives were applied in model reaction of hydrolysis reaction of the ethyl hexanoate at pH 5, 7 and 9.2 getting the best activity at pH 5. The results show that the support activated with divinylsulfone is very promising and improved the enzyme stability. Um novo suporte heterofuncional, a quitosana-divinilssulfona, é proposto neste estudo. O uso de quitosana como suporte para imobilização de enzimas é muito promissor, pois possui características que o tornam ideal para esta função, como boa resistência mecânica e química, além de ser um polímero biodegradável, renovável e de baixo custo. A divinilssulfona (DVS) foi escolhida como agente ativante, pois além de se ligar aos grupos hidroxila e amino da quitosana podem interagir com diferentes grupos das enzimas, como: amino, fenol, imidazol ou tiol. O suporte foi preparado introduzindo 7,5 mL de divinilssulfona (DVS) a 10 g de quitosana em três diferentes pHs (10, 12,5 e 14) de tampão de carbonato de sódio 333 mM. A enzima escolhida foi a lipase B de Candida antarctica (CALB) porque tem alta estabilidade e enantiosseletividade, sendo capaz de atuar em várias reações de interesse industrial. Neste contexto, foi conduzido o estudo de ativação do suporte quitosana com divinilssulfona (DVS) para imobilizar a CALB. Os melhores resultados de imobilização foram para ativação de quitosana com divinilssulfona (DVS) a pH 12.5. Nestas condições, obteve-se 2.87 ± 0.06 U/g de atividade do derivado, 79.37% de rendimento de imobilização e quase 50% de atividade recuperada. No entanto, os melhores resultados para a inativação térmica foram para as enzimas imobilizadas em quitosana ativada a pH 10, onde os dois melhores biocatalisadores não atingiram o tempo de meia-vida após 24 e 48 horas, assim foram mais de 480 vezes e 960 vezes mais estáveis do que a enzima livre, respectivamente. Finalmente, alguns derivados foram aplicados em reação modelo de hidrólise do hexanoato de etila a pH 5, 7 e 9,2 obtendo a melhor atividade a pH 5. Os resultados mostraram que o suporte ativado com divinilssulfona é muito promissor e melhorou a estabilidade da enzima.

The cashew apple bagasse (CAB), an agroindustrial wastes, was used as a support for the immobilizing of lipase kind B de Candida antarctica (CALB). After treatment with alkaline hydrogen peroxide (AHP), CAB - AHP was f unctionalized with glycidol (GLY ), epichlorohydrin (EPI), glycidol – ethylenediamine - glutaraldehyde (GEG) 5% and 10% and then, characterized through analysis of the Scanning Electron microscopy ( MEV ) and Red Infra Fourier Transform (FTIR). The biocatalysts produced at pH 10 (25 mM, 25 °C, 0.5% Triton® X - 100) and at pH 7 (5 mM, 100 mM, 25 °C, 0.5% Triton® X - 100), were characterized with respect to thermal stability, stability in the presence of organic solvents, pH relationship and hydrolytic activity. The derivatives were applied in the enzymatic kinetic resolution of rac - acetate indanila (30 °C, 24h, 250 rpm). The biocatalyst produced at pH 10.0, CAB - GLI and CAB - EPI showed high swelling and low catalytic activity (0.22 ± 0.19 U/g and 0.21 ± 0.22 U/g) respectively. The CAB - GEG 5%, in the presence and in the absence of 0.5% Triton® X - 100, showed high catalytic activities (21.8 ± 0.52 U/g 38.8 ± 0.37 U/g) and high immobilization yields (95.1% and 97.1%), respectively. The longest times of half - life t 1/2 were obtained under as say conditions at 60 °C and pH 5.0, 32.9 minutes for the immobilized prepared in the absence of Triton® X - 100 and 29.8 minutes with addition of detergent. The stability in the presence of tetrahydrofuran solvent (THF) was best achieved when the derivative was prepared with addition of 0 .5% Triton® X - 100, showing t 1/2 of 60 minutes. For the derivatives produced at pH 7.0, CAB - GEG 10% (5 mM) in the presence of detergent showed enzymatic activity of 29.62 ± 0 74 U / g. This derivative showed the best immobilization parameters in assays at pH 7.0. The most sta ble derivative at 60 °C showed t 1/2 of 100.7 minutes (CAB - GEG 10%, 5 mM at pH 5.0). For the stabilities to organic solvents in the presence of tetrahydrofuran, the biocatalyst obtained in higher i onic strength conditions (100 mM) and in the presence of detergent was the most stable, t 1/2 129.7 minutes. The derivatives were applied in the enzymatic kinetic resolution of rac - acetate indanol, showing high conversion values (50%). They can be applied i n the production of intermediates used in drug formulations, such as Rasagiline Mesylate, indicated for the management of Parkinson's disease O bagaço de caju (CAB), um resíduo agroindustrial, foi utilizado como suporte para o processo de imobilização da lipase do tipo B de Candida antarctica (CALB). Após tratamento com peróxido de hidrogênio em meio alcalino (AHP), o CAB - AHP foi funcionalizado com glicidol (GLI), epicloridrina (EPI), glicidol – etilenodiamina- glutaraldeído (GEG) 5% e 10%, e em seguida, caracterizados através das análises de Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV) e Infra Vermelho com Transformadas de Fourier (FTIR). Os biocatalisadores produzidos a pH 10 (25 mM, 25 °C, 0,5% de Triton® X-100) e pH 7 (5 mM, 100 mM, 25 °C, 0,5% de Triton® X-100), foram caracterizados quanto a estabilidade térmica, estabilidade na presença de solventes orgânicos, relação pH e atividade hidrolítica. Os derivados foram aplicados na resolução cinética enzimática do rac- acetato de indanila (30 °C, 24h, 250 rpm). Os biocatalisadores produzidos a pH 10,0, CAB- GLI e CAB- EPI apresentaram elevado intumescimento e baixa atividade catalítica (0,22 ± 0,19 U/g e 0,21 ± 0,22 U/g), respectivamente. O CAB- GEG 5% (na presença e ausência de 0,5% de Triton® X-100) apresentou elevadas atividades catalíticas (21,8 ± 0,52 U/g e 38,8 ± 0,37 U/g) e rendimentos de imobilização (95,1% e 97,1%), respectivamente. Os maiores tempos de meia- vida (t1/2) foram obtidos nas condições de ensaio a 60 °C e pH 5,0, em 32,9 minutos para o imobilizado preparado na ausência de Triton® X-100 e 29,8 minutos com adição de detergente. A estabilidade na presença do solvente tetrahidrofurano (THF) foi melhor atingida quando o derivado foi preparado com adição de 0,5% de Triton® X-100, apresentando t1/2 de 60 minutos. Para os derivados produzidos a pH 7,0, o CAB- GEG 10% (5 mM) na presença de detergente, a atividade enzimática foi de 29,62 ± 0,74 U/g, sendo este o derivado que apresentou melhores parâmetros de imobilização nos ensaios a pH 7,0. O derivado mais estável a 60 °C apresentou t1/2 de 100,7 minutos (CAB- GEG 10%, 5 mM a pH 5,0). Para as estabilidades a solventes orgânicos na presença de tetrahidrofurano, o biocatalisador obtido na condição de maior força iônica (100 mM) e presença de detergente foi o mais estável, t1/2 de 129,7 minutos. Os derivados foram aplicados na resolução cinética enzimática do rac- acetato de indanol apresentando elevados valores de conversão (50%), podendo ser aplicados na produção de intermediários utilizados nas formulações de medicamentos, como o Mesilato de Rasagilina indicado para o controle do Mal de Parkinson (MP).