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Orientador : Sebastião Roberto Taboga Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: A próstata não é um órgão exclusivo do organismo masculino, pois está presente em fêmeas adultas de várias espécies de roedores e também na espécie humana. A próstata feminina tem sido considerada homóloga à próstata ventral masculina, sendo composta por um pequeno conjunto de glândulas e ductos entremeados a uma matriz músculo-fibrosa. Atualmente, sabe-se que é de fundamental importância que se compreendam melhor os processos fisiológicos que mantém esta glândula funcionalmente ativa no organismo feminino, uma vez que ela está sujeita as mesmas patologias que comprometem a próstata masculina durante o climatério. Desta forma, o objetivo do presente estudo foi caracterizar histológica, cito química e ultra:..estruturalmente os componentes teciduais da próstata feminina do gerbilo Menones unguiculatus adulto normal e experimentalmente tratado com testosterona, por um intervalo de 21 dias. Para isso, as próstatas coletadas foram fixadas e incluídas para microscopia de luz e eletrônica de transmissão. Testes citoquímicos foram desenvolvidos para evidenciar fibras colágenas (f ricrômico de Masson, Picrossírius-Hematoxilina), reticulares (Reticulina de Gõmõri) e elásticas (Resorcina-Fucsina de Weigert); secreções glicoprotéicas (periodic Acid & Schiff); e fenótipos nucleares prostáticos (Reação de Feulgen). Também foram desenvolvidas colorações usuais para a análise morfológica geral da glândula. A análise morfométrico-estereológica das próstatas femininas normais e tratadas foi realizada para avaliar estatisticamente as alterações sofridas pela glândula após a administração hormonal. Os resultados indicam que a próstata feminina normal do gerbilo é morfologicamente semelhante à próstata feminina humana, apresentando os mesmos tipos celulares e o mesmo padrão estrutural característico, o que lhe permite ser um bom modelo experimental para os estudos da próstata. Além disso, as próstatas tratadas com testosterona apresentaram um grande desenvolvimento nas primeiras fases de administração hormonaJ, chegando até a quadruplicar seu número inicial de ácinos e duetos. As células epiteliais apresentaram-se mais altas e volumosas, tomando-se mais ativas nos processos secretórios. O estroma tomou-se mais denso, apesar de não ter apresentado alterações significativas em sua freqüência relativa. No entanto, ao final do tratamento observou-se um sucessivo dec1ínio no desenvolvimento prostático. As próstatas tratadas com testosterona por 21 dias apresentaram um número de ácinos e duetos próximo ao apresentado pela próstata normal e um epitélio secretor menos desenvolvido. Esses resultados sugerem que a testosterona exerceu um efeito positivo inicial sobre a próstata feminina do gerbilo, tomado-se menos eficaz nas fases finais do tratamento. Deste modo, acredita-se que a exposição contínua à testosterona possa ter provocado a ativação de fatores endógenos de reguiação, capazes de inibir parte do estímulo androgênico sobre a próstata feminina nas fases finais da administração hormonal Abstract: The prostate is not an exclusive male organism, because it is also present in adults females of several rodents species and even in women. The female prostate has been considered homologous to the male ventral prostate, it is composed by sma1l clusters of glands and ducts intermixed to a musculofibrous matrix. It is known nowadays the fundamental importance of the better understanding of the physiological process that maintaÍfi this gland functiona1ly active in the female organism, once that it suffers the same diseases that compromises the male prostate during the climacteric. By this way, the goal of this study was to characterize histologica1ly, cytochemica1ly and ultrasttucturally the tissues components of normal and experimentally treated with testosterone female prostate of gerbil Meriones unguiculatus, during 21 days. In order to do this work, the collected prostates were fixed and embedded for light microscopy and transmission electron microscopy. Cytochemical tests were employed to evidence collagen fibers (Masson's Trichrome, Picrosirius Hematoxylin), reticular fibers (Gõmõri' s Reticulin) and elastic system (Weigert's Resorcin Fuchsin); glycoprotein secretory products (periodic Acid & Schiff); prostatic nuclear and mitotic phenotypes (Feulgen's Reaction). It has also been done usual staining to general morphological analysis of the prostate. The morphometric stereological analysis of the normal and treated female prostate was realized to value statistica1ly the alteration suffered by the glands after hormonal administration. The results show that the normal female prostate of the gerbil is morphologica1ly similar to the male prostate, they have the same cell types and the same characteristics sttuctural pattem, what a1lows it is a good experimental model to studies of the prostate. In addition, the treated prostates with testosterone show a great development during the first phases of the hormonal administration, increasing foU! times the initial number of acini and ducts. The epithelial cells show themselves high and voluminous, becoming more actives in the secretion processes. The stroma has become thicker in spite of it has not been demonstrated significative modification in its relative frequency. Meanwhile, at the end of the treatment it has been observed a successive decrease in the prostatic deve1opment. The prostates treated with testosterone during 21 days have shown a similar number of acini and ducts to normal prostate and secretory epithelium less deve1oped. These results suggest that testosterone has produced a initial positive effect in the gerbil female prostate, becoming less efficient in the last phases of the treatment. By this way, it is supposed that the continued exposition to testosterone could have provoked the activation of endogens factors, that are able to inhibit part of androgenic stimuli upon the female prostates at the last phases of the hormonal administration Mestrado Biologia Celular Mestre em Biologia Celular

Orientador: Sebastião Roberto Taboga Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: A próstata feminina é uma glândula funcionalmente ativa encontrada em diversas espécies de mamíferos, incluindo humanos e roedores. Em fêmeas adultas de gerbilos, a próstata apresenta localização parauretral, exibindo íntimo contato com a parede da uretra mediana e distal. Esta glândula é homóloga a próstata ventral de roedores machos, sendo formada por um conjunto de glândulas e ductos inseridos em um estroma fibromuscular. Em machos, a fisiologia prostática é regulada por hormônios esteróides, principalmente andrógenos e estrógenos. Em fêmeas, os fatores que influenciam a atividade prostática são pouco conhecidos, embora existam indícios de que alterações hormonais decorrentes da senescência estejam associadas à instalação de lesões prostáticas. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar os fatores que promovem a regulação hormonal da próstata feminina do gerbilo (Meriones unguiculatus) em condições de hiperandrogenismo e de supressão da atividade estrogênica. Os resultados obtidos com as análises estruturais, ultra-estruturais, sorológicas e imunocitoquímicas permitiram concluir que a próstata feminina do gerbilo é sensível à ação de andrógenos e de agentes anti-estrogênicos. O estímulo androgênico provocou crescimento anormal da próstata, aumento da atividade secretória, além de causar displasia prostática e síndrome de ovário policístico. O tratamento com letrozol resultou em aumento dos níveis séricos de testosterona, hiperplasia glandular, incremento da atividade secretória e crescimento displásico, simulando os efeitos causados por andrógenos exógenos. Os efeitos causados pelo tamoxifeno indicam que este agente endócrino atuou como agonista estrogênico na próstata, causando hipertrofia glandular, diminuição da atividade secretória e desenvolvimento de lesões prostáticas, tais como prostatites e adenocarcinoma. Deste modo, pode-se concluir que a utilização de drogas hormonalmente ativas resulta em uma série de efeitos complexos que comprometem a fisiologia de órgãos hormônio-dependentes, como a próstata feminina e os ovários. O desequilíbrio hormonal provocado pela administração destas drogas causa profundas alterações na morfologia prostática, de maneira muito similar ao que ocorre durante o desenvolvimento de lesões espontâneas em mulheres no período pós-menopausa. Assim, essas terapias devem ser utilizadas com cautela, visto que longos períodos de tratamento podem resultar em lesões malignas da próstata feminina Abstract: The female prostate is a functionally active gland found in several species of mammals, including humans and rodents. In adult female gerbils, the prostate presents a paraurethral location, showing close contact with the wall of urethra in its median and distal portions. This gland is homologue to the ventral prostate of male rodents and it is formed by a cluster of glands and ducts inserted into a fibermuscular stroma. In males, the prostatic physiology is regulated by steroid hormones, mainly androgen and estrogen. In females, the factors that influence the prostatic activity are unclear, although there are evidences that the hormonal alterations caused by aging are associated with the installation of prostatic lesions. Thus, the objective of this work is to evaluate the factors that promote the hormonal regulation of the gerbil (Meriones unguiculatus) female prostate in hyperandrogenic conditions and estrogenic activity suppression. The results obtained with the structural, ultrastructural, serologic and immunocytochemical analyses showed that the gerbil female prostate is responsive to androgenic and the anti-estrogenic action. The androgenic stimulus has caused an abnormal prostatic growth, increase in secretory activity, and has also caused prostatic dysplasia and polycystic ovary syndrome. The letrozole treatment has stimulated an increase in testosterone serum levels, glandular hyperplasia, increment of the secretory activity and dysplasic growth, simulating the effects provoked by exogenous androgens. The effects caused by tamoxifen indicate that this endocrine agent has acted as an estrogenic agonist on the prostate, causing glandular hypertrophy, decrease in secretory activity and prostatic lesions. Hence, it is possible to conclude that the use of hormonally active drugs results in a series of complex effects that endanger the physiology of hormone-dependent organs, like female prostate and ovaries. The hormonal unbalance caused by the administration of such drugs results in alterations in prostatic morphology similar to what occurs during the development of spontaneous lesions in post-menopausal women. Thus, the utilization of such therapies must occur in a careful manner because a long-term treatment can cause malignant lesions in female prostate Doutorado Biologia Celular Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Laurecir Gomes Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Interações entre o epitélio e o mesênquima/estroma são importantes em diversos estágios da morfogênese, na diferenciação celular e na função geral de diversas glândulas. Na próstata, a função secretora do epitélio nos animais adultos é regulada por andrógenos que tem participação direta na manutenção do estado ativo da glândula. Sabe-se que o endotélio é um dos primeiros elementos prostáticos a responder à eliminação do estímulo androgênico e a responder à sua reposição. Entretanto, a célula endotelial não apresenta receptor para andrógenos, o que leva a crer que a modulação do seu comportamento ocorra indiretamente pela ação de fatores locais produzidos por diferentes tipos celulares. Este trabalho teve como objetivo isolar, caracterizar e cultivar células endoteliais prostáticas, assim como avaliar a possível regulação do seu comportamento por células musculares lisas que correspondem ao principal tipo celular do estroma prostático. Culturas primárias de células endoteliais da próstata de ratos foram obtidas e caracterizadas a partir de sua morfologia e expressão do fator von Willebrand e dos receptores Flk-1 (VEGFR-1) e Flt-1 (VEGFR-2) marcadores específicos de células endoteliais, e de sua habilidade em formar estruturas parecidas com capilares quando cultivadas sobre Matrigel. Não foi observado efeito sobre a proliferação celular quando estas células foram cultivadas na presença de meio condicionado por células musculares lisas, sobre diferentes substratos (plástico, colágeno, matrigel). Entretanto, o meio condicionado pelas células musculares lisas reforçou o efeito de indução da diferenciação em estruturas similares a capilares. Foi também detectado que o meio condicionado inibe a secreção de angiopoietina-1 pelas células endoteliais quando cultivadas sobre colágeno e estimula a secreção de angiopoietina-2 quando as células foram cultivadas sobre Matrigel. Os dados obtidos demonstram que o protocolo utilizado resultou em uma população homogênea de células endoteliais prostáticas e que, as células musculares lisas, produzem fatores solúveis capazes de regular diferencialmente o comportamento das células endoteliais, de acordo com o substrato Abstract: Interactions between the epithelium and mesenchyme/stroma are important in different stages of morphogenesis, differentiation and function of most glands. In the prostate, the secretory function of the epithelium in adult animals is regulated by androgens, which have direct roles in maintaining prostate activity. It is well known that the endothelium is the first prostatic compartment to respond to androgen deprivation and to its reposition after castration. However, the endothelial cell does not express the androgen receptor and this led us to believe that the altered behavior in response to androgen is modulated by soluble factors produced by other cell types that can sense androgen levels. The objective of this work was to isolated, characterize and culture prostatic endothelial cells, as well as to evaluate its possible regulation by smooth muscle cells, which are the predominant cell type in the prostate stroma. Primary cultures of rat ventral prostate endothelial cells were isolated, maintained in culture and characterized by their morphology, expression of von Willebrand factor, Flk-1 (VEGFR-1) and Flt-1 (VEGFR-2) receptors, and ability to form capillary-like structures on Matrigel. When these cells were cultured in the presence of smooth muscle cell conditioned medium, on different substrata (plastic, collagen, matrigel) there was no variation in cell proliferation. However, the smooth muscle cell conditioned medium reinforced the formation of capillary-like structures in Matrigel. It was also observed that the smooth muscle cell conditioned medium inhibited the secretion of angiopoietin-1 when the cells were cultured on collagen and stimulated the secretion of angiopoietin-2 when the cultured on Matrigel. Altogether, our data indicate that the protocol employed here resulted in a highly homogenous population of prostate-derived endothelial cells and that smooth muscle cells produce soluble factors capable of differentially regulating the behaviour of endothelial cell, as a function of the substratum Doutorado Biologia Celular Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Sérgio Luis Felisbino Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: A finasterida e a doxazosina são drogas usadas no tratamento da hiperplasia prostática benigna (HPB) e, mais recentemente, estão sendo também usadas na quimioprevenção do câncer de próstata (CaP), principalmente devido aos seus efeitos na indução de apoptose das células epiteliais prostáticas. Entretanto, pouca atenção tem sido dispensada aos efeitos destes fármacos sobre o estroma glandular. Assim, o objetivo deste estudo foi analisar os efeitos da finasterida e da doxazosina no arranjo estromal e em componentes específicos, como o colágeno do tipo I, colágeno do tipo III e o TGF-Beta 1. Para isso, foram empregadas técnicas morfológicas, bioquímicas e moleculares. O tratamento com finasterida promoveu apoptose epitelial, alterações na membrana basal epitelial e na membrana basal das células musculares lisas, além da diminuição na expressão dos colágenos I e III. O bloqueio ?-adrenérgico com doxazosina aumentou a quantidade de fibras do sistema elástico, promoveu apoptose nas células epiteliais, além de alterar a expressão dos colágenos I e III. Os dois fármacos influenciaram o aumento da expressão do TGF-Beta 1, que parece estar mais relacionado com o evento da apoptose no tratamento com a finasterida e com as alterações das fibras colágenas e a ativação de fibroblastos no tratamento com a doxazosina. Conclui-se que as alterações estromais pós tratamento com finasterida e doxazosina podem contribuir para a regressão prostática esperada no tratamento da HPB e na ruptura de eventos parácrinos responsáveis pela evolução tumoral no CaP Abstract: Finasteride and doxazosin are drugs used in the benign prostatic hyperplasia (BPH) treatment and, more recently, they're have been used in the prostate cancer (PCa) chemoprevention, mainly because their apoptotic effect in the prostatic epithelial cells. However, few attentions have been given to the effects of these drugs in the glandular stroma. Thus, the objective of this study was to analyze the effects of the finasteride or doxazosin treatment on stroma arrangement and on specific components, like collagen type I, collagen type III and TGF-Beta 1. For this aim, we have used morphological, biochemical and molecular approaches. Finasteride treatment provoked epithelial apoptosis, epithelial basal membrane and smooth muscle cells basal membrane alterations, besides decrease the type I and type III collagen fibers expression. The alpha-adrenergic blockade increased the elastic fibers system, promoted apoptosis in epithelial cells, as well altered the type I and type III collagen fibers expression. Both drugs influenced the TGF-Beta 1 up-regulation that show to be related with apoptosis in finasteride treatment and with collagen fibers alterations and fibroblasts activation in doxazosin treatment. In conclusion, the stromal alterations promoted by finasteride and doxazosin treatments can contribute to the prostate regression expected in the BPH treatment and to the rupture of paracrine events responsible by tumoral evolution in the PCa Doutorado Biologia Celular Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientadores: Sebastião Roberto Taboga, Ricardo Alexandre Fochi Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: O compartimento estromal responde rapidamente a situações adversas, como reparo de lesões e resposta a distúrbios na homeostase tecidual, que também podem ser resultantes da gênese do câncer. A reação estromal é um fenômeno conhecido que envolve processos celulares, múltiplas proteínas e sinalizadores de matriz extracelular que proporcionam uma resposta do tecido conjuntivo a uma agressão epitelial, principalmente às alterações neoplásicas e inflamatórias. Embora sejam conhecidos os processos que levam à formação do estroma reativo, na próstata ainda restam muitas questões relacionadas a esse fenômeno. Assim o presente trabalho teve como objetivo identificar, quantificar e caracterizar as células estromais e epiteliais, além de elementos de matriz extracelular associados ao estroma reativo prostático em gerbilos, submetidos a diferentes formas de ablação androgênica. Gerbilos machos com 90 dias de idade (n = 5 por grupo) foram castrados (Cc) ou tratados semanalmente por gavagem com crisina (Cr) (50mg/kg/semana em 0,1 ml de óleo de milho), um inibidor da aromatase, ou tratados semanalmente por gavagem com finasterida (F) (10mg/kg/semana em 0,1 ml de óleo de milho), um inibidor da 5alfa-redutase. O grupo controle (Cn) foi formado por animais intactos e o grupo controle veículo (Cv) foi formado por animais que receberam apenas óleo de milho. Cada grupo experimental foi subdividido em outros três subgrupos e foram eutanasiados com 1, 4 e 52 semanas de tratamento. Os dados foram comparados estatisticamente pela análise de variância (Anova bidirecional) e, posteriormente, pelos pós-testes de Bonferroni (p ? 0,05). A castração cirúrgica promoveu uma regressão glandular expressiva, reduzindo vários parâmetros morfofuncionais e a incidência de inflamações e lesões pré-malignas e malignas. Além disso, o estroma glandular passou a apresentar um maior número de macrófago CD68 e secreção aumentada de MMP-9. O emprego da crisina como inibidor da aromatase, desencadeou uma involução glandular mais sutil. Nesses animais também foi observado uma redução da incidência de lesões inflamatórias, pré-malignas e malignas. Após 1 semana de tratamento com a crisina foi observado um aumento da secreção de MMP-9 e redução de TGF-beta, e depois de 52 semanas o inverso, com maior síntese de TGF-beta e presença de telócitos, além de uma menor secreção de MMP-2 e MMP-9. Ao contrário da crisina, a finasterida auxiliou na formação de um microambiente favorável à inflamação e permissivo ao desenvolvimento de lesões prostáticas, formando um estroma reativo. Esse estroma está caracterizado pelo aumento de TGF-beta, metaloproteinases (2 e 9), células inflamatórias, miofibroblastos e aumento de telócitos. Assim, conclui-se que a utilização de finasterida e crisina a longo prazo possuem efeitos distintos, sendo que a finasterida potencializa a inflamação, o desenvolvimento de estroma reativo e o surgimento de lesões prostáticas, e a crisina possui um papel protetivo ao desenvolvimento de lesões prostáticas, principalmente nos animais senis Abstract: The stromal compartment responds quickly to adverse situations such as injury repair and response to disorders on tissue homeostasis, which may also result from cancer genesis. Stromal reaction is a known phenomenon involving cellular processes, multiple proteins and extracellular matrix signaling that provide a connective tissue response to epithelial aggression, mainly as neoplastic and inflammatory alterations. Although the processes that lead to the formation of the reactive stroma are known, in the prostate there are still many questions related to this phenomenon. So, the present study aimed to identify, quantify and characterize stromal and epithelial cells, as well as extracellular matrix elements associated with reactive prostatic stroma in gerbils, submitted to different forms of androgen ablation. 90-day-old male gerbils (n = 5 per group) were castrated (Cc) or weekly treated by gavage with chrysin (Cr) (50mg/kg/week in 0.1 ml corn oil), an aromatase inhibitor , or with finasteride (F) (10mg/kg/week in 0.1 ml corn oil), a 5alpha-reductase inhibitor. The control group (Cn) was composed by intact animals and the vehicle control group (Cv) was formed by animals that received only corn oil. Each experimental group was subdivided into three other subgroups and euthanized after at 1, 4 and 52 weeks of treatment. Data were statistically compared by analysis of variance (bidirectional ANOVA) and subsequently by Bonferroni post-tests (p ? 0.05). Surgical castration promotes an expressive glandular regression, with variation of several morphofunctional parameters and with incidence of inflammation, premalignant and malignant lesions. In addition, the glandular stroma presented a larger number of CD68 macrophages and increased MMP-9 secretion. The use of chrysin as an aromatase inhibitor triggered a more subtle gland involution. In these animals, a reduction in inflammatory, premalignant and malignant lesions was also observed. After 1 week of chrysin treatment, an increase in MMP-9 secretion and a reduction in TGF-beta was observed, and after 52 weeks the opposite was observed, with higher sintesis of TGF-beta and presence of telocytes, and a smaller secretion of MMP-2 and MMP-9. Unlike chrysin, finasteride promoted formation of a microenvironment favorable to inflammation and the development of prostatic lesions, forming a reactive stroma. This stroma is associated with increased TGF-beta, metalloproteinases (2 and 9), inflammatory cells, myofibroblasts and telocytes. Thus, it is concluded that the use of finasteride and chrysin for a long period have distinct effects, finasteride enhances inflammation, the development of reactive stroma and the appearance of prostatic lesions, and chrysin plays a protective role in the development of prostatic lesions, especially in senile animal Doutorado Biologia Celular Doutora em Biologia Celular e Estrutural CNPQ 141439/2018-1 CAPES FAPESP 2014/26660-0.

Úlceras gástricas afetam pessoas no mundo todo e a recorrência desta patologia tem levado à busca de agentes que promovam sua erradicação. Apesar da tão conhecida utilização da alantoína em produtos cosméticos, seu efeito ainda não foi estudado sobre a úlcera gástrica. Dessa forma, o presente trabalho objetivou explorar os mecanismos farmacológicos associados à eficácia da alantoína contra as injúrias teciduais causadas por diferentes agentes. A atividade gastroprotetora deste composto foi avaliada em diferentes modelos experimentais de úlceras gástricas induzidas por etanol, etanol acidificado e ligadura pilórica. Todos os protocolos experimentais foram aprovados pela CEUA/UFG, protocolo n 064/15. Para tanto, foram utilizados camundongos albinos Swiss fêmeas (30 – 35 g), mantidos à 23  2C e ciclo claro/escuro de 12 h, com acesso livre a água e ração. Os animais foram mantidos com restrição de alimentos sólidos 16 h antes das sessões experimentais, com acesso livre a água glicosada (5%). Os estômagos dos animais foram utilizados para quantificação dos níveis de glutationa reduzida (GSH), permeabilidade vascular gástrica, citocinas pró-inflamatórias (TNF- e IL-1), muco gástrico, PGE2, além da atividade da enzima mieloperoxidase (MPO). As lesões gástricas foram examinadas macroscopicamente, e procederam-se análises histopatológicas em microscopia de luz e eletrônica de transmissão (M.E.T.). Os resultados mostraram que o tratamento com alantoína na dose de 60 mg/kg por via oral reduziu a formação de lesão gástrica em todos os modelos experimentais e o tratamento por via intraduodenal revelou atividade antissecretória ácida. O tratamento com alantoína foi capaz de preservar os níveis de GSH e diminuiu a permeabilidade vascular gástrica, atividade da MPO e os níveis de citocinas pró-inflamatórias. O tratamento com alantoína preservou o muco aderido à mucosa gástrica, assim como os níveis de PGE2. As análises microscópicas e ultraestruturais revelaram que a alantoína manteve a integridade tecidual e preveniu as alterações morfológicas induzidas por etanol nas células. Em conjunto, os resultados do presente trabalho trazem evidências de que alantoína possui papel gastroprotetor em camundongos através de mecanismos antioxidantes, citoprotetores e antissecretório ácido. Gastric ulcer affects people worldwide and the recurrence have fueled for new therapeutic strategies. Despite the well-known use of allantoin in cosmetic products, it effect has never been studied in gastric ulcer. In this way, the presente work aimed explore the pharmacological pathways associated with the allantoin efficacy against commonly harmful agents that cause injuries to the stomach. The gastroprotective activity of this compound was evaluate in diferent experimental models induced by ethanol, ethanol acidity and pylorus ligature. All the experimental protocols were approved by CEUA/UFG, protocol n. 064/15. Female albino Swiss mice (30-35g) were used in the experiments. They were maintained at 23  2C and 12 h light/dark cycle, with free access to food and water. Animals were fasted 16 h before the experimental sessions with free access to glucose water (5%). The stomach of mice were used to quantification of reduced gluthatione (GSH), gastric vascular permeability, pro-inflammatory cytokines (TNF- e IL-1), gastric mucus, PGE2 levels and the myeloperoxidase (MPO) activity. The gastric lesions were examined macroscopically and histopatological analysis in light microscopy and eletronic microscopic transmission were carried out. The results showed that allantoin at dose of 60 mg/kg (p.o.) decreased the formation of gastric lesion in all the experimental models and the intraduodenal treatment revealed the antisecretory action. The treatment with allantoin preserved the GSH levels and decreased the gastric vascular permeability, MPO activity and pro-inflammatory cytokines levels. The treatment with allantoin preserved the gastric adhered mucus as well as the PGE2 levels. Microscopic and ultrastructural analysis revealed that allantoin maintained tissue integrity and prevented morphological changes in cells caused by ethanol. Altogether, the results of present work brings evidences that allantoin possesses gastroprotective activity through anti-oxidative, antisecretory, and cytoprotective mechanisms. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

Atualmente as doenças cardiovasculares e suas complicações são as maiores causas de morte em todo o mundo. Dentre estas doenças, a hipertensão arterial sistêmica destaca-se por sua grande prevalência e por sua característica multifatorial. Diversos estudos demonstram que, entre outros fatores, a alta ingestão de alimentos industrializados, ricos em sal e em açúcar, contribui para a patofisiologia da hipertensão arterial sal-dependente e relacionada à obesidade. Entretanto, as alterações induzidas pela sobrecarga de sacarose sobre o sistema cardiovascular e a regulação reflexa da pressão arterial ainda precisam ser esclarecidas. A partir do exposto, objetivamos avaliar os efeitos da sobrecarga de sal de diferentes durações durante o período pós-natal e da sobrecarga de sacarose na fase adulta sobre parâmetros cardiovasculares de animais adultos. Avaliamos a pressão arterial média (PAM), a frequência cardíaca (FC) e a sensibilidade barorreflexa dos animais submetidos à sobrecarga de sal após o desmame e à sobrecarga de sacarose na fase adulta. Nos animais submetidos à sobrecarga de NaCl, foram avaliadas também a morfologia cardíaca e a sensibilidade da região Rostro Ventrolateral do Bulbo (RVLM). Machos Wistar com 21 dias de vida receberam solução salina hipertônica (NaCl 0,3M) durante 30 dias ou 60 dias (grupos experimentais). Os grupos controle foram mantidos com água durante período equivalente. Após o tratamento, todos os grupos foram mantidos com água e ração por um período de 15 dias (recuperação). Um grupo distinto de animais adultos foi submetido à sobrecarga de sacarose por 30 dias. Ao final dos protocolos experimentais, os animais foram submetidos ao procedimento de canulação crônica. 24h após a cirurgia, os parâmetros cardiovasculares basais e suas alterações induzidas por estimulação barorreflexa e/ou quimiorreflexa foram registrados. O índice de barorreflexo (IB) foi calculado como a razão entre as variações de FC e de PAM induzidas por cada infusão de fenilefrina e nitroprussiato de sódio. Não foram observadas diferenças significativas entre os valores basais de PAM e FC dos animais submetidos à sobrecarga de sal durante 30 dias em comparação com os animais controle de mesma idade (PAM: cont.: 118,2 ± 3,7 mmHg vs. exp.: 112,3 ± 4,0 mmHg. FC: cont.: 404,0 ± 10,6 bpm vs. exp.: 374,7 ± 9,1 bpm, respectivamente). Entretanto, estes animais apresentaram diminuição da sensibilidade barorreflexa, em comparação com o grupo controle (IB: cont.: -2,441 ± 0,359 bpm/mmHg vs. exp.: -1,434 ± 0,086 bpm/mmHg, p

Orientadores: Sebastião Roberto Taboga, Fernanda Cristina Alcântara dos Santos Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: A planta Tribulus terrestris (TT) é utilizada para o tratamento de inúmeros problemas de saúde em diversas medicinas tradicionais. Uma das principais indicações é no tratamento de disfunções sexuais, supostamente por sua capacidade de interferir no metabolismo androgênico. Por conta disso, o fitoterápico se popularizou entre indivíduos de várias idades, tendo sido utilizado como alternativa natural e legal para anabolizantes. Entretanto, o uso de substâncias que interferem no equilíbrio hormonal pode trazer consequências negativas para a histofisiologia prostática, já que a próstata é um órgão alvo da ação dos andrógenos, sensível às alterações hormonais. Por outro lado, dados da literatura apontam uma possível ação quimioprotetora de alguns dos principais componentes do TT, as saponinas, as quais seriam capazes de atenuar efeitos deletérios da idade e da exposição a agentes tóxicos. Assim, este trabalho se propôs a apresentar uma extensa revisão da literatura a respeito do papel do fitoterápico sobre os aspectos da biologia reprodutiva (Capítulo I) e avaliar os efeitos do uso do extrato de TT sobre os níveis de testosterona e suas consequências sobre a histofisiologia prostática no gerbilo da Mongólia intacto ou exposto ao carcinógeno N-metil-N-nitrosoureia (MNU). Para avaliar os efeitos da exposição em curto prazo (Capítulo II), 24 machos foram divididos em quatro grupos: controle experimental, controle da indução carcinogênica (50 mg/kg de MNU em dose única aos 180 dias), controle dos efeitos do TT (11 mg/kg em doses diárias do 180º ao 270° dia) e tratamento pós-indução (11 mg/kg em doses diárias do extrato de TT do 180º ao 270° dia, após dose única de 50 mg/kg de MNU aos 180 dias). Para avaliar os efeitos da exposição em longo prazo (Capítulo III), 24 machos foram divididos em quatro grupos: controle experimental, controle da indução carcinogênica (50 mg/kg de MNU em dose única aos 180 dias), controle do uso prolongado do TT (11 mg/kg em doses diárias do 90º ao 270° dia) e tratamento prolongado associado à indução (11 mg/kg em doses diárias do extrato de TT do 90º ao 270° dia, com dose única de 50 mg/kg de MNU aos 180 dias). O TT não foi capaz de elevar os níveis séricos de testosterona e não causou alterações biométricas em órgãos sensíveis a andrógenos, o que indica baixo potencial anabolizante na dose e nos períodos administrados. Além disso, o fitoterápico pode ter contribuído para a quimioproteção da próstata uma vez que retardou o surgimento de lesões malignas na glândula. Houve uma ação específica do TT em reduzir a atividade da via androgênica canônica (diminuição de receptores de andrógenos e de proliferação de células epiteliais), reproduzindo, in vivo, a proteção contra a atividade tumoral já observada in vitro. No entanto, apesar de frear o surgimento de lesões malignas, o TT não foi capaz de evitar o surgimento de lesões pré-malignas, especialmente quando a utilização teve início em indivíduos ainda jovens. Dessa forma, os efeitos do TT para a próstata precisam ser melhor compreendidos e o uso do fitoterápico ainda requer cautela Abstract: The plant Tribulus terrestris (TT) is used to treat numerous health problems in many traditional medicines. One of the most frequent indication of use is for the treatment of sexual dysfunction, because of its supposed ability to interfere with androgenic metabolism. Because of this, TT became popular among individuals of various ages, having been used as a natural and legal alternative for anabolics. However, the use of substances that interfere with hormonal balance can have negative consequences for prostate histophysiology, since the prostate is an organ that is the target of androgen action and sensitive to hormonal changes. On the other hand, data from the literature indicate a possible chemoprotective action of some of the major components of TT, the saponins, which would be able to attenuate deleterious effects of age and exposure to toxic agents. Thus, this work has proposed to present an extensive review of the literature on the role of this herbal medicine in aspects of reproductive biology (Chapter I) and to evaluate the effects of the use of TT extract on testosterone levels and its consequences on the histophysiology of the prostate in intact Mongolian gerbil, or those exposed to the carcinogen N-methyl-N-nitrosourea (MNU). To evaluate the effects of short-term exposure (Chapter II), 24 males were divided into four groups: experimental control, control of carcinogenic induction (50 mg/kg of MNU in a single dose on the 180º day), control of TT effects (11 mg/kg, in daily doses from 180º to 270º day) and treatment after induction (11 mg/kg of TT, in daily doses from 180º to 270º day, after a single dose of 50 mg/kg of MNU on the 180º day). To evaluate the effects of long-term exposure (Chapter III), 24 males were divided into four groups: experimental control, carcinogenic induction control (50 mg/kg MNU, in a single dose on the 180º day), control of prolonged use of TT (11 mg/kg in daily doses from 90º to 270º day) and prolonged treatment associated with induction (11 mg/kg of TT, in daily doses from 90º to 270º day, with a single dose of 50 mg/kg of MNU on the 180º day). TT was not able to raise serum testosterone levels and did not cause biometric changes in androgen-sensitive organs, which indicates low anabolic potential at the dose and periods administered. In addition, the herbal medicine may have contributed to the chemoprotection of the prostate as it has delayed the onset of malignant lesions in the gland. There was a specific action of TT in reducing the activity of the canonical androgenic pathway (decrease of androgen receptors and proliferation of epithelial cells), reproducing, in vivo, the protection against the tumor activity already observed in vitro. However, in spite of repressing the onset of malignant lesions, TT was not able to prevent the onset of premalignant lesions, especially when the use started in young individuals. Thus, the effects of TT on the prostate need to be better understood and phytotherapeutic use still requires caution Doutorado Biologia Celular Doutor em Biologia Celular e Estrutural FAPESP 2014/26660-0 CNPQ 305840/2015-0

desenvolvimento prostático, desde a etapa pré-natal até a puberdade, é controlado por ações hormonais de forma que sensíveis intervenções ambientais durante estes períodos podem predispor a glândula a desenvolver lesões durante a vida senil. Com o avanço da industrialização, tem sido cada vez maior a exposição aos elementos ativos no meio ambiente. Entre esses elementos, temos o alumínio (Al), sendo o primeiro metal e o terceiro elemento químico em massa mais abundante na crosta terrestre. Independente da forma complexada que pode vir a ser encontrado, ele apresenta um efeito tóxico significativo no ser humano que podendo causar alterações no crescimento e no desenvolvimento de sistemas distintos, quando ingerido em altas doses. Porém, poucas evidências científicas demonstram os efeitos da exposição no sistema reprodutor. Assim, o objetivo desta pesquisa foi avaliar se a exposição intrauterina ao cloreto de alumínio (AlCl3) pode alterar a próstata ventral masculina e feminina de gerbilos neonatos e adultos. Foram formados dois grupos: controle e AlCl3. As fêmeas grávidas receberam doses diárias de AlCl3 (100 mg/Kg/dia) ou do veículo de diluição (solução salina 0,9%), do dia 17 a 24 de gestação. Após nascimento, os machos e fêmeas foram separados e eutanaziados com um dia (PN1) e noventa dias (PN90) de idade. As próstatas ventrais dos machos e fêmeas dos grupos experimentais foram removidas e coletadas, e posteriormente, foram realizadas análises estruturais, citoquímicas e imunohistoquímicas. Além disso, o padrão de ramificação da próstata nos animais de um dia de idade foi descrito mediante reconstrução tridimensional (3D). Os resultados demonstraram que a exposição ao Al diminuiu o peso corpóreo das fêmeas e machos PN1, e reduziu a distância anogenital das fêmeas PN1. Além disso, o Al alterou o padrão de desenvolvimento prostático de machos e fêmeas PN1, tornando estas glândulas mais proliferativas e com reduzida imunomarcação para AR. As alterações promovidas pela exposição ao Al parecem ser permanentes, visto que modificações na expressão de receptores hormonais e altos índices de proliferação celular também são observados nas fêmeas e machos adultos. Estes dados indicam que o Al agiu como um desregulador endócrino sobre a próstata, exercendo atividade antiandrogênica sobre as células epiteliais e estromais prostáticas. Normal prostate development is highly dependent of an equilibrated hormonal regulation, so that sensible interferences during this period may predispose the gland to lesions during ageing. Industrial activities have increased the exposure of this gland to active elements found in environment. Within these elements, we find aluminum, the first metal being and the third chemical element more abundant in earth crust. Independently from the complex form in which it can be found, it presents toxic effect for living beings having the potential to disrupt the development and growth of several organs and systems, when ingested in high doses. However, little scientific evidence shows the effects of exposure in the reproductive system. Therefore, the aim of this study was to evaluate whether the intrauterine exposure to aluminum chloride (AlCl3) may alter the male and female ventral prostate of neonatal and adult gerbil. Two groups where formed: control and AlCl3. The pregnant females received daily doses of AlCl3 (100 mg/Kg/day) or from the dilution vehicle, from 17th to 24th gestational day. Following the birth, males and females were separated and euthanized with 1 (PN1) and 90-days-old (PN90). The ventral prostates of male and females of the experimental groups were removed and collected, and later, structural, cytochemical and immunohistochemical analysis were conducted. Furthermore, the branching pattern of the prostate in one day-old animals was described by three dimensional reconstruction. Here, we demonstrate that the Al decreases the body weight of PN1 males and females, and also reduce the anogenital distance (AGD) of PN1 females. Moreover, Al changed the prostate developmental patterns of PN1 animals, causing an increase in proliferative status and decreasing androgen receptor (AR) immunomarking. These data suggests that the aluminum-promoted changes were permanent, since these differences in AR immunomarking were also observed either in adult females or males. Therefore, we reveal that the Al acts as an endocrine-disrupting chemical, changing the antiandrogenic activity of prostate epithelial and stromal cells. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

Orientadores: Sebastião Roberto Taboga, Fernanda Cristina Alcântara dos Santos Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: A próstata é uma glândula acessória do sistema genital responsável pela secreção e armazenamento de líquido com propriedades nutritivas. É encontrada na maioria dos mamíferos e, nos últimos anos, a próstata feminina tem sido estudada com o objetivo de compreender seu papel nas funções reprodutivas e no aparecimento de patologias do trato reprodutor. Os hormônios esteroides são responsáveis pelo crescimento, proliferação e desenvolvimento da glândula, mas não são os únicos envolvidos na sua homeostase ou na promoção de lesões no tecido. A prolactina é um hormônio polipeptídico com síntese pituitária e extrapituitária, com mais de 300 atividades biológicas no organismo, dentre elas, funções envolvidas com a reprodução. No entanto, seu papel exato na manutenção da próstata ainda não é bem definido. Sendo assim, este projeto teve como objetivo avaliar o efeito da prolactina e de seu inibidor, a bromocriptina, sobre a histofisiologia prostática de fêmeas e machos adultos do gerbilo da Mongólia (Meriones unguiculatus) intactos e castrados, afim de se estabelecer relações entre a prolactina e os hormônios esteroides. Os animais foram submetidos à administração de prolactina exógena ou de bromocriptina, em dois períodos de tratamento, 3 e 30 dias. As próstatas ventrais dos machos e os complexos prostáticos das fêmeas foram avaliados por análises histológicas, morfométrico-estereológicas e imunocitoquímicas. Os resultados demonstraram que a prolactina e a bromocriptina influenciam fortemente a morfologia da próstata feminina e masculina do gerbilo, promovendo o aparecimento de lesões PIN cribriforme na glândula já após 3 dias de administração em animais intactos. Após 30 dias de exposição à prolactina, a glândula não apresentou tais lesões, e a morfologia do órgão foi praticamente reestabelecida. A bromocriptina produziu na glândula efeitos semelhantes aos da administração de prolactina, provavelmente por não ter sido eficiente em inibir a ação da prolactina extrapituitária no tecido. A prolactina e seu receptor foram identificados na próstata feminina e masculina por reação de imunocitoquímica, localizados principalmente na região apical das células epiteliais. Na próstata feminina, a prolactina aumentou a expressão dos receptores estrogênicos ER? e ER? quando administrada após a castração, e não alterou a dos receptores androgênicos (AR). Na próstata masculina, a prolactina aumentou a imunomarcação de seus receptores (PRLR), de AR, ER? e ER? em animais intactos, mas não em animais castrados, indicando que este hormônio apresenta uma relação sinérgica com os andrógenos. Apesar de não ter evitado a regressão dos ácinos prostáticos após a castração, a administração de prolactina suavizou os efeitos atróficos da ablação hormonal na glândula feminina e masculina, sem provocar o aparecimento de lesões. Sendo assim, a prolactina apresentou funções ora relacionadas à presença dos hormônios esteroides, ora ativadas pela ausência deles. Foram identificados diferentes fenótipos de células secretoras no epitélio da próstata feminina. As células mucinosas, claras, basófilas, goticuladas, espumosas, ciliadas e neuroendócrinas, diferenciadas por características citoquímicas e imunocitoquímicas, foram alteradas em número conforme as situações experimentais de ablação hormonal pela castração e de administração de prolactina exógena e bromocriptina, mostrando que a próstata feminina responde às condições de desbalanço hormonal gerenciando a atividade de células específicas do epitélio Abstract: The prostate is an accessory gland of the reproductive system responsible for secretion and storage of a liquid with nutritious properties. It is found in most mammals and, in recent years, the female prostate has been studied in order to understand their role in reproductive function and reproductive tract pathologies. Steroid hormones are responsible for the growth, proliferation and development of the gland, but they are not the only ones involved in homeostasis or in promotion of tissue lesions. Prolactin is a polypeptide hormone with pituitary and extrapituitary synthesis, and more than 300 biological activities in the body, among them, functions involved with reproduction. However, their exact role in maintaining prostate is not well defined. Thus, this project aimed to evaluate the effect of prolactin and its inhibitor, bromocriptine, on prostate histophysiology of adult females and males Mongolian gerbils (Meriones unguiculatus) intact and castrated, in order to establish relations between prolactin and steroid hormones. The animals were subjected to administration of exogenous prolactin or bromocriptine, on two treatment periods, 3 and 30 days. The ventral prostates of males and prostatic complex of females were evaluated by histological, morphometric-stereological and immunocytochemistry analysis. The results show that prolactin and bromocriptine strongly influence the morphology of the female and male gerbil prostates, promoting the emergence of PIN cribriform lesions in the gland already after 3 days of administration in intact animals. After 30 days of exposure to prolactin, the gland showed no such lesions and the organ morphology was almost reestablished. Bromocriptine produced in gland effects like-prolactin administration, probably because it was not effective in inhibiting the action of extrapituitary prolactin in tissue. Prolactin and its receptor were identified in female and male prostates by immunocytochemistry, located mainly in the apical region of epithelial cells. In the female prostate, prolactin increased the expression of estrogen receptors ER? and ER? when administered after castration, and did not alter the androgen receptor (AR). In the male prostate, prolactin increased immunostaining of its receptor (PRLR), of AR, ER? and ER? in intact animals, but not in castrated animals, indicating that this hormone has a synergistic relationship with androgens. Despite to not prevent the regression of prostatic acini after castration, prolactin administration softened the atrophic effects of hormone ablation in female and male gland without causing the appearance of lesions. Thus, the prolactin presented functions sometimes related to the presence of steroid hormones, sometimes activated by their absence. Different phenotypes of secretory cells were identified in the epithelium of female prostate. The mucinous, clear, basophils, droplets, spumous, ciliated and neuroendocrine cells, differentiated by cytochemical and immunocytochemical features, were changed in number as the experimental conditions of hormone ablation by castration and administration of exogenous prolactin and bromocriptine, showing that the female prostate responds to the conditions of hormonal imbalance managing the activity of specific epithelial cells Doutorado Biologia Celular Doutora em Biologia Celular e Estrutural FAPESP 2012/00695-6 CAPES

A incidência de doenças neurodegenerativas (DN) vem aumentando com o envelhecimento populacional. Dentre as DN a doença de Alzheimer (DA) é a forma mais comum de demência na população idosa. Um dos fatores envolvidos no desenvolvimento da DA é o estresse oxidativo neuronal que pode resultar em diversas desordens neurodegenerativas, como o comprometimento dos sistemas antioxidante e colinérgico. Um dos tratamentos utilizados para esta doença são os fármacos inibidores de acetilcolinesterase (AChE) porém, as terapias disponíveis apenas atenuam temporariamente os sintomas. Nesse sentido, novas terapias são necessárias para o tratamento da DA e o estudo de plantas pode ser uma fonte para obtenção de novas opções terapêuticas. Eugenia dysenterica DC (Myrtaceae), popularmente conhecida como cagaita, é uma planta encontrada em região de Cerrado, utilizada na medicina popular para tratar doenças diarreicas, icterícia e diabetes. Dados da literatura relatam a presença de compostos fenólicos, como flavonoides e taninos, nas folhas de E. dysenterica., substâncias descritas como potenciais antioxidantes e anticolinesterásicos. Dessa forma, o objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito neuroprotetor do extrato bruto hidroalcoólico das folhas de Eugenia dysenterica (EHED) em camundongos, em um modelo de neurotoxicidade induzida por alumínio. O EHED aumentou o tempo de latência na memória de curta e longa duração no teste esquiva passiva, demonstrando a reversão do prejuízo cognitivo promovido pelo alumínio. Os testes chaminé e campo aberto demonstraram que não houve comprometimento na atividade locomotora dos animais. As análises histológicas demonstraram que o tratamento com EHED diminuiu a incidência da morte neuronal por necrose causada pelo AlCl3. Nos ensaios bioquímicos, observou-se que o EHED foi capaz de reduzir a lipoperoxidação e restaurar a atividade das enzimas antioxidantes superóxido dismutase (SOD) e catalase (CAT). Além disso, o EHED foi capaz de restaurar a atividade da AChE, revertendo os danos causados pelo AlCl3. Em conclusão, os resultados obtidos são sugestivos de que o EHED apresenta atividade neuroprotetora por apresentar propriedades antioxidantes, inibindo os efeitos deletérios centrais promovidos pelo alumínio e que se assemelham às alterações celulares descritas para a Doença de Alzheimer. incidence of neurodegenerative disease (ND) is increasing with the world population aging. Among them, Alzheimer's disease (AD) is the most common of dementia in the elderly population. The AD has been linked to oxidative stress resulting in neurodegenerative disorders, such as the impairment of the antioxidant and cholinergic systems. AChE inhibitors drugs are a treatment option used for AD. However, until now, the drug treatment only temporary attenuates the AD symptoms and new drug targets, as the medicinal plants, are necessary for a better treatment of this disease. Eugenia dysenterica DC (Myrtaceae), popularly known as cagaita, is a native plant from the Cerrado region of Brazil. It is used in the folk medicine to treat diarrhea, jaundice and diabetes. Data from literature reported the presence of phenolic compounds, such as flavonoids and tannins, in the leaves of E. dysenterica. Thus, the aim of this study was to evaluate the neuroprotective effect of crude hydroalcoholic extract of E. dysenterica leaves (HEED), using a model of neurotoxicity induced by aluminium in mice and that causes similar cellular alterations of that observed in the Alzheimer’s disease. The results showed the HEED increased the mice performance in the passive avoidance test, showing the reversion of the cognitive damage promoted by aluminium. In addition, the HEED reduced the neuronal lipid peroxidation and restored the activity of superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT) and acetylcholinesterase (AChE) enzymes in mice brain. The histological analysis showed the HEED decreased the incidence of neuronal death by necrosis. Taken together, the results here obtained suggest that the antioxidant properties of HEED are the responsible for its neuroprotective effect. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

O desenvolvimento neonatal é estimulado por diversas interações hormonais. Os poluentes ambientais que mimetizam hormônios esteróides, como o bisfenol-A (BPA), podem causar alterações no padrão de desenvolvimento da próstata, levando a lesões ao longo da vida. O objetivo deste estudo foi verificar se a exposição neonatal ao BPA afeta o desenvolvimento da próstata de gerbilos machos e fêmeas. Para isso, os recém-nascidos foram expostos a níveis ambientais (LBPA – 40 μ/kg/dia) e doses elevadas (HBPA – 4 mg/kg/dia) de BPA, do 1° ao 7º dia de vida. No oitavo dia, os complexos prostáticos foram coletados e processados para as análises morfológica, estereológica e imunohistoquímica. Com a reconstrução tridimensional observamos que nos machos os brotos prostáticos se alongaram em forma de “V” em direção ao mesênquima condensado ventral (VMP). Os dados estereológicos dos machos demonstraram um aumento significativo na frequência relativa do compartimento mesenquimal do grupo LBPA em relação aos demais grupos (p ≤ 0,05). As células AR-positivas tornaram-se significativamente mais frequentes no mesênquima periuretral (PeM), brotos epiteliais ventrais (VB) e camada muscular (SM) dos grupos tratados com BPA. Ocorreu uma redução na frequência de células PCNA-positivas nos brotos periuretrais (PeB) e na SM do grupo LBPA. Em fêmeas, a reconstrução tridimensional demonstrou que os PeBs podem emergir de um ou ambos os lados da uretra e também foi visível uma significativa redução do mesênquima parauretral (PaM) nos grupos tratados com BPA. Apenas as fêmeas do grupo HBPA apresentaram brotos parauretrais (PaB) aparentemente mais desenvolvidos. No grupo LBPA observou-se um aumento na frequência de células AR-positivas no PeM e uma diminuição destas células no PeB e mesênquima parauretral (PaM). No grupo HBPA as células AR-positivas tornaram-se mais frequentes no PeM e PaB, contudo sofreram redução no PeB e PaM. Células PCNA-positivas tornaram-se significativamente menos frequentes no PaB e PaM dos grupos LBPA e HBPA. Em relação às células ER-α positivas, nas fêmeas do grupo LBPA observou-se uma redução das imunomarcações no PeM e SM, enquanto que no grupo HBPA essa redução ocorreu apenas no PaM. Este estudo revelou que o desenvolvimento pós-natal da próstata de fêmeas de gerbilos é mais precoce e morfologicamente distinto do que ocorre nos machos da mesma espécie. Além disso, pode-se observar que o BPA exerceu um efeito antiproliferativo sobre a glândula prostática de machos e fêmeas com oito dias de vida pós-natal, sendo as fêmeas mais susceptíveis a este químico ambiental. The neonatal development is stimulated by various hormonal interactions. Environmental pollutants that mimic steroid hormones, such as bisphenol A (BPA) can cause changes in the pattern of development of the prostate, leading to lifelong lesions. The objective of this study was to determine whether neonatal exposure to BPA affects the development of prostate gerbils males and females. For this, the newborns were exposed to environmental levels (LBPA - 40 μ / kg / day) and high dose (HBPA - 4 mg / kg / day) of BPA, from 1st to the 7th day of life. On the eighth day, the prostatic complexes were collected and processed for morphological analysis, stereological and immunohistochemistry. It was observed through the three-dimensional reconstruction that in males the prostatic buds have elongated in a "V" form towards the ventral condensed mesenchyme (VMP). The stereological data of males showed a significant increase in the relative frequency of the mesenchymal compartment in the LBPA group compared to other groups (p ≤ 0.05). The AR-positive cells became significantly more frequent in the periurethral mesenchyme (PEM), ventral epithelial buds (VB) and muscle layer (SM) in the BPA group. There was a reduction in the frequency of PCNA-positive cells in the periurethral buds (PeB) and in the SM of the LBPA group. In females, the three-dimensional reconstruction showed that PeBs can emerge from one or both sides of the urethra and it was also visible a significant paraurethral mesenchyme (MAP) reduction in the BPA group. Only females of the HBPA group apparently presented paraurethral buds (PAB) more developed. In the LBPA group it was observed an increase in the AR-positive cells frequency in the PeM and a decrease of these cells in the PeB and mesenchyme paraurethral (PaM). In the HBPA group the AR-positive cells were more frequent in the PeM and PaB and reduced in PeB and PaM. PCNA-positive cells became significantly less frequent in the PaB and PaM of LBPA and HBPA groups. Regarding the ER-α positive cells in the group LBPA females showed a reduction in the immunoblots of PeM and MS, whereas in the group HBPA this reduction occurred only in the PaM. This study revealed that the postnatal development of the prostate of female gerbils occurs earlier and are morphologically distinct from what occurs in males of the same species. Furthermore, it can be seen that the BPA exerted a proliferative effect on the prostate gland of males and females with eight days of postnatal life, though females being more susceptible to this environmental chemicals. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

Orientadores: Sebastião Roberto Taboga, Fernanda Cristina Alcântara dos Santos Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Os disruptores endócrinos (DE) são agentes exógenos que interferem no funcionamento do sistema endócrino. O 17?-etinilestradiol (EE), um importante componente dos contraceptivos orais é um exemplo de DE. Alguns estudos com roedores machos e fêmeas relataram que a exposição aos DE durante o período pré-natal foi capaz de eliciar proliferações patológicas no sistema reprodutor, incluindo a próstata do animal adulto. Entretanto, pouco se sabe sobre a real ação do estrógeno nas próstatas de machos e fêmeas, principalmente quando se leva em consideração o comportamento de ambas às próstatas durante o desequilíbrio dos níveis de hormônios esteroides que ocorre na puberdade e durante o envelhecimento dessas glândulas. Assim o presente estudo, teve como objetivos avaliar por análises morfológicas, sorológicas e imunohistoquímica quais foram os efeitos da exposição à baixa dose de EE durante os períodos pré-natal e puberal sobre a próstata ventral masculina e na próstata feminina de gerbilo senil. Deste modo, nós dividimos os grupos experimentais de acordo com o período de exposição ao EE (15µg/kg/dia). EE/PRÉ durante o período pré-natal, EE/PUB durante a puberdade e o EE/PRÉ-PUB durante o período pré-natal e puberdade. A exposição à estrógenos sintéticos durante o desenvolvimento afeta o eixo hipotálamo-pituitária gonadal, alterando a produção de hormônios esteroides. Os resultados revelaram que a exposição ao EE durante o desenvolvimento prostático alterou os níveis de hormônios esteroides, diminuindo os níveis de testosterona nos machos senis dos grupos EE/PRÉ e EE-PRÉ/PUB e aumento, nas fêmeas senis do grupo EE/PRÉ. Os níveis de estradiol aumentaram nas fêmeas do grupo EE/PRÉ-PUB. A interação epitélio-estroma também foi afetada pela exposição ao EE durante o desenvolvimento, dado evidenciado pela diminuição da imunorreatividade de ?-actina de músculo liso em regiões com presença de lesões invasivas, principalmente na próstata ventral de macho senil. A frequência de células positivas de p63 diminuiu na próstata ventral masculina do grupo EE/PRÉ, provavelmente a camada basal diminui em locais onde se observa foco com NIP e, aumentou na próstata feminina do grupo EE/PUB. Entretanto, esses dados mostraram que a próstata ventral de machos senil foi mais sensível aos efeitos da exposição ao EE, comparado à próstata de fêmeas senis. A senescência é caracterizada pela queda dos hormônios sexuais¸ e nessa fase aumenta as doenças prostáticas em machos e fêmeas. A exposição ao EE durante fases críticas como o pré-natal e a puberdade acentuaram as alterações na estrutura glandular da próstata e aumentaram o desenvolvimento de lesões prostáticas na senescência. Assim como o período pré-natal, o puberal também foi considerado uma fase crítica na exposição ao EE sobre a próstata de gerbilos machos e fêmeas senis. O consumo de EE durante a gestação ou na puberdade altera significativamente a saúde prostática masculina e feminina durante o envelhecimento, e o gerbilo foi considerado um bom modelo para esse estudo Abstract: Endocrine disruptor (ED) are exogenous agents that interfere in the endocrine system function. 17?-ethinylestradiol, an important component of oral contraceptives is an example of ED. Studies with male and female rodents have reported that exposure to ED during the prenatal period is able to elicit aberrant pathological proliferations in the reproductive system, inclusive in the prostate of the adult animal. However, the amount known about the actual action of estrogen on male and female prostate, mainly as is the behavior of both prostates during imbalance between androgen and estrogen that occurs in pubertal period and during senescence of these glands. Thus the present study aimed to evaluate by morphological, serological, histopathological and immunohistochemical methods, as the exposure to low dose of ethinylestradiol during the prenatal and pubertal periods acts on ventral male prostate and female prostate of senile gerbil. Thus, we divided the experimental groups according to the period of exposure to EE (15?g/kg/day). EE/PRE during the prenatal period, EE/PUB during puberty and EE/PRE-PUB during the prenatal period and puberty. Exposure to synthetic estrogens during development affects the hypothalamic-pituitary-gonadal axis this alters the production of steroid hormones. The results showed that exposure to EE during developing prostate changed steroid hormones levels, decreasing testosterone levels in senile male of EE/PRE and EE-PRE/PUB groups and increased in senile female of EE/PRE group. The estradiol levels enhanced in females of EE /PRE-PUB group. In addition, EE exposure during the prenatal and pubertal periods altered the immunoreactivity of AR, ER? and ER?, as the function of these receptors are critical for prostate development, changes these signaling pathways contributed to increase of development of lesion and inflammation prostate in males and females during senescence. The stromal-epithelium interaction was also affected by exposure to EE during developing, was observed by decreased immunoreactivity of smooth muscle ?-actin in regions where noted invasive lesions, mainly in the ventral male prostate of senile gerbil. Frequencies positive cells of p63 decreased in the ventral male prostate of EE/PRE group, the basal layer decreases in locals with NIP focus, and these frequencies increased the female prostate EE/PUB group. However, these data showed that the ventral male prostate of senile gerbil was more sensible to effects of exposure to EE compared to female prostate. Senescence is characterized by reducing of sexual hormones, in this phase increases the prostatic diseases in males and females. Exposure to EE during critical periods as prenatal and puberty accentuated the changes in prostate glandular structure and increased the developing prostatic lesions in senescence. As prenatal period, pubertal was also considered a critical phase during the exposure to EE on male and female prostate of senile gerbil. The use of EE during gestational or puberty phases significantly alters male and female prostate health during aging, and the gerbil was considered a good model for this study Doutorado Biologia Celular Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientadores: Sebastião Roberto Taboga, Fernanda Cristina Alcântara dos Santos Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: O resumo poderá ser visualizado no texto completo da tese digital quando liberada Abstract: The abstract is available with the full electronic document when available Mestrado Biologia Celular Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientadores: Sebastião Roberto Taboga, Fernanda Cristina Alcântara Santos Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: A próstata feminina é uma glândula funcionalmente ativa encontrada em diversas espécies de mamíferos, incluindo humanos e roedores. Em fêmeas adultas de gerbilos, a próstata apresenta localização parauretral, exibindo íntimo contato com a parede da uretra média e distal. Esta glândula é homóloga a próstata ventral de roedores machos, sendo formada por um conjunto de glândulas e ductos inseridos em um estroma fibromuscular. O estudo da morfofisiologia prostática nas fases do ciclo estral tem demonstrado que a próstata feminina é influenciada pelas oscilações nos níveis séricos de estradiol e progesterona. Assim, tornam-se necessários estudos que avaliem o efeito da exposição ao estradiol em longo prazo, com o objetivo de observar como este esteróide atua no desenvolvimento de lesões prostáticas. Além disso, de igual importância é avaliar a interação dos estrógenos com outros esteróides circulantes, a fim de se avaliar quais associações hormonais são necessárias para manter o equilíbrio homeostático da próstata feminina do gerbilo. A partir do proposto, o objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da administração prolongada de estradiol, e de estradiol + testosterona, sobre a próstata de fêmeas ovariectomizadas. Para isso, as fêmeas adultas foram submetidas à intervenção cirúrgica para remoção dos ovários e, após 10 dias de recuperação, foram submetidas à administração de estradiol, e de estradiol + testosterona. Após trinta dias de tratamento, os animais foram sacrificados e as glândulas prostáticas submetidas a análises morfológicas, morfométrico-estereológicas e sorológicas. Alterações morfológicas e fisiológicas foram observadas em todos os grupos experimentais. A restrição hormonal resultante da ovariectomia causou grande regressão glandular e diminuição da atividade secretora, aspectos revertidos pela exposição dos animais ao estrógeno isolado e conjugado à testosterona. Entretanto, esses hormônios não foram capazes de reestabelecer a histoarquitetura normal do tecido. Foram observadas, inclusive, algumas lesões presentes principalmente nos grupos tratados, tais como inflamações e neoplasias intraepiteliais. A imunorreação para o ER-? foi reduzida nos núcleos do estroma prostático após castração e foi recuperado com os tratamentos. Já a localização de ER-? no núcleo das células epiteliais mostrou-se muito semelhante em todos os grupos. Sugere-se, ainda, uma atuação do estradiol na regulação dos níveis séricos de prosgesterona e testosterona. Sendo assim, conclui-se que a histoarquitetura normal da glândula nas fêmeas está relacionada ao equilíbrio entre os hormônios ovarianos e que, dentre eles, o estradiol e a testosterona desepenham papel importante na homeostasia prostática desses animais Abstract: The female prostate is a functional gland found in several mammal species, including humans and rodents. In adult female gerbils, the prostate shows paraurethral localization, exhibiting intimate contact with medial and distal urethra wall. This gland is homologous to ventral prostate in male rodents, composed by a group of acini and ducts inserted into a fibromuscular stroma. Prostate morphophysiology estudies during estrous cycle have shown that female prostate is influenced by estradiol and progesterone serum levels oscillations. Thus, studies which evaluate the effect of long-term exposure to estradiol become necessary, in order to observe the way this steroid acts by on prostate lesions development. Furthermore, it is also important to evaluate hormonal interaction among estradiol and other serum steroids with the aim of evaluating which hormonal associations are necessary to maintain the homeostatic balance of gerbil female prostate. Hence, this study role was to evaluate the effect of estradiol and estradiol plus testosterone long-term exposure on the prostate of ovariectomized females. To make it possible, adult females underwent to surgical intervention to remove both ovaries and, after 10 days recovering, they received estradiol or estradiol plus testosterone doses. After 30 days of treatment, the animals were euthanized and de prostate glands were submitted to morphological, morphometric-estereological and serological analysis. Morphological and physiological alterations were observed in all experimental groups. Hormonal deprivation caused by castration brought glandular atrophy and decreased secretory activity. These aspects were reverted by animals exposure to isolated estrogen and estrogen plus testosterone conjugation. However, these hormones were not able to reestablish the tissue normal histoarchitecture. Some lesions were even observed mainly in tratment groups, like inflammations and intraepithelial neoplasias. The imunoreaction for ER-? decreased in prostate stroma nuclei after castration and was restablished with treatments. On the other hand, the epithelium ER-? expression was similar in all groups. It also seems that there is a role played by estradiol in testosterone and progesterone serum levels regulation. In conclusion, normal histoarchitecture of gerbil female prostate is related to ovarian hormones balance and estradiol and testosterone play an important role in prostatic homeostasis in these animals Mestrado Histologia Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientadores: Sebastião Roberto Taboga, Fernanda Cristina Alcantara dos Santos Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: A próstata não é um órgão exclusivo do sistema reprodutor masculino, estando presente em fêmeas de diversas espécies de roedores e também na espécie humana. A próstata feminina tem sido considerada homóloga à próstata ventral masculina, sendo composta por um pequeno conjunto de glândulas e ductos entremeados a um estroma fibromuscular. Em fêmeas adultas de gerbilos da Mongólia (Meriones unguiculatus) a próstata apresenta uma localização parauretral, mostrando íntimo contato com a parede da uretra proximal e mediana. Em machos, a atuação dos reguladores hormonais, principalmente andrógenos e estrógenos, que influenciam a fisiologia prostática são bastante conhecidos. Em fêmeas, no entanto, os fatores que influenciam a atividade prostática são pouco conhecidos, embora já se saiba que as alterações hormonais comuns à senescência estejam associadas à instalação de lesões prostáticas. É sabido também que as oscilações hormonais que ocorrem durante o ciclo reprodutivo das fêmeas influenciam a morfofisiologia de vários órgãos do sistema reprodutor. Embora se saiba que a próstata feminina seja um órgão funcional e sensível à ação de hormônios esteróides, não é conhecido, até o momento, se as oscilações hormonais que ocorrem durante o ciclo reprodutivo podem alterar a biologia desta glândula. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar os aspectos morfofuncionais da próstata feminina durante o ciclo estral de gerbilos da Mongólia, o qual é constituído por quatro fases distintas, a saber: proestro, estro, diestro I e diestro II. Para isso, foram empregadas análises morfológicas, morfométricoesterológicas, sorológicas, imunocitoquímicas e enzimáticas. Os resultados obtidos com este estudo demonstraram que as oscilações hormonais que ocorrem durante o ciclo estral alteram a estrutura e funcionalidade da próstata feminina do gerbilo. Estas alterações compreendem um crescente desenvolvimento prostático e aumento da atividade secretória, em relação à secreção do antígeno prostático específico (PSA) e às glicoproteínas PAS positivas, durante as fases de proestro e estro, e uma gradual diminuição da atividade secretória e do desenvolvimento glandular nas fases de diestro I e II. O mesmo ocorreu com a atividade fosfatásica ácida prostática presente em todo o ciclo, a qual mostrou uma menor freqüência de ácinos com ausência de marcação na fase estro e uma maior freqüência nasfases subseqüentes (diestro I e II). Acredita-se, com base nos dados coletados, que estas oscilações cíclicas na morfofisiologia prostática sejam determinadas pelos picos hormonais de estrógeno no diestro II e pelos altos níveis de progesterona no estro, os quais interagem com os níveis constantes de andrógenos durante todo o ciclo estral. Abstract: The prostate is not an exclusive organ of the male reproduction system, found in females of several rodents' species and also in humans. The female prostate has been considered homologue to the male ventral prostate and it is formed by a small cluster of glands and ducts inserted into a fiber muscular stroma. In adult female Mongolian gerbils (Meriones unguiculatus), the prostate presents a paraurethral location, showing close contact with the wall of urethra in its proximal and median regions. In males, the hormone action, mainly androgens and estrogens that influence the prostate physiology are well known. In females, however, the factors that influence the prostate activity are little know, although it is known that the hormonal changes, common to senescence, are associated with the genesis of prostate lesions. It is also known that hormonal oscillations that occur during the female's reproductive cycle influence the morphophysiology of several organs of the reproductive system. Although the female prostate is a functional organ and sensitive to the action of steroid hormones, it is not known, until now, if hormonal oscillations that occur during the reproductive cycle can alter the biology of this gland. Thus, the aim of this work was to evaluate the morphofunctional aspects of the female prostate during the Mongolian gerbil estrous cycle, which consists of four distinct phases, considering proestrus, estrus, diestrus I and diestrus II. For this, were employed morphological, morphometricstereological, serological, and enzyme immunocytochemistry analysis. The data showed that hormonal oscillations during the estrous cycle alter the structure and function of the gerbil female prostate. These changes include an increased prostate development and an increased secretory activity, in relation to the secretion of prostate specific antigen (PSA) and PAS positive glycoproteins, during the estrus and proestrus stages, and a gradual reduction in secretory activity and of the glandular development in the diestrus I and II stages. The same occurred with prostatic acid phosphatase activity, present throughout the cycle, which showed a lower frequency of acini with lack of marking in estrus phase and a higher frequency in subsequent phases (diestrus I and II). It is believed, based on collected data, that these morphophysiological cyclical changes in prostate are determined by hormonal peak of estrogen in diestrus II and the high levels of progesterone in estrus, which interact with the constant levels of androgens throughout the estrous cycle. Mestrado Biologia Celular Mestre em Biologia Celular e Estrutural