Research background. In the recent years, considerable attention has been given to selenium status since its deficiency is linked with various disorders and affects at least 13% of world population. Additionally, mushrooms are known to possess pronounced capacity for absorption of various micronutrients, including Se, from soil/substrate. Here, we investigate the possibility of using Se-rich zeolitic tuff as a supplement for production of selenized mushroom. Furthermore, the impact of the enrichment on the activity of antioxidant enzymes and biological potential of Coriolus versicolor medicinal mushroom is studied. Experimental approach. Se(IV)- and Se(VI)-modified natural zeolitic tuff from the Serbian deposit Zlatokop was used as supplement for mushroom cultivation. To examine the effectiveness of selenium enrichment, we determined total selenium with inductively coupled plasma mass spectrometry (ICP-MS), together with the activity of antioxidant enzymes in fresh fruiting bodies and biological potential of methanolic extracts. Antioxidant activity was evaluated using the appropriate tests for: inhibition of lipid peroxidation, DPPH free radical scavenging assay, Fe(III)-reducing antioxidant power assay and ability of chelating Fe2+ ions. The antibacterial activity against foodborne pathogens was measured by broth microdilution assay. Additionally, chemical composition of the prepared extracts was studied using UV-Vis and Fourier transform infrared (FTIR) spectroscopy. Results and conclusions. Content of selenium detected in biofortified C. versicolor was even 470 times higher than in control on dry mass basis ((140.7±3.8) vs (0.3±0.1) µg/g), proving that Se-rich zeolitic tuff is an excellent supplement for mushroom production. Furthermore, the results of monitoring the activity of antioxidant enzymes revealed that most of the Se-enriched mushrooms exhibited higher superoxide dismutase (SOD) and catalase (CAT) and lower glutathione peroxidase (GSH-Px) activities than control. Due to higher amounts of enzymes, which can quickly catalyze the reduction of superoxide radicals, the quality of selenium-enriched mushrooms is preserved for a longer period of time. Investigation of biological potential indicated that Se-enriched mushroom methanolic extracts, generally, expressed enhanced antioxidant properties. Additionally, extracts showed antibacterial activity against all tested pathogenic microorganisms. Novelty and scientific contribution. Cultivation of mushrooms on Se-enriched zeolitic tuff is a new technological approach for obtaining Se-fortified food/supplements with enhanced antioxidant and antibacterial activities., Pozadina istraživanja. Posljednjih se godina sve veća pažnja posvećuje udjelu selena u organizmu, s obzirom na to da se nedostatak ovog elementa u prehrani povezuje s pojavom mnogih bolesti koje pogađaju najmanje 13 % svjetske populacije. Prethodna su istraživanja pokazala da gljive uspješno apsorbiraju različita mikrohranjiva iz tla odnosno supstrata, uključujući i selen. Svrha je ovog rada bila ispitati mogućnost primjene zeolitnog tufa bogatog selenom kao dodatka u proizvodnji gljiva obogaćenih selenom. Uz to, ispitan je utjecaj obogaćivanja na aktivnost antioksidacijskih enzima i biološki potencijal medicinske gljive Coriolus versicolor. Eksperimentalni pristup. Prirodni zeolit bogat Se(IV) i Se(VI) iz rudnika Zlatokop (Srbija) upotrijebljen je kao izvor selena u proizvodnji gljiva na čvrstom supstratu. Za utvrđivanje uspješnosti obogaćivanja gljive selenom ispitani su sljedeći parametri: ukupni udjel selena, i to masenom spektrometrijom s induktivno spregnutom plazmom (ICP-MS), aktivnost antioksidacijskih enzima u svježim plodištima gljiva, te biološki potencijal metanolnih ekstrakata. Antioksidacijska aktivnost ispitana je sljedećim metodama: inhibicijom lipidne peroksidacije, mjerenjem sposobnosti hvatanja slobodnih DPPH radikala, metodom FRAP i određivanjem sposobnosti keliranja iona željeza. Antibakterijski učinak ekstrakata na patogene iz hrane ispitan je mikrodilucijskom metodom. Nadalje, kemijski je sastav ekstrakata ispitan pomoću UV-Vis i Fourier transformirane infracrvene spektroskopije (FTIR). Rezultati i zaključci. Udjel selena u gljivi Coriolus versicolor obogaćenoj selenom bio je i do 470 puta veći nego u kontrolnom uzorku ((140.7±3.8) naspram (0.3±0.1) µg po g suhe tvari), što potvrđuje da se zeolitni tuf bogat selenom može uspješno primjeniti za obogaćivanje gljiva selenom. Praćenjem aktivnosti antioksidacijskih enzima utvrđeno je da većina uzoraka gljiva obogaćenih selenom ima veću aktivnost superoksid dismutaze (SOD) i katalaze (CAT) te manju glutation peroksidaze (GSH-Px) od kontrolnog uzorka. Zbog veće aktivnosti enzima koji mogu brže katalizirati dismutaciju superoksid radikala, gljive obogaćene selenom mogle bi dulje zadržati svoju kakvoću. Ispitivanjem biološkog potencijala utvrđeno je da metanolni ekstrakti gljiva obogaćenih selenom imaju izraženija antioksidacijska svojstva. Osim toga, ekstrakti su inhibirali rast svih ispitanih patogenih mikroorganizama. Novina i znanstveni doprinos. Uzgoj gljiva na zeolitnom tufu bogatom selenom predstavlja novi tehnološki pristup proizvodnji hrane odnosno suplemenata obogaćenih selenom s pojačanom antioksidacijskom i antibakterijskom aktivnošću.