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Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-02-22Bitstream added on 2014-06-13T20:10:40Z : No. of bitstreams: 1 rodrigues_hg_me_botfm.pdf: 322778 bytes, checksum: da4082071a25800b9f48baa13f7598ee (MD5) Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) O presente trabalho teve por objetivo determinar os efeitos da administração de saponina em ratos alimentados com dietas de diferentes proporções de lipídios, colesterol e sacarose sobre parâmetros morfométricos e nutricionais. Para tanto, 36 ratos, Wistar, 240g, foram divididos em 6 grupos com 6 ratos cada. O grupo P foi considerado controle recebendo dieta padrão. O grupo L recebeu dieta padrão acrescida de óleo de soja, colesterol e ácido cólico. O grupo S recebeu dieta padrão enriquecida com sacarose e óleo de soja. O grupo FP recebeu dieta padrão e saponina (4g/L) na água de beber. Animais do grupo FL receberam a mesma dieta do grupo L e saponina (4g/L) na água. O grupo FS recebeu a mesma dieta do grupo S e saponina (4g/L) na água. O experimento teve duração de 35 dias. Os resultados demonstraram que as dietas não elevaram o peso corporal, porém induziram alterações nos parâmetros nutricionais como eficiência alimentar e ingestão de líquidos. A administração de saponina induziu elevação no ganho de peso por aumentar a eficiência alimentar. Not available.

Orientador: Marcio Alberto Torsoni Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Aplicadas Resumo: O uso do óleo de coco (CO) na dieta permanece controverso devido aos possíveis efeitos adversos dos ácidos graxos saturados e sua associação com desordens metabólicas e obesidade. O presente estudo investigou os efeitos metabólicos da suplementação de CO no hipotálamo e tecido adiposo de camundongos Swiss saudáveis. O protocolo experimental foi aprovado pelo CEUA da UNICAMP (no5124-1/2019). Camundongos, machos, Mus musculus da linhagem Swiss (com 5 semanas de vida) alimentados com dieta normal (ad libitum), foram randomicamente distribuídos em grupos e suplementados oralmente, por 8 semanas, com 300 ?L de água para o grupo controle (CV), 100 ou 300 ?L de óleo de coco (CO100 e CO300, respectivamente) e 100 ou 300 ?L de óleo de soja (SO100 e SO300, respectivamente). No mais, os camundongos foram estimulados com solução salina ou leptina ou insulina para avaliação da sensibilidade à leptina e sinalização da leptina e insulina após oito semanas de suplementação. A ingestão alimentar e o peso corporal foram mensurados semanalmente. Ao final do período de suplementação analisou-se parâmetros metabólicos por calorimetria indireta, comportamentais e moleculares, como expressão das citocinas TNF-?, IL-1?, IL-6 e da quimiocina CCL2 por qPCR e expressão das proteínas pJNK e pNF?B por WB. No mais, tratou-se linhagem celular neuronal (mHypoA-2/29) com soro dos camundongos suplementados com CO, na presença ou ausência do inibidor de TLR4 (TAK-242) e mensurou-se por qPCR a expressão de TNF-? e NFKBia e por WB a migração de NFKB para o núcleo. Para análise estatística foram aplicados: teste t de Student; teste t pareado; análise de variância unilateral (ANOVA) seguida de Student-Newman-Keuls. Enquanto para amostras não paramétricas, aplicou-se os testes de Wilcoxon e Kruskal Wallis. As diferenças foram consideradas significantes para p< 0,05. Não houve alteração na ingestão dietética durante o período experimental. A suplementação com CO levou ao aumento do ganho de peso corporal e da adiposidade, redução do gasto energético e da atividade locomotora, e indução de um comportamento ansioso. No hipotálamo, o consumo de CO aumentou a expressão gênica de citocinas pró-inflamatórias, como TNF-?, IL-1? e IL- 6, a fosforilação de JNK e NFKB e o conteúdo proteico de TLR4. Ainda, observou-se aumento da infiltração de macrófagos bem como da expressão gênica de TNF-? e IL6 no tecido adiposo dos animais suplementados com CO. Contudo, a expressão dos genes IL-1B e CCL2, os níveis de pJNK e pNF?B aumentaram apenas no tecido adiposo do CO300. Ademais, células neuronais tratadas com soro de camundongos suplementados com CO mostraram aumento na expressão gênica de TNF-? e NF?Bia e maior migração de NFKB para o núcleo. Contudo, esses efeitos foram evitados por tratamento prévio com inibidor de TLR4. Por fim, a suplementação com CO induziu estresse de retículo endoplasmático no hipotálamo e resistência à leptina hipotalâmica, conforme demonstrado pelo efeito reduzido da leptina no gasto de energia, fosforilação de JAK2 e STAT3 hipotalâmica e expressão de POMC. No tecido adiposo, a lipogênese foi favorecida e a sinalização de STAT3 e JAK2 prejudicada após suplementação de CO e estimulação com leptina. Contudo, a suplementação de CO por oito semanas não desencadeou resistência à insulina. A suplementação com CO, por 8 semanas, altera parâmetros metabólicos, estimula resposta pró-inflamatória, por meio de um mecanismo mediado por TLR4, induz disfunção comportamental, estresse de retículo endoplasmático no hipotálamo e resistência hipotalâmica e periférica à leptina em camundongos Swiss saudáveis Abstract: The use of coconut oil (CO) in the diet remains controversial due to the possible adverse effects of saturated fatty acids and their association with metabolic disorders and obesity. This study investigated the metabolic effects of CO supplementation on the hypothalamus and adipose tissue of healthy Swiss mice. The experimental protocol was approved by the CEUA of UNICAMP (no5124 1/2019). Male Swiss, Mus musculus, mice (5 weeks old) fed a normal diet (ad libitum) were randomly distributed into groups and supplemented orally, for 8 weeks, with 300 ?L of water for the control group (CV),100 or 300 ?L of coconut oil (CO100 and CO300, respectively) and 100 or 300 ?L of soybean oil (SO100 and SO300, respectively). Furthermore, mice were stimulated with saline solution or leptin or insulin to assess leptin sensitivity and leptin and insulin signaling after eight weeks of supplementation. Food intake and body weight were measured weekly. At the end of the supplementation period, metabolic parameters were analyzed by indirect calorimetry, behavioral and molecular parameters, such as expression of the cytokines TNF-?, IL-1?, IL-6 and the chemokine CCL2 by qPCR and expression of pJNK and pNF?B proteins by WB. Furthermore, a neuronal cell line (mHypoA-2/29) was treated with CO supplemented mice serum, in the presence or absence of TLR4 inhibitor (TAK 242) and the expression of TNF-? and was measured by qPCR. NFKBia and by WB the migration from NFKB to the core. For statistical analysis were applied: Student's t test; paired t test; One-way analysis of variance (ANOVA) followed by Student-Newman-Keuls. As for non-parametric samples, the Wilcoxon and Kruskal Wallis tests were applied. Differences were considered significant at p

Orientador: Maria Cláudia Gonçalves de Oliveira Fusaro Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Aplicadas Resumo: Existem evidências do envolvimento do ATP via ativação do receptor P2X3 na dor muscular. Portanto, o objetivo deste estudo foi verificar se a ativação do receptor P2X3 no músculo gastrocnêmio de ratos induz hiperalgesia mecânica, e em caso afirmativo, analisar os mecanismos inflamatórios pelo qual os receptores P2x3 induzem hiperalgesia mecânica. O Antagonista não seletivo para o receptor P2X3 ?,?meATP foi administrado no músculo gastrocnêmio de ratos, induzindo hiperalgesia, a qual foi significativamente reduzida pelo antagonista seletivo do receptor P2X3 e P2X2/3 - A-317491. A hiperalgesia mecânica induzida pelo ?,?meATP foi reduzida pelo inibidor de ciclooxigenase Indometacina, pelo antagonista seletivo do receptor de Bradicinina B1 e B2- Dalbk e Bradyzide, respectivamente, antagonista dos adrenoceptores ?1 e ?2 - Atenolol e ICI 118,551 respectivamente, e inibidor não específico de selectinas Fucoidan. O ?,?meATP também induziu o aumento da concentração local de citocinas pro inflamatórias TNF-?, IL-1?, IL-6 e CIN e migração de neutrófilos. Juntos estes achados sugerem que o ?,?meATP induz hiperalgesia mecânica no músculo gastrocnêmio via ativação de receptor periférico P2X3, o qual envolve bradicinina, prostaglandinas e aminas simpatomiméticas e migração de neutrófilos. Portanto, nós sugerimos que os receptores P2X3 sejam um importante alvo no controle da dor muscular Abstract: There is evidence of the involvement of endogenous ATP via activation of P2X3 in muscle pain. Therefore, the aim of this study was to verify whether the activation of P2X3 receptors in the gastrocnêmio muscle of rats induces mechanical hyperalgesia and, if so, to analyze the inflammatory mechanisms by which P2X3 receptors induce mechanical hyperalgesia. Intramuscular administration of the non-selective P2X3 receptor agonist ?,?-meATP in the gastrocnemius muscle of rats induced mechanical hyperalgesia, which was significantly reduced by the selective P2X3 and P2X2/3 receptors antagonist A-317491. The ?,?-meATP-induced mechanical hyperalgesia was prevented by the indomethacin cyclooxygenase inhibitor, the selective bradykinin B1- or B2- receptor antagonist DALBK and bradyzide, respectively, the ?1- or ?2-adrenoceptor antagonist atenolol and ICI 118,551, respectively, and the nonspecific selectin inhibitor fucoidan. ?,?-meATP also induced increase in the local concentration of the pro-inflammatory cytokines TNF-?, IL-1?, IL-6 and CINC-1 and the neutrophil migration. Together, these findings suggest that ?,?-meATP induced mechanical VIII hyperalgesia in the gastrocnemius muscle of rats via activation of peripheral P2X3 receptors, which involves bradykinin, prostaglandins, sympathetic amines, pro-inflammatory cytokines and neutrophil migration. Therefore, we suggest that P2X3 receptors are important targets to control muscle inflammatory pain Mestrado Biodinâmica do Movimento Humano e Esporte Mestra em Ciências da Nutrição e do Esporte e Metabolismo

Orientador: Hosana Gomes Rodrigues Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Aplicadas Resumo: A cicatrização de feridas cutâneas é um processo fisiológico essencial à sobrevivência de todo organismo vivo. Este processo é composto por três fases sequenciais e sobrepostas: inflamação, formação do tecido de granulação e remodelamento da matriz extracelular (MEC). Alteração em qualquer uma destas fases influencia o reparo tecidual final... O resumo poderá ser visualizado no texto completo da tese digital Abstract: The cutaneous wound healing is a physiological process essential for the survival of every living organism. This process consists of three sequential and overlapping phases: inflammation, formation of granulation tissue and remodelling of the extracellular matrix (ECM). Alteration in any of these phases influences the tissue repair... Abstract is available with the full The electronic document Doutorado Nutrição Doutora em Ciências da Nutrição e do Esporte e Metabolismo FAPESP 2017/26366-2 CAPES CNPQ

Orientador: Hosana Gomes Rodrigues Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Aplicadas Resumo: A pele é a primeira barreira imunológica contra agentes físicos, químicos ou biológicos provenientes do ambiente externo e assim, deve ser reparada rapidamente quando danificada. O atraso da cicatrização resulta em aumento do tempo de hospitalização, altos custos aos serviços de saúde e baixa qualidade de vida. Tal atraso pode estar relacionado com doenças como o Diabetes Mellitus (DM). Embora várias abordagens terapêuticas tenham sido desenvolvidas para a cicatrização de feridas diabéticas nos últimos anos, a úlcera diabética continua sendo importante desafio clínico. O ácido graxo ômega-3 (?-3) eicosapentaenoico (EPA, 20:5) prejudica a reorganização de colágeno em feridas de camundongos saudáveis por aumentarem IL-10 no tecido cicatricial. Entretanto, não se sabe quais os efeitos desses ácidos graxos na cicatrização de feridas em diabéticos, assim o objetivo do presente trabalho é investigar os efeitos da administração oral com óleo rico EPA no processo de cicatrização em camundongos diabéticos. Para tanto, camundongos C57Black/6 machos foram divididos em três grupos: (C) Controle que receberam água como placebo; (D) diabéticos com diabetes induzido por estreptozotocina e foram suplementados com água; (ED) animais diabéticos que receberam suplementação oral de óleo rico em EPA. Foram avaliados o fechamento macroscópico da ferida, características histológicas do tecido cicatricial, resistência à tração da ferida; imunofenotipagem celular por citometria de fluxo, quantificação de citocinas por ELISA, expressão gênica de colágenos por PCR quantitativo. Na fase inflamatória (1 e 3 dias), os animais diabéticos apresentam redução de citocinas pró-inflamatórias (TNF-? e IL-6) o que pode estar relacionado com a redução do tecido de granulação nesses animais. Já na fase proliferativa (7 e 10 dias) ocorreu o aumento de citocinas (IL-1?, IL-6) e a quimiocina CXCL1, com consequente aumento do infiltrado inflamatório e edema no tecido de granulação. A suplementação com óleo rico em EPA nos camundongos diabéticos aumentou a concentração da citocina anti-inflamatória IL-10, na fase inflamatória, o que pode estar relacionado com a redução da migração de neutrófilos ao tecido cicatricial. Na fase proliferativa o óleo rico em EPA também apresentou efeitos anti-inflamatórios como o aumento de IL-10 e da razão neutrófilos/macrófagos o que indica uma redução da fagocitose de neutrófilos apoptóticos. Foi observado também redução da expressão gênica de colágeno 1A1 e consequentemente o aumento da fragilidade do tecido cicatricial. Alterações celulares e moleculares durante a cicatrização de feridas em camundongos diabéticos suplementados com óleo rico em EPA, geraram um tecido muito menos resistente e mais fácil de ser novamente rompido. Palavras chaves: Reparo tecidual, diabetes, ômega-3, colágeno Abstract: The skin is the first immune barrier against physical, chemical or biological agents from the external environment and thus must be repaired quickly when damaged. Delayed wound healing results in longer hospital stays, high costs to health services and poor quality of life. Such delay may be related to diseases such as diabetes mellitus (DM). Although several therapeutic approaches have been developed for the wound healing of diabetic patients in recent years, diabetic ulcer remains a major clinical challenge. Omega-3 (?-3) eicosapentaenoic fatty acid (EPA, 20:5) impairs collagen reorganization in healthy mouse wounds by increasing IL-10 in scar tissue. However, the effects of these fatty acids on wound healing in diabetic patients are unknown, so the aim of present study is investigating the effects of oral administration with EPA rich oil on the wound healing in diabetic mice. C57Black/6 male mice were divided into three groups: (C) Control that received water as placebo; (D) diabetics with streptozotocin-induced diabetes and were supplemented with water; (ED) diabetic animals that received oral supplementation of EPA-rich oil. We evaluated macroscopic wound closure, histological characteristics of scar tissue, wound tensile strength; cell immunophenotyping by flow cytometry, cytokine quantification by ELISA, collagen gene expression by quantitative PCR. In the inflammatory phase (1 and 3 days), diabetic animals reduced the proinflammatory cytokines (TNF-? and IL-6) which may be related to the reduction of granulation tissue in these animals. In the proliferative phase (7 and 10 days) there was an increase of cytokines (IL-1?, IL-6) and chemokine CXCL1, with consequent increase of inflammatory infiltrate and edema in granulation tissue. EPA-rich oil supplementation in diabetic mice increased the concentration of anti-inflammatory cytokine IL-10 in the inflammatory phase, which may be related to reduced neutrophil migration to scar tissue. In the proliferative phase, EPA-rich oil also had anti-inflammatory effects such as increased IL-10 and neutrophil/macrophage ratio indicating a reduction in apoptotic neutrophil phagocytosis. Reduction of 1A1 collagen gene expression was also observed, and consequently increased fragility of scar tissue. Cellular and molecular changes during wound healing in diabetic mice supplemented with EPA-rich oil produced a less resistant tissue and easier to be broken again. Keywords: Tissue repair, diabetes, omega-3, collagen Mestrado Ciências Nutricionais e Metabolismo Mestra em Ciências da Nutrição e do Esporte e Metabolismo FAPESP 2018/00529-5 CAPES FAEPEX

Orientador: Hosana Gomes Rodrigues Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Aplicadas Resumo: A cicatrização de feridas é um processo fisiológico iniciado sempre que há o rompimento de qualquer tecido corporal. Ela é dividida em 3 fases concomitantes, sendo elas: inflamação, proliferação e maturação. Durante a fase proliferativa, a formação de novos vasos sanguíneos (angiogênese) desempenha um papel fundamental, uma vez que os vasos são essenciais para a chegada de células inflamatórias, remoção dos debris celulares e fornecimento adequado de oxigênio e nutrientes, ao local lesionado. Em estudos anteriores observamos que o ácido graxo linoleico (LA, 18:2 'omega'-6), induziu o aumento no número de novos vasos sanguíneos na pele, favorecendo a cicatrização, em ratos Abstract: Wound healing is a physiological process initiated whenever there is a breakdown of any body tissue. It is divided into 3 concomitant phases: inflammation, proliferation and maturation. During the proliferative phase, formation of new blood vessels (angiogenesis) plays a key role, as vessels are essential for the arrival of inflammatory cells, removal of cellular debris and adequate supply of oxygen and nutrients to the injured site. In previous studies, we observed that linoleic acid (LA, 18: 2 'omega'-6) increased the number of new blood vessels in the skin, favoring healing in rats. However, the mechanisms involved in these effects have not been clarified... The abstract is available with the full electronic document Mestrado Metabolismo e Biologia Molecular Mestra em Ciências da Nutrição e do Esporte e Metabolismo FAPESP 2016/15955-4 CNPQ CAPES

Orientadores: Marciane Milanski Ferreira, Adriana Souza Torsoni Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Aplicadas Resumo: A obesidade é um problema de saúde global e está diretamente associada com o risco de desenvolvimento de outras doenças metabólicas. Um estilo de vida saudável, incluindo uma alimentação equilibrada, é essencial para a manutenção da eutrofia. Os mamíferos possuem um poderoso sistema que é responsável pela regulação da homeostasia energética, sendo que, no hipotálamo estão localizados neurônios relacionados com o acoplamento entre a fome e a saciedade. Estes neurônios são afetados pela ingestão excessiva de lipídeos, especialmente por ácidos graxos saturados de cadeia longa, e pela obesidade. Sabe-se que a obesidade é marcada pela presença de uma inflamação subclínica e alteração em diversas vias relacionadas ao estresse celular. Em camundongos com obesidade induzida por dieta hiperlipídica, há falha na regulação da macroautofagia e do sistema ubiquitina-proteasoma em neurônios do hipotálamo, que são mecanismos responsáveis pela proteostasia celular. Este trabalho teve como objetivo investigar a modulação de autofagia mediada por chaperonas em neurônios hipotalâmicos de animais obesos. Esse tipo de autofagia é responsável por degradar proteínas citosólicas que contém um motivo específico de aminoácidos, por meio da atuação principal de duas proteínas, denominadas de HSC-70 e LAMP-2A. Nossos resultados mostraram que animais que consumiram dieta hiperlipídica por 3 dias apresentaram maior ativação de autofagia mediada por chaperonas em hipotálamo. Após este período, houve menor ativação de autofagia mediada por chaperonas nesta região. Além disso, neurônios hipotalâmicos expostos ao palmitato, um ácido graxo saturado, apresentaram ativação de autofagia mediada por chaperonas. A exposição destes neurônios hipotalâmicos a um ambiente inflamatório também levou à ativação de autofagia mediada por chaperonas nessas células. Em situações de estresse celular, a ativação da autofagia mediada por chaperonas é essencial para a manutenção da proteostasia. Em contrapartida, a diminuição neste sistema leva a maior suceptibilidade celular a estímulos estressores. Portanto, o excesso de ácidos graxos saturados afeta a autofagia mediada por chaperonas em neurônios do hipotálamo, fato que pode contribuir para a disfunção neuronal e formação de agregados proteicos. A manutenção dos níveis basais de autofagia por meio de intervenções farmacológicas ou dietéticas pode representar uma terapia importante no tratamento de doenças metabólicas Abstract: Obesity has become a global health issue and is directly related to increased risk of developing other metabolic diseases. A healthy lifestyle, including a balanced diet, is essential for the maintenance of a healthy body mass. Mammals have a powerful system responsible for the regulation of energy homeostasis. Neurons from hypothalamus are responsible for the coupling between food intake and satiety. These neurons are affected by lipid excess, especially long-chain saturated fatty acids and obesity. A subclinical inflammatory state is the hallmark of obesity. Also, obesity leads to the dysregulation of several systems related to stress response. In mice with diet-induced obesity, there is a failure in the regulation of macroautophagy and ubiquitin-proteasome system in hypothalamic neurons. These systems are responsible for the cytosolic protein renewal and therefore for cellular proteostasis. This work aimed to study the chaperone-mediated autophagy modulation in obese mice. This type of autophagy is responsible for the degradation of proteins which have a specific amino acid motif. There are two main proteins responsible for chaperone-mediated autophagy machinery, called HSC-70 and LAMP-A. Our results showed an upregulation in chaperone-mediated autophagy in the hypothalamus of mice fed a high-fat diet for 3 days. Longer exposure to high-fat diet led to the downregulation in hypothalamic chaperone-mediated autophagy. Furthermore, direct exposure of hypothalamic neurons to palmitate, a saturated fatty acid, led to chaperone-mediated autophagy activation. After an insult, the activation of chaperone-mediated autophagy is essential for proteostasis maintenance. On the other hand, failure in this system could lead to increased cellular susceptibility to stressors. Thus, saturated fatty acid excess affects neuronal chaperone-mediated autophagy and this could contribute to neuronal dysfunction and protein aggregate formation in hypothalamic neurons. Therefore, the maintenance of basal chaperone-mediated autophagy levels with pharmacology or dietary interventions could represent an important therapy in the treatment of metabolic disorders Doutorado Metabolismo e Biologia Molecular Doutora em Ciências da Nutrição e do Esporte e Metabolismo FAPESP 2013/10911-0

Orientador: Hosana Gomes Rodrigues Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Aplicadas Resumo: A inflamacao e a primeira fase do processo de cicatrizacao de feridas e esta pode ser dividida em resposta inflamatoria inicial e tardia. A resposta inflamatoria tardia e essencial ao controle de mediadores pro-inflamatorios e resolucao da inflamacao, sendo determinante ao inicio da proxima fase de formacao de tecido ou proliferacao. Acidos graxos poli-insaturados das familias 'omega'-6 e 'omega'-3, modulam o perfil inflamatorio, sendo cada vez mais estudados no processo de reparo tecidual. Assim, buscando compreender o papel destes acidos graxos na fase inflamatoria tardia do processo de cicatrizacao de feridas, utilizamos como objeto de estudo, camundongos transgenicos denominados FAT-1, capazes de produzir endogenamente, acidos graxos 'omega'-3 a partir de acidos graxos 'omega'-6. Para verificar a composicao lipidica destes camundongos, avaliamos por cromatografia gasosa, o plasma e o tecido cicatricial, 3 dias apos a inducao da ferida. No plasma, os camundongos transgenicos reduziram a concentracao do acido graxo araquidonico (AA) e aumentaram a concentracao dos acidos graxos alfa-linolenico (ALA), eicosapentaenoico (EPA) e docosahexaenoico (DHA), reduzindo a proporcao 'omega'-6/'omega'-3 em 32,9%, quando comparados ao grupo wild type (WT). Ja no tecido cicatricial, estes camundongos apresentaram reducao da porcentagem de AA nas classes lipidicas teciduais de fosfatidilcolina (PC) e fosfatidiletalonamina (PE) e, aumento dos acidos graxos docosapentaenoico (DPA) e DHA nas classes lipidicas teciduais de PC, PE e de triacilglicerol (TAG). Com isto, os camundongos transgenicos obtiveram uma reducao da proporcao 'omega'-6/'omega'-3, equivalente a 56,4% em PC, 55,1% em PE e 39,1% em TAG, em relacao ao grupo WT. Em analise do fechamento da ferida pelo programa Image J, os camundongos FAT-1 mantiveram a area da ferida maior desde o 1¿ dia apos a inducao, sendo que no ultimo dia de analise (14¿ dia), a area da ferida era duas vezes maior que a do grupo WT (p

Orientador: Hosana Gomes Rodrigues Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Aplicadas Resumo: A cicatrização é um evento fisiológico essencial para a manutenção da vida. Sua fase inicial, a inflamatória, é de suma importância e pode ser modulada por diversos mecanismos, como pela ação dos ácidos graxos poliinsaturados ômega 3. Atualmente, têm sido descritos também outros sistema nervoso central (SNC) interagindo com o sistema imune (SI) para modular a resposta inflamatória. Essa comunicação atua através do nervo vago, o qual libera acetilcolina que irá atuar, via receptor 'alfa'-7 nicotínico, em células como macrófagos. Assim, considerando que a resposta inflamatória é uma parte essencial do processo de reparo tecidual e que a ingestão de DHA pode afetar a cicatrização de feridas, nossos objetivos são avaliar os efeitos da ingestão de DHA no processo de cicatrização, investigando a via anti-inflamatória colinérgica. Para tanto, administramos óleo rico em DHA para camundongos C57 black/6 durante 4 semanas. Após este período, realizamos as feridas nos animais e avaliamos a celularidade do tecido da ferida; fizemos o acompanhamento do fechamento das mesmas; quantificamos, no tecido, as citocinas IL-1, TNF, sIL-6R, IL-6 e IL-10; as quimiocinas CXCL1/KC e CXCL2/MIP e o fator de crescimento VEGF. Acompanhamos também as feridas realizadas nos camundongos knockdown do transportador vesicular de acetilcolina (VAChT). E, estimulamos os animais com agonista da via anti-inflamatória colinérgica (PNU282978) e nicotina. Verificamos aumento de macrófagos CD45+F4/80+CD206+ e atraso no fechamento das feridas do grupo DHA em relação ao controle. Assim como, no grupo VAChTKD em relação ao controle (WT). Além disso, o grupo DHA apresentou aumento significativo de TNF-'alfa' em 3 e 7 dias após a realização da ferida. O óleo rico em DHA reduziu as concentrações de IL-10 e VEGF no tecido cicatricial na presença do PNU282987 e reduziu a fosforilação de STAT3 após estimulação nicotínica. Porém, não houve diferenças na expressão do receptor 'alfa'-7 nicotínico e na STAT3 total. DHA não alterou a atividade enzimática da acetilcolinesterase. Considerando tais resultados, podemos concluir que o DHA através de seus efeitos anti-inflamatórios, atenua a fase inflamatória da cicatrização e retarda o fechamento da ferida. Os resultados sugerem haver influência da via anti-inflamatória colinérgica na cicatrização e que, o DHA parece influenciar negativamente essa via de sinalização Abstract: Healing is an essential physiological event for the maintenance of life. Its initial, inflammatory phase is of paramount importance and can be modulated by several mechanisms, such as the action of omega-3 polyunsaturated fatty acids. At present, other central nervous system (CNS) has also been interaggregated with the immune system Modulate the inflammatory response. This communication acts through the vagus nerve, which releases acetylcholine that will act via the nicotinic 'alpha'-7 receptor in cells such as macrophages. Considering that the inflammatory response is an essential part of the tissue repair process and that DHA ingestion can affect wound healing, our objectives are to evaluate the effects of DHA in the healing process by investigating the anti-inflammatory route Cholinergic. To do so, we administered DHA rich oil to C57 black / 6 mice for 4 weeks. After this period, we performed the wounds on the animals and evaluated the cellularity of the wound tissue; We followed the closing of the same ones; We quantified IL-1, TNF, sIL-6R, IL-6 and IL-10 cytokines in the tissue; The CXCL1 / KC and CXCL2 / MIP chemokines and the VEGF growth factor. We also followed the wounds performed on the acetylcholine vesicular transporter (VAChT) knockdown mice. And, we stimulated the animals with agonist of the cholinergic anti-inflammatory route (PNU282978) and nicotine. We observed increased CD45 + F4 / 80 + CD206 + macrophages and delayed closure of the DHA group wounds in relation to the control. As in the VAChTKD group in relation to the control (WT). In addition, the DHA group showed a significant increase of TNF-'alpha' at 3 and 7 days after the wound. DHA-rich oil reduced IL-10 and VEGF concentrations in the scar tissue in the presence of PNU282987 and reduced the phosphorylation of STAT3 after nicotinic stimulation. However, there were no differences in nicotinic 'alpha'-7 receptor expression and total STAT3. DHA did not alter the enzymatic activity of acetylcholinesterase. Considering these results, we can conclude that DHA through its anti-inflammatory effects attenuates the inflammatory phase of healing and delays wound closure. The results suggest that there is influence of the cholinergic anti-inflammatory pathway on healing and that DHA seems to negatively influence this signaling pathway Mestrado Nutrição Mestra em Ciências da Nutrição e do Esporte e Metabolismo FAPESP

Orientador: Maria Helena de Melo Lima Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Enfermagem Resumo: O reparo de feridas é um processo biológico complexo e dinâmico, envolvendo as fases hemostasia, inflamatória, proliferativa e remodelagem. Na presença do diabetes mellitus esse processo de cicatrização torna-se limitado. Estudos mostram que a membrana de quitosana e alginato modula a fase inflamatória, estimula a proliferação de fibroblastos e de fibras colágenas, acelerando o processo de cicatrização em animais saudáveis. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito do tratamento tópico com a membrana de quitosana e alginato por meio marcadores inflamatórios, fibras colágenas em lesões de camundongos diabéticos induzidos com estreptozotocina. O estudo foi composto pelos grupos: CAM (Chitosan and Alginete Membrane), animais tratados com membrana de quitosana e alginato previamente umedecidos com salina 0,9% e o CG (Control Group), animais tratados apenas com solução salina 0,9%. As feridas de ambos os grupos foram umedecidas diariamente com soro fisiológico 0,9% até completa cicatrização. Ao longo de 10 dias as feridas foram avaliadas pelos parâmetros: período de fechamento, histologia, fibras colágenas e concentração de citocinas pró e anti-inflamatórias. Para o cálculo das dimensões das feridas e concentração de proteínas foi utilizado o software IBM SPSS Statistics 20, sendo os grupos comparados utilizando o teste de t de Student com nível de significância de p

Orientador: Licio Augusto Velloso Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: A inflamação hipotalâmica induzida pela dieta é um importante mecanismo que leva à disfunção dos neurônios envolvidos no controle da ingestão alimentar e do gasto energético. Várias abordagens farmacológicas e genéticas que reduzem a inflamação no hipotálamo foram utilizadas com sucesso para atenuar os fenótipos obesos e metabólicos associados com o consumo excessivo da gorduras dietéticas. Estudos recentes revelaram que os ácidos graxos poli-insaturados, também podem reduzir a inflamação hipotalâmica. Neste estudo avaliamos a presença e a função da RvD2, uma resolvina produzida a partir do ácido docosahexaenóico, no hipotálamo de camundongos obesos. Todas as enzimas envolvidas na síntese da RvD2 foram detectadas no hipotálamo e foram moduladas em resposta ao consumo de uma dieta rica em gordura, conduzindo a uma redução da RvD2 hipotalâmica. GPR18, o receptor da RvD2, presente em neurônios NPY e POMC, também foi modulado pela gordura dietética. A substituição dietética de ácidos graxos saturados por poli-insaturados resultou num aumento da RvD2 hipotalâmica que foi acompanhada por uma redução da massa corporal e melhor tolerância à glicose. Além disso, o tratamento com ácido docosahexaenóico intracerebroventricular resultou num aumento da expressão das enzimas que sintetizam a RvD2, no aumento da expressão de citocinas anti-inflamatórias e no fenótipo metabólico melhorado. Finalmente, o tratamento com a RvD2 exógena intracerebroventricular resultou em uma redução da adiposidade, melhor tolerância à glicose e aumento da expressão hipotalâmica de citocinas anti-inflamatórias. Em conclusão, a RvD2 é produzida no hipotálamo de camundongos e tanto as enzimas que a biossintetizam quanto o seu receptor são modulados pela gordura dietética. A melhora do perfil metabólico sistémico induzido pela RvD2 exógena coloca essa substância como uma abordagem atraente para tratar a obesidade e suas comorbidades Abstract: Diet-induced hypothalamic inflammation has emerged as an important mechanism leading to the dysfunction of neurons involved in the control of food intake and energy expenditure. A number of pharmacological and genetic approaches that reduce inflammation in the hypothalamus can attenuate the obese and metabolic phenotypes associated with the excessive consumption of dietary fats. Recent studies have shown that polyunsaturated fatty acids can also reduce hypothalamic inflammation. Here, we evaluated the presence and function of RvD2, a resolvin produced from docosahexaenoic acid, in the hypothalamus of obese mice. All enzymes involved in the synthesis of RvD2 were detected in the hypothalamus and were modulated in response to the consumption of dietary fat leading to a reduction of hypothalamic RvD2. GPR18, the receptor for RvD2, which was detected in POMC and NPY neurons, was also modulated by dietary fat. The substitution of saturated by polyunsaturated fatty acids in the diet resulted in increased hypothalamic RvD2, which was accompanied by reduced body mass and improved glucose tolerance. In addition, the intracerebroventricular treatment with docosahexaenoic acid resulted in increased expression of the RvD2 synthetic enzymes, increased expression of anti-inflammatory cytokines and improved metabolic phenotype. Finally, the intracerebroventricular treatment with exogenous RvD2 resulted in reduced adiposity, improved glucose tolerance and increased hypothalamic expression of anti-inflammatory cytokines. In conclusion, RvD2 is produced in the hypothalamus and its receptor and synthetic enzymes are modulated by dietary fat. The improved metabolic outcomes of exogenous RvD2, places this substance as an attractive approach to treat obesity and its comorbidities Doutorado Fisiopatologia Médica Doutora em Ciências FAPESP 2011 50011-3

Orientadores: Adriana Souza Torsoni, Fernando Moreira Simabuco Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Aplicadas Resumo: A obesidade tem adquirido características de epidemia e os mesmos números que indicam o aumento da obesidade também apontam um aumento significante de indivíduos portadores de diabetes mellitus tipo 2. Sabe-se atualmente que ambas as patologias apresentam uma resposta metabólica característica, que leva a uma alteração em vias de sinalização intracelulares e na homeostase da glicose. O uso de dieta hiperlipídica (DH) é responsável pelo aumento da massa adiposa, que entre outros fatores, leva a um aumento na produção de citocinas pró-inflamatórias. Vários estudos apontam para a participação de macrófagos nesse processo. A via não-canônica de sinalização de NF-?B contribui para o quadro de inflamação e pode representar uma via chave na resposta metabólica à obesidade, especialmente na resistência à insulina. Nosso intuito foi avaliar se a sobrecarga nutricional induziria polarização macrofágica em tecidos metabólicos, ocasionando aumento na expressão de genes que codificam citocinas pró-inflamatórias, induzindo não somente o quadro inflamatório, mas a resistência ao sinal da insulina em hepatócitos. Para isso, macrófagos de camundongo (RAW 264.7) foram submetidos ao bloqueio de NIK por siRNA, desafiados com palmitato e, posteriormente, o meio condicionado proveniente destas células foi adicionado como meio de manutenção em células de hepatoma de camundongo (Hepa1c1c7). Os resultados mostraram que o palmitato é capaz de induzir uma resposta inflamatória em macrófagos ocasionando resistência ao sinal da insulina em hepatócitos, por intermédio da ativação de NIK, através da degradação de TRAF-3 em células imunes. Ao bloquear NIK em células RAW 264.7 o quadro inflamatório foi reduzido, mesmo após exposição ao palmitato, e o quadro de resistência ao sinal da insulina em hepatócitos tratados com o meio condicionado de macrófagos foi amenizado. O estudo sugere uma comunicação entre hepatócitos e macrófagos residentes no fígado no desenvolvimento da resistência à insulina por intermédio da via não-canônica de NF-?B Abstract: The obesity has acquired epidemic characteristics and the same numbers that indicate the increase in obesity also showed a significant increase in individuals with diabetes mellitus type 2. It is now known that both diseases exhibit a metabolic response characteristic, which leads to changes in intracellular signaling pathways and glucose homeostasis. High fat diet (HFD) consumption is responsible for the increased fat mass leading to an increased production of pro-inflammatory cytokines. Several studies indicate the involvement of macrophages in this process. The non-canonical NF-?B pathway contributes to the pro-inflammatory signaling activation, and may represent a key metabolic pathway in response to obesity, especially in insulin resistance. Our aim was to evaluate if the nutritional overload trigger macrophage polarization in metabolic tissues, resulting in an increase in the gene expression of proinflammatory cytokines, inducing not only the inflammatory condition, but the resistance to the insulin signal in hepatocytes. Mouse macrophage cell line (RAW 264.7) were treated with NIK siRNA, and challenged with palmitate. Macrophage-conditioned medium was used to treat hepatocytes (Hepa1c1c7). Our results showed that palmitate was able to induce an inflammatory response in macrophages leading to insulin resistance in hepatocytes, through NIK activation by TRAF-3 degradation in immune cells. NIK knockdown in macrophages reduced the pro-inflammatory profile induced by palmitate treatment, and ameliorated insulin resistance in hepatocytes treated with macrophage-conditioned medium. Therefore, the present study suggests the communication between hepatocytes and macrophages in the liver on development of insulin resistance through non-canonical NF-kB pathway Mestrado Metabolismo e Biologia Molecular Mestra em Ciências da Nutrição e do Esporte e Metabolismo FAPESP 2013/23072-7 CNPQ