Search

Mezcal is an alcoholic beverage produced only in selected regions of Mexico under appellation of origin status from the Word Intellectual Property Organization. While it has been produced in Mexico for many centuries, mezcal’s appellation of origin was only granted in 1995. Therefore efforts to produce and market it as a premium product have a relatively short history. This case study examines developments in the production and marketing of this unique product, and the activities of the marketing cooperative El Tecuán in Guerrero State in this process.

This case study focuses on the history of Cargill Hybrid Seeds Mexico, its position in the industry and the manner in which it had grown throughout time. Details on product, facility and personnel decisions give a feel for how the company was managed and how it succeeded in growing rapidly in the 1990s. The purpose of this case study is to provide an in-depth look into the Mexican Seed industry, with a particular focus on Cargill Seeds Mexico prior to its takeover by Monsanto. Additionally, the case study allows for the discussion of how to successfully merge similar companies, in this case, three companies that are accustomed to being competitors in the market. A discussion focusing on unique human resource difficulties that come from such a merger a setup.

Background: The cytomeglovirus infection is among the most feared complications in patients with immunological immaturity (preterm) and immunosuppressed (patients with bone marrow transplantation). The antigenemia or the polymerase chain reaction (PCR) tests have been routinely used for the detection of CMV in immunosuppressed patients. However, using these techniques for the diagnosis of active CMV infection in preterm infants has been limited because the vascular access is difficult. For this reason, it has turned to alternative samples such as blood collection in filter paper cards (Guthrie card). Furthermore, it has been proposed that the characterization of the surface proteins, such as gB is necessary because, apparently the presence of a particular genotype and the presence of genotype mixtures, in the same patient can affect the development of the syndrome caused by CMV. Objective: The aim of this work was to identify and characterize active CMV infection in preterm patients and pediatric patients with bone marrow transplantation. Methods: It was evaluated 271 samples of saliva and 2171 preserved blood in Guthrie cards of preterm infants (RNP) obtained from the Hospital de la Mujer of Mexico City. Real time PCR (PCR-TR) and n-PCR was performed in DNA extracted from Guthrie cards, besides of n-PCR of saliva, and as a gold standard infection with CMV in cell culture. It was used also a nested multiplex PCR to determine the distribution of CMV genotypes in 30 mexican patients who underwent bone marrow transplantation from the Hospital Infantil de México Federico Gómez and Centro Médico Nacional La Raza, IMSS from Mexico City. Results: We evaluated 271 blood samples from Guthrie cards and 271 saliva samples for the presence of CMV. Only 3.69% were positive in culture of saliva, 4.05% were positive by n-PCR in Guthrie cards, 4.05% were positive by RT-PCR in Guthrie cards and 1.10% were positive by n-PCR in saliva. The sensitivity (S) of n-PCR and RT-PCR on Guthrie Cards were 100%, specificity (E) 99%, positive predictive value (PPV) of 90% and negative predictive value (NPV) 100%. The results in n-PCR in saliva were: S of 30%, E 99%, PPV 75% and NPV 97%. Congenital infection with CMV in RNP does not represent a risk to the RNP as none of the RNP detected with congenital CMV infection presented symptoms; the presence of infection in these RNP did not influence their anthropometric characteristics and initial evaluation. The genotypes found in the patients with bone marrow transplantation were: gB1, 9/30 (30%); gB2, 8/30 (27%); gB3, 4/30 (13%), y gB4, 1/30 (3%); mixed genotypes were found in 8/30 patients (27%). Conclusions: The sensitivity in PCR or RT-PCR Guthrie cards was 100%. No relationship was found between viral load and symptoms since no subject had symptomatic infection. The predominant genotypes in our population were gB2 and GB1. It was found a high proportion of mixed genotypes. La infección por Citomegalovirus (CMV) es una de las patologías de mayor riesgo en los pacientes con inmadurez inmunológica (recién nacidos prematuros) e inmunosuprimidos (pacientes con trasplante de médula ósea). La glicoproteína B de superficie (gB), y la presencia de uno o más genotipos, puede influir en el desarrollo de la enfermedad. La antigenemia o reacción en cadena de la polimerasa (PCR) a partir de sangre, se ha usado rutinariamente para la detección de CMV en pacientes inmunosuprimidos. El uso de estas técnicas para diagnosticar CMV en recién nacidos prematuros ha sido limitado debido al difícil acceso vascular. El empleo de sangre absorbida en tarjetas de papel filtro (tarjeta de Guthrie) es una buena alternativa por la cantidad de muestra que se utiliza. Objetivo: Identificar y caracterizar la infección activa por CMV en pacientes recién nacidos prematuros y pacientes pediátricos con trasplante de medula ósea. Material y Métodos: Se tomaron 271 muestras de saliva y 271 de sangre conservadas en tarjetas Guthrie, de 271 recién nacidos prematuros del Hospital de la Mujer, en la Ciudad de México D.F. Se realizó n-PCR y PCR en tiempo real (PCRTR) en ADN extraído de tarjetas Guthrie, además de n-PCR de saliva, y como estándar de oro, infección en cultivos celulares para detección de CMV. Se utilizó un PCR multiplex anidado para determinar los genotipos de la glicoproteína de CMV gB en 30 pacientes pediátricos mexicanos con trasplante de médula ósea del Hospital Infantil de México Federico Gómez, del Centro Médico Nacional La Raza, y del IMSS, en la Ciudad de México. Resultados: Se evaluaron 271 muestras de sangre en tarjetas Guthrie y 271 muestras de saliva para la presencia de CMV. El 3.69% de éstas, resultó positivo al cultivo de saliva, el 4.05% positivas en n-PCR en tarjetas Guthrie, 4.05% positivas para PCR-TR en tarjetas de Guthrie y 1.10% positivas para n-PCR en saliva. La sensibilidad (S) de n-PCR y PCR-TR en tarjetas Guthrie fue de 100%, la especificidad (E) 99%, el valor predictivo positivo (VPP) de 90% y valor predictivo negativo (VPN) 100%. En la n-PCR en saliva, S del 30%, E del 99%, VPP del 75% y VPN del 97%. Ninguno presentó infección sintomática. Los genotipos en los pacientes trasplantados con medula ósea fueron: gB1, 9/30 (30%); gB2, 8/30 (27%); gB3, 4/30 (13%), y gB4, 1/30 (3%); se encontraron genotipos mezclados en 8/30 pacientes (27%). Conclusiones: La sensibilidad en PCR o PCR-TR de las tarjetas Guthrie fue de 100%. No se determinó relación entre la carga viral y sintomatología ya que ningún paciente presentó infección sintomática. Los genotipos predominantes en nuestra población fueron gB2 y gB1. Se encontró una alta proporción de genotipos mezclados.

Las balsas lipídicas son microdominios de la membrana plasmática ricos en colesterol y esfingolípidos, además de proteínas que tienen tanto funciones estructurales como funciones en el reconocimiento celular y transducción de señales. En la membrana de espermatozoides de diferentes especies se han encontrado balsas lipídicas. Por otro lado se ha tratado de criopreservar espermatozoides de cerdo, resultando en baja eficiencia. El objetivo de este trabajo fue estudiar la composición de las proteínas de balsas lipídicas en espermatozoides de cerdo criopreservados, por medio de electroforesis en geles de poliacrilamida, tanto unidimensional como bidimensional; se encontró una disminución en la concentración total de proteínas en los espermatozoides de cerdo criopreservados, además de un cambio en los patrones electroforéticos en ambos casos.

The process of fertilization is characterized by a series of events that occur in both the oocyte and the sperm, which lead to the formation of the zygote and ends with the formation of a new individual. Sperm must undergo a series of molecular events, called capacitation globally. This process involves the reorganization of lipids and proteins, changes in ion permeability and phosphorylation of many proteins and a reorganization of the plasma membrane domains called lipid rafts, cholesterol and loss of plasma membrane not that rafts. During cryopreservation sperm fertilizing capacity decrease there has been linked to alterations in the plasma membrane. Boar sperm have, to date, the greatest difficulty in preserving. This effect has been related to the lipid composition of the plasma membrane. Only 2.5% of cryopreserved sperm retain their full functionality (viability, motility, morphology and fertilizing capacity). The aim of this study was to determine the effect of cryopreservation on the distribution of lipid rafts and cholesterol concentration in the membrane of boar sperm. To determine the changes that occur in the distribution of lipid rafts of boar spermatozoa undergo cryopreservation, the cholera toxin bound to fluorescein (CTX-FTC), a marker of GM1, glucose that is coupled to the lipid rafts used, comparing the samples before and cryopreserved sperm that were trained in vitro. Finding three fluorescence patterns: A: flagellum and head, B: Fluorescence labeled weak in the head but in the flagellum and C: fluorescence in the acrosomal region and postacrosomal and absence in the flagellum. Sperm non-capacitatedA 88.7%, B 6.3% and C 5%; capacitated A 5.5%, B 22.7% and C 71.8%; cryopreserved A 57.8%, B 13.9% and C 17.1%. Analysis of concentration of plasma membrane cholesterol using the Amplex Red kit, 183.6 µg/ml were found in non-capacitated sperm, 147.6 µg/ml in capacitated sperm, while in the cryopreserved group of cholesterol is only found in the middle freezing 487.9 µg/ml. The cryopreservation damages the sperm plasma membrane, causing a slight increase in lipid rafts migration towards the sperm head and the loss of plasma membrane cholesterol, increasing the capacitated sperm. More studies are needed that complement our results by determining the difference in mobility using a computerized system, which would provide a more objective analysis; RA evaluate training and chlortetracycline and assays with Coomassie to determine whether the value of the position of the lipid rafts, performed here by tracking GM1, correlates with these processes and quantifying cholesterol in isolated lipid rafts, to determine is the proportion that is anchored to them. El proceso de fertilización se caracteriza por una serie de eventos que ocurren tanto en el ovocito como en el espermatozoide, que conducen a la formación del cigoto y finaliza con la formación de un nuevo individuo. Los espermatozoides deben pasar por una serie de eventos moleculares, llamados globalmente capacitación. Este proceso involucra el reordenamiento de lípidos y proteínas, cambios en la permeabilidad de iones y la fosforilación de muchas proteínas, así como, la pérdida de colesterol que provoca la reorganización de las balsas lipídicas. Durante la criopreservación, los espermatozoides disminuyen su capacidad fertilizante, esto se ha relacionado con alteraciones en la membrana plasmática. Los espermatozoides de cerdo presentan, hasta la fecha, la mayor dificultad en preservarse. Este efecto se ha relacionado con la composición lipídica de la membrana plasmática. Solo el 2.5 % de los espermatozoides criopreservados conservan su funcionalidad completa (viabilidad, movilidad, morfología y capacidad de fertilización). El objetivo de este trabajo fue determinar el efecto de la criopreservación sobre la distribución de las balsas lipídicas y sobre la concentración de colesterol en la membranade espermatozoides de cerdo. Para determinar los cambios que se presentan en la distribución de balsas lipídicas de espermatozoides de cerdo sometidos a criopreservación, se utilizó la toxina de cólera unido a fluoresceína (CTX-FTC), como marcador del GM1, glucósido que se encuentra acoplado a las balsas lipídicas, comparándolos con las muestras antes de ser criopreservadas y con espermatozoides que se capacitaron in vitro. Encontrándose 5 patrones de distribución de fluorescencia: A: en flagelo y cabeza, B:intensa en la cabeza pero débil en el flagelo, B1: intensa en la cabeza destacando un anillo semicircular y débil en el flagelo, C:intensa en la cabezay D: en la región post-acrosomal de la cabeza y pieza intermedia del flagelo. Las medias para el porcentaje de los patrones encontrados en espermatozoides no capacitados fueron A el 88.7, B el 6.3 y C 5; capacitadosin vitro A el 5.5, B el 22.7 y C 71.8; criopreservados A el57.8, B el 13.9, B1 el 1.7, C el 17.1 y D 9.5. Del análisis de concentración de colesterol de la membrana plasmática utilizando el kit Amplex Red, se encontraron 183.6 µg/ml en espermatozoides no capacitados,147.6 µg/ml en espermatozoides capacitados (p˂0.005), mientras que en el grupo de criopreservados el colesterol solo se encontró en el medio de congelación 487.9 µg/ml. El proceso de criopreservación daña la membrana plasmática de los espermatozoides, provocando la migración de las balsas lipídicas hacia la cabeza del espermatozoide y causa una pérdida importante de colesterol de la membrana plasmática, incrementando enlos espermatozoides capacitados. Sin embargo se requieren otros estudios complementarios tales como análisis de movilidad asistido por computadora, ensayos de reacción acrosomaly cuantificar decolesterol en balsas lipídicas aisladas.

El análisis de varianza revela la diferencia estadísticamente significativa del modelo lineal corregido (p

Phytoestrogens are non-steroidal compounds found in plants that are structurally or functionally similar to estradiol, so their mechanism of action is through their receptors. Isoflavones genistein and daidzein are phytoestrogens that are found in significant amounts in infant formulas based on soy, which have become popular during the past 50 years due to the increasing number of lactose intolerant babies. The intake of these phytoestrogens has led to numerous studies with controversial results, in some of them the possible effects on reproductive parameters in the critical stages of the neonatal development of males have been demonstrated, since they can affect the sexual differentiation of the brain, of the endocrine system, of the gonads and, ultimately, fertility during adulthood. In the present study, the effects of the daily administration of phytoestrogens Genistein and Daidzein (G / D) were analyzed in two doses (A= 6.8 mg/Kg; B= 9.4 mg/Kg), in similar proportions to those found in dairy formulas based on soy (but maintaining the same proportion Genistein 64%, Daidzein 36%) in the male neonatal stage, assessing its effects on behavioral and reproductive parameters in the adult stage. The results on olfactory behavior indicate that both concentrations of G/D index the loss of the ability to recognize the urine of females in estrus. Similarly, there are effects of both concentrations of G/D on male sexual behavior, since changes were observed in both the display and achievement of the sexual behavior, particularly both concentrations significantly decrease the total number of ejaculations and the dose “A” the Hit rate. The administration of G/D induces changes un the behavior of aggression, although in the opposite way for the dose studied; while dose “A” induces offensive behaviors, with dose “B” defensive behaviors are observed. As for the seminal parameters, the dose “A” decreases the concentration and viability of the sperm, while both concentrations increase the number of immature spermatozoa. The strongest results were observed in fertility parameters, where dose “A” generated a dramatic decrease in the number of pregnant females, as well as in the number of offspring. These results should be verified with a greater number of experiments. In general, is it shown that neonatal administration of G/D causes significant changes in the behavioral and reproductive parameters of male rats. Los fitoestrógenos son compuestos no esteroideos encontrados en plantas que estructural o funcionalmente son similares al estradiol, por lo que su mecanismo de acción es a través de sus receptores. Las isoflavonas Genisteína y Daidzeína son fitoestrógenos que se encuentran en cantidades significativas en las fórmulas infantiles a base de soya, las cuales se han popularizado durante los últimos 50 años debido al creciente número de bebés intolerantes a la lactosa. La ingesta de estos fitoestrógenos ha propiciado numerosos estudios con resultados controversiales, en algunos de ellos se ha demostrado los posibles efectos sobre parámetros reproductivos en las etapas críticas del desarrollo neonatal de machos, ya que pueden afectar la diferenciación sexual cerebral, del sistema endócrino, de las gónadas y, en última instancia, la fertilidad durante su adultez. En el presente estudio se analizaron los efectos de la administración simultánea y diaria de los fitoestrógenos Genisteína y Daidzeína (G/D), en dos dosis (A= 6.8 mg/Kg y B= 9.4 mg/Kg), que tenían concentraciones semejantes a las encontradas en las fórmulas lácteas a base de soya (pero manteniendo la misma proporción de 64% de Genisteína y 36% de Daidzeína) en la etapa neonatal masculina, valorando sus efectos sobre parámetros conductuales y reproductivos en la etapa adulta. Los resultados sobre conducta olfatoria señalan que ambas concentraciones de G/D inducen la pérdida de la capacidad de reconocer la orina de hembras en estro. De igual manera, se presentan efectos de ambas concentraciones de G/D sobre la conducta sexual masculina (CSM), ya que se observaron cambios tanto en el despliegue como la ejecución de la CSM, particularmente ambas concentraciones disminuyen significativamente el número total de eyaculaciones y la dosis “A” disminuyó la Tasa de Aciertos (Hit Rate). La administración de G/D induce cambios sobre la conducta de agresión, aunque de manera opuesta para las dosis estudiadas; mientras que la dosis “A” induce conductas ofensivas, con la dosis “B” produce conductas defensivas. En cuanto a los parámetros seminales, la dosis “A” disminuye la concentración y viabilidad de los espermatozoides, mientras que ambas dosis incrementan el número de espermatozoides inmaduros. Los resultados más contundentes se observaron en los parámetros de fertilidad, donde la dosis “A” generó una disminución dramática en el número de hembras gestantes, así como en el número de crías. Estos resultados deben ser comprobados con un mayor número de experimentos. En general, se demuestra que la administración neonatal de G/D ocasionaron cambios importantes en los parámetros conductuales y reproductivos de las ratas macho.

En la evaluación de medios se encontró que el TBMm tuvo un 53% de FIV mientras que en TALP-HEPES se obtiene un 47% de FIV sin determinarse diferencias. Para el lavado de la muestra se obtuvo un 53% de FIV en espermatozoides sin un lavado adicional mientras que los que si fueron lavados el porcentaje de FIV fue del 0%. Para la evaluación de la FIV con las diferentes concentraciones de GSH se obtuvo en la concentración de 0.5, 1 y 5 mM un porcentaje del 42, 56 y 0% respectivamente de FIV obteniendo porcentajes más altos en la concentración de 1 mM. Y finalmente para la coincubación de gametos con las diferentes concentraciones de GSH se obtuvo en la concentración de 0.5, 1 y 5 mM un porcentaje del 54, 39 y 4% respectivamente de FIV obteniendo porcentajes más altos en 0.5 sin embrago la concentración de 1 mM no muestra diferencias. Este trabajo tuvo diversas dificultado sin embargo se obtuvieron resultados importantes que pueden conducir hacia estudios más minuciosos del proceso de oxido-reducción durante la CE. Palabras clave: glutatión, capacitación espermática, fertilización in vitro, especies reactivas del oxígeno. Para la metodología primero se realizó un análisis seminal de la muestra de semen evaluando viabilidad, concentración morfología y movilidad. posteriormente se realizó la CE, para ello se tomó 5 mL de muestra y fue diluida y lavada en DPBS, posteriormente fue colocada en medio capacitante e incubados por 2 y 4h con las diferentes concentraciones de GSH a evaluar (0, 0.5, 1 y 5 mM). Para la maduración de ovocitos, se puncionaron ovarios de cerdas pre-puberes colectando los ovocitos, estos fueron colocados en medio de maduración e incubados por 44h. Finalmente para la fertilización, los ovocitos madurados se desnudaron para su inseminación con espermatozoides previamente capacitados y determinando diferentes parámetros como: tiempo de CE y coincubación, medio de fertilización: TBMm y TALP-HEPES, evaluar la FIV con las diferentes concentraciones de GSH (0, 0.5, 1 y 5 mM) y finalmente la coincubación de ambos gametos en GSH lavado de espermatozoides. Para la evaluación del tiempo de CE y coincubación se encontró que a 2h de CE más 4h de coincubación se obtiene un porcentaje entre el 50 al 60% de FIV a diferencia de 4 h de CE y 2h de coincubación donde el porcentaje fue del 0%. En las TRA que buscan conservar la calidad espermática se ha utilizado el GSH como antioxidante, intentando alargar la vida útil del gameto masculino. A pesar de que las ERO generan un daño celular, también es claro que juegan un papel fisiológico importante en el espermatozoide durante la CE lo que a su vez afecta la fertilización. Por ello es necesario mantener un determinado balance tanto de antioxidantes como oxidantes para que la CE se lleva a cabo de forma correcta. El objetivo del siguiente trabajo fue determinar si al adicionar diferentes concentraciones de GSH durante la capacitación espermática se modifica la fertilización in vitro de ovocitos porcinos. Durante la CE, se ha demostrado el papel relevante del GSH, reportando que a concentraciones de 1 mM se obtiene un porcentaje adecuado de espermatozoides capacitados, mientras que, a otras concentraciones, el proceso de capacitación se ve afectado; esto nos permite suponer que el GSH es un importante regulador de la CE, por lo que es importante analizar, si la concentración de GSH administrada durante la capacitación, puede modificar la FIV.

La presencia de los carbohidratos N-acetil glucosamina y/o ácido siálico durante el mes de septiembre, se observó particularmente a nivel post-acrosomal, distribuyéndose a todo el espermatozoide a finales de octubre. La cuantificación de estos azúcares realizada con apoyo de citometría de flujo, indicó que, la unión con WGA-FITC disminuye en los espermatozoides obtenidos de la región caudal conforme transcurre el tiempo de almacenamiento. Aun cuando la microscopia de fluorescencia no nos permitió observar la presencia de fucosa en espermatozoides de ninguna de las tres regiones epididimarias, por citometría de flujo se encontró que la cantidad de este azúcar es mayor en el corpus en comparación con la cuada durante el mes de septiembre; de forma similar, se encontró una mayor fluorescencia de concanavalina A por unión a manosa en espermatozoides obtenidos del corpus del epidídimo entre finales de septiembre y principios de octubre. Durante el análisis por microscopía, se observó que la distribución de manosa en los espermatozoides de las tres regiones epididimarias, de encontrarse en toda la célula durante el mes de septiembre, finalmente se localiza hacia la región sub-acrosomal al termino del estudio. Las evidencias bioquímicas obtenidas en el presente estudio nos permiten concluir que, el proceso de maduración de los espermatozoides de C. mexicanus culmina en la región caudal del epidídimo, probablemente como resultado estratégico del almacenamiento prolongado de espermatozoides, fenómeno directamente relacionado con el patrón reproductivo asincrónico de los machos de esta especie. La maduración epididimaria de los espermatozoides, comprende una serie de eventos morfológicos y bioquímicos que modifican secuencialmente al espermatozoide durante su tránsito a lo largo del túbulo epididimario, que les confiere las características necesarias para poder realizar la fertilización del óvulo. Se considera que, en la mayoría de los mamíferos estudiados, la maduración finaliza en la parte distal del corpus del epidídimo, culminando antes de la entrada de los espermatozoides a la región caudal. El murciélago vespertiliónido, Corynorhinus mexicanus presenta un patrón reproductivo temporalmente asincrónico, donde la producción de espermatozoides se encuentra desfasada varios meses de la temporada de cópula, observándose la completa involución del testículo al momento en que los espermatozoides ingresan al túbulo epididimario, lo que implica un largo periodo de almacenamiento espermático en la región caudal. En este quiróptero hay evidencias histológicas y fisiológicas, que indican que el proceso de maduración de espermatozoides epididimarios requiere un tiempo inusualmente más largo en comparación con el reportado para el resto de los mamíferos, terminando en la región caudal del epidídimo, y parece estar relacionado con el tiempo en que los espermatozoides permanecen almacenados, particularmente para nuestro grupo de investigación, es de gran interés conocer las modificaciones postraduccionales como la fosforilación de tirosinas y distribución de carbohidratos en la membrana de los espermatozoide durante su tránsito por el epidídimo en el murciélago estacional C. mexicanus. El objetivo de la presente investigación fue determinar si en el murciélago C. mexicanus, la maduración espermática termina en la viii región caudal del epidídimo, mediante el uso de pruebas bioquímicas como son: la fosforilación de tirosina y el análisis de la distribución de carbohidratos. Se observó que el paso de los espermatozoides de C. mexicanus es rápido a diferencia de lo reportado en otras especies de mamíferos con patrón reproductivo estacional, encontrándose en promedio 200 x 106 células en la cauda vs 20 x 106 células en el caput. Para corroborar el estatus funcional de las células se determinó el porcentaje de células móviles una vez realizada la extracción de espermatozoides de cada una de las regiones del epidídimo (caput, corpus y cauda), registrando que aproximadamente el 90% de los gametos obtenidos de la cauda eran móviles. Para conocer el grado de maduración de los espermatozoides, se determinó in vitro el potencial para capacitarse y llevar a cabo la reacción acrosomal. Fue notorio que los espermatozoides obtenidos de la región caudal y con un mes de almacenamiento (segunda quincena de septiembre) presentaron un aumento en el porcentaje de capacitación (40%), así como un incremento en la fosforilación de tirosinas.

El espermatozoide es una célula haploide cuya función es fertilizar al ovocito para la formación del cigoto. El espermatozoide se capacita en el tracto femenino en donde adquiere el potencial de fertilizar el óvulo. Para esto, requiere llevar a cabo la reacción acrosomal (RA) que permite la liberación de enzimas útiles para la degradación de la zona pelúcida y así poder penetrar al óvulo. Se ha observado que la exposición a agentes tóxicos afecta la movilidad y la capacidad para llevar a cabo la RA ya que los gametos son células muy susceptibles a xenobióticos. Los compuestos perfluorados (PFCs, por sus siglas en inglés) son hidrocarburos de 5 a 9 átomos de carbono, se caracterizan por ser anfipáticos y tienen un amplio uso comercial; se pueden encontrar en ropa, detergentes, champú, teflón de utensilios de cocina, alfombras, productos de cuero, alimentos y hasta en el agua potable. Estudios en animales y humanos sugieren que existe una asociación entre los PFCs y las funciones reproductivas, sin embargo, el mecanismo por el cual sucede esta asociación es aún desconocido. También existe evidencia importante sobre la acumulación de compuestos perfluorados en animales y humanos. Los PFCs que se producen más son el sulfonato de perfluorooctano (PFOS), el ácido perfluorooctanoico (PFOA), el sulfonato de perfluorohexano (PFHxS), así como el ácido perfluorononanoico (PFNA). Los PFCs como PFOS y PFHxS se caracterizan por tener un potencial de acumulación alto uniéndose a proteínas séricas. El espermatozoide tiene un alto contenido de ácidos grasos poliinsaturados, por lo que es sensible al daño oxidante, el cual es producido principalmente por Especies vii Reactivas de Oxígeno (EROS). No existe mucha información acerca de PFHxS hoy en día pero se ha asociado con una disminución del colesterol y disminución de peso en ratas, se ha enlistado junto con otros perfluorados como un contaminante orgánico persistente. El presente estudio tuvo como objetivo conocer el efecto de los compuestos perfluorados PFHxS y PFOS, en la capacitación y RA de espermatozoides de cerdo in vitro, así como los niveles de EROS intracelular. La capacitación, RA, movilidad, formación de aglutinados y niveles de EROS no fueron modificados en espermatozoides que fueron expuestos a PFHxS. Sin embargo, la capacitación, RA, movilidad y niveles de EROS disminuyeron en espermatozoides que fueron expuestos a PFOS; por el contrario, hubo un incremento en la formación de aglutinados. The sperm is a haploid cell whose function is to fertilize the ovule for the formation of zygote. Sperm carries out the capacitation in the female tract where it acquires the capacity to fertilize the ovule. Requires carrying out the acrosomal reaction (AR) which allows the release of enzymes useful for degradation of the pellucid zone and thus be able to penetrate the oocyte. It has been observed to exposure to different toxic agents affects the motility and ability to carry out the AR since the gametes are very susceptible to several types of xenobiotics. The perfluorinated compounds (PFCs) are hydrocarbons of 5 to 9 carbon atoms and are characterized by being amphipatic and have wide commercial use, can be found in clothing, detergents, shampoo, Teflon cookware, carpets, leather products, food and even drinking water. Studies in animals and humans have suggested that there is an association between PFCs and reproductive functions, however, the mechanism by which this association happens is still unknown. There is also important evidence on the accumulation of PFCs in animals and humans. The PFCs of greater production are perfluorooctanesulfonic acid (PFOS), perfluorooctanoic acid (PFOA), perfluorohexane sulfonate (PFHxS) and perfluorononanoic acid (PFNA). The PFCs like PFOS and PFHxS are characterized by their high potential for accumulation after absorption by binding to serum proteins. The sperm has a high content of fatty acids so it is sensitive to oxidative damage by which is mainly produced by EROS. Not much is known about PFHxS today, but it has been associated with a decrease in cholesterol and weight loss in rats, has been listed along with other toxics as a persistent organic ix pollutant. The present study aims to know the effect of the perfluorinated compounds PFHxS y PFOS, in the capacitation and acrosomal reaction of pig sperm in vitro, as well as the levels of intracellular EROS. The capacitation, AR, motility, formation of agglutinations and EROS levels were not modified in sperm that were exposed to PFHxS. Althought the capacitation, AR, motility and EROS level decreased in spermatozoa that were exposed to PFOS; on the other hand, there was an increase in the formation of agglutinated spermatozoa rosettes as the concentration of PFOS increased, which affected its progressive motility.

El éxito de la inyección intracitoplasmática del espermatozoide (ICSI) está restringido por falta de activación del ovocito y falla en la descondensación de la cabeza espermática, ocasionando baja formación del pronúcleo (PN) masculino. Para mejorar los resultados obtenidos por la ICSI, es necesaria una adecuada activación del ovocito y selección espermática. El objetivo del presente estudio fue determinar la eficiencia de la fertilización usando ICSI con activación química en ovocitos de ovino y seleccionando el espermatozoide por “swim-up” o “swim-up” más la unión a la zona pelúcida (ZP). Tres experimentos fueron realizados. En el experimento 1, un total de 821 ovocitos madurados in vitro, fueron activados químicamente con etanol (EtOH), ionóforo de calcio (Ica) o ionomicina (Io), para determinar la formación del PN femenino. Los tratamientos mostraron resultados similares (54, 47 y 42%, respectivamente), siendo más alta (P

It is known that the initially undivided Conus, is separated by the endocardial crest into two conducts (anterior Conus and posterior Conus). Classically it has been mentioned that both the anterior and posterior Conus are involved in the embryogenesis of the outflow tract of the right and left ventricles respectively. At the same time, it has been mentioned that the main cellular process responsible of the normal development of the ventricular outflow tracts is the "shortening” by apoptosis of the Conus and the Truncus. By in vivo labeling of the chick embryo heart it was discovered that the “anterior conus” becomes the right ventricle outflow (RVOT). In contrast, there is no experimental evidence that directly relates to the “posterior conus” with the development of the left ventricle outflow (LVOT). Based on these facts, the objective of this work was to determine by means of in vivo labeling of chicken embryo heart the prospective fate of the walls of the Conus (right, left, dorsal and ventral), from the Stage 22HH up to their anatomical manifestation in the mature heart (Stage 30-36HH). It was also established the spatio-temporal pattern of apoptotic and proliferative myocytes during this process. To this purpose embryonic chicken hearts (stage-22HH) were labeled in ovo with Indian ink/gelatin in the Conus- Trunk transition and the boundary between the Conus and developing ventricle, separately at the right, left, dorsal and ventral walls. The eggs were re-incubated to obtain embryos at stages 24, 26, 28, 30, 32HH, 34HH and 36HH. The hearts were photographed in ovo (22HH) and once fixed at the end of experiment. To determine if the length of the Conus decreases or increases a morphometric analysis was carried out, by measuring the distance between the marks at the beginning (stage 22HH) and at the end of the experiment (stage 30 and 36HH). To detect apoptosis, samples were processed with LTR and to determine proliferation the technique of PCNA was used. In addition, at least three hearts of each stage were selected to perform histological studies. On the basis of the results of the in vivo labeling of the Conal wall it was designed a fate map in which it was determined that all the Conal walls become placed on the ventral wall heart and the marks were found exclusively in cardiac structures of the right ventricle, the most noteworthy were 1. The anterior free wall and the left wall of the RVOT. 2. The right portion of the base of the heart and 4. The superior portion of the acute edge of the heart. By histology it was determined that the Conus initially tubular, loses continuity in its posterior left wall, at the same time the Conal sleeve rotate toward a ventro-lateral position and become a slider structure. Together these results deny the existence of the “posterior Conus”. The morphometric analysis indicates that the cephalo-caudal dimensions of the Conus increase during development therefore it does not suffer from shortening as has been classically mentioned. Apoptosis was observed especially on the right and left walls and comes on gradually from stadium 24HH, rise among the stages 26 to 32HH. These findings are not consistent with the concept of shortening of the outflow tract of embryonic, rather indicate that apoptosis is involved in fine remolding undermining the lateral walls of the Conus during its transformation from a tubular structure on a slide. With respect to the pattern of proliferative myocytes, specifically in the Conus, the results indicate a differential growth particularly in the right portion. Clásicamente se conoce que los conductos anterior y posterior de la región proximal del tracto de salida embrionario o “Cono” participan en la embriogénesis del tracto de salida del ventrículo derecho (TSVD) e izquierdo (TSVI) respectivamente, mencionado como el proceso morfogenético fundamental “acortamiento” por apoptosis. Por medio de marcaje en vivo en el corazón de embrión de pollo se ha descrito que el conducto anterior se transforma en el TSVD. Sin embargo, no existe evidencia experimental que relacione directamente al conducto posterior del Cono con el desarrollo del TSVI. Con base en estos hechos, el objetivo de este trabajo fue determinar mediante marcaje in vivo del corazón de embrión de pollo, el destino prospectivo de las paredes del cono (derecha, izquierda, dorsal y ventral), desde el estadio 22HH hasta su manifestación anatómica en el corazón maduro. También se estableció el patrón espacio temporal de miocitos apoptóticos y cíclicos durante este proceso. Para lograr este objetivo, corazones embrionarios de pollo (estadio-22HH) se marcaron in ovo con tinta china/gelatina en los límites Cono-Tronco y Cono- ventricular sobre las paredes derecha, izquierda, dorsal y ventral por separado. Los embriones se re-incubaron para rastrear las marcas hasta los estadios 24, 26, 28, 30, 32, 34 y 36HH. Los corazones se fotografiaron in-ovo (22HH) y al final de experimento, después de fijarlos. Para determinar si el Cono disminuye o incrementa su longitud se llevó a cabo un análisis morfométrico, midiendo la distancia entre las marcas al inicio (estadio 22HH) y al final del experimento (estadio 30 y 36HH). Para detectar apoptosis las muestras se procesaron con LTR y para determinar Roberto Lazzarini vii proliferación se empleó la técnica de PCNA. Además, al menos tres corazones de cada etapa se seleccionaron para hacer un estudio histológico. Con base en los resultados del rastreo de las marcas colocadas en las distintas paredes del Cono se logró construir un mapa de destino en el que se determinó que todas las paredes conales giran para colocarse en la pared ventral cardiaca, las marcas se encontraron exclusivamente en estructuras cardiacas del ventrículo derecho entre las que destacan 1. Pared libre anterior 2. Pared izquierda del TSVD, 3. Porción derecha de la base cardiaca y 4. Porción superior del borde agudo cardiaco. Por medio de histología se determinó que el Cono inicialmente tubular, pierde continuidad en su pared dorso-izquierda y sus distintas paredes rotan hacia una posición ventro-lateral. Estos resultados en conjunto niegan la existencia del supuesto Cono posterior. Los resultados del análisis morfométrico indican que el Cono no sufre acortamiento en sus dimensiones céfalo-caudales. Respecto al patrón apoptótico en el Cono se encontró que no fue uniforme ni en el espacio ni en el tiempo. La apoptosis se manifestó especialmente en las paredes derecha e izquierda y aparece gradualmente a partir del estadio 24HH, incrementándose entre los estadios 26 a 32HH. Estos hallazgos no son congruentes con el concepto de acortamiento del tracto de salida embrionario, más bien indican que la apoptosis participa en finas remodelaciones, socavando las paredes laterales del Cono, durante su transformación de una estructura tubular en una lamina. Respecto al patrón de miocitos en proliferación específicamente en el Cono, los resultados indican un crecimiento diferencial dominante en la porción derecha.