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Resumen Una amplia variedad de antioxidantes evaluados en la congelación de semen equino no ha arrojado resultados satisfactorios en el mantenimiento de su calidad y fertilidad. El isoespintanol y el timol son moléculas de origen natural con una alta actividad antioxidante, lo que las hace potencialmente útiles para reducir el estrés oxidativo del semen durante la criopreservación. Este estudio tuvo como objetivo evaluar el efecto del isoespintanol y el timol en la actividad antioxidante total y enzimática de semen equino diluido con fines de congelación. El semen de cinco caballos criollos colombianos se diluyó en un medio de congelación, se dividió en tres alícuotas que se asignaron aleatoriamente a los tratamientos isoespintanol (40 µM), timol (50 µM) o control (sin antioxidante). Se evaluó la capacidad antioxidante total (TAC) por los ensayos ORAC y FRAP. La actividad de catalasa (CAT), superóxido dismutasa (SOD) y glutatión peroxidasa (GPx) se evaluaron mediante pruebas enzimáticas. La evaluación estadística se realizó mediante modelos mixtos, análisis de correlación y comparación de medias por la prueba de Tukey. Las actividades de SOD y GPx fueron menores para el isoespintanol (6,7 ± 2,2 U/ ml y 0,16 ± 0,02 U/ml), comparadas con el timol (6,9 ± 2,2 U/ml y 0,20 ± 0,02 U/ml) y el control (7,2 ± 2,2 U/ml y 0,22 ± 0,02 U/ml) (p < 0,05). No hubo diferencias para la TAC o la CAT del semen (p > 0,05). El isoespintanol reduce la actividad de SOD y GPx en el semen equino diluido con fines de congelación. Abstract A wide variety of antioxidants that were evaluated for freezing equine semen failed to yield satisfactory results in maintaining their quality and fertility. Isoespintanol and thymol are molecules of natural origin with a high antioxidant activity, which makes them potentially useful for reducing semen oxidative stress during cryopreservation. This study aimed to evaluate the effect of isoespintanol and thymol on total antioxidant and enzymatic activity of equine semen diluted for freezing purposes. The semen of five Colombian creole horses was diluted in a freezing medium, divided into three aliquots that were randomly assigned to treatments with isoespintanol (40 µM), thymol (50 µM), or control (no antioxidant). Total antioxidant capacity (TAC) was evaluated using ORAC and FRAP tests. Catalase (CAT), superoxide dismutase (SOD) and glutathione peroxidase (GPx) activity were evaluated by enzymatic assays. The statistical evaluation was performed using mixed models, correlation analysis, and comparison of means by Tukey's test. SOD and GPx activities were lower for isoespintanol (6.7 ± 2.2 U/ml and 0.16 ± 0.02 U/ml), compared to thymol (6.9 ± 2.2 U/ml and 0.20 ± 0.02 U/ml) and to control (7.2 ± 2.2 U/ml and 0.22 ± 0.02 U/ml) (p < 0.05). There were no differences for TAC or CAT in semen (p > 0.05). Isoespintanol reduces SOD and GPx activity in equine semen diluted for freezing purposes. Resumo Uma ampla variedade de antioxidantes avaliados na congelação de sêmen equino não tem mostrado resultados satisfatórios na manutenção de sua qualidade e fertilidade. O isoespintanol e o timol são moléculas de origem natural com uma alta atividade antioxidante, fator que as faz potencialmente úteis para reduzir o estresse oxidativo do sêmen durante a criopreservação. Este estudo teve como objetivo avaliar o efeito do isoespintanol e do timol na atividade antioxidante total e enzimática de sêmen equino diluído para fins de congelação. O sêmen de cinco cavalos nativos da Colômbia foi diluído em um meio de congelação, depois dividido em três partes designadas aleatoriamente aos tratamentos isoespintanol (40 µM), timol (50 µM) o controle (sem antioxidante). Avaliou-se a capacidade antioxidante total (TAC) pelos ensaios ORAC e FRAP. A atividade de catalase, superóxido dismutase (SOD) e glutationa peroxidase (GPx) se avaliaram mediante provas enzimáticas. A avaliação estatística realizou-se mediante modelos mistos, análise de correlação e comparação de médias pela prova de Tukey. As atividades de SOD e GPx foram menores para o isoespintanol (6,7 ± 2,2 U/ml e 0,16 ± 0,02 U/ml), comparadas com o timol (6,9 ± 2,2 U/ml e 0,20 ± 0,02 U/ml) e o controle (7,2 ± 2,2 U/ ml e 0,22 ± 0,02 U/ml) (p < 0,05). Não houve diferenças para a TAC ou a CAT do sêmen (p > 0.05). O isoespintanol reduz a atividade de SOD e GPx no sêmen equino diluído para fins de congelação.

El objetivo de este estudio fue evaluar el efecto de la centrifugación sobre la integridad y la funcionalidad de espermatozoides equinos. Empleando el método de la vagina artificial se colectó el semen de diez reproductores equinos de la raza criollo colombiano, ubicados en El Valle de Aburrá (Antioquia, Colombia). Cada muestra de semen fue dividida en cuatro alícuotas, entre las cuales, tres fueron centrifugadas de forma separada a tres fuerzas de centrifugación (600 x g, 1200 x g y 1800 x g), durante 10 minutos a temperatura ambiente, mientras la cuarta no fue centrifugada (tratamiento control). Posteriormente, se evaluó la movilidad total y movilidad progresiva mediante un sistema analizador de clase (SCA®), al igual que se evaluaron el potencial de membrana mitocondrial, la vitalidad espermática y la integridad del acrosoma, mediante los ensayos fluorescentes JC1, SYBR/IP y FITC/PNA, respectivamente. Se concluye que incluso bajos niveles de fuerza de centrifugación, logran alterar la movilidad total, la movilidad progresiva, la integridad del acrosoma y el potencial de la membrana interna mitocondrial de los espermatozoides equinos. The aim of this study was to evaluate the effect of centrifugation on the integrity and functionality of equine spermatozoa. Semen of ten stallion of Colombian Creole breed were collected using the artificial vagina method. The stallions were located in El Valle de Aburrá (Antioquia, Colombia). Each sperm sample was divided in four aliquots, three of them were centrifuged at one of three forces of centrifugation (600 x g, 1200 x g 1800 x g) during 10 minutes at room temperature, while the fourth was not centrifuged (control treatment). Subsequently, total motility and progressive motility were evaluated by a computer analyzer system (SCA), as well mitochondrial membrane potential, sperm viability and acrosome integrity by JC1, SYBR / PI and FITC/PNA fluorescent assays, respectively. It is concluded that even low levels of centrifugal force, can alter total motility, progressive motility, acrosome integrity and mitochondrial membrane potential of stallion spermatozoa. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da centrifugação sobre a integridade e a funcionalidade dos espermatozóides eqüinos. Usando o método da vagina artificial, o sêmen de dez eqüinos da raça crioulo colombiano, localizados no Valle de Aburrá (Antioquia, Colômbia) foram coletados. Cada amostra de sêmen foi dividida em quatro alíquotas, das quais três foram centrifugadas em uma das três forças de centrifugação (600 xg, 1200x g 1800 xg) durante 10 minutos a temperatura ambiente, enquanto a quarta não foi centrifugada (tratamento controle). Posteriormente, a mobilidade total e a motilidade progressiva foram avaliadas por un sistema de análise computarizado (SCA), assim como o potencial de membrana mitocondrial, a viabilidade espermática e a integridade do acrossoma foram avaliados por meio das provas fluorescentes JC1, SYBR/IP e FITC/PNA, respectivamente. Conclui-se que mesmo níveis baixos de força centrífuga, podem alterar a mobilidade total, a motilidade progressiva, a integridade do acrossoma e o potencial da membrana interna mitocondrial dos espermatozóides eqüinos.

Semen cryopreservation is a fundamental process for the development of biotechnologies for assisted reproduction in horses. The use of cryopreservation techniques with changes in concentrations and the nature of the cryoprotectant, as well as, the different types of vials for storage of semen, have become an alternative to improve the protocols used. The objective of this work was to evaluate the effect of two protocols of cryopreservation (freezing and vitrification) on the fertilizing capacity of stallion semen. The study was conducted with horses of the Criollo Colombiano breed. For freezing was used a extender supplemented with egg yolk (4%) and dimethyl formamide (5%), and 0.5 mL straws as vials, whereas for vitrification, the extender was supplemented with egg yolk (8%) and dimethyl formamide (8%), and cryovials were used as carriers. As post thaw parameters were evaluated: progressive motility, vitality, normal morphology and integrity of the plasma membrane through the hypoosmotic swelling test (HOS). For statistical evaluation was fitted a generalized linear model (GLM) and means were compared by the Tukey test. Were found average percentages of progressive motility, vitality, normal morphology and HOS of 41.6 ± 11.8 and 37 ± 8.5, 54.3 ± 10.2 and 52.3 ± 7.8, 83.1 ± 5.4 and 83.6 ± 5.8, 41.7 ± 9.8 and 38.9 ± 3.6, for cryopreserved semen by freezing and vitrification, respectively. There were no statistically significant differences (P ≤ 0.05) between treatments for any of the parameters evaluated. The fertilizing capacity of equine semen cryopreserved by vitrification is comparable to that obtained by conventional freezing.Resumen. La criopreservación de semen es un proceso fundamental en el desarrollo de biotecnologías para la reproducción asistida en equinos. El uso de diferentes técnicas de criopreservación con cambios en las concentraciones y la naturaleza de los crioprotectores, así como en los diferentes tipos de soportes para el almacenamiento del semen, se ha constituido en una alternativa para mejorar los protocolos empleados. El objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto de dos protocolos de criopreservación (congelación y vitrificación), sobre la capacidad fecundante del semen equino. El estudio se realizó con equinos de la raza Criollo Colombiano. Para la congelación se empleó un diluyente suplementado con de yema de huevo (4%) y dimetilformamida (5%), y pajillas de 0,5 mL como soportes; mientras que para la vitrificación, el diluyente fue suplementado con yema de huevo (8%) y dimetilformamida (8%) y se usaron crioviales como soportes. Post-descongelación, se evaluaron los parámetros: movilidad progresiva, vitalidad, morfología normal e integridad de la membrana plasmática (HOS). Para la evaluación estadística se ajustó un modelo lineal generalizado (GLM) y las medias se compararon por la prueba de Tukey. Se encontraron porcentajes promedio de movilidad progresiva, vitalidad, morfología normal y HOS de 41,6±11,8 y 37,0±8,5, 54,3±10,2 y 52,3±7,8, 83,1±5,4 y 83,6±5,8, 41,7±9,8 y 38,9±3,6, para el semen criopreservado por congelación y vitrificación, respectivamente. No se encontraron diferencias estadísticamente significativas (P ≤ 0,05) entre los tratamientos para ninguno de los parámetros evaluados. La capacidad fecundante del semen equino criopreservado por vitrificación es equiparable a la obtenida por congelación convencional.

La crioconservación de semen es una técnica utilizada tanto en humanos como en animales, permitiendo la congelación del material genético que será utilizado en la reproducción. El objetivo de esta investigación fue evaluar el efecto de tres crioprotectores sobre los parámetros de movilidad y vitalidad en el semen post descongelado de la sabaleta Brycon henni (Pisces: Characidae). Tres crioprotectores: dimetilformamida (DMF), dimetilsulfoxido (DMSO) y etilenglicol (EG), fueron utilizados independientemente para la crioconservación seminal, a una concentración de 5%, el semen fue empacado en pajillas de 0.5 ml. Diecinueve machos sexualmente maduros y 116 pajillas fueron analizadas en el laboratorio de Biotecnología Animal del Politécnico Colombiano Jaime Isaza Cadavid. En la evaluación del semen fresco y post descongelado se utilizó el Sistema de Análisis de Clase (SCA®), para los parámetros de movilidad total (MT), movilidad progresiva (MP), velocidad curvilínea (VCL), velocidad rectilínea (VSL) y velocidad promedio (VAP), entre otros. La vitalidad espermática post descongelación se evaluó mediante microscopia de fluorescencia utilizando la combinación de sondas SYBR/IP. Para el análisis estadístico se ajustaron modelos lineales generalizados (GLM) y las medias se compararon por la prueba de Tukey. Los porcentajes de MT fueron 96.1±3.3% (semen fresco), 52.7±9.2% (DMF), 59.7±9.3% (DMSO) y 62.1±11.2% (EG). Mientras que para la MP fueron de 73.3±14.2 (semen fresco), 11.7±6.7% (DMF), 13.8±6.8% (DMSO) y 15.6±7.8% (EG). No hubo diferencias significativas entre DMSO y EG, pero fueron superiores a DMF (P≤0.05), para ambas variables. VCL, VSL y VAP fueron estadísticamente superiores para EG (P≤0.05). DMSO presentó valores mayores de vitalidad espermática (82.0±1.9%), cuando fue comparado con DMF (73.5±5.9%) y EG (69.2±6.7%) (P≤0.05). Se concluye que DMSO y EG presentan porcentajes superiores de MT y MP que DMF, mientras DMSO produce mejores resultados de vitalidad, cuando se evalúa el semen post descongelado de sabaleta Brycon henni. Semen cryopreservation (i.e. sperm banking) is a technique which is used for both humans and animals; it allows the genetic material which will be used in reproduction to be frozen. This research was aimed at evaluating the effect of three cryoprotectants on the mobility and vitality of post-thaw semen from the trans-Andean, omnivorous fish Brycon henni (Pisces: Characidae). Three cryoprotectants (N,N-dimethylformamide (DMF), dimethyl sulphoxide (DMSO) and ethylene glycol (EG)) were used independently for semen cryopreservation (5% concentration); B. henni semen was packed in 0.5 ml plastic mini-straws. Nineteen sexually-mature males and 116 straws were analysed at Animal Biotechnology Laboratory of Politécnico Colombiano Jaime Isaza Cadavid. A computer-assisted sperm class analyser (SCA) system was used for evaluating fresh and post-thaw semen regarding the following parameters: total motility (TM), progressive motility (PM), curvilinear velocity (VCL), straight line velocity (VSL) and average path velocity (VAP). Post-thaw sperm vitality was evaluated by fluorescence microscopy using the SYBR Green I/PI probe assay. Statistical analysis involved fitting generalised linear models (GLM) and Tukey multiple comparison test was used for comparing means. TM percentages were 96.1±3.3% (fresh semen), 52.7±9.2% (DMF), 59.7±9.3% (DMSO) and 62.1±11.2% (EG), whilst PM percentages were 73.3±14.2 (fresh semen), 11.7±6.7% (DMF), 13.8±6.8% (DMSO) and 15.6±7.8% (EG). There were no statistically significant differences between DMSO and EG, but these were greater than those for DMF (p≤0.05) for both variables. Differences for VCL, VSL and VAP were statistically greater for EG (p≤0.05). DMSO had greater sperm vitality values (82.0±1.9%) compared to DMF (73.5±5.9%) and EG (69.2±6.7%) (p≤0.05). it was thus concluded that DMSO and EG had greater TM and PM percentages than DMF, whilst DMSO produced better results regarding vitality when evaluating post-thaw semen from the trans-Andean, omnivorous fish Brycon henni. A criopreservação do sémen é uma técnica utilizada em humanos e animais, permitindo o congelamento do material genético a ser utilizado na reprodução. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito de três crioprotetores sobre os parâmetros de mobilidade e vitalidade no sêmen pós-descongelamento da Sabaleta Brycon henni (Pisces: Characidae). Três crioprotectores, dimetilformamida (DMF), dimetilsulfóxido (DMSO) ou etilenoglicol (EG) foram usados independentemente para a criopreservação seminal, a uma concentração de 5%, o sêmen foi empacotado em canudos de 0.5 ml. Dezenove machos sexualmente maduros e 116 canudos foram analisados no Laboratório de Biotecnologia Animal do Politécnico Colombiano Jaime Isaza Cadavid. Na avaliação da mobilidade do sêmen fresco e após a descongelação, foi usado o Sistema de Análise de Classe (SCA®) para os parâmetros de mobilidade total (MT), mobilidade progressiva (MP), velocidade curvilinear (VCL), velocidade em linha reta (VSL) e velocidade média (VAP), entre outros. A viabilidade espermática após o descongelamento foi realizada por meio de microscopia de fluorescência utilizando a combinação de sondas SYBR/ IP. Para a análise estatística, modelos lineares generalizados (GLM) foram ajustados e as médias foram comparadas pelo teste de Tukey. Os percentuais de MT foram de 96.1±3.3% (sêmen fresco), 52.7±9.2% (DMF), 59.7±9.3% (DMSO) e 62.1±11.2% (EG). Enquanto que para o MP foram 73.3±14.2 (sêmen fresco), 11.7±6.7% (DMF), 13.8±6.8% (DMSO) e 15.6±7.8% (EG). Não houve diferenças significativas entre DMSO e EG, mas foram superiores ao DMF (P≤0.05) para as duas variáveis. VCL, VSL e VAP foram estatisticamente superiores ao EG (P≤0.05). DMSO (82.0±1.9%) apresentaram altos valores para a vitalidade espermática em comparação com DMF (73.5±5.9%) e EG (69.2±6.7%) (P≤0.05). Conclui-se que o DMSO e EG têm maiores percentuais de MT e MP que DMF, enquanto DMSO produz melhores resultados da vitalidade, quando o sêmen após o descongelado da Sabaleta Brycon henni e avaliado.

La capacidad antioxidante del plasma seminal podria ser defi nitiva para el mantenimiento de la viabilidad y la fertilidad del semen equino. El proposito de este estudio fue determinar la capacidad antioxidante total (CAT) y los niveles de produccion de especies reactivas de oxigeno (ERO) del plasma seminal equino, y su relacion con la calidad espermatica. Se utilizaron 24 muestras de plasma seminal de caballos Criollos Colombianos. La produccion de ERO se evaluo por la prueba de fluoresceina diacetato (FDA), y la CAT por los ensayos de capacidad atrapadora de radicales oxigeno (ORAC), decoloracion del radical cationico ABTS●+ (ABTS) y poder reductor ferrico (FRAP). La evaluacion estadistica se realizo mediante el ajuste de modelos lineales generalizados (GLM) y analisis de correlacion. Las medias de produccion de ERO, ORAC, ABTS y FRAP fueron de 0,74 URF/ min, 4.049,4 µmol Trolox equivalente / l, 3.347,8 µmol Trolox equivalente / l y 23,9 mg de acido ascorbico equivalente / l, respectivamente. Se encontro un efecto significativo (P

Para optimizar los resultados se debe determinar la fertilidad potencial del semen equino usado en procedimientos de reproducción asistida, tales como la inseminación artificial. Sin embargo, los procesos convencionales de evaluación seminal pueden dar un bajo valor predictivo de la tasa de gestación. Por tal motivo se han desarrollado nuevos métodos de análisis seminal, incorporado diversos recursos tecnológicos y mejorado las técnicas existentes, y en muchos casos adaptándolas a la especie equina. El desarrollo de los sistemas de análisis de semen asistido por computador (CASA) ha permitido que la evaluación espermática sea más objetiva y precisa, incluyendo la determinación de nuevas variables con valor diagnóstico. El hallazgo de una amplia variedad de fluorocromos y de compuestos conjugados a sondas fluorescentes y el desarrollo de diferentes tecnologías para visualizar y cuantificar la fluorescencia de la célula y sus compartimentos permite un análisis más completo de los espermatozoides. La aplicación de ensayos o técnicas que utilizan oocitos de otras especies o incluso partes de la zona pelúcida ha favorecido el diagnóstico más certero de la verdadera capacidad fecundante de los espermatozoides equinos. El objetivo de esta revisión es ofrecer y analizar información sobre los métodos convencionales y recientes empleados para evaluar la fertilidad potencial del semen equino. In order to optimize the results of assisted reproductive procedures such as artificial insemination, the potential fertility of stallion semen should be determined. However, conventional processes of seminal evaluation can give an low predictive value of the pregnancy rate. For this reason, the new methods of semen analysis incorporate several technological resources and improve the existing techniques. In many cases those techniques have been adapted to the equine species. The development of the computer-assisted semen analysis (CASA) has allowed a more objective and accurate sperm evaluation, including the identification of new variables with diagnostic value. The finding of a wide variety of fluorochromes and compounds conjugated with fluorescent probes, and the development of various technologies to visualize and quantify the fluorescence emmited by the cell and cell compartments allows a more complete sperm analysis. The application of tests or techniques using oocytes from other species or even parts of the zona pellucida has favored a more accurate diagnosis of the true sperm fertilizing capacity in horses. The aim of this review is to provide and analyze information on recent conventional methods used to assess the potential fertility of stallion semen. Determinar a fertilidade potencial do sêmen equino utilizado em procedimentos de reprodução assistida como a inseminação artificial, é fundamental para aperfeiçoar seus resultados. Embora, os procedimentos convencionais de avaliação seminal poderiam ter um valor preditivo reduzido das taxas de gestação que se podem obter a partir da utilização deste. Por tal motivo, tem se desenvolvido novos métodos de analise seminal, incorporando diversos recursos tecnológicos e melhorando as técnicas existentes, e em muitas ocasiões adaptando-lhas a espécie equina. O desenvolvimento dos sistemas de analise de sêmen assistido por computador (CASA), tem permitido que a avaliação espermática fosse mais objetiva e precisa, incluindo a determinação de novas variáveis com valor diagnostica. Tem se encontrado uma ampla variedade de fluorocromos e de compostos conjugados a sondas fluorescentes, e o desenvolvimento de diferentes tecnologias para visualizar e quantificar a fluorescência emitida pela célula e seus compartimentos, o qual tem permitido um analise mais ampla das características dos espermatozoides. A aplicação de ensaios ou técnicas que utilizam ovócitos de outras espécies ou incluso partes da zona pelúcida, tem favorecido dispor de sistemas de diagnostico mais certeiros da verdadeira capacidade fecundante dos espermatozoides equinos. Esta revisão tem como objetivo, recopilar e analisar informação referente aos métodos convencionais e recentes, que poderiam ser empregados para a avaliação da fertilidade potencial do sêmen equino.

Semen cryopreservation is a fundamental process for the development of biotechnologies for assisted reproduction in horses. The use of cryopreservation techniques with changes in concentrations and the nature of the cryoprotectant, as well as, the different types of vials for storage of semen, have become an alternative to improve the protocols used. The objective of this work was to evaluate the effect of two protocols of cryopreservation (freezing and vitrification) on the fertilizing capacity of stallion semen. The study was conducted with horses of the Criollo Colombiano breed. For freezing was used a extender supplemented with egg yolk (4%) and dimethyl formamide (5%), and 0.5 mL straws as vials, whereas for vitrification, the extender was supplemented with egg yolk (8%) and dimethyl formamide (8%), and cryovials were used as carriers. As post thaw parameters were evaluated: progressive motility, vitality, normal morphology and integrity of the plasma membrane through the hypoosmotic swelling test (HOS). For statistical evaluation was fitted a generalized linear model (GLM) and means were compared by the Tukey test. Were found average percentages of progressive motility, vitality, normal morphology and HOS of 41.6 ± 11.8 and 37 ± 8.5, 54.3 ± 10.2 and 52.3 ± 7.8, 83.1 ± 5.4 and 83.6 ± 5.8, 41.7 ± 9.8 and 38.9 ± 3.6, for cryopreserved semen by freezing and vitrification, respectively. There were no statistically significant differences (P ≤ 0.05) between treatments for any of the parameters evaluated. The fertilizing capacity of equine semen cryopreserved by vitrification is comparable to that obtained by conventional freezing. Resumen. La criopreservación de semen es un proceso fundamental en el desarrollo de biotecnologías para la reproducción asistida en equinos. El uso de diferentes técnicas de criopreservación con cambios en las concentraciones y la naturaleza de los crioprotectores, así como en los diferentes tipos de soportes para el almacenamiento del semen, se ha constituido en una alternativa para mejorar los protocolos empleados. El objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto de dos protocolos de criopreservación (congelación y vitrificación), sobre la capacidad fecundante del semen equino. El estudio se realizó con equinos de la raza Criollo Colombiano. Para la congelación se empleó un diluyente suplementado con de yema de huevo (4%) y dimetilformamida (5%), y pajillas de 0,5 mL como soportes; mientras que para la vitrificación, el diluyente fue suplementado con yema de huevo (8%) y dimetilformamida (8%) y se usaron crioviales como soportes. Post-descongelación, se evaluaron los parámetros: movilidad progresiva, vitalidad, morfología normal e integridad de la membrana plasmática (HOS). Para la evaluación estadística se ajustó un modelo lineal generalizado (GLM) y las medias se compararon por la prueba de Tukey. Se encontraron porcentajes promedio de movilidad progresiva, vitalidad, morfología normal y HOS de 41,6±11,8 y 37,0±8,5, 54,3±10,2 y 52,3±7,8, 83,1±5,4 y 83,6±5,8, 41,7±9,8 y 38,9±3,6, para el semen criopreservado por congelación y vitrificación, respectivamente. No se encontraron diferencias estadísticamente significativas (P ≤ 0,05) entre los tratamientos para ninguno de los parámetros evaluados. La capacidad fecundante del semen equino criopreservado por vitrificación es equiparable a la obtenida por congelación convencional.

La escasa fertilidad del semen equino criopreservado ha limitado de manera sustancial su uso en procedimientos de biotecnología reproductiva. El estrés oxidativo es uno de los factores más relacionados con este fenómeno, debido al incremento en los niveles de especies reactivas de oxígeno (ERO) en el semen como resultado del choque térmico, de la toxicidad de los crioprotectores, y de la alteración en la disponibilidad y la funcionalidad de los antioxidantes endógenos durante los procesos de criopreservación. Esta revisión analiza el efecto del estrés oxidativo sobre la fertilidad del semen equino criopreservado. The scarce fertility of the cryopreserved equine sperm has significantly limited its use in reproductive biotechnology. Oxidative stress is one of the facts that are related the most to this phenomenon, due to the increase in the levels of species that react to oxygen in the sperm as a result of the thermal shock, the toxicity of cryoprotectors and the alteration in the disposal and the functionality of the endogenous antioxidants during cryopreservation. This revision article analyzes the effect of oxidative stress on the cryopreserved equine sperm's fertility A escassa fertilidade do sémen equino crio-preservado limitou de maneira substancial seu uso em procedimentos de biotecnologia reprodutiva. O estresse oxidativo é um dos fatores mais relacionados com este fenômeno, devido ao incremento nos níveis de espécies reativas de oxigênio (ERO) no sémen como resultado do choque térmico, da toxicidade dos crio-protetores, e da alteração na disponibilidade e a funcionalidade dos antioxidantes endógenos durante os processos de criopreservação. Esta revisão analisa o efeito do estresse oxidativo sobre a fertilidade do sémen equino crio-preservado.

Introducción. Diversos factores influyen sobre la capacidad fertilizante del semen canino criopreservado. Las alteraciones estructurales, y los efectos osmóticos y tóxicos sobre los espermatozoides, han centrado el interés en desarrollar nuevas técnicas de criopreservación y crioprotectores con mayor potencial para la conservación de la capacidad fertilizante del semen. Objetivo. Comparar el efecto de la congelación rápida con glicerol y dimetilformamida sobre la calidad post-descongelación del semen canino. Materiales y métodos. En un proceso de criopreservación por congelación rápida, fueron implementados cuatro tratamientos (glicerol al 3% y 5%, y dimetilformamida al 3% y 5%). Posterior a la descongelación, fueron evaluados para cada tratamiento, la movilidad individual, la morfología espermática y la integridad de membrana de los espermatozoides. La evaluación estadística se realizó mediante un análisis de varianza y una prueba de diferencia significativa mínima de Fisher. Resultados. Para la movilidad individual se encontró superioridad del glicerol 5% (58%±7.8) sobre DMF 5% (44.5%±17.7), glicerol 3% (18%±10.1), y DMF 3% (11.8%±10.5). Para la integridad de membrana, DMF 5% obtuvo el mayor promedio (33.4%±9.7), siendo superior a glicerol 3% (27.5%±4.3) y DMF 3% (24.2%±5.3), pero sin diferencia estadística sobre glicerol 5% (31.4%±3.8). Para la morfología espermática no se encontró diferencia estadística entre glicerol 5% (67%±11.9), glicerol 3% (65.6±12.5), y DMF 5% (60%±16.5), pero sí hubo diferencia entre estos y DMF 3% (50.1%±18.3). Conclusiones. El glicerol y la DMF en concentraciones del 5% proveen una protección similar del semen canino durante la criopreservación por congelación rápida. Introduction. Several factors influence the fertilizing capacity of cryopreserved canine semen. Structural alterations and the osmotic and toxic effects on sperm have focused interest on developing new cryopreservation and cryoprotection techniques with a bigger potential for conserving the semen's fertilization capacity. Objective. To compare the effect of fast freezing with glycerol and dimethylformamide on the post-freezing quality of canine semen. Materials and methods. In a cryopreservation process by fast freezing, four treatments were implemented (glycerol at 3% and 5%, y dimethylformamide at 3% and 5%). After thawing, individual mobility, sperm morphology and the membrane's integrity of sperm were evaluated. The statistic evaluation was made by the use of a variance analysis and a Fisher's minimal significant difference test. Results. For the individual mobility, a superiority was found for the 5% glycerol (58%±7.8) over 5% DMF (44.5%±17.7), 3% glycerol (18%±10.1), and 3% DMF (11.8%±10.5). For the membrane's integrity, 5%DMF had the highest media value (33.4%±9.7), above 3% glycerol (27.5%±4.3) y 3% DMF (24.2%±5.3), but it had no statistic difference over 5% glycerol (31.4%±3.8). For the sperm morphology, no statistic difference was found between 5% glycerol (67%±11.9), 3% glycerol (65.6±12.5), and 5%DMF (60%±16.5), but there was a difference between these and 3% DMF (50.1%±18.3). Conclusions. Glycerol and DMF, in 5% concentrations, provide a similar protection to semen during fast freezing cryopreservation. Introdução. Diversos fatores influem sobre a capacidade fertilizante do sêmen canino criopreservado. As alterações estruturais, e os efeitos osmóticos e tóxicos sobre os espermatozóides, centraram o interesse em desenvolver novas técnicas de criopreservação e crioprotetores com maior potencial para a conservação da capacidade fertilizante do sêmen. Objetivo. Comparar o efeito do congelamento rápido com glicerol e dimetilformamida sobre a qualidade pós-descongelamento do sêmen canino. Materiais e métodos. Num processo de criopreservação por congelamento rápido, foram implementados quatro tratamentos (glicerol ao 3% e 5%, e dimetilformamida ao 3% e 5%). Posterior ao descongelamento, foram avaliados para cada tratamento, a mobilidade individual, a morfologia espermática e a integridade de membrana dos espermatozóides. A avaliação estatística se realizou mediante uma análise de variância e uma prova de diferença significativa mínima de Fisher. Resultados. Para a mobilidade individual se encontrou superioridade do glicerol 5% (58%±7.8) sobre DMF 5% (44.5%±17.7), glicerol 3% (18%±10.1), e DMF 3% (11.8%±10.5). Para a integridade de membrana, DMF 5% obteve a maior média (33.4%±9.7), sendo superior a glicerol 3% (27.5%±4.3) e DMF 3% (24.2%±5.3), mas sem diferença estatística sobre glicerol 5% (31.4%±3.8). Para a morfologia espermática não se encontrou diferença estatística entre glicerol 5% (67%±11.9), glicerol 3% (65.6±12.5), e DMF 5% (60%±16.5), mas se teve diferença entre estes e DMF 3% (50.1%±18.3). Conclusões. O glicerol e a DMF em concentrações do 5% provêem uma proteção similar do sêmen canino durante a criopreservação por congelamento rápido.

La producción in vitro de embriones (PIVE) en equinos es una técnica que genera incrementos en la eficiencia reproductiva de especímenes de alto valor genético y comercial. A pesar de todos los estudios que se han realizado, la PIVE es una técnica con acceso y un éxito limitado, debido principalmente a las dificultades para alcanzar tasas de fertilización eficientes mediante fertilización in vitro convencional, al igual que por las altas necesidades en recursos técnicos y económicos para la fertilización mediante inyección intracitoplasmática de espermatozoides (ICSI), entre otras limitaciones existentes para el desarrollo embrionario in vitro. En el mundo, se han evaluado múltiples alternativas para el mejoramiento de la PIVE en equinos, desde el uso de diferentes medios, fluidos, células, y moléculas, hasta la utilización de métodos alternativos para mejorar las tasas de fertilización como la ICSI en asociación de sustancias como el polivinilalcohol. Esta revisión explora los avances investigativos y las expectativas futuras de aplicación de la técnica de PIVE en equinos. The in vitro embryo production (PIVE) in horses is a technique that generates increases in reproductive efficiency of high genetic and commercial value animais. Despite all the studies that has been made, PIVE is still a technique with limited access and success, mainly due to difficulties to achieve efficient rates of fertilization through conventional in vitro fertilization, as well as by the high needs in technical and economic resources for fertilization using intracytoplasmic sperm injection (ICSI), among other limitations on in vitro embryonic development. In the world there have been evaluated multiple alternatives for improving the PIVE in horses: from the use of different means, fluids, cells and molecules, to the use of alternative methods to improve the rates of fertilization through ICSI with the use of substances such as polyvinylalcohol. This review explores the research progress and future expectations for the application of the PIVE technique in horses. A produção de embriões eqüinos in vitro (PIVE) é uma técnica que aumenta eficiência reprodutiva em espécies de alto valor genético e comercial. Apesar de todos os estudos realizados, a PIVE é uma técnica de acesso e êxito limitados, principalmente devido à dificuldade de se alcançar taxas de fertilização eficientes diante da fertilização in vitro convencional, grande necessidade de recursos financeiros e técnicos para a fertilização por injeção intracitoplasmática de espermatozóide (ICSI), entre outras limitações para o desenvolvimento embrionário in vitro. Em todo mundo foram avaliadas várias alternativas para a melhoria da PIVE em eqüinos, desde a utilização de diferentes meios, fluidos, células e moléculas até a utilização de métodos alternativos para melhorar as taxas de fertilização como a ICSI em associação com outras substâncias como o álcool polivinílico. Essa revisão aborda o progresso da pesquisa e as perspectivas futuras de aplicação da técnica PIVE em eqüinos.

Introducción. Almacenar oocitos bovinos inmaduros de forma eficiente permite contar con fuentes casi ilimitadas de recursos genéticos, valiosos para los procesos biotecnológicos de la reproducción y para la investigación. Diversos métodos se han empleado para la criopreservación de este tipo de células, entre de los cuales la vitrificación ha demostrado ser el más exitoso. Sin embargo, los resultados aún son limitados por las bajas tasas de sobrevivencia de los oocitos vitrificados. Objetivo. Determinar entre tres concentraciones del crioprotector etilenglicol cuál previene en mayor proporción las alteraciones sobre la morfología post-desvitrificación de oocitos bovinos inmaduros. Materiales y métodos. Para un protocolo de dos pasos de vitrificación en pajilla abierta estirada (OPS) de oocitos bovinos inmaduros, se evaluaron tres combinaciones en la concentración de etilenglicol: 1, (7.5% y 15%); 2, (10% y 20%) y 3, (20% y 40%). Resultados. Los resultados mostraron que un protocolo que utiliza 20% y 40% de etilenglicol en dos soluciones de vitrificación, produce menores alteraciones en la morfología posdesvitrificación de los oocitos bovinos inmaduros. Conclusiones: La utilización de las concentraciones de 20% y 40% de etilenglicol en un protocolo de vitrificación de dos pasos en OPS tiene un mayor efecto preventivo sobre los daños morfológicos asociados a la vitrificación de oocitos bovinos inmaduros. Introduction. Efficient storage of immature bovine oocytes means to have an unlimited quantity of genetic resources, valuable for reproduction biotechnology processes and for research. Several methods have been used for the cryopreservation of these cells. Vitrification has demonstrated to be the most successful one, but its results are still limited due to the low survival rates of the vitrified oocytes. Objective. To determine which one, between three different concentrations of the ethylene glycol crioprotector, prevents in the highest proportion the alterations on post-devitrification morphology of immature bovine oocytes. Materials and methods. Three different concentrations of ethylene glycol were tested in order for a two step vitrification protocol in open pulled straw (OPS) of immature bovine oocytes: 1, (7.5% y 15%); 2, (10% y 20%) and 3, (20% y 40%). Results. A protocol that uses the combination of 20% and 40% of ethylene glycol on two vitrification solutions, produces less changes in the post-devitrification morphology of immature bovine oocytes. Conclusions. The use of 20% and 40% ethylene glycol concentrations, in a two step OPS vitrification protocol, has a better prevention effect on the morphologic damages associated to the vitrification of immature bovine oocytes. Introdução. Armazenar ovócitos bovinos imaturos de forma eficiente permite contar com fontes quase ilimitadas de recursos genéticos, valiosos para os processos biotecnológicos da reprodução e para a investigação. Diversos métodos se empregaram para a criopreservação deste tipo de células, entre dos quais a vitrificar demonstrou ser o mais exitoso. No entanto, os resultados ainda são limitados pelas baixas taxas de sobrevivência dos ovócitos vitrificados. Objetivo. Determinar entre três concentrações do crio - protetor etilenglicol qual previne em maior proporção as alterações sobre a morfologia pós-desvitrificação de ovócitos bovinos imaturos. Materiais e métodos. Para um protocolo de dois passos de vitrificar em palha aberta esticada (OPS) de ovócitos bovinos imaturos, avaliaram-se três combinações na concentração de etilenglicol: 1, (7.5% e 15%); 2, (10% e 20%) e 3, (20% e 40%). Resultados. Os resultados mostraram que um protocolo que utiliza 20% e 40% de etilenglicol em duas soluções de vitrificar, produz menores alterações na morfologia pos-desvitrificação dos ovócitos bovinos imaturos. Conclusões. A utilização das concentrações de 20% e 40% de etilenglicol num protocolo de vitrificar de dois passos em OPS tem um maior efeito preventivo sobre os danos morfológicos sócios ã vitrificar de ovócitos bovinos imaturos.