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The development of immunotherapeutic approaches for the treatment of melanoma requires a better understanding of immunoescape mechanisms of tumor cells and how they interact with other tumor-resident cell types. Here, we evaluated how the conditioned media of resting (rCM) and immune-activated PBMCs (iCM) influence the ability of a metastatic melanoma cell line (MeWo) to control T-cells function. MeWo cells were expanded in RPMI, rCM, or iCM and the secretome generated after cell expansion was identified as MeSec (RPMI), niSec (non-inflammatory), or iSec (inflammatory secretome), respectively. Then, the immunomodulatory potential of such secretomes was tested in PHA-activated PBMCs. iCM induced higher levels of IFN-γ and IL-10 in treated melanoma cells compared to rCM, as well as higher IDO and PD-L1 expression. The iSec was able to inhibit T-cell activation and proliferation. Interestingly, PBMCs treated with iSec presented a reduced expression of the regulators of Th1 and Th2 responses T-BET and GATA-3, as well as low expression of IFN-γ, and co-stimulatory molecules TIM-3 and LAG-3. Importantly, our findings show that melanoma may benefit from an inflammatory microenvironment to enhance its ability to control the T-cell response. Interestingly, such an immunomodulatory effect involves the inhibition of the checkpoint molecules LAG-3 and TIM-3, which are currently investigated as important therapeutic targets for melanoma treatment. Further studies are needed to better understand how checkpoint molecules are modulated by paracrine and cell contact-dependent interaction between melanoma and immune cells. Such advances are fundamental for the development of new therapeutic approaches focused on melanoma immunotherapy.

Dissertação (mestrado) — Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Brasília, 2022. O melanoma é um tipo de câncer de pele derivado dos melanócitos, com alta taxa de mortalidade e mau prognóstico. Atualmente, várias abordagens imunoterapêuticas estão sob investigação para tratar o melanoma. No entanto, recidivas do câncer e respostas heterogêneas ainda são observadas clinicamente. Portanto, é essencial compreender melhor os mecanismos de imunoescape do melanoma e como esse câncer interage com a resposta imune para garantir o escape imunológico. Nesse trabalho, investigamos qual o impacto do microambiente inflamatório sobre o potencial da linhagem de melanoma metastático MeWo em controlar a resposta imune de células T. Para isso, inicialmente produzimos meios condicionados de células mononucleares do sangue periférico (PBMCs) em repouso (MC) e imunoativados com fitohemaglutinina (iMC). Em seguida, a MeWo foi expandida em RPMI, MC ou iMC e o secretoma gerado após a expansão celular foi coletado e identificado como Sec (RPMI), nSec (não inflamatório) ou iSec (secretoma inflamatório), respectivamente. A partir desse momento, submetemos as PBMCs ativadas com fitohemaglutinina ao Sec, nSec e iSec. Inicialmente, notamos que as células MeWO expostas ao iMC apresentaram expressão elevada de importantes moléculas imunomoduladoras, como PD-L1 e IDO. Além disso, essas células apresentaram aumento na expressão das ectoenzimas CD39 e CD73 em sua membrana, indicando maior potencial de gerar imunossupressão por produção de adenosina. Em adição, nossos dados revelaram que o iSec foi capaz de controlar significativamente a proliferação de células T e reduzir a expressão de marcadores clássicos de ativação como CD69 e HLA-II. Além disso, as PBMCs tratadas com iSec apresentaram expressão reduzida dos principais reguladores das respostas Th1, Th2 e Treg (Tbet e Gata-3 e FOXp3). De modo concordante, notamos expressão reduzida de IFNγ nessas células. Mais importante, as PBMCs cultivadas com iSec apresentaram expressão reduzida dos transcritos TIM-3 e LAG-3, que codificam alvos terapêuticos que têm sido investigados no melanoma. Como pode ser visto, a exposição das células tumorais ao ambiente inflamatório desempenha um papel importante para permitir que essas células atuem com uma função imunossupressora mais potente. Considerando que nosso estudo teve foco em investigar comunicação parácrina, seria importante o desenvolvimento de novas investigações de modo a fornecer um melhor entendimento dos mecanismos de imunoescape do melanoma, com uma abordagem que permita contato celular. Tais avanços são fundamentais para o desenvolvimento de novas abordagens terapêuticas focadas na imunoterapia do melanoma. Melanoma is a type of skin cancer derived from melanocytes, with a high mortality rate and poor prognosis. Currently, several immunotherapeutic approaches are under investigation to treat melanoma. However, cancer relapses and heterogeneous responses are still clinically observed. Therefore, it is essential to better understand the mechanisms of melanoma immunoescape and how this cancer interacts with the immune response to ensure immune escape. In this work, we investigated the inflammatory microenvironment impact on the potential of the MeWo metastatic melanoma cell line to control the T cell immune response. First, we produced the conditioned media (MC) of resting peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) and immunoactivated with phytohemagglutinin (iCM) Then, MeWo was expanded into RPMI, MC or iMC and the secretome generated after cell expansion was collected and identified as Sec (RPMI), nSec (non-inflammatory) or iSec (inflammatory secretome), respectively. From that moment, we submitted the PBMCs activated with phytohemagglutinin to Sec, nSec and iSec. Initially, we noticed that MeWo cells exposed to iMC showed high expression of important immunomodulatory molecules, such as PD-L1 and IDO. In addition, these cells showed an up regulation on the expression of CD39 and CD73 ectoenzymes in their membrane, indicating a greater potential to generate immunosuppression by adenosine production. In addition, our data revealed that iSec was able to significantly control T cell proliferation and reduce the expression of classic activation markers such as CD69 and HLA- II. PBMCs treated with iSec showed reduced expression of the main regulators of Th1, Th2 and Treg responses (Tbet, Gata-3 and FOXp3). Accordingly, we noted reduced expression of IFNγ in these cells. More importantly, PBMCs cultured with iSec showed reduced expression of TIM-3 and LAG-3 transcripts, which encode therapeutic targets that have been investigated in melanoma. As can be seen, the exposure of tumor cells to the inflammatory environment plays an important role in allowing these cells to perform a more potent immunosuppressive function. Considering that our study focused on investigating paracrine communication, it would be important to develop new investigations in order to provide a better understanding of melanoma immunoescape mechanisms, with an approach that allows cellular contact. Such advances are fundamental for the development of new therapeutic approaches focused on melanoma immunotherapy.

Dissertação de mestrado em Genética Molecular, O protozoário Neospora caninum é uma das principais causas de aborto em bovinos, com um impacto negativo económico global estimado em mais de mil milhões de dólares por ano. Em bovinos, N. caninum pode ser transmitido horizontalmente através da ingestão de oocistos que contaminam alimentos ou água, ou verticalmente de vacas gestantes infetadas para os seus fetos. A vacinação é considerada a abordagem mais económica para o tratamento da neosporose, a doença causada por N. caninum. No entanto, até ao momento, não existe uma vacina comercial contra a neosporose. O nosso grupo desenvolveu uma vacina experimental na mucosa contra a neosporose, usando antigénios de membrana de N. caninum mais CpG ODN como adjuvante, que conferiu proteção de longo prazo dependente de IFN-γ em murganhos infetados com este parasita por via intragástrica e intraperitoneal. Essa abordagem de vacinação aumenta a imunidade tanto na mucosa gastrointestinal como sistemicamente. As duas camadas de proteção combinadas têm o objetivo de fornecer proteção contra a neosporose transmitida horizontal e verticalmente. O objetivo deste trabalho teve por base os nossos resultados anteriores em murganhos, e consistiu em reformular a nossa preparação imunogénica para conseguir a imunogenicidade ideal em bovinos. Pretendeu-se também identificar os mecanismos moleculares e celulares associados à proteção, nomeadamente células T de memória e sinalização de IFN-γ em macrófagos de murganho e bovino. Em bovinos, esta abordagem de imunização induziu a produção de anticorpos IgG específicos para o parasita e levou à geração de células T de memória, que proliferaram e produziram grandes quantidades de IFN-γ em resposta à reestimulação ex vivo com antigénios de N. caninum. O IFN-γ produzido em resposta à vacinação induziu a expressão de mecanismos microbicidas contra o parasita em macrófagos, uma vez que murganhos KO condicionais imunizados, com macrófagos que não respondem a IFN-γ, não conseguiram controlar a infeção por N. caninum. A carga parasitária nos órgãos destes animais foi semelhante à dos animais deficientes em IFN-γ, identificando a sinalização de IFN-γ em macrófagos como um mecanismo chave na proteção contra a neosporose. Além disso, em macrófagos bovinos, a expressão de mRNA de GBP4 e GBP5 estava significativamente aumentada em células tratadas com IFN-γ, sugerindo que as “Guanylate Binding Proteins” podem estar envolvidas no controlo do parasita. A obtenção de uma vacina contra a neosporose, que possa prevenir ou reduzir a infeção, terá um grande impacto nos sistemas de produção de gado bovino., The protozoan Neospora caninum is a leading cause of abortion in cattle with an estimated global economic burden exceeding one billion dollars per year. In cattle, N. caninum can be transmitted horizontally through ingestion of oocysts contaminating food or water or vertically from infected pregnant cows to their foetuses. Vaccination is considered the most cost-effective approach to manage neosporosis, the disease caused by N. caninum. However, no commercial vaccine for neosporosis is available to date. We have previously developed an experimental mucosal vaccine for neosporosis, using N. caninum membrane antigens plus CpG adjuvant, that conferred IFN-γ-dependent long-term protection to mice challenged with this parasite. This vaccination approach boosts immunity both in the gastrointestinal mucosa and systemically. The two layers of protection combined are intended to provide protection against horizontally and vertically transmitted neosporosis. First, by promoting mucosal parasite-specific IgA production that can counteract parasite entry into non-infected hosts and second, by inducing the differentiation of IFN-γ-producing T cells, which might impair parasite dissemination and proliferation. Building on our previous results in mice, we aimed here to reformulate our immunogenic preparation to attain optimal delivery and immunogenicity in cattle. We also aimed at identifying the molecular and cellular mechanisms associated with protection, namely memory T cells and IFN-γ-signalling in both mouse and bovine macrophages. In cattle, this immunization approach induced the production of specific IgG antibodies and led to the generation of memory T cells that proliferated and produced high amounts of IFN-γ in response to ex vivo N. caninum antigen recall. Produced IFN-γ induced the expression of parasite microbicidal mechanisms in macrophages cells, since immunized conditional KO mice, with macrophages unresponsive to IFN-γ, failed to control N. caninum infection. Organ parasite burden of these animals was similar to that of animals deficient in IFN-γ, when a high dose of parasite inoculum was used. However, when using a low parasite inoculum dose, these conditional KO mice were more resistant than IFN-γ deficient, indicating that although macrophages are key effectors in N. caninum control, cells other than macrophages also contribute to protection against neosporosis in an IFN-γ dependent manner. Also, in bovine macrophages, expression of GBP4 and GBP5 mRNA was significantly upregulated in IFN-γ-treated cells, suggesting that guanylate binding proteins might be involved in parasite control. Obtaining a neosporosis vaccine that could prevent or reduce infection will have a major impact on cattle production systems., This work was carried out at I3s and financed by FEDER - Fundo Europeu de Desenvolvimento Regional funds through the COMPETE 2020 - Operacional Programme for Competitiveness and Internationalisation (POCI), Portugal 2020, and by Portuguese funds through FCT - Fundação para a Ciência e a Tecnologia/Ministério da Ciência, Tecnologia e Ensino Superior in the framework of the project PTDC/CVT-CVT/31020/2017.

The essential oil of alfavaca (Ocimum gratissimum) contains important compounds, such as 1.8-cineol and eugenol. This study evaluated the effects of diets containing alfavaca essential oil on the zootechnical performance, plasma glucose, leukocyte respiratory activity, haematology, and intestinal histomorphometry in “cachara” (Pseudoplatystoma reticulatum) challenged with Aeromonas hydrophila. A total of 300 juvenile fish, with an average total length of 14.98 ± 0.28 cm and average weight of 18.84 ± 1.22 g, distributed in 20 tanks of 80 L, were fed twice a day with a diet containing essential oil at 0.5, 1.0, or 1.5% or without its inclusion in five replicates. After 45 days, blood collection and mid-intestinal bowel were sampled, before a challenge with Aeromonas hydrophila was performed. The fish supplemented with 1.0% of essential oil presented better weight gain, mean corpuscular volume, concentration of thrombotic and neutrophils, respiratory activity of leukocytes, and height of villi (p < 0.05) when compared to other groups. The cumulative mortality response was lower for fish fed 1.5% essential oil of alfavaca diets. Thus, the use of alfavaca essential oil is recommended in the diet of cachara catfish (P. reticulatum) at the level of up to 1.0% for 45 days for improvements in the zootechnical, haematological, and intestinal histomorphometric parameters. O óleo essencial de alfavaca (Ocimum gratissimum) contém componentes importantes, como por exemplo o 1.8-cineol e o eugenol. Este estudo avaliou os efeitos de dietas contendo óleo essencial de alfavaca sobre o desempenho zootécnico, glicose plasmática, atividade respiratória leucocitária, hematologia e histomorfometria intestinal em cachara (Pseudoplatystoma reticulatum) desafiado com Aeromonas hydrophila. Um total de 300 peixes juvenis, com comprimento total médio de 14,98 ± 0,28 cm e peso médio de 18,84 ± 1,22 g, distribuídos em 20 tanques de 80 L, alimentados duas vezes ao dia com dieta contendo o óleo essencial a 0,5, 1,0 ou 1,5 % ou sem inclusão de óleo em cinco repetições. Após 45 dias, foi realizada a biometria final, coleta de sangue, amostra do intestino médio e desafio com Aeromonas hydrophila. Após o período experimental, a dieta suplementada com 1,0% do óleo essencial apresentou melhor ganho de peso, volume corpuscular médio, concentração de trombóticos e neutrófilos, atividade respiratória de leucócitos e altura de vilosidades (p < 0,05) quando comparada aos demais grupos. A resposta de mortalidade cumulativa foi menor para peixes alimentados com dietas com o óleo essencial de alfavaca a 1,5%. Assim, o uso de óleo essencial de alfavaca é recomendado na dieta do bagre cachara (P. reticulatum) no nível de até 1,0% por 45 dias para melhorias nos parâmetros zootécnicos, hematológicos e histomorfométricos intestinais.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, 2016. As células dendríticas (DCs) são um dos mais importantes componentes do sistema imunológico e desempenham funções essenciais como reconhecimento do antígeno no local da infecção bem como sua internalização e apresentação de forma eficiente. Estas células tem papel central na ligação das respostas imunes naturais e adquiridas contra Trypanosoma cruzi, o agente causador da doença de Chagas. As DCs podem modular a resposta imunológica do hospedeiro, dependendo da sua subpopulação, do seu nível de maturação, das citocinas presentes no meio e do receptor dessas células envolvido nas interações com o T. cruzi, influenciando o desenvolvimento das formas clínicas da doença. Dentro desde contexto, esta dissertação apresenta a padronização da obtenção de DCs provenientes de monócitos de três doadores voluntários e otimização da diferenciação da forma tripomastigota metacíclica (TM) do parasito in vitro para posterior interação entre ambas as células e extração do RNA total para sequenciamento e montagem do transcriptoma por duplicata. Entre as cepas G e CL Brener de T. cruzi, a 2ª mostrou um melhor rendimento no que diz respeito a velocidade de crescimento em cultura, porcentagens finais de metaciclogênese e taxa de infecção. Durante a obtenção e diferenciação das DCs, três técnicas foram aplicadas para confirmação, incluindo citometria de fluxo, visualização em microscópio óptico e de fluorescência. O tempo estabelecido para interação parasito-célula hospedeira foi de 12 h, depois de transcorrido esse tempo obteve-se 39% de taxa de infecção, média de 2,4 amastigotas/DC infectada e 80% de DCs infectadas ativadas contra 47% das células controle. O passo seguinte foi a extração do RNA total das amostras controle e infectadas para sequenciamento e a montagem dos reads. Os resultados provenientes deste processo mostram ser confiáveis devido à cobertura satisfatória dos reads dentro do genoma humano com ~23.000.000 reads por amostra, e ao coeficiente de correlação próximo a 1 entre as duplicatas, fortes indícios da qualidade dos dados. A obtenção de uma visão detalhada da biologia das células apresentadoras de antígenos após os contatos iniciais com T. cruzi poderá proporcionar novos alvos para o tratamento da doença e ajudará no entendimento da evolução diferencial da doença nos pacientes e nos mecanismos de resistência e tolerância ao T. cruzi. Dendritic cells (DCs) are one of the most important components of human immunologic system and are able to develop essential functions like antigen recognition at the infection site and its internalization and presentation are accomplished with high efficiency. These cells play a central role in linking natural and acquired immune response against Trypanosoma cruzi, the etiologic agent of Chagas disease. DCs can modulate host immunologic response depending on their subset, maturation level, cytokine milieu and DC receptor involved in the interactions with T. cruzi, influencing the development of the disease clinic forms. Therefore, this dissertation presents the standardization of DCs derived from monocyte obtained from three voluntaries and the optimization of in vitro metacyclic trypomastigote form differentiation to proceed to interaction between both cells and subsequently total RNA extraction for sequencing and transcriptome assembly. Among G and CL Brener T. cruzi strains, the second yielded more with respect to culture grow velocity, final metacyclogenesis percentages and infection rate. During DCs obtainment and differentiation, three technics were applied to confirmation, including flow cytometry and optic or fluorescence microscopy visualization. A parasite-host cell interaction time of 12 h was established and after it, infection rates of about 39%, an average of 2.4 amastigotes/infected DC were obtained and also 80% of DCs from infected assays were activated. The next step was extraction of total RNA from control and infected samples for sequencing and assembly of the reads accordingly to human reference genome. These results showed good reliability because of the satisfactory human genome coverage obtained with ~23,000,000 reads per sample, and correlation coefficient of ~1 between duplicates, which are strong indications of data quality. A detailed vision of antigen presenting cells biology after initial contacts with T. cruzi could provide new targets for the disease treatment and it will help understanding the differential evolutions of Chagas disease in patients and in resistance and tolerance to parasite.

Absolute uterine factor infertility (AUFI) refers to women who are unable to conceive or maintain pregnancy due to the absence of the uterus or the presence of an anatomically or physiologically dysfunctional uterus. New strategies have been sought in recent decades to solve this problem, such as uterine transplantation. However, little is known about uterine immunogenicity and there is little data on the immune response to transplanted uterine tissue. Thus, this study aimed to demonstrate how the body's immune response to uterine transplantation can occur through a literature review. For that, a search was carried out in the SciELO, LILACS, PubMed / MEDLINE and Science Direct databases. According to the data obtained, it is believed that the uterus is an immunoprivileged organ in relation to the rapid immune response exerted by the organism, however the experiences of allogeneic uterine transplantation showed rejection patterns similar to those observed in other solid organ transplants. In general, rejection was characterized by myometrial invasion by neutrophils and macrophages, followed by T cells (mainly CD8 +), followed by necrosis, atrophy and fibrosis. This response has a unique characteristic of being mediated by interactions of the T cell receptor (TCR) with molecules of the donor's own MHC system. Therefore, with this study it was possible to understand how the possible immune response to uterine transplantation would occur, which can lead to the rejection process. La infertilidad por factor uterino absoluto (AUFI) se refiere a las mujeres que no pueden concebir o mantener el embarazo debido a la ausencia del útero o la presencia de un útero anatómica o fisiológicamente disfuncional. En las últimas décadas se han buscado nuevas estrategias para solucionar este problema, como el trasplante de útero. Sin embargo, se sabe poco sobre la inmunogenicidad uterina y hay pocos datos sobre la respuesta inmune al tejido uterino trasplantado. Por lo tanto, este estudio tuvo como objetivo demostrar cómo puede ocurrir la respuesta inmune del cuerpo al trasplante uterino a través de una revisión de la literatura. Para ello se realizó una búsqueda en las bases de datos SciELO, LILACS, PubMed / MEDLINE y Science Direct. Según los datos obtenidos, se cree que el útero es un órgano inmunoprivilegiado en relación a la rápida respuesta inmune que ejerce el organismo, sin embargo las experiencias de trasplante uterino alogénico mostraron patrones de rechazo similares a los observados en otros trasplantes de órganos sólidos. En general, el rechazo se caracterizó por la invasión del miometrio por neutrófilos y macrófagos, seguida de linfocitos T (principalmente CD8 +), seguida de necrosis, atrofia y fibrosis. Esta respuesta tiene la característica única de estar mediada por interacciones del receptor de células T (TCR) con moléculas del propio sistema MHC del donante. Por tanto, con este estudio se pudo entender cómo se produciría la posible respuesta inmune al trasplante uterino, que puede conducir al proceso de rechazo. Infertilidade de fator uterino absoluto (AUFI) refere-se a mulheres que são incapazes de conceber ou manter a gravidez devido à ausência do útero ou à presença de um útero anatômica ou fisiologicamente disfuncional. Novas estratégias têm sido buscadas nas últimas décadas para solucionar esse problema, como o transplante uterino. No entanto, pouco se sabe sobre a imunogenicidade uterina e há poucos dados sobre a resposta imunológica a tecido uterino transplantado. Assim, este estudo teve como objetivo demonstrar como a resposta imune do organismo ao transplante uterino pode ocorrer por meio de uma revisão da literatura. Para tanto, foi realizada uma busca nas bases de dados SciELO, LILACS, PubMed/MEDLINE e Science Direct. De acordo com os dados obtidos, acredita-se que o útero seja um órgão imunoprivilegiado em relação à rápida resposta imune exercida pelo organismo, porém as experiências do transplante uterino alogênico mostraram padrões de rejeição semelhantes aos observados em outros transplantes de órgãos sólidos. Em geral, a rejeição foi caracterizada por invasão miometrial por neutrófilos e macrófagos, seguidos por células T (principalmente CD8 +), seguida de necrose, atrofia e fibrose. Essa resposta tem uma característica única de ser mediada por interações do receptor de células T (TCR) com moléculas do próprio sistema MHC do doador. Portanto, com este estudo foi possível compreender como ocorreria a possível resposta imunológica ao transplante uterino, que pode levar ao processo de rejeição.

This case report proposes to address some influential factors on the monitoring of COVID-19 and the containment of new cases from the analysis of the immune response and antibody development. From this perspective, a case of SARS-CoV-2 infection is reported in which the patient presented, in serology, IgM reagent and IgG non-reagent in a first examination and, after 17 days, a new test reported IgM and IgG non-reagents. From this report in question, this study aims to consider some circumstances in the context of the disease, such as its phases and the consolidation of immunity. Thus, the discussion about the cascades and the immunological windows from researches related to symptomatic and asymptomatic individuals, correlating the aspects of possible reinfections, was evidenced. Therefore, scientific data were verified to evaluate the efficiency of the methods of detection of the disease, as well as their accuracy, according to the different contexts in which the individuals affected by the infection are. Este relato de caso propõe-se a abordar alguns fatores influentes sobre o monitoramento da COVID-19 e a contenção dos novos casos a partir da análise da resposta imunológica e do desenvolvimento de anticorpos. Sob essa perspectiva, reporta-se um caso de infecção pelo SARS-CoV-2 em que o paciente apresentou, na sorologia, IgM reagente e IgG não-reagente em um primeiro exame e, após 17 dias, uma nova testagem relatou IgM e IgG não-reagentes. A partir deste relato em questão, esse estudo visa ponderar sobre algumas circunstâncias no contexto da doença, como as suas fases e a consolidação da imunidade. Assim sendo, evidenciou-se a discussão sobre as cascatas e as janelas imunológicas a partir de pesquisas relacionadas a indivíduos sintomáticos e assintomáticos, correlacionando os aspectos de possíveis reinfecções. Por conseguinte, dados científicos foram averiguados para avaliar a eficiência dos métodos de detecção da doença, bem como a sua precisão, de acordo com os diferentes contextos em que os indivíduos acometidos pela infecção se encontram.

Fundação de Apoio a Pesquisa e à Inovação Tecnológica do Estado de Sergipe - FAPITEC/SE Leprosy is a chronic infectious disease with a slow clinical evolution, caused by the intracellular bacillus Mycobacterium leprae. This disease can be classified according to operational forms in paucibacillary and multibacillary, or according to histopathological criteria in the forms: indeterminate, tuberculoid, dimorphic and virchowian. In the clinical evolution of the disease, patients may present complications such as leprosy reactions and the occurrence of physical disability. The clinical manifestations and complications of leprosy are related to several factors such as the genetic background and immunological aspects inherent to the host. However, the exact role of cytokines in the characteristics of leprosy is still unclear. Therefore, the objective of this research was to investigate the role of cytokines in the complications and clinical forms of leprosy. 104 patients diagnosed with leprosy and their contact controls (n = 70) participated in the research. These were classified according to the clinical and operational form of the disease, as well as the occurrence of leprosy reaction and physical disability. After blood collection and serum separation, the dosage of cytokines of the profiles Th1, Th2, Treg, Th17, Th9 and Th22 produced by patients and contacts using the Luminex technique was observed. Statistical analyzes were performed using the Graphpad Prisma software and the cluster formation was performed using the R program (3.6.0). We observed that cytokines of inflammatory profile IL-12p70, IFN-y, TNF- α and IL-18 were related to the virchowian form, as well as being linked to the occurrence of leprosy and physical disability. The cytokines IL-17 and IL-22 was associated with the tuberculoid form. As for the cluster analysis, it was observed the formation of a cluster formed by the cytokines IFN-γ, TNF-α, IL-9, IL-5, IL-10 and IL18 that are involved with the main complications of leprosy. On the other hand, there was formation of the cluster composed of the cytokines IL-12p70, IL-1β, IL-23, IL-5, IL-2 and IL-17A in CC, this cluster may be related to an effective immune response against M. leprae. We conclude that cytokines of the Th1 profile (IFN-y, TNF-α e IL18) are involved with leprosy complications. In addition, we identified cytokines (TNFα, IL-18, IL-4, IL-6, IL-10 e IL-27) involved in the occurrence of leprosy complications, which can function as biomarkers for monitoring the clinical course of the disease. A hanseníase é uma doença infecciosa crônica e de evolução clínica lenta, causada pelo bacilo intracelular Mycobacterium leprae. Essa doença pode ser classificada de acordo com suas formas operacionais em paucibacilar e multibacilar; ou segundo critérios histopatológicos nas formas clínicas: indeterminada, tuberculóide, dimorfa e virchowiana. Na evolução clínica da doença os pacientes podem apresentar complicações como as reações hansênicas e ocorrência de incapacidade física. As manifestações clínicas e complicações da hanseníase estão relacionadas a diversos fatores como o background genético e aspectos imunológicos inerentes ao hospedeiro. Contudo, ainda não está esclarecido o papel exato das citocinas nas características da hanseníase. Diante disso, o objetivo dessa pesquisa foi investigar o papel das citocinas nas complicações e formas clínicas da hanseníase. Participaram da pesquisa 104 pacientes diagnosticados com hanseníase e seus controles contactantes (n = 70). Os pacientes foram classificados quanto à forma clínica e operacional da doença, bem como à ocorrência de reação hansênica e incapacidade física. Após coleta de sangue e separação do soro, foram dosadas citocinas dos perfis Th1, Th2, Treg, Th17, Th9 e Th22 através da técnica de Luminex. As análises estatísticas foram realizadas no software Graphpad Prisma e a formação de cluster foi realizada no programa R (3.6.0). Foi observado que citocinas do perfil inflamatório IL-12p70, IFN-y, TNF-α e IL-18, apesar de pertencer ao perfil Th1, foram associados com a forma virchowiana e com a ocorrência de reação hansênica e incapacidade física. Já as citocinas IL-17 e IL-22, também do perfil inflamatório, foram associadas às formas tuberculóide. Quanto à análise de cluster, foi observado um cluster formado pelas citocinas IFN-γ, TNF-α, IL9, IL-5, IL-10 e IL-18 que estão envolvidos com as principais complicações da hanseníase. Por outro lado, houve formação do cluster composto pelas citocinas IL12p70, IL-1β, IL-23, IL-5, IL-2 e IL-17A em CC, este cluster pode estar relacionado a uma resposta imune eficaz contra M. leprae. Os resultados desse estudo demonstram que citocinas do perfil Th1 (IFN-y, TNF-α e IL-18) estão envolvidas com as complicações da hanseníase. Ademais, identificamos citocinas (TNF-α, IL-18, IL-4, IL6, IL-10 e IL-27) envolvidas na ocorrência de complicações da hanseníase, as quais podem funcionar como biomarcadores para o monitoramento da evolução clínica da doença. São Cristóvão

Submitted by Helena Bejio (helena.bejio@unioeste.br) on 2020-09-17T20:07:05Z No. of bitstreams: 2 THESIS - CURRENT.pdf: 1137787 bytes, checksum: 970bfc11b2e1d631c2995ef8767e64b2 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Made available in DSpace on 2020-09-17T20:07:05Z (GMT). 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A total of 64 crossbred piglets, entire male, weaned at 25-days-old with an average initial body weight of 7.168 ± 0.287 kg were allocated to a randomized complete block design consisting of four treatments repeated twice in the two blocks: control diet (negative control), control diet + antimicrobial growth promoter (AGP, 150 g of tiamulin/ton of diet), control diet + 15 mg IAP/kg of diet and control diet + 30 mg IAP/kg of diet, four replications per block with two piglets per experimental unit. All piglets were orally challenged with 6 mL of a solution containing ETEC K88+ (106 CFU/mL). Prior to the beginning of the experimental period, was determined the best microencapsulation process of IAP in a model involving adhesion and phagocytic activity of equine bronchoalveolar macrophage. In Exp. I, the variables analyzed were growth performance, DO, blood metabolites (urea, glucose and alkaline phosphatase), intestinal morphometry, relative organ weight and in vitro simulation of microencapsulated IAP on pH modulation capacity and its dilution in acidic and basic solution. At 19 experimentation days, six animals per treatment were slaughtered for data collection and biological samples. Exp. II involved the evaluation of the effect of IAP on intestinal health by bacterial populations counts in the intestinal content and adhered to mesenteric lymph node, digestive organ content pH, HGR, proinflammatory markers in the liver and intestinal epithelium and histopathological description of the intestinal epithelium. In pre-starter I phase, piglets that received 30 mg IAP added in the diet or control diet showed better feed conversion rate (P = 0.075) compared to those fed 15 mg IAP. Piglets that consumed 30 mg IAP or control diet showed greater (P = 0.004) average daily body weight gain (ADBWG) in the pre-starter II phase. Piglets fed 15 mg IAP had lower average daily feed intake (ADFI) (P = 0.033) compared to piglets with diets containing AGP. At the total period, there was a difference between treatment, in which the piglets fed 15 mg IAP showed a reduction in ADBWG (P = 0.040) and ADFI (P = 0.092). For the pre-starter II phase, there was a difference (P = 0.044) of treatment, in which the piglets that consumed the diet containing 30 mg IAP showed a 24% improvement in DO compared to the treatment with 15 mg IAP. We observed the main effect (P = 0.009), with the addition of 30 mg IAP in the post-challenge phase in decreasing piglet DO (5.56%) when compared to those receiving AGP (16.67%). For the total period, piglets that consumed 15 mg IAP showed greater (P = 0.007) DO when compared to those receiving 30 mg IAP. No differences between treatments were obtained in any of the pre- and post-challenge plasma concentration indicators. The spleen relative weight of piglet increased (P = 0.043) in response to 30 mg IAP treatment. The Enterobacteriaceae counts in the cecum content were lower (P = 0.002) in piglets that receiving 30 mg IAP compared with those for AGP treatment. Piglets fed 30 mg IAP presented lower (P = 0.007) Enterobacteriaceae count in the colon when compared to the other treatments. For the Enterobacteriaceae count adhered to the mesenteric lymph nodes (MLN), there was an increase (P = 0.006) in piglets fed diets with AGP. Piglets fed the control diet or AGP showed greater (P = 0.000) lactic acid bacteria (LAB) count in the cecum content. There was a treatment effect (P = 0.013) on LAB count in MLN, in which piglets fed with AGP or that received 30 mg IAP had a greater count when compared to those with 15 mg IAP. The experimental treatments did not influence (P > 0.05) the pH of the digestive tract contents, intestinal morphology, TNF-α, COX-2 activity, TLR4 and proliferating cell nuclear antigen in the jejunum and liver, nor on HGR. Piglets that received 30 mg IAP showed a slight reduction on TNF-α in jejunum (4.17 times) and liver (1.9 times) when compared to piglets in the control group or with AGP, respectively. Based on the present results, the addition of 30 mg IAP in diets improves the growth performance and attenuates the DO in piglets in the post-weaning period. In addition, the results suggest that the addition of 30 mg IAP provides an ability to mitigate intestinal injuries and maintain the homeostasis of the intestinal physiology of piglets. Neste estudo, nosso objetivo foi o de avaliar o efeito adicional da fosfatase alcalina intestinal (FAI) em dietas sobre o desempenho zootécnico, a ocorrência de diarreia (OD), os metabólitos sanguíneos, a histologia intestinal, o peso relativo de órgãos, as contagens de populações bacterianas, pH do conteúdo do trato digestório, a reserva de glicogênio hepático, a descrição histopatológica e marcadores pró-inflamatórios de leitões desafiados com Escherichia coli enterotoxigênica (ETEC) K88+. Um total de 64 leitões mestiços, machos inteiros, desmamados com 25 dias de idade e peso corporal inicial médio de 7,168 ± 0,287 kg foram alocados em um delineamento experimental de blocos casualizados completos, consistindo de quatro tratamentos repetidos duas vezes nos dois blocos: dieta controle (controle negativo), dieta controle + promotor de crescimento antimicrobiano (PCA, 150 g de tiamulina/tonelada de dieta), dieta controle + 15 mg de FAI/kg de dieta e dieta controle + 30 mg de FAI/kg de dieta, quatro repetições por bloco com dois leitões por parcela experimental. Todos os leitões foram desafiados via oral com 6 mL de uma solução contendo ETEC K88+ (106 UFC/mL). Previamente ao início do período experimental, foi determinado o melhor processo de microencapsulação da FAI em um modelo envolvendo a adesão e a atividade fagocítica do macrófago broncoalveolar de equinos. No Exp. I, as variáveis analisadas foram o desempenho zootécnico, a OD, os metabólitos sanguíneos (ureia, glicose e fosfatase alcalina), a morfometria intestinal, o peso de órgãos relativo e a simulação in vitro da FAI microencapsulada sobre a capacidade de modulação do pH e sua diluição em solução ácida e básica. Aos 19 dias de experimentação, seis animais por tratamento foram abatidos para coleta de dados e amostras biológicas. O Exp. II envolveu a avaliação do efeito da FAI sobre a saúde intestinal pela contagem de populações bacterianas no conteúdo dos intestinos e aderidas aos linfonodos mesentéricos, pH do conteúdo do trato digestório, RGH, marcadores pró-inflamatórios no fígado e no epitélio intestinal e descrição histopatológica do epitélio intestinal e fígado. Na fase pré-inicial I, os leitões que receberam 30 mg de FAI adicionada na dieta ou do grupo controle mostraram melhor taxa de conversão alimentar (P = 0,075) em comparação aos alimentados com 15 mg de FAI. Houve efeito (P = 0,004) de tratamento sobre o ganho de peso corporal diário médio (GPCDM) na fase pré-inicial II. Os leitões que foram alimentados com 15 mg de FAI tiveram menor consumo de ração diário médio (CRDM) (P = 0,033) em comparação aos leitões com dietas contendo PCA. No período total, houve diferença sobre o GPCDM (P = 0,040) e CRDM (P = 0,092). Para a fase pré-inicial II, houve diferença (P = 0,044) de tratamento, em que os leitões que consumiram a dieta contendo 30 mg de FAI apresentaram melhora de 24% na OD em comparação aos do tratamento com 15 mg de FAI. Nós observamos o principal efeito (P = 0,009), com a adição de 30 mg de FAI na fase pósdesafio na redução da OD de leitões (5,56%) quando comparado aos que receberam PCA (16,67%). Para o período total, houve efeito (P = 0,007) dos tratamentos, em que os leitões que consumiram 15 mg de FAI mostraram maior OD quando comparado aos recebendo 30 mg de FAI. Não foram obtidas diferenças entre os tratamentos em qualquer um dos indicadores de concentração plasmática pré e pós-desafio. O peso relativo do baço de leitões aumentou (P = 0,043) em resposta ao tratamento com 30 mg de FAI. As contagens de Enterobacteriaceae no conteúdo do ceco foram menores (P = 0,002) para os leitões que receberam 30 mg de FAI em comparação com aqueles do tratamento com PCA. Os leitões alimentados com 30 mg de FAI apresentaram menor (P = 0,007) contagem de Enterobacteriaceae no cólon quando comparados aos demais tratamentos. Para a contagem de Enterobacteriaceae aderidas aos linfonodos mesentéricos (LM), houve redução (P = 0,006) nos leitões que ingeriram dietas com PCA. Os leitões alimentados com a dieta controle ou com PCA mostraram maior (P = 0,000) contagem para bactérias ácido lácticas (BAL) no conteúdo do ceco. Houve efeito (P = 0,013) de tratamento sobre a contagem de BAL nos LM, em que os leitões alimentados com PCA ou que receberam 30 mg de FAI apresentaram maior contagem quando comparados aos com 15 mg de FAI. Os tratamentos experimentais não influenciaram (P > 0,05) o pH do conteúdo de órgãos digestórios, a morfologia intestinal, a concentração de TNF-α, de TLR4 e do antígeno nuclear de proliferação celular, e a atividade de COX-2 no jejuno e fígado, nem sobre a RGH. Os leitões que receberam 30 mg de FAI apresentaram ligeira redução do TNF-α no jejuno (4,17 vezes) e no fígado (1,9 vezes) quando comparados aos leitões do grupo controle ou com AGP, respectivamente. Com base nos resultados, a adição de 30 mg de FAI nas dietas melhora o desempenho zootécnico e atenua a OD em leitões no período pós-desmame. Além disso, os resultados sugerem que a adição de 30 mg de FAI proporciona uma capacidade de mitigar lesões intestinais e manter a homeostase da fisiologia intestinal de leitões.

Salmonella Gallinarum is capable of causing high mortality in birds of the order Galliformes. This study aimed to relate the presence of clinical signs with the recovery of Salmonella Gallinarum from organs and c loacal swabs of Japanese quails (Coturnix coturnix) experimentally infected. A total of 70 female quails were housed in a pair per cage and divided in two groups (IG: quails inoculated with 1.5x106 CFU of Salmonella Gallinarum Nalr/mL and CG: control group). After the inoculation, birds were evaluated three times a day to verify the presence of clinical signs. Birds that presented ruffled feathers, eyes closed and remained quiet in the cage were removed for euthanasia, as well as the same number of birds from the inoculated groups that presented no clinical signs and from the control group. Cloacal swabbing was performed following euthanasia for the sampling of liver, spleen, caeca, ovarian follicles and lung for microbiological procedure. Quails with clinical signs and quails found dead presented positivity of 100%. While inoculated quails with no clinical signs presented a lower positivity (38.5%). Therefore, quails with septicemia caused by SG present clinical signs of the disease and the pathogen can be isolated and quantified in the organs. RESUMO Salmonella Gallinarum pode causar alta mortalidade em aves da ordem Galliformes. Objetivou-se neste estudo relacionar a presença de sinais clínicos com a recuperação de Salmonella Gallinarum de órgãos e swabs cloacais de codornas japonesas (Coturnix coturnix) experimentalmente infectadas. Um total de 70 codornas fêmeas foram alojadas em par por gaiola e divididas em dois grupos (IG: codornas inoculadas com 1,5x106 UFC de Salmonella Gallinarum Nalr / mL e CG: grupo controle). Após a inoculação, as aves foram avaliadas três vezes ao dia para se verificar a presença de sinais clínicos. As aves que se apresentaram com penas eriçadas, olhos fechados e permaneciam imóveis na gaiola foram removidas para a eutanásia, assim como o mesmo número de aves dos grupos inoculados que não apresentaram sinais clínicos e do grupo controle. O swab cloacal foi realizado após a eutanásia para a amostragem de fígado, baço, ceco, folículos ovarianos e pulmão para procedimento microbiológico. As codornas com sinais clínicos e as encontradas mortas apresentaram positividade de 100%, enquanto as codornas inoculadas sem sinais clínicos apresentaram menor positividade (38,5%). Portanto, codornas com septicemia causada por SG apresentam sinais clínicos da doença e o patógeno pode ser isolado e quantificado em diversos órgãos.

A produção total de anticorpos (Sample-to-Positive ratio; S/P ratio) vem sendo proposta como uma característica indicadora para melhorar o desempenho reprodutivo de porcas infectadas com o vírus da PRRS (PRRSV). Os objetivos deste trabalho foram avaliar a base genética do desempenho reprodutivo de matrizes suínas durante um surto de PRRS e a sua relação com o sistema imune. Amostras de sangue foram coletadas de 1231 porcas de raça pura (690 Duroc e 541 Landrace) após um surto de PRRS para a realização do teste ELISA e posterior genotipagem. Essas matrizes tiveram dados de desempenho reprodutivo coletados durante o surto da doença em relação ao número de leitões nascidos vivos (NBA), natimortos (NSB), mumificados (NM), nascidos mortos (NBD; NSB + NM), total de nascidos (TNB; NBA + NBD) e desmamados (NW), sendo genotipadas para 29799 marcadores do tipo SNPs. As estimativas de herdabilidade e os estudos de associação genômica ampla (GWAS) foram realizados para S/P ratio e características reprodutivas para cada raça separadamente. As estimativas de herdabilidade (±erro padrão) de S/P ratio durante o surto de PRRS foram moderadas, com 0,35±0,08 para Duroc e 0,34±0,09 para Landrace. Para S/P ratio, o GWAS identificou um importante locus de característica quantitativa (QTL) no cromossomo (chr) 7 [24-25 megabases (Mb)], explicando 15% da variação genética (VG) e outro no chr 8 (25 Mb) explicando 2,4% VG para Duroc. O GWAS também identificou dois QTLs no chr 7 (23-24 Mb; 108-109 Mb) explicando, respectivamente, 31% e 2.2% VG para Landrace. As estimativas de herdabilidade para as características reprodutivas foram, de modo geral, baixas nas duas raças. Correlações genéticas favoráveis foram observadas entre S/P ratio e NBA (0.61±0.34) e NBD (-0.33±0.32) em porcas da raça Landrace durante o surto da doença. Poucos QTL foram identificados para características reprodutivas em porcas das raças Duroc e Landrace. Acurácias de Predição Genômica (APG) foram medianas a altas para S/P ratio em SNPAll, SNPMHC e SNPRest para a predição dentro da raça. No entanto, APG foram baixas para características reprodutivas. Os resultados indicam que as características reprodutivas apresentam baixa herdabilidade durante o surto de PRRS, com poucos QTL identificados. Estes resultados validam a utilização de S/P ratio como uma característica indicadora, herdável e geneticamente correlacionada com características reprodutivas de interesse durante um surto de PRRS. Total antibody response, measured as sample-to-positive ratio (S/P ratio), has been proposed as an indicator trait to improve reproductive performance in pigs infected with the porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) virus (PRRSV). The objectives of this work were to evaluate the genetic basis of reproductive performance in pigs and to perform host-genetic analyses for S/P ratio in Duroc and Landrace sows that experienced a PRRS outbreak. Serum samples were taken from 1231 purebred sows (690 Duroc and 541 Landrace) after a PRRS outbreak for subsequent PRRSV ELISA analysis and SNP genotyping. These sows had 29799 SNP genotypes one, with farrowing performance data during the outbreak on: number of piglets born alive (NBA), stillborn piglets (NSB), mummified piglets (NM), piglets born dead (NBD; NSB+NM), total number of piglets born (TNB; NBA+NBD), and piglets weaned (NW). Heritability and genome-wide association studies (GWAS) were performed for S/P ratio and reproductive traits, separately per breed. Genomic prediction accuracies (GPA) were obtained for each trait within and between breeds. Heritability estimates (±standard error) of S/P ratio during the PRRS outbreak were moderate, with 0.35±0.08 for Duroc and 0.34±0.09 for Landrace. For S/P ratio, the GWAS identified a major quantitative trait locus (QTL) on chromosome (chr) 7 [24-25 megabases (Mb)] explaining 15% of the genetic variance (GV), and one on chr 8 (25 Mb) explaining 2.4% GV for Duroc. For Landrace, GWAS identified a QTL on chr 7 (23-24 Mb) explaining 31% GV, and another one on chr 7 (108-109 Mb) explaining 2.2% GV. Heritability estimates for reproductive traits were overall low for both breeds. Favorable genetic correlations between S/P ratio with NBA (0.61±0.34) and NBD (-0.33±0.32) were observed for Landrace sows during the PRRS outbreak. Few QTL were identified in Duroc and Landrace sows for reproductive traits. GPA were moderate to high for S/P ratio for the within-breed prediction. On the other hand, GPA were low to moderate for most reproductive traits. The results indicate that reproductive traits are lowly heritable during a PRRS outbreak with few QTL identified in Duroc and Landrace sows. These results also validate previous studies that S/P ratio in PRRSV-infected sows is heritable and favorably genetically correlated with some reproductive traits during a PRRS outbreak. S/P ratio has then the potential to be used as an indicator trait to improve the reproductive performance of PRRSV-infected sows.

Dissertação de mestrado em Bioinformática, O tratamento para o cancro tem visto grandes avanços nos últimos anos. Em conjunto com a evolução das técnicas de sequenciação, novos e melhores tratamentos têm sido desenvolvidos. A imunoterapia é um tipo de tratamento para o cancro que usa o mecanismo de imunovigilancia do sistema imunitário para combater o cancro. Este ramo de investigação e em especial o estudo dos neoantigénios tem atraído imensa atenção nos últimos anos. Os neoantigénios são péptidos anormais que derivam de mutações associadas ao cancro e que podem provocar uma resposta imunitária mediada por linfócitos T. Uma vez que estes péptidos são específicos para tecidos cancerígenos e por isso não estão presentes em tecidos normais, estes têm um grande potencial para serem reconhecidos pelo sistema imunitário levando à ativação de células T que atacam as células tumorais. Contudo, nem todos os neoantigénios conseguem efetivamente gerar uma resposta imunitária, assim, é necessário identificar, de todos os neoantigénios presentes num tumor, aqueles mais prováveis de gerar uma resposta imunitária. Esta dissertação apresenta uma pipeline de machine learning que é capaz de identificar este tipo de neoantigénios. Vários modelos de machine learning e diferentes datasets foram utilizados para atingir este objetivo. Os algoritmos utilizados foram Support Vector Machines, K-nearest neighbors, Logistic Regression e Random Forests. Concluiu-se que otimizar os hiperparâmetros dos modelos de machine learning melhora a performance dos modelos. O efeito do número de casos negativos na performance dos modelos também foi avaliado e concluiu-se que os modelos de machine learning conseguem fazer previsões mais eficazes se forem aplicados em datasets balanceados. O algoritmo que deu melhores previsões foi o Random Forests, desta forma este algoritmo foi também aplicado a um dataset de diferente tamanho criado com um número de casos positivos mais elevado usando a técnica synthetic minority oversampling technique. O algoritmo Random Forests aplicado neste dataset atingiu um f1-score de 0.89, sensibilidade de 0.95 e precisão de 0.86. Infelizmente, estes bons resultados não se refletiram no caso de estudo usado para testar novamente o modelo, o que pode ser explicado pelo facto de os dados usados para treinar os modelos serem tão diferentes dos dados do caso de estudo. Por esta razão, no futuro, a investigação deve focar-se em melhorar os dados de treino para que estes melhor reflitam o que acontece em pacientes reais. Apesar disto, existe a oportunidade para um promissor trabalho futuro., Cancer treatment has been improving in the past years. Along with the evolution of next generation sequencing techniques, new and more efficient cancer treatments have been developed. Immunotherapy is a form of cancer treatment that uses the immunosurveillance mechanism of the immune system to fight cancer. This field of research and especially the study of neoantigens have attracted a lot of attention in recent years. Neoantigens are aberrant peptides derived from tumor mutations that can generate an immune response by T lymphocytes. As these peptides are cancer specific and thus not present in normal cells, they have an exceptionally high potential to be recognized by the immune system leading to activation of T-cells that will attack tumor cells. However, as not all neoantigens are effectively able to generate an immune response, there is a need to identify, from all the neoantigens present in a tumour, those that are more likely to trigger an immune response. This dissertation presents a machine learning approach to identify such neoantigens. Several machine learning models, built over different datasets were used. The machine learning algorithms used were Support Vector Machines, K-nearest neighbors, Logistic Regression and Random Forests. Random Forests generated the best prediction. It was concluded that optimizing the hyperparameters of the machine learning models, enhances the model’s performance. Regarding the optimal number of negative cases on model performance, it was concluded that machine learning models give best predictions when these are applied to balanced datasets. The algorithm that made better predictions was Random Forests, and thus the corresponding model was applied to a different sized dataset created with a higher number of positive cases using the synthetic minority oversampling technique. The Random Forests algorithm applied in this dataset achieved a F1-score of 0.89, recall of 0.95 and precision of 0.86. Unfortunately, these good results were not reflected when this model was tested with a different dataset of the case study, a fact that can be explained, mainly, because the data used for training was very different from the case study data. As such, in the future, research should be focused on improving the training data so that it better reflects what happens in real patients. Despite this, there is an excellent opportunity for a promising future work in this area.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2016. Durante o processo de interação patógeno-hospedeiro ambos os organismos envolvidos sofrem uma ampla reprogramação do padrão global de expressão gênica, o que tem sido mostrado ser crucial na definição da resultante dessa interação. Dentre os inúmeros genes com expressão alterada no hospedeiro encontram- se aqueles que codificam microRNAs (miRNAs), um grupo de pequenas moléculas de RNA regulatórias atuante nos mais diversos processos celulares, incluindo a regulação da resposta imune tanto inata quanto adaptativa. Embora vários trabalhos venham mostrando a importância dos miRNAs na resposta imune de hospedeiros mamíferos a bactérias e vírus, pouco se sabe a respeito do papel desses reguladores em infecções fúngicas. Nesse sentido, buscamos analisar o papel de miRNAs na resposta imune inata de hospedeiros murinos à infecção por Paracoccidioides brasiliensis, um dos agentes etiológicos da Paracoccidioidomicose (PCM), considerada a micose sistêmica de maior prevalência na América Latina. Os ensaios iniciais com macrófagos peritoneais de camundongos das linhagens A/J e B10.a, modelos definidos de resistência e suscetibilidade à PCM, respectivamente, e leveduras do isolado virulento Pb18 de P. brasiliensis revelaram o aumento dos cinco miRNAs avaliados: miR-125b, miR-132, miR-146a, miR-155 e miR-455, sugerindo a participação dessas moléculas na regulação da resposta a P. brasiliensis. No entanto, a ausência de um padrão de indução distinto entre as duas linhagens possivelmente indica que os miRNAs avaliados não possuem papel determinante no estabelecimento de respostas distintas entre as duas linhagens nas fases iniciais da interação com o fungo. Devido seu papel chave na regulação da resposta imune e aos altos níveis de acúmulo diferencial em resposta a P. brasiliensis aqui descritos, o miRNA miR-155 foi escolhido para análises mais abrangentes envolvendo sua biogênese e ação na modulação de transcritos alvo. O acúmulo do precursor pri-miR-155 observado sugere uma maior transcrição do gene MIR155HG contribuindo em parte para os altos níveis do miRNA maduro. Por sua vez, o aumento na razão entre os níveis de miR-155-3p e miR-155-5p pode indicar uma modulação do grau de estabilidade da fita 3p e regulação de seus processos de decaimento. A avaliação dos níveis de transcritos alvo de miR-155-5p forneceu resultados variáveis. Enquanto o aumento de TNFα e redução de SHIP1 estão de acordo com o já descrito na literatura em resposta a miR-155, o aumento nos níveis de SOCS1 e SOCS3, negativamente regulados pelo miRNA, demonstra as dificuldades de se estabelecer paralelos diretos entre os níveis de um miRNA e seus alvos em um contexto de alta reprogramação do padrão global de expressão gênica. Também foram realizados ensaios de infecção empregando macrófagos derivados de medula de animais nocautes para os genes de TLR4 e dectina-1 para avaliação da sua participação na modulação dos níveis de miR-155-5p. Os resultados obtidos evidenciam a sinalização desses receptores de membrana como reguladores negativos, direta ou indiretamente, de miR-155-5p em resposta a P. brasiliensis. Para possibilitar o estudo do papel funcional de miRNAs na resposta imune, experimentos foram realizados visando validar um modelo de silenciamento de miRNAs através da transfecção in vitro de inibidores (antimiR). Resultados preliminares utilizando sondas marcados com fluorescência e inibidores de um miRNA controle demonstraram uma alta eficiência de transfecção de BMDMs e eficácia no silenciamento do miRNA controle let-7. Desta forma, os resultados aqui apresentados são de relevância por sugerirem, pela primeira vez, a participação de miRNAs na regulação de vias envolvidas na resposta imune inata a P. brasiliensis. During host-pathogen interactions both organisms go through a wide genetic reprogramming, a process believed to be crucial in the establishment of the infection. Amongst all the host’s genes showing this altered expression are the ones encoding for microRNAs (miRNAs), small regulatory RNA molecules acting on many biological processes, including regulation of both innate and adaptive immune responses. Although the importance of microRNAs in the immune response to bacteria and viruses by mammalian hosts has been reported by many groups, little is known about their participation in fungal infections. In this context, we aimed at analyzing the role of microRNAs in the innate immune response of murine hosts to infection by Paracoccidioides brasiliensis, the etiological agent of Paracoccidioidomycosis (PCM) – the most prevalent systemic mycosis in Latin America. Initial infection assays performed with peritoneal macrophages from resistant (A/J) and susceptible (B10.a) mouse strains and yeast cells from the virulent isolate Pb18 of P. brasiliensis showed an increase of the levels of five miRNAs: miR-125b, miR-132, miR-146a, miR-155 e miR-455, indicating a participation of these molecules on the regulation of the response to P. brasiliensis. However, the similar patterns of miRNA induction on both strains possibly suggests that the miRNAs studied do not have a determinant role in the establishment of the distinct inflammatory responses presented by the two strains in the early stages of interaction with the fungus. Therefore, we chose to perform the following analyses just with the A/J strain. miR-155 was selected for a more complete characterization of its biogenesis and target transcripts regulation based on its key role in regulating many aspects of the immune response and the high levels of differential accumulation in response to P. brasiliensis observed by us. The accumulation of the precursor pri-miR-155 observed suggests an influence of the transcription of the gene MIR155HG on the increase in the mature miRNA levels. The changes in the miR-155-3p to miR-155-5p ratio following P. brasiliensis infection may indicate an altered stability degree and turnover rate of the 3p strand. The assessment of the levels of miR-155-5p target mRNAs showed varying results. While upregulation of TNFα and downregulation of SHIP1 are in accordance with the expected effects of miR-155-5p, the high levels of SOCS1 and SOCS3, negatively regulated by this miRNA, reflect the difficulties in establishing direct parallels between the levels of a miRNA and its targets in a context of broad genetic reprogramming. Finally, we performed infection assays using BMDM from TLR4 or dectin-1 knockout mice to assess the role of these receptors in the regulation of miR-155 levels. Results show that in the absence of the receptors miR-155 accumulates in even higher levels, pointing the signaling by TLR4 and dectin-1 as negative regulators, directly or indirectly, of miR-155 in respose to P. brasiliensis. In order to allow the study of the functional role of miRNAs in the immune response, we tested a model for miRNA silencing by in vitro transfection of miRNA inhibitors (antimiR). Preliminary results using fluorescent-labelled antimiR and inhibitors for a control miRNA showed a high transfection efficiency in primary macrophages and proper effect on silencing the control miRNA let-7. In conclusion, the results presented are of great significance for suggesting, for the first time, the involvement of miRNAs in the regulation of the innate immune response to Paracoccidioides brasiliensis.

CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior A hemofilia A (HA) é um distúrbio de sangramento hereditário causado por deficiência de fator (F) VIII. Seu tratamento baseia-se na reposição de FVIII deficiente, tanto profilaticamente quanto sob demanda. Uma das principais complicações da HA é o desenvolvimento de aloanticorpos que inibem a atividade do FVIII (inibidores). Estudos recentes sugerem que o tratamento com infusões repetidas de concentrado de FVIII pode alterar a resposta imune e, portanto, contribui para o desenvolvimento de inibidores. O objetivo deste estudo foi investigar o efeito das infusões de concentrado de FVIII sobre biomarcadores imunológicos de pacientes com HA congênita (PHA). A maioria (80,3%) dos PHA foram incluídos ao diagnóstico e antes de qualquer infusão de FVIII (PUPs; da sigla em inglês, previously untreated patients). Variáveis sociodemográficas, clínicas e laboratoriais foram coletadas. Amostras de plasma foram coletadas na inclusão (T0) e a cada 5-10 dias de exposição (DE) ao FVIII até pelo menos 75 DE (T1/INB-) ou desenvolvimento de inibidor (T1/INB+). Os anticorpos anti-FVIII (IgM, IgG1, IgG3 e IgG4) foram testados por ELISA, bem como um painel de quimiocinas (CCL2, CCL5, CXCL8, CXCL9 e CXCL10) e citocinas (IL-2, IL -4, IL-6, IL-10, IFN-, TNF e IL-17A). Análise estatística descritiva das variáveis e correlação de Spearman entre os biomarcadores foram realizadas. Um total de 71 pacientes com HA grave (FVIII

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2019. Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientifico e Tecnológico (CNPq). Nos últimos anos, o surgimento, ou ressurgimento, de diferentes arboviroses gerou um alerta global. À diferença da infecção por outros flavivírus, a infecção pelo vírus zika (ZIKV) pode ocasionar alterações neurológicas, tais como malformações cerebrais em neonatos de mães infectadas durante a gravidez, incluindo encefalite, mielite e microcefalia, conhecidas como síndrome congênita do Zika (SCZ). Também foram relatadas outras alterações neurológicas, como a síndrome de Guillain-Barré em adultos. A microcefalia é uma desordem de células progenitoras neurais desencadeada por ZIKV da estirpe brasileira, a qual pode atravessar a placenta e induzir neuroinflamação e ativação microglial. Vírus da cepa africana também mostrou ser capaz de infectar células-tronco humanas pluripotentes in vitro e induzir a morte celular por apoptose, entretanto, não foram relatados casos de SCZ associados a esta cepa. Estes dados juntos com as poucas informações disponíveis a respeito dos mecanismos de neurodegeneração envolvidos nos distúrbios neurológicos e o envolvimento de miRNAs em processos neuroinflamatórios desencadeados por infecções virais, nos levaram a realizar uma análise comparativa por PCR da expressão de miRNAs envolvidos na resposta inflamatória, assim como seus alvos celulares, após infecção de células imortalizadas da micróglia com ZIKV das cepas africana e asiática. Neste trabalho foi possível observar que os isolados da cepa africana (ZIKVMR766) e asiática (ZIKVPE243) são capazes de infectar células da micróglia de camundongos da linhagem BV2 e produzir vírus infecciosos, embora em níveis menores que os descritos para outros tipos celulares e não induzir efeitos citopatogênicos. Ambas os isolados induziram a expressão dos marcadores de ativação Iba1, CD68, enquanto a expressão do MHC-II foi induzida apenas pelo ZIKVMR766. A infecção pelo ZIKV mostrou induzir a expressão diferencial dos miRNAs 155, 146a, 132 e 125b, assim como dos respectivos alvos celulares envolvidos na regulação da resposta imune inata. A infecção pelo ZIKVMR766 mostrou induzir níveis maiores dos miRNAs que os induzidos pelo ZIKVPE243, especialmente do miR-146a em 24h (>7 folds). Também, ambos os isolados mostraram induzir um padrão diferencial na expressão de citocinas pró e anti-inflamatórias, IFN-β, IFN-γ e IL-10. Esperamos que as diferenças observadas entre os isolados das duas cepas do ZIKV nos auxiliem, numa etapa posterior, a esclarecer os mecanismos moleculares envolvidas na doença ou proteção, virulência, tropismo tecidual, patologia, e evasão imune. In recent years, the emergence, or resurgence, of different arboviruses has generated a global alert. In contrast to infection with other flaviviruses, Zika virus (ZIKV) infection may cause neurological changes such as brain malformations in children of infected mothers during pregnancy, including encephalitis, myelitis, and microcephaly, known as Zika congenital syndrome (SCZ). Other neurological changes, such as Guillain-Barré syndrome, have also been reported. Microcephaly is a disorder of neural progenitor cells triggered by the Brazilian lineage (ZIKVPE243), which can cross the placenta and induce neuroinflammation and microglial activation. The African strain (ZIKVMR766) has also been shown to be able to infect pluripotent human stem cells in vitro and trigger cell death by apoptosis; however, no cases of SCZ associated to this lineage have been reported. These data, paired to the limited information available on mechanisms of neurodegeneration involved in neurological disorders, and the involvement of miRNAs in neuroinflammatory processes triggered by viral infections, led us to perform a qPCR to compare the miRNAs expression involved in the inflammatory response, as well as their cell targets, after infection of microglia-BV2 cells with the African and Asian strains of the Zika virus. In this work it was possible to observe that the ZIKVMR766 and ZIKVPE243 strains are capable of infecting BV2 lineage microglial cells and producing infectious viral particles, although at levels lower than those described in other cell types besides not inducing cytopathogenic effects. Both strains induced the expression of Iba1, CD68 activation markers, whereas MHC-II expression was induced only by ZIKVMR766. ZIKV infection has been shown to produce differential expression of miRNAs 155, 146a, 132 and 125b, as well as their respective cellular targets involved in the regulation of the innate immune response. ZIKVMR766 infection showed higher levels of miRNAs than that caused by ZIKVPE243, especially miR-146a in 24h (> 7 folds). Also, both strains have been shown to prompt a differential pattern in the expression of pro and anti-inflammatory cytokines, IFN-β, IFN-γ and IL-10. We expect that the observed differences between the two ZIKV strains will help us, at a later stage, to clarify the molecular mechanisms involved in the disease or protection, virulence, tissue tropism, pathology, and immune evasion.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Biologia, Departamento de Biologia Celular, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2016. Escherichia coli é uma bactéria gram-negativa, que apresenta uma alta diversidade genética e fenotípica. Muitas linhagens de E. coli são inofensivas, mas algumas apresentam fatores de patogenicidade. Muitos produtos, estruturas e propriedades bacterianas podem ser utilizadas para evadir as defesas do hospedeiro através de sistemas de secreção. O sistema de secreção de tipo VI (SST6) é considerado como um potencial fator de virulência que tem a capacidade de translocar substratos efetores para o interior de vários tipos de células, tanto procarióticas quanto eucarióticas. O SST6 tem sido descrito como uma importante maquinaria celular envolvido principalmente na competição entre células procarióticas. No entanto, o papel do SST6 na imunidade da célula hospedeira eucariótica é pouco compreendida. Portanto, o objetivo deste estudo foi investigar o papel do SST6 bacteriano na apresentação de antígenos e sobre a indução da ativação da resposta inflamatória em células de mamíferos infectados por E. coli. Nós avaliamos a modulação de alguns mecanismos da imunidade inata durante a infecção causada pela bactéria E coli SEPT362 e a linhagem mutante para o gene IcmF. Aqui demonstramos que SST6 beneficia a E. coli, promovendo sua sobrevivência no interior das células do hospedeiro participando da adesão, internalização e viabilidade da bactéria no interior de macrófagos. Nossos resultados mostraram que E. coli selvagem inibe a expressão das moléculas CD1 dos grupos I e II e consequentemente, a apresentação de antígenos lipídicos. Diferentemente, a linhagem mutante para IcmF desencadeou uma regulação positiva dessas moléculas, mostrando a participação do SST6 nesse processo. Além disso, SST6 está associada à inibição da expressão de moléculas de MHC II, indicando provável bloqueio na apresentação de antígenos peptídicos e uma possível forma de escape imunológico pelo patógeno. Ademais, os nossos resultados mostraram que, SST6 participa na modulação negativa da expressão de moléculas co-estimulatórias CD40 e CD80 em macrófagos. Também verificamos que, E. coli SEPT362 induz a expressão aumentada do receptor nuclear PPARɣ dependente de SST6 em macrófagos e não induz a translocação do fator de transcrição NF- kB durante a infecção. A infecção por E. coli também induziu o aumento da biogênese de corpúsculos lipídicos de forma dependente de SST6. Nós identificamos que SST6 participa na redução da viabilidade das células de macrófagos, recrutamento de macrófagos para a cavidade peritoneal e favorece o estabelecimento do patógeno no fígado. Finalmente, observamos que SST6 participa na indução da secreção de óxido nítrico e a da citocina IL-6 em macrófagos, no entanto, a regulação positiva da secreção de IL-10 é independente do SST6. Todos estes resultados mostram um novo papel para o papel do SST6 na imunidade inata dos hospedeiros e no progresso da patogênese. Escherichia coli is Gram-negative bacteria that exhibit a high genetic and phenotypic diversity. Many products, structures and bacterial properties can be used to overcome host defenses, mainly through a mechanism mediated by secretion systems. The type VI secretion system (T6SS) is considered a potential virulence factor capable of translocating substrate effectors into largest cell types, both prokaryotic and eukaryotic cells. T6SS has been described as important cell machinery involved mainly in competition among prokaryotic cells. However, the role of T6SS in eukaryotic host cell immunity is poorly understood. Therefore, the aim of this study was investigate the role of bacterial T6SS on the antigen presentation and modulation of inflammatory response in mammalian cells infected by E. coli. We evaluated the modulation of different mechanisms involved in innate immune during the infection caused by E. coli wild type strain (SEPT362) and the knockout strains IcmF-deficient (delta IcmF). Here we demonstrate that, T6SS is beneficial to survival advantage of E. coli into host cells, since it participates in adherence, internalization and viability of E. coli bacteria within macrophages. Our results showed that E. coli wild type inhibits the expression of CD1 group I and group II molecules, and consequently the lipids antigens presentation. In contrast, the knockout strain delta IcmF triggered an upregulation of these molecules, showing the participation of T6SS in this process. Moreover, T6SS is associated with inhibition of expression of MHC II molecules, indicating participation in peptide antigen presentation and a possible form of immune escape by the pathogen. Furthermore, our results showed that T6SS participates in the modulation of expression of co-stimulatory molecules CD40 and CD80 on macrophages. In addition, we also found that E. coli SEPT362 induces an increased expression of the nuclear receptor PPARɣ in macrophage dependent of T6SS and did not induce the translocation of the transcription factor NF-kB during the infection. The infection by E. coli SEPT362 also induced a T6SS dependent increase of lipid droplets biogenesis. Moreover, we identified that T6SS participates in the reduction of macrophage cell viability, macrophages recruitment to mice peritoneal cavity and establishment of the pathogen in the liver. Finally we observed that T6SS participates in the induction of secretion of nitric oxide and IL-6 cytokine in macrophage, however the upregulation of IL-10 secretion is T6SS independent. Taken together, our results present a new T6SS role in innate immune host response and progress of E. coli pathogenesis.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Pós-graduação em Medicina Tropical, 2016. Texto parcialmente liberado pelo autor. Conteúdo liberado: introdução. Estrongiloidíase é uma doença parasitária causada pelo Strongyloides sp., com distribuição mundial e maior prevalência em países tropicais e subtropicais. Objetivo: Verificar se a presença ou ausência de hormônio testosterona influência na evolução do S. venezuelensis (Sv) em camundongos e se altera as respostas imunes celulares e humorais em camundongos orquiectomizados e infectados com esse helminto. Metodologia: Usamos no estudo camundongos, linhagem Swiss, pesando entre 18 e 20 g, e ratos Rattus novergicus Wistar pesando cerca de 120 g, para manutenção do helminto, ambos provenientes da Seção de Expedição Animal/CECAL da Fundação Oswaldo Cruz (FIOCRUZ), Manguinhos, Rio de Janeiro, Brasil. Grupos de animais: G1. Controle negativo; G2. Animais infectados; G3. Animais Sham negativos; G4. Animais Sham infectados; G5. Animais Operados negativos; G6. Animais Operados infectados; G7. Animais operados com reposição de uma dose de testosterona; G8. Animais operados com reposição de duas doses de testosterona. Os animais foram infectados com 1.500 larvas filarióides de Sv, via s.c. As doses de testosterona foram aplicadas nos dias 3, 7 e 14 via s.c. Os animais foram sacrificados por overdose de Ketamina/Xilazina nos dias 1, 3, 5, 7, 14 e 21 após infecção. Deles coletou-se o sangue para contagem de leucócitos totais e células diferenciais. Recolheram o intestino para contagens de parasitos fêmeas, baço, coração, fígado e pulmão para verificação da presença de formas evolutivas do helminto. Quantificaram anticorpos e citocinas no soro por ELISA, e fizeram exames histopatológicos do baço, coração, fígado, intestinos, e pulmões. Resultados: O número de vermes adultos, ovos e larvas recuperados dos animais orquiectomizados foram significativamente menores nos dias 5 e 7 após infecção, quando comparados com animais infectados e Sham. Porém, os animais operados com reposição de testosterona, essas formas evolutivas estavam aumentadas e o parasitismo nos camundongos foram maiores. A infecção por S. venezuelensis induz aumento de células inflamatórias no sangue ao longo da cinética, no entanto, nos dias 14 e 21 o aumento de leucócitos totais, eosinófilos e células mononucleares foram maiores, mas sem diferenças entre os grupos de animais analisados. Níveis de anticorpos (IgE e IgG1) e citocinas (IL-4, IL-5, IL-13) foram aumentados nos animais infectados, mas a concentração deles variaram ao longo da cinética experimental, e sem diferenças significantes entre os animais sem testosterona ou com reposição desse hormônio. A síntese de IL- 12 detectado nos animais infectados, operados, operados com reposição de testosterona e infectados foram semelhantes aos animais controles negativos. IFN-gama. IL-17 não foi detectado em nenhum grupo experimental. Infiltrado inflamatório de histiócitos estavam presentes nos animais Sv + Água, Sham + Sv, Op + Sv observado a partir do dia 3 da infecção e estendeu-se até o dia 7 após infecção, enquanto que nos animais operados com reposição da testosterona o processo inflamatório permaneceu até o dia 14. Presença de infiltrado de mastócitos e presença discreta de eosinófilos foram observadas na polpa branca de centro germinativo foi similar entre todos os grupos de animais infectados, operados e trados ou não com testosterona até o dia. Porém, no dia 14 nesses animais observaram infiltrados de neutrófilos associados a formação de granuloma (piogranuloma), sendo essas modificações no tecido hepático mais evidentes nos animais tratados com T indiferente no quantidade de doses. Infecção com Sv não induz alterações histopatológicas significativas no coração. Conclusões: A redução parcial de testosterona circulante nos animais orquiectomizados torna-os resistentes a infecção do S. venezuelensis, ao passo que níveis aumentados desse hormônio o parasitismo no hospedeiro, porém, não interferiu na fertilidade do parasito. Ausência ou concentração aumentada de testosterona circulante não induz síntese aumentada de anticorpos ou citocinas. Assim, esses resultados sugerem a testosterona possivelmente interfere em outras vias da resposta imune como: sistema complemento, quimiocinas, ou celular por nós não avaliados, que seja sinais entendido pelo Strongyloides permitindo a permanência no hospedeiro. Strongyloidiasis is a parasitic disease caused by Strongyloides sp. It’s distributed worldwide with higher prevalence in tropical and subtropical countries. Objective: To verify if the presence or absence of testosterone hormone influences the evolution of S. venezuelensis (Sv) in mice and if it alters the cellular and humoral immune responses in orchiectomized mice infected with this helminth. Methodology: We used in the study mice, Swiss strain, weighing between 18 and 20 g, and RattusnovergicusWistar weighing about 120 g, for helminth maintenance, both from the Section of Animal Expedition / CECAL of the Oswaldo Cruz Foundation (FIOCRUZ), Manguinhos, Rio de Janeiro, Brazil. Animal groups: G1. Negative control; G2. Infected animals; G3. Negativesham-operated animals; G4. Infectedsham-operated animals; G5. Negative operatedanimals; G6. Infected operated animals; G7. Animals operated with a replacement dose of testosterone; G8.Animals operated with replacement of two doses of testosterone.The animals were infected with 1,500 filarial larvae of Sv, bys.c. The doses of testosterone were applied on days 3, 7 and 14 by s.c. The animals were sacrificed by overdose of Ketamine / Xylazine on days 1,3,5,7,14 and 21 after infection. Blood was collected from they for total leukocyte count and of differential cells. They collected the intestines to count parasites females, spleen, heart, liver and lungs to verify the presence of evolutionary forms of the helminth. They quantified antibodies and cytokines by ELISA, and did histopathological examination of the spleen, heart, liver, intestines, and lungs. Results: The number of adult helminth, eggs and larvae recovered from the orchiectomized animals were significantly lower on days 5 and 7 after infection when compared to infected and sham animals. However, the operated animals with testosterone replacement, these evolutive forms were increased and the parasitsm in mice were bigger. The infection by S. venezuelensis induces an increase in inflammatory cells in the blood along the kinetics, however, on days 14 and 21, the increase of total leukocytes, eosinophils and mononuclear cells were larger, but without significant differences between the groups of animals analyzed. The antibodies levels (IgE and IgG1) and citokynes (IL-4, IL-5, IL-13) were increased in the infected animals, but their concentrations varied along the experimental kinetics, and without significant differences between the animals without testosterone or with replacement of this hormone. The IL-12 synthesis detected in infected animals, operated, operated with testosterone replacement and infected were similar to negative control animals. IFN-gama. IL-7 was not detected in no experimental group. Inflamatory infiltrate of histiocytes were present in the animals Sv + Water, Sham + Sv, Op + Sv observed from day 3 of the infection and extended until day 7 after infection, while in the operated animals with testosterone replacement the inflamatory process remained until day 14. Presence of mast cell infiltrate and discrete presence of eosinophils were observed in the white germinative center pulp was similar among all groups of infected animals, operated and with or without testosterone up to the day. However, on day 14 in these animals they observed neutrophil infiltrates associated with granuloma formation (piogranuloma), these changes in hepatic tissue being more evident in animals treated with indifferent T in the amount of doses. Sv infection does not induce significant histopathological changes in the heart. Conclusion: The partial reduction of circulating testosterone in orchiectomized animals makes them resistant to infection of S. venezuelensis, whereas increased levels of this hormone parasitism in the host, however, did not interfere in the fertility of the parasite. Absence or increased concentration of circulating testosterone does not induce increased antibody or cytokine synthesis. Thus, these results suggest that testosterone possibly interferes in other immune response pathways such as: complement system, chemokines, or cellular by unvalued nodes, which are signals understood by the Strongyloides allowing the stay in the host.

Chromoblastomycosis (CBM) is a chronic worldwide subcutaneous mycosis, caused by several dimorphic, pigmented dematiaceous fungi. It is difficult to treat patients with the disease, mainly because of its recalcitrant nature. The correct activation of host immune response is critical to avoid fungal persistence in the tissue and disease chronification. CD4+ T cells are crucial for the development of protective immunity to F. pedrosoi infection. Here, we investigated T helper cell response dynamics during experimental CBM. Following footpad injection with F. pedrosoi hyphae and conidia, T cells were skewed towards a Th17 and Th1 phenotype. The Th17 population was the main Th cell subset found in the infected area during the early stages of experimental murine CBM, followed by Th1 predominance in the later stages, coinciding with the remission phase of the disease in this experimental model. Depletion of CD25+ cells, which leads to a reduction of Treg cells in the draining lymph node, resulted in decline in fungal burden after 14 days of infection. However, fungal cells were not cleared in the later stages of the disease, prolonging CBM clinical features in those animals. IL-17A and IFN-γ neutralization hindered fungal cell elimination in the course of the disease. Similarly, in dectin-2 KO animals, Th17 contraction in the course of experimental CBM was accompanied by fungal burden decrease in the first 14 days of infection, although it did not affect disease resolution. In this study, we gained insight into T helper subsets’ dynamics following footpad injections of F. pedrosoi propagules and uncovered their contribution to disease resolution. The Th17 population proved to be important in eliminating fungal cells in the early stages of infection. The Th1 population, in turn, closely assisted by Treg cells, proved to be relevant not only in the elimination of fungal cells at the beginning of infection but also essential for their complete elimination in later stages of the disease in a mouse experimental model of CBM., Author summary Chromoblastomycosis is a chronic subcutaneous infection caused by several dimorphic, pigmented dematiaceous fungi. CD4+ T cells modulations are crucial for the proper immune response against this fungal infection and play a key role in CBM resolution in a self-healing mouse model. In this work we report Th17 cells as being the main CD4+ subpopulation in the infected area during the early stages of experimental murine CBM, followed by Th1 predominance in the later stages, coinciding with the remission phase of the disease in this experimental model. Depletion of CD25+ cells resulted in fungal burden reduction after 14 days of infection, but it compromised fungal clearing in later stages of the disease, prolonging CBM clinical features in those animals. In vivo analysis with IL-17A and IFN-γ neutralization hindered fungal cell elimination in the course of the disease. Dectin-2 deficiency was associated with impairment of Th17 response and fungal control in the early phase of CBM but did not affect disease resolution. In this study, we gained insight into T helper subsets’ dynamics following footpad injections of F. pedrosoi fungal cells and uncovered their contribution to disease resolution.

Trabalho Final do Curso de Mestrado Integrado em Medicina, Faculdade de Medicina, Universidade de Lisboa, 2019 Submitted by Sofia Amador (sofiamador@fm.ul.pt) on 2020-05-18T10:24:49Z No. of bitstreams: 1 SaraSereno.pdf: 967577 bytes, checksum: 2eb784cb95f2be7448903e8f982b3ee4 (MD5) Made available in DSpace on 2020-05-18T11:18:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 SaraSereno.pdf: 967577 bytes, checksum: 2eb784cb95f2be7448903e8f982b3ee4 (MD5) Previous issue date: 2019

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2018. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES). Baculovírus são vírus de DNA de dupla fita circular que infectam insetos. O potencial destes vírus como ferramenta para expressão de proteínas heterólogas começou a ser explorado na década de 70. Hoje, os baculovírus são utilizados amplamente para expressar antígenos de uso vacinal, diagnóstico e como potenciais vetores de terapia gênica e vacinas de DNA. Sabendo que a forma BV (Budded virus) de AcMNPV (Autographa californica multicapsid nucleopolyhedrovirus) induz alterações fenotípicas e funcionais em células da resposta imune inata e adaptativa, despertou-se o interesse do nosso grupo em saber se a forma OB (Occlusion Body) de AcMNPV, também conhecido como poliedros, apresenta a capacidade de estimular tanto a resposta imune inata como a adaptativa. Genes de interesse podem ser fusionadas ao gene da poliedrina, a proteína mais abundante do poliedro, o que permite assim sua produção de proteínas recombinantes em alta concentração. Neste presente trabalho foi avaliado a capacidade do poliedro de AcMNPV em estimular a resposta imune do hospedeiro saudável, apresentando uma ação imunomoduladora. Os resultados in vitro mostraram que o poliedro é capaz de induzir a maturação das células dendríticas derivadas da medula óssea (BMDC) observado pelo aumento da produção de citocinas inflamatórias (IL-1β, TNF-α, IL-6 e IL-12), quimiocina (CCL2), aumento da expressão de moléculas coestimulatória (CD80, CD86) e MHC-II. O poliedro foi capaz de ativar vias de sinalização intracelular semelhante ao obsevado por vírus com o aumento da transcrição dos genes. Além disso, observou-se a ativação de células da reposta imune adaptativa com aumento da proliferação celular com indução de um perfil mixto. Estes dados nos permite concluir que a fusão de proteínas de interesse fusionadas à poliedrina é uma estratégia interessante, não sendo necessária a utilização de adjuvantes nas estratégias de vacinas terapêuticas ou profiláticas. Baculoviruses are circular double-stranded DNA viruses that infect insects. The potential as an implement for heterologous proteins expression began to be explored in the 70´. Today, baculoviruses are widely used to express vaccine antigens, to diagnosis and as potential gene therapy vectors and DNA vaccines. It is already reported in the literature that the BV form of AcMNPV induces phenotypic and functional changes in cells of the innate and adaptive immune response. In this way, our group's interest in knowing whether the OBs form of AcMNPV, also known as polyhedra, has been shown to have the ability to stimulate the innate and adaptive immune responses. Proteins of interest can be fused to the polyhedrin gene, the most abundant protein of the polyhedron, which allows its production in high concentration. This study evaluated if the polyhedron of AcMNPV is able to exert immunomodulatory action. The in vitro results showed that the polyhedron is capable of inducing maturation of the BMDCs cells, which is observed by increased production of inflammatory cytokines (IL-1β, TNF-α, IL-6 and IL-12), chemokine (CCL2), increased expression of co-stimulatory molecules (CD80, CD86) and MHC-II. The polyhedron was able to activate intracellular signaling pathways, like those observed by viruses with increased transcription of TLR3, TLR9, IRF3 and IFN-α. In addition, it was through the activation of the BMDCs that it provided the activation of adaptive immune response cells with increased cell proliferation with induction of a mixed profile. These data allow us to conclude that the fusion of proteins of interest fused to polyhedrin is an interesting strategy and there is no need for the use of adjuvants in the strategies of therapeutic or prophylactic vaccines.

Litopenaeus vannamei shrimp were reared in a bioflocs system and fed different levels of soybean protein concentrate as a replacement for fishmeal, and both immunological parameters of this marine shrimp and its resistance to Vibrio sp. infection (CPQBA 378-12 DRM01) were evaluated. Four different diets were formulated with 0, 33, 66 and 100 % of soybean protein concentrate as a substitute for fishmeal. Shrimp were reared in a biofloc system in twelve 800 L tanks (250 shrimp m-3) maintained at constant aeration and temperature. After 42 days, 36 animals (14.21 ± 0.89 g) per treatment were challenged with Vibrio sp. (1 x 105 CFU mL-1 - LD10), and hemolymph was collected before and after challenge to perform immunological assays (agglutination titer, concentration of protein and phenoloxidase activity). Shrimp fed with the experimental diets showed no difference in their resistance to infection and haemato-immunological parameters. Thus, rearing L. vannamei in a biofloc system on diets containing either partial or total replacement of fishmeal for soybean protein concentrate did not affect either immunocompetence or susceptibility to infection. RESUMO. O presente trabalho avaliou os parâmetros imunológicos e a resistência contra o Vibrio sp. (CPQBA 378-12 DRM01) de camarões marinhos Litopenaeus vannamei alimentados com diferentes níveis de concentrado proteico de soja em substituição à farinha de peixe e cultivados em sistema de bioflocos. Foram formuladas quatro dietas com 0, 33, 66 e 100 % de concentrado proteico de soja em substituição a farinha de peixe. Os camarões foram cultivados em 12 tanques de 800 L com 250 camarões m-3, sob temperatura e aeração constantes. Após 42 dias, 36 animais (14,21 ± 0,89 g) por tratamento foram desafiados com Vibrio sp. (1 x 105 UFC mL-1 - DL10). Antes e após o desafio foi coletada hemolinfa para avaliação dos parâmetros imunológicos (título aglutinante, concentração de proteína no soro e atividade da fenoloxidase). Não houve diferença na resistência ao desafio e nos parâmetros imunológicos entre os tratamentos. Portanto, o cultivo de L. vannamei em sistema de bioflocos utilizando dietas com substituição total ou parcial com concentrado proteico de soja não afeta sua imunocompetência e susceptibilidade a infecção bacteriana.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Pós-graduação em Medicina Tropical, 2018. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES), Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) e Fundação de Apoio à Pesquisa do Distrito Federal (FAP-DF). A criptococose é uma micose sistêmica causada por fungos do gênero Cryptococcus que acomete principalmente pessoas com Aids. A principal manifestação clínica da doença é uma meningoencefalite severa. O tratamento desta doença é baseado atualmente em drogas intravenosas bastante tóxicas ou caras, que necessitam de internação hospitalar para administração e requerem acompanhamento laboratorial constante para manejo dos efeitos colaterais. Apesar da existência deste tratamento, se estima que aproximadamente 80% dos 223 mil casos anuais da doença levem à morte. Há evidências de que a infecção pelo fungo ocorra em todas as pessoas durante a infância; o que parece determinar a doença, portanto, é o surgimento de imunossupressão da resposta imunitária celular, o que indica que novas terapias possam ser criadas com alvo na resposta imunitária do hospedeiro. Um dos mecanismos possíveis para manipulação com fins terapêuticos da resposta do hospedeiro é a autofagia, um processo de reciclagem de material intracelular que tem sido demonstrado em experimentos in vitro e em modelos animais como importante também na resposta imunitária a fungos. Tendo em vista essa possibilidade de manipulação da autofagia, é necessário determinar se a autofagia é importante também na resposta imunitária humana, assim como os mecanismos pelos quais a autofagia exerce atividade antifúngica e como Cryptococcus evade da resposta autofágica. Para estudar o papel da autofagia na interação patógeno-hospedeiro da criptococose, nós utilizamos uma coleção de isolados clínicos de C. neoformans obtidos como parte do trabalho da Rede Criptococose Brasil no DF (RCB-DF). Esses isolados foram utilizados em testes in vitro para determinação de sua capacidade de evasão da autofagia do hospedeiro. Os resultados foram correlacionados com dados clínicos dos pacientes dos quais os isolados foram obtidos. Devido possivelmente ao grande número de isolados que seriam necessários para detectar diferenças, não conseguimos observar nenhuma. No entanto, correlações com outros fenótipos desses isolados trouxeram dados muito importantes sobre como C. neoformans causa doenças. Entre eles, o mais importante é a relação direta entre a capacidade de melanização de um isolado e sua capacidade de evadir da autofagia do hospedeiro, o que sugere um novo papel para a melnanina de C. neoformans: evadir da resposta autofágica. Cryptococcosis is a systemic mycosis caused by fungi of the genus Cryptococcus that mainly affects people with AIDS. The main clinical manifestation of the disease is a severe meningoencephalitis. The treatment is currently based on very toxic or expensive intravenous drugs that require hospital admission for administration and constant laboratory monitoring to manage side effects. Despite the existence of this treatment, it is estimated that approximately 80% of the 223,000 annual cases of the disease lead to death. There is evidence that fungal infection occurs in all people during childhood; what appears to determine the disease, therefore, is the emergence of immunosuppression of the cellular immune response, which indicates that novel therapies can be created targeting the immune response of the host. One of the possible mechanisms for therapeutic manipulation of host response is autophagy, an intracellular material recycling process that has been demonstrated in in vitro experiments and in animal models as a relevant tool in the immune response to fungi. In view of this possibility to manipulate the autophagy process, it is necessary to determine whether this is equally significant in the human immune response, as well as the mechanisms by which autophagy exerts antifungal activity and how Cryptococcus evades the autophagic response.

CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico FAPEMIG - Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais Toxoplasma gondii é um dos parasitas mais bem sucedidos do mundo, infectando uma grande variedade de mamíferos, incluindo um terço da população humana global. Extratos de várias partes morfológicas de Annona muricata L. (Annonaceae) são amplamente utilizados medicinalmente em muitas partes do mundo para o manejo, controle e/ou tratamento de várias doenças humanas. Neste contexto, investigamos a ação do extrato etanólico da A. muricata L. (EtOHAm) durante a infecção por T. gondii in vitro e in vivo. In vitro, fibroblastos NIH/3T3 e macrófagos J774 foram infectados e tratados com diferentes concentrações de EtOHAm e suas frações hexano (HexAm), diclorometano (CH2Cl2Am) e acetato de etila (EtOAcAm), e o parasitismo e a produção de óxido nítrico (NO) foram analisados. Para o estudo in vivo, camundongos C57BL/6 foram infectados com T. gondii e tratados com os extratos e analisados para parasitismo, histologia, parâmetros bioquímicos e imunológicos. O tratamento com EtOHAm foi capaz de controlar o parasitismo em fibroblastos e macrófagos e, adicionalmente, aumentou a produção de NO pelas células hematopoiéticas; e as frações HexAm, CH2Cl2Am e EtOAcAm controlaram o crescimento parasitário nas concentrações de 20 ou 50, 50 e 200 µg/mL, respectivamente. In vivo, o tratamento com EtOHAm prolongou a sobrevivência, controlou a proliferação do parasita no intestino delgado e no pulmão no dia 8 pós-infecção (p.i.) e no cérebro no dia 30 p.i., mas o mesmo não foi observado para as frações. O baixo parasitismo em camundongos tratados com EtOHAm foi associado com níveis moderados de IFN-γ e TNF, aumento do número de células caliciformes no intestino delgado e diminuição dos níveis dos lipídios triglicerídeos e VLDL sistemicamente. Portanto, o EtOHAm pode ser um bom candidato para o tratamento da toxoplasmose. Toxoplasma gondii is one of the most successful parasites in the world, infecting a wide variety of mammals, including a third of the global human population. Extracts from various morphological parts of Annona muricata L. (Annonaceae) are widely used medicinally in many parts of the world for the management, control and/or treatment of several human diseases. In this context, we investigated the action of ethanolic extract of A. muricata L (EtOHAm) treatment during T. gondii-infection in vitro and in vivo. For in vitro, NIH/3T3 fibroblast and J774 macrophages cell lines were infected and treated with different concentrations of EtOHAm, and hexane (HexAm), dichloromethane (CH2Cl2Am) and ethyl acetate (EtOAcAm) fractions, and the parasitism and nitric oxide (NO) production were analyzed. For in vivo experiments, C57BL/6 mice were infected with T. gondii and treated as described above, and analyzed for parasitism, histology, biochemical and immunological parameters. The EtOHAm-treatment was able to control the parasitism in fibroblasts and macrophages, and additionally, increased the NO production by the hematopoietic cells; and HexAm, CH2Cl2Am and EtOAcAm fractions controlled parasite grow at 20 or 50, 50 and 200 g/mL concentrations, respectively. In vivo, the EtOHAm -treatment prolonged the survival, controlled the parasite proliferation in the small intestine and lung on day 8 post-infection (p.i.) and in the brain on day 30 p.i., but not the fractions. The lower parasitism in EtOHAm-treated mice was associated with IFN-γ and TNF moderated levels, increased goblet cell numbers in the small intestine and decreased triglycerides and VLDL lipid levels systemically. Therefore, EtOHAm could be a good candidate for toxoplasmosis treatment. Tese (Doutorado)

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2018. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES), Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPQ) e Fundação de Apoio a Pesquisa do Distrito Federal (FAPDF). MicroRNAs (miRNAs ou miRs) são pequenos RNAs não-codificadores endógenos, de cerca de 23 nucleotídeos, que desempenham importante papel regulatório, a nível pós-transcricional, atuando em inúmeros processos biológicos em animais e plantas. Dentre os inúmeros processos onde os miRNAs atuam, é de importância a modulação da resposta imune inata, área de interesse central nas pesquisas realizadas por nosso grupo. Na interface da interação hospedeiro-patógeno, uma intensa reprogramação da expressão gênica tanto do hospedeiro, como do patógeno é observada, sendo descrito que tais alterações são de grande relevância na resultante da interação. Dentre os genes amplamente descritos como modulados estão os miRNAs do hospedeiro na resposta à infecção por patógenos. Considerando o papel regulatório dos miRNAs, vários estudos mostram sua importância na resposta imune contra bactérias e vírus, mas pouco se sabe sobre seu papel em infecções fúngicas. Paracoccidioides brasiliensis é um fungo dimórfico que causa paracoccidioidomicose, considerada a micose sistêmica mais prevalente no Brasil, e que se faz presente na maioria dos países da América Latina. Dados preliminares de nosso grupo mostraram um maior acúmulo de miRNAs relacionados à resposta imune a P. brasiliensis, especialmente o miR-155. O objetivo deste trabalho é identificar miRNAs diferencialmente modulados na resposta de macrófagos murinos frente à infecção pelo isolado virulento Pb18 de P. brasiliensis. Foram infectados macrófagos primários derivados da medula-óssea (BMDMs) de camundongos de linhagem C57BL/6 com leveduras de P. brasiliensis, e o RNA total foi extraído após os tempos de 30’, 2h, 4h, 6h e 24h de infecção. A quantificação de miRNAs foi realizada por RT-qPCR utilizando o sistema TaqMan miRNA assay. Nesse estudo foram avaliados um conjunto de miRNAs já descritos como importantes na resposta imune a patógenos, tais como miR155 (5p e 3p), miR132, miR146a e miR125b. Os resultados revelam que, apesar de não ter havido modulação dos miRNAs nos tempos iniciais de interação fungo-macrófago, enquanto a partir de 6 e 24 horas de interação observamos um aumento no acúmulo do miR155 (as duas frações -5p e -3p) na célula hospedeira. Os transcritos miR146a e miR125b foram regulados negativamente tanto após 6 quanto após 24 horas de infecção, enquanto em nossos ensaios o miR132 não apresentou modulação em resposta à infecção por P. brasiliensis. Conforme descrito na literatura, o miR155-5p encontra-se relacionado com a indução de uma resposta inflamatória, enquanto os miR146a e miR125b, são descritos como reguladores negativos desta resposta. Em concordância com a resposta imune de BMDMs murinos à infecção por P. brasiliensis descrita na literatura, observamos um aumento de acúmulo de miRs relacionados a uma modulação positiva da resposta inflamatória e uma diminuição do acúmulo de miRs relacionados a uma regulação negativa de tal resposta. Assim, o aumento no acúmulo de miR pró-inflamatório (miR155-5p e -3p) juntamente com a diminuição no acúmulo de miRs anti-inflamatórios (miR146a e miR125b), descrito em BMDMs da linhagem murina C57BL/6 infectados por P. brasiliensis provavelmente resulta na ativação de uma resposta imune inflamatória, descrita como uma resposta protetora contra P. brasiliensis. Visando entender a via de sinalização envolvida na ativação do miR155, foram infectados BMDMs de camundongos deficientes para os receptores Dectina-1, Dectina-2, Toll-Like receptor (TLR) 2 e TLR 4 e foi feita a quantificação dos níveis do miR155-5p após 6 e 24 horas de infecção. Os resultados principais mostram a participação dos TLRs 2 e 4 e Dectina-2 na ativação do miR155-5p. Embora o mecanismo molecular envolvido na sinalização positiva, responsável pela indução da expressão do miR155-5p, não tenha sido abordada nos seus vários níveis, esse trabalho aporta novas informações sobre a base molecular tanto do reconhecimento de P. brasiliensis no modelo in vitro de BMDMs murinos, como também da modulação de importantes efetores regulatórios da resposta imune inata a este patógeno. Em conclusão, este trabalho traz novos dados sobre a modulação de miRNAs em resposta à P. brasiliensis, e sobre as primeiras etapas da via de ativação do miR155 frente à infecção por este patógeno. MicroRNAs (miRNAs or miRs) are endogenous, small non-coding regulatory RNAs, of about 23 nucleotides length, which play an important regulatory role, at posttranscriptional level, acting in a myriad of biological processes in animals and plants. In the context of the research developed by our team, the importance of miRNAs in the modulation of the innate immune response is of our great interest. In the interface of host-pathogen interaction, an intense reprogramming of the gene expression is observed, not only in the host, but also in the pathogen, and this reprogramming is highly relevant to the infection outcome. Among the widely described genes modulated in response to pathogens are the host miRNAs. Several studies have shown their importance in the immune response against viruses and bacteria, but little is known about their role in fungal infections. Paracoccidioides brasiliensis is a dimorphic fungus which causes paracoccidioidomycosis, considered the most prevalent systemic mycosis in Brazil and in almost all countries in Latin America. Preliminary results of our group have showed a higher accumulation of miRNAs related to the immune response to P. brasiliensis, especially miR-155. The main goal of this work is to identify differentially modulated miRNAs in the response of macrophages against infection by virulent isolate Pb18 of P. brasiliensis. Bonemarrow derived macrophages (BMDM) from C57BL/6 mice were infected with yeast forms of P. brasiliensis, and total RNA was extracted after the time intervals of 30 min, 2h, 4h, 6h and 24h of infection. The quantification of miRNAs was performed by RT-qPCR using TaqMan miRNA assay. In this study a group of miRNAs described as having important participation in the immune response against pathogens, like miR155 (5p and 3p), miR132, miR146a and miR125b were evaluated. The results revealed that, despite no modulation was observed in the early time intervals of fungus-macrophage interaction, an increase in the levels of both fractions -5p and - 3p of miR155 was observed in the host cells after 6 and 24 hours of interaction. The transcripts of miR146a and miR125b were both negatively regulated in 6 and 24 hours of infection while, in our assays, miR132 did not show any modulation in response to P. brasiliensis. As described in the literature, miR155-5p is associated to the induction of the inflammatory response, while miR146a and miR125b are described as negative regulators. In agreement to the literature observations with respect to the immune response of murine BMDMs to P. brasiliensis, we observed an increase of miRs accumulation related to a positive modulation of the inflammatory response and a decrease of miRs accumulation related to a negative regulation of this response. Thus, the increase in the accumulation of pro-inflammatory (miR155- 5p and 3p) together with the decrease of anti-inflammatory miRs (miR146a and miR125b), described in BMDMs of C57BL6’s mice infected with P. brasiliensis probably results in the activation of an inflammatory immune response, described as a protective response against P. brasiliensis. In order to understand the signaling pathway involved in the activation of miR155, BMDMs from knockout mice for Toll- Like receptor (TLR) 2, Dectin-2 and TLR 4 were infected and the quantification of miR155-5p was performed after 6 and 24 hours of infection. Main results showed the participation of TLRs 2 and 4, and Dectin-2 in the activation of miR155-5p. Although the molecular mechanism involved in the positive signaling responsible for the induction of miR155 expression has not been fully adressed, this work provides new information on the molecular basis of P. brasiliensis recognition and modulation of important regulatory innate immune response effectors of primary murine macrophages. In conclusion, this work reveals new data on the modulation of miRNAs in response to P. brasiliensis, and on the first step of the activation pathway of miR155 in response to infection by this pathogen.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas, 2018. As células-tronco mesenquimais (CTMs) desempenham importante função imunorregulatória, o que as tornam promissoras para o tratamento de situações em que o sistema imunológico apresenta-se com resposta exacerbada. Entretanto, os estudos in vivo em que se utilizam CTMs para controlar a resposta imune revelam resultados heterogêneos, impedindo uma conclusão clara e definitiva quanto ao uso clínico dessas células. Foi demostrado em modelo murino que o INF-ɣ é capaz de ativar as CTMs realçando a sua capacidade de suprimir a resposta imunológica. Alguns estudos mostram que as propriedades das CTMs parecem ser influenciadas por receptores do tipo toll (RTT), especialmente RTT 3, que pode polarizar essas células para um estado anti-inflamatório. Outro ponto que tem recebido atenção da comunidade cientifica é o risco de efeito adverso proveniente da infusão das CTMs. Diante do exposto, esse estudo teve por objetivo investigar através de um modelo livre de células, se INF-γ e a sinalização de RTT 3, por uso de Poly (I:C), são capazes de realçar o potencial supressivo de CTMs de lipoaspirado. Para isso, inicialmente, testamos o efeito de INF-γ e Poly (I:C) na capacidade imunossupressiva das CTMs, através de um cocultivo dessas células com células mononucleares do sangue periférico (CMSP). Em seguida, foi investigado o efeito desses tratamentos sobre a proliferação, potencial migratório e expressão gênica das CTMs. Utilizando um modelo livre de células, investigamos o potencial imunossupressivo do sobrenadante e das microvesículas obtidas de CTMs sobre CMSP. O tratamento dessas células com INF-γ realçou o seu potencial imunossupressivo, o que foi acompanhado por aumento na expressão de IDO e da molécula de adesão ICAM – dois fatores imunorregulatórios. Entretanto, no modelo livre de células, em que utilizamos sobrenadante total ou microvesículas celulares, os produtos obtidos de CTMs tratadas com INF-γ e Poly (I:C) não exerceram maior imunossupressão sobre os linfócitos T, quando comparados aos produtos provenientes das CTMs não tratadas. De modo geral, os resultados obtidos nesse estudo podem nortear caminhos para as novas estratégias terapêuticas livre de células, em que os efeitos benéficos das CTMs são preservados e os riscos oriundos da administração dessas células evitados. Além disso, os nossos resultados também podem servir de base para abordagens que tenham como objetivo realçar as propriedades fundamentais das CTMs, como a propriedade imunorregulatória. Mesenchymal stem cells (MSCs) have important immunoregulatory roles, which makes them promising for the treatment of conditions in which the immune response is exacerbated. However, in vivo studies that use MSCs to control the immune response reveal heterogeneous results, and compromise any clear and definitive conclusion regarding the clinical use of these cells. In murine models, it has been demonstrated that INF-ɣ is able to promote MSCs activation and enhance their ability to suppress the immune response. Some studies show that MSC’s properties appear to be influenced by toll-like receptors (TLRs), especially TLR3, which can polarize these cells towards an anti-inflammatory state. Another point that has received attention from the scientific community is the adverse effect risk coming from the infusion of MSCs. In this context, the aim of this study was to investigate whether INF-γ and TLR3 signaling by Poly (I:C) are capable of enhancing the immunosuppressive potential of MSCs and their secretome. We initially tested the effects of INF-γ and Poly (I:C) treatments over the immunosuppressive capacity of MSCs in a coculture system of these cells with peripheral blood mononuclear cells (PBMC). Then, the effect of INF-γ and Poly (I:C) treatments over the proliferation, migration and transcriptional profile of MSCs was investigated. We also investigated the suppressive potential of the MSC-conditioned media and MSC-derived microvesicles over PBMC. Our data indicates that the treatment of MSCs with INF-γ enhanced their immunosuppressive potential, supported by the increased expression of IDO and the adhesion molecule ICAM - two immunoregulatory factors. However, the conditioned media obtained from INF-γ and Poly (I:C) treated MSCs did not exert greater immunosuppression over T lymphocytes, when compared to the supernatant of untreated MSCs. In general, the results obtained in this study may pave the way to new cellfree therapeutic strategies, in which the beneficial effects of MSCs are preserved, and the risks from the administration of these cells are avoided. In addition, our results may also serve as a basis for novel approaches that aim to highlight the fundamental properties of MSCs, such as their immunoregulatory property.

Orientadora: Profa. Dra. Luciana Campos Paulino Tese (doutorado) - Universidade Federal do ABC, Programa de Pós-Graduação em Biossistemas, Santo André, 2018. A pele humana é habitada por uma complexa comunidade de microorganismos, que influenciam positivamente a saúde e também podem estar associados a doenças de pele. A dermatite seborreica (SD) é uma doença de alta prevalência mundial que causa prurido e descamação, principalmente no couro cabeludo. Tem sido sugerido que SD esteja relacionada a fungos do gênero Malassezia, porém o papel que desempenham não foi elucidado e a etiologia da doença ainda não é totalmente compreendida. A resposta imune possivelmente também exerce papel importante no processo patogênico, influenciando a microbiota e também sendo influenciada por ela. Pouco ainda é conhecido sobre como a microbiota é adquirida e compartilhada. A interação entre as pessoas e as superfícies das habitações e objetos, aliada à capacidade dos micro-organismos de colonizar diferentes ambientes, pode facilitar o compartilhamento da microbiota. Este trabalho tem como objetivo caracterizar a microbiota da pele e a resposta imunológica em indivíduos com SD e seus familiares. O trabalho foi dividido em três etapas: (1) análise das microbiotas fúngica e bacteriana; (2) análise da microbiota fúngica de famílias e dos ambientes residenciais; (3) análise da resposta imunológica. Foram obtidas amostras de indivíduos saudáveis e com SD, amostras de seus familiares, de residências e de animais de estimação. As comunidades microbianas foram analisadas utilizando-se next generation sequencing. A resposta imunológica foi avaliada através da quantificação dos níveis séricos de citocinas. Os resultados da etapa 1 revelaram que SD está associada à disbiose nas comunidades fúngicas e bacterianas, inclusive em áreas da pele que não apresentam sintomas da doença, sugerindo a ocorrência de um processo sistêmico, possivelmente imunológico. Na etapa 2, a disbiose associada a fungos da pele foi confirmada. Os resultados revelaram um compartilhamento de fungos entre pessoas e o ambiente, principalmente através das mãos. Na etapa 3, foram observadas alterações nos níveis de citocinas em pessoas com SD, sugerindo que a doença está relacionada com alterações imunológicas. Os resultados coletivamente revelam que a SD está relacionada à interação entre a microbiota e a resposta imune do hospedeiro. Assim, este trabalho pode ter implicações importantes na compreensão e no tratamento de doenças de pele. The human skin is inhabited by a complex community of microorganisms that can positively influence health but also can cause diseases. Seborrheic dermatitis (SD) is widespread disease causing itching and desquamation, mainly on the scalp. SD has been associated with Malassezia yeasts, although their role is not clear, and the etiology of the disease is still not completely elucidated. The immune response also plays an important role in the pathogenic process, influencing and being influenced by the microbiota. Little is known about how the microbiota is acquired and shared. The interaction between people and surfaces and objects, together with the ability of microorganisms to colonize different environments, may facilitate microbial sharing. This work aims to characterize the microbiota of the skin and the immune response in patients with SD and their family members. The study was divided into three stages: (1) analysis of fungal and bacterial microbiotas; (2) analysis of the fungal microbiota of families and built environments; and (3) analysis of the immune response. Samples were obtained from healthy and SD subjects, their houses and pets. The microbial communities were analyzed using next generation sequencing. The immune response was assessed by quantifying cytokine serum levels. Results of stage 1 revealed that SD is associated with dysbiosis in fungal and bacterial communities, including skin areas that do not show SD symptoms, suggesting a systemic process, possibly immunological. In stage 2, dysbiosis in fungal communities was confirmed. The results revealed that fungi are shared between people and the environment, especially through the hands. In stage 3, changes in cytokine levels were observed in people with SD, suggesting that the disease is related to immunological alterations. The results collectively reveal that SD is related to the interaction between the microbiota and the host immune response. Thus, this work may contribute for understanding and treating skin diseases.

A vacinação é um dos métodos mais adequado para proteger a população em geral de infeções. No entanto, a contínua evolução e a resistência dos microrganismos aos métodos atualmente existentes traduz-se na necessidade de inovar nesta área. A imunização através das mucosas, particularmente por via intranasal, apresenta diversas vantagens, relativamente à imunização por outras vias, particularmente no que concerne à potenciação da resposta imunológica, sendo um tema amplamente estudado por vários investigadores. Na presente dissertação é analisada a influência de diversos sistemas coloidais na encapsulação de antigénios e/ou adjuvantes utilizados para a imunização intranasal. Os estudos in vivo mais recentes envolvendo nanopartículas, micelas, lipossomas, arqueossomas, nanotubos de carbono ou partículas ‘virus-like’ são apresentados, bem como as barreiras fisiológicas, farmacêuticas e regulamentares que estes sistemas têm que ultrapassar para atingirem o sucesso no mercado e na adesão da população. Despite being one of the most effective ways to protect the world population against infections, the continuous emergence and resistance of pathogens to vaccination highlights the constant need of innovation on this field. Immunization through the mucosa, particularly through the intranasal route, has several advantages over immunization by other routes, particularly with regard to the potentiating the immune response, being a topic widely studied by several investigators. This dissertation provides an overview on recent studies evolving particulate systems for antigens delivery, with or without adjuvants, to the airway mucosa. The most recent and relevant in vivo studies with nanoparticles, micelles, liposomes, archaesomes, carbon nanotubes or virus-like particles are presented, as well as physical, pharmaceutical and regulatory barriers that have to be overtaken by these particulate systems to hit clinical and commercial success.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2017. Infecções por Escherichia coli (E. coli) ainda são um problema de saúde pública graças ao seu alto potencial zoonótico e ao fato de que em muitos países ainda existem altos índices de mortalidade. Sistemas de secreção são descritos como importantes aparatos celulares para que bactérias sejam capazes de translocarem proteínas efetoras para células hospedeiras. Dentre as proteínas efetoras que compõe o sistema de secreção do tipo VI (SST6), destacam-se ClpV e IcmF, por sua importância em manter o SST6 funcional. Desta forma, o objetivo do presente trabalho foi analisar o papel do SST6 bacteriano, via ClpV e IcmF, na ativação dos inflamassomas durante a resposta imune inata. Através dos resultados observamos que o SST6 é crucial para a replicação intracelular de E. coli em macrófagos, modulando a secreção de citocinas, o metabolismo redox da célula e a ativação dos inflamassomas através da clivagem de caspase 1. As proteínas NLRP3 e as caspases 1 e 11 são necessárias para o aumento da secreção de IL-1β induzida por E. coli. Demonstramos que a presença das caspases 1 e 11, bem como do receptor NLRP3 podem atuar em outros processos e mecanismos celulares ativados durante a infecção por E. coli, como a apresentação de antígenos lipídicos, geração de espécies reativas de oxigênios, produção de óxidos nítrico e outras citocinas pró-inflamatórias. A ausência de componentes do inflamassoma favoreceu a replicação intracelular bacteriana assim como a colonização de órgãos vitais em camundongos como o fígado e o baço. Investigamos também o papel do metabolismo lipídico durante a infecção através da análise da biogênese de corpúsculos lipídicos e ainda constatamos que a replicação intracelular bacteriana está relacionada com a presença da enzima ácido graxo-sintase. Portanto o presente trabalho caracterizou os diferentes mecanismos celulares envolvidos durante a ativação da resposta imune inata frente à infecção com uma linhagem patogênica de E. coli focando no papel do sistema de secreção do tipo VI, através do uso de cepas onde suas proteínas efetoras são ausentes, e ainda a relevância de componentes do inflamassoma nesse processo. Escherichia coli (E. coli) infections remains a public health problem since its higher zoonotic power and the fact that in a lot of countries there are still cases with mortality risk. Secretion systems are described as important cellular apparatus to make bacteria capable of translocate effectors proteins to the host cell. Among all proteins constituent of type six secretion system (T6SS) effectors proteins, ClpV and IcmF are highlighted due to their importance to maintain T6SS functional. Therefore, the aim of the present work was to analyze the role of T6SS through ClpV and IcmF in inflammasome activation during innate immune response. Taken together, odemonstrated that T6SS is crucial to control intracellular bacterial replication in macrophages by modulating cytokines release, cell redox metabolism and inflammasome activation through caspase 1 cleavage. The NLRP3 receptor, as well as caspases 1 and 11, are necessary to increase IL-1β release induced by E. coli. We showed that the presence of caspases 1 and 11 and NLRP3 can influence in other process and cellular mechanisms active during E. coli infection, such as, lipid antigen presentation, generation of oxygen reactive species, nitric oxide and other pro-inflammatory cytokines production. The absence of inflammasome components improved bacterial intracellular replication and the colonization of the liver and spleen in mice. We also investigated the role of lipid metabolism during infection through analyses of lipid droplet biogenesis and verified that intracellular bacterial replication can be associated with fatty acid synthase. Therefore, this work characterized the different mechanisms involved during innate immune response activation upon infection with a pathogenic strain of E. coli focusing in the role of bacterial T6SS, using strains where its effector proteins are absent, and the relevance of inflammasome components in this process.

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The experimental system of Taenia crassiceps cysticerci infection in BALB/c mice is considered to be the most representative model of cysticercosis. In our work, mice were sacrificed 7 and 30days after infection, and pouch fluid was collected to determine the number of accumulated cells and the concentrations of IFNγ, IL-2, IL-4, IL-6, IL-10 and nitric oxide. The injection of 50 nonbudding cysticerci into normal mouse dorsal air pouches induced a high level of IFNγ and nitric oxide production relative to the parasite load. The air pouch provides a convenient cavity that allows studying the cellular immunological aspects of the T. crassiceps parasite. The nonbudding cysticerci recovered from the air pouches contained cells that can reconstitute complete cysts in the peritoneal cavity of mice. In conclusion, these results demonstrate that the air pouch model is an alternative tool for the evaluation of the immune characteristics of T. crassiceps infection.

Orientadora: Profa. Dra. Marcela Sorelli Carneiro Ramos Tese (doutorado) - Universidade Federal do ABC, Programa de Pós-Graduação em Biossistemas, 2017. hipertrofia cardiaca pode ser considerada uma adaptacao fisiologica que se desenvolve quando ha uma sobrecarga cronica imposta ao miocardio. A lesao renal e definida como uma diminuicao abrupta da funcao renal e pode ser considerada uma doenca inflamatoria que pode atingir outros orgaos como, por exemplo, pulmoes, figado e coracao. Evidencias sugerem um papel importante para interleucina-6 (IL-6) nas vias moleculares que iniciam a hipertrofia. O sistema nervoso simpatico (SNS) esta relacionado com a funcao imunologica inervando os orgaos imunes sendo responsavel pela liberacao de catecolaminas. Por sua vez, as catecolaminas quando liberadas no coracao modificam o debito cardiaco por alterarem a forca de contracao nas fibras miocardicas e a frequencia cardiaca. Alem de influenciar funcionalmente a circulacao, o aumento na atividade do SNS, pode exercer um efeito trofico sobre as celulas musculares lisas e miocardicas, podendo assim, contribuir para o trofismo do sistema cardiovascular. O presente estudo buscou avaliar a participacao do Sistema Nervoso Simpatico, no desenvolvimento da hipertrofia cardiaca induzida por lesao renal isquemica. Para tanto, foram utilizados camundongos machos C57BL/6 submetidos a oclusao do pediculo renal esquerdo, por 60 min, seguido de reperfusao por 12 dias, e submetidos ou nao ao tratamento com o ¿À-bloqueador atenolol. Os resultados demostraram que o modelo experimental de isquemia/reperfusao (I/R), foi capaz de gerar um quadro de falencia renal e induzir hipertrofia cardiaca, devido ao processo inflamatorio causado pela lesao. Alem disso, o tratamento com atenolol foi capaz de prevenir o crescimento hipertrofico observado apos a I/R, avaliado pelas relacoes Peso coracao/Peso Corporeo, pelos niveis de RNAm de ANF e BNP (marcadores moleculares de hipertrofia cardiaca) e pelos niveis das citocinas inflamatorias. Da mesma forma, o tratamento reduziu os niveis de expressao genica e proteica do receptor ¿À adrenergico assim como dos demais componentes da via, e tambem a atividade enzimatica de PKA. Os niveis de noradrenalina tambem se mostraram elevados apos isquemia e reperfusao, apresentando uma relacao com a hipertrofia observada, sugerindo um papel importante do SNS na regulacao do quadro hipertrofico. Diante do exposto, os dados apresentados demonstram uma sensibilidade do tecido cardiaco para as acoes do SNS, o qual pode estar presente na regulacao de mecanismos que levam a patogenese da hipertrofia cardiaca neste modelo. Cardiac hypertrophy is a physiological adaptation that develops when a chronic overload is imposed on the myocardium. Kidney damage is defined as an abrupt decrease in kidney function and can be considered an inflammatory disease that can target other organs such as the lungs, the liver and the heart. Evidence suggests an important role for interleukin-6 (IL-6) in the molecular pathways that initiate hypertrophy. The sympathetic nervous system is related to the immune function by innervating the immune organs and also being responsible for the release of catecholamines. On the other hand, the catecholamines released in the heart modify the cardiac output because they change the contraction force of the myocardial fibers and the heart rate. An increase in the activity of the SNS, which functionality influencescirculation, can exert a trophic effect on the smooth and over myocardial muscle cells, thus contributing to the trophism of the cardiovascular system. The present study aimed to evaluate the participation of the Sympathetic Nervous System in thedevelopment of cardiac hypertrophy induced ischemia/reperfusion animal model. Therefore, C57BL / 6 mice were submitted to left renal pedicle occlusion for 60 min, followed by reperfusion for 12 days, with or without treatment with the â-blocker atenolol. The results demonstrated that the experimental model of ischemia / reperfusion (I / R) was able to generate renal failure and induce cardiac hypertrophy due to the inflammatory process caused by the lesion. In addition, atenolol treatment was able to prevent the hypertrophic development observed after I / R, performed by heart weight/ bodyweight ratios, ANF and BNP mRNA levels (molecular markers of cardiac hypertrophy), and cytokine levels. Similarly, the treatment reduced the levels of gene and protein expression of the â-adrenergic receptor as well as of the other components of the pathway and enzymatic activity of PKA. Noradrenaline levels were also elevated after ischemia / reperfusion, showing a relationship with the hypertrophy phenomenon and therefore suggesting an important role of SNS in the regulation of hypertrophic conditions. In conclusion, this data indicates a sensitivity of the cardiac tissue to the actions of the SNS, which may be present in the regulation of mechanisms that lead to the pathogenesis of cardiac hypertrophy in this model.

Orientadora: Profa. Dra. Marcela Sorelli Carneiro Ramos Tese (doutorado) - Universidade Federal do ABC, Programa de Pós-Graduação em Biossistemas, 2017. As doencas cardiovasculares correspondem ao maior risco de morte subita em todo o mundo, a populacao mundial tem se tornado cada vez mais sedentaria e junto as doencas cardiovasculares outros problemas de saude publica aumentam como a obesidade e diabetes mellitus. Os gastos com a saude publica aumentam muito devido a maior incidencia de doencas associadas ao sedentarismo, obesidade, tabagismo, estresse, hipertensao arterial entre outros. Especificamente a obesidade e considerada uma epidemia mundial, que esta associada aos habitos alimentares e sedentarismo, e esta amplamente relacionada ao fator de risco cardiovascular como hipertensao arterial, resistencia insulinica, dislipidemia e diabetes mellitus, que favorecem o processo aterosclerotico e a ocorrencia de eventos cardiovasculares. Ha uma maior prevalencia de hipertensao arterial em individuos obesos e presenca de hipertrofia cardiaca, que e a maior condicao de morbimortalidade cardiovascular. Trata-se de uma doenca cronica relacionada a eventos pro-inflamatorios com acao de diversas citocinas e quimiocinas alem de hormonios envolvidos na resposta imunologica inata. Os receptores Toll-Like fazem parte da Resposta Imunologica Inata e estao presentes em diversos tecidos, incluindo o coracao. Quando ativados desencadeiam uma resposta intracelular, ativando fatores transcricionais, como NF-kB, que leva a transcricao genica de citocinas inflamatorias: IL-6, TNF-¿¿, INF-gama, IL-1. Algumas doencas cardiovasculares sao antecedidas por inflamacoes sistemicas ou locais, demonstrando que as citocinas sao responsaveis por modular o trofismo cardiaco. Diante do exposto, uma analise mais completa envolvendo obesidade e processos inflamatorios com o risco cardiovascular se faz necessaria para a compreensao de moleculas e vias de sinalizacao, reguladas nessa patologia. O presente estudo tem como objetivo avaliar a contribuicao dos fatores inflamatorios na hipertrofia cardiaca induzida por modelo experimental de obesidade. Para tanto, foram utilizados camundongos C57Bl/6 e camundongos FVB/NJ submetidos ao tratamento com dieta rica em gordura contendo 23% proteina, 35,5% carboidrato e 35,9% gordura e foram comparados aos grupos chow (controle) submetidos a dieta composta por 19% de proteina, 56% de carboidrato, 3,5% de gordura por 68 dias de tratamento. Os animais C57Bl/6 apresentaram maior ganho de peso em relacao aos FVB/NJ ao final dos 68 dias de dieta High Fat. O aumento de colesterol serico, insulina, glicemia, epiWAT (epididymal white adipose tissue) foi maior nos animais C57Bl/6. As duas linhagens apresentaram Heart Weight/Body Lenght e Heart Weight/Tibia Lenght maior em relacao ao grupo Chow, ou seja, grupo controle. Atraves da tecnica de Q-PCR os niveis de mRNA dos marcadores moleculares de hipertrofia cardiaca foram avaliados, e o marcador alfa-actina mostrou-se aumentado na linhagem C57Bl/6 enquanto o marcador ANF (atrial natriuretic factor) mostrou-se aumentado na linhagem FVB/NJ, quando comparados aos seus respectivos grupos chow. Os genes TLR2, TLR4, TNF-¿¿, IL-6, MyD88 e NF-kB tambem foram avaliados. A expressao genica de TLR2, MyD88 e NF-kB mostrou-se diminuida nos animais FVB/NJ submetidos a dieta rica em gordura quando comparados aos animais controle. Na linhagem C57Bl/6, observou-se aumento na expressao genica de TNF-¿¿ e NF-kB. A inducao da obesidade promoveu maior ganho de peso na linhagem C57Bl/6 acompanhado de maior adiposidade abdominal e no tecido epididimal, essa linhagem apresentou maior sensibilidade a insulina e maiores niveis de colesterol na dieta High Fat em relacao a linhagem FVB/JN. Houve remodelamento cardiaco em ambas linhagens e a expressao genica de citocinas inflamatorias foi mais evidente na linhagem C57Bl/6, tambem apresentando maior expressao genica de NF-kB. A linhagem FVB/NJ apresentou diminuicao na expressao de MyD88 e NF-kB na dieta High Fat. Com base nos resultados obtidos verificamos que os camundongos C57Bl/6 mostraram-se mais suscetiveis a dieta enquanto a linhagem FVB/JN mostrou-se mais resistente. Cardiovascular diseases correspond to an increased risk of worldwide sudden death, the world population has become increasingly sedentary and with cardiovascular diseases other public health problems increase such as obesity and diabetes mellitus. Expenditures on public health increase greatly due to a higher incidence of diseases associated with sedentarism, obesity, smoking, stress, hypertension among others. Obesity specifically is considered a worldwide epidemic, which is associated with eating habits and sedentary lifestyle, and is largely related to cardiovascular risk such as hypertension, insulin resistance, dyslipidemia and diabetes mellitus, which favor the atherosclerotic process and occurrence of cardiovascular events. There is a higher prevalence of hypertension in obese and presence of cardiac hypertrophy, which is a higher cardiovascular morbidity and mortality condition. It is a chronic disease related to pro-inflammatory events with the action of various cytokines and chemokines in addition to hormones involved in the innate immune response. Toll-like receptors are part of the innate immune response and are present in several tissues including the heart. When activated trigger an intracellular response, activating transcriptional factors such as NF-kB, which leads to the genetic transcription of inflammatory cytokines: IL-6, TNF- á, IFN-gamma, IL-1. Some cardiovascular diseases are antecedents of systemic or local inflammations, demonstrating that cytokines are responsible for modulating cardiac trophism. In summary, a more complete analysis involving obesity and inflammatory processes with cardiovascular risk to understand molecules and signaling pathways regulated in this pathology are needed. The present study aims to evaluate the contribution of inflammatory factors in cardiac hypertrophy induced by the experimental model of obesity. For this, C57Bl/6 mice and FVB/NJ mice submitted to a high fat diet containing 23% protein, 35.5% carbohydrate and 35.9% fat were compared to the Chow (control) groups submitted to a chow diet containing 19% protein, 56% carbohydrate, 3.5% fat for 68 days of treatment. The C57Bl/6 animals presented greater weight gain in relation to FVB/NJ at the end of 68 days of high fat diet. Serum cholesterol, insulin, glycemia, epiWAT (epididymal white adipose tissue) increased in C57B1/6 animals. Both strains presented Heart Weight/Body Lenght and Heart Weight/Tibia Lenght higher than the Chow group. mRNA levels of cardiac hypertrophy molecular markers were evaluated through Q-PCR technique, and the alpha-actin marker was shown to be increased in the C57B1/6 lineage while the ANF (atrial natriuretic factor) marker was shown to be increased in the FVB/NJ lineage, when compared to their respective chow groups. TLR2, TLR4, TNF-á, IL-6, MyD88 and NF-kB genes were also evaluated. Gene expression of TLR2, MyD88 and NF-kB were decreased in FVB / NJ animals submitted to a high fat diet when compared to control animals. There was an increase in the gene expression of TNF-á and NF-kB in C57Bl/6 lineage. The induction of obesity promoted greater weight gain in the C57Bl/6 mice followed by a greater abdominal and epididymal adiposity, this lineage presented higher insulin sensitivity and higher cholesterol levels in the High Fat diet when compared to the FVB/JN lineage. There was cardiac remodeling in both lineages and inflammatory cytokines gene expression were more evident in the C57Bl/6 mice, also presenting a greater gene expression of NF-kB. The FVB/NJ mice showed decreased expression of MyD88 and NF-kB on the High Fat diet. Based on the results, we found that the C57Bl/6 mice were more susceptible to the High Fat diet than the FVB/JN strain.

Parasitoses intestinais e esquistossomose constituem sérios problemas de saúde pública e estão distribuídas de forma cosmopolita, tendo maior prevalência nos países em desenvolvimento, onde fatores como condições econômicas, saneamento básico e educação sanitária se mostram precários. Na maioria das vezes, essas doenças estão relacionadas com desnutrição e anemia resultando em deficiências no desenvolvimento físico e cognitivo da população infantil, geralmente a mais afetada. No Brasil é elevada a frequência de parasitoses intestinais e de esquistossomose, sobretudo entre crianças em idade escolar. Poucos estudos têm avaliado os efeitos dessas infecções no desenvolvimento cognitivo. O objetivo deste trabalho é avaliar o impacto de infecções parasitárias no desempenho cognitivo e na interação entre sistema hormonal e sistema imunológico em escolares do Município de Jaboticatubas - MG. 316 estudantes participaram do levantamento parasitológico inicial, porém, apenas 53 foram acompanhados no estudo de coorte, divididos em grupos e subgrupos e submetidos, antes e três meses após tratamento, a exames parasitológicos de fezes; avaliação imunológica, hormonal e de desempenho cognitivo através dos subtestes Cubos e Vocabulário da Escala Wechsler de Inteligência para Crianças - WISC. A análise estatística foi realizada através do programa BioEstat (versão 5.3). Dados paramétricos foram analisados por meio dos testes t de Student e correlação de Pearson; para os dados não-paramétricos utilizou-se os testes Wilcoxon, Mann-Whitney e correlação de Spearman, nesses testes um valor p menor de 0,05 foi considerado significativo. O levantamento epidemiológico revelou 8,9% de positividade para parasitoses intestinais e esquistossomose. Dos indivíduos infectados 71,4% (n=20) foram mono ou coinfectados por S. mansoni. As análises imunológicas identificaram marcadores como IL-1, TNF- e IL-12, em níveis aumentados nos escolares infectados por S. mansoni. A produção dessas citocinas sugere um predomínio de uma resposta imunológica inflamatória ou do tipo 1. Essa tendência de perfil imunológico é reforçada pelos níveis aumentados da melatonina, que induz a produção da citocina IL-12. Três meses após tratamento, verificou-se expressivo aumento da produção de IL-8, que pode ser um reflexo à liberação de antígenos decorrentes da destruição de S. mansoni adultos no sistema porta e nas veias mesentérias. Os resultados do desempenho cognitivo não evidenciaram melhoria do aprendizado após o tratamento antiparasitário e não houve diferença de desempenho intergrupos. Entre os escolares infectados houve associação positiva entre o subteste cognitivo Cubos e duas citocinas (IL-27 e IL-33). Após o tratamento verificou-se uma correlação positiva entre Cubos e TNF-; e entre subteste Vocabulário e as citocinas IL-1 e TNF-. Mesmo com alterações imunológicas e hormonais em escolares infectados e três meses após tratamento, não foi possível de registrar um impacto significativo das infecções intestinais ou da esquistossomose sobre o desempenho cognitivo dos escolares no presente estudo. Isso, muito provavelmente, devido às baixas cargas parasitárias encontradas na população avaliada. Assim, embora o tratamento antiparasitário não tenha refletido na melhoria do desempenho cognitivo dos escolares, o percurso teórico e metodológico desenvolvido no presente estudo evidencia a viabilidade do modelo enquanto estratégia potencial para pesquisas futuras com escolares parasitados. Intestinal parasites and schistosomiasis still cause serious public health problems and are distributed all over the world. Highest prevalences are found in under-developed countries with inferior economical conditions, sanitation and educational level. Generally, these diseases are associated with undernutrition and anemia and result in decreased physical and cognitive development in children, which are most affected. Especially in schoolchildren, there exists an increasing frequency of intestinal parasites and schistosome infections. Up to now, very few studies have evaluated the impact of such infections on the cognitive development or capacity.Therefore, the goal of the present investigation was to evaluate the impact of intestinal parasitism on cognition and on the interaction between hormonal and immune system in schoolchildren from the Municipality of Jaboticatubas, Minas Gerais State. A total of 316 schoolchildren participated during the initial parasitological exams. Of those, fifty-three individuals participated in the cohort study. Apart from parasitological exams, immunological parameters, hormone levels, and the cognitive performance were evaluated, the later using Cubes and Vocabulary subtests of Wechsler Intelligence Scale for Children WISC. Statistical analyses were performed using BioEstat 5.3 version. The significance level was set to p 0.05. For parametric data, Students t-test and correlation of Pearson were applied. For non-parametric data, Wilcoxon or Mann- Whitney U-test were used and correlations were evaluated by using Spearmans rank test. An overall prevalence of 8.9% for intestinal parasitism and/or schistosomiasis resulted in examined schoolchildren. Out of these infected individuals, the majority (71.4%) were mono- or co-infected with S. mansoni. Analyses of immune responses revealed an increase of immunological markers, such as IL-1, TNF- and IL-12 in S. mansoni infected schoolchildren. Thus, indicating a predominant inflammatory or type 1 immune response in this group. This immunological profile is accompanied by increased melatonin levels, a hormone which is known to increase IL-12 production. Three months after anti-parasitic treatment, a significant increase in IL-8 production was measured, which might be a response against the liberation of parasite antigens after disintegration of adult parasites of S. mansoni in the portal system or mesenteric veins. Evaluation of the cognitive capacity of infected children did not reveal improvement after chemotherapy and no significant differences between the study groups were notified. Within the infected group, there was a positive association between the Cubes subtest and the secretion of two cytokines (IL-27 and IL-33). After treatment, a positive correlation between Cubes subtest and TNF-; and between Vocabulary subtest and the cytokines IL-1 and TNF- resulted. Though, we found immunological and hormonal changes in infected schoolchildren before and three months after chemotherapy, we were not able, to find an impact of intestinal infections and/or schistosomiasis on the cognitive function of these schoolchildren. Most probably, this lacking impact on cognition was due to low parasite loads in the endemic population. Even though, chemotherapy did not result in improved cognitive functions in schoolchildren, we were able to show the viability of the theoretical concept and of the applied methods, which may be further improved in future studies with parasitezed schoolchildren

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) The main goal of the present work was to perform an expression analysis of the Arg1, Arg2 and iNOS genes in the liver, anterior kidney and spleen of pacu (Piaractus mesopotamicus) in 4 different times post-infection, in response to the experimental infection with the bacterium Aeromonas dhakensis. The strain used in the present study was isolated from a specimen of P. mesopotamicus from the CEPTA/ICMBio in Pirassununga – SP, characterized by biochemical tests using the VITEK 2 automated identification system, and identified as belonging to the genus Aeromonas. Further molecular analyses of the 16S rRNA, gyrB and rpoD genes showed that the isolated strain belonged to the species A. dhakensis, a species that had never been reported in South America. This strain was resistant to the antibiotics ampicillin, ampicillin/sulbactam, cefoxitin and meroponem, with a high virulence level against experimentally infected pacus, causing clinical signs of acute hemorrhagic septicemia. The fifty per cent lethal dose (LD50) was 1.1 × 105 CFU/fish. Once characterized, this A. dhakensis strain was used in the infection experiments in P. mesopotamicus in order to analyze the expression of the Arg1, Arg2 and iNOS genes. These genes were sequenced and, from the partial sequences, P. mesopotamicus specific primers were designed for the quantitative real time PCR (qPCR) expression analyses. Following the infection with A. dhakensis, the Arg1 gene expression levels decreased in the kidney 24 h post-infection; the Arg2 gene expression of reduced in the liver at 12 h and 24 h post-infection and increased in the spleen at 24 h and 48 h post-infection; the gene expression of iNOS was significantly increased in she spleen at 12 h, 24 h, and 48 h post-infection. The results of the present study showed that the Arg2 and iNOS genes were the most variable in response to the A. dhakensis infection, indicating that these are involved in the initial immune response to bacterial infections in P. mesopotamicus. The organ that was most involved in this response was the spleen, which showed the highest levels of variation in these genes after the challenge. This is the first study assessing the expression levels of the Arg1, Arg2 and iNOS genes in P. mesopotamicus following the infection with A. dhakensis, providing a valuable contribution for the understanding of the immune response mechanisms against bacterial pathogens in this important South American fish species. O presente trabalho teve como objetivo realizar uma análise da expressão dos genes das enzimas Arg1, Arg2 e iNOS no fígado, rim anterior e baço de pacu (Piaractus mesopotamicus) em 4 períodos diferentes pós-infecção, em resposta à infecção experimental pela bactéria Aeromonas dhakensis. A cepa bacteriana utilizada no presente estudo foi isolada de um exemplar de P. mesopotamicus obtido do CEPTA/ICMbio em Pirassununga – SP, caracterizada por testes bioquímicos pelo sistema de identificação automatizado VITEK 2 e identificada como sendo do gênero Aeromonas. Posteriores análises moleculares dos genes 16S rRNA, gyrB e rpoD demonstraram que a bactéria isolada era da espécie A. dhakensis, cuja ocorrência na América do Sul nunca havia sido relatada. Essa cepa se mostrou resistente aos antibióticos ampicilina, ampicilina/sulbactam, cefoxitina e meropenem, com elevado nível de virulência para pacus experimentalmente infectados, causando sinais clínicos de septicemia hemorrágica aguda. A dose letal para 50% dos animais infectados (DL50) foi de 1,1 × 105 UFC/peixe. Uma vez caracterizada, essa cepa de A. dhakensis foi utilizada no experimento de infecção em P. mesopotamicus para análise de expressão dos genes Arg1, Arg2 e iNOS. Esses genes foram sequenciados e, a partir das sequências parciais, primers específicos para P. mesopotamicus foram desenhados para as análises de expressão por PCR em tempo real quantitativo (qPCR). O gene Arg1 apresentou os maiores níveis de expressão basal no fígado, já o gene Arg2 foi mais expresso no rim e o gene iNOS apresentou os maiores níveis de expressão basal no rim e no fígado. Após a infecção por A. dhakensis, o gene Arg1 apresentou uma leve diminuição na expressão no rim no período de 24 h pósinfecção; o gene Arg2 apresentou uma redução na sua expressão no fígado nos períodos de 12 h e 24 h pós-infecção e um aumento na expressão no baço nos períodos de 24h e 48 h pósinfecção; e o gene iNOS apresentou aumento significativo nos níveis de expressão no baço nos períodos de 12 h, 24 h e 48 h pós-infecção. Os resultados do presente trabalho mostram que os genes Arg2 e iNOS foram os que apresentaram maior variação em resposta à infecção por A. dhakensis, indicando que estes genes estão envolvidos na resposta inicial à infecções por essa bactéria em P. mesopotamicus. O baço foi o órgão mais envolvido nessa resposta, apresentando os maiores variações nos níveis de expressão desses genes após o desafio. Este é o primeiro estudo avaliando os níveis de expressão dos genes Arg1, Arg2 e iNOS em P. mesopotamicus após infecção por A. dhakensis, fornecendo uma valiosa contribuição para o entendimento dos mecanismos de resposta imunológica contra patógenos desse importante peixe sul-americano.

INTRODUÇÃO: A resposta imune pode ser um elemento chave para a progressão ou remissão da infecção pelo papilomavírus humano (HPV) no estroma da cérvice uterina. Este estudo objetivou quantificar no estroma cervical a presença de linfócitos T CD4, CD8 e células NK, por imunohistoquímica, em lesões de alto e baixo grau em pacientes infectadas por HPV MÉTODOS: Utilizou-se 56 amostras de biópsia da estroma cervical, sendo 43 amostras positivas para DNA de HPV de alto risco oncogênico e com diagnóstico histopatológico de neoplasia intraepitelial cervical (NIC) de alto e baixo grau, ou negativa para lesão intraepitelial e malignidade (NILM), e 13 amostras de pacientes negativas para DNA de HPV com diagnóstico histopatológico NILM RESULTADOS: Maior quantidade de linfócitos T CD4 foi observada em amostras NIC II/III, carcinoma e NILM (p=0,04) e naquelas cuja carga viral esteve entre 10 e 1,000 RLU/PCB. O predomínio de linfócitos T CD8 ocorreu em maior proporção nas amostras NIC II/III (p=0,02) e em amostras com carga viral entre 100 e 1.000 RLU/PCB. As células NK prevaleceram nas amostras com lesões de baixo grau e com baixa carga viral CONCLUSÕES: Este estudo comprovou que nas fases iniciais da infecção, onde não há ainda alterações celulares de alto grau, não temos a presença de células que possam desencadear a fase efetora da resposta imune. ABSTRACT - INTRODUCTION: Immune response might be a key element regarding the progression or regression of human papillomavirus (HPV) infection in the stroma of the uterine cervix. This study aimed to quantify the presence of CD4 and CD8 T lymphocytes and NK cells in the cervical stroma, by means of immunohistochemistry, in high and low grade lesions in patients infected by HPV.METHODS: Fifty-six biopsy samples from the uterine cervix were used. Forty-three samples were positive for oncogenic high-risk HPV DNA and had a histopathological diagnosis of high and low-grade cervical intraepithelial neoplasia (CIN) or negative for intraepithelial lesion and malignancy (NILM); while the other 13 samples were negative for HPV DNA with a histopathological diagnosis of NILM RESULTS: Higher quantities of CD4 T lymphocytes were observed in CIN II/III, carcinoma and NILM samples (p = 0.04) and in those in which the viral load was between 10 and 1.000 RLU/PCB. CD8 T lymphocytes were predominant in CIN II/III samples (p = 0.02) and also in samples with viral loads between 100 and 1,000 RLU/PCB. NK cells predominated in samples with low-grade lesions and low viral load. CONCLUSIONS: This study proved that in the initial stages of the infection, in which no high-grade cell abnormalities have yet occurred, no cells that might trigger the effector phase of the immune response.

PURPOSE: To assess the chemotactic activity and phagocytic response of neutrophilic polymorphonuclear leukocytes among women in the first five days postpartum.METHODS: A prospective, cross-sectional clinical-laboratory study was conducted. Data of 31 postpartum women during the first five days after vaginal delivery were compared with those of 24 healthy non-pregnant non-postpartum women matched for age. The inclusion criteria were postpartum, clinically and obstetrically healthy women; vaginal delivery, singleton pregnancy carried to term; non-hypertensive, hyperglycemic, allergic, malnourished or with autoimmune or neoplastic diseases; not having received vaccines or blood products in the last three months. The Control Group was chosen according to the same inclusion criteria but involving non-pregnant non-postpartum women. The chemotactic activity of neutrophilic polymorphonuclear leukocytes was assessed by determining the distance from directed migration to bacterial lipopolysaccharide, in three Boyden chamber assays. The phagocytic response was identified by assessing the Zymosan particles' ingestion in three assays carried out in Leighton tubes. The Student's t-test was used in the statistical analysis, adopting a 5% level of significance.RESULTS: The chemotactic activity of neutrophilic polymorphonuclear leukocytes from postpartum women in the presence of homologous (73.2±6.9) and autologous (78.6±13.9) sera showed a significant increase compared to the values observed in the Control Group (64.1±4.1 and 66.6±5.4). Both chemotactic response and phagocytosis ingestion phase of neutrophilic polymorphonuclear leukocytes were significantly increased (p

Objetivou-se com o presente estudo comparar o efeito de diferentes sorovares de Salmonella na resposta imune local da mucosa do intestino de frangos de corte. Aos sete dias de idade, as aves foram desafiadas com os sorovares S. Enteritidis, S. Typhimurium, S. Senftenberg, S. Mbandaka e S. Minnesota. Foi observado que todos os sorovares testados foram capazes de colonizar o intestino das aves sendo possível o isolamento de Salmonella em suabes de cloaca, 48 h após inoculação. De maneira geral, as aves do grupo controle negativo, que não foram desafiados apresentaram quantidade significativamente menor de células imunológicas na mucosa intestinal do que as aves desafiadas. Porém, verificou-se que os sorovares de Salmonella, utilizados neste estudo, apresentaram diferentes efeitos sobre a dinâmica celular da mucosa do íleo e ceco e afetaram de modo diferente o ganho de peso e ganho médio diário das aves demonstrando distintos graus de patogenicidade. Os sorovares Enteritidis e Typhimurium apresentaram um efeito mais intenso tanto no desempenho quanto na mobilização de células imunológicas na mucosa intestinal de frangos de corte The study was designed to compare the effect of different Salmonella serovars in immune response across the count of CD8+ cells, CD4+ cells, goblet cells and macrophages in the gut mucosa of broilers. During the experimental inoculation at 7 day-old were used Salmonella enterica subspecies enterica sorovars Enteritidis, Typhimurium, Senftenberg, Mbandaka and Minnesota. It was observed that all serovars tested were capable of contaminating the poultry being possible counts of Salmonella in cloacal swabs, 48 h after inoculation and into the crop and cecum, at 14 and 20 day-old. Serovars tested had different effects on broiler performance assessed at 20 days. In the mucosa of the ileum and cecum of broilers, it was observed that some of the serotypes increased CD8 + cells, CD4 + cells, goblet cells and macrophages compared to the negative control group both at 14 and at 20 day-old. S. Enteritidis and S. Typhimurium are the serovars that showed the more intense effect in live performance and in the immune system of birds showing pathogenic characteristic; generally the broilers of the negative control showed significantly less immune cells on the intestinal mucosa than broilers inoculated experimentally. However, it was found that the Salmonella serovars used in this study had different effects on the cellular dynamics of the mucosa of the ileum and cecum and differently affect weight gain and average daily gain of poultry showing different levels of pathogenicity.

Trabalho Final de Mestrado Integrado, Ciências Farmacêuticas, Universidade de Lisboa, Faculdade de Farmácia, 2015 Made available in DSpace on 2017-03-07T10:44:38Z (GMT). No. of bitstreams: 3 MICF_Sara_Pintado.pdf: 1252816 bytes, checksum: 34ad8a2a18d7cbca8099b4a67d7c38c6 (MD5) license.txt: 1195 bytes, checksum: 25733b0b84e8845b1d09ead22e7c5a2c (MD5) MICF_Sara_Pintado.pdf: 1252816 bytes, checksum: 34ad8a2a18d7cbca8099b4a67d7c38c6 (MD5) Previous issue date: 2015

A leishmaniose visceral (LV) é endêmica no Brasil, sendo a região nordeste a que apresenta maior incidência, apesar de nos últimos 30 anos ter aumentado o número de casos em outras regiões do país. A LV na América Latina é resultante da infecção por Leishmania infantum. No entanto, nem todas as pessoas infectadas desenvolvem doença; na verdade, a maioria apresenta resolução espontânea da infecção sem sintomas característicos de LV. Tradicionalmente a avaliação do perfil imunológico tem sido realizada utilizando a reestimulação de células mononucleares de sangue periférico em cultura. Esses estudos revelaram que pacientes com LV apresentavam inibição tanto da proliferação linfocitária quanto da resposta pró-inflamatória anti-Leishmania. O presente trabalho teve por objetivo avaliar a resposta imune na LV sintomática, na cura pós-tratamento e assintomática. Para isso, analisamos características imunofenotípicas relacionadas à ativação, Treg e memória de linfócitos, por citometria de fluxo, assim como a produção de citocinas ex vivo ou em cultura de sangue total. Para os voluntários com LV, foi realizado um estudo longitudinal com reavaliação imunológicas aos 4 e 14 meses após a cura clínica. O grupo controle incluiu pessoas provenientes de região endêmica, sendo dividido em 2 grupos: Controle Positivo, formado por pessoas que apresentaram sorologia e∕ou PCR anti-Leishmania positivos e Controle Negativo formado por pessoas com sorologia e PCR anti-Leishmania negativos. Durante a LV os linfócitos CD4 apresentam um maior perfil de ativação e memória, além de serem maiores produtores de citocinas em cultura, quando comparado aos linfócitos CD8, contudo essa ativação não é Leishmania específica, visto que ocorreu tanto em ausência (CD4+CD25+:10,60%, CD8+CD25+:5,36%; p

There is little information on the humoral response of sheep experimentally infected with Echinococcus granulosus. Thus, the objective of this study was to evaluate this response and measure its evolution. Doses of 10, 100, 1000 and 10000 E. granulosus eggs were prepared and inoculated via intraruminal puncture. Blood samples were obtained before inoculation and every 48 h after inoculation, until they became seropositive. Thereafter, they were taken monthly for the first year and then every three months until 1700 days of observation had been completed. An ELISA test, with total hydatid fluid antigen, was used for immunodiagnosis. The average optical density of the 12 inoculated sheep was found to be above the mean cutoff value 10 days after inoculation, went on increasing until 180 days after inoculation and remained above the cutoff level until the end of the observation period. This confirms that the antibody response of sheep to E. granulosus infection occurs before production of hydatid fluid and that activation, mobilization and establishment of oncospheres in the tissues generates a persistent response from the host's immune system. Existe pouca informação sobre a resposta imune humoral de ovinos experimentalmente infectados por Echinococcus granulosus. O objetivo deste estudo é avaliar a resposta imune por anticorpos em ovinos infectados. Os ovinos receberam doses de 10, 100, 1.000 e 10.000 ovos de E. granulosus por via intrarruminal. Amostras de sangue foram colhidas antes e após infecção, a cada 48 horas, até a detecção de anticorpos anti-E. granulosuse após, colheram-se amostras mensal e trimestralmente, no primeiro ano até 1.700 dias de infecção. No imunodiagnóstico, utilizou-se o ensaio imunoenzimático indireto (ELISA-teste) e como antígeno total, líquido hidático. Na detecção de anticorpos anti-E. granulosus no soro das 12 ovelhas, a densidade ótica esteve acima do ponto de corte, após 10 dias de infecção, aumentando até 180 dias pós-infecção, e permanecendo acima desses dias até o final do experimento. Isso confirma que a resposta por anticorpos em ovinos infectados por E. granulosus antecede a produção de líquido hidático, e que a ativação, mobilidade e permanência das oncosferas nos tecidos possibilita a resposta imune dos hospedeiros.

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandarego@gmail.com) on 2015-02-23T12:24:17Z No. of bitstreams: 1 Tese_ICS_ Évelin Santos Oliveira.pdf: 7328336 bytes, checksum: fdac89fd4b2f0b48c7bf3d08e065fbe1 (MD5) Made available in DSpace on 2015-02-23T12:24:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_ICS_ Évelin Santos Oliveira.pdf: 7328336 bytes, checksum: fdac89fd4b2f0b48c7bf3d08e065fbe1 (MD5) A vacina Bacilo Calmette-Guérin (BCG) é a única vacina disponível para prevenir a tuberculose. Na infância apresenta ação protetora principalmente contra formas disseminadas da doença, porém a proteção contra a forma pulmonar, responsável pela transmissão, é variável. Novas estratégias vacinais buscam maior eficácia, e a descoberta de biomarcadores que avaliem a resposta imune pós vacinação pode auxiliar no desenvolvimento de novas vacinas. A modulação de parâmetros imunológicos em resposta aos antígenos de Mycobacterium tuberculosis em adultos jovens revacinados com BCG foi investigada para estudar os padrões imunológicos associados a uma boa resposta versus uma resposta ineficaz contra micobactérias. Avaliou-se a expansão de células produtoras de citocinas e os níveis de citocinas em culturas de sangue total. Dois meses após a revacinação, alguns indivíduos apresentaram aumento expressivo da produção de interferon-gama (IFN- ) por estímulo com antígenos micobacterianos e aumento de linfócitos T produtores de IFN- , fator de necrose tumoral (TNF) e linfócitos polifuncionais. Esses indivíduos mantiveram produção aumentada de IFN- após um ano. Soros de voluntários que apresentaram altos níveis de IFN- foram capazes de reconhecer diferencialmente proteínas da cepa vacinal BCG Moreau-RJ. As proteínas identificadas foram analisadas in silico quanto aos epítopos potencialmente passíveis de reconhecimento específico por moléculas do complexo principal de histocompatibilidade humanas. Dessa forma, a produção de IFN- pode ser um biomarcador para a avaliação da eficácia de vacinas contra a tuberculose, e a estratégia utilizada pode apontar candidatos a uma nova vacina contra a tuberculose com melhor eficácia do que a BCG em populações humanas.

OBJETIVO: Avaliar a etapa de ingestão da fagocitose e do metabolismo oxidativo de neutrófilos em crianças portadoras de desnutrição moderada. MÉTODOS: Foi analisado o sangue periférico de vinte e duas crianças portadoras de desnutrição moderada, sem infecção, comparando-se os resultados aos de vinte crianças eutróficas da mesma faixa etária (2 a 5 anos de idade). A ingestão fagocitária por neutrófilos foi avaliada através da ingestão de partículas de zimosan e o metabolismo oxidativo avaliado pela redução do nitro blue tetrazolium entre um número fixo de 200 neutrófilos. RESULTADOS: As médias aritméticas da ingestão por neutrófilos de partículas de zimosan, zimosan incubado com soro homólogo e zimosan incubado com soro autólogo foram 18, 41 e 46 em desnutridos e 20, 57 e 63 em eutróficos. A redução espontânea e estimulada de nitro blue tetrazolium foi de 6 e 11 em desnutridos e 12 e 17 em eutróficos. CONCLUSÃO: Concluiu-se haver uma diminuição da etapa da ingestão e do metabolismo oxidativo de neutrófilos nos pacientes estudados portadores de desnutrição moderada.PURPOSE: To evaluate the phagocytic function of polymorphonuclear neutrophils in moderate malnutrition. METHODS: The phagocytic function of neutrophils obtained through peripheral blood sampling of twenty two children with moderate malnutrition without infections was analyzed. The results were compared to a group of twenty well nourished children matched for age (two to five years old). The phagocytic function was assessed by the ingestion of zymosan particles and nitro blue tetrazolium reduction among 200 cells. RESULTS: The mean number of zymosan particles ingested by neutrophils incubated with homologous human serum and autologous human serum were 18, 41 and 46 in the malnutrition group compared to 20, 57 and 63 in the well nourished group. The spontaneous and stimulated reduction of nitro blue tetrazolium was 6 and 11 in the malnourished patients, respectively, and 12 and 17 in the well nourished group. CONCLUSION: A decrease in the process of ingestion and digestion during phagocytosis occurs in malnourished patients.