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Dissertação de Mestrado em Segurança Alimentar apresentada à Faculdade de Farmácia O crescimento da população mundial e a demanda por alimentos de origem animal exigem um aumento na produção de espécies animais de rápido crescimento, como os suínos. Em Portugal, a produção comercial de leitões intensificou-se significativamente nas últimas décadas, sendo a carne de suíno a mais consumida pelos portugueses. O uso de antibióticos na pecuária tornou-se prática corrente, não apenas para fins terapêuticos e profiláticos, mas também como promotores de crescimento. Na União Europeia (UE), existem regulamentos que proíbem o uso de antibióticos como promotores de crescimento e todos os medicamentos administrados a animais produtores de alimentos têm que ser aprovados pela UE ou por cada estado membro. Devem ainda ser cumpridos os limites máximos de resíduos (LMR) estabelecidos, que são descritos como a concentração máxima de resíduos que podem ser aceites como legalmente autorizados num alimento. Porém, os resíduos de antibióticos ainda encontrados em matrizes edíveis podem causar efeitos tóxicos e reações alérgicas a indivíduos com hipersensibilidade, comprometendo diretamente a saúde dos consumidores. Estas práticas ainda expõem as bactérias a doses não letais de antibióticos, favorecendo o aparecimento de estirpes bacterianas resistentes. A presença de medicamentos veterinários e outros contaminantes em tecidos edíveis é um dos principais problemas de segurança alimentar (food safety), e consequentemente apresenta implicações na disponibilidade global de alimentos (food security), o que desperta grande preocupação pública. Este estudo utiliza uma metodologia de cromatografia líquida de ultra resolução acoplada a um espectrómetro de massa com analisador de tempo de voo (UHPLC-ToF-MS), multi-classe e multi-resíduo, previamente validada de acordo com a Decisão da Comissão 657/2002/CE, para a determinação de 48 antibióticos de diversas famílias. Foram analisadas 40 amostras de rim e 40 amostras de fígado, provenientes dos mesmos leitões, permitindo uma análise comparativa dos resultados obtidos em ambos os órgãos. 45% das amostras apresentaram algum tipo de resíduo, mais especificamente 18 amostras de rim e 18 de fígado, sendo que 11 animais exibiram resíduos em ambos os órgãos. No total, foram detetados 7 antibióticos, como ciprofloxacina, danofloxacina, enrofloxacina, oxitetraciclina, espiramicina, sulfadiazina e trimetoprim. As concentrações obtidas variaram entre 0,3μg/kg (danofloxacina) e 85,2μg/kg (enrofloxacina) em rim, e entre 3,9μg/kg (danofloxacina) e 215,4μg/kg (espiramicina) em fígado, apresentando algumas diferenças significativas entre os dois órgãos, confirmando que ambas as matrizes são relevantes em programas de monitoração e controlo de resíduos de antibióticos. Todos estes antibióticos foram encontrados em concentrações relativamente baixas, nunca excedendo o LMR estabelecidos pelo Regulamento nº37/2010 da Comissão Europeia, para cada matriz edível. No entanto, várias amostras apresentaram mais do que um resíduo em simultâneo, o que pode levar a efeitos cumulativos levantando preocupações adicionais de segurança. The growth of the world population and the demand for foods of animal origin requires an increase in the production of fast-growing animal species, such as swines. In Portugal, the commercial production of piglets has significantly intensified in the last decades, being swine meat the most consumed by the Portuguese. The use of antibiotics in livestock has become a current practice, not only for therapeutic and prophylactic purposes, but also as growth promoters. In the European Union (EU), there are regulations that prohibit the use of antibiotics as growth promoters and all drugs administered to food-producing animals must be approved by the EU or by each member state. The established maximum residue limits (MRL), which are described as the maximum concentration of residues that can be accepted as legally authorized in food of animal origin, must also be respected. However, antibiotic residues still found in edible matrices can cause toxic effects and allergic reactions to individuals with hypersensitivity, directly compromising consumers’ health. These practices also expose bacteria to non-lethal doses of antibiotics, favoring the appearance of resistant bacterial strains. The presence of veterinary drugs and other contaminants in edible tissues is one of the main problems of food safety and food security, which raises great public concern.This study uses an ultra-high performance liquid chromatography coupled to a mass spectrometer with a time of flight analyzer (UHPLC-ToF-MS), multi-class and multi-residue methodology, previously validated according to Commission Decision 657/ 2002 / CE., for the determination of 48 antibiotics belonging to different families. 40 kidney and 40 liver samples from the same piglets were analyzed, allowing a comparative analysis of the results obtained for both organs. 45% of the total samples, more specifically 18 kidneys and 18 livers, presented some kind of antibiotic residue, in which only 11 animals exhibited residues in both organs. In total, 7 antibiotics were detected, such as ciprofloxacin, danofloxacin, enrofloxacin, oxytetracycline, spiramycin, sulfadiazine and trimethoprim. The obtained concentrations ranged between 0,3μg/kg (danofloxacin) and 85,2μg/kg (enrofloxacin) in kidney samples, and between 3,9μg/kg (danofloxacin) and 215,4μg/kg (spiramycin) in liver samples. Some differences between the two organs were observed, confirming that both matrices are relevant in monitoring and control programs. All of these antibiotics were found in relatively minimum concentrations, never exceeding the (MRL) set by Regulation No. 37/2010 of the European Commission, for each edible matrix. However, several samples showed more than one residue, which can lead to cumulative effects, raising additional safety concerns.

La investigación residuos de antibióticos β-Lactámicos y tetraciclinas en la leche cruda comercializada en los mercados de la ciudad de Chota 2017, responde a un abordaje cuantitativo, con diseño no experimental, de tipo descriptivo y de corte longitudinal, que tuvo como objetivo determinar la presencia de residuos de antibióticos β-Lactámicos y tetraciclinas en la leche cruda comercializada en los mercados de la ciudad de Chota que es destinada al consumo humano, durante los meses de noviembre y diciembre de 2017. La población estuvo constituida por 15 puntos de expendio de leche fresca, para el recojo de las muestras se usó tubos de propileno de capacidad de 20 mL los que fueron transportados en cadena de frio usando un cooler, para su procesamiento de las muestras se usó la kit SNAP ST, así mismo se observó las condiciones higiénico sanitarias de la venta de leche de acuerdo a las buenas prácticas de manufactura usando la observación directa a través del chek list a cada uno de los vendedores de leche fresca. De las 100 muestras tomadas de leche fresca, como resultado se obtuvo que el 29% de las muestras resultaron positivas a la presencia de antibióticos. Para los β-Lactámicos se tuvo 13% de positividad y el 16% de las muestras analizadas contenían tetraciclinas. Tesis

The study evaluated the microbiological profile of milk samples collected before and after mastitis treatment with gentamicin and investigated biofilms production and antimicrobial susceptibility of Staphylococcus spp. isolated. The presence of gentamicin residues in milk after the recommended withdrawal period was also evaluated. Antimicrobial residues were analyzed by Delvotest® SP NT over a period of 12 days beginning after 24 hours the last gentamicin application. Some of Staphylococcus spp. isolates were biofilm producers (19.05%). Staphylococcus spp. showed high levels of resistance to neomycin (16.95%), penicillin G (10.17%), and ampicillin (10.17%). Multidrug resistance to all antibiotics tested was observed in 1.69% of the Staphylococcus spp. isolates. Among 1440 mammary quarter milk samples 24.95% presented gentamicin residues after the withdrawal period. Gentamicin residues were also detected in 3.8% of samples from calibrated glass recorder jar (n=383) 4.1 days after treatment. The indiscriminate use of antibiotics may lead to the emergence of multidrug-resistant strains as well as increasing the risk of presence of residues of these drugs in milk. These problems affect the milk quality and may become a public health problem. Resumo Este estudo avaliou o perfil microbiológico de amostras de leite colhidas antes e após o tratamento da mastite com gentamicina e investigou a produção de biofilmes e o perfil de susceptibilidade antimicrobiana de Staphylococcus spp. isolados. Avaliou-se também a presença de resíduos de gentamicina no leite após o período de carência recomendado. Resíduos de antimicrobianos foram analisados por Delvotest® SP NT ao longo de um período de 12 dias, iniciando 24 horas após a última aplicação de gentamicina. Alguns dos Staphylococcus spp. isolados apresentaram produção de biofilmes (19,05%). Staphylococcus spp. apresentaram elevados níveis de resistência à neomicina (16,95%), penicilina G (10,17%), e ampicilina (10.17%). Multirresistência a todos os antibióticos testados foi observada em 1,69% dos Staphylococcus spp. isolados. Do total de 1440 amostras de leite de quartos mamários, 24,95% apresentaram resíduos de gentamicina após o período de carência. Resíduos de gentamicina também foram detectados em 3,8% das amostras de balões volumétricos coletores de leite (n= 383), 4,1 dias após o tratamento. O uso indiscriminado de antibióticos pode levar ao aparecimento de estirpes multirresistentes bem como o aumento do risco da presença de resíduos destas drogas no leite. Esses problemas afetam a qualidade do leite e podem tornar-se um problema de saúde pública.

130 páginas. Maestría en Ciencias e Ingeniería de Materiales. En este trabajo se presenta un estudio espectrofotométrico y electroquímico realizado a ceftiofur, así como de su interacción con la β-ciclodextrina, una molécula que ha demostrado coadyuvar en el estudio de diversos analitos. En el Capítulo 1 de este documento, se presenta una descripción de la problemática a la cual está sujeta ceftiofur, las medidas que instituciones regulatorias internacionales han tomado para atacarla; los trabajos reportados enfocados al estudio de la molécula, así como una descripción de las ventajas derivadas del empleo de la β-ciclodextrina, en solución y a través de la formación de películas poliméricas en superficies electródicas. En los Capítulo 2 y 3, por medio de espectrofotometría UV-Vis, se presenta la caracterización del espectro de absorción de CF, la evaluación de la estabilidad de la molécula en función del tiempo por efecto de las condiciones experimentales, la determinación de las constantes de acidez de la molécula, y de inclusión, producto de la interacción de ceftiofur con la β ciclodextrina. En el Capítulo 4, se presenta la caracterización electroquímica de ceftiofur en electrodos de pasta de carbono, el mecanismo de electrooxidación de la molécula que hasta el momento no ha sido reportado, así como la determinación de diversos parámetros termodinámicos y cinéticos del sistema de estudio. Más adelante, en el Capítulo 5, se presenta la determinación electroquímica en solución del complejo de inclusión ceftiofur-β-ciclodextrina, así como la caracterización electroquímica de ceftiofur empleando electrodos modificados con poli-β-ciclodextrina y diversos electrolitos. Finalmente, en el Capítulo 6, se presenta la determinación de ceftiofur, su cuantificación y la validación del método electroquímico a través de lo dispuesto por la IUPAC, así como guías para la validación de métodos de alto rendimiento en normas mexicanas, abriendo la posibilidad del estudio de muestras reales para la eventual aplicación del método en campo. In this work we develop a spectrophotometric and electrochemical study of ceftiofur in aqueous media, as well as its interaction with β-cyclodextrin, which has previously contributed to study several analytes. In Chapter 1 of this document, a description is presented of the problems of which ceftiofur is the subject of study and the actions that international regulatory institutions have taken to face them; the reported works focus on the study of the molecule, and on a description of the advantages derived from the use of β-cyclodextrin in solution, as well as through formation of polymeric films on electrode surfaces. Chapters 2 and 3, deal with the characterization of the ceftiofur absorption spectra through UV-Vis spectrophotometry, the evaluation of the stability of the molecule as a function of time due to the effect of the experimental conditions, the determination of its acidity and inclusion complex constants, produced by deprotonation and the interaction with β-cyclodextrin, respectively. In Chapter 4, we present the electrochemical characterization of ceftiofur on carbon paste electrodes, the electro-oxidation mechanism of the molecule that has not yet been reported, as well as the determination of several thermodynamic and kinetic parameters of the system studied. Subsequently, in Chapter 5, the electrochemical determination of the ceftiofur-β-cyclodextrin inclusion complex is shown, as well as the ceftiofur electrochemical characterization on poly-β-cyclodextrin-modified electrodes and various support electrolytes. Finally, Chapter 6 aimed at the determination, quantification and validation of the electrochemical method developed by means of the IUPAC provisions, as well as guidelines for validation of high performance methods in Mexican standards, opening the possibility of studying real samples for an eventual application of the method in a field study. Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología (México).

Milk is an essential food on human’s diet and for this reason must provide adequate sanitary conditions and lack of chemical and low level of microbial contamination. Antibiotics residues are considered as the main chemical contaminant of milk and represent potential risk to the consumer health. Thus, the aim was to detect antibiotics residues in 79 samples of type B pasteurized milk from different manufactures acquired in commercial establishments from Paraná State, Brazil. The detection of streptomycin, chloramphenicol, ?-lactamic, tetracycline and gentamicin residues was performed using commercial immunoenzymatic kits. Antibiotic residues were detected in 15/79 (19%), which 6/15 (40%) were contaminated by chloramphenicol, 3/15 (20%) by tetracycline, 1/15 (6.7%) by gentamicin, 3/15 (20%) by streptomycin, and 2/15 (13.3%) by ?-lactams and three samples were contaminated by two types of residues simultaneously. Brazilian legislation regulates that residues of antibiotics and other inhibitors of microbial growth should be absent. Thus, further studies should be conducted for quantification of these residues targeting monitoring the exposure risk for consumers. O leite é um alimento essencial na dieta humana e por este motivo deve apresentar condições sanitárias adequadas e ausência de contaminantes químicos e baixa contaminação microbiana. Os resíduos de antibióticos são considerados como os principais contaminantes químicos do leite e representam risco potencial à saúde do consumidor. Assim, objetivou-se detectar os resíduos de antibióticos em 79 amostras de leite pasteurizado do tipo B de diferentes fabricantes adquiridos em estabelecimentos comerciais do Estado do Paraná, Brasil. A detecção de residuos de estreptomicina, cloranfenicol, ?-lactâmicos, tetraciclina e gentamicina foi realizada utilizando kits comerciais de ensaio imunoenzimático. Foram detectados resíduos de antibióticos em 15/79 (19%), das quais 6/15 (40%) estavam contaminadas por cloranfenicol, 3/15 (20%) por tetraciclinas, 1/15 (6,7%) por gentamicina, 3/15 (20%) por estreptomicina e 2/15 (13.3%) por ?-lactâmicos e três amostras estavam contaminadas por dois tipos de resíduo simultaneamente. A legislação brasileira regulamenta que os resíduos de antibióticos e outros agentes inibidores de crescimento microbiano devem estar ausentes. Assim, estudos devem ser realizados para a quantificação desses resíduos visando o monitoramento do risco de exposição aos consumidores.

The aim of this research was to carry out a screening study to check the incidence of antimicrobial residues in Brazilian UHT milk according to rapid yoghurt method. Of the 100 (100%) samples analysed, 96 (96%) showed no traces of antibiotic residues while 4 (4%) indicated probable presence of antibiotic residues. The results suggest that the Brazilian Sanitary Surveillance Agency should apply continuous monitoring programs in order to obtain a safe product offering no health risks to consumers.O objetivo deste trabalho é realizar um estudo preliminar para verificar a presença de resíduos de antibióticos em leite UHT disponíveis no mercado brasileiro, utilizando o método rápido do iogurte. Das 100 (100%) amostras analisadas, 96 (96%) indicaram negativas, sugerindo ausência de resíduos de antibióticos, enquanto 4 (4%) mostraram-se positivas. Os resultados sugerem a necessidade de contínuo monitoramento deste parâmetro por parte da Vigilância Sanitária com o objetivo de oferecer um produto seguro, sem riscos para saúde do consumidor.

El presente estudio tuvo por objetivo determinar la frecuencia de residuos de antibióticos en leche de vacas luego del periodo de descarte (tres días) de leche por tratamiento contra la mastitis con antibióticos betalactámicos. Muestras de leche de 60 vacas se analizaron mediante la prueba inmunoenzimática SNAP (Betalactam), que indica la presencia de antibióticos betalactámicos en leche. El 45.0% (27/60) resultó positivo a residuos de antibióticos. En relación al tipo de antibiótico utilizado, el 56.0% (14/25), 26.7% (4/15) y 45.0% (9/20) de las muestras de animales tratados con la asociación penicilina y estreptomicina, kanamicina y penicilina, y amoxicilina y ácido clavulónico, respectivamente, fue positiva a la prueba. Asimismo, el 50.0% (14/28) de los animales tratados por vía intramuscular y 40.6% (13/32) por vía intramamaria fueron positivos; y el 46.7%(7/15), 57.1% (12/21) y 33.3% (8/24) de las vacas de baja, media y alta producción, respectivamente, fue positiva a la prueba; aunque sin que hubiera una asociación estadística entre el tipo de antibiótico, vía de administración, y nivel de producción con la presencia de residuos de antibióticos. The aim of the study was to determine the frequency of antibiotic residues in milk from cows that had clinical mastitis and returned to production after completion of the 3- day period of discarded milk post treatment. Milk samples were collected from 60 cows that received treatment for mastitis with betalactamic antibiotics. Samples were analyzed by the inmunoenzimatic test SNAP (Betalactam), which indicates presence of betalactamic antibiotics residues in milk. Results showed that 45.0% (27/60) were positive to betalactamic antibiotics residues. Also, 56.0% (14/25), 26.7% (4/15), and 45% (9/20) of samples from animals treated with penicillin and streptomycin, kanamycin and penicillin, and amoxicillin and clavulanic acid respectively had antibiotic residues. In addition, 50.0% (14/28) of the animals treated by the intramuscular route and 40.6% (13/32) by the intramammary route were positive; whereas 46.7% (7/15), 57.1% (12/21), and 33.3% (8/24) of cows with low, medium, and high production cows, respectively, were positive to the test. However, no statistical association between type of antibiotic used, via of administration and level of production with presence of antibiotic residues was found.

El Codex Alimentarius determina que la residualidad de anti- bióticos en leche debe ser nula por las consecuencias negati- vas para la salud humana (Codex Alimentarius Commission, 2011). Con el fin de aportar información sobre residuos β lactámicos, los más usados en Colombia, en el control de in- fecciones en ganado lechero y para hacer una aproximación a los factores de riesgo asociados a la presencia de residuos, se analizaron las bases de datos de once plantas de acopio de leche cruda, de diferentes regiones del país. Se determinó la frecuencia de la residualidad de antibióticos, durante el 2010, y los factores de riesgo asociados, se buscaron en las encuestas aplicadas por parte de profesionales de los cen- tros de acopio a los hatos positivos, durante el período 2007 a 2010. Las plantas estudiadas recibieron leche de 8.423 productores; de 738 millones de litros muestreados el 0,05% de la leche fue positiva. Se analizaron 340 encuestas, en las que se indagó sobre el uso de antibióticos y los posibles factores de riesgo presentes para el no retiro de la leche y las posibles causas de no retiro de la leche. Los dos mayo- res factores de riesgo asociados a la residualidad fueron el uso de medicamentos sin prescripción médico veterinaria y la ausencia de registro de tratamientos. Adicionalmente, se asociaron al evento de positividad para residuos, el olvido en el retiro de la leche (42,57%) y el tiempo de retiro incompleto (20,79%). Los β lactámicos más frecuentes fueron mezclas de cloxacilina-ampicilina (20%), mezclas de penicilinas G (15,2%) y, en menor proporción, cefalosporinas, amoxicilinas y penetamato. Las enfermedades asociadas a la positividad en residualidad fueron mastitis clínica (76%) y cojeras (16%). The Codex Alimentarius determines that residual antibiotics in milk should be zero due to the negative effects on human health. With the aim tocontribute to the information on resi-dues of β lactamics, the most common antimicrobials used in Colombia for the control infections in dairy cattle, and for making an approach to risks factors associated to the event of residues in milk we analyzed the data bases of eleven dairy collection facilities from different regions of the country. The frequency of residues was determined during 2010 and risk factors were searched in surveys applied by professionals be-longing to the collection facilities to the herds appearing pos-itive to residues during the period 2007 a 2010. This Centers received milk from 8423 producers; out of the 738 millions litters sampled 0.05% were positive. 340 surveys were ana-lyzed and the two major risk factors associated to residues were the use of medications without a professional prescrip-tion and the lack of medical histories. Other factors associ-ated were forgetting the retirement (42.57%) and incomplete retirement period (20.79%) The β-lactámicos most frequently found were mixtures of cloxaciline-ampiciline (20%), mixtures of peniciline G (15.2%) and to a lesser extend cefalosporines, amoxicilines y penetamate. Diseases associated to positivity were clinical mastitis (76%) and lameness (16%). Incluye referencias bibliográficas

Este trabalho teve como objetivo avaliar a eficiência e sensibilidade do kit de inibição microbiana Eclipse 50® (Zeu Inmunotec) na detecção de resíduos de antimicrobianos em leite cru. Foram analisadas amostras de leite cru isento de resíduos inoculado experimentalmente com diferentes antimicrobianos em duas concentrações, o limite mínimo de detecção declarado pelo fabricante (Nível 1) e o limite máximo de resíduos estabelecido pela legislação brasileira (Nível 2). Para os antimicrobianos que não possuem limite estabelecido no país, limites legais estabelecidos pelo Codex Alimentarius ou pela legislação da União Europeia foram adotados. Foram utilizadas 19 bases de antimicrobianos de seis classes diferentes, além de amostras controle positivas e negativas, com 30 repetições para cada nível. Em relação ao nível 1, o kit foi eficiente (erro < 5%) na detecção de 16 antimicrobianos, sendo os não conformes: a gentamicina, neomicina e lincomicina. Estes resultados indicam a necessidade do fabricante em rever estes níveis de detecção declarados. Para o nível 2 (LMR), cinco dos 19 antimicrobianos testados apresentaram-se não conformes, sendo eles a eritromicina, estreptomicina, gentamicina, neomicina e lincomicina. Os três antimicrobianos testados do grupo dos aminoglicosídeos (estreptomicina, gentamicina e neomicina) não foram detectados no LMR, mostrando a baixa sensibilidade do Geobacillus stearothermophilus var. calidolactis frente à esta classe de antimicrobiano. The aim of this study was to evaluate the efficiency and sensitivity of the kit based on microbial inhibition Eclipse 50® (Zeu Inmunotec) for detecting antimicrobial residues in raw milk. Samples from antimicrobial-free milk were inoculated with two different antimicrobial concentrations, the lower limit of detection by the manufacturer (Level 1) and the maximum residue limit established by Brazilian legislation (Level 2). For antimicrobials that have no limit in the country, legal limits established by the Codex Alimentarius or European Union legislation were adopted. The 19 antimicrobials from six different groups and positive and negative controls were tested with 30 repetitions/level. In relation to the level 1 the test was efficient ( error

El presente estudio realizado en la ciudad de Tacna, consistió en hacer un muestreo de carne e hígado de pollo en 5 mercados haciendo un total de 20 muestras, que fueron procesadas mediante la técnica de cromatografía liquida de alta resolución (HPCL) y los resultados fueron confrontados con los valores de los límites máximos de residuos (LMRs) estipulados por las normas del consejo de las comunidades europeas. Se evaluó los niveles de residuos de 05 antibióticos: Fluoroquinolonas, tetraciclinas, betalactámicos, sulfamidas y nitrofuranos; determinándose porcentajes de niveles no superiores y superiores a los LMRs estipulados. De manera paralela se realizó una encuesta en los alrededores de los mercados incluidos en la investigación a un total de 100 consumidores. Con la finalidad de tener idea del conocimiento que poseen sobre consumo productos cárnicos, uso de antibióticos y sus consecuencias en la salud pública. Las conclusiones fueron: el 100% de las muestras tanto de musculo, como de hígado de pollo presentan ciertos niveles de residuos de uno o más antibióticos; lo cual podría constituirse en un serio riesgo para la salud de los consumidores, causando problemas como resistencia bacteriana, hipersensibilidad, problemas digestivos y de otros tipos; así mismo se conoció que a nivel de la ciudad de Tacna, el consumo de carne y menudencias de pollo, es de manera interdiaria. Ante esta situación se recomienda que el uso de antibióticos en la crianza de pollos sea únicamente por prescripción médica especializada y que se respeten estrictamente los periodos de retiro de cada una de las drogas; además; se sugiere la creación de una autoridad autónoma regional que controle la presencia de residuos de antibióticos u otras drogas en todo alimento de origen pecuario. Tesis

A cadeia produtiva do leite representa um importante segmento no agronegócio brasileiro. Por isso, é necessário que haja rigoroso controle de qualidade em todas as etapas de produção, incluindo o uso de antimicrobianos nos animais, que podem gerar resíduos no leite, causando prejuízos ao produtor, à indústria e à saúde do consumidor. Foram avaliados dois kits de inibição microbiana (Charm® Cow Side II Test e Charm® Blue Yellow II Test) para a detecção de resíduos de antimicrobianos em diferentes concentrações no leite. Avaliou-se também a capacidade de ambos em detectar o grupo das tetraciclinas em uma concentração menor daquela considerada na legislação brasileira. Amostras de leite foram inoculadas com soluções-padrãode 23 diferentes antimicrobianos e uma solução com metabólitos de um dos antimicrobianos (ceftiofur), em duas diferentes concentrações: o limite mínimo de detecção declarado pelo fabricante (Nível 1) e o limite máximo de resíduos (LMR) (Nível 2) estabelecido pela legislação. Ambos os kits foram eficientes na detecção da maioria dos antimicrobianos testados nas duas concentrações, inclusive de metabólitos de ceftiofur. É necessário rever a informaçãodo fabricante do kit Charm® Cow Side II Test quanto à detecção dos resíduos de oxacilina, penicilina G, das sulfonamidas e espiramicina e do kit Charm® Blue Yellow II Test quanto à detecção de eritromicina, cloxacilina, sulfadiazina, tilosina e penicilina G no leite. Os dois kitsdetectaram resíduos de tetraciclinas atendendo o LMR previsto na legislação brasileira e podem ser utilizados com segurança para o monitoramento destes resíduos no leite. The milk supply chain is an important stage in Brazilian agribusiness. Therefore, it is necessary to have strict quality control at all stages of production, including the use of antimicrobials in animals, which may generate residues in milk, causing damages to producer, industries andconsumer health. Two kits based on microbial inhibition (Charm® Cow Side II Test and Charm® Blue Yellow II Test) for detection of antimicrobial residues in milk in different concentrations were evaluated. The ability of both to detect the tetracycline group in a lower concentration of that considered by Brazilian law was also evaluated. Milk samples wereinoculated with standard solutions of 23 different antimicrobial agents and metabolites with a solution of one of antimicrobials (ceftiofur) in two different concentrations: the lower limit of detection stated by the manufacturer (Level 1) and the maximum residue limit (MRL) (Level 2)established by the legislation. Both kits were effective in detecting most of antimicrobials tested in two concentrations, including metabolites of ceftiofur. It is necessary to review information from the manufacturer of the kit Charm® Cow Side II Test for the detection of residues of oxacillin, penicillin G, spiramycin, and sulfonamides and Charm® Blue Yellow II Test on the detection of erythromycin, cloxacillin, sulfadiazine, tylosin, and penicillin G in milk. Both kits detected residues of tetracyclines given the MRLs required by the Brazilian law and can be safely used for monitoring these drugs in milk. Keywords: milk, antimicrobials, residues, microbial inhibition

Avaliou-se a eficiência dos kits Charm MRL BL/TET, SNAP beta-lactâmico e SNAP tetraciclinas na detecção de resíduos de antimicrobianos inoculados experimentalmente em quatro concentrações distintas em leite isento de resíduos, considerando o limite de detecção declarado pelo fabricante e o limite máximo de resíduo (LMR) estabelecido pela legislação brasileira (Instrução Normativa nº42/1999/MAPA). Foram utilizadas 21 bases de antimicrobianos de seis classes diferentes, além de amostras controle positivas e negativas, com 30 repetições cada. Durante todo o experimento, controlou-se a temperatura dos blocos aquecedores, e foi avaliada a qualidade do leite utilizado (contagem bacteriana total e de células somáticas, determinação dos teores de gordura, proteína, lactose, extrato seco desengordurado e total, além da acidez titulável). A avaliação foi realizada por ensaios laboratoriais, no período de junho a setembro de 2009. As temperaturas variaram de 44 a 47 ºC no bloco aquecedor para os Kits SNAP e de 55 a 57 ºC para o kit Charm MRL BL/TET, estando, portanto, de acordo com valores estabelecidos pelas respectivas empresas de 45 ± 5 ºC e 56 ± 2 °C. Os valores de acidez titulável do leite variaram de 14,35 a 16,56 ºD. Discrepâncias não foram observadas quanto à recomendação do fabricante (N3). Ambos os kits detectaram a presença dos resíduos de antimicrobianos nas concentrações do LMR no nível 2 (legislação brasileira) e alguns em baixas concentrações (N1), que correspondem à metade do valor declarado pelo fabricante. No kit Snap Tetraciclina o percentual de detecção de tetraciclina, oxitetraciclina e clortetraciclina no nível 2 variou de 90 a 100%. Para os beta-lactâmicos, a sensibilidade no nível 2 variou de 93,3 a 100%, com destaque para o ceftiofur no nível 1 com 76,7 % de positividade. Beta-lactâmicos não declarados pelo fabricante foram detectados em 100% pelo kit SNAP beta-lactâmicos para cefazolina, 90% para dicloxacilina sódica e 66,7% para cloxacilina. No kit Charm MRL Beta/TET, o percentual de detecção no nível 2 (N2) foi de 100% para maioria dos antimicrobianos, exceto para cloxacilina (93,3%). O ceftiofur foi detectado em 100% das amostras testadas. Sobre a concentração declarada pelo fabricante (N3), o kit detectou a cefalexina em 23,3% e a cefapirina em 20,0%; cefazolina não foi detectada. O kit Snap Beta-lactâmico quando comparado com o kit Charm MRL BL/TET não detectou resíduos de tetraciclinas e o Kit Snap Tetraciclinas não detectou beta-lactâmicos. Embora não tenha sido observada diferença estatisticamente significativa em relação à leitura visual e na leitora, alguns resultados foram discordantes. Conclui-se que os kits são eficientes na detecção de resíduos de antimicrobianos, podendo ser usados como métodos de triagem no monitoramento destas substâncias no leite. O uso da leitora deve ser obrigatório para a triagem de resíduos de antimicrobianos no leite avaliados pelos kits testados. In order to evaluate the efficiency of Charm MRL BL/TET, SNAP beta-lactams and SNAP tetracyclins kits for detecting antimicrobials residues in milk, raw milk samples without antimicrobials were inoculated with 21 drugs in four different concentrations considering the Brazilian legal limit (MRL) and the detected level of the kits. The 21 antimicrobials from six different groups and positive and negative controls were tested with 30 repetitions/level. During all the experiment, the blocks temperature was measured and the milk quality was evaluated for total bacterial count, somatic cell count, determination of fat, protein, lactose, total and solids non fat content. The experiment was carried out from June to September, 2009. The temperatures varied from 44 to 47 ºC in Kits SNAPs blocks and from 55 to 57 ºC to Charm MRL BL/TET kit and were considered satisfactory. The titrable acidity of the milk samples varied from 14.35 to 16.56 ºD. Considering all the limit level of antimicrobial detection (N3) defined by the kits manufacturer, discrepancies were not observed. All the kits detected the different antimicrobials in level 2 that correspond to MRL concentration (Brazilian legislation) and also some detect in level 1 (N1) that is the half of the N3 concentration. The Snap Tetracyclin kit detection of tetracyclin, oxitetracyclin and clortetracyclin in N2 level varied from 90 to 100%. For beta-lactams, the sensitivity in N2 level varied from 93.3 to 100% and ceftiofur (N1) was detected in 76.7 %. Beta-lactams such as cefazolina were detected in 100%; sodium dicloxacylin in 90.0% and cloxacillin in 66.7% by Snap beta-lactams kit. In Charm MRL Beta/TET kit, the detection for level 2 (N2) was 100% for the majority of the antimicrobials, exception for cloxacilin (93.3%). Ceftiofur was detected in 100% of all the milk samples tested. In relation to N3 level, the Charm MRL Beta/TET kit detected cefalexin in 23.3% and cefapirin in 20.0%; cefazolin was not detected. The Snap Beta-lactams kit did not detect tetracyclins and the Snap Tetracyclin kit did not detected beta-lactams. Although statistical difference (P > 0.05) was not noted when the results were evaluated visually compared with the kits reader, some results were not similar. It can be concluded that all the tested kits are efficient for detecting antimicrobials in milk and they can be used as screening tests for monitoring these substances in milk. The kits reader must be obligatory for screening antimicrobial residues in milk.

El estudio se realizó con la finalidad de conocer la realidad actual y local referida al uso de antibióticos a nivel de granjas de pollos de engorde; para ello se elaboró una encuesta epidemiológica (validez de constructo y confiabilidad de alfa cronbach (0,91)) y se indagó la presencia de residuos de antibióticos en tejidos de pollos beneficiados en cuatro plantas del municipio San Francisco del estado Zulia, Venezuela. La medición se efectuó mediante la técnica de cromatografía líquida de alta resolución (HPLC). El muestreo se basó en estimaciones del consumo de pollo por familia y constó de 20 canales obtenidos directamente de las empresas. Los resultados de la encuesta mostraron uso generalizado de antibióticos y preferencia por la enrofloxacina (51%), por su supuesta doble acción profiláctica (promotor de crecimiento) y terapéutica, por lo que se convirtió en centro de la indagación. Los datos de la medición de residuos evidencian niveles importantes de los metabolitos (enrofloxacina y ciprofloxacina) en dos de las cuatro plantas estudiadas, con diferencias significativas entre ellas (valor F= 174,77; P= 0,05). Dichos datos sugieren el incumplimiento del tiempo de retiro del medicamento, previa salida de las aves a matadero y reaviven la discusión sobre sus efectos adversos en la salud pública de los consumidores. Enrofloxacine Residues in Carcass of Chickens from four Slaughterhouse, San Francisco County, Zulia State, Venezuela. ABSTRACT The study was made with the purpose of knowing present and local reality, referred to the use of antibiotics at level of farms of fattening chickens; for it an epidemiological survey was elaborated (validity of constructo and trustworthiness of alpha cronbach (0.91)) and the presence of weave antibiotic remainders was investigated of chickens benefitted in four plants of the San Francisco County, Zulia State, Venezuela. The measurement took place by means of the technique of liquid chromatography of hi-res (HPLC). The sampling was based on estimations of the consumption of chicken by family and consisted of 20 carcass, obtained directly of the companies. The results of the survey showed the generalized antibiotic use and preference by the enrofloxacin (51%) because of their supposed double prophylactic action (promotional of growth) and therapeutic, reason that became it as center of the investigation. The data about the measurement of remainders demonstrate important levels of the metabolites (enrofloxacin and ciprofloxacin) in two of the four studied plants, with significant differences among them (value F= 174.77; P= 0.05). These data suggest the breach of the time of retirement of medicine previous leaving of the birds to slaughter house and revive the discussion on their adverse effects in the public health of the consumers.

The aim of this research was to carry out a screening study to check the incidence of antimicrobial residues in Brazilian UHT milk according to rapid yoghurt method. Of the 100 (100%) samples analysed, 96 (96%) showed no traces of antibiotic residues while 4 (4%) indicated probable presence of antibiotic residues. The results suggest that the Brazilian Sanitary Surveillance Agency should apply continuous monitoring programs in order to obtain a safe product offering no health risks to consumers. O objetivo deste trabalho é realizar um estudo preliminar para verificar a presença de resíduos de antibióticos em leite UHT disponíveis no mercado brasileiro, utilizando o método rápido do iogurte. Das 100 (100%) amostras analisadas, 96 (96%) indicaram negativas, sugerindo ausência de resíduos de antibióticos, enquanto 4 (4%) mostraram-se positivas. Os resultados sugerem a necessidade de contínuo monitoramento deste parâmetro por parte da Vigilância Sanitária com o objetivo de oferecer um produto seguro, sem riscos para saúde do consumidor.

Foi avaliada a eficiência dos testes microbiológicos COPAN (Microplate e Single) que são utilizados na detecção de resíduos de antimicrobianos em leite. Essa avaliação foi feita a partir de ensaios laboratoriais, de setembro a dezembro de 2004, utilizando 13 diferentes antimicrobianos em quatro concentrações inoculadas em leite isento de resíduos, além de amostras controle. Os testes apresentaram 100% de sensibilidade na detecção de penicilina G, ampicilina, cloxacilina, amoxicilina, sulfadiazina e sulfametoxazol; e 96,66% na detecção de oxacilina para as concentrações testadas. Em relação às concentrações estabelecidas pela legislação (LMR) verificou-se que os testes foram capazes de detectá-las para os antimicrobianos avaliados, exceto para eritromicina, oxitetraciclina, tetraciclina e trimetoprim. Os testes também foram capazes de detectar as concentrações declaradas pelo fabricante (limites de detecção) para todos os antimicrobianos testados. Utilizando o teste Microplate foram analisadas 136 amostras de leite cru, originadas de produtores com histórico de baixa contagem bacteriana total no leite, provenientes da região metropolitana de Belo Horizonte (MG), e a presença de resíduos de antimicrobianos ocorreu em 24,26% das amostras analisadas.Palavras-chave: leite, antimicrobianos, resíduos. The efficiency of COPAN (Microplate and Single) microbiological tests that are used to detect antimicrobial residues in milk was evaluated. This evaluation was conducted in laboratory from September to December 2004, with 13 different antimicrobials in 4 concentrations each, inoculated in free milk residues, besides control samples. COPAN tests showed 100% of sensibility to detect penicillin G, ampicillin, cloxacillin, amoxicillin, sulfadizine and sulfamethoxazole; and 96,66% detecting oxacillin for tested concentrations. COPAN tests are capable to detect concentrations established in legislation (MRL), for the evaluated antimicrobials, except to erythromycin, oxytetraciline, tetracycline and trimethoprim. COPAN tests can also detect concentrations around detection limits informed by the tests manufacturing for all tested antimicrobials. Using the Microplate test, we analyzed 136 samples of raw milk from producers that have historical data of low total bacterial count in milk. The selected producers were from metropolitan area of Belo Horizonte (MG). The presence of antimicrobial residues has occurred in 24,26% of analysed samples.Keywords: milk, antimicrobials, residues.

Este artigo tem o objetivo de contextualizar a utilização de antibióticos na nutrição animal, produzindo discussões sobre o tema. Consiste de uma revisão de literatura a preocupação sobre o potencial risco de resistência que os antibióticos podem causar em bactérias. Retrata o modo de ação dos antibióticos no trato digestivo dos animais. Enfoca a legislação que incide sobre a liberação para comercialização destes produtos no Brasil. Evidencia problemas nas técnicas de diagnosticos para identificar a ´presença de residuos de antibióticos. Alerta sobre a necessidade de se verificar o verdadeiro impacto que os antibióticos usados na alimentação animal podem causar a saude humana e ao meio ambente.

Residuos de antibióticos en camarones: límites residuales y detección de fenicoles La seguridad de los alimentos destinados al consumo humano, es un tema que en la actualidad ha sobrepasado las esferas científicas, llegando a ser una preocupación de los consumidores. La inclusión de drogas en alimentos utilizados para el cultivo de camarones, puede dejar residuos que aparecen en sus tejidos.

Junto al desarrollo de la salmonicultura, surge la necesidad de aplicación de antimicrobianos para el control de enfermedades de los peces, aumentando el riesgo de la presencia de residuos en el producto destinado al consumo. Con la finalidad de aportar antecedentes a la detección microbiológica de residuos de ácido oxolínico y oxitetraciclina en peces, se trataron, 75 peces de la especie Salmo salar con cada uno de los antibióticos. Para ello se escogieron peces con un peso promedio de 2,7 Kg, y durante 10 días se les administró por vía oral la dosis indicada por el fabricante para ambos antibacterianos. Finalizado el período de tratamiento, se tomaron muestras de músculo y suero de 5 peces en los días 1 a 5 y 10, 15, 20 y 30 post tratamiento. Las muestras fueron conservadas en congelación para luego ser analizadas por el método de detección del antibiótico por inhibición bacteriana, utilizando Bacillus subtilis BGA y E. coli ATCC 11303 como cepas sensibles, incluidas en un medio de cultivo nutritivo a pH 6,0 y 8,0 respectivamente. Muestras de suero y de músculo de cada pez se colocaron en duplicado en cada una de las 4 placas de Petri con los diferentes substratos de cultivo. Después de la incubación de las placas a 35 ºC por 24 h se midió el halo de inhibición bacteriana (en mm) provocado por la difusión del residuo. Los resultados demuestran que el ácido oxolínico y la oxitetraciclina se detectan mejor en el substrato a pH 6,0, y que la cepa Bacillus subtilis BGA, es más sensible que E.coli ATCC 11303, a la detección de ambos antibacterianos. Las muestras de suero provocaron halos de inhibición de mayor tamaño que las de músculo del mismo pez y demostraron una mayor persistencia del residuo a través del tiempo de depleción de los fármacos Simultaneously with the development of the salmoniculture, comes forth the need to use antimicrobial drugs to control fish disease thus, increasing the risk of residues in the edible product. Detection of residues of oxolinic acid and oxitetracycline in fish, carried out using 75 units of Salmo salar. With an average weight of 2.7 Kg. Fish were treated during 10 days with the dosis recommended by the manufacturer, for both antibiotics. Once the treatment was finished, blood serum samples and muscle samples after killing the fish, were taken on days 1 to 5, 10, 15, 20 and 30 of the posttreatment period. Samples were kept frozen and submitted later to bacterial inhibition method, using B. subtilis BGA and E. coli ATCC 11303 as sensitive strains included in a nutritive culture media at pH 6,0 and 8,0. Both samples, muscle and serum of fishes, were placed in duplicate on each Petri dish with the different substrates. Residues of antibiotic were detected after an incubation period of 24 h at 35 ºC when an inhibitory zone of the test microorganism appeared. The inhibition zone was measured in milimeters and recorded. Results show that the oxolinic acid and oxitetraciclyne were detected better at pH 6.0, also B. subtilis BGA is more sensitive than E. coli ATCC 11303 to both drugs. Blood serum samples produce bigger inhibitory zones for both antibiotics than the muscle sample. Moreover better residue retention time for drugs was in blood serum