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El objetivo del estudio fue seleccionar de una biblioteca combinatoria de fagos filamentosos clonas que mimeticen la proteína N del virus del Síndrome Respiratorio y Reproductivo Porcino (PRRS) utilizando un anticuerpo monoclonal (SDOW17). Se utilizó una biblioteca combinatoria de fagos filamentosos (M13) que expone aleatoriamente péptidos de 7 aminoácidos en la región N-terminal fusionado con la proteína III. Para determinar el efecto del enriquecimiento después de cada ronda de selección, los fagos eluidos fueron titulados; estos se incrementaron de 4,8 x 10³ unidades formadoras de colonias (ufc) en la primera ronda a 3,2 x 10(5) ufc en la tercera. Después de tres rondas de selección, 32 clonas fueron picadas al azar, cada clona individual fue amplificada, purificada y titulada. La reactividad de la unión de las clonas a los anticuerpos anti-PRRS fue determinado utilizando un ELISA de fagos. El alineamiento de las clonas secuenciadas con la obtenida del GenBank, ubican a estas en la región aminoterminal y porción media de la proteína N del vPRRS. La secuencia consenso de las 32 clonas seleccionadas fue NYRYQ. Las secuencias de los mimotopos fueron utilizadas para calcular los epitopos de la proteína N, mediante la herramienta bioinformática del servidor Peptiope con el algoritmo PepSurf. Dos epitopos conformacionales contra el anticuerpo monoclonal antiproteína N fueron identificados, localizados en diferentes posiciones y presentados principalmente como hélices a. Los mimotopos seleccionados y epitopos conformacionales podrían ser considerados informativos para el diagnóstico de la enfermedad. The aim of the present study was to select phage clones from a combinatorial library of filamentous phage that mimic the N protein of Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus (PRRS) using a monoclonal antibody (SDOW17). An combinatorial library of random peptide 7-mer cysteine-constrained fused to a minor coat protein (pIII) of the M13 phage was used. To determine the effect of enrichment after each round of selection, the eluted phage were titrated, bacteriophages increased from 4,8 x 10³ plaque-forming units (pfu) in the first round to 3,2 x 10(5) pfu in the third round. After three rounds of panning 32 phage clones were randomly picked, each individual clone was amplified, purified and titred. The binding reactivity of phage clones with anti-PRRS antibodies was determined using a phage ELISA. Alignments of the selected clones with the published sequences of the N protein of PRRS virus were located at the amino terminal region and middle portion of the protein. The consensus amino acid residues of the 32 mimotopes sequenced was NYRYQ. Mimotope sequences were used to calculate the epitopes of the nucleocapsid protein by the web tool of Peptiope server with PepSurf algorithm. Two conformational epitopes against monoclonal antibody anti-protein N were identified, located in a different position and appeared mainly as an a-helix. The selected mimotopes and conformational epitopes could be regarded as informative for diagnosis of disease.

The aim of the present study was to select phage clones from a combinatorial library of filamentous phage that mimic the N protein of Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus (PRRS) using a monoclonal antibody (SDOW17). An combinatorial library of random peptide 7-mer cysteine-constrained fused to a minor coat protein (pIII) of the M13 phage was used. To determine the effect of enrichment after each round of selection, the eluted phage were titrated, bacteriophages increased from 4,8 x 103plaque-forming units (pfu) in the first round to 3,2 x 105pfu in the third round. After three rounds of panning 32 phage clones were randomly picked, each individual clone was amplified, purified and titred. The binding reactivity of phage clones with anti-PRRS antibodies was determined using a phage ELISA. Alignments of the selected clones with the published sequences of the N protein of PRRS virus were located at the amino terminal region and middle portion of the protein. The consensus amino acid residues of the 32 mimotopes sequenced was NYRYQ. Mimotope sequences were used to calculate the epitopes of the nucleocapsid protein by the web tool of Peptiope server with PepSurf algorithm. Two conformational epitopes against monoclonal antibody anti-protein N were identified, located in a different position and appeared mainly as an a-helix. The selected mimotopes and conformational epitopes could be regarded as informative for diagnosis of disease. &nbsp, El objetivo del estudio fue seleccionar de una biblioteca combinatoria de fagos filamentosos clonas que mimeticen la proteína N del virus del Síndrome Respiratorio y Reproductivo Porcino (PRRS) utilizando un anticuerpo monoclonal (SDOW17). Se utilizó una biblioteca combinatoria de fagos filamentosos (M13) que expone aleatoriamente péptidos de 7 aminoácidos en la región N-terminal fusionado con la proteína III. Para determinar el efecto del enriquecimiento después de cada ronda de selección, los fagos eluidos fueron titulados; estos se incrementaron de 4,8 x 103unidades formadoras de colonias (ufc) en la primera ronda a 3,2 x 105ufc en la tercera. Después de tres rondas de selección, 32 clonas fueron picadas al azar, cada clona individual fue amplificada, purificada y titulada. La reactividad de la unión de las clonas a los anticuerpos anti-PRRS fue determinado utilizando un ELISA de fagos. El alineamiento de las clonas secuenciadas con la obtenida del GenBank, ubican a estas en la región aminoterminal y porción media de la proteína N del vPRRS. La secuencia consenso de las 32 clonas seleccionadas fue NYRYQ. Las secuencias de los mimotopos fueron utilizadas para calcular los epitopos de la proteína N, mediante la herramienta bioinformática del servidor Peptiope con el algoritmo PepSurf. Dos epitopos conformacionales contra el anticuerpo monoclonal antiproteína N fueron identificados, localizados en diferentes posiciones y presentados principalmente como hélices a. Los mimotopos seleccionados y epitopos conformacionales podrían ser considerados informativos para el diagnóstico de la enfermedad. &nbsp

La rabia es una enfermedad contagiosa que ataca a animales y humanos, se transmite por la mordedura de un animal infectado con el virus de la rabia y aunque causa daño letal, su estructura no es muy compleja, pues sólo presenta cinco proteínas: G, N, P, L y M2. Dada la necesidad de contar con una herramienta para mejorar la efectividad de una vacuna contra la rabia, este trabajo se avocó al estudio de la proteína N, que es la proteína que se produce inicialmente y en mayor cantidad cuando se replican nuevas partículas virales. Esta revisión proporciona evidencia de la importancia inmunológica, estructura y maduración de esta proteína. El trabajo propone que para mejorar la respuesta inmune en las vacunas contra la rabia, se debe considerar a la proteína N.

"El objetivo de este estudio fue estandarizar un ensayo de Transcripción reversa en cadena de la polimerasa (RT/PCR) para detectar la presencia de ácido ribonucleico mensajero (ARNm) de la Interleucina 2 (IL-2), con la finalidad de determinar su expresión en linfocitos de pollos inmunizados con una vacuna inactivada experimental contra influenza aviar (IA), la vacuna inactivada experimental contra IA adicionada con proteína N recombinante del virus de la rabia (N-Bac) y una vacuna comercial. Para la estandarización, se obtuvieron linfocitos de pollos que fueron cultivados a 1 x 106 y 1 x 107 células/ml en presencia de Concanavalina A (Con-A) a una concentración de 5, 10 y 30 mg/ml, durante 5, 24 y 48 h. Se extrajo el ARN de los linfocitos y se sintetizó el ácido desoxirribonucleico complementario (ADNc) utilizando oligo(dT). Para llevar a cabo el PCR se diseñaron cebadores específicos dentro de la secuencia del gen de la IL-2 de pollo. Se determinó que 10 mg de Con-A durante 24 h y una concentración celular de 1 x 107 mostraron los mejores resultados con respecto a los niveles de ARNm para IL-2 entre los linfocitos activados y los controles (linfocitos sin activar). Como gen constitutivo se empleó la b-actina. La cinética de expresión se realizó en linfocitos obtenidos a los días 0, 1, 4 y 10 posvacunación. El grupo control fueron linfocitos de pollos no vacunados. Se estableció que las vacunas contra IA incrementaron la expresión de la IL-2 en pollos, en comparación de los controles. Se concluye que el RT/PCR puede ser empleado para analizar la expresión de la IL-2 de pollo. "