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RESUMEN - Diversos estudios han comprobado que la progesterona tiene un efecto directo en la calidad ovocitaria y el desarrollo inicial embrionario. El objetivo de este estudio fue evaluar el efecto de la concentración de la progesterona (P4) plasmática en el desarrollo de embriones in vitro en vacas de raza Bos taurus taurus (Holstein) y Bos taurus indicus (Gyr). Se utilizaron vacas Holstein y Gyr multíparas, presincronizadas con la aplicación de dos dosis de D-cloprostenol con intervalo de once días. Posteriormente, se distribuyeron en uno de tres grupos experimentales inducidos a diferentes niveles plasmáticos de progesterona. El grupo control fue sincronizado utilizando únicamente D-cloprostenol sin progesterona exógena, el grupo progesterona baja recibió un implante auricular de norgestomet de segundo uso y al grupo progesterona alta se le aplicaron dos implantes auriculares de norgestomet nuevos. Los resultados evidencian que la concentración plasmática de progesterona fue significativamente diferente (P < 0,05) tanto para las vacas Holstein (0,22 ± 0,15, 2,23 ± 0,17 y 5,32 ± 0,22 ng/mL) como para las vacas Gyr (0,24 ± 0,19, 2,05 ± 0,17, 4,85 ± 0,20 ng/mL) entre los grupos control, progesterona baja y progesterona alta, respectivamente. Las vacas Gyr presentaron diferencia (P < 0,05) en la tasa de clivaje del grupo progesterona baja en relación con los grupos control y progesterona alta (87,9 % ± 0,11 vs 77,5 % ± 0,13 y 76,4 % ± 0,10, respectivamente) y en la variable tasa de blastocistos del grupo progesterona baja (48,3 % ± 0,16) en relación con el grupo control (35,8 % ± 0,10) y el grupo progesterona alta (30,4 % ± 0,20). Se concluye que la progesterona tuvo efecto sobre el desarrollo embrionario en vagas de raza Gyr, el cual no se evidenció en las vacas de raza Holstein. ABSTRACT - Studies have shown that progesterone has a direct effect on oocyte quality and early embryonic development. The objective of this study was to evaluate the effect of plasma progesterone (P4) concentration on in vitro embryo development in Bos taurus taurus (Holstein) and Bos taurus indicus (Gyr) cows. Multiparous Holstein and Gyr cows were used, and they were presynchronized with the application of two doses of D-cloprostenol with an interval of 11 days. They were latter distributed in one of three experimental groups induced to different plasma levels of progesterone: control group was synchronized using only D-cloprostenol without exogenous progesterone, low progesterone group received an auricular implant of norgestomet of second use, and high progesterone group received two new auricular implants of norgestomet. The plasma progesterone concentration was significantly different (P < 0.05) for both Holstein cows (0.22 ± 0.15, 2.23 ± 0.17 and 5.32 ± 0.22 ng/mL) and Gyr cows (0.24 ± 0.19, 2.05 ± 0.17, 4.85 ± 0.20 ng/mL) between control, low progesterone, and high progesterone groups respectively. Gyr cows presented differences (P < 0.05) in the cleavage rate of the low progesterone group in relation to the control and high progesterone groups (87.9 % ± 0.11 vs. 77.5 % ± 0.13 and 76.4 % ± 0.10, respectively) and in the variable blastocyst rate of the low progesterone group (48.3 % ± 0.16) in relation to the control group (35.8 % ± 0.10) and the high progesterone group (30.4 % ± 0.20). It is concluded that there is an effect of progesterone on embryonic development of Gyr cows. However, this effect is not evidenced in Holstein cows. Made available in DSpace on 2022-06-09T11:19:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Efecto-de-la-progesterona-plasmatica-en-la-competencia-para-el-desarrollo-embrionario.pdf: 255349 bytes, checksum: 1805cc445c7c4eae516f25506817085c (MD5) Previous issue date: 2022

A Produção in vitro de embriões (PIVE) depende das etapas de maturação, fertilização e cultivo in vitro, sendo a maturação a etapa decisiva para o oócito atingir o estádio de mórula e blastocisto. Neste trabalho objetivou-se avaliar a qualidade de maturação in vitro, de acordo com a distribuição mitocondrial de oócitos provenientes de ovários de fêmeas de abatedouro, com baixa ou alta contagem de folículos antrais (CFA). Foram aspirados 243 ovários dos quais selecionou-se 334 oócitos perante de cinco repetições para cada grupo. Os ovários foram separados em dois grupos: 1- baixa CFA (n=19), 2- alta CFA (n= 53) e os oócitos recuperados corados com a sonda MitoTracker Red. Os dados obtidos foram analisados pelo teste não paramétrico exato de Fisher (α=5%) mediante o software Statistical Analysis System for Windows (SAS Inst., Inc., Cary, NC). Em relação a localização das mitocôndrias o presente trabalho apresentou diferenças (p

CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior As alterações de cromatina, apesar de não serem avaliadas no espermograma de rotina, sabidamente influenciam a fertilidade de touros. O método de avaliação cromatínica mais utilizado é o SCSA (Sperm Chromatin Structure Assay), entretanto este é de alto custo. Como alternativa a esta metodologia, a coloração com azul de toluidina (AT) após hidrólise ácida associada a análises computacionais se apresenta como uma ferramenta equivalente e acessível. Além de apresentar menor custo, esta metodologia mensura a intensidade de descompactação e heterogeneidade da cromatina. No entanto, ainda não se definiu que níveis de descompactação e heterogeneidade interferem na fertilidade do touro. Este trabalho tem como objetivos definir os níveis de descompactação e heterogeneidade cromatínicas aceitáveis para que não prejudique a fertilidade do touro e o desenvolvimento embrionário, propor uma classificação das alterações cromatínicas de espermatozoides bovinos de acordo com sua localização e verificar se cada tipo de alteração influencia no processo de fecundação e de desenvolvimento embrionário inicial. Para tal, foram utilizadas amostras de sêmen de animais induzidos à subfertilidade, as quais foram utilizadas para produção in vitro de embriões (PIVE). Estas amostras foram avaliadas pelo método de coloração com AT e posterior análise computacional. Para caracterização da fertilidade das amostras de sêmen, foram avaliadas as taxas de clivagem no segundo dia e de blastocistos morfologicamente normais no sétimo dia de cada rotina de PIVE. Utilizando análise de imagem computacional, foi possível fazer a seguinte classificação das alterações cromatínicas: descompactação na base da cabeça (DB), na metade basal (DMB), em áreas dispersas (AD), no eixo central da cabeça (DEC) e em toda a extensão da cabeça (DT). Foi utilizado teste de correlação de Pearson (pp>0,05) para correlacionar essas alterações com a eficiência da PIVE. Em relação à clivagem, DEC e DT apresentaram correlações negativas e significativas (p=0,03 e p=0,047, respectivamente), DB e DMB apresentaram uma tendência para uma correlação negativa (p=0,06 e p=0,07, respectivamente). Em relação à formação de blastocisto, DB apresentou uma tendência para correlação negativa (p=0,09). Além disso, foi testado dois níveis de anormalidade em relação à heterogeneidade (Het) e descompactação (Des) da cromatina: acima de 5% e acima de 10%. A Des apresentou correlação significativa em relação à clivagem quando utilizado níveis acima de 5 e 10% de descompactação (p=0,03 e p=0,02, respectivamente). Já para Het, não houve correlações significativas tampouco tendências com a eficiência da PIVE. Assim, ficou demonstrado que em PIVE, a descompactação no eixo central e total da cabeça do espermatozoide interfere intensamente no processo de fecundação. Os demais tipos de alterações também podem interferir na fecundação de forma menos intensa. A DB pode interferir na formação de blastocistos. Para a avaliação da descompactação, espermatozoides acima de 5% de Des interferem no processo de fecundação. Já a heterogeneidade, independentemente do nível considerado, não interfere em ambos os parâmetros avaliados. Chromatin alterations, despite not being evaluated in the spermogram routine affect the fertility of bulls. The most used method of chromatin evaluation is the SCSA (Sperm Chromatin Structure Assay). However it is a high method cost. An alternative method is the toluidine blue (TB) after acid hydrolysis associated with computer analysis - this method is presented as an equivalent and affordable tool. In addition to its lower cost, this methodology measures the intensity of decondensation and heterogeneity chromatin. However, it has not yet determined which decondensation and heterogeneity levels interfere with bull fertility. This study aims to define which levels of decondensation and heterogeneity chromatin are acceptable in order not to prejudice the bull fertility and the embryonic development. It also aims to propose a classification of cattle sperm chromatin alteration according to their location, and it also aims to verify if each type of alteration influences the process of fertilization and the early embryonic development. To this, animals semen samples induced to subfertile were used for in vitro production of embryos (IVP). These samples were evaluated using the AT method, and computer analysis. To characterize the semen fertility samples, cleavage ratio were evaluated on the second day and morphologically normal blastocysts in the seventh day of each IVF. With the use of computer image analysis it was possible to make the following classification of chromatin alterations: decondensation of the base of the head (DB), in the basal half (DBH), in scattered areas (SA), in the central axis of the head (DCA) and the entire length of the head (DT). It was used the estimation of Pearson (pp>0,05) in order to relate these alterations with IVP efficiency. In relation to cleavage, DCA and DT had a significant negative correlation (p=0,03 and p=0,047, respectively). DB and DBH showed a tendency to a negative correlation (p=0,06 and p=0,07, respectively). In relation to the blastocyst formation, DB showed a tendency to a negative correlation (p=0,09). In addition to this, two abnormality levels were tested in relation to the Heterogeneity (Het) and Decondensation (Des) of chromatin: above 5%, and above 10%. Des presented a significant correlation related to cleavage when used levels above 5% and 10% of decondensation (p=0,03 and p=0,02, respectively), while Het had no significant correlations neither tendencies with the IVP. It was established that the central axis decondensation of the sperm in IVP intensely affects the fertilization process. Other types of alterations may also affects, but with less intensity. DB may affect in blastocyst formation. To evaluate the decondensation, sperm above 5% Des affect the fertilization process. Related to heterogeneity, regardless of the level considered, does not interfere in both parameters evaluated. Dissertação (Mestrado)

Submitted by Ubirajara Cruz (ubirajara.cruz@gmail.com) on 2022-01-07T23:17:51Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) dissertacao_monique_mazzarollo_frata.pdf: 929490 bytes, checksum: 1d09ec930f8b777ddeb1de6fd410be47 (MD5) Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2022-01-19T22:03:16Z (GMT) No. of bitstreams: 2 dissertacao_monique_mazzarollo_frata.pdf: 929490 bytes, checksum: 1d09ec930f8b777ddeb1de6fd410be47 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Made available in DSpace on 2022-01-19T22:03:16Z (GMT). No. of bitstreams: 2 dissertacao_monique_mazzarollo_frata.pdf: 929490 bytes, checksum: 1d09ec930f8b777ddeb1de6fd410be47 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2021-06-21 Sem bolsa A transferência de embriões (TE) permite a multiplicação de fêmeas geneticamente superiores, contribuindo com o aumento da eficiência na produção de alimentos. Porém, tanto a produção in vivo quando a in vitro ainda necessitam de melhorias. No primeiro estudo, o objetivo foi identificar se a uma única administração de PGF na inseminação artificial (IA) após a superovulação (SOV) melhora as taxas de fecundação e produção embrionária. Vacas doadoras de embriões (n=35) participaram de duas SOV (n=70) sendo que, em cada ciclo, a metade não foi tratada (controle; n=35) e as demais receberam PGF (482µg de cloprostenol; n=35) no momento da primeira IA. No dia da coleta de embriões, registrou-se o número, estágio de desenvolvimento e qualidade das estruturas. As medianas (IC 95%) dos grupos controle e PGF foram, respectivamente, 12 (10-18) e 15 (12-18) estruturas totais; 9 (7-11) e 7 (6-10) embriões viáveis; 1 (0-1) e 1 (1-3) embriões degenerados; e 1 (0-3) e 2 (0-5) oócitos (P>0,05). Conclui-se que uma única administração de PGF no momento da primeira IA não afeta a produção embrionária de vacas superovuladas. No segundo estudo, o objetivo foi avaliar o efeito de um tratamento hormonal injetável para sincronização da onda folicular de doadoras Bos taurus, sobre a concentração de progesterona (P4), número e qualidade dos complexos cumulus oócito (CCOs) recuperados por aspiração folicular (OPU) e eficiência da produção in vitro de embriões (PIVE). Vacas Bos taurus (n=11) foram submetidas a quatro sessões de OPU (n=44), sendo que no dia zero (D0), a metade foi alocada no grupo controle (não sincronizada; n=22) ou no tratamento (2 mg de benzoato de estradiol; 150 µg de D-cloprostenol; e 300 mg de progesterona injetável; n=22) e no dia 6 (D6) ocorreu a OPU. Não houve diferença (P>0,05), nas medianas (IC 95%) de estruturas totais e viáveis, sendo respectivamente, 12 (6-15) e 10 (9-19) CCOs totais; 5,5 (5-8) e 6 (5-9) CCOs viáveis; e a taxa de produção de embriões foi 28% (21-46%) para o controle e 33% (22-45%) para o tratamento (P>0,05). Observou-se diferença (P0.05). In conclusion, a single PGF treatment at the time of the first AI does not affect the embryo production of superovulated cows. In the second study the objective was to evaluate the effect of an injectable hormonal treatment to synchronize the follicular wave of Bos taurus donors on progesterone (P4) concentration, number and quality of cumulus-oocyte complexes (COCs) recovered by ovum pick up (OPU) and in vitro embryo production (IVP) efficiency. Bos taurus cows (n=11) were submitted to four OPU sessions (n=44). On day zero (D0) the cows were allocated to control (not synchronized) or treated group (2 mg of estradiol benzoate; 150 µg of D-cloprostenol; and 300 mg of injectable progesterone). On day 6 (D6) the OPU procedures were performed. There was no difference (P>0.05) between control and treatment, in the medians (CI 95%) of total and viable structures, being, respectively, 12 (6-15) and 10 (9-19) total oocytes; 5.5 (5-8) and 6 (5-9) viable oocytes; the rate of embryo production was 28% (21-46%) for control and 33% (22-45%) for treatment. A significant difference (P

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES O óleo essencial de Syzygium aromaticum (OESA) possui comprovada atividade antioxidante. Contudo, por seus bioativos serem de diferentes constituições, é necessária a aplicação de estudos bioguiados para denotar o maior potencial antioxidante do OESA, bem como determinar a concentração ideal. Assim, considerando que a produção in vitro de embriões (PIVE) em bovinos apresenta eficiência variável em virtude das condições de estresse oxidativo, a suplementação do meio com esses compostos pode ser uma alternativa para otimizar a técnica. Portanto, o objetivo foi avaliar o potencial antioxidante dos bioativos isolados do OESA em oócitos bovinos, sobre a maturação nuclear e citoplasmática, viabilidade das células do cumulus, níveis de espécies reativas de oxigênio (EROs), níveis de glutationa intracelular (GSH), potencial de membrana mitocondrial (ΔΨm), desenvolvimento embrionário partenogenético (Etapa 1); e diferentes concentrações do bioativo definido na primeira etapa sobre os mesmos parâmetros (Etapa 2). Para tanto, oócitos foram maturados nas seguintes suplementações: OESA20 (20 μg/mL OESA), EUG (83 μM eugenol), β-CA (19 μM β-cariofileno), ACT (12 μM acetato de eugenila), CIS (100 μM cisteamina) e controle (sem antioxidante) para a Etapa 1; e eugenol E83 (83 μM eugenol), E100 (100 μM eugenol), E120 (120 μM eugenol), controle positivo (100 μM cisteamina) e controle negativo (sem antioxidante) para Etapa 2. Na etapa 1, todos os antioxidantes foram superiores ao controle nas taxas de metáfase II (MII, P < 0,05). Contudo, EUG, OESA20 e CIS aumentaram as taxas de extrusão do primeiro corpúsculo polar (1CP, P < 0,05). Além disso, EUG apresentou taxas de expansão e viabilidade das células do cumulus superiores aos demais grupos (P < 0,05). As taxas de maturação citoplasmática por distribuição mitocondrial foram maiores nos grupos EUG e ACT, e para os padrões de agregação mitocondrial se destacaram EUG, ACT e CIS (P < 0,05). Os níveis de EROs foram reduzidos e os de GSH aumentaram com o EUG e CIS (P < 0,05). Ainda, todos os grupos mostraram menores níveis de ΔΨm comparado ao grupo controle e β-CA (P < 0,05). EUG, OESA20 e CIS promoveram maiores taxas de clivagem e qualidade embrionária, mas o EUG promoveu uma maior taxa de blastocistos e estruturas com ≥ 8 células (P < 0,05). Apesar da ação dos demais bioativos serem positivas, o eugenol promoveu a maior atividade e foi usado na etapa seguinte. Na etapa 2, as taxas de MII foram superiores para E83 quando comparados aos demais grupos (P < 0,05). E83, E120 e o controle positivo aumentaram as taxas de 1CP (P < 0,05). E83 e controle positivo resultaram em expansão e viabilidade de células cumulus superiores (P < 0,05). A maturação citoplasmática não diferiu entre os grupos com antioxidantes, mas, a agregação mitocondrial se destacou em E83 e controle positivo (P < 0,05). Um ΔΨm menor foi mostrado nos grupos suplementados com antioxidantes (P < 0,05). Os níveis de EROs reduziram com os grupos E83 e controle positivo, e os de GSH aumentaram com esses e o E120 (P < 0,05). A taxa de clivagem e o número de blastocistos eclodidos foi maior em E83, assim como a qualidade embrionária (P < 0,05). Em conclusão, apesar do β-CA e ACT terem efeitos antioxidantes, 83 μM de eugenol adicionado aos meios de MIV foi a mais interessante alternativa entre os bioativos para a manutenção da qualidade de oócitos bovinos, bem como promover o aumento do subsequente desenvolvimento embrionário The Syzygium aromaticum essential oil (EOSA) has proven antioxidant activity. Nevertheless, because its bioactive substances are of different constitutions, it is necessary to apply bioguided studies to denote the greater antioxidant potential of EOSA, as well as to determine the ideal concentration. Thus, considering that the in vitro embryo production (IVEP) in cattle has variable efficiency, due to oxidative stress conditions, medium supplementation with these compounds may be an alternative to optimize the technique. Therefore, the aim was to evaluate the antioxidant potential of EOSA bioactives in bovine oocytes on nuclear and cytoplasmic maturation, viability of cumulus cells, levels of reactive oxygen species (ROS), levels of intracellular glutathione (GSH), mitochondrial membrane potential (ΔΨm), parthenogenetic embryonic development (Step 1); and different concentrations of the bioactive defined in the first step on the same parameters (Step 2). Oocytes were matured in the following supplements: EOSA20 (20 μg/mL EOSA), EUG (83 μM eugenol), β-CA (19 μM β-caryophyllene), ACT (12 μM acetyl acetate), CYS (100 μM cysteamine) and control (without antioxidant) for step 1; and E83 (83 μM eugenol), E100 (100 μM eugenol), E120 (120 μM eugenol), positive control (100 μM cysteamine) and negative control (without antioxidant) for step 2. In the step 1, all antioxidants were superior to the control for metaphase II (MII) rates (P < 0.05). Nevertheless, EUG, EOSA20 and CYS increased the extrusion rates of the first polar body (1PB, P < 0.05). Moreover, EUG showed a superior expansion and viability of the cumulus cells rates (P < 0.05). The rates of cytoplasmic maturation by mitochondrial distribution were higher in the EUG and ACT, and for the patterns of mitochondrial aggregation EUG, ACT and CYS stood out (P < 0.05). ROS levels were reduced and GSH levels were increased with EUG and CYS (P < 0.05). All groups showed lower levels of ΔΨm compared to the control and β-CA (P < 0.05). EUG, EOSA20 and CYS promoted higher rates of cleavage and embryonic quality, but EUG promoted a higher rate of blastocysts and structures with ≥ 8 cells in the cleavage (P < 0.05). Although the action of the other bioactive agents was positive, eugenol promoted the greatest activity and was used in the next step. In the step 2, the MII rates were higher in the E83 when compared other groups (P < 0.05). E83, E120 and the positive control increased the rates of 1PB (P < 0.05). E83 and positive control resulted in higher expansion and viability of cumulus cells (P < 0.05). Cytoplasmic maturation did not differ among groups with antioxidants, but mitochondrial aggregation stood out in E83 and positive control (P < 0.05). A lower ΔΨm was shown in the groups supplemented with antioxidants (P < 0.05). The ROS levels decreased with E83 and positive control, and the GSH levels increased with these and the E120 (P < 0.05). The cleavage rate and the number of hatched blastocysts was higher in the E83, as well as the embryonic quality (P < 0.05). In conclusion, although β-CA and ACT have positive antioxidant effects, 83 μM of eugenol added to IVM medium was the most interesting alternative among bioactive agents for maintaining the quality of bovine oocytes, as well as promoting the increase of subsequent embryonic development

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2020. A transferência de genoma (TG), o qual permite substituir um citoplasma danificado por um integro, pode ser uma alternativa para melhorar a eficiência da criopreservação de ovócitos bovinos. Neste trabalho objetivou-se estabelecer a técnica de TG utilizando a placa metafásica (PM) e corpúsculo polar (CP) de ovócitos bovinos como fontes do material genético. Para isso foram realizados quatro experimentos. No primeiro foi estabelecida a TG utilizando a PM (TG-PM) avaliando a concentração espermática a ser utilizada, a taxa de fecundação, a de polispermia e a de embriões. Na avaliação da concentração espermática, a taxa de fecundação foi maior (P 0,05) entre as estruturas reconstruídas GT-PM (n = 22) e GT-CP (n = 20). No entanto, ambos os grupos apresentaram menos GC (p 0,05). Não foi observado diferença entre os grupos quanto a quantidade e distribuição de MT e quantidade de mtDNA. No quarto experimento foi realizada a TG-PM utilizando ovócitos vitrificados (TG-PMV) como fonte de material genético. Para isso, forma utilizados 3 grupos, TG-PMV, controle vitrificado (VIT) e controle PIVE. A taxa de clivagem do grupo TG-PMV (61,2%) foi semelhante ao grupo controle VIT (52,7%) e inferior (p 0.05) between groups. Regarding embryo production, in GT-MP group cleavage (50%) and blastocyst rates (13.6%) were lower than the IVP control group (80.2% and 32.6%, respectively). In the second experiment, the same parameters as the first were evaluated, but ieateady the metahphase II, the polar body (GT-PB) was used. The results showed that the GT-PB group had lower fertilization rate (82.3% x 96.2%) and a blastocyst (7.7% x 36.8%) than control group, but the cleavage rate (88.5% x 85.3%) was similar between them. . In the third experiment, the effect of micromanipulation on the amount and distribution of Cortical Granules (CG), Mitochondria (MT) and number of copies of mitochondrial DNA (mtDNA) was evaluated. For this, four groups were used, GT-MP, GT-PB, enucleated and control intact group. CG quantification was similar (p> 0.05) between the reconstructed structures GT-MP (n = 22) and GT-PB (n = 20). However, both groups had less CG (p 0.05). There was no differences between groups regarding the amount and distribution of MT and the amount of mtDNA. In the fourth experiment, GT-MP was performed using vitrified oocytes (GT-VMP) as a source of genetic material. Cleavage rate of the TG-PMV group (61.2%) was similar to the VIT control group (52,7%) and lower (p

CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Durante a produção in vitro de embriões, a maturação ovocitária pode ser influenciada pelo estresse oxidativo. Assim, é importante conhecer os meios para controlar a produção de espécies reativas de oxigênio (ROs). Objetivou-se avaliar o uso do resveratrol associado a nanopartículas de sílica durante a maturação in vitro de ovócitos bovinos. Ovários bovinos foram coletados em frigorífico comercial e os ovócitos foram distribuídos nos seguintes tratamentos durante o processo de maturação: controle, resveratrol 0,5 μM, resveratrol 1 μM, resveratrol ligado a nanopartículas 0,5 μM e resveratrol ligado a nanopartículas 1 μM. Foram avaliadas as taxas de clivagem e produção de blastocistos, produção de ROs, maturação nuclear ovocitária e apoptose celular. Para mensurar a taxa de produção foram utilizados 789 ovócitos e a análise de ROs e maturação nuclear através das probes 2',7'- dichlorodihydrofluorescein diacetato (DCFDA) e 4',6'-diamino-2-fenil-indol (DAPI), respectivamente, com 130 e 95 ovócitos. A taxa de apoptose celular embrionária foi feita em 117 embriões, através do iodeto de propídio. A análise estatística foi realizada pelo programa Sigma Plot versão 11 e os dados foram considerados significativos quando P < 0,05 (bilateral). O uso do resveratrol na forma diluída na concentração de 1µM diminuiu a taxa de clivagem e de blastocistos e não foi detectada diferença entre os tratamentos em relação a produção de ROs, maturação ovocitária e apoptose celular. O resveratrol quando associado a nanopartículas de silíca apresenta um melhor resultado para a taxa de clivagem e blastocistos em relação a forma diluída na concentração de 1 μM, o que pode estar relacionado a uma diminuição da toxicidade do antioxidante, devido a liberação controlada quando o mesmo está associado a estes nanomateriais. During the in vitro embryo production, the oocyte maturation may be influenced by oxidative stress. This way, it is important to know the means of controlling the production of oxygen reactive species (ROs). The aim of this study was to evaluate the use of resveratrol associated to nanoparticles of silica during the in vitro maturation of bovine oocytes. We collected bovine ovaries in regional slaughterhouses and the oocytes were distributed during the maturation process in the following treatments: control group, resveratrol 0.5 μM, resveratrol 1 μM, resveratrol connected to nanoparticles 0.5 μM, and resveratrol connected to nanoparticles 1 μM. We evaluated the cleavage rate and blastocysts production, ROs production, oocyte nuclear maturation, and cellular apoptosis rate. To measure the production rate, we used 789 oocytes and the Ros and nuclear maturation analysis were made using probes 2',7'- dichlorofluorescin diacetate (DCFDA) and 4',6'-diamidino-2-phenylindole (DAPI), respectively, with 130 and 95 oocytes. The cellular apoptosis rate was done in 117 embryos through propidium iodide. The statistical analysis was made using the Sigma Plot program version 11, and the data were considered significant with P< 0.05 (bilateral). The use of diluted resveratrol at 1µM decreased the cleavage rate of the blastocysts, and there was no difference between the treatments at ROs production, oocyte maturation and cellular apoptosis. The resveratrol shows better results when associated to silica nanoparticles at the cleavage rate and blastocysts related to its diluted form at 1μM concentration, which may be associated to a decrease of the toxicity of the antioxidant because of the controlled release when it is associated to these nanomaterials. Dissertação (Mestrado) 2022-03-04

Submitted by Maickon Willian de Freitas (maickon.wf@hotmail.com) on 2020-04-27T20:40:56Z No. of bitstreams: 1 dissertação repositorio.pdf: 1247364 bytes, checksum: 2753263f31f4d511d4a89e562bf557bd (MD5) Submitted by Maickon Willian de Freitas (maickon.wf@hotmail.com) on 2020-04-27T20:40:56Z No. of bitstreams: 1 dissertação repositorio.pdf: 1247364 bytes, checksum: 2753263f31f4d511d4a89e562bf557bd (MD5) Submitted by Maickon Willian de Freitas (maickon.wf@hotmail.com) on 2020-04-27T20:40:56Z No. of bitstreams: 1 dissertação repositorio.pdf: 1247364 bytes, checksum: 2753263f31f4d511d4a89e562bf557bd (MD5) Rejected by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: problema 1: capa Verifique nas normas do seu programa de pós se não é necessário incluir os símbolos da Universidade, da Faculdade e do seu programa de pós no alto da capa. Se sim, incluir. Se não, desconsidere essa observação. Essa estrutura de apresentação é comum na maioria dos programas de pós do IBB. Problema 2: Ficha catalográfica No arquivo submetido não consta a ficha catalográfica, item obrigatório para submissão. A ficha deve ser inserida no arquivo PDF logo após a folha de rosto do seu trabalho. Elaboramos a ficha na biblioteca ou, se preferir, pode usar o sistema disponibilizado pela Coordenadoria Geral de Bibliotecas para essa finalidade: https://www.biblioteca.unesp.br/ficha/ Assim que tiver efetuado as correções submeta o arquivo, em formato PDF, novamente. Agradecemos a compreensão. on 2020-04-29T20:33:40Z (GMT) Submitted by Maickon Willian de Freitas (maickon.wf@hotmail.com) on 2020-04-27T20:40:56Z No. of bitstreams: 1 dissertação repositorio.pdf: 1247364 bytes, checksum: 2753263f31f4d511d4a89e562bf557bd (MD5) Submitted by Maickon Willian de Freitas (maickon.wf@hotmail.com) on 2020-04-30T15:15:34Z No. of bitstreams: 1 dissertação repositorio novo.pdf: 1248709 bytes, checksum: e5c7cc3ba92ac24849bb2b24b3a43216 (MD5) Submitted by Maickon Willian de Freitas (maickon.wf@hotmail.com) on 2020-04-27T20:40:56Z No. of bitstreams: 1 dissertação repositorio.pdf: 1247364 bytes, checksum: 2753263f31f4d511d4a89e562bf557bd (MD5) Submitted by Maickon Willian de Freitas (maickon.wf@hotmail.com) on 2020-04-30T15:15:34Z No. of bitstreams: 1 dissertação repositorio novo.pdf: 1248709 bytes, checksum: e5c7cc3ba92ac24849bb2b24b3a43216 (MD5) Rejected by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: problema 1: capa Verifique nas normas do seu programa de pós se não é necessário incluir os símbolos da Universidade, da Faculdade e do seu programa de pós no alto da capa. Se sim, incluir. Se não, desconsidere essa observação. Essa estrutura de apresentação é comum na maioria dos programas de pós do IBB. Problema 2: Ficha catalográfica No arquivo submetido não consta a ficha catalográfica, item obrigatório para submissão. A ficha deve ser inserida no arquivo PDF logo após a folha de rosto do seu trabalho. Elaboramos a ficha na biblioteca ou, se preferir, pode usar o sistema disponibilizado pela Coordenadoria Geral de Bibliotecas para essa finalidade: https://www.biblioteca.unesp.br/ficha/ Assim que tiver efetuado as correções submeta o arquivo, em formato PDF, novamente. Agradecemos a compreensão. on 2020-04-29T20:33:40Z (GMT) Rejected by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: problema 1: Ficha catalográfica A ficha catalográfica deve ser inserida no arquivo PDF logo após a folha de rosto do seu trabalho. No arquivo submetido a ficha está entre a capa e a folha de rosto do seu trabalho. Favor verificar e corrigir. Assim que tiver efetuado a correção submeta o arquivo, em formato PDF, novamente. Agradecemos a compreensão. on 2020-04-30T15:27:16Z (GMT) Submitted by Maickon Willian de Freitas (maickon.wf@hotmail.com) on 2020-04-27T20:40:56Z No. of bitstreams: 1 dissertação repositorio.pdf: 1247364 bytes, checksum: 2753263f31f4d511d4a89e562bf557bd (MD5) Submitted by Maickon Willian de Freitas (maickon.wf@hotmail.com) on 2020-04-30T15:15:34Z No. of bitstreams: 1 dissertação repositorio novo.pdf: 1248709 bytes, checksum: e5c7cc3ba92ac24849bb2b24b3a43216 (MD5) Rejected by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: problema 1: capa Verifique nas normas do seu programa de pós se não é necessário incluir os símbolos da Universidade, da Faculdade e do seu programa de pós no alto da capa. Se sim, incluir. Se não, desconsidere essa observação. Essa estrutura de apresentação é comum na maioria dos programas de pós do IBB. Problema 2: Ficha catalográfica No arquivo submetido não consta a ficha catalográfica, item obrigatório para submissão. A ficha deve ser inserida no arquivo PDF logo após a folha de rosto do seu trabalho. Elaboramos a ficha na biblioteca ou, se preferir, pode usar o sistema disponibilizado pela Coordenadoria Geral de Bibliotecas para essa finalidade: https://www.biblioteca.unesp.br/ficha/ Assim que tiver efetuado as correções submeta o arquivo, em formato PDF, novamente. Agradecemos a compreensão. on 2020-04-29T20:33:40Z (GMT) Submitted by Maickon Willian de Freitas (maickon.wf@hotmail.com) on 2020-04-30T15:15:34Z No. of bitstreams: 1 dissertação repositorio novo.pdf: 1248709 bytes, checksum: e5c7cc3ba92ac24849bb2b24b3a43216 (MD5) Submitted by Maickon Willian de Freitas (maickon.wf@hotmail.com) on 2020-04-30T19:58:25Z No. of bitstreams: 1 dissertação repositorioo.pdf: 1248710 bytes, checksum: 9b6e902b14e4af5e7a7f5a2b84f5c4e7 (MD5) Submitted by Maickon Willian de Freitas (maickon.wf@hotmail.com) on 2020-04-30T19:58:25Z No. of bitstreams: 1 dissertação repositorioo.pdf: 1248710 bytes, checksum: 9b6e902b14e4af5e7a7f5a2b84f5c4e7 (MD5) Approved for entry into archive by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br) on 2020-05-04T23:31:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 freitas_mw_me_bot.pdf: 1248710 bytes, checksum: 9b6e902b14e4af5e7a7f5a2b84f5c4e7 (MD5) Rejected by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: problema 1: Ficha catalográfica A ficha catalográfica deve ser inserida no arquivo PDF logo após a folha de rosto do seu trabalho. No arquivo submetido a ficha está entre a capa e a folha de rosto do seu trabalho. Favor verificar e corrigir. Assim que tiver efetuado a correção submeta o arquivo, em formato PDF, novamente. Agradecemos a compreensão. on 2020-04-30T15:27:16Z (GMT) Submitted by Maickon Willian de Freitas (maickon.wf@hotmail.com) on 2020-04-30T15:15:34Z No. of bitstreams: 1 dissertação repositorio novo.pdf: 1248709 bytes, checksum: e5c7cc3ba92ac24849bb2b24b3a43216 (MD5) Approved for entry into archive by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br) on 2020-05-04T23:31:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 freitas_mw_me_bot.pdf: 1248710 bytes, checksum: 9b6e902b14e4af5e7a7f5a2b84f5c4e7 (MD5) Submitted by Maickon Willian de Freitas (maickon.wf@hotmail.com) on 2020-04-30T15:15:34Z No. of bitstreams: 1 dissertação repositorio novo.pdf: 1248709 bytes, checksum: e5c7cc3ba92ac24849bb2b24b3a43216 (MD5) Submitted by Maickon Willian de Freitas (maickon.wf@hotmail.com) on 2020-04-30T15:15:34Z No. of bitstreams: 1 dissertação repositorio novo.pdf: 1248709 bytes, checksum: e5c7cc3ba92ac24849bb2b24b3a43216 (MD5) Made available in DSpace on 2020-05-04T23:31:51Z (GMT). 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Essa estrutura de apresentação é comum na maioria dos programas de pós do IBB. Problema 2: Ficha catalográfica No arquivo submetido não consta a ficha catalográfica, item obrigatório para submissão. A ficha deve ser inserida no arquivo PDF logo após a folha de rosto do seu trabalho. Elaboramos a ficha na biblioteca ou, se preferir, pode usar o sistema disponibilizado pela Coordenadoria Geral de Bibliotecas para essa finalidade: https://www.biblioteca.unesp.br/ficha/ Assim que tiver efetuado as correções submeta o arquivo, em formato PDF, novamente. Agradecemos a compreensão. on 2020-04-29T20:33:40Z (GMT) Submitted by Maickon Willian de Freitas (maickon.wf@hotmail.com) on 2020-04-30T15:15:34Z No. of bitstreams: 1 dissertação repositorio novo.pdf: 1248709 bytes, checksum: e5c7cc3ba92ac24849bb2b24b3a43216 (MD5) Rejected by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: problema 1: capa Verifique nas normas do seu programa de pós se não é necessário incluir os símbolos da Universidade, da Faculdade e do seu programa de pós no alto da capa. Se sim, incluir. Se não, desconsidere essa observação. Essa estrutura de apresentação é comum na maioria dos programas de pós do IBB. Problema 2: Ficha catalográfica No arquivo submetido não consta a ficha catalográfica, item obrigatório para submissão. A ficha deve ser inserida no arquivo PDF logo após a folha de rosto do seu trabalho. Elaboramos a ficha na biblioteca ou, se preferir, pode usar o sistema disponibilizado pela Coordenadoria Geral de Bibliotecas para essa finalidade: https://www.biblioteca.unesp.br/ficha/ Assim que tiver efetuado as correções submeta o arquivo, em formato PDF, novamente. Agradecemos a compreensão. on 2020-04-29T20:33:40Z (GMT) Submitted by Maickon Willian de Freitas (maickon.wf@hotmail.com) on 2020-04-27T20:40:56Z No. of bitstreams: 1 dissertação repositorio.pdf: 1247364 bytes, checksum: 2753263f31f4d511d4a89e562bf557bd (MD5) Submitted by Maickon Willian de Freitas (maickon.wf@hotmail.com) on 2020-04-30T19:58:25Z No. of bitstreams: 1 dissertação repositorioo.pdf: 1248710 bytes, checksum: 9b6e902b14e4af5e7a7f5a2b84f5c4e7 (MD5) Rejected by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: problema 1: Ficha catalográfica A ficha catalográfica deve ser inserida no arquivo PDF logo após a folha de rosto do seu trabalho. No arquivo submetido a ficha está entre a capa e a folha de rosto do seu trabalho. Favor verificar e corrigir. Assim que tiver efetuado a correção submeta o arquivo, em formato PDF, novamente. Agradecemos a compreensão. on 2020-04-30T15:27:16Z (GMT) Approved for entry into archive by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br) on 2020-05-04T23:31:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 freitas_mw_me_bot.pdf: 1248710 bytes, checksum: 9b6e902b14e4af5e7a7f5a2b84f5c4e7 (MD5) Submitted by Maickon Willian de Freitas (maickon.wf@hotmail.com) on 2020-04-30T15:15:34Z No. of bitstreams: 1 dissertação repositorio novo.pdf: 1248709 bytes, checksum: e5c7cc3ba92ac24849bb2b24b3a43216 (MD5) Submitted by Maickon Willian de Freitas (maickon.wf@hotmail.com) on 2020-04-30T15:15:34Z No. of bitstreams: 1 dissertação repositorio novo.pdf: 1248709 bytes, checksum: e5c7cc3ba92ac24849bb2b24b3a43216 (MD5) Submitted by Maickon Willian de Freitas (maickon.wf@hotmail.com) on 2020-04-27T20:40:56Z No. of bitstreams: 1 dissertação repositorio.pdf: 1247364 bytes, checksum: 2753263f31f4d511d4a89e562bf557bd (MD5) Rejected by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: problema 1: Ficha catalográfica A ficha catalográfica deve ser inserida no arquivo PDF logo após a folha de rosto do seu trabalho. No arquivo submetido a ficha está entre a capa e a folha de rosto do seu trabalho. Favor verificar e corrigir. Assim que tiver efetuado a correção submeta o arquivo, em formato PDF, novamente. Agradecemos a compreensão. on 2020-04-30T15:27:16Z (GMT) Approved for entry into archive by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br) on 2020-05-04T23:31:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 freitas_mw_me_bot.pdf: 1248710 bytes, checksum: 9b6e902b14e4af5e7a7f5a2b84f5c4e7 (MD5) Submitted by Maickon Willian de Freitas (maickon.wf@hotmail.com) on 2020-04-30T19:58:25Z No. of bitstreams: 1 dissertação repositorioo.pdf: 1248710 bytes, checksum: 9b6e902b14e4af5e7a7f5a2b84f5c4e7 (MD5) Made available in DSpace on 2020-05-04T23:31:51Z (GMT). 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Se sim, incluir. Se não, desconsidere essa observação. Essa estrutura de apresentação é comum na maioria dos programas de pós do IBB. Problema 2: Ficha catalográfica No arquivo submetido não consta a ficha catalográfica, item obrigatório para submissão. A ficha deve ser inserida no arquivo PDF logo após a folha de rosto do seu trabalho. Elaboramos a ficha na biblioteca ou, se preferir, pode usar o sistema disponibilizado pela Coordenadoria Geral de Bibliotecas para essa finalidade: https://www.biblioteca.unesp.br/ficha/ Assim que tiver efetuado as correções submeta o arquivo, em formato PDF, novamente. 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No. of bitstreams: 1 freitas_mw_me_bot.pdf: 1248710 bytes, checksum: 9b6e902b14e4af5e7a7f5a2b84f5c4e7 (MD5) Previous issue date: 2020-02-28 Approved for entry into archive by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br) on 2020-05-04T23:31:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 freitas_mw_me_bot.pdf: 1248710 bytes, checksum: 9b6e902b14e4af5e7a7f5a2b84f5c4e7 (MD5) Submitted by Maickon Willian de Freitas (maickon.wf@hotmail.com) on 2020-04-30T19:58:25Z No. of bitstreams: 1 dissertação repositorioo.pdf: 1248710 bytes, checksum: 9b6e902b14e4af5e7a7f5a2b84f5c4e7 (MD5) Rejected by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: problema 1: capa Verifique nas normas do seu programa de pós se não é necessário incluir os símbolos da Universidade, da Faculdade e do seu programa de pós no alto da capa. Se sim, incluir. Se não, desconsidere essa observação. Essa estrutura de apresentação é comum na maioria dos programas de pós do IBB. Problema 2: Ficha catalográfica No arquivo submetido não consta a ficha catalográfica, item obrigatório para submissão. A ficha deve ser inserida no arquivo PDF logo após a folha de rosto do seu trabalho. Elaboramos a ficha na biblioteca ou, se preferir, pode usar o sistema disponibilizado pela Coordenadoria Geral de Bibliotecas para essa finalidade: https://www.biblioteca.unesp.br/ficha/ Assim que tiver efetuado as correções submeta o arquivo, em formato PDF, novamente. Agradecemos a compreensão. on 2020-04-29T20:33:40Z (GMT) Approved for entry into archive by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br) on 2020-05-04T23:31:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 freitas_mw_me_bot.pdf: 1248710 bytes, checksum: 9b6e902b14e4af5e7a7f5a2b84f5c4e7 (MD5) Submitted by Maickon Willian de Freitas (maickon.wf@hotmail.com) on 2020-04-30T19:58:25Z No. of bitstreams: 1 dissertação repositorioo.pdf: 1248710 bytes, checksum: 9b6e902b14e4af5e7a7f5a2b84f5c4e7 (MD5) Submitted by Maickon Willian de Freitas (maickon.wf@hotmail.com) on 2020-04-30T15:15:34Z No. of bitstreams: 1 dissertação repositorio novo.pdf: 1248709 bytes, checksum: e5c7cc3ba92ac24849bb2b24b3a43216 (MD5) Approved for entry into archive by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br) on 2020-05-04T23:31:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 freitas_mw_me_bot.pdf: 1248710 bytes, checksum: 9b6e902b14e4af5e7a7f5a2b84f5c4e7 (MD5) Submitted by Maickon Willian de Freitas (maickon.wf@hotmail.com) on 2020-04-30T19:58:25Z No. of bitstreams: 1 dissertação repositorioo.pdf: 1248710 bytes, checksum: 9b6e902b14e4af5e7a7f5a2b84f5c4e7 (MD5) Made available in DSpace on 2020-05-04T23:31:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 freitas_mw_me_bot.pdf: 1248710 bytes, checksum: 9b6e902b14e4af5e7a7f5a2b84f5c4e7 (MD5) Previous issue date: 2020-02-28 Made available in DSpace on 2020-05-04T23:31:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 freitas_mw_me_bot.pdf: 1248710 bytes, checksum: 9b6e902b14e4af5e7a7f5a2b84f5c4e7 (MD5) Previous issue date: 2020-02-28 Submitted by Maickon Willian de Freitas (maickon.wf@hotmail.com) on 2020-04-30T19:58:25Z No. of bitstreams: 1 dissertação repositorioo.pdf: 1248710 bytes, checksum: 9b6e902b14e4af5e7a7f5a2b84f5c4e7 (MD5) Made available in DSpace on 2020-05-04T23:31:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 freitas_mw_me_bot.pdf: 1248710 bytes, checksum: 9b6e902b14e4af5e7a7f5a2b84f5c4e7 (MD5) Previous issue date: 2020-02-28 Submitted by Maickon Willian de Freitas (maickon.wf@hotmail.com) on 2020-04-30T15:15:34Z No. of bitstreams: 1 dissertação repositorio novo.pdf: 1248709 bytes, checksum: e5c7cc3ba92ac24849bb2b24b3a43216 (MD5) Made available in DSpace on 2020-05-04T23:31:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 freitas_mw_me_bot.pdf: 1248710 bytes, checksum: 9b6e902b14e4af5e7a7f5a2b84f5c4e7 (MD5) Previous issue date: 2020-02-28 Approved for entry into archive by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br) on 2020-05-04T23:31:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 freitas_mw_me_bot.pdf: 1248710 bytes, checksum: 9b6e902b14e4af5e7a7f5a2b84f5c4e7 (MD5) Submitted by Maickon Willian de Freitas (maickon.wf@hotmail.com) on 2020-04-30T19:58:25Z No. of bitstreams: 1 dissertação repositorioo.pdf: 1248710 bytes, checksum: 9b6e902b14e4af5e7a7f5a2b84f5c4e7 (MD5) Rejected by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: problema 1: Ficha catalográfica A ficha catalográfica deve ser inserida no arquivo PDF logo após a folha de rosto do seu trabalho. No arquivo submetido a ficha está entre a capa e a folha de rosto do seu trabalho. Favor verificar e corrigir. Assim que tiver efetuado a correção submeta o arquivo, em formato PDF, novamente. Agradecemos a compreensão. on 2020-04-30T15:27:16Z (GMT) Submitted by Maickon Willian de Freitas (maickon.wf@hotmail.com) on 2020-04-30T15:15:34Z No. of bitstreams: 1 dissertação repositorio novo.pdf: 1248709 bytes, checksum: e5c7cc3ba92ac24849bb2b24b3a43216 (MD5) Approved for entry into archive by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br) on 2020-05-04T23:31:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 freitas_mw_me_bot.pdf: 1248710 bytes, checksum: 9b6e902b14e4af5e7a7f5a2b84f5c4e7 (MD5) Submitted by Maickon Willian de Freitas (maickon.wf@hotmail.com) on 2020-04-27T20:40:56Z No. of bitstreams: 1 dissertação repositorio.pdf: 1247364 bytes, checksum: 2753263f31f4d511d4a89e562bf557bd (MD5) Made available in DSpace on 2020-05-04T23:31:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 freitas_mw_me_bot.pdf: 1248710 bytes, checksum: 9b6e902b14e4af5e7a7f5a2b84f5c4e7 (MD5) Previous issue date: 2020-02-28 Submitted by Maickon Willian de Freitas (maickon.wf@hotmail.com) on 2020-04-30T15:15:34Z No. of bitstreams: 1 dissertação repositorio novo.pdf: 1248709 bytes, checksum: e5c7cc3ba92ac24849bb2b24b3a43216 (MD5) Submitted by Maickon Willian de Freitas (maickon.wf@hotmail.com) on 2020-04-30T19:58:25Z No. of bitstreams: 1 dissertação repositorioo.pdf: 1248710 bytes, checksum: 9b6e902b14e4af5e7a7f5a2b84f5c4e7 (MD5) Rejected by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: problema 1: Ficha catalográfica A ficha catalográfica deve ser inserida no arquivo PDF logo após a folha de rosto do seu trabalho. No arquivo submetido a ficha está entre a capa e a folha de rosto do seu trabalho. Favor verificar e corrigir. Assim que tiver efetuado a correção submeta o arquivo, em formato PDF, novamente. Agradecemos a compreensão. on 2020-04-30T15:27:16Z (GMT) Made available in DSpace on 2020-05-04T23:31:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 freitas_mw_me_bot.pdf: 1248710 bytes, checksum: 9b6e902b14e4af5e7a7f5a2b84f5c4e7 (MD5) Previous issue date: 2020-02-28 Approved for entry into archive by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br) on 2020-05-04T23:31:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 freitas_mw_me_bot.pdf: 1248710 bytes, checksum: 9b6e902b14e4af5e7a7f5a2b84f5c4e7 (MD5) Submitted by Maickon Willian de Freitas (maickon.wf@hotmail.com) on 2020-04-30T15:15:34Z No. of bitstreams: 1 dissertação repositorio novo.pdf: 1248709 bytes, checksum: e5c7cc3ba92ac24849bb2b24b3a43216 (MD5) Submitted by Maickon Willian de Freitas (maickon.wf@hotmail.com) on 2020-04-30T19:58:25Z No. of bitstreams: 1 dissertação repositorioo.pdf: 1248710 bytes, checksum: 9b6e902b14e4af5e7a7f5a2b84f5c4e7 (MD5) Approved for entry into archive by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br) on 2020-05-04T23:31:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 freitas_mw_me_bot.pdf: 1248710 bytes, checksum: 9b6e902b14e4af5e7a7f5a2b84f5c4e7 (MD5) Rejected by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: problema 1: Ficha catalográfica A ficha catalográfica deve ser inserida no arquivo PDF logo após a folha de rosto do seu trabalho. No arquivo submetido a ficha está entre a capa e a folha de rosto do seu trabalho. Favor verificar e corrigir. Assim que tiver efetuado a correção submeta o arquivo, em formato PDF, novamente. Agradecemos a compreensão. on 2020-04-30T15:27:16Z (GMT) Approved for entry into archive by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br) on 2020-05-04T23:31:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 freitas_mw_me_bot.pdf: 1248710 bytes, checksum: 9b6e902b14e4af5e7a7f5a2b84f5c4e7 (MD5) Approved for entry into archive by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br) on 2020-05-04T23:31:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 freitas_mw_me_bot.pdf: 1248710 bytes, checksum: 9b6e902b14e4af5e7a7f5a2b84f5c4e7 (MD5) Rejected by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: problema 1: Ficha catalográfica A ficha catalográfica deve ser inserida no arquivo PDF logo após a folha de rosto do seu trabalho. No arquivo submetido a ficha está entre a capa e a folha de rosto do seu trabalho. Favor verificar e corrigir. Assim que tiver efetuado a correção submeta o arquivo, em formato PDF, novamente. Agradecemos a compreensão. on 2020-04-30T15:27:16Z (GMT) Submitted by Maickon Willian de Freitas (maickon.wf@hotmail.com) on 2020-04-30T19:58:25Z No. of bitstreams: 1 dissertação repositorioo.pdf: 1248710 bytes, checksum: 9b6e902b14e4af5e7a7f5a2b84f5c4e7 (MD5) Made available in DSpace on 2020-05-04T23:31:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 freitas_mw_me_bot.pdf: 1248710 bytes, checksum: 9b6e902b14e4af5e7a7f5a2b84f5c4e7 (MD5) Previous issue date: 2020-02-28 Submitted by Maickon Willian de Freitas (maickon.wf@hotmail.com) on 2020-04-30T19:58:25Z No. of bitstreams: 1 dissertação repositorioo.pdf: 1248710 bytes, checksum: 9b6e902b14e4af5e7a7f5a2b84f5c4e7 (MD5) Made available in DSpace on 2020-05-04T23:31:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 freitas_mw_me_bot.pdf: 1248710 bytes, checksum: 9b6e902b14e4af5e7a7f5a2b84f5c4e7 (MD5) Previous issue date: 2020-02-28 Made available in DSpace on 2020-05-04T23:31:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 freitas_mw_me_bot.pdf: 1248710 bytes, checksum: 9b6e902b14e4af5e7a7f5a2b84f5c4e7 (MD5) Previous issue date: 2020-02-28 Submitted by Maickon Willian de Freitas (maickon.wf@hotmail.com) on 2020-04-30T19:58:25Z No. of bitstreams: 1 dissertação repositorioo.pdf: 1248710 bytes, checksum: 9b6e902b14e4af5e7a7f5a2b84f5c4e7 (MD5) Made available in DSpace on 2020-05-04T23:31:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 freitas_mw_me_bot.pdf: 1248710 bytes, checksum: 9b6e902b14e4af5e7a7f5a2b84f5c4e7 (MD5) Previous issue date: 2020-02-28 Submitted by Maickon Willian de Freitas (maickon.wf@hotmail.com) on 2020-04-30T19:58:25Z No. of bitstreams: 1 dissertação repositorioo.pdf: 1248710 bytes, checksum: 9b6e902b14e4af5e7a7f5a2b84f5c4e7 (MD5) Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) A fim de mimetizar melhores condições do sistema in vivo, um meio de cultura mais proximo à composição do fluido do oviduto foi criado, denominado fluido ovidutal sintético (SOF), este foi formulado com base na análise bioquímica do oviduto das ovelhas. In vivo os momentos finais de maturação oocitária ocorrem em contato com o FO, já in vitro a maturação oocitária é realizada com protocolos de maturação 24h sem nenhuma alteração no meio de maturação. Portanto, o presente estudo investigou o impacto do meio de cultivo SOF durante as últimas quatro horas da maturação in vitro (MIV) e seus efeitos sobre a progressão meiótica e taxa de produção embrionária. Para tanto, os CCOs foram recuperados de ovário de vacas abatidas e maturados in vitro, nos seguintes grupos: SFB/ SFB; SFB/ SFB+SOF; BSA/BSA; BSA/BSA+SOF, todos submetidos há uma troca total de meio nas últimas quatro horas de maturação, adicionando o meio SOF de acordo com os grupos citados anteriormante. Os CCOs maturados foram fertilizados e cultivados em atmosfera e umidade controlada até o estágio de blastocisto (7 e 8 dias após a fertilização). A análise estatística foi realizada transformando os dados em arcoseno e as médias foram comparadas pelo teste T usando JMP (software JMP, SAS Institute Cary, NC). Diferenças significativas foram consideradas quando p≤ 0,05. O resultado obtido mostrou que o tratamento com SOF não tem efeito na progressão da meiose (p= 0,5944). Entretanto, quando analisamos as taxas embrionárias e a incorporação do SOF no meio BSA, o meio SOF é capaz de modular o rendimento embrionário que aumenta quando comparado ao tratamento com BSA (p= 0,0194). The oviduct and its secretion, the ovidutal fluid (OF), promote an adequate environment for the final maturation of the oocyte, sperm training, fertilization, transport and initial development of the embryo. In this context, in order to mimic better conditions of in vivo mechanisms, a culture medium similar to the composition of the oviduct fluid, called synthetic ovidutal fluid (SOF), was formulated based on biochemical analysis of the oviduct of sheep. Specifically, regarding the importance of OF for the final maturation of the oocyte in cattle, only the last four hours of oocyte maturation occur in the oviduct, which therefore pemits a new strategy of oocyte maturation in vitro (MIV) in the bovine species. Therefore, the present study aimed to investigate the impact of SOF culture medium during the last four hours of IVM and its effects on the meiotic progression and embryonic production rate. Therefore, the COCs were recovered from ovaries of slaughtered and matured cows in vitro, in base medium (composed of 199 MCT with Earles salts supplemented with pyruvate, amicacin, BSA, follicle stimulating hormone and luteinizing hormone, and another group in 199 MCT medium with Earles salts supplemented with 10% fetal bovine serum (FBS), pyruvate, both in moist atmosphere at 5% CO2 for 20 hours (4 replicates with 20 COCs/group). In the last four hours of maturation, the medium was completely changed by adding the SOF medium. Matured COCs were fertilized and cultivated in a controlled atmosphere and humidity at 5% CO2 and O2 until the blastocyst stage (7 and 8 days after fertilization). The culture medium was partially replaced on days 3 and 5 (with addition of glucose in the latter). Statistical analysis was performed by transforming the blastocyst yield into arcosene and the means were compared by the T test using JMP (software JMP, SAS Institute Cary, NC). Significant differences were considered when p≤ 0.05. The result obtained showed that treatment with SOF has no effect on the progression of meiosis (p= 0.5944). However, when we analyze the embryonic rates and the incorporation of SOF in BSA medium, the SOF medium is able to modulate the embryonic yield that increases when compared to treatment with BSA (p= 0.0194).

CAPS - Centro de Atenção Psicosocial A produção in vitro de embriões (PIVE) e a inseminação artificial (IA) são duas importantes técnicas utilizadas para melhorar o desempenho reprodutivo, a produção e o ganho genético, por isso precisam de atenção para maximizar seus resultados. A contagem de folículos antrais (CFA) é o número de folículos visualizados por ultrassonografia nos ovários. A literatura mostra que utilizando o exame de ultrassonografia é possível classificar as fêmeas bovinas de acordo com o número de folículos antrais, em três grupos diferentes: baixa, intermediária e alta contagem de folículos antrais. Estudos mostram em diferentes raças uma relação entre a CFA e a produção in vitro de embriões e taxa de concepção. Objetivou-se avaliar em fêmeas bovinas da raça Senepol, a relação da contagem de folículo antral com a produção in vitro de embrião, precocidade e taxa de concepção. No experimento 1 foi avaliada a relação entre CFA e ovócitos viáveis, clivados e total de embriões, e no experimento 2, foram avaliadas a relação entre CFA e precocidade (determinada pela presença de corpo lúteo), e entre CFA e taxa de concepção de novilhas. Por exame de ultrassonografia nos ovários, os animais foram avaliados e classificados em CFA baixa (20 ≤ folículos antrais), CFA intermediária (≥ 25 ≤ 45 folículos antrais) e CFA alta (≥50 folículos antrais). Foi detectada relação entre CFA e ovócitos viáveis (R2=0,96), clivados (R2=0,69). e total de embriões (R2=0,34), porém não houve efeito da CFA na taxa de conversão de ovócitos viáveis em embriões. Novilhas com CFA intermediária e alta apresentaram tendência a serem precoces. Não houve relação entre CFA e taxa de concepção a primeira IA das novilhas. Conclui-se que no grupo avaliado, fêmeas Senepol com alta CFA podem produzir maior quantidade de ovócitos viáveis, clivados e embriões totais, e as novilhas com CFA intermediária e alta tendem a ser mais precoces, porém não há relação com a taxa de concepção das novilhas até 24 meses. In vitro embryo production (IVP) and artificial insemination (AI) are two important techniques used to improve reproductive performance, production and genetic gain, so attention is needed to maximize results. Antral follicle count (ACF) is the number of follicles visualized by ultrasound in the ovaries. The literature shows that the use of the ultrasound exam can be classified as Beef according to the number of antral follicles, in three different groups: low, intermediate and high antral follicle count. Studies show for different reasons a relationship between ACF and in vitro embryo production and conception rate. The objective is to evaluate, in Senepol cattle, a relationship between antral follicle count and in vitro embryo production, precocity and exhibition rates. In experiment 1 was evaluated the relationship between ACF and viable, cleaved and total embryo oocytes, and in experiment 2 was evaluated the relationship between ACF and precocity (determined by the presence of corpus luteum), and between ACF and heifer conversion rate. . By ultrasound examination in the ovaries, the animals were evaluated and classified as low ACF (20 ≤ antral follicles), intermediate ACF (≥ 25 ≤ 45 antral follicles) and high ACF (≥50 antral follicles). The relationship between CFA and viable oocytes (R2 = 0.96), cleaved (R2 = 0.69) was detected. the total number of embryos (R2 = 0.34), but there was no effect of CFA on the conversion rates of viable oocytes into embryos. Heifers with intermediate ACF and high ACF tendency to be precocious. There was no relationship between ACF and conception rate in the first AI of heifers. It was concluded that in the evaluated group, Senepol with high ACF can produce a greater quantity of viable oocytes, cleaved and total embryos, and as heifers with intermediate ACF and high frequency it is earlier, but there is no relationship with heifer indexes up to 24 months. Dissertação (Mestrado)

A transferência de genoma (TG), o qual permite substituir um citoplasma danificado por um integro, pode ser uma alternativa para melhorar a eficiência da criopreservação de ovócitos bovinos. Neste trabalho objetivou-se estabelecer a técnica de TG utilizando a placa metafásica (PM) e corpúsculo polar (CP) de ovócitos bovinos como fontes do material genético. Para isso foram realizados quatro experimentos. No primeiro foi estabelecida a TG utilizando a PM (TG-PM) avaliando a concentração espermática a ser utilizada, a taxa de fecundação, a de polispermia e a de embriões. Na avaliação da concentração espermática, a taxa de fecundação foi maior (P 0,05) entre as estruturas reconstruídas GT-PM (n = 22) e GT-CP (n = 20). No entanto, ambos os grupos apresentaram menos GC (p 0,05). Não foi observado diferença entre os grupos quanto a quantidade e distribuição de MT e quantidade de mtDNA. No quarto experimento foi realizada a TG-PM utilizando ovócitos vitrificados (TG-PMV) como fonte de material genético. Para isso, forma utilizados 3 grupos, TG-PMV, controle vitrificado (VIT) e controle PIVE. A taxa de clivagem do grupo TG-PMV (61,2%) foi semelhante ao grupo controle VIT (52,7%) e inferior (p

Submitted by Wiqlifi Bruno de Freitas Melo (wbruno@ufersa.edu.br) on 2019-03-14T12:36:33Z No. of bitstreams: 1 MariaVOS_DISSERT.pdf: 2874285 bytes, checksum: 2619796d38d3c762a7be202e31df1eb0 (MD5) Made available in DSpace on 2019-03-14T12:36:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MariaVOS_DISSERT.pdf: 2874285 bytes, checksum: 2619796d38d3c762a7be202e31df1eb0 (MD5) Previous issue date: 2018-06-29 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES O uso de antioxidantes naturais em meios de cultivo pode ser uma alternativa para minimizar os efeitos negativos do estresse oxidativo produzido pelas condições in vitro. Nesse sentido, o óleo essencial de Syzygium aromaticum (OESA) possui propriedades terapêuticas, incluindo atividade antioxidante, e poderia ser utilizado durante a maturação in vitro (MIV) de oócitos e incubação de espermatozoides bovinos. Portanto, o objetivo foi avaliar a atividade antioxidante do OESA sobre os gametas bovinos, especificamente sua adição (i) durante a MIV e influência sobre a maturação nuclear, maturação citoplasmática, viabilidade das células do cumulus, níveis de espécies reativas de oxigênio (EROs), potencial de membrana mitocondrial (ΔΨm) e desenvolvimento embrionário partenogenético; e (ii) durante a incubação por 1 e 6 h de espermatozoides epididimários e sua influência sobre a qualidade espermática e níveis de EROs. Para tanto, gametas foram cultivados em meios contendo as seguintes suplementações: OESA0 (sem antioxidante), OESA10 (10 μg/mL de OESA), OESA15 (15 μg/mL de OESA), OESA20 (20 μg/mL de OESA), CIS (100 μM de cisteamina, somente para os oócitos) e Controle (somente para espermatozoides frescos, imediatamente avaliados). Assim, quanto à influência do OESA durante a MIV, nenhuma diferença foi observada para as taxas de maturação. Contudo, OESA15, OESA20 e CIS melhoraram a viabilidade das células do cumulus após a MIV, sendo somente o OESA20 maior que o OESA0 (P < 0,05). Além disso, embora nenhuma diferença tenha sido observada para os níveis de EROs (P > 0,05), oócitos derivados dos grupos OESA15, OESA20 e CIS mostraram ΔΨm menor que os oócitos do grupo OESA0 (P < 0,05). Adicionalmente, embora nenhuma diferença tenha sido observada para as taxas de clivagem de oócitos ativados partenogeneticamente, OESA20 melhorou as taxas de blastocistos, tanto quando calculada pelo número total de oócitos cultivados, quando pelo número total de oócitos clivados. Ainda, essas taxas de blastocistos foram diferentes do OESA0 e similares ao grupo CIS. Quanto à qualidade dos embriões produzidos, os grupos OESA15 e OESA20 mostraram um maior número de blastômeros quando comparados ao OESA0 (P < 0,05). Já quanto à influência do OESA durante a incubação dos espermatozoides, nenhuma diferença foi observada para a morfologia espermática (P > 0,05). Contudo, espermatozoides incubados na presença de OESA preservaram os parâmetros ao longo do tempo, especialmente para integridade estrutural e funcional da membrana plasmática, atividade mitocondrial, velocidade curvilínea e atividade metabólica (P < 0,05). Além disso, espermatozoides derivados do grupo OESA15 mantiveram resultados similares ao grupo controle para velocidade média após 6 h de incubação, integridade funcional da membrana e percentual de membrana danificada e mitocôndria inativa (P < 0,05). Ainda, nenhuma diferença foi observada para os níveis de EROs após a incubação. Em conclusão, OESA a 20 μg/mL e 15 μg/mL adicionado aos meios durante a MIV e a incubação espermática, respectivamente, pode ser uma interessante alternativa de antioxidante para manutenção da qualidade de gametas bovinos in vitro The use of natural antioxidants in culture media may be an alternative to minimize the negative effects of oxidative stress produced by in vitro conditions. In this sense, the essential oil of Syzygium aromaticum (EOSA), has therapeutic properties, including antioxidant activity, and could be used during in vitro maturation (IVM) of bovine oocytes and incubation of bovine spermatozoa. Therefore, the aim was to evaluate the antioxidant activity of EOSA on bovine gametes, specifically its addition (i) during IVM and influence on nuclear maturation, cytoplasmic maturation, viability of cumulus cells, reactive oxygen species (ROS) levels, mitochondrial membrane potential (ΔΨm), and parthenogenetic embryonic development; and (ii) during incubation for 1 and 6 h of epididymal spermatozoa and its influence on sperm quality and ROS levels. Thus, gametes were cultured in media containing the following supplements: EOSA (without antioxidants), EOSA 10 (10 μg/mL of EOSA), EOSA15 (15 μg/mL of EOSA), EOSA20 (20 μg/mL of EOSA) (100 μM of cysteamine, only for oocytes) and Control (only for fresh spermatozoa, immediately evaluated). Thus, regarding the influence of EOSA during IVM, no difference was observed for maturation rates. Nevertheless, EOSA15, EOSA 20 and CYS improved the viability of cumulus cells after IVM, being only the EOSA20 group greater than EOSA0 (P < 0.05). Moreover, although no difference was observed for ROS levels (P > 0.05), oocytes derived from the EOSA15, EOSA20 and CYS groups showed ΔΨm lower than the EOSA0 (P < 0.05) oocytes. Additionally, although no differences was observed for cleavage rates of the parthenogenetically activated oocytes, EOSA20 improved blastocyst rates, both when calculated by the total number of cultured oocytes, and by the total number of cleaved oocytes. Also, these blastocyst rates were different from EOSA0 group and similar to CYS group. As to the quality of the embryos produced, OESA15 and OESA20 groups showed a higher number of blastomeres when compared to OESA0 (P < 0.05). Regarding the influence of EOSA during sperm incubation, no difference was observed for sperm morphology (P > 0.05). Nevertheless, spermatozoa incubated in the presence of EOSA preserved the parameters over time, especially for structural and functional integrity of the plasma membrane, mitochondrial activity, curvilinear velocity and metabolic activity (P < 0.05). Moreover, spermatozoa derived from the EOSA15 group maintained similar results to the control group for medium velocity after 6 h of incubation, functional integrity of the membrane and percentage of damaged membrane and inactive mitochondria (P < 0.05). Also, no difference was observed for ROS levels after incubation. In conclusion, OESA at 20 μg/mL and 15 μg/mL added to media during IVM and sperm incubation, respectively, may be an interesting antioxidant alternative for maintaining the quality of bovine gametes in vitro

No presente estudo foi adicionado o extrato oleoso da Lippia origanoides no meio de cultivo de embriões bovinos produzidos in vitro, com a finalidade de avaliar seu efeito antioxidante. Na etapa de cultivo embrionário, os possíveis zigotos eram cultivados em meios com diferentes concentrações de antioxidantes, sendo um total de 5 tratamentos: T1 - meio de cultivo sem adição de antioxidantes; T2 - meio de cultivo + 50M/mL Cisteamina; T3 - meio de cultivo + 2,5g/mL do extrato oleoso de Lippia origanoides; T4 - meio de cultivo + 5,0g/mL do extrato oleoso de Lippia origanoides; T5 - meio de cultivo + 10,0g/mL de do extrato oleoso de Lippia origanoides. Após o sétimo dia de cultivo (D7), os blastocistos obtidos foram selecionados para as análises. Como resultado das analises realizadas, foram encontrados baixos índices apoptóticos para os embriões cultivados em meios que continham o extrato oleoso de Lippia origanoides. Os tratamentos que induziram à menor taxa de apoptose continham maior proporção de mitocôndrias e menor vacuolização citoplasmática, avaliadas por meio da morfometria celular. Além disso, os resultados da expressão gênica indicaram que os tratamentos suplementados com Lippia origanoides apresentaram diferenças na expressão da enzima antioxidante PRDX-1, uma importante enzima antioxidante capaz de reduzir o peróxido de hidrogênio. Os resultados obtidos nos diferentes estudos dessa tese sugerem que os compostos presentes no extrato oleoso de Lippia origanoides não influenciam diretamente nas taxas de produção total de embriões, porém, podem agir em etapas que incrementam a qualidade das células embrionárias de forma molecular e morfológica. The present work was added to the oily extract of Lippia origanoides in vitro of bovine embryos produced in vitro, with an estimated purpose of its antioxidant effect. In the embryonic culture stage, the possible zygotes were cultivated in media with different concentrations of antioxidants, being a total of 5 treatments: T1 - culture medium without addition of antioxidants; T2 - culture medium + 50M / mL Cysteamine; T3 - culture medium + 2.5g / mL of Lippia origanoides oily extract; T4 - culture medium + 5.0g / mL of Lippia origanoides oily extract; T5 - culture culture + 10.0g / mL oily extract of Lippia origanoides. After the seventh day of culture (D7), the blastocysts were selected for analysis. As a result of the cultivated analyzes, they were found in the apoptotic indexes for the embryos cultured in media containing the oily extract of Lippia origanoides. The treatments that induce lower rate of apoptosis are larger in proportion to mitochondria and less cytoplasmic vacuolization, evaluated by means of cellular morphometry. In addition, gene expression results indicated that supplementation tests with Lippia origanoides were altered in the expression of the antioxidant enzyme PRDX-1, an important antioxidant enzyme capable of reducing the hydrogen content. The results obtained in the different studies were those that were submitted to a non-oil extract test of Lippia origanoides do not influence the rates of total embryo production, but may act to increase the quality of the embryonic cells in a molecular and morphological way.

O objetivo nesta revisão é mostrar as principais técnicas utilizadas na área de melhoramento genético na reprodução animal e como estes podem afetar a eficiência reprodutiva e na produtiva de leite. Com o conhecimento dos mecanismos envolvidos no controle da fisiologia reprodutiva, em níveis endócrino, celular e molecular, foi possível o desenvolvimento das biotecnias reprodutivas, destacando-se a Inseminação Artificial em Tempo Fixo, que tem sido utilizada em larga escala, por permitir a multiplicação de animais superiores geneticamente, aumentar a taxa de natalidade e ser eficaz no ajuste da estação reprodutiva notadamente em pecuária de leite. Outras biotecnias, como a Inseminação Artificial, Transferência de Embriões, Produção in Vitro de Embriões, também são fundamentais no desenvolvimento de pesquisas de ciência básica, medicina e preservação animal. São apresentados também os principais fatores de manejo reprodutivo nutricional e sanitário que afetam a produtividade da pecuária leiteira. Contudo, o incentivo às pesquisas é fundamental para que estas biotecnias sejam aprimoradas e continuem auxiliando o desenvolvimento da pecuária nacional.

RESUMO No presente estudo, utilizou-se a melatonina e a proteína específica do oviduto (pOSP) nos meios de maturação in vitro. Foram avaliadas a expansão do complexo cumulus-ovócito (CCOs), as concentrações intracelulares de espécies reativas de oxigênio (ROS) e o desenvolvimento embrionário nos diferentes grupos (C = controle; T1 = somente com melatonina; T2 = com melatonina e pOSP e T3 somente com pOSP). No tocante à expansão do CCOs, houve diferença (P0,05). Na dosagem de ROS, não houve diferença entre os valores médios obtidos no grupo C (26,4±10,9) e o valor verificado no grupo T1 (23,4±7,8), porém no grupo T2 (21,3±9,7) o valor médio mostrou-se satisfatório em relação ao valor do grupo C. No entanto, o valor médio do grupo T3 (16,6±10,5) foi o que demonstrou resultado mais satisfatório quando comparado aos demais grupos (P0,05) entre os valores obtidos entre o grupo C (48,9 %) e os valores verificados nos grupos T1 (51,5 %), T2 (50 %), T3 (57,7 %), nem destes entre si. Este estudo permitiu concluir que a proteína específica do oviduto recombinante e a melatonina foram eficientes em melhorar a expansão dos CCOs. Além disso, as células tratadas com pOSP mostraram-se com menor quantidade de ROS, podendo a pOSP ser considerada um antioxidante proteico. ABSTRACT The present study used melatonin and recombinant oviduct specific protein (pOSP) in in vitro maturation medium (IVM). The expansion of the cumulus-oocyte complexes (COCs), the intracellular concentrations of reactive oxygen species (ROS) and embryo development of the different groups were evaluated (C = control; T1 = melatonin; T2 = melatonin and pOSP and T3 = pOSP). Regarding the COCs expansion, the groups T1, T2 and T3 showed satisfactory results compared with group C (P0.05). In the ROS dosage, there was no difference between the mean values obtained in group C (26.4 ± 10.9) and group 1 (23.4 ± 7.8). However, in group 2 (21.3 ± 9.7), the average value was found to be satisfactory in relation group C. Despite that, the average value of treatment 3 (16.6 ± 10.5) was the most satisfactory result found compared to the other groups (P

No presente estudo, utilizou-se a melatonina e a proteína específica do oviduto (pOSP) nos meios de maturação in vitro. Foram avaliadas a expansão do complexo cumulus-ovócito (CCOs), as concentrações intracelulares de espécies reativas de oxigênio (ROS) e o desenvolvimento embrionário nos diferentes grupos (C = controle; T1 = somente com melatonina; T2 = com melatonina e pOSP e T3 somente com pOSP). No tocante à expansão do CCOs, houve diferença (P0,05). Na dosagem de ROS, não houve diferença entre os valores médios obtidos no grupo C (26,4±10,9) e o valor verificado no grupo T1 (23,4±7,8), porém no grupo T2 (21,3±9,7) o valor médio mostrou-se satisfatório em relação ao valor do grupo C. No entanto, o valor médio do grupo T3 (16,6±10,5) foi o que demonstrou resultado mais satisfatório quando comparado aos demais grupos (P0,05) entre os valores obtidos entre o grupo C (48,9 %) e os valores verificados nos grupos T1 (51,5 %), T2 (50 %), T3 (57,7 %), nem destes entre si. Este estudo permitiu concluir que a proteína específica do oviduto recombinante e a melatonina foram eficientes em melhorar a expansão dos CCOs. Além disso, as células tratadas com pOSP mostraram-se com menor quantidade de ROS, podendo a pOSP ser considerada um antioxidante proteico. The present study used melatonin and recombinant oviduct specific protein (pOSP) in in vitro maturation medium (IVM). The expansion of the cumulus-oocyte complexes (COCs), the intracellular concentrations of reactive oxygen species (ROS) and embryo development of the different groups were evaluated (C = control; T1 = melatonin; T2 = melatonin and pOSP and T3 = pOSP). Regarding the COCs expansion, the groups T1, T2 and T3 showed satisfactory results compared with group C (P0.05). In the ROS dosage, there was no difference between the mean values obtained in group C (26.4 ± 10.9) and group 1 (23.4 ± 7.8). However, in group 2 (21.3 ± 9.7), the average value was found to be satisfactory in relation group C. Despite that, the average value of treatment 3 (16.6 ± 10.5) was the most satisfactory result found compared to the other groups (P

As células tronco são conhecidas por suas propriedades de auto-renovação, diferenciação em diversas linhagem celulares e capacidades imunomoduladores, além de expressarem um grande número de moléculas de adesão, as proteínas de matriz extracelular, citocinas e receptores para fatores de crescimento, permitindo interações com demais células. Podem ser isoladas de vários tecidos, porém as células-tronco adultas derivadas do estroma do tecido adiposo (MSC-ad) apresentam como vantagens a facilidade de isolamento, alto rendimento e baixa morbidade. Baseado nisso, a hipótese deste trabalho é verificar se o uso de meio condicionado pelas MSC-ad na maturação in vitro tem efeito sobre a as taxas de desenvolvimento de embriões bovinos. Para tanto, foi feito o isolamento e em seguida o cultivo de MSC-ad de origem bovina que se estendeu até a passagem três (P3) em meio de cultivo DMEM, suplementado com bicarbonato de sódio, 10% Soro fetal bovino (SFB), 50μl/mL de gentamicina. Quando os cultivos atingiram a confluência de 70% o meio foi substituído por TCM199 suplementado com 0.2 mM de piruvato, 50 μl/ml de gentamicina e 10% de SFB (meio de MIV). As MSC-ad foram condicionadas com meio TCM199 suplementado pelo período de 0 (Grupo CONTROLE), 24 (grupo COND-24h), 48 (grupo COND-48h) e 72 horas (grupo COND-72h), sendo que ao fim de cada período, o meio sobrenadante foi retirado, filtrado, aliquotado e congelado a -200 C. O meio foi descongelado somente no dia da MIV, e suplementado com 0,5 μl de PMSG (concentração 7UI/Ml) e 0,5 μl de HCG. Ovários de abatedouro foram puncionados para obtenção de complexos cumulus oophurus (CCOs) que foram maturados por 24 horas em microgotas de meios condicionados sob óleo mineral e incubados em estufa a 5% de CO2 com 38,5° C. A avaliação da maturação nuclear foi feita com 22 horas, em seguida realizada a ativação partenogenética somente dos oócitos que exibiam corpúsculo polar com concentração em 50 μM de ionomicina por 5 minutos, inativação com TCM199-Hepes saturado com 0,03g de BSA, seguida de incubação por 3 horas em microgotas de 2mM de 6-DMAP. Após esse período as partenogêneses foram transferidas para migrogotas de meio de cultivo in vitro. As taxas de desenvolvimento foram avaliadas no segundo e sétimo dia após a ativação. Os resultados foram analisados por ANOVA e pós-teste de Fisher adotando nível de significância de 5%. Para os grupos experimentais CONTROLE, COND-24h, COND-48h e COND-72h, obtivemos os seguinte 14 resultados, respectivamente: 83.7, 77.7, 81,4 e 76.1% de maturação nuclear; 87.5, 86,9, 74 e 80.3% de clivagem e 23.8, 27.5, 18 e 19.6% de formação de blastocisto. Não houve diferença estatística entre os grupos experimentais condicionados (p>0.05). Porém, as taxas de blastocisto foram menores quando comparadas ao meio de MIV fresco (42.1%) (p

CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior FAPESPA - Fundação Amazônia de Amparo a Estudos e Pesquisas O objetivo dessa tese foi avaliar o efeito do cortisol, na maturação oocitária e cultivo de embriões bovinos. No ARTIGO 1 foi analisada a distribuição e localização de receptor de glicocorticóide (GR) por imunocitoquímica em oócitos, células do cumulus, embrião de 2-4 células, 8-16 células, mórula e blastocisto, e foi verificado também a presença de RNAm (rtPCR qualitativa) para GR nos referidos estádios. Os resultados apontam que o GR está presente em todas as células analisadas. A fim de verificar a funcionalidade de GR no desenvolvimento embrionário préimplantacional, a tradução do RNAm para GR foi silenciada em zigotos pela técnica de RNAi, e o desenvolvimento embrionário subsequente foi analisado. A diminuição de transcrito e proteínas de GR pela técnica de RNAi prejudicou o desenvolvimento embrionário (p0,05). Em relação à expressão gênica embrionária, apenas as quantificações relativas de RNAm para FASN, GLUT1 e HSP70 estavam aumentadas nos blastocistos tratados com 0,1μg/mL durante a MIV quando comparados aos embriões do grupo Controle (p0,05). No ARTIGO 3 foi analisado o uso do cortisol durante o cultivo in vitro (CIV) de embriões bovinos. Visto que no Capítulo 1 foi identificado GR em todos os estádios de desenvolvimento embrionário e quando a expressão de GR foi silenciada o desenvolvimento embrionário foi prejudicado. Sendo assim, no experimento 3 foram adicionadas diferentes concentrações (0,01; 0,1 e 1 μg/mL) de cortisol na CIV e o desenvolvimento embrionário foi avaliado, mesmos parâmetros do Capítulo 2. Não houve diferença estatística nos embriões tratados com Cortisol em diferentes concentrações quando comparados com o Controle para nenhum dos parâmetros analisados (p>0.05). A concentração de 0,1 μg/mL foi escolhida para avaliar outros parâmetros de qualidade embrionária. Sendo assim, embriões CIV Com ou Sem 0,1 μg/mL de Cortisol, foram analisados quanto à taxa de apoptose e expressão gênica, não sendo observada diferença estatística em nenhuma das análises (p>0,05). Após estes estudos concluímos que oócitos e embriões são responsivos a GC, que a adição de cortisol na MIV melhora a competência oocitária, porém a suplementação com cortisol na CIV não influenciou o desenvolvimento embrionário. The aim of this thesis was to evaluate the effect of cortisol in oocyte maturation and bovine embryo culture. In Chapter 1 we analyzed the distribution and location of glucocorticoid receptor (GR) by immunocytochemistry in oocytes, cumulus cells, embryonic cells 2-4, 8-16 cell, morula and blastocyst, and was also verified the presence of mRNA (qualitative RT-PCR) for GR in the stages. The results showed that the GR is present in all cells analyzed. In order to verify the functionality GR in preimplantation embryo development, translation of mRNA for GR zygotes was silenced in the RNAi technique, and subsequent embryo development was analyzed. The embryonic development decreased (P 0, 05). Regarding embryonic gene expression, only the measurements relative mRNA FASN, GLUT1 and HSP70 were increased in blastocysts treated with 0.1 g/ml during IVM when compared to embryos of the Control group (p 0.05). In Chapter 3, we investigated the use of cortisol during in vitro culture (IVC) of bovine embryos. As in Chapter 1 was identified GR in all embryonic stages and when the GR expression was silenced and embryonic development was impaired. Thus, in the experiment three different concentrations (0.01, 0.1 and 1 mg / mL) of cortisol in IVC and embryonic development was evaluated same parameters of Chapter 2. There was no statistical difference in the embryos treated with cortisol in different concentrations when compared to the control for the parameters analyzed (p> 0.05). The concentration of 0.1 mg/ml was chosen to evaluate other parameters of embryo quality. Thus, IVC embryos with or without 0.1 mg/mL of cortisol, were analyzed for apoptosis rate and gene expression, not being statistically significant difference in any of the analyzes (p> 0.05). After these studies conclude that oocytes and embryos are responsive to GC, and the addition of cortisol in IVM improves oocyte competence, but the supplementation of IVC with cortisol may not have influence on embryo development.

Trata-se da aplicação de biotecnicas de reprodução na espécie Pecari tajacu para melhorar seu potencial para a criação em cativeiro visando sua produção, conservação e multiplicação de recursos genéticos. Para determinar o tempo de maturação in vitro foram utilizados 48 fêmeas, foram selecionados 69 CCOs e divididos em 4 grupos por idade e tempo de MIV, e então submetidos a ativação partenogenética em Ionomicina e 6-DMAP. Para análise da progressão meiótica 165 oócitos foram divididos em 4 grupos conforme a suplementação de hormônios na MIV e tempo de maturação. Na criopreservação foram utilizados espermatozoides epididimários de 9 machos, diluídos em Tris-frutose e ACP-120 e divididos em grupos de refrigeração a 4ºC e congelamento a -196ºC e presença da glutationa (GSH), foram avaliados os parâmetros motilidade, vigor e viabilidade após a diluição a fresco e criopreservação. Para a produção de embriões, 97 oócitos após MIV de 36 horas foram divididos grupos de ativação partenogenética, FIV e ICSI. Através da ativação partenogenética obteve-se taxas de clivagens (47%) para os oócitos de fêmeas com menos de 2 anos submetidos a MIV em 36 horas, em todos os grupos observaram-se clivagens porém não houve diferenças significativas (P>0,05) entre os grupos analisados, observou-se taxa de blastocisto (15,4%) somente no grupo de oócitos ativados após MIV de 44 horas. Na analise da progressão meiótica, em todos os tempos analisados foram encontrados oócitos em MII. Na criopreservação dos espermatozoides observaram-se queda nos parâmetros analisados nos dois diluidores em todos os grupos, a presença da glutationa não interferiu significativamente nos parâmetros analisados. No resfriamento, as taxas de motilidade e viabilidade foram superiores no ACP-120 (> 50%) e no congelamento em tris-frutose (33% e 18%). A produção de embriões in vitro foi bem sucedida na ativação partenogenética (62,9%) e na ICSI (52,6%), na FIV as taxas foram baixas (7%), a produção de blastocisto ocorreu somente nos embriões partenotos (4,5%). Os resultados mostraram a viabilidade de biotecnicas reprodutivas como conservação de gametas, e produção in vitro de embriões na espécie Pecari tajacu. This work considers the application of reproduction biotechniques on species Pecari tajacu designed to improve its potential for upbringing in captivity and aiming its production, conservation and the multiplication of genetical resources. To determine the maturation time in vitro, 48 females were utilized. An amount of 69 CCOs were selected and divided in 4 groups, per age and per time of MIV. They were then submitted to parthenogenetic activation in ionomycin and 6-DMAP. For the meiotic progression analysis, 165 oocytes were divided in 4 groups according to supplementation of hormones in MIV and time of maturation. For the cryopreservation, epididymal sperm of 9 males were utilized, diluted in Tris-fructose and ACP-120 and divided in groups of refrigeration at 4°C and freezing at -196 °C in the presence of glutathione (GSH), where the parameters of motility, vigor and viable sperm were evaluated, after fresh dilution and cryopreservation. For the embryo production, 97 oocytes after MIV of 36 hours were divided in groups of parthenogenetic activation, IVF and ICSI. Through parthenogenetic activation the rates of cleavages were obtained (47%) for the oocytes of females with less than 2 years of age, submitted to MIV in 36 hours. In all groups cleavages were observed, but with no significant difference (P>0,05) among the groups analysed. One blastocyst rate of 15,4% was observed only in the group of oocytes activated after MIV of 44 hours. In the meiotic progression analysis, in all times analyzed oocytes were found in MII. In the cryopreservation of the spermatozoa it was observed a drop of the parameters analyzed in the two extenders in all groups. The presence of glutathione did not interfere significantly in the parameters analyzed. In the freezing, the rates of motility and viable sperm were superior in ACP-120 (> 50%) and in the freezing in tris-fructose, 33% and 18%. The production of embryos in vitro was well succeeded in the parthenogenetic activation (62,9%) and in ICSI (52,6%). In IVF the rates were low (7%). The production of blastocyst occurred only in the partenotes embryos (4,5%). The results of this work showed the feasibility of reproductives biotechniques, such gametes conservation and in vitro production of embryos of the species Pecari tajacu.

CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Na última década a produção in vitro de embriões tornou-se uma técnica de grande importância na reprodução de bovinos. No gado de leite, ela tem sido bastante utilizada com destaque para as raças Gir e Holandesa. Dentre outras características, essas duas raças apresentam diferenças relacionadas à fisiologia reprodutiva, com reflexo no potencial de produção de embriões no sistema in vitro. Sabendo da importância de ambas as raças para o rebanho brasileiro, é primordial entender as bases fisiológicas destas diferenças e buscar ferramentas para avaliação da qualidade e viabilidade de oócitos e embriões. O objetivo desse trabalho foi caracterizar o fenótipo “doadora” com base na produção de embriões e avaliar alguns genes como possíveis marcadores de produção nestas raças. Para isso, inicialmente foram analisados dados de um laboratório comercial de produção in vitro de embriões. Posteriormente, foi realizada a caracterização molecular e avaliação da expressão relativa de genes candidatos, utilizando-se a técnica de PCR em Tempo-Real, em amostras de células da granulosa cultivadas provenientes de animais com diferentes perfis de produção de embriões. Uma maior produção de complexos cumulus-oócito (COC) total e viáveis foi observado em doadoras da raça Gir. Da mesma forma, animais da raça Gir apresentavam maior taxa de conversão e maior produção total de embriões, independente da raça do touro utilizado para fertilização. Entretanto, nas duas raças não houve diferença na produção de COC entre animais com diferentes taxas de conversão COC/embrião. Não houve diferença nas expressão dos genes (BAX, INHA, IGFIR, LHR, STAR) entre animais com alta ou baixa produção de embriões, assim como entre raças. No entanto, o gene PRDX1 estava sobre-expresso em doadoras da raça Holandesa caracterizadas como de alta produção de embriões. Esses resultados confirmam a maior produção de COC em animais da raça Gir, quando comparados aos animais da raça Holandesa, assim como, a maior produção total de embriões no sistema in vitro, mas sugerem que nas duas raças a eficiência na produção de embriões não é determinada pela produção total de COC. A avaliação da expressão gênica de células da granulosa obtidas de cultivos para a produção in vitro de embriões não possibilitou a caracterização de marcadores com potencial para predição da produção de embriões das doadoras. In the last years the in vitro production of embryos became a technique of great importance in the reproduction of cattle. In the dairy cattle, it has been widely used with spotlight for the Gyr and Holstein breeds. Among other features, this two breeds exhibit differences related to reproductive physiology and reflects on the potential of production of embryos in the system in vitro. Knowing the importance of both breed for the Brazilian herd, it is critical to understand the physiological basis of these differences and search tools to evaluate the quality and viability of oocytes and embryos. The aim of this study was to characterize the phenotype "donor" based on embryo production and evaluate some genes as potential markers for production in these breeds. To do this initially, data from in vitro production of embryos from a commercial laboratory were analyzed. Subsequently, the molecular characterization and evaluation of the relative expression of candidate genes was performed in samples of granulosa cells from culture of animals with different profiles of production embryos using the Real-time PCR. A higher production of total and viable oocyte-cumulus complexes (COC) was observed in donor Gyr. Likewise, animals Gyr had a higher conversion rate and higher total production of embryos, independent of breed of sire used for fertilization. However, in the two breeds there was no difference in the production of COC between animals with different conversion rates COC / embryo. There was no differences in the expression of genes (BAX, INHA, IGFIR, LHR, STAR) between animals with high or low production of embryos, as well as between breeds. However, the PRDX1 gene was overexpressed in donor Holstein characterized as high production of embryos. These datas confirm the higher production of COC in Gyr breed animals when compared to Holstein cows, as well as the highest total production of embryos in vitro system, but suggest that the two breeds efficiency in the production of embryos is not determined by the total production of COC. The assessment of gene expression of granulosa cells obtained from cultures for in vitro production of embryos did not allow the characterization of potential markers for predicting embryo production of donors.

Made available in DSpace on 2016-08-29T15:37:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_5660_DISSERTAÇÃO - MARCUS DÓREA.pdf: 959070 bytes, checksum: b826fbc0dc1185e5661f7622a98c7491 (MD5) Previous issue date: 2012-03-30 Objetivou-se com este estudo avaliar a taxa de folículos residuais pós-aspiração de folículos ovarianos de 8 e 12 mm de diâmetro, por meio da avaliação dos fatores endócrinos, analisando a interferência destas estruturas no desenvolvimento normal da dinâmica de crescimento. Foram selecionadas vacas da raça Holandesa (N=13) não lactantes e com dois ciclos estrais normais consecutivos; estas foram tratadas com 500mg de cloprostenol sódico (Sincrocio®) e 3 mg de norgestomet (Crestar®) (D0), 2 mg de benzoato de estradiol (Sincrodiol®) (D1), após a emergência da onda folicular foram distribuídas aleatoriamente em dois tratamentos caracterizados pela ausência ou presença de implantes de norgestomet, cada tratamento dividido em dois grupos: presença do implante e folículo de 8 mm (G1), ausência do implante e folículo de 8 mm (G2), presença do implante e folículo de 12 mm (G3) e ausência do implante e folículo de 12 mm (G4). O monitoramento ultrassonográfico (Esaote Pie Medical®) foi realizado duas vezes ao dia com intervalo de 12 horas. Os folículos ovarianos foram aspirados com 8 e 12mm e avaliados quanto à presença do resíduo ao processo de aspiração, quando residual, eram aspirados novamente. Os dados de dinâmica de crescimento folicular, perfil hormonal do plasma sanguíneo e do fluído folicular foram verificados quanto à distribuição normal, pelo teste de Shapiro-Wilk e comparadas nos diferentes tratamentos pelo teste t de student. Os dados de perfil de esteroidogênico dos folículos aspirados em diferentes diâmetros foram analisados pelo SAS GLM procedure para o principal efeito de tratamento e as comparações foram feitas pelo teste F. O nível de significância adotado foi de 5%. O tratamento com progestágeno não afetou o crescimento folicular. A taxa de folículo residual foi de 74.6%. O tratamento com progestágeno não afetou (P>0.05) o percentual de folículos residuais, independente do diâmetro do folículo, no entanto, o efeito do diâmetro folicular aproximou a significância estatística (P=0.07). Os folículos residuais cresceram cerca de 5 mm ao dia. Dos folículos residuais aproximadamente 65% se tornaram folículos ativos, 12% folículos luteinizados e 23% folículos inativos. Conclui-se que a presença de folículos residuais ocorre na maioria dos folículos aspirados com maior frequência em 12 mm e grande parte ativos e com elevada concentração de estradiol.

O objetivo deste estudo foi avaliar a maturação e o desenvolvimento embrionário após a fecundação in vitro de oócitos bovinos que tiveram a maturação bloqueada com Butirolactona I e Roscovitina em meio de pré-maturação suplementado com soro fetal bovino (SFB). Oócitos foram divididos em 4 grupos: Controle 0 hora, Controle (maturação por 24 horas), Butirolactona I (bloqueio da maturação com 150µM de Butirolactona I por 24 horas, seguido de 24 horas de maturação) e Roscovitina (bloqueio da maturação com 50µM de Roscovitina por 24 horas, seguido de 24 horas de maturação). Para avaliar a maturação nuclear, os oócitos foram fixados e corados em aceto orceína. Parte dos oócitos dos grupos Controle 24 horas, Roscovitina e Butirolactona I após o período de maturação, foi fecundado in vitro. O desenvolvimento embrionário foi avaliado pelos índices de clivagem (D3) e formação de blastocistos (D7). Oócitos do grupo Butirolactona I apresentaram índices de Vesícula Germinativa após o bloqueio e de Metáfase 2 após a maturação semelhantes ao dos grupos Controle 0 hora e Controle, respectivamente. Por outro lado, a Roscovitina apresentou menores índices de Vesícula Germinativa e Metáfase 2. Os grupos Controle e Butirolactona I apresentaram maiores índices de clivagens. O grupo Controle apresentou maior produção de blastocistos que o Roscovitina e não diferiu do grupo Butirolactona I. Conclui-se que a Butiroloactona I pode ser utilizada no sistema de pré-maturação em meio contendo SFB, pois apresentou resultados semelhantes ao do grupo Controle o mesmo não ocorrendo com a Roscovitina, que apresentou menores índices de maturação oocitária e de desenvolvimento embrionário. This study evaluated the bovine oocyte maturation and embryo development after in vitro fertilization. The maturation of the oocytes was blocked using Butyrolactone I and Roscovitine using pre-maturation medium supplemented with fetal calf serum (FCS). The ocytes were divided in four groups: Control 0 hour, Control (24 hours of maturation), Roscovitine (maturation blockage with 50mM Roscovitine during 24 hours followed by 24 hours of maturation), and Butyrolactone I (maturation blockage with 150mM Butyrolactone I during 24 hours followed by 24 hours of maturation). The oocytes were fixed and stained with aceto orcein to evaluate the nuclear maturation. After the maturation period, the remaining oocytes of the Control group, Roscovitine, and Butyrolactone I were fertilized in vitro. Embryo development was assessed by the cleavage rate (D3) and blastocysts formation (D7). The Butyrolactone I group had similar rates of germinal vesical stage oocytes during blockage, and Metaphase 2 after maturation, comparing to Control group at 0 hour and Control group, respectively. On the other hand, the Roscovitine group had lower rates of vesical stage oocytes during blockage, and Metaphase 2 after maturation comparing to Control groups. After in vitro fertilization, higher rates of cleavage were observed in Control and Butyrolactone I groups. For the blastocyst formation rate, the Control group showed better results than Roscovitine group. In summary, Butyrolactone I group had similar results to the Control group, and for this reason, is suitable for pre-maturation of bovine oocytes using FCS. In contrast, Roscovitine group had lower oocyte maturation and embryo development.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-07-15Bitstream added on 2014-06-13T18:46:17Z : No. of bitstreams: 1 lucio_ac_dr_jabo.pdf: 8403632 bytes, checksum: 32d25390bda4a085595ac038827009d8 (MD5) Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) O objetivo do presente estudo foi verificar se existem diferenças no desenvolvimento de embriões produzidos com sêmen sexado por centrifugação em gradiente de densidade e por citometria de fluxo e também quantificar a expressão relativa de genes importantes para o desenvolvimento embrionário. Após a sexagem os espermatozóides foram submetidos a produção de embriões in vitro. Foram avaliadas as taxas de clivagem e blastocisto para verificar a influência do método de sexagem no desenvolvimento in vitro de embriões. Os blastocistos foram coletados nos dias 7 e 8 de desenvolvimento, e submetidos a extração de RNA para a avaliação da expressão de genes relacionados a qualidade do embrião: AKR1B1, COX2, IGF2R, PLAC8 (desenvolvimento de placenta e reconhecimento da gestação), MnSOD e GPX1 (estresse oxidativo), SCL2A1 (metabolismo) e TP53 (apoptose). Os resultados não mostraram diferenças no desenvolvimento in vitro de embriões (taxas de clivagem e blastocisto) produzidos com sêmen sexado. Em relação ao padrão de expressão, a citometria de fluxo reduz os níveis de mRNA dos genes AKR1B1(P=0,023), COX2 (P=0,016). A centrifugação em gradiente de densidade aumentou os níveis de transcritos dos genes PLAC8 (P=0,007), MnSOD (P=0,013) e GLUT1 (P=0,028). Ambas as técnicas reduzem os níveis de expressão do gene TP53 (P

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-06-27Bitstream added on 2014-06-13T18:58:52Z : No. of bitstreams: 1 ferreira_rm_me_jabo.pdf: 499475 bytes, checksum: adcc6fc6d838f270b207706f21c18463 (MD5) Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) Os objetivos do estudo foram: avaliar o efeito antioxidante do Trolox® 1) no meio de manutenção de embriões sobre as taxas de concepção (25 e 46 dias) e a perda gestacional de receptoras bovinas Holandesas repetidoras de serviço, em dois períodos (abril-junho/setembro-novembro) e 2) no meio de transporte de oócitos bovinos aspirados de ovários de abatedouro sobre as taxas de clivagem, blastocisto e eclosão in vitro. No Experimento 1, doadoras de embriões foram superovuladas e submetidas à lavagem uterina. Os embriões colhidos foram divididos em dois grupos, deixados em meio com ou sem antioxidante, por 2 a 6h. No Experimento 2, folículos foram aspirados e os complexos cumulus-oócito grau I e II foram divididos em quatro grupos: Controle 8h, Antioxidante 8h, Controle 20h e Antioxidante 20h. Então, foram mantidos em uma transportadora de oócitos (37ºC) por 8 ou 20 horas. Após a maturação, fecundação e cultivo in vitro, as taxas de clivagem (D3), blastocisto (D6, 7 e 9) e eclosão (D11) foram avaliadas. Alíquotas de 200 μL do meio de transporte foram retiradas em cada momento experimental (0, 8 e 20h) para realização dos testes de capacidade antioxidante total (CAT). No Experimento 1, não houve efeito de tratamento sobre as variáveis avaliadas. Foi verificado efeito de período experimental (P=0,001), categoria da doadora (P

In vitro embryo production (IVP) represents a way to increase gamete use from animals with high zootechnical value. In spite of the advances obtained in IVP over the last few years, production of transferable embryos is still low. The aim of this review is to discuss ways to produce in vitro embryos, as well as oocytes formation and maturation processes that can be related to the effectiveness of obtained results. Some studies show the influence of follicular growth factors, gonadotropins, steroids and other hormones on the follicular development and the quality of the cumulus oocyte complex (COC). The follicular phase of slow growth is critical for the development of the oocyte capacity to reach the final competence and diameter. Information about endocrine influences, or likewise, the dependence of growth of small antral follicles when a loss in the oocyte or follicle functionality occurs is scarce in the literature. A variable number of different techniques and protocols for treatment of oocytes donors are described with the aim of improve the results, the COCs recovering rate and the developmental competence in vitro of collected oocytes. From the considerations presented in this review, it is possible to verify the importance of better understanding the factors involved in the IVP process, with the aim of allow new alternatives to increase the results obtained in programs of animal assisted reproduction. La producción in vitro de embriones (PIV) representa una manera de aumentar el uso de gametos de animales con alto valor zootécnico. A pesar de los avances obtenidos en PIV en los últimos años, la producción de embriones tranferibles sigue siendo baja. El objetivo de esta revisión es discutir maneras de producir embriones in vitro, así como los procesos de formación y de maduración de los oocitos que se pueden relacionar con la eficacia de los resultados obtenidos. Algunos estudios demuestran la influencia de los factores foliculares del crecimiento, gonadotrofinas, esteroides y otras hormonas en el desarrollo folicular y la calidad del complejo del cumulus oocito (CCO). La fase folicular del crecimiento lento es crítica para el desarrollo de la capacidad del oocito de alcanzar la capacidad y el diámetro final. Información sobre influencias endocrinas, o además, la dependencia del crecimiento de pequeños folículos antrales cuando ocurre una pérdida en la funcionalidad del oocito o del folículo, es escasa en la literatura. Un número variable de diversas técnicas y los protocolos para el tratamiento de oocitos de las donantes son descritos en esta revisión, con lo objetivo de mejorar los resultados, el índice de la recuperacion de CCOs y la capacidad de desarrollo in vitro de oocitos recogidos. De las consideraciones presentadas en esta revisión, es posible verificar la importancia de entender los factores implicados en el proceso de PIV, para permitir el desarrollo de nuevas alternativas que mejoren los resultados obtenidos en programas de la reproducción animal asistida. A produção in vitro (PIV) de embriões representa uma maneira de incrementar o uso de gametas de animais de alto valor zootécnico. Apesar dos avanços obtidos na PIV nos últimos anos, a produção de embriões transferíveis ainda é baixa. O objetivo desta revisão é discutir maneiras de produzir embriões in vitro, assim como o processo de formação e maturação de oócitos, que pode estar relacionado a eficácia dos resultados obtidos. Aguns estudos demonstram a influência de fatores de crescimento, gonadotrofinas, esteróides e outros hormônios no desenvolvimento folicular e na qualidade do complexo cumulus oócito (CCO). A fase folicular de crescimento lento é critica para o desenvolvimento da capacidade do oócito de atingir a competência e o diâmetro finais. Informação sobre as influências endócrinas, ou seja, da dependência do crescimento de pequenos folículos antrais quando ocorre perda da funcionalidade do oócito ou folículo são escassas na literatura. Um número variável de diferentes técnicas e protocolos para o tratamento de doadoras de ovóctios são descritos com o objetivo de melhorar os resultados, a taxa de recuperação de CCOs e o desenvolvimento da competência in vitro dos oócitos coletados. Das considerações apresentadas nesta revisão é possível verificar a importância do conhecimento dos fatores envolvidos no processo de PIV, com o objetivo de possibilitar que novas alternativas incrementem os resultados obtidos em programas de reprodução animal assistida.

Avaliou-se a viabilidade de embriões bovinos cultivados in vitro, a fresco ou reaquecidos após vitrificação, depois de transportados por 6 ou 12 horas. Oócitos obtidos de folículos de ovários coletados em matadouro foram maturados, fecundados e cultivados in vitro. Após sete dias de cultivo, blastocistos com grau de qualidade I e II (segundo o manual da IETS-1998) foram selecionados, envasados em OPS (open pulled straws) e vitrificados em nitrogênio líquido. O reaquecimento foi realizado a 39ºC pela passagem em soluções de HM com concentrações decrescentes de sacarose (0,25M - 0,15M) por cinco minutos em cada solução. Foram avaliados três tratamentos - V0: embriões vitrificados, reaquecidos e cultivados in vitro (n=25); V6: embriões vitrificados, transportados por 6 horas (simulação em palhetas), reaquecidos e cultivados in vitro (n=29); e V12: embriões vitrificados, transportados por 12 horas, reaquecidos e cultivados in vitro - comparados, cada um, a um tratamento controle, com embriões a fresco-C0: embriões a fresco cultivados in vitro (n=26); C6: embriões a fresco cultivados in vitro após 6 horas de transporte (n=30); e C12: embriões a fresco cultivados in vitro após 12 horas de transporte (n=30). Os embriões foram co-cultivados com células da granulosa em microgotas de TCM 199 acrescido de SFB. Foram avaliadas as taxas de re-expansão e eclosão após 48 horas de cultivo. A análise foi realizada pelo teste do qui-quadrado. As taxas de re-expansão entre os grupos V0, V6 e V12 não diferiram, assim como as taxas de eclosão entre os embriões vitrificados e os controles. As taxas de eclosão, no entanto, diferiram entre os embriões submetidos à vitrificação e os controles. Embriões bovinos produzidos in vitro podem ser transportados a fresco ou vitrificados por períodos de até 12 horas, pois possibilitam taxas de eclosão satisfatórias. The aim of this study was to evaluate the viability of in vitro produced bovine embryos, fresh or warmed, after submitted to different periods of transportation (6h-12h). Oocytes obtained from ovaries collected from slaughterhouse were matured, fertilized and cultured in vitro. After seven days, grades I and II blastocysts (according to IETS manual) were selected and vitrified after exposition to PBS solution with 5% fetal calf serum (HM), added with 10% ethylene glycol (EG) and 10% of dymetil sulfoxide (DMSO), for one minute, followed by HM solution with 20% EG and 20% DMSO, for 20 seconds. Embryos were loaded into open pulled straws (OPS) and plunged into liquid nitrogen. Warming was performed at 39ºC by embryo exposure to decreasing concentration of sucrose (0.25 and 0.15M), for five minutes in each step. The warmed embryos were distributed in three groups: V0: in vitro cultured after warmed; V6: embryos loaded into straws and kept for 6 hours at 35ºC, before in vitro culture; and V12: embryos loaded into straws and kept for 12 hours at 35ºC, before in vitro culture. Each group was evaluated by control groups of fresh embryos (C0, C6 and C12, respectively). The embryos were co-cultured with cumulus cells in TCM-199 micro droplets added with SFB. Re-expansion and hatching rates after 48 hours in culture were evaluated and results were compared by the Chi-square test. Re-expanded rates among groups V0, V6 and V12 as well as hatching rates among vitrified groups and among control groups did not differ. However, hatching rates were different between vitrified groups and their respective controls. The satisfactory rates of hatching suggest that it is possible to transport warmed and fresh in vitro produced embryos for periods up to 12 hours.

O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito de benzoato de estradiol (BE) e progesterona/norgestomet sobre a dinâmica folicular de novilhas aspiradas a cada sete dias, sincronizando a emergência da onda folicular para aumentar o número de folículos e qualidade dos ovócitos. Em três experimentos, novilhas meio sangue Simental x Nelore foram divididas aleatoriamente em três tratamentos, com todos os animais participando de todos os tratamentos. Nos experimentos 1 e 2, as novilhas foram sincronizadas com implante de progesterona/progestágeno por 7 d seguido da administração im de 150 µg de d-Cloprostenol e aspiração de todos os folículos maiores que 3 mm de diâmetro. No Experimento 1 (n=12), os folículos das novilhas do tratamento 2X foram aspirados duas vezes por semana, com intervalo de 3 e 4 d, e os das novilhas do tratamento 1X e 1X-BE uma vez por semana. As novilhas do tratamento 1X-BE receberam 2 mg de BE im após a aspiração. No Experimento 2 (n = 12), as novilhas do tratamento NBE não receberam BE, e as dos tratamentos 2BE e 5BE receberam 2 mg e 5 mg após a aspiração. No Experimento 3 (n = 15), as novilhas foram sincronizadas com 2 mg de BE e implante intravaginal de progesterona (DIB) por sete dias, seguido de administração de PGF2_. No dia quatro do ciclo estral subseqüente, as novilhas receberam DIB e tiveram todos os folículos maiores que 3 mm de diâmetro aspirados, seguido da administração de PGF2_ no dia sete. As novilhas do tratamento 0h-BE (n= 4), -12h-BE (n = 6) e -24h-BE (n = 5) receberam 2 mg de BE imediatamente após a aspiração, doze e vinte e quatro horas antes, respectivamente. O sêmen, meios utilizados e as condições de cultivo foram iguais para todos os tratamentos. O número de folículos maior que 3 mm e o tamanho do maior folículo foram avaliados por ultra-sonografia no momento da aspiração folicular. Todos os ovócitos aspirados foram maturados e fecundados in vitro (D0), com a taxa de clivagem e a taxa de blastocisto avaliadas no D2 e D7, respectivamente. Durante uma semana foi realizada, diariamente, a mensuração do tamanho do maior folículo, por ultra-sonografia, e coletado sangue para a quantificação da concentração de FSH. Embora o uso de 2 mg de BE associado a progestágeno/progesterona tenha alterado o padrão de crescimento folicular e a concentração de FSH, não foi capaz de sincronizar eficientemente a emergência da onda e o desvio folicular, além de não aumentar o número e a qualidade dos ovócitosrecuperados. Este estudo falhou em mostrar o efeito positivo da aspiração folicular logo após a emergência da onda folicular, quando o efeito da dominância seria menos evidente, sobre a produção in vitro de embriões bovinos. Além disso, o uso de BE associado a um dispositivo de progesterona, 12 h ou 24 h antes da aspiração folicular, prejudicou a produção de embriões in vitro, em um programa de aspiração com intervalo de sete dias entre sessões. The purpose of this study was to evaluate the effect of estradiol benzoate (EB) and progesterone/norgestomet on follicular dynamics of heifers aspirated every 7 d through synchronization of the follicular wave emergence in order to increase the number of follicles and quality of the recovered oocytes. Three experiments were designed in which crossbred Simmental x Nelore heifers were randomly divided into three groups, with all animals participating in all groups. In experiments 1 and 2, heifers were synchronized using a progestin implant for 7 d followed by a 150 µg im injection of d-Cloprostenol and aspiration of all ovarian follicles greater than 3 mm in diameter. In experiment 1 (n = 12), follicles from group 2X were aspirated twice a week with 4- and 3-day interval, and follicles from 1X and 1X-EB heifers were aspirated once a week. Heifers from group 1X-EB also received an im injection of 2 mg of EB immediately after OPU. In experiment 2 (n= 12), all heifers were aspirated once a week. Heifers from 0EB group did not receive EB, and from 2EB and 5EB received 2 mg and 5 mg of EB immediately after OPU. In experiment 3 (n = 15), heifers were synchronized with 2 mg EB and progesterone intravaginal implant (DIB) for seven d followed by an im PGF2_ injection. On day 4 of the subsequent estrous cycle, heifers received a DIB and had all ovarian follicles larger than 3 mm in diameter aspirated, followed by a PGF2_ injection on day seven. Heifers in groups 0h-EB (n = 4), -12h-EB (n = 6) and -24h-EB (n = 5) received 2 mg of EB immediately after OPU and twelve and twenty four h before, respectively. The semen, media used and culture conditions were equal for all groups. Ultrasound evaluations of number of follicles greater than 3 mm in diameter and size of the largest follicle at the time of OPU were performed. All recovered oocytes were in vitro matured and fertilized (D0). Cleavage rate on D2 and blastocyst production on D7 was evaluated. During a 7-day period, daily measurement of the size of the greatest follicle was performed by ultrasonography, and daily blood collection was done for evaluation of serum FSH concentrations. Although the use of EB in association with a norgestomet/progesterone implant seven d prior to OPU have altered follicular wave profile and FSH concentration, it was not able to efficiently synchronize the emergence of follicular wave and follicular deviation. Moreover, it was not enough to improve number and quality of the recovered oocytes. This study failed to demonstrate a positive effect of OPU earlier after wave emergence, when the effect of dominance should be less pronounced, on IVP in bovine. Moreover, the use of EB in association with a progesterone implant 12 and 24 h prior to OPU compromised the in vitro embryo production in a program of OPU with a 7 d interval between sessions.