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Fibrinolytic enzymes have received attention regarding their medicinal potential for thrombolytic diseases, a leading cause of morbidity and mortality worldwide. Various natural enzymes purified from animal, plant and microbial sources have been extensively studied. The aim of this work was to produce fibrinolytic protease by solid state fermentation using agro industrial substrates. Rhizopus arrhizus var. arrhizus UCP 1295 and Mucor subtillissimus UCP 1262 filamentous fungi species isolated from soil of Caatinga-PE, Brasil, were used as producer microorganisms. Wheat bran was shown to be the best substrate for the production of the enzyme and by using a 23 full factorial design the main effects and interactions of the quantity of the substrate wheat bran, moisture and temperature on the fibrinolytic enzyme production and protease were evaluated. The best results for fibrinolytic and protease activities, 144.58 U/mL and 48.33 U/mL, respectively, were obtained with Mucor subtillissimus UCP 1262 using as culture medium 3 g wheat bran, 50% moisture at a temperature of 25˚C for 72 hours. The optimum temperature for the produced enzyme was 45˚C and most of its original activity was retained after being subjected to 80˚C for 120 min. The protease activity was enhanced by K+, Ca+ and Mn+; but with Cu+ there was an inhibition. The specificity to chromogenic substrate and the inhibition by PMSF indicates that it is a chymotrypsin-like serine protease. Presented results suggest that this enzyme produced by solid-state fermentation is an interesting alternative as a candidate for thrombolytic therapy.

XI Reunião Regional Nordeste da SBBq | 4th International Symposium in Biochemistry of Macromolecules and Biotechnology, Fibrinolytic enzymes have the ability to degrade fibrin clots formed for avoiding intravascular thrombosis. In the pharmaceutical industry there is a search for new fibrinolytic agent that reduces the production cost and increasing productivity. The use of microorganism for enzyme production, such as the genus Streptomyces has been reported. Streptomyces is a Gram-positive bacteria, responsible for producing many bioactive compounds and extracellular enzymes of pharmaceutical interest. This study aimed to evaluated the production of fibrinolytic protease by Streptomyces sp DPUA 1573. Microbial cells were cultivated in the ISP2 for 48 hours, after this period the strains were inoculated in MS2 (soybean medium) that according with factorial design 24 (concentrations of soybean 0.5; 1.0 and 1.5%, glucose 0; 0.5 and 1.0% and different speeds 150 rpm; 200 rpm and 250 rpm and temperature 28C; 30C and 32C). The factorial design was analyzed by variance analysis (anova) and the glucose concentration showed a positive and significative effect. The results showed that the variable interaction had significant effect. that the best condition was composed 1.5% soybean, 1% glucose, 28 ºC and 150 speed in 48 hours, with production fibrinolytic 1391.66 U/mL. These values were higher than those reported in the literature. However these results show the biggest potencial in production fibrinolytic enzyme by Streptomyces., info:eu-repo/semantics/publishedVersion

Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2022-11-29T15:53:24Z No. of bitstreams: 1 Munique Cristiane Tavares Santos Silva.pdf: 2650044 bytes, checksum: c4a9b3a616885240306af5750a6bc4e1 (MD5) Made available in DSpace on 2022-11-29T15:53:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Munique Cristiane Tavares Santos Silva.pdf: 2650044 bytes, checksum: c4a9b3a616885240306af5750a6bc4e1 (MD5) Previous issue date: 2021-03-05 Proteases are enzymes that have been used extensively in several industry segments. Despite their high interest and numerous advantages, their application still has some limitations. The immobilization process has become an alternative since it increases enzyme stability. The use of magnetic supports has been widely explored, due to its versatility in the biotechnology sector for the purification of biomolecules, and its coating with organic supports such as chitosan, facilitates the process, preventing the oxidation of magnetic nanoparticles (MNP's), giving ideal properties for immobilization. The present work aimed to select, immobilize and characterize collagenolytic proteases obtained from Aspergillus sclerotiorum URM5792 in MNP’s coated with chitosan. For production, a complete factorial planning was carried out 22; with the best production condition (7g of wheat bran and 60% humidity, submitted to 30°C for 72h of fermentation, with proteolytic activity of 56,27 U/mL and e collagenolytic of 303,00 U/mL). The immobilization process was carried out using complete factorial planning 23 aiming to evaluate the influence of independent variables: glutaraldehyde concentration, activation time and immobilization time under the enzyme immobilization yield. In the assay composed of 4% glutaraldehyde concentration, 2.5h of activation and 1.5h of immobilization yields of 86.25% for protein activity and 83.83% for collagenolytic activity were obtained. The immobilized enzyme showed more than 95% of the initial activity after 28 days of storage and retained more than 60% of the residual activity in the twelfth cycle of reuse. The influence of pH and temperature on enzyme activity in free and immobilized form were also analyzed, both had an optimal pH in the range of 9.0, as well as an optimal temperature of 30 ° C and 40 ° C, respectively. The pH and temperature stability of the free enzyme was maintained with more than 80% and 60% of residual activity within 24 hours and 180 minutes, respectively. And the stability of the immobilized enzyme was maintained with 60% and 70% of residual activity in the same times. The solid-state fermentation was effective with high enzymatic production and the immobilization of protease collagenolytic in magnetic nanoparticles coated with chitosan and activated in glutaraldehyde, proved to be efficient methods in the yield, storage and reuse of the enzyme. The immobilized enzyme showed greater affinity to the substrate in relation to the free enzyme, it was inhibited by the Cu2+ ion, SDS and PMSF indicating the presence of active serine protease sites. These results indicate that Aspergillus sclerotiorum URM 5792 is a potential source for production of collagenolytic protease with possible biotechnological applications in various sectors of the industry, in the production of detergents, in the textile and pharmaceutical industry, in the treatment and regeneration of tissues in necrosis. As proteases são enzimas quem têm sido extensivamente utilizadas em diversos segmentos da indústria. Apesar de apresentar elevado interesse e inúmeras vantagens, sua aplicação expõe ainda algumas limitações. O processo de imobilização tem se tornado uma alternativa, visto que pode aumentar a estabilidade enzimática e promover a reutilização por vários ciclos. A utilização de suportes magnéticos tem sido amplamente explorada, devido a sua versatilidade no setor da biotecnologia de purificação de biomoléculas, e seu revestimento com suportes orgânicos como a quitosana, facilitam o processo, impedindo a oxidação das nanopartículas magnéticas (NPM’s), conferindo propriedades ideais para a imobilização. O presente trabalho teve como objetivo selecionar, imobilizar e caracterizar proteases colagenolíticas obtidas de Aspergillus scletotiorum URM5792 em NPM’s revestidas com quitosana. Para produção foi realizado um planejamento fatorial completo 22; tendo como melhor condição de produção (7g de farelo de trigo e 60% de umidade, submetidas a 30°C por 72h de fermentação, com atividade proteolítica de 56,27 U/mL e colagenolítica de 303,00 U/mL). O processo de imobilização foi realizado utilizando planejamento fatorial completo 23 visando avaliar a influência das variáveis independentes: concentração de glutaraldeído, tempo de ativação e tempo de imobilização sob o rendimento de imobilização enzimática. No ensaio composto por 4% de concentração de glutaraldeído, 2,5h de ativação e 1,5h de imobilização foram obtidos rendimentos de 86,25% para atividade proteásica e 83,83% para atividade colagenolítica. A enzima imobilizada apresentou mais de 95% da atividade inicial após 28 dias de armazenamento e reteve mais de 60% da atividade residual no décimo segundo ciclo de reutilização. Também foram analisadas a influência do pH e temperatura sob a atividade enzimática na forma livre e imobilizada, ambas apresentaram pH ótimo na faixa de 9,0, assim como, temperatura ótima de 30°C e 40°C, respectivamente. A estabilidade ao pH e à temperatura da enzima livre se manteve com mais de 80% e 60% de atividade residual nos tempos de 24h e 180min, respectivamente. E a estabilidade da enzima imobilizada se manteve com 60% e 70% de atividade residual nos mesmos tempos. A fermentação em estado sólido foi eficaz com alta produção enzimática e a imobilização da protease colagenolítica em nanopartículas magnéticas revestidas com quitosana e ativadas em glutaraldeído, mostraram ser métodos eficientes no rendimento, armazenamento e reuso da enzima. A enzima imobilizada apresentou maior afinidade ao substrato em relação à enzima livre, foi inibida pelo íon Cu2+, SDS e PMSF indicando a presença de uma serino-protease. Esses resultados indicam que Aspergillus sclerotiorum URM 5792 é uma fonte potencial para a produção de protease colagenolítica com possíveis aplicações biotecnológicas em diversos setores da indústria, na produção de detergentes, no setor têxtil e na indústria farmacêutica, no tratamento e regeneração de tecidos em necrose. Palavras-chave: Aspergillus

As proteases são enzimas com a capacidade de hidrolisar proteínas em peptídeos menores ou aminoácidos livres, sendo essenciais para animais, plantas e micro-organismos devido à sua atuação na regulação metabólica. As proteases são utilizadas com diversas finalidades, no processo industrial da fabricação de detergentes, na indústria farmacêutica e de alimentos, além de ser utilizada na recuperação e aproveitamento de resíduos e subprodutos. Em virtude da grande importância das proteases este trabalho teve como objetivo comparar a produção de proteases produzidas por Mucor subtilissimus UCP 1262 em fermentação em estado sólido (FES) e submersa (FS), bem como extrair em Sistema de duas fases aquosas (SDFA) PEG/Fosfato, as colagenases oriundas de ambas as fermentações. O meio de produção da FES e FS no qual o micro-organismo foi cultivado era constituído principalmente de farelo de soja e farinha de soja. As determinações enzimáticas e dosagem proteica foram realizadas após 72h de fermentação. Para montagem do SDFA foram realizados dois planejamentos fatoriais 23, o primeiro planejamento foi realizado com amostras da FES e o segundo com amostras da FS. Neste sistema foi analisada a influência de três variáveis no processo de extração: massa molar do PEG (200, 550 e 1000 g/mol), concentração do PEG (17,5; 20 e 22,5%) e concentração do sal fosfato de sódio (15; 17,5 e 20%). A maior produção de proteases (362,66 U/ml) ocorreu na FES, enquanto que na FS obteve-se apenas 26,33 U/ml. Dentre as atividades proteásicas específicas: colagenolítica, fibrinolítica e queratinolítica, os melhores resultados foram obtidos para a atividade colagenolítica, sendo esta de: 179,81 U/ml, em FES. A colagenase presente no extrato bruto obtida nos processos fermentativos foram particionadas para fase rica em PEG do SDFA. O maior valor para a variável resposta Fator de purificação (FP=3,49) foi obtido no sistema que utilizou o extrato obtido por FES. Com base nas condições estudadas, os dois sistemas mostraram-se viáveis para a extração de colagenase, pois além de ser um processo que pode ser utilizado em larga escala é constituído por componentes de baixo custo e as condições utilizadas no SDFA favoreceram a extração desta enzima. Todavia, a extração da colagenase oriunda da FES foi mais promissora em virtude da maior concentração da enzima de interesse encontrada nesse tipo de fermentação. Proteases are enzymes with the ability to hydrolyze proteins into smaller peptides and free amino acids. They are vital for animals, plants and micro-organisms due to their role in metabolic regulation. Proteases have been used in various purposes, in the industrial process of detergents, pharmaceutical and food industry, as well as being used in the recovery and utilization of waste and by-products. Due to their economic feasibility and great medical and farmaceutical importance this study aimed to compare the production of proteases produced by Mucor subtilissimus UCP 1262 in solid state fermentation (SSF) and submerged fermentation (SF) as well as extract collagenolytic proteases using Aqueous two-phase system (ATPS) -PEG/Phosphate from both fermentations. The medium composition for the fungal fermentation in SSF and SF was based in soybean flour. Enzymatic determinations and protein levels were performed after 72 hours of fermentation. To mount the ATPS were two 23 factorial design, the first planning was carried out with samples of SSF and the second with samples of SF. In this system was analyzed the influence of three variables in the extraction process: PEG molar mass (200, 550 and 1000), the PEG concentration (17,5; 22,5 and 20%) and sodium phosphate salt concentration (15; 17,5 and 20%). The higher proteolytic activity (362,66 U/ml) was produced using SSF, while in the FS was obtained 26,33 U/ml. Among the specific proteolytic activities: collagenolytic, fibrinolytic and keratinolytic, the best results were obtained for the collagenolytic activity, this being: 179,81 U / ml in the SSF. The Collagenase present in the crude extract obtained in the fermentative processes partitioned preferencially to the PEG-rich phase. The highest value for the variable response Purification Factor (PF = 3,49) was obtained in the system that used SSF crude extract. According with the showed results, both extraction systems seemed to be feasible for collagenase extraction, as well as being a process that can be used in large scale, constituted by low cost components and conditions used in this ATPS favored the enzyme extraction. Furthermore, the collagenase extraction from the SSF was more promising because of the higher interest enzyme concentration found in this type of fermentation.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-06-13T15:36:13Z No. of bitstreams: 1 Marcia Nieves Carneiro da Cunha.pdf: 1895206 bytes, checksum: 69a6b07c6d8f6d7284d8b6a3598e376d (MD5) Made available in DSpace on 2016-06-13T15:36:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marcia Nieves Carneiro da Cunha.pdf: 1895206 bytes, checksum: 69a6b07c6d8f6d7284d8b6a3598e376d (MD5) Previous issue date: 2014-03-30 Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES Clavulanic acid is a β-lactam antibiotic, consisting of a β-lactam ring fused to oxazolidine ring. This compound is used clinically in combination with conventional β-lactam antibiotics. The present study evaluated the simultaneous extraction and production of clavulanic acid by Streptomyces malasyensis DPUA 1571 by extractive fermentation using Aqueous Two-Phase Systems (ATPS). Initially, a study of the stability of commercial clavulanic acid in polyethylene glycol (PEG) and citrate solutions at different concentrations and extraction of this compound in ATPS composed of PEG/citrate realized. In the following stage of the present work clavulanic acid production by Streptomyces malasyensis DPUA 1571 by conventional fermentation was performed in order to verify the ability of this microrganism to produce clavulanic acid, and the results obtained made it possible to realization of integrated production and extraction of clavulanic acid using extractive fermentation in ATPS formed by PEG / citrate. Later, there was the influence of different variables in the production of clavulanic acid by Streptomyces malasyensis DPUA 1571 in bioreactor. Studies on the degradation of the clavulanic acid have shown that it is more stable in PEG 20.000 g/mol, pH 6. Due to the results obtained ATPS used partition of clavulanic acid was performed using PEG molar mass 20.000 g/mol. The clavulanic acid was detected in the PEG-rich phase with a concentration of 30% was obtained 188.83 mg/L of clavulanic acid with coefficient K = 3.46 and partition recovery equal to Y = 139.22%. Streptomyces malasyensis DPUA 1571 was capable to produce clavulanic acid, and this production of 387.66 mg/L after 72 hours of cultivation, and production was made possible by extractive fermentation. In this process, the largest concentration of clavulanic acid (337.8 mg.L) was obtained from the PEG-rich phase, were used when higher concentrations of citrate and PEG (25%). Values of partition coefficient of 1.6 and yields of up to 98.2%. In a third step of this work, the production of clavulanic acid by Streptomyces malasyensis DPUA 1571 was performed in bioreactor bench (2.0L). After 120 hours of culture, higher high concentration of clavulanic acid (2241.38 mg/L) were observed. Results concluding that Streptomyces malasyensis DPUA 1571 is a promising source of clavulanic acid with potential for application in the pharmaceutical area. O ácido clavulânico é um antibiótico β-lactâmico, constituído por um anel β-lactâmico condensado a um anel oxazolidina. Este composto é utilizado clinicamente em combinações com antibióticos β-lactâmicos convencionais. No presente trabalho foi avaliada a produção e extração simultânea de ácido clavulânico por Streptomyces malasyensis DPUA 1571 através de fermentação extrativa utilizando Sistemas de Duas Fases Aquosas (SDFA). Inicialmente foi realizado um estudo da estabilidade do ácido clavulânico comercial em soluções de Polietilenoglicol (PEG) e soluções de citrato em diferentes concentrações, e a extração deste composto por SDFA compostos por PEG/citrato. Na etapa seguinte do presente trabalho foi realizada a produção do ácido clavulânico por Streptomyces malasyensis DPUA 1571 por fermentação convencional, visando verificar a capacidade deste micro-organismo em produzir ácido clavulânico, e os resultados obtidos viabilizaram a realização da produção e extração integradas do ácido clavulânico utilizando fermentação extrativa em SDFA formados por PEG/citrato. Posteriormente, verificou-se a influência de diferentes variáveis na produção de ácido clavulânico por Streptomyces malasyensis DPUA 1571 em biorreator. Os estudos sobre a degradação do ácido clavulânico demonstraram que este é mais estável em PEG 20.000 g/mol, a pH 6. Devido aos resultados obtidos os SDFA utilizados para a partição do ácido clavulânico foram realizados utilizando PEG com massa molar 20.000 g/mol. O ácido clavulânico foi detectado na fase rica em PEG com concentração de 30%, sendo obtido 188,83 mg/L de ácido clavulânico, com coeficiente de partição de K=3,46 e com recuperação igual a Y=139,22%. Streptomyces malasyensis DPUA 1571 foi capaz de produzir ácido clavulânico, sendo esta produção de 387.66 mg/L após 72 horas de cultivo, e a produção por fermentação extrativa foi viabilizada. Neste processo a maior concentração de ácido clavulânico (337, 8 mg.L-1) foi obtida na fase rica em PEG, quando foram utilizadas as maiores concentrações de PEG e citrato (25%). Valores de coeficiente de partição de 1,6 e rendimentos de até 98,2% foram obtidos. Em uma terceira etapa deste trabalho, foi realizada a produção do ácido clavulânico por Streptomyces malasyensis DPUA 1571 em biorreator de bancada (2.0L). Após 120 horas de cultivo foi observada alta concentração de ácido clavulânico (2241,38 mg/L). Resultados que permitem concluir que Streptomyces malasyensis DPUA 1571 é uma promissora fonte de ácido clavulânico com potencial para aplicação na área farmacêutica.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-07-06T11:28:13Z No. of bitstreams: 1 Maiza de Azevedo Dantas.pdf: 1426194 bytes, checksum: 248ab81985fd9f5b4bd3a17adefea341 (MD5) Made available in DSpace on 2016-07-06T11:28:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Maiza de Azevedo Dantas.pdf: 1426194 bytes, checksum: 248ab81985fd9f5b4bd3a17adefea341 (MD5) Previous issue date: 2014-02-06 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES Orchids stand out among the ornamental tropical due to the exotic beauty of flowers, exuberant colors and shapes. Due to the high market demand, depredation of habitat, low rate of seed germination in natural environment and slow growth, tissue culture has been presented as an important tool for the production of seedlings of orchids on a large scale, in a reduced period of time and with greater seedling quality over conventional methods. The polysaccharide chitosan has been tested as an additive in the culture medium of some species as it stand out as a growth promoter and by acting as an antioxidant. This study aimed to evaluate the influence of dietary supplementation of chitosan to the nutrient medium in vitro cultivation of Dendrobium Phalaenopsis and Cattleya labiata in liquid and solid medium. Shoots from in vitro seedlings of both species were inoculated into vials containing 30 ml of MS medium with half the ionic strength. The experiment consisted of the combination of three chitosan concentrations (0, 15 and 20 mg.L-1) with nutrient medium in solid and liquid state. Each treatment had four replicates, each with two plants. The experimental design was completely randomized with a factorial scheme of 3x2 (chitosan concentration x physical state of the medium). For 50 days were evaluated the total fresh weight, number of shoots and roots, and were determined activities of superoxide dismutase enzyme (SOD), ascorbate peroxidase (APX) and catalase (CAT). In cultivation in liquid medium, D. phalaenopsis fresh weight showed higher treatment with 20 mg.L-1 of chitosan as the highest number of shoots was observed in both media, at the same concentration. C. labiata also exhibited higher fresh weight and number of shoots in liquid medium, but at the concentration of 15 mg.L-1 of chitosan. The solid medium favored the emission of roots in both species, but inhibited the formation of shoots of C. labiata regardless of the chitosan concentration. The best development of seedlings of both species in liquid medium coincided with increased activity of SOD directly proportional to the chitosan. This activation of SOD was not accompanied by an increase in the activity of APX or CAT, showing the action of chitosan in the dismutation of superoxide without forming hydrogen peroxide. On solid medium, the action of chitosan on the antioxidative mechanism is also provided by the activation of the APX and CAT. Verified the prevalence of the liquid medium for micropropagation of the species studied and confirmed the combination of chitosan in controlling levels of reactive oxygen species in joint action with the antioxidant enzyme system action. As orquídeas destacam-se entre as ornamentais tropicais, devido à beleza exótica das flores, exuberância de cores e formas. Em virtude da alta demanda do mercado, depredação do habitat, baixa taxa de germinação das sementes em ambiente natural e o lento crescimento, a cultura de tecidos vem se apresentando como uma importante ferramenta para a produção de mudas de orquídeas em larga escala, em período reduzido de tempo e com maior qualidade das mudas em relação aos métodos convencionais. O polissacarídeo quitosana tem sido testado como aditivo no meio de cultura de algumas espécies por se destacar como promotor de crescimento e por sua ação como antioxidante. O presente trabalho teve por objetivo avaliar a influência da suplementação de quitosana ao meio nutritivo no cultivo in vitro de Dendrobium phalaenopsis e Cattleya labiata, em meio líquido e sólido. Brotações provenientes de mudas in vitro de ambas as espécies foram inoculadas em frascos com 30 ml de meio MS com metade da força iônica. O experimento constou da combinação de três concentrações de quitosana (0, 15 e 20 mg L-1 de quitosana) em meio nutritivo em estado sólido e líquido. Cada tratamento contou com quatro repetições, cada uma com duas plantas. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado em esquema fatorial de 3x2 (concentrações de quitosana x estado físico do meio). Aos 50 dias avaliaram-se o peso fresco total, número de brotos e de raízes, e foram determinadas as atividades das enzimas superóxido dismutase (SOD), ascorbato peroxidase (APX) e catalase (CAT). No cultivo em meio líquido, D. phalaenopsis apresentou maior peso fresco no tratamento com 20 mg.L-1 de quitosana, enquanto o maior número de brotos foi observado em ambos os meios, nessa mesma concentração. C. labiata também exibiu maior peso fresco e número de brotos em meio líquido, porém na concentração de 15 mg.L-1 de quitosana. O meio sólido favoreceu a emissão de raízes das duas espécies, mas inibiu a formação de brotos de C. labiata, independente das doses de quitosana. O melhor desenvolvimento das mudas das duas espécies em meio líquido coincidiu com aumento da atividade de SOD diretamente proporcional ao da concentração de quitosana. Essa ativação da SOD não foi acompanhada pelo aumento na atividade da APX nem da CAT, evidenciando a ação da quitosana na dismutação do superóxido sem formação de peróxido de hidrogênio. Em meio sólido, a ação da quitosana no mecanismo antioxidativo se deu pela ativação da APX e CAT. Constatou-se a prevalência do meu líquido para a micropropagação das espécies estudadas e confirmou-se a ação combinada da quitosana no controle dos níveis de espécies reativas de oxigênio, em ação conjunta com o sistema enzimático antioxidativo.

Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2016-06-09T13:41:06Z No. of bitstreams: 1 Patyanne Carvalho Correia.pdf: 804722 bytes, checksum: 984e0900e0184bfd493feebf393b0390 (MD5) Made available in DSpace on 2016-06-09T13:41:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Patyanne Carvalho Correia.pdf: 804722 bytes, checksum: 984e0900e0184bfd493feebf393b0390 (MD5) Previous issue date: 2013-02-22 Keratinase are proteolytic enzymes whose substrate are a group of fibers and insoluble proteins denominate keratin. Some several micro-organisms such as fungi are capable to produce keratinase and to hydrolyze disulfide bonds present in keratinous substrates. The aim of this study was to select a producer keratinase and develop an integrated system which combines production, extraction and purification of keratinase by extractive fermentation in aqueous two-phase system (ATPS), prepared with polyethylene glycol (PEG) and citrate salts. Were observed the fermentation with Aspergillus sp SIS 11 was the higher producer of keratinases (7.65 U / mL), which the best conditions for enzyme production showed feather 0.5% o and pH 9.0. An ATPS which is composed of 20% (w/w) PEG 400 molar mass (g/mol), pH 8.0, 20% (w / w) sodium citrate, provided the best conditions for extractive keratinase production. Promoting greater (purification) 7.41, partition coefficient 0.74 and enzyme recovery 503.6%. In extractive fermentation enzyme produced presented partition coefficient K = 1.39 and enzyme recovery 65.08%. The studied strain was effective for enzyme production and biotechnological potential to use in animal feed. Queratinases são enzimas proteolíticas que tem como substrato um grupo de proteínas fibrosas e insolúveis denominadas queratinas. Alguns micro-organismos como fungos excretam queratinases capazes de hidrolisar as ligações peptídicas presentes na queratina, principal componente das penas de aves. Diante do contexto, o presente trabalho teve como objetivo selecionar um micro-organismo produtor de queratinases, bem como desenvolver um processo integrado de produção, extração e purificação da queratinase por fermentação extrativa em sistema de duas fases aquosas (SDFA), preparados com polietileno glicol (PEG) e sais citrato. A linhagem Aspergillus sp SIS 11 foi a melhor produtora de queratinases (7,65 U/mL), nas quais as melhores condições para produção da enzima apresentavam 0,5% de pena e pH 9,0. As melhores condições de extração das enzimas em SDFA foram obtidas com 20% de PEG com massa molar 400 (g/mol), pH 8,0, 20% (m/m) de citrato de sódio, promovendo assim aumento da pureza de 7,41, coeficiente de partição de 0,74 e recuperação de 503,6%. Na fermentação extrativa a enzima produzida apresentou coeficiente de partição K =1,39 e recuperação de 65,08%. A linhagem estudada mostrou-se eficaz para a produção da enzima e potencial biotecnológico para aplicação em ração animal.

Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2016-05-23T14:49:01Z No. of bitstreams: 1 Bruno Oliveira Ferreira de Souza.pdf: 1374739 bytes, checksum: 210e4bdc1715b5995117487fc1929cf5 (MD5) Made available in DSpace on 2016-05-23T14:49:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bruno Oliveira Ferreira de Souza.pdf: 1374739 bytes, checksum: 210e4bdc1715b5995117487fc1929cf5 (MD5) Previous issue date: 2011-05-23 Retinal degenerations are the major causes of blindness in the world, and the Age-Related Macular Degeneration (AMD) is the most important. The AMD is a slow and progressive disease with multi-factorial causes. The oxidative stress caused by light exposure is the major risk factor for this disease. Although there is no cure, dietary supplementation with ω-3 long chain polyunsaturated fatty acids (ω-3 LCPUFAs) is indicated for reduction of disease progression. The purpose of our study is evaluate the effects of dietary supplementation with ω-3 LCPUFAs in albino mice (SWISS) subjected to medium intensity light exposure. The animals were fed with a diet enriched with ω-3 LCPUFAs and exposed to white light (3000LUX) for 12 hours, and then evaluated at periods of 0, 7, 14, 21, 30, 60 and 90 days after exposure. Mice fed with a commercial diet served as controls. The retinal morphology, outer nuclear layer thickness, Retinal Pigmented Epithelium (EPR) cell number, presence and activation of microglial cells, PEDF immunolocalization, presence of apoptotic cells and retina neovascularization. Our results indicated that immediately after light exposure, supplemented animals had attenuated lesions compared to the control group. However, in subsequent periods, supplemented groups showed lesions similar or even more pronounced as the control group. These results suggest that ω-3 LCPUFAs have a dual effect on the retina, exerting an initial neuroprotection, and then exhibiting a deleterious effect to the retina. As degenerações retinianas são a maior causa de cegueira no mundo, sendo a Degeneração Macular Associada à Idade (DMAI) a mais importante. A DMAI é uma doença de caráter lento, progressivo e de causas multifatoriais. O estresse oxidativo causado pela exposição à luz é o principal fator de risco para esta enfermidade. Embora não haja cura, a suplementação dietética com ácidos graxos polinsaturados de cadeia longa ω-3 (ω-3 LCPUFAs) é indicada para a redução da progressão da doença. O presente estudo tem como objetivo avaliar os efeitos da suplementação dietética com ω-3 LCPUFAs em camundongos albinos (SWISS) submetidos à exposição à luz de média intensidade. Os animais foram suplementados com dieta rica em ω-3 LCPUFAs e expostos à luz branca (3000LUX) por 12 horas, e em seguida avaliados nos períodos de 0, 7, 14, 21, 30, 60 e 90 dias após a exposição. Camundongos alimentados com ração comercial serviram como controle. Os grupos foram avaliados quanto a morfologia da retina, espessura da camada nuclear externa, número de células do Epitélio Pigmentar da Retina (EPR), presença e ativação de micróglias, imunolocalização de PEDF, presença de células em apoptose e neovascularizações. Nossos resultados indicaram que imediatamente após a exposição à luz, os animais suplementados tiveram alterações atenuadas em relação ao grupo controle. Entretanto, nos períodos seguintes, os grupos suplementados apresentaram lesões equivalentes ou até mesmo mais acentuadas em relação ao grupo controle. Estes resultados sugerem que os ω-3 LCPUFAs possuem um efeito dual sobre a retina, exercendo uma neuroproteção inicial e, e em seguida, atuando de maneira nociva.