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Due to the complexity of the soybean matrix and the very low pesticide concentrations expected for these samples, it is really necessary to develop efficient and reliable analytical methods to identify and quantify their residues. In this study, an evaluation and validation was performed of the linear range of the analytical curves (7 concentration levels and 6 injections each), detection limit (LOD), quantification limit (LOQ), matrix effect, as well as precision (as RSD%) and accuracy (as recovery percent), for 221 pesticides, analyzed by 2 different extraction methods (modified Luke and Quechers) and also by different chromatographic techniques (GC and LC) coupled with mass spectrometry (MS). Furthermore, a clean up method by gel permeation chromatography (GPC) was developed for soybean extract purification. To that end, milled and homogenized soybean was spiked with 221 pesticides (52 analyzed by GC and 169 by LC), at 3 different spiking levels (10, 50 and 100 μg kg-1, 6 replicates at each level) and extracted by 2 different methods. Applying the modified Luke method, 10 mL of water was added to 5.0 g of soybean matrix and the samples were allowed to stand for 2 hours. A volume of 100 mL of a mixture of acetone, dichloromethane and light petroleum ether (1:1:1) and anhydrous sodium sulfate (15 g) were added, the samples were extracted with a Polytron homogeneiser for 1 min and finally centrifuged for 3 min. Applying the modified Quechers method, 4 mL of water was added to 2.0 g of soybean matrix and the samples were allowed to stand for 2 hours. A volume of 20 mL of acetonitrile was added and the tubes were vigorously shaken by hand for 45 s. The tubes were uncapped, 2 g of anhydrous magnesium sulfate and 2.5 g of sodium acetate were added, the shaking procedure was repeated and the extract was centrifuged for 1 min. The upper layer of the extracts was transferred to another tube, containing 2 g of anhydrous magnesium sulfate, and the shaking and centrifugation procedures were repeated. Prior to GC determination, a volume of 100 μL of each extract (reconstituted in 1 mL dichloromethane) was injected into a GPC system, consisting of a HPLC pump, autosampler, column oven, 2 PLgel columns, DAD detector, ELSD detector, automated fraction collector and computer workstation. Dichloromethane was used as eluent (flow rate, 0.75 mL min-1) and the pesticide fraction was collected between 17.5 and 27.5 min. After evaporation and reconstitution with 1 mL of iso-octane/toluene (9:1), containing 4.0 ng mL-1 bromophos-methyl (internal standard), extracts were analyzed by GC-MS and GC-MS/MS. The clean up procedure was not necessary for LC-MS/MS analysis, so, the extracts were reconstituted in methanol and directly injected into the LC-MS system. In general, LOD, LOQ and r2 results, obtained from GC, were affected by standards prepared in matrix extract compared to the preparation in solvent, which was not observed with results obtained from LC-MS/MS, showing a considerably lower matrix effect. Among the GC-MS techniques, the GC-MS NCI SIM mode was most appropriate for multiresidue pesticide analysis, conciliating sensitivity and acceptable selectivity, and allowing good quantification of 85% of the target compounds. ESI positive mode LC-MS/MS allowed determination of 155 pesticides in one chromatographic analysis, generating LOQm values of 10 or 50 μg kg-1, for ca 80% of the pesticides studied. Hence, it is possible to conclude, that the GPC clean up method developed was efficient to purify soybean extracts and that both extraction methods evaluated showed good performance, depending on which detection technique was to be used. Comparing GC and LC-MS/MS, there is no doubt that the latter was more efficient for pesticide multiresidue analysis, taking into account both robustness and sensitivity. Also, the possibility to perform the determination of a large number of pesticides in just a single chromatographic analysis is another major advantage. Devido a complexidade da matriz de grãos de soja e das baixas concentrações dos pesticidas presentes, há uma grande necessidade de desenvolvimento de métodos analíticos eficientes e confiáveis para a identificação e quantificação de contaminantes. Assim, nesse estudo avaliou-se a faixa de linearidade das curvas analíticas (7 níveis de concentração e 6 injeções cada), limite de detecção (LOD), limite de quantificação (LOQ), efeito matriz, bem como a precisão e a exatidão (em termos de percentual de recuperação), para 221 pesticidas, analisados e validados por dois diferentes métodos de extração (Luke e Quechers modificados), e também por diferentes técnicas cromatográficas (GC e LC) hifenadas à Espectrometria de Massas (MS). Ainda, desenvolveu-se um método de purificação por Cromatografia por permeação em gel (GPC), para purificação dos extratos da soja. Para isso, efetuou-se a fortificação da soja moída, com soluções contendo 221 pesticidas ao total (52 analisados por GC e 169 por LC), em 3 níveis de fortificação (10, 50 e 100 μg kg-1), 6 réplicas para cada nível, e aplicou-se os dois métodos de extração. A extração pelo método de Luke modificado consistiu na pesagem de 5,0 g da matriz, adição de 10 mL de água destilada e desionizada e repouso por 2 horas, onde em seguida, foi adicionado 100 mL de uma mistura de acetona, éter de petróleo e diclorometano (1:1:1) e 15 g de sulfato de sódio. Essa mistura foi levada para homogeneização em homogeneizador Polytron por cerca de 1 min e finalmente, centrifugada por outros 3 min. Para a aplicação do método Quechers, pesou-se 2,0 g da matriz, colocou-se 10 mL de água destilada e desionizada, deixada em repouso por 2 horas, onde em seguida adicionou-se 20 mL de acetonitrila e procedeu-se a agitação manual e vigorosa, por cerca de 45 segundos. Acrescentou-se 2,0 g de sulfato de magnésio anidro e 2,5 g de acetato de sódio anidro, repetindo-se a agitação. Foram, posteriormente, centrifugados por 1 minuto e o extrato foi transferido para outro tubo já contendo 2,0 g de sulfato de magnésio anidro, repetindo a agitação e a centrifugação. Para os pesticidas a serem determinados por GC, um volume de 100 μL de cada extrato foi injetado no sistema de GPC, que consistiu em um HPLC contendo amostrador automático, forno para coluna, 2 colunas PLgel, detector por arranjo de diodos, coletor automático de frações, detector por dispersão de luz por evaporação e workstation, onde o eluente foi o diclorometano, e a fração do eluato contendo os pesticidas foi coletada entre 17,5 e 27,5 min. Após evaporação e reconstituição em 1 mL de isooctano/tolueno (9:1) contendo bromofós metílico 4 ng mL-1 como padrão interno, os extratos foramanalisados por GC-MS e GC-MS/MS. Para aquelas realizadas por LC-MS/MS não foi necessária a aplicação do procedimento de purificação. Assim, os extratos foram evaporados e reconstituídos em metanol, e em seguida analisados por LC-MS/MS. Em geral, os valores de LOD, LOQ e r2, obtidos por GC, foram influenciados pela utilização de extratos da matriz para o preparo das soluções analíticas, o que não ocorreu com aqueles obtidos por LC-MS/MS, demonstrando o menor efeito da matriz sobre esta técnica. Dentre as técnicas de GC-MS, a GC-MS NCI modo SIM mostrou-se apropriada para análise multirresíduos de pesticidas, conciliando sensibilidade e seletividade adequados, o que promoveu boa quantificação de 85% dos compostos. LC-MS/MS modo ESI positivo possibilitou a determinação de 155 pesticidas em apenas uma análise, promovendo LOQm de 10 ou 50 μg kg-1, para ≈80% dos compostos. Portanto, concluiu-se que, a técnica desenvolvida de purificação foi eficiente para a purificação dos extratos da soja e que ambos métodos de extração apresentaram desempenhos satisfatórios, dependendo da técnica de detecção utilizada. Comparando-se as técnicas de GC com LC-MS/MS, esta última é, sem dúvida, aquela mais eficiente para análise multirresíduos de pesticidas, tanto pela robustez e sensibilidade do instrumento, como pela possibilidade de determinação de um grande número de pesticidas em uma única análise.

The immobilization of a silicone stationary phase (SE-30) on Chromosorb W/AW for use in packed column gas chromatography was initiated by dicumyl peroxide (DCUP). Appropriate peroxide concentrations were studied and the immobilization procedure is described. Solvent extractions and chromatographic testing, as well as thermal stability and on-column solvent rinsing, showed that preparation of an SE-30 phase immobilized on Chromosorb W/AW using DCUP is a simple method that produces efficient and non-extractable stationary phases. A imobilização de uma fase estacionária de silicone (SE-30) sobre Chromosorb W-AW para uso em cromatografia gasosa foi iniciada por peróxido de dicumila (DCUP). Foram estudadas concentrações apropriadas de peróxido e o procedimento utilizado para imobilização é bem descrito. Foram realizados testes de extrações com solventes, avaliação cromatográfica, bem como estabilidade térmica e lavagem com solventes em coluna. Estes testes mostraram que a preparação de SE-30 imobilizada sobre Chromosorb W-AW, usando DCUP, é simples e produz fases estacionárias eficientes e resistentes a solventes.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES Dithiocarbamates (DTC) are one of the main classes of fungicides applied to the control of fungal diseases on a large variety of crops. In this work, a fast and cheap sample preparation procedure for DTC analysis in yerba mate using gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS) was developed. A multivariate approach by Placket-Burmann Design (PBD) was carried out for screening of DTC extraction variables (concentration and volume of hydrolysis acid solution, isooctane volume, and water bath shaking time and temperature). The significant variables were studied by a Central Composite Rotational Design (CCRD) to optimize the DTC recovery. A complete validation study was performed according to the European Union guideline -SANTE document. The screening experiment obtained by PBD indicates that three experimental parameters were significant: concentration and volume of hydrolysis solution, and time of hydrolysis. The final optimized and validated method proved to be reproducible and robust in routine analysis. For recovery studies, blank yerba mate samples were spiked with a thiram solution at the 3 spike concentrations of 0.1; 0.5 and 2.0 mg kg-¹, as CS2, and analyzed by 3 analysts (n = 7, per analyst). Excellent recoveries, in the range of 81.4 to 116.2%, with good precision (all RSDs ≤ 16.1%), were obtained. The intermediate precision (RSDR) was evaluated by different analysts (1 and 2) and a RSDR≤ 8.2% was obtained, indicating the very good repeatability of the method. The interlaboratory reproducibility also showed recovery and precision values within the acceptable limits (70-120%, and 0.999, and the matrix effect was not significant (-14.9%). The LOD and LOQ were 0.05 and 0.1 mg kg-¹ CS2, respectively. The method presented important advantages: a five-fold reduction of the isooctane extraction volume; an increase of sample throughput from 1 to 30 sample extractions, due to sample mass reduction without HCl addition; a two-fold reduction of extraction time; a smaller sample amount to process, and less waste volume aiming at green chemistry principles. The application of the multivariate approach proved to be of influence in improving the extraction efficiency. A erva mate, originária da América Latina, vem sendo consumida de diversas formas, devido aos seus efeitos benéficos para a saúde humana. Ao longo dos anos os fungicidas ditiocarbamatos (DTC) tem sido utilizado no controle de doenças fúngicas em uma grande variedade de culturas. Atualmente não existe na legislação brasileira recomendações fitossanitárias nem Limite Máximo de Resíduos (LMR) para a erva mate, por isso a necessidade de desenvolver e otimizar um método confiável para a identificação e quantificação de resíduos de DTC. Neste trabalho, foi realizado um delineamento experimental por Placket-Burmam (PB), para determinar as variáveis experimentais independentes. Em seguida, foi utilizado o Delineamento Composto Central Rotacional (DCCR) para obter os melhores resultados para a otimização do método. Após os resultados obtidos, foi realizado um estudo univariado bem como a miniaturização do método. Por último o estudo da validação do método foi realizado, sendo avaliados os seguintes parâmetros: linearidade, limite de detecção (LOD), limite de quantificação (LOQ), seletividade precisão e exatidão. As curvas analíticas foram lineares na faixa de 0,05 a 10 mg L-¹ de CS2, com um coeficiente de determinação (r²) maior que 0,99, o LOD do método foi de 0,05 mg kg-¹ de CS2. Já o LOQ do método foi de 0,1 mg Kg-¹. A precisão mostrou-se adequada, com valores de RSD médios entre 8,2 e 16,1% e recuperações médias de 81,4 e 116,2%. O efeito matriz (-14,9) não foi significativo. Assim os resultados obtidos pela otimização e validação do método foram satisfatórios e apresentam um grande avanço no método analítico para a determinação de DTC em erva mate, por se ter um procedimento de rápido e barato de preparação de amostras para análise de (DTC) em erva-mate, usando Cromatografia gasosa acoplado a Espectrometria de Massas (GC-MS), além de ser um método amigável com o meio ambiente, pois gera menos resíduos químicos. Amostras de erva mate de diferentes supermercados de Santa Maria/ RS foram analisadas e em nenhuma delas detectada a presença de DTC.

Dithiocarbamates (DTC) fungicides have characteristics related to high instability when in the presence of moisture and oxygen, thus requiring special preparation of the sample to be worked on, as well as the development and validation of an individual method for analysis of the generated compounds. In this work, an individual method for the determination of DTC in yerba mate was miniaturized and validated, based on the acid hydrolysis of the sample in the presence of tin chloride II, purification of the extract and subsequent analysis of the carbon disulfide (CS2) generated using gas chromatography–mass spectrometry (GC-MS). The optimization conditions were evaluated through miniaturization in the sample extraction process, based on the amount of sample, volume of extracting solvent and acid solution and the stirring time during the hot bath. These conditions were compared to those already described in the literature. As it is a complex matrix, an extract purification step was carried out through the dispersive solid phase extraction (d-SPE) process using primary and secondary amine (PSA) as sorbents, graphitized carbon (GCB) in addition to magnesium sulfate (MgSO4) as a drier. For the method validation study, the following parameters were evaluated: linearity, matrix effect, limit of detection (LOD) and limit of quantification (LOQ), precision and accuracy. Within the results obtained in the validation study, the LOD was established at 0.05 mg L-1 CS2, and the LOQ at 0.1 mg kg-1 CS2. The coefficient of determination (r2) obtained through the analytical curves was r2 > 0.99. The results obtained through the precision study were acceptable values with RSDr ≤11.2% and RSDpi ≤19.4% and, as well as the recoveries, in the range of 71.3 to 118.2%. The matrix effect calculated was -5.1%, which is within acceptable values for determining trace levels of contaminants. The validation parameters are in accordance with those described in DG-SANTE (2019) and, therefore, suitable for the determination of DTC in yerba mate. The validated method proved to be faster, simpler, and cheaper when compared to the traditional method described in the literature and quite effective for determining DTC in yerba mate. The miniaturized method was applied to 58 samples produced and sold in southern Brazil, 3 produced in Brazil and exported to Uruguay, and 4 produced in Argentina and sold in Brazil. Of the 65 herb samples that were used for the monitoring study, 33.8% had detectable levels of CS2, and 14% had concentration levels higher than the LOQ. Os fungicidas da classe dos ditiocarbamatos (DTC) apresentam características particulares relacionadas à alta instabilidade quando em presença de umidade e oxigênio, necessitando assim, de preparo especial da amostra a ser trabalhada, bem como desenvolvimento e validação de método individual para análise dos compostos gerados. Neste trabalho, um método individual para determinação de DTC em ervamate foi miniaturizado e validado, com base na hidrólise ácida da amostra em presença de cloreto de estanho II (SnCl2), purificação do extrato e posterior análise do dissulfeto de carbono (CS2) gerado utilizando Cromatografia Gasosa acoplada a Espectrometria de Massas (GC-MS, do inglês Gas Chromatography–mass Spectrometry). As condições de otimização foram avaliadas através da miniaturização no processo de extração das amostras, com base na quantidade de amostra, volume de solvente extrator e solução ácida e o tempo de agitação durante o banho quente. Essas condições foram comparadas às já descritas na literatura. Por se tratar de uma matriz complexa, foi realizada uma etapa de purificação do extrato através do processo de extração em fase sólida dispersiva (d-SPE, do inglês Dispersive Solid Phase Extraction) utilizando como sorventes amina primária e secundária (PSA, do inglês, Primary Secundary Amine) e carvão grafitizado (GCB, do inglês Grahitized Carbon Black) além de sulfato de magnésio (MgSO4) como secante. Para o estudo de validação do método, foram avaliados os seguintes parâmetros: linearidade, efeito matriz, limite de detecção (LOD, do inglês Limit of Detection) e limite de quantificação (LOQ, do inglês Limit of Quantification), precisão e exatidão. Dentro dos resultados obtidos no estudo de validação, o LOD foi estabelecido em 0,05 mg L-1 CS2, e o LOQ 0,1 mg kg-1 CS2. O coeficiente de determinação (r2) obtido através das curvas analíticas foi r2>0,99. Os resultados obtidos através do estudo de precisão foram valores aceitáveis com RSDr ≤11,2% e RSDpi≤19,4% e, assim como as recuperações, na faixa de 71,3 a 118,2%. O efeito matriz calculado foi de -5,1%, estando dentro dos valores aceitáveis para determinação de contaminantes em níveis traço. Os parâmetros de validação estão em acordo com descrito no DG-SANTE (2019) e, portanto, apropriados à determinação de DTC em erva-mate. O método validado mostrou ser mais rápido, simples e barato quando comparado ao método tradicional descrito na literatura e bastante eficaz para determinação de DTC em erva-mate. O método miniaturizado foi aplicado a 58 amostras produzidas e comercializadas no sul do Brasil, 3 produzidas no Brasil e exportadas ao Uruguai, e 4 produzidas na Argentina e comercializadas no Brasil. Das 65 amostras de erva que foram utilizadas para o estudo de monitoramento, 33,8% com níveis detectáveis de CS2, sendo que, 14% apresentaram níveis de concentração maior que o LOQ.

Pesticides are used worldwide in the agricultural production of different crops in order to avoid losses in production due to the attack of pests and diseases. Due to the increase in food production, consequently, the concern about the correct disposal of pesticide residues is growing. Thus, from 1990 onwards, biobeds began to be developed in order to reduce contamination from accidental spills during pesticide formulation dissolution and in the washing of sprayers. The biomix, made up of soil, straw and peat, which makes up the biobeds, is primarily responsible for retaining and biodegrading pesticides. Among those different classes of pesticides, herbicides represent a large percentage (59,56%) of the most sold active ingredients in Brazil. Therefore, the meangoal of this study was to develop and to validate two extraction methods for pesticide determinations. A multiclass method composed of five distinct classes of herbicides, in addition to an insecticide class and an individual method, for the imidazolinone class herbicides, in the biomix that compose biobeds and its determination applying HPLC-MS/MS. To evaluate biobeds efficiency through the contamination of reactors, with those active ingradients under study and verifying their degradation over time with collections and subsequent analysis at different times, was also a goal in this project. To method validation studies, the criterias of linearity, linear range, matrix effect, limit of detection (LD) and limit of quantification (LQ), precision, intermediate precision and accuracy were evaluated. For those pesticides determined via individual method, imazapic and imazethapyr, the detection and quantification limits were 12.5 μg kg -¹ and 20 μg kg -¹ respectively. For all pesticides determined via multiclass method, 2,4-D, acetochlor, atrazine, diuron, dicamba and methidathione, the LOD was 8 μg kg -¹ and LOQ 20 μg kg -¹. The positive matrix effect for the imidazolinone extraction method was very evident by comparing the analytical curves data, prepared in organic solvent and in blank matrix extract, because the biomix is a very complex matrix and the extraction procedure has a high pH variation, which influences the interferents co-extraction. The analysis of biomix samples from contaminated biobeds showed that most of pesticides (2,4-D, atrazine, diuron, methidathione) under study were degraded. The exception was for imazethapyr, which possibly due to its known persistence in environment and dependence on specific conditions to be available and to be biodegraded, was not degrated. Further more, dicamba presented a lower biodegradation compared to other pesticides, that may be due to interactions with other pesticides discharged in to the biobed. Os agrotóxicos são mundialmente empregados na produção agrícola de diferentes culturas a fim de evitar perdas na produção devido ao ataque de pragas e doenças. Devido ao aumento na produção de alimentos e, consequentemente o uso de agrotóxicos, cresce a preocupação com a destinação correta de seus resíduos. Assim, a partir de 1990 começaram a ser desenvolvidas camas biológicos a fim de reduzir a contaminação por derramamentos acidentais durante o preparo da calda e na lavagem de pulverizadores. A biomistura, composta por solo, palha e turfa, que compõe as camas biológicas é a principal responsável por reter e biodegradar os agrotóxicos. Dentre as diferentes classes de agrotóxicos existentes, os herbicidas representam um grande percentual (59,56%) dos princípios ativos mais vendidos no Brasil. Portanto, o principal objetivo deste estudo foi desenvolver e validar dois métodos de extração para determinação de agrotóxicos. Um método multiclasse, composto por cinco classes distintas de herbicidas, além de uma classe de inseticida e um método individual, para os herbicidas da classe das imidazolinonas, na biomistura que compõe as camas biológicas e sua determinação empregando HPLC-MS/MS. Também objetivou-se avaliar a eficiência das camas biológicas através da contaminação de reatores, com os princípios ativos em estudo e verificar sua degradação ao longo do tempo com coletas e posterior análise. No estudo de validação, foram avaliados os critérios de linearidade, faixa linear, efeito matriz, limite de detecção (LD) e limite de quantificação (LQ), precisão, precisão intermediária e exatidão. Para os agrotóxicos do método individual, do imazapique e imazetapir, os limites de detecção (LD) e quantificação (LQ) foram de 12,5 μg kg -¹ e 20 μg kg -¹ respectivamente. Já para os agrotóxicos do método multiclasse, composto pelo 2,4-D, acetocloro, atrazina, diuron, dicamba e metidationa, o LD foi de 8 μg kg -¹ e LQ de 20 μg kg -¹. O efeito matriz positivo para o método de extração das imidazolinonas ficou bem evidente através da comparação das curvas analíticas preparadas em solvente orgânico e no extrato branco da matriz, pois além da biomistura ser uma matriz complexa, o procedimento de extração apresenta uma alta variação de pH, o que influencia na coextração de interferentes. A análise de amostras de biomistura de camas biológicas contaminadas demonstrou que a maior parte (2,4-D, atrazina, diuron, metidationa) dos agrotóxicos em estudo foi degradada. A exceção foi para o imazetapir, que não foi biodegradado, possivelmente devido a sua conhecida persistência no ambiente e dependência de condições específicas para estar disponível e poder ser biodegradado. Além disso, o dicamba teve uma menor biodegradação em comparação com os demais agrotóxicos, fato que pode estar associado com possíveis interações deste com os demais agrotóxicos aplicados nas camas biológicas.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES Due to the complexity of matrices such as honey and the low concentrations of pesticides, there is a great need for the development of efficient and reliable analytical methods for the identification and quantification of these residues. The greatest advantage of a multi-residual method is the possibility of determining a variety of pesticides in the same chromatographic analysis. Thus, this work carried out the validation of the multi-residual method for the determination of pesticides in honey by GC-μECD. The parameters of matrix effect and linearity of the analytical curve were evaluated in terms of coefficient of determination (r2) and residues. The determination of the limits of quantification and detection, accuracy and precision was performed through the fortification/recovery studies, in the following concentrations: 5, 10, 20 and 50 μg kg-1 in seven replicates each (n=7). For the determination of pesticides 10 mL of ultrapure water was added to 10 g of honey followed by stirring. Then 10 ml of acetonitrile 1% acetic acid (v/v) were added and stirred. To the partition step was added 4 g of MgSO4 and 1 g of sodium acetate followed by stirring and centrifugation. 2 mL was transferred into the tube containing 300 mg of MgSO4 and 50 mg of PSA to perform the purification step followed by stirring and centrifugation. Finally 1.2 mL of extract was evaporated and resuspended in 1.2 mL of isoctane/toluene (9:1, v/v). 990 μL of the extract in vial and 10 μL of I.I.S. Most pesticides presented linearity of 2.5 to 200 μg L-1. Regarding to limits of detection and quantification, 78.9% of the pesticides studied presented LOD of 2.5 μg kg-1, 57.9% of pesticides presented LOQ of 5 μg kg-1, 36.8% LOQ of 10 μg kg- 1 and 5.3% LOQ of 20 μg kg-1. The results obtained for the validation were considered satisfactory according to the SANTE 2017. The recoveries between 70 and 120% and RSD

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES This work aimed to develop and validate analytical methods for the determination of mycotoxins in beans, corn and soybean using UPLC-MS/MS and to evaluate the occurrence of mycotoxins in samples of these grains after six months of storage under controlled atmosphere. The extraction of mycotoxins was performed using the QuEChERS method, which was optimized so that the highest number of mycotoxins were extracted with recoveries between 70 and 120% and RSD ≤ 20%. Subsequently, the optimized methods were validated for beans and soybeans based on three guidance documents. Samples (5 g) were extracted with 10 mL of acetonitrile containing 1% formic acid for beans and maize, and 5% formic acid for soybean, followed by partitioning with MgSO4 and diluting the extract 1: 1 (v / v) with methanol directly into vial. Samples submitted to 15 controlled atmosphere treatments for four bean cultivars (Fepagro 26, Garapia, Cowpea white and red beans), four soybean cultivars (Brasmax Ultra IPRO, Brasmax Desafio RR, Brasmax Bonus IPRO and Tec IRGA 6070) were analyzed and 6 treatments for maize. Treatments were carried out at three temperature (20, 25 and 30 ºC) and at atmosphere with control of the partial pressures of O2 and CO2. There was no occurrence of mycotoxins in the cultivars Cowpea white and red beans, and soybean cultivars Brasmax Desafio RR and Brasmax Ultra IPRO. Aflatoxin B1 (AF B1) was detected in the other bean and soybean cultivars. For the cultivars Fepagro 26 and Garapia, no mycotoxins were detected in the grains stored at temperatures ≤ 20 ºC. For the cultivars Brasmax Bonus IPRO and Tec IRGA, AF B1 was detected in all the studied samples, indicating that the storage conditions were not effective to prevent the contamination of the samples. AF B1, fumonisins B1 and B2 (FM B1 and FM B2, respectively) were detected in all maize samples, although FM B1 was not detected in grain stored with moisture content at 14% at 30 ºC and ambient atmosphere. Este trabalho teve como objetivos desenvolver e validar métodos analíticos para a determinação de micotoxinas em grãos de feijão, milho e soja empregando UPLC-MS/MS e avaliar a ocorrência de micotoxinas em amostras desses grãos após seis meses de armazenamento em atmosfera controlada. A extração das micotoxinas foi realizada com o método QuEChERS, o qual foi otimizado de forma que o maior número de micotoxinas fosse extraído com recuperações entre 70 e 120% e RSD ≤ 20%. Posteriormente, os métodos foram validados para as matrizes feijão e soja com base em três documentos orientativos. As amostras (5 g) foram extraídas com 10 mL de acetonitrila contendo 1% de ácido fórmico para feijão e milho, e 5% de ácido fórmico para soja, seguido de partição com MgSO4 e diluição do extrato 1:1 (v/v) com metanol diretamente em vial. Foram analisadas amostras submetidas a 15 tratamentos em atmosfera controlada para quatro cultivares de feijão (Fepagro 26, Garapiá, Caupi branco e Caupi vermelho), quatro cultivares de soja (Brasmax Ultra IPRO, Brasmax Desafio RR, Brasmax Bônus IPRO e Tec IRGA 6070) e 6 tratamentos para milho. Os tratamentos foram realizados em três faixas de temperatura (20, 25 e 30 ºC) e em atmosfera com controle das pressões parciais de O2 e CO2. Não houve ocorrência de micotoxinas nos cultivares feijão Caupi branco e vermelho, e nos cultivares de soja Brasmax Desafio RR e Brasmax Ultra IPRO. Nos demais cultivares de feijão e soja detectou-se a presença de aflatoxina B1 (AF B1). Para os cultivares Fepagro 26 e Garapiá, não foram detectadas micotoxinas nos grãos armazenados em temperaturas ≤ 20 ºC. Para os cultivares Brasmax Bônus IPRO e Tec IRGA, detectou-se a presença de AF B1 em todas amostras estudadas, indicando que as condições de armazenamento não foram efetivas para impedir a contaminação das amostras. Nas amostras de milho detectou-se a presença das micotoxinas AF B1, fumonisinas B1 e B2 (FM B1 e FM B2, respectivamente) sendo que FM B1 não foi detectada no armazenamento dos grãos com teor de umidade 14%, à 30 ºC e em atmosfera ambiente.

Polyciclic aromatic hydrocarbons (PAH) are compounds that present two or more condensed aromatic rings. These substances can be found in the environment, and its contamination could lead to health risks. For environmental and biological monitoring of PAH passive or active sampling could be used containing na adsorbent material. In this work, high density polyethylene (HDPE) and polyuretane foam (PUF) were compared to Amberlite XAD®-2 for adsorption of naphthalene (NAP), acenaphthylene (ACY), acenaphthene (ACE), Fluorene (FLN), phenanthrene (PHE), anthracene (ANT), and chrysene (CHR). The adsorption of PAH in these materials were studied using UV-vis spectrophotometry. The experiments were performed in batches and the amount of PAH adsorbed during the time was obtained from the concentratrion of these compounds in solution in relation to the initial concentration. The effect of chemical modifier, amount of adsorbent, and the adsorption capacity were studied. Kinetic models of pseudo first order, pseudo second order and intraparticle diffusion were applied. Adsorption experiments at constant temperature provided data for application of Langmuir and Freundlich isotherm models. Hierarchical cluster analysis (HCA) was used as a chemometric tool to evaluate the similarities and diferences of PAH adsorption behaviour among adsorbents. If the amount of adsorbents is reduced to 0.1 g no siginificant change was observed with adsorption of more than 90% of PAH, with exception of chrysene. Two behaviour were observed for adsorption capacity within the range from 0 to 180 min. From 0 to 60 min high rates were found and between 60 and 180 min low variation was observed. The pseudo second order kinetic model was applied to PAH with exception of naphthalene. The isotherms (Langmuir) presented favorable profiles for adsorption of naphthalene and anthracene in HDPE and PUF and chrysene in PUF and XAD-2. The adsorption of acenaphthylene, acenaphthene and chrysene in HDPE presented better correlations with Freundlich model. The isotherms presented favorable forms and the adsorption remained constant for the reduction of adsorbents amount, with the exception for chrysene. Using HCA similarities and differences among adsorbents were observed, with separation in different groups. HDPE and PUF could be considered as promising adsorbents due to their availability, low cost and facile adaptation and evaluation in adsorption sampling devices. Hidrocarbonetos aromáticos policíclicos (HPA) são compostos que apresentam dois ou mais anéis aromáticos condensados. Essas substâncias podem ser encontradas no meio ambiente e sua contaminação pode levar a riscos à saúde. Para o monitoramento ambiental e biológico dos HPA, pode ser utilizada a amostragem passiva ou ativa constituída por um material adsorvente. Neste trabalho, polietileno de alta densidade (PEAD) e espuma de poliuretano (EPU) foram comparados com Amberlite XAD®-2 para adsorção de naftaleno (NAP), acenaftileno (ACY), acenafteno (ACE), fluoreno (FLN), fenantreno (PHE), antraceno (ANT) e criseno (CHR). A adsorção de HPA nestes materiais foi estudada usando espectrofotometria UV-vis. Os experimentos foram realizados em batelada e a quantidade de HPA adsorvida durante o tempo foi obtida a partir da concentração destes compostos em solução em relação à concentração inicial. O efeito do modificador químico, quantidade de adsorvente e a capacidade de adsorção foram estudados. Modelos cinéticos de pseudo-primeira-ordem, pseudo-segunda-ordem e difusão intrapartícula foram aplicados. Experimentos de adsorção em temperatura constante forneceram dados para aplicação das isotermas de Langmuir e Freundlich. A análise de agrupamento hierárquico (HCA) foi utilizada como ferramenta quimiométrica para avaliar as semelhanças e diferenças do comportamento de adsorção dos HPA entre os adsorventes. Ao reduzir a quantidade dos adsorventes para 0,1 g, nenhuma mudança significativa foi observada, permanecendo acima de 90% a adsorção dos HPA, com exceção do criseno. Dois comportamentos foram observados para a capacidade de adsorção na faixa de 0 a 180 min. De 0 a 60 min, altas taxas foram encontradas e entre 60 e 180 min, pouca variação foi observada. O modelo cinético de pseudo-segunda-ordem se aplica aos HPA com exceção do naftaleno. As isotermas de Langmuir apresentaram perfis favoráveis para adsorção de naftaleno e antraceno em PEAD e EPU e criseno em EPU e XAD-2. A adsorção de acenaftileno, acenafteno e criseno em PEAD apresentou melhores correlações com o modelo de Freundlich. Os resultados permitem concluir que as porcentagens de adsorção permaneceram constantes ao reduzir a massa dos adsorventes, com exceção do criseno. As isotermas apresentaram formas favoráveis, a partir do HCA a separação dos diferentes grupos possibilitou verificar as semelhanças e diferenças entre os adsorventes. PEAD e EPU são materiais de fácil acesso, baixo custo e operação que podem ser adaptados e testados para uso em amostradores de adsorção.

Besides the possibility to perform determination of a large number of pesticides in only a single chromatographyc analysis using multiresidual methods, sometimes, due to diversity in pesticides chemical composition and particular characteristics, it is still required develop single-residue method, such as for dithiocarbamates (DTC). Therefore, in this study, firstly, was optimized and validated a single method to determine DTC (mancozeb) in biobeds using GC-MS to evaluate biobeds efficiency on DTC degradation. Validation study was performed and assessed the analytical curve linearity (r2), detection and quantification limits (LOD and LOQ), accuracy (recovery%), precision (RSD%) and matrix effect. Recovery experiments were carried out with a standard spiking solution of the DTC pesticide thiram. Blank biomixture samples were spiked at the three levels corresponding to the CS2 concentrations of 1, 3 and 5 mg kg-1, with seven replicates each (n = 7). The method presented recoveries within the range of 89-96% and RSD ≤ 11%. The analytical curves were linear in the concentration range of 0.05 to 10 μg CS2 mL-1 (r2 > 0.9946). LOD and LOQ were 0.2 and 1.0 mg CS2 kg-1, respectively, and the calculated matrix effects were not significant (≤ 20%). The validated method was applied to 80 samples (biomixture), from sixteen different biobeds. Ten percent of samples presented CS2 concentration below the LOD (0.2 mg CS2 kg-1) and 70% of them showed results below the LOQ (1.0 mg CS2 kg-1), which demonstrates the biobeds capability to degrade DTC. The second step was to devepol and validated a method (modification of the New Dutch mini-Luke method) for multiresidue determination of captan and its degradation product (tetrahydrophytalimide), chlorothalonil, chlorpyrifos-ethyl, fenithrothion, methidathion, phosmet and tebuconazole in biobed, using GC-MS/MS. The dichloromethane use and the evaporation step were eliminated. This improvement avoids chlorinated solvents use and allows final extract direct injection into the GC-MS/MS system. After method optimization, validation study was performed based on SANTE Guidance Document. Linearity of analytical curves (r2), residuals, limits of detection (LOD) and quantification (LOQ) and matrix effects (%), were assessed by the analysis of standards solutions prepared in organic solvent and in blank biobed extract at eight concentrations, with seven replicate injections of each standard solution. Accuracy (as recoveries %) precision (as repeatability of recoveries experiments-RSD% and as intermediate precision) were also determinate. Two labeled internal standards were used for quality control. PCB-153 was used as procedure internal standard (P.I.S.), and HCB-C13 was used as instrument internal standard (I.I.S.). Recovery study was performed by the analysis of blank biobed samples spiked at 50, 100 and 200 μg kg-1 (n=7). All pesticides presented average recoveries within the range of 74 and 117%, except captan which was indirectly detected via tetrahydrophytalimide, its degradation product, and also had acceptable recoveries. The RSD values calculated from the 7 replicated recovery samples at 3 concentration levels were below 20% (2 to 14%). The residuals was lower than 20% for all pesticides. The method was linear within the range of 1 to 300 ng mL-1 for 2 pesticides and of 5 to 300 ng mL-1 for 4 pesticides and for tetrahydrophytalimide (the degradation product of captan). The r2 of the analytical curves calculated from matrix-matched standards were > 0.99 for all pesticides except for chlorpyrifos-ethyl, that had an r2 0.98. All studied pesticides presented the LODs of 10 or 20 μg kg-1 and LOQs of 50 μg kg-1. The calculated matrix effects were higher than 25% for all pesticides, excepted for chlorpiripfós-ethyl, that was -20%. Embora o emprego dos métodos multirresiduais possibilite a determinação de um grande número de agrotóxicos em uma única análise cromatográfica, para agrotóxicos da classe dos ditiocarbamatos (DTC), ainda é necessário o desenvolvimento de métodos individuais. Dessa forma, na primeira parte deste trabalho, otimizou-se e validou-se um método individual para determinação de DTC (mancozebe) em camas biológicas utilizando GC-MS. Foram avaliados os parâmetros de linearidade da curva analítica (r2), limites de detecção e de quantificação, exatidão, precisão e efeito matriz. Os estudos de recuperação foram realizados empregando o agrotóxico tiram como solução padrão de fortificação. As amostras “branco” de biomistura foram fortificadas em três concentrações, 1; 3 e 5 mg CS2 kg-1, em sete replicatas (n = 7). O método apresentou recuperações na faixa de 89-96% e RSD ≤ 11%, com linearidade na faixa de concentração de 0,05 a 10 μg CS2 mL-1 (r2> 0,9946). LODm e LOQm foram 0,2 e 1,0 mg CS2 kg-1, respectivamente, e o efeito matriz calculado não foi significativo (≤ 20%). O método validado foi aplicado para análise de 80 amostras (biomistura), de dezesseis reatores diferentes (coletadas em cinco tempos de amostragem) durante quatorze meses. Dez por cento das amostras apresentaram concentração de CS2 abaixo do LODm (0,2 mg CS2 kg-1) e 70% apresentaram resultados abaixo do LOQ (1,0 mg CS2 kg-1), o que confirma a eficiência das camas biológicas para degradar DTC. Na segunda etapa deste trabalho otimizou-se e validou-se um método multirresidual para a determinação de captana e seu produto de degradação (tetrahidroftalimida), clorotalonil, clorpirifós, fenitrotiona, metidationa, fosmete e tebuconazol em camas biológicas, utilizando GC-MS/MS. A otimização do método “ND” mini-Luke foi efetuada em nosso grupo de pesquisa realizando-se a troca de solventes para eliminar o uso de diclorometano e também evitar o passo de evaporação, permitindo a injeção direta do extrato final no GC-MS/MS, o que reduz tempo de análise e o uso de reagentes. Após otimização do método, a validação do mesmo para determinação multirresidual de agrotóxicos em camas biológicas foi realizada com base nas diretrizes do Documento Guia SANTE/11813/2017 avaliando-se a linearidade (r2), os limites de detecção e de quantificação (LOD e LOQ), o efeito matriz, a exatidão e a precisão. Dois padrões internos foram empregados para controle de qualidade, o PCB-153 foi usado como padrão interno do procedimento e o HCB-C13 como padrão interno do instrumento. No estudo de fortificação e recuperação, as amostras “branco” de biomistura foram fortificadas à 50, 100 e 200 μg kg-1 (n = 7) e todos os agrotóxicos, exceto captana a qual foi determinada indiretamente através do seu produto de degradação tetrahidroftalimida, apresentaram recuperações entre 74 e 117%, com valores de RSD% entre 2 e 14%. Os resíduos foram inferiores a 20% para todos os agrotóxicos avaliados. O método foi linear de 1 a 300 ng mL-1 para 3 agrotóxicos e 5 a 300 ng mL-1 para outros 4 agrotóxicos, com coeficientes de determinação maiores do que 0,99 para quase todos os agrotóxicos, exceto para clorpirifós (r2> 0,98). Todos os agrotóxicos apresentaram LODm de 10 ou 20 μg kg-1 e LOQm de 50 μg kg-1. Os valores calculados de efeito matriz ficaram acima de 25% para todos os agrotóxicos estudados, exceto para clorpirifós que foi de -20%.

The tomato is considered a functional food because its nutritional components promote health benefits for humans. However, in recent years, concerns have arisen due to the fact that food present often pesticide residues. During the cultivation period, tomato is susceptible to pests and diseases, and the use of pesticides is one of the methods used to control this problem. Among the pesticides allowed for the tomato crop is the neonicotinoid insecticide imidacloprid, which can cause damage to human health. Thus, this work had as objectives to evaluate the effects of washing on the imidacloprid residues in tomatoes, to determine the estimated daily intake (FDI) of this pesticide, in addition, to divulging methods of decontamination of the fruit to the population. Tested the washing of tomatoes with tap water and solutions of acetic acid at 5, 10 and 15%, chlorinated at 100, 150 and 200 ppm, of sodium bicarbonate at 5, 10 and 15% and of lemon juice at 5, 10 and 15%, followed by a rinse with tap water. The washing were performed in triplicates. Extraction and determination of imidacloprid concentrations in tomatoes were performed by modified mini-Luke method and ultra performance liquid chromatography coupled to mass spectrometry (UPLC-MS/MS), respectively. The pH of washing solutions was checked and the chemical composition of the samples was characterized. At the end, a primer was elaborated describing the most efficient washes in reducing the concentration of imidacloprid in tomato. To estimate human exposure to the imidacloprid pesticide, EDI was determined for Brazilian women, men, adolescents, adults and elderly. Data were analyzed through analysis of variance and Tukey's test, at 5% of significance level. Washing with tap water was the most effective method in reducing imidacloprid in the samples. In contrast, solutions of sodium bicarbonate at 10%, acetic acid at 10% and chlorinated at 150 ppm were the least efficient tomatoes containing imidacliprid decontamination. Considering all different solutions tested, there were no linear decreases in imidacloprid levels as their concentration increased. The samples did not differ in relation to moisture contents, acidity and total soluble solids present in them. The pH of the solutions did not interfere tomatoes pH. The relation of total soluble solids and acidity demonstrated that tomatoes were adequate to the quality standard for consumption. The correlation between the chemical parameters and imidacloprid levels in tomatoes showed that there is no linear relation between these data. Determined EDI have been shown to be below the acceptable daily intake (ADI) established in Brazil, United States of America, Europe and by the Codex Alimentarius. It has been shown that tomatoes analyzed were suitable for human consumption, since they met the parameters for being considered as toxicologically safe. O tomate é considerado um alimento funcional devido aos seus componentes nutricionais promoverem benefícios à saúde dos seres humanos. No entanto, nos últimos anos, preocupações tem surgido devido ao fato desse alimento apresentar frequentemente resíduos de agrotóxicos. Durante o período de cultivo, o tomate é suscetível a pragas e doenças, sendo o uso de agrotóxicos um dos métodos empregados para o controle deste problema. Dentre os agrotóxicos permitidos para a cultura do tomate está o inseticida neonicotinóide imidacloprido, que pode causar danos à saúde dos seres humanos. Assim, este trabalho teve como objetivos avaliar os efeitos de lavagens sobre os resíduos de imidacloprido em tomate, determinar a ingestão diária estimada (IDE) deste agrotóxico, além de divulgar métodos de descontaminação do fruto para a população. Testou-se a lavagem de tomates com água de torneira e as soluções de ácido acético a 5, 10 e 15%, clorada a 100, 150 e 200 ppm, de bicarbonato de sódio a 5, 10 e 15% e de suco de limão a 5, 10 e 15%, seguidas de enxágue com água corrente. As lavagens foram realizadas em triplicatas. A extração e a determinação das concentrações de imidacloprido nos tomates foram realizadas pelo método mini-Luke modificado e cromatografia líquida de ultra eficiência acoplada a espectrometria de massas (UPLC-MS/MS), respectivamente. Verificou-se o pH das soluções de lavagem e caracterizou-se a composição física e química das amostras. Ao final, foi elaborada uma cartilha com a descrição das lavagens mais eficientes na redução da concentração de imidacloprido em tomate. Para estimar a exposição humana ao agrotóxico imidacloprido, determinou-se a IDE para mulheres, homens, adolescentes, adultos e idosos brasileiros. Os dados foram avaliados através da análise de variância e do teste de Tukey, ao nível de 5% de significância. A lavagem com água de torneira foi o método mais efetivo na redução de imidacloprido nas amostras. Em contrapartida, as soluções de bicarbonato de sódio a 10%, ácido acético a 10% e clorada a 150 ppm foram as menos eficientes na descontaminação dos tomates contendo imidacloprido. Considerando todas as diferentes soluções testadas, não ocorreram diminuições lineares nas concentrações de imidacloprido à medida que se aumentou a concentração das mesmas. As amostras não diferiram com relação aos teores de umidade, acidez e sólidos solúveis totais presentes nas mesmas. O pH das soluções não interferiu no pH dos tomates. A relação sólidos solúveis totais e acidez demonstrou que os tomates estavam adequados ao padrão de qualidade para o consumo. A correlação entre os parâmetros físicos e químicos e as concentrações de imidacloprido nos tomates demonstrou que não há relação linear entre estes dados. As IDE determinadas demonstraram-se abaixo da ingestão diária aceitável (IDA) estabelecida no Brasil, nos Estados Unidos da América, na Europa e pelo Codex Alimentarius. Demonstrou-se que os tomates analisados eram adequados para o consumo humano, visto que estavam conforme os parâmetros considerados toxicologicamente seguros.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES The goal of this study was to evaluate the patulin contamination in post-harvest apples submitted to different storage conditions under controlled atmosphere (CA), in addition to apples and juices available in supermarkets. In relation to apples submitted to storage, two independent experiments were performed. The first experiment was conducted in a completely randomized 2x3 factorial, totaling six treatments with four replications. Factor A was presence and absence of 1-MCP. The factor B was: i) CA with 1.2 kPa O2 and 2.0 kPa CO2; ii) DCA with chlorophyll fluorescence measurement (ACD-FC); and iii) DCA with respiratory quotient monitoring (ACD-QR 1,3). The second experiment was also conducted in a completely randomized design, totaling three treatments with four replicates. The conditions were: i) CA with 1.2 kPa O2 and 2.0 kPa CO2; ii) DCA-CF; and iii) DCA-RQ 1.3. In both experiments were used fruits from commercial orchards of the Vacaria - RS city, being stored for nine months in the mentioned conditions plus seven days of exposure at 20 °C to simulate the shelf life. Afterwards, the fruits were submitted to the analysis: decay incidence, percentage of healthy fruits and patulin occurrence. In addition, contamination with patulin was evaluated in apples and juices commercially available in supermarkets in all regions of the Santa Maria - RS city. Analytical method for patulin determination in apples and apple juice was developed and validated in CEPARC. In this method, samples were extracted with acidified ethyl acetate followed by the addition of Na 2SO4. The cleanup step uses silica and Na2 SO4). The solvent was evaporated at 65 °C and residue dissolved in acetonitrile: water (75:25). The analytical technique employed was UPLC-MS/MS. The results showed that the studied conditions of CA and DCA were not efficient to prevent the production of patulin, in both the 'Galaxy' and 'Fuji Kiku' apples, under the conditions studied in addition to 7 days exposure at 20 ºC. Healthy fruits were not contaminated with patulin present in fruits with rot. For apples 'Galaxy', the application of 1-MCP increased the percentage of fruits with rot and the patulin concentration, being not advantageous its application in this cultivar. In the 'Fuji Kiku' apples there was no significant difference between CA and DCA-CF and DCA-RQ 1.3 in the patulin concentration, although all the fruits of this cultivar showed patulin contamination even though values lower than the LMT of 50 μg kg-1. The apple and apple juice samples monitoring collected in supermarkets evidenced the presence of patulin in both matrices, with concentrations ranging from

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior This study aims to validate an analytical multi-mycotoxin method using UPLC-MS/MS for 12 mycotoxins determination in wheat and maize matrices. The parameters evaluated for the validation were: calibration curve and linearity, limit of detection (LOD), limit of quantification (LOQ), accuracy (recovery%), precision (RSD %) and matrix effect. The extraction of mycotoxins was performed using the modified QuEChERS method, whereby were used 12.5 g of slurry (suspension between sample and water), 4.5 g MgSO4 anhydrous and 10 ml of acidified acetonitrile at 1% acetic acid. After method validation, it was used to search, quantitatively, the occurrence of mycotoxins in 646 samples, 476 samples of wheat (the field trials, exported and imported grain type, grain processing and their fractions (flour and bran) and flour collected in supermarkets) and 170 samples of maize (grain exported type, flour collected in supermarkets, grains and brewer for the manufacture of animal feed). The results were satisfactory for all evaluated parameters, thus showing that the method validated for the matrices of wheat and maize, it is effective to determine these 12 mycotoxins studied. The matrix effect for some mycotoxins was outside the range -20 to +20%. These results for some analytes were compensated by matrix-mached calibration. All were contaminated by at least one of 12 mycotoxins in the study, regardless of origin. The mycotoxin DON was predominantly found in wheat samples, while fumonisin were determined in maize. In the field trials, factors such as genotype, environment and fungicide treatment had influence on DON concentration. Wheat grain for exportation and imported from Argentina had DON contamination in all samples. In wheat for exportation, also been determined contamination for FB1, FB2, ZEN and OTA. There is evidence that this is the first study to report the presence of fumonisins in Brazilian wheat, since it was not found other reports in the literature. In the sub-products of milling was observed redistribution of DON, a decreased concentration in white flour and increased in bran fraction when compared to the initial concentration in the grain, showing that this process is not effective for mycotoxins removal. It was determined DON and ZEN mycotoxins in flour samples purchased either in the city of Cruz Alta as Santa Maria as well. In maize samples for exportation was observed concomitant contamination by DON, ZEN, FB1 and FB2 and AFLA B1. In maize flour samples collected from supermarkets all samples were contaminated with fumonisins. Besides fumonisins evidenced the presence of DON, ZEN and AFLA B1 in some samples. Samples destined for the production of animal feed were determineted with aflatoxins (B1, B2, G1, G2), fumonisins (B1 and B2), DON and ZEN, and in some samples, the concentrations were higher than Brazilian MRL. The extraction method combined with modern chromatographic technique for the determination of analytes, were effective for the analysis of mycotoxins in wheat and maize. Even in concentrations below the legal limits, human been exposure to mycotoxins can occur constantly. Monitoring of mycotoxins in foods is extremely important for public health, seeking quality to make healthy products available at all points of the supply and commercial chain. O trabalho teve por finalidade validar um método analítico multimicotoxinas empregando UPLC-MS/MS para determinação simultânea de 12 micotoxinas em matrizes de trigo e milho. Os parâmetros avaliados para validação do método foram: curva analítica e linearidade, limite de detecção (LOD), limite de quantificação (LOQ), exatidão (recuperação%), precisão (RSD%) e efeito matriz. A extração das micotoxinas foi realizada empregando o método QuEChERS modificado, no qual foram utilizados 12,5 g de slurry (suspensão entre amostra e água), 4,5 g MgSO4 anidro e 10 mL de acetonitrila acidificada a 1% com ácido acético. Após a validação do método, o mesmo foi empregado para pesquisar, quantitativamente, a ocorrência de micotoxinas em 646 amostras, sendo 476 amostras de trigo (ensaios a campo, grãos tipo exportação e importação, grãos para processamento e respectivas frações (farinha e farelo) e farinhas comercializados em supermercados) e 170 amostras de milho (grãos tipo exportação, farinhas coletadas em supermercados, grãos e quirera destinados à fabricação de ração animal). Os resultados obtidos foram satisfatórios para todos os parâmetros avaliados, mostrando desta forma, que o método validado para as matrizes de trigo e milho, é eficaz para determinar as 12 micotoxinas em estudo. O efeito matriz, para algumas micotoxinas ficou fora da faixa de -20 a +20%. Esse efeito pronunciado para alguns analitos foi compensado pela calibração por superposição da matriz. Este método pode então ser utilizado para avaliação das amostras, em que todas apresentaram contaminação por pelo menos uma das 12 micotoxinas estudadas, independente da origem. A micotoxina DON foi predominantemente encontrada em amostras de trigo, enquanto fumonisinas foram as micotoxinas predominante determinadas em milho. Nos ensaios a campo, fatores como genótipo, ambiente e tratamento fungicidas tiveram influência sobre as concentrações de DON. Grãos de trigo tipo exportação e importados da Argentina apresentaram contaminação por DON em todas as amostras. Em trigo tipo exportação, também foi determinado contaminação por FB1, FB2, ZEN e OTA. Há evidências de que este seja o primeiro trabalho a relatar a presença de fumonisinas em trigo brasileiro, visto que não foi encontrado outros relatos na literatura. Nos subprodutos derivados da moagem foi verificado redistribuição de DON, com redução das concentrações na farinha branca e incremento na fração farelo, quando comparados a concentração inicial no grão, evidenciando que tal processo não é eficaz para eliminação de micotoxinas. Foram determinadas as micotoxinas DON e ZEN em amostras de farinhas adquiridas tanto na cidade de Cruz Alta quanto de Santa Maria. Nas amostras de milho tipo exportação foi evidenciada contaminação concomitante por DON, ZEN, FB1 e FB2 e AFLA B1. Nas amostras de farinha de milho coletadas em supermercados todas estavam contaminadas por fumonisinas. Além de fumonisinas foi evidenciado a presença de DON, ZEN e AFLA B1 em algumas amostras. Em amostras destinadas a fabricação de ração animal foi determinada aflatoxinas (B1, B2, G1, G2), fumonisinas (B1 e B2), DON e ZEN, sendo que em alguns casos, as concentrações foram superiores aos limites tolerados pela legislação brasileira. O método de extração, aliado com a técnica cromatográfica para determinação dos analitos mostraram-se eficientes para a análise de micotoxinas em trigo e milho. Mesmo em concentrações abaixo dos limites legais, a exposição humana a micotoxinas pode ocorrer constantemente. O monitoramento de micotoxinas em alimentos é de extrema importância para a saúde pública, visando a disponibilização de produtos de qualidade em todos os pontos da cadeia produtiva e comercial.

Organização dos Estados Americanos - OEA Grupo Coimbra de Universidades Brasileiras - GCUB In this study, a method for determination of diquat and paraquat in Cowpea was optimized and validated. In order to obtain a good homogeneous sample, the Cowpea were milled and then prepared a slurry of matrix and water (ratio 1:1.5; m/m). The extraction procedure was based on the QuPPe-Method and modifications of the method were developed. As extraction solution, it was used methanol containing hydrochloric acid 5 mol L-1 (6:4 v/v) plus isotopically labeled (IL) analogues of the targets analytes, which were used as internal standards (ISTDs). In order to promote a better extraction, the mixture between slurry plus extraction solvent was manually shaked for 2 min, vigorously, and then taken to a water bath, at 80°C, for 15 min. After, the mixture was cooled down to room temperature and then centrifuged for 4 min at 4000 rpm. The supernatant was used for the analysis. All analytical solutions of diquat and paraquat have been prepared and stored in polypropylene vessels. The determination of diquat and paraquat was done into a liquid chromatographic system coupled to a tandem mass spectrometer (UPLC-MS/MS). The validation was performed by analyzing spiked samples at three different concentrations (10, 20 and 50 μg kg-1), with seven replicates (n = 7) for each concentration. Assessed, both as to diquat and paraquat, was determined the linearity (r) of analytical curves, accuracy (as recovery %), instrument and method limits of detection and quantification (LOD and LOQ), precision (as RSD %) and matrix effects (%). In the recovery study of Diquat, the average recovery obtained was between 77 and 85% with RSD% values ≤ 20%, for all 3 spike concentrations. On the other hand, paraquat presented averages between 68-103% and averages of RSD between 14.4-25.4 %. The LOQ of the method was 10 and 20 μg kg-1 for diquat and paraquat, respectively. The matrix effect was present for both pesticides even using isotopically labeled (IL) analogues of the target analytes, which were used as internal standard (ISTD), therefore requiring matrix-matched calibration standards for application in routine analysis. This study was applied for samples from EMBRAPA study. Neste estudo, foi otimizado e validado um método para determinação de diquate e paraquate em feijão-caupi. Para se obter uma amostra bem homogênea, o feijão-caupi foi moído e em seguida preparou-se um slurry de matriz e água (razão 1:1,5; m/m). O procedimento de extração baseou-se no método QuPPe, no qual foram feitas modificações. Como solvente extrator, utilizaram-se metanol contendo ácido clorídrico 5 mol L-1 (6:4 v/v) e utilizou-se padrões internos deuterados de diquate e paraquate. Após a adição do solvente extrator, para promover uma melhor extração, agitou-se vigorosamente de maneira manual por 2 minutos e logo levou-se por 15 minutos para banho de água à 80 °C. Deixou-se resfriar à temperatura ambiente e centrifugou-se por 5 minutos a 4000 rpm. O sobrenadante foi utilizado para as análises. Todas as soluções analíticas de diquate e paraquate foram preparadas e armazenadas em frascos de polipropileno. A determinação de diquate e paraquate foi feita em um sistema de cromatografia líquida acoplado a um espectrômetro de massas tandem (UPLC-MS/MS). A validação foi realizada pela análise de amostras de feijão-caupi fortificado em três concentrações (10, 20 e 50 μg kg-1), com 7 replicatas (n=7) para cada concentração. Avaliou-se, para ambos herbicidas, a linearidade da curva analítica (r), exatidão (recuperação%), limite de detecção e de quantificação (LOD e LOQ) do instrumento e do método, precisão (RSD%) e efeito matriz (%). No estudo de recuperação o diquate obteve médias entre 77-85% e apresentou RSD ≤ 20% para as amostras fortificadas, nas três concentrações de estudo. Por outro lado, paraquate apresentou médias entre 68-103% na recuperação e médias de RSD entre 14,4-25,4%. O LOQ do método foi 10 e 20 μg kg-1 para diquate e paraquate, respetivamente. Mesmo após a adição de padrões deuterados antes da etapa de fortificação o efeito matriz manteve-se presente tanto para diquate como para o paraquate. Dessa forma, para que o método possa ser implantado em análises de rotina, a confecção das curvas analíticas deve ser realizada a partir de soluções em extrato de matriz (matrix-matched calibration). Este método foi aplicado para amostras provenientes de um estudo da EMBRAPA.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior The optimization and validation of an analytical method for 51 pesticides determination in tomato, using UPLC-MS/MS, was developed in order to fulfill the requirement 5.4.5 (Method Validation) of the NBR ISO/IEC 17025:2005 and following the orientation document DOQ-CGCRE-008 (Orientation of analytical methods validation). This item is very important to a laboratory to be accredited by INMETRO (Brazilian accreditation body). The method validation was carried out following all the validation parameters, such as linearity of the analytical curves, limits of detection and quantification, matrix effects, accuracy and precision of the method. The studied compounds in this work were determined by UPLC-MS/MS in the positive ESI ionization mode. The stock solutions of the pesticides were prepared in organic solvent compatible with the compound solubility. These solutions were prepared by two different analysts in order to validate the preparation by comparing the areas of the injections (n=7) of each individual solution. After evaluation, 43 from 51 studied solutions showed results between the acceptable range of ± 10% demonstrating the satisfactory quality of solutions preparation. The evaluated pesticides were extracted from tomatoes applying the mini Luke method with a mixture 1:1:1 (v/v/v) of each acetone/petroleum ether/dichloromethane solvent as extraction solvent. After extraction, the organic solvent extract was evaporate and reconstituted in appropriate solvent (acidified methanol with 0.1% acetic acid) for UPLC-MS/MS analysis. The recovery experiments were done at 10, 20 and 50 μg kg-1 spike levels, by two analysts in different days, and 7 replicates (n=7) for each spike level plus the blank matrix (without pesticides). The limits of detection and quantification for the instrument and method were estimated, as well as the linearity of the analytical curves evaluated based on determination coefficient (r²), dynamic linear range, accuracy by recovery experiments (%), precision (RSD%) and matrix effect. From the 51 studied compounds, 46 showed recoveries between the range of 81 115% for all the evaluated spike levels. About precision, 92% of the compounds showed RSD% below 18.7% in the lowest spike level. The quantification limit of the method, for 82% from all evaluated compounds, was the lowest spike level studied (10 μg kg-1). The matrix effect observed was between ± 20% for all evaluated compounds, showing that there is not considerable suppression or enhancement in the analytes signal. For all evaluated pesticides the intermediate precision was below 20% of RSD showing the good repeatability of the method. O desenvolvimento e validação do método analítico para determinação de 51 agrotóxicos em tomate por UPLC-MS/MS foi realizado a fim de atender ao requisito 5.4.5 (Validação de Métodos) da norma NBR ISO/IEC 17025:2005 e seguindo o documento orientativo DOQ-CGCRE-008 (Orientação sobre validação de métodos analíticos). Esse item descrito na norma é de fundamental importância para que o laboratório possa ser acreditado pelo INMETRO. A validação do método seguiu todos os parâmetros de validação, tal como a linearidade das curvas analíticas, limites de detecção e quantificação, efeito matriz, exatidão e precisão do método. Os agrotóxicos estudados neste trabalho foram determinados por UPLC- MS/MS no modo de ionização ESI positivo. As soluções estoque dos agrotóxicos foram preparadas em solvente orgânico compatível com a solubilidade de cada substância. Essas soluções foram preparadas por dois analistas distintos a fim de validar o preparo dessas a partir da comparação das áreas das injeções realizadas (n=7) de cada solução individual. Após avaliação, 43 das 51 soluções estudadas mostraram resultados dentro da faixa de ± 10% demonstrando a excelente qualidade no preparo dessas soluções. Os agrotóxicos estudados foram extraídos das amostras de tomate utilizando o método mini Luke o qual faz o uso de uma mistura 1:1: 1 (v/v/v) de acetona/éter de petróleo/diclorometano como solvente extrator. Após extração, o extrato em solvente orgânico foi evaporado e ressuspendido em solvente apropriado (metanol acidificado com 0,1% ácido acético) para análise por UPLC-MS/MS. O estudo de fortificação e recuperação dos analitos foi realizado nas concentrações de 10, 20 e 50 μg kg-1, por dois analistas, e 7 replicatas (n=7) para cada concentração, além das amostras branco (sem conter os agrotóxicos). Os limites de detecção e quantificação do instrumento e do método foram determinados, bem como a linearidade das curvas analíticas avaliadas através do coeficiente de determinação (r²), faixa linear dinâmica de trabalho, exatidão através do estudo de fortificação e recuperação (%) dos analitos, precisão (RSD%) e efeito matriz. Dos 51 agrotóxicos estudados, 46 apresentaram recuperação média na faixa de 81 a 115 % para todas as concentrações avaliadas. Com relação à precisão, 92% dos agrotóxicos demonstraram RSD% abaixo de 18,7% na menor concentração de fortificação. O limite de quantificação do método, para 82% dos agrotóxicos, foi a concentração de fortificação mais baixa estudada (10 μg kg-1). O efeito matriz observado foi inferior a ± 20% para todos os agrotóxicos avaliados, demonstrando assim que não há supressão ou aumento considerável no sinal do analito. Para todos os agrotóxicos estudados os resultados de precisão intermediária (onde foram avaliados diferentes analistas em diferentes dias) ficaram abaixo de 20% demonstrando a repetitividade satisfatória do método proposto.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico A fast multimethod using liquid chromatography tandem mass spectrometry (UPLC-MS/MS) was implemented and optimized to yield a complete determination of 36 mycotoxins in wine samples. Extraction was performed with acetonitrile, applying modified QuEChERS method (Quick, Easy, Cheap, Effective, Rugged and Safe). Traditionally, QuEChERS method is well known in pesticides determination in a variety of matrices and due this has received the distinction of an AOAC (Association of Official Agricultural Chemists) official method for multiple pesticides in fruits and vegetables (LEHOTAY et al., 2005; BANERJEE et al., 2009). Usually mycotoxins analysis are carried out by liquid chromatography after immunoaffinity column clean-up or by enzyme-linked immunosorbent assay tests, but all these methods normally involve determination of a single compounds only (SPANJER et al., 2008; CUNHA et al., 2009). This study aimed to apply modified QuEChERS method as extraction procedure for mycotoxins determination in wine samples.During this study, were performed optimization experiments to improve recovery results and analites stability. Besides the evaluation of the proper volume of wine samples to be applied, tests were performed to test pH effect by using an additional buffering step with ammonium formate/ formic acid. Normally this method apply a dispersive clean-up with sorbents to clean-up sample extract. This procedure followed a dSPE clean-up with various sorbents where mycotoxins were analyzed on UPLC-MS/MS system, using electrospray ionization in positive mode. Mycotoxins standards stock solutions were prepared and classified in three different groups, with different range of concentration. Recovery studies were performed by analyzing samples in three spiked levels, with six (n=6) replicates in each concentration. Other validation parameters evaluated were linearity (r2) of calibration curves, accuracy (recovery %), instrument limits of detection and method limits of quantification (LOD and LOQ), precision (RSD%) and matrix effects (%) were determined for each individual mycotoxin. From 36 mycotoxins analyzed by UPLC-MS/MS (ESI+), 35 showed average recoveries between 70-120% and 88% an RSD ≤ 20%, at the lowest spiked level (Group I = 1, Group II = 50 e Group III = 10 μg kg-1). The method LOQ for 86% mycotoxins was the lowest level studied. The observed matrix effect was lower than ±20% for 75% of mycotoxins. This procedure was applied successfully also in a survey of 56 red wine samples purchased in the city of Amsterdam (The Netherlands) from many different countries. Um método rápido usando cromatografia líquida de ultra eficiência acoplada a espectrometria de massas (UPLC-MS/MS) foi implementado e otimizado para proporcionar a determinação completa de 36 micotoxinas em amostras de vinhos. A extração foi realizada com acetonitrila, aplicando o método QuEChERS (Quick, Easy, Cheap, Effective, Rugged, Safe; em português: Rápido, Fácil, Barato, Efetivo, Robusto e Seguro) modificado. Tradicionalmente, o método QuEChERS é muito conhecido na determinação de múltiplos pesticidas em uma grande variedade de matrizes de frutas e vegetais e por essa razão recebeu a distinção de método oficial da AOAC (Association of Official Agricultural Chemists) (LEHOTAY et al., 2005; BANERJEE et al., 2009). Normalmente, as determinações de micotoxinas são realizadas por cromatografia líquida após purificação em coluna de imunoafinidade ou testes ELISA, porém, essas técnicas possuem a desvantagem de envolver a determinação individual dos analitos (SPANJER et al., 2008; CUNHA et al., 2009). O objetivo deste estudo foi otimizar e empregar o método QuEChERS no procedimento de extração para determinação de micotoxinas em amostras de vinho. Durante o estudo, foram realizados experimentos de otimização para melhorar a recuperação e estabilidade dos analitos. Além da avaliação do volume da amostra de vinho tinto a ser empregado, foi estudado o efeito do pH, realizado pela adição de uma etapa de tamponamento com formiato de amônio e ácido fórmico. Esse método envolveu uma etapa de purificação do extrato por dSPE, avaliando o uso de vários adsorventes. As micotoxinas foram analisadas por UPLC-MS/MS, usando ionização por eletronebulização no modo positivo. As soluções padrão de micotoxinas foram preparadas e classificadas em três diferentes grupos, com faixas de concentração diferentes. O estudo de recuperação foi realizado em três diferentes níveis de fortificação, com seis replicatas (n=6) em cada concentração. Outros parâmetros avaliados da validação foram linearidade (r2) das curvas analíticas, exatidão (% de recuperação), limites de detecção e de quantificação do método (LOQ e LOD, respectivamente), precisão (RSD%) e efeito matriz (%), determinados individualmente para cada micotoxina. Das 36 micotoxinas analisadas por UPLC-MS/MS (ESI+), 35 apresentaram recuperação percentual entre 70-120% e 88% apresentaram RSD ≤ 20% no menor nível de fortificação estudado (Grupo I = 1, Grupo II = 50 e Grupo III = 10 μg kg-1). O LOQ do método para 86% das micotoxinas foi o nível mais baixo estudado. O efeito matriz observado foi inferior a ±20% para 75% das micotoxinas. Este método foi aplicado satisfatoriamente na análise de 56 amostras de vinho tinto adquiridos na cidade de Amsterdã (Holanda), provenientes de diversos países.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior In this study, was developed and validated a multi-residue method for the determination of 40 pesticides in green coffee beans. To obtain a very homogeneous sample, the coffee beans were first milled, followed by a slurry preparation of coffee and water (ratio 1:4, w/w). For the extraction procedure modifications of the QuEChERS method were developed. Acetonitrile containing 1% acetic acid and the procedure internal standard (P.I.S.) was used as extraction solvent. After the acetonitrile addition, 3 g of anhydrous magnesium sulfate were added, to promote phase separation between the organic phase (acetonitrile) and the aqueous phase. For the dispersive solid-phase extraction (dSPE) clean-up step, two sorbents were tested in separate and in different amounts and were also tested mixtures of them. Ergo the best results were obtained using 500 mg C18-bonded silica together with 600 mg of magnesium sulfate, for drying. The pesticides were determined by gas chromatography tandem mass spectrometry (GC-MS). Considering the characteristics of the pesticides and the complexity of the coffee matrix the GC-MS had to be operated in negative chemical ionization mode (NCI) and single ion monitoring mode (SIM) which provided high sensitivity and selectivity to pesticide detection. The validation was performed by analyzing spiked samples at three different concentrations (10, 20 and 50 μg kg-1), with 6 replicates (n=6) at each spike concentration. For each one of the 51 pesticides determined by GC-MS (NCI-SIM), the linearity (r) of calibration curves, accuracy (as recovery percent), instrument and method limits of detection and quantification (LOD and LOQ), precision (as RSD percent) and matrix effects (percent) were determined. From the 51 pesticides studied, approximately 76% showed average recoveries between 70-120% and 75% RSD ≤ 20% for the spike concentration of 10 μg kg-1. For the spike concentrations of 20 and 50 μg kg-1, the recoveries (%) and RSD (%) values were even better. The method LOQ was 10, 20 and 50 μg kg-1, for respectively 33, 3 and 6 pesticides, 4 pesticides could only be detected via their degradation products and 5 compounds did not presented recoveries between 70-120% and RSD ≤ 20% thus the method LOQ could not be determined for those pesticides. The matrix effect was present for all the pesticides even with the use of a clean-up step, requiring therefore matrixmatched calibration standards for application in routine analysis. Neste estudo, foi desenvolvido e validado um método multirresidual para determinação de 40 pesticidas em grãos de café verde. Para se obter uma amostra bem homogênea, os grãos de café verde foram previamente moídos e em seguida preparou-se um slurry de café e água (razão 1:4, m/m). Para o procedimento de extração utilizou-se o método QuEChERS, no qual foram introduzidas algumas modificações. Como solvente extrator, utilizou-se acetonitrila contendo 1% de ácido acético e padrão interno do procedimento (P.I.P.). Após a adição da acetonitrila, para promover o particionamento entre as fases orgânica e aquosa, adicionou-se 3 g de sulfato de magnésio anidro. Para a purificação do extrato de café, foram testados dois adsorventes, separadamente e em diferentes quantidades e também misturas entre os dois adsorventes, em uma etapa de extração em fase sólida dispersiva (dSPE), sendo que os melhores resultados foram obtidos com a utilização de 500 mg de C18 juntamente com 600 mg de sulfato de magnésio, para remoção de água. A determinação dos pesticidas foi feita em um sistema de cromatografia gasosa acoplado a um espectrômetro de massas (GC-MS). Em função das características dos pesticidas e da complexidade da matriz, o GC-MS foi operado no modo de ionização química negativa (NCI) e monitoramento seletivo de íons (SIM), que forneceu grande sensibilidade e seletividade na determinação dos pesticidas. A validação foi realizada pela análise de amostras de café fortificado em três diferentes concentrações (10, 20 e 50 μg kg-1), com 6 replicatas (n=6) para cada concentração. Para cada um dos pesticidas, avaliou-se a linearidade da curva analítica (r), exatidão (recuperação%), limite de detecção e quantificação (LOD e LOQ) do instrumento e do método, precisão (RSD%) e efeito matriz (%). Dos 51 pesticidas estudados, aproximadamente 76% obtiveram recuperações médias entre 70-120% e 75% apresentaram RSD ≤ 20% para amostras fortificadas na concentração de 10 μg kg-1. Para as fortificações de 20 e 50 μg kg-1 os resultados foram ainda melhores. O LOQ do método foi estabelecido em 10, 20 e 50 μg kg-1, respectivamente para 33, 3 e 6 pesticidas, 4 pesticidas somente puderam ser detectados via seus produtos de degradação e 5 compostos não apresentaram recuperações entre 70-120% e RSD≤ 20%, assim o LOQ do método não pode ser estabelecido para esses pesticidas. Mesmo com a utilização de uma etapa de purificação do extrato de café o efeito matriz manteve-se presente para todos os pesticidas, dessa forma, para que o método possa ser implantado em análises de rotina, a confecção das curvas analíticas deve ser feita em matriz (matrix-matched calibration).

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico Due to the complexity of grains like soybean, corn and rice, and the very low pesticide concentration expected for these samples, it is really necessary to develop efficient and reliable analytical methods to identify and quantify their residues. The possibility to perform the determination of a large number of pesticides in just a single chromatographic analysis is the major advantage of the multi-residue methods. However, there are important compounds that are not possible to be analyzed together, like the dithiocarbamates (DTC). For that, is so important to develop and validate single methods. Due to low acute toxicity, combined with strong action, low-cost production and low environmental persistence, the dithiocarbamates are still using worldwide. The first part of this study reports a sensitive analytical single method suitable for the quantitative analysis of DTCs in soybeans, rice and corn, using GC-PFPD and GCITD- MS. For the method validation studies, the following parameters were assessed: detection limit (LOD), quantification limit (LOQ), precision (repeatability and intermediate precision) and accuracy, via recovery experiments at 0.05, 0.1 and 0.5 mg CS2 kg-1 spiking levels. For soybeans is necessary a clean-up step due the high fat content in that crop, because of it, same sorbents (Aluminum oxide, Florisil®, Silica, PSA, C18 and C18OH) were tested and the best results were obtained applying silica gel. For the extraction procedure, an amount of sample was weighed and water added. The spike solution (thiram) was added to the sample, 25 mL of isoctane and 150 mL of tin (II) chloride solution in hydrochloric acid were added. The bottles were closed immediately and heated for 1 h in a water bath at 80 °C, under shaking. After cooling, 2 mL aliquot of the upper organic layer of each bottle was pipetted into a tube containing 50 mg of silica gel, for the clean-up step. The analytical curves were linear from 0.02 to 1.0 mg CS2 L-1 with determination coefficients (r2) higher than 0.99 for both detection systems and to all crops. Method LOD and LOQ values were 20 and 50 μg CS2 kg-1, respectively, for soybeans and corn. For rice LOQ was just 40 μg CS2 kg-1. Very good precision was obtained with RSD between 1.8 and 7.9% and recoveries from 67 to 103%, for all matrices. The results obtained in the validation step allow us to conclude that both chromatographic detection systems are appropriate to determine residues of DTCs in grains. The second step was to develop and validate a method for the analysis of 75 pesticides in corn grain and breakfast cereals using LC-MS/MS, ESI positive mode. The extraction procedure was the modified QuEChERS method, however, excluding the dispersive SPE clean-up step. To that end, milled and homogenized corn grain and breakfast cereals with water were spiked with 75 pesticides, at 3 spiking levels (10, 20 and 50 μg kg-1, n=6), plus the procedure internal standard (quinalfos). A volume of 10 mL of acetonitrile with 1% acetic acid was added and the tubes were vigorously shaken for 1 minute. The tubes were uncapped, anhydrous magnesium sulfate were added, the shaking procedure was repeated and the extract was centrifuged at 4000 rpm, for 4 min. The upper layer of the extracts was transferred to chromatographic vial, containing 0.5 mL of the instrumental internal standard (propoxur) in methanol. The linear range wasevaluated and validated between 0.1 and 50 μg L-1 of the analytical curves (7 concentrations, n=6). Also LOD, LOQ, matrix effect, as well as precision (as RSD%) and accuracy (as recovery), for 75 pesticides, were studied The LOD were calculated based on practically realized repeatability RSD. To determine the precision, accuracy and LOQ, blank samples were spiked at 10, 20 and 50 μg kg-1. The results showed recoveries between 70 and 120% and RSDs