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Orientador: Maria Alice da Cruz Hofling Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Face à dificuldade do estudo de material humano, muitos modelos experimentais, que mimetizam doenças desmielinizantes, têm sido utilizados no estudo das características celulares da desmielinização e da limitada remielinização do sistema nervoso central. O objetivo desta investigação foi estudar o fenômeno desmielinizante causado pela droga intercalante brometo de etídio (BE), bem como o conseqüente processo de remielinização, no tronco cerebral de ratos Wistar adultos. Foram utilizados 34 animais divididos em grupo I (3 animais) utilizados para as análises histológica e ultraestrutural da porção ventral da ponte, grupo 11 (21 animais) que receberam uma única injeção de 1O,u1 (0,1 % de BE em solução salina 0,15M) na cisterna basal, e grupo 111 (10 animais) que receberam uma única injeção de 10 ,ul de solução salina 0,15M. Do grupo 11, 3 animais foram perfundidos (1 para histologia e 2 para ultraestrutura) nos seguintes intervalos de tempo (dias): 1,3,7, 11, 15,21 e 30. Do grupo 111, 2 animais foram perfundidos (1 para histologia e 2 para ultraestrutura) até o período de 15 dias. No grupo 11, lesões desmielinizantes foram encontradas principalmente na superfície ventral da ponte e se estendem de 1/3 a 1/2 na estrutura em sentido dorsal e posteriormente constituem formações císticas. As lesões eram caracterizadas por espongiose do tecido nervoso confirmados à microscopia eletrônica de transmissão por cariorréxis das células gliais, severas alterações citoplasmáticas, formação de figuras de "honey comb", vesículas de mielina e grande aumento do espaço extracelular. Aos 3 dias, a lesão apresentava-se povoada por células fagocíticas que iniciavam a remoção dos restos de mielina. A remielinização ficava confinada à periferia da lesão e era iniciada pelos oligodendrócitos aos 11 dias. Embora neste mesmo período as células de Schwann estivessem relacionadas com axônios, a produção de mielina por essas células só foi evidenciada aos 15 dias após a injeção do BE. Na área de remielinização os oligodendrócitos estavam sempre associados a nichos de fibras desmielinizadas onde eram evidentes processos citoplasmáticos astrocitários, por outro lado, as células de Schwann apresentavam-se associadas apenas a fibras individualizadas que não estivessem relacionadas com processos astrocitários. Nesta investigação a remielinização do encéfalo foi significativamente realizada por oligodendrócitos, e na ausência de processos astrocitários as células de Schwann remielinizantes migravam para a lesão, e não se relacionavam obrigatoriamente com os espaços perivasculares e subpiais. Provavelmente a astrocitose, per se, não deve ser responsabilizada pelo impedimento da remielinização por oligodendrócitos Abstract: The difficulty to study human tissue, had led to the development of many experimental models, that mimic the nervous system demyelinating diseases. The models have contributed to the understanding of many cellular events involving the demyelination as well as the limited remyelination of the central nervous system. The objective of this investigation was to study the process of demyelination caused by the intercalant drug ethidium bromide (EB) , as well as the consequent remyelination in the brainstem of Wistar adult rats. It were utilized 34 animaIs divided into group 1 (3 animaIs) as used for histologycal and ultrastructural analyses of the ventral part of the pons, the group 11 (21 animaIs) received a single injection of 10 #1 (EB/O,l % of 0,15M saline) into the basal cisterna; the group 111 (10 animaIs) that received a single injection of 10 #1 of saline solution 0,15M. In the group 11 3 animaIs were perfused (1 for histology and 2 for ultrastructure) in time intervals (days): 1,3, 7, 11 and 15 days after EB injection. In the group 111,. Demyelinated lesions were found find mainly in the ventral surface of the pons and extended by 1/3 to 1/2 along the dorsal direction and later on constitute cystic formations. The lesions were characterized by status spongiosus on the nervous tissue, which is corroborated by ultrastructural observations showing cariorrexis of the glial cells, severe cytoplasmic alterations, honey comb formation, myelin vesicculation and finally loss of the myelin by the axons and widening of extracellular space. After 3 days the lesion is invaded by phagocytic cells that began the removal of myelin debris.The remyelination was confined to the periphery of the lesion and began with the oligodendrocytes by 11 days by this time the Schwann cells were already connected with axons, but myelin production only began by 15 days after EB injection. In the remyelinated area the oligodendrocytes were always associated with groups of demyelinated tibers, where are evident in between several cytoplasmic astrocytic processes, on the hand, the Schwann cells were seen associated with individualized fibers without any contact with astrocytes processes. In this model, the encephalic remyelination was chiefly carryed out by oligodendrocytes. In the absence of the astrocytic processes the remyelinating Schwann cells, migrate to the lesioned area Mestrado Biologia Celular Mestre em Ciências Biológicas

Agradecimentos: This study was financed by the Brazilian agencies Fapesp (2008/09207-9), CAPES (0050/10-5) and CNPq. Rubens Spin-Neto holds a PhD scholarship from Aarhus University, Denmark Abstract: To compare cortical (AL-C) and corticocancellous (AL-CC) fresh-frozen block bone allografts to cortical block bone autografts (AT) used for lateral ridge augmentation in terms of radiographic dimensional maintenance and histomorphometrical graft remodeling. Twenty-four patients, requiring ridge augmentation in the anterior maxilla prior to implant placement, were treated with AT, AL-C or AL-CC bone blocks (eight patients per graft type). Patients were examined with CBCT prior to, 14 days, and 6–8 months after grafting. Amount of augmentation and dimensional block graft maintenance over time was evaluated by comparing planimetric measurements of the alveolar ridge made on CBCT sections of the augmentation area. During implant installation surgery, 6–8 months after grafting, cylindrical biopsies were harvested perpendicularly to the lateral aspect of the augmented alveolar ridge. The relative volumes of vital and necrotic bone and soft tissues were histomorphometrically estimated. Comparisons among groups and observation times were performed using Friedman test followed by Dunn's post-hoc test. Radiographic evaluation showed that the three types of grafts resulted in a significant increase in alveolar ridge width, with no significant differences among the groups in terms of ridge dimensions at the various observation times. However, significant graft resorption (P = 0.03) was observed in the AL-CC group over time (-8.3 ± 7.1%) compared with the AT and AL-C groups, where a slight increase was observed, on average (1.5 ± 20.6% and 1.3 ± 14.9%, respectively). Histomorphometrical analysis showed that larger amounts of vital bone were found in the biopsies from the AT augmented sites (25.1 ± 11.2%) compared with AL-CC and AL-C augmented sites (9.3 ± 3.8% and 3.9 ± 4.6%, respectively; P = 0.01). AL-CC and AT biopsies had the smallest amount of necrotic bone (38.2 ± 12.1% and 56.7 ± 26.0, respectively) compared with AL-C (83.7 ± 10.8%, P < 0.01) biopsies. AL-CC biopsies showed the largest amount of soft tissues (52.5 ± 11.7%) compared with those from AT (18.1 ± 17.1%, P = 0.03) and AL-C (12.3 ± 8.5%, P < 0.01) sites. AL block bone graft architecture influences significantly its dimensional incorporation and remodeling. Compared with AT bone graft, a small portion of the AL block consists of vital bone 6–8 months after grafting. Cortical AL blocks seem to show the least amounts of vital bone, while corticocancellous AL blocks seem to undergo more resorption over time CONSELHO NACIONAL DE DESENVOLVIMENTO CIENTÍFICO E TECNOLÓGICO - CNPQ COORDENAÇÃO DE APERFEIÇOAMENTO DE PESSOAL DE NÍVEL SUPERIOR - CAPES FUNDAÇÃO DE AMPARO À PESQUISA DO ESTADO DE SÃO PAULO - FAPESP Fechado

Orientador: Luis Antonio Violin Dias Pereira Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: O termo e-learning abrange a utilização de ferramentas eletrônicas para mediar o processo de ensino e afeta, portanto, a comunicação entre alunos e professores. Para o cenário da educação presencial a incorporação do e-learning deu origem ao conceito de educação presencial aprimorada, prática que tem sido incitada para educação de nível superior. A percepção desse contexto instigou a possibilidade de aplicação de novas estratégias complementares ao modelo de aula expositiva presencial no ensino de embriologia humana. Aos estudantes da área da saúde essa ciência é particularmente importante por permitir a compreensão de questões de saúde reprodutiva e as bases dos defeitos congênitos, no entanto, como ocorre em geral para as disciplinas da etapa pré-clínica, a retenção de seu conteúdo é bastante pobre. Esse estudo se baseou na utilização do software Embriologia Clínica Humana como recurso didático em disciplinas de graduação da UNICAMP para os cursos de Fonoaudiologia, Enfermagem e Medicina, para os anos de 2010, 2011 e 2012. Foram estabelecidas três estratégias de utilização do software que se diferenciam pelo momento e forma de interferência na dinâmica de aula: (I) com o professor como o único usuário ativo do software em aula expositiva; (II) inicialmente com professor utilizando o software em aula expositiva e retomada desse material pelo aluno para revisão de conteúdo; (III) inicialmente com o aluno utilizando o software para introdução de conteúdo e retomada deste material pelo professor através de exposição dialogada. Para o curso de Medicina empregou-se ainda a utilização do software em estratégias de aprendizagem individual (II/III) e colaborativa (II'/III'). A avaliação do desempenho cognitivo imediato baseou-se no cálculo de valores de ganho normalizado (g) a partir de questões do pré e pós-testes realizados a cada aula. Os desempenhos cognitivos em curto e médio prazo foram dados pela análise de variância (ANOVA) de avaliações somativas das disciplinas e de retenção em médio prazo, respectivamente. Para a cognição imediata, a estratégia I mostrou-se superior as demais. Em curto prazo houve equivalência entre as estratégias e em médio prazo, as estratégias que favorecem comportamentos de aprendizagem ativa (II/II' e III/III') destacaram-se positivamente. A investigação da percepção de estudantes baseou-se em instrumentos de percepção com asserções que compunham uma escala de Likert, itens tipo Likert, e entrevistas semi-estruturadas. A percepção do professor responsável pelas disciplinas de graduação envolvidas no estudo foi coletada através de entrevista. Com relação ao material utilizado e a coerência das atividades, as percepções apresentadas foram positivas. Na percepção dos estudantes diante das estratégias de aula propostas foi notada resistência às estratégias que desconstruíam o modelo de aula expositiva. A estratégia III/III' foi alvo de maior oposição, embora, na percepção do professor responsável, essa tenha sido a estratégia mais motivadora, por valorizar a importância do professor frente aos alunos. A experiência relatada e os resultados obtidos destacam ainda que a introdução de novos métodos de ensino exige o envolvimento íntimo de membros do corpo docente, um aspecto fundamental da qualidade da educação e para o sucesso de qualquer estudante Abstract: The term e-learning covers the use of electronic tools to mediate the learning process, affecting communication among students and teachers. For the face to face educational scenario, the incorporation of e-learning gives rise to the enhanced learning, a practice that has been encouraged on higher education. The perception of this context instigated the possibility of implementing new strategies to complement the lecture style often adopted in human embryology classes. Students of health science should be particularly interest in this topic, since it allows the understanding of reproductive health issues and the basis of birth defects, however, as occurs in general for the disciplines of pre-clinical stage, the retention of its content is quite poor. This study were based on the use of the software Clinical Human Embryology as a teaching resource in graduate courses at UNICAMP for courses in speech therapy, nursing and medicine, for the years 2010, 2011 and 2012. It was established three strategies using software that differ by time and form of interference in the class' dynamics: (I) with the teacher as the only active user of the software during lecture presentation; (II) initially using the software with teacher during lecture presentation and then by the student to review content; (III) initially with the student using the software to introduce the content and then by the teacher during exposure dialogue. To the medical course it was also possible to use the software trough individual (II / III) and collaborative (II '/ III') learning strategies. The immediate assessment of cognitive performance was based on the calculation of values of normalized gain (g) based on the score of pretests and posttests performed for each class. Cognitive performance in the short and medium term was given by analysis of variance (ANOVA) of summative evaluations and retention assessments, respectively. For immediate cognition, the strategy I figured out with the higher socres. In the short term there was equivalence between strategies and at medium-term the strategies that promote active learning behaviors (II / II 'and III / III') positively stood out. The investigation of the students' perception was based on instruments of perception with assertions that comprised a Likert scale, Likert type items, and semi-structured interviews. The perception of the teacher responsible for undergraduate disciplines involved in the study was collected through an interview. With regard to the material used and the coherence of the activities, perceptions presented were positive. In the perception of the students for the proposed strategies there was noted a resistance to the ones that deconstruct the lecture model. The strategy III / III' was subject to greater opposition, though, in the perception of the teacher in charge, this was the most motivating strategy for valuing the importance of the teacher front students. The reported experience and the results highlight that the introduction of new teaching methods requires the intimate involvement of faculty members, a key aspect of quality of education and to the success of any student Mestrado Histologia Mestra em Biologia Celular e Estrutural

Orientadores: Luis Antonio Violin Dias Pereira, Luis Guillermo Bahamondes Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: O espermatozóide é uma célula altamente especializada, uma vez que apresenta diferenciações morfofisiológicas que garantem o sucesso da fecundação. Com o objetivo de adquirir a capacidade de fecundação precisam passar por três processos seqüenciais, maturação epididimária, capacitação e reação acrossômica (RA). A capacitação é um processo que acontece no trato reprodutor feminino e define-se como uma mudança bioquímica na membrana plasmática do espermatozóide, sendo a presença de progesterona e o aumento na concentração intracelular do cálcio ('Ca POT +2¿) eventos característicos e obrigatórios para a posterior RA. O levonogestrel (LNG) é um progestágeno sintético, semelhante a progesterona, o qual tem sido usado como contraceptivo feminino, seja na contracepção de emergência (CE), nas pílulas contraceptivas combinadas ou com o dispositivo intra-uterino (DIU). Entretanto, na literatura não há dados que relacionem a eficácia contraceptiva do lenovogestrel com possíveis efeitos deste hormônio sobre os espermatozóides humanos. Assim, com o objetivo de adicionar dados a respeito do mecanismo de ação contraceptiva do LNG, este estudo teve como objetivo avaliar o efeito de 5 concentrações de LNG, comparáveis as concentrações encontradas no plasma sanguíneo de mulheres, após a ingestão de LNG sob a forma de (CE) com a concentração intracelular do cálcio em espermatozóides capacitados de homens férteis. Um total de 24 amostras de sêmen, provenientes de 4 homens férteis foram avaliadas. Os espermatozóides foram selecionados através de um gradiente de Percoll, e foram submetidas a um período de capacitação. Às amostras foi adicionado o corante Fura2/AM e a seguir estas foram expostas às concentrações de 8, 10, 14, 1.000 e 10.000 ng/mL de LNG e a dois controles, um positivo e outro negativo, sendo respectivamente a progesterona (32 'mu' M = 11.000 ng/mL) e a meio de cultivo human tubal fluid (HTF). A seguir as amostras foram avaliadas através da espectrofotometria de fluorescência, com exitação de 340 nm e emissão de 510 nm. A taxa de fluorescência foi convertida em medidas de concentração intracelular de cálcio ([('Ca POT 2+¿]i), utilizando a equação de Grynkiewicz et al. (1985), a qual demonstrou que as concentrações de 8, 10, 14 e 1.000 ng/mL de LNG foram capazes de induzir um aumento na [('Ca POT 2+¿]i significativamente maior quando comparados ao obtido com HTF, e significativamente menor que ao obtido com progesterona (o indutor natural), excetuando-se a concentração de 10.000 ng/ml (32 'mu' M) de LNG, a qual foi estatisticamente similar que a progesterona 11.000 ng/ml (32 'mu' M). Assim, é possível sugerir que o LNG in vitro, em baixas concentrações, aumente a [('Ca POT 2+¿]i nos espermatozóides. No entanto, este mecanismo, de maneira isolada, não deva ser o responsável pela indução da RA. Entretanto a [('Ca POT 2+¿]i obtida através de altas concentrações de LNG (10.000 ng/ml) pode ser sim, um possível mecanismo de ação do LNG como droga contraceptiva Abstract: The spermatozoa is a highly specialized cell because it contains morfophysiological modifications that guarantees fecundation success. Spermatozoa must undergo three sequential changes before they acquire their fertilizing capacity: maturation in epididymis, capacitation and acrosome reaction (RA). Capacitation is a process that takes place in the female reproductive tract and is defined as a biochemical modification on the spermatozoa plasmatic membrane. The presence of progesterone (P) and the intracellular calcium concentration increase inside the spermatozoa are typical and obligatory events in the capacitation stage for further RA. Levonogestrel (LNG) is a synthetic progestin, similar to P, which has being used as a female contraceptive in several manners, among them they are: emergency contraception (EC), contraceptive pills combine and with the intrauterine system (IUS). Nevertheless, there are no available data or the scientific literature that correlate LNG contraceptive efficacy with possible effects of the hormones over human spermatozoa. Therefore, to add data over the contraceptive action mechanism of LNG, the aim of this study was to evaluate the effect of 5 concentrations of LNG somes comparable to the levels found in serum following ingestion of LNG as EC on the calcium intracellular concentration (['Ca POT 2+¿]i) rates of capacitated spermatozoa of fertile men. A total of 24 semen samples from 4 fertile men were evaluated. The spermatozoa were selected by Percoll gradient, following incubation with human tubal fluid medium supplemented with bovine serum albumin (HTF/BSA) under capacitating conditions. The sperm suspensions were incubated with Fura2/AM Subsequently the cells were exposed to the following concentration of LNG: 8, 10, 14, 1,000 and 10,000 ng/mL, and two controls (positive and negative). The positive control was P (32 'mu' M=11,000 ng/ml) and the negative one was medium (HTF). Cells were transferred to a quartz cuvette to make the reading in the spectrofluorometer at 340 nm excitation with emission at 510nm. Fluorescence measurements were converted to ['Ca POT 2+¿]i by the equation of Grynkiewicz et al. (1985). The Grynkiewicz equation shown that LNG concentration of 8, 10, 14, and 1,000 ng/mL were able to induce increase in the ['Ca POT 2+¿]i with significantly higher values, when compared with the rate obtained with HTF medium ( as a negative control), and significantly lower than the rate obtained with natural P (as a positive control). However, the exception was the LNG concentration of 10,000 ng/mL (32 'mu' M) in which values of ['Ca POT 2+¿]i were similar to those observed with P at a concentration of 11,000 ng/mL (32 'mu' M). In conclusion, it is possible to suggest that although LNG in vitro, in low concentration, increase the ['Ca POT 2+¿]i in the spermatozoids. Despite the fact that this mechanism is not the only responsible for the RA induction the calcium obtained through high concentration of LNG (10,000 ng/ml) might have a contraceptive action in the spermatozoa Mestrado Histologia Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Luis Antonio Violin Dias Pereira Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: O entendimento da Embriologia Humana é fundamental para o diagnóstico e tratamento corretos das malformações congênitas, que são responsáveis pela maioria das mortes na primeira infância em países desenvolvidos e cuja prevalência pode chegar a 21%. No entanto, as disciplinas tradicionais de Embriologia Humana exigem do aluno um rápido entendimento de uma série de mudanças que ocorrem simultaneamente em uma escala macro e microscópica no embrião e, como conseqüência, os estudantes têm dificuldade em compreender os conceitos apresentados e criar mentalmente imagens tridimensionais dos processos envolvidos. O uso de recursos multimídia auxilia na aprendizagem, estimula o conhecimento e a criatividade e possibilita soluções para problemas. Entretanto, pouca atenção tem sido dada ao desenvolvimento, utilização e avaliação dessas estratégias e à real participação do estudante no processo ensino/aprendizado. Sabendo-se que os testes de múltipla escolha, quizzes, são métodos objetivos comumente usados como ferramenta auxiliar de aprendizado, neste estudo foram desenvolvidos quizzes eletrônicos e uma metodologia para a utilização dos mesmos, visando o ensino de Embriologia Humana. Os quizzes eletrônicos correlacionaram conceitos de Embriologia básica com a gênese, o diagnóstico e o tratamento dos defeitos congênitos mais freqüentes e foram construídos de maneira a apresentar uma parte teórica seguida de uma ou mais questões de múltipla escolha, quizzes. A parte introdutória teórica foi composta por animações e esquemas ilustrativos, desenvolvidos no software Flash MX (Macromedia), imagens macroscópicas e microscópicas de embriões, fetos e neonatos encaminhados para autópsia, bem como de recém-nascidos e crianças portadores de defeitos congênitos, e de seus exames de imagens (ultrassons e radiografias). As questões de múltipla escolha foram desenvolvidas de maneira que o aluno pudesse verificar a extensão do seu conhecimento e as suas deficiências, uma vez que os quizzes indicam o porquê das alternativas erradas. O material didático foi organizado e disponibilizado em um ambiente interativo, o qual foi usado durante as monitorias pelos alunos do primeiro ano do curso de Medicina da UNICAMP matriculados nas disciplinas Morfofisiologia Humana I e II, no ano de 2006. Ao final de ambas as disciplinas, os quizzes eletrônicos e a metodologia utilizada foram avaliados pelos alunos, através de instrumentos quantitativos e qualitativos. A avaliação teve como objetivo determinar se os quizzes eletrônicos constituem uma ferramenta importante para o ensino de Embriologia Humana, para o desenvolvimento de raciocínio clínico e para a integração das áreas básica e clínica. Analisando-se os resultados pode-se observar que 98,8% dos alunos tiveram um nível de atitude no mínimo positiva em relação à metodologia de ensino desenvolvida. Enfatizaram que, quanto à qualidade, os quizzes eletrônicos são bons, apresentando parte introdutória clara com animações e imagens de casos clínicos que permitem a resolução das questões de múltipla escolha propostas, sem abordar conteúdo em excesso. Quanto ao objetivo pedagógico, os quizzes eletrônicos estimularam o raciocínio, permitiram fixar e testar os conhecimentos adquiridos em aula, acrescentaram informações novas, tornaram mais interessantes os assuntos complexos de Embriologia, aproximaram a área básica da clínica, abordaram assuntos relevantes à formação profissional e desenvolveram habilidades na resolução de problemas clínicos, o que nos permite concluir que os quizzes eletrônicos constituem sim uma ferramenta complementar adequada para o ensino de Embriologia Humana Abstract: The Human Embryology understanding is essential for appropriate diagnosis and treatment of congenital anomalies, which are responsible for the majority of the deaths in the first infancy and whose prevalence can reach up to 21% in North America. Traditional Human Embryology courses require students to rapidly understand the various changes that occur simultaneously on a macro and on a microscopic scale in embryos. Thus, the students have difficulties to understand the concepts presented and to create three-dimensional mental images of the processes involved. The use of multimedia assists in the learning process, stimulates the understanding and the creativity, and makes possible solutions to problems proposed. However, little attention has been given to the evaluation of these strategies and to the real commitment of the student to the education/learning process. Multiple-choice tests, called quizzes, are among the most common methods used as an auxiliary learning tool. In this study, there was developed an education methodology for Human Embryology based on electronic quizzes. The quizzes have correlated concepts of basic Embryology with the genesis, diagnosis, and treatment of the more frequent congenital defects. The electronic quizzes were constructed in a way to present a theoretical part, followed by one or more multiple-choice questions regarding the considered subject. The theoretical introductory part involved texts, animations developed by Flash MX (Macromedia), and macro and microscopical digital documentation of embryos, fetuses and neonates referred to autopsy. Newborn babies with inherit disorders were also photographed, at the nursery. The multiple-choice questions were developed for verifying the students¿ knowledge extension and deficiency since the quizzes indicated the reasons why they have chosen the false statements. The didactic material was organized on an educational software used by the students at the first year of UNICAMP Medicine¿s course, attending the Human Morpho-Physiology module, in 2006. At the end of the module, the methodology was considered, using quantitative and qualitative instruments, an important tool for the education of Human Embryology, the development of clinical reasoning, and the integration of the basic and clinical areas. Analyzing the results, one can observe that 98.8% of the students had had an attitude at least positive in relation to the electronic quizzes. Concerning its quality, they had emphasized that the electronic quizzes are good, presenting a clear introductory part with animations and images of clinical cases that allow them to solve all the multiple-choice questions without approaching excessively the content. With regard to the pedagogical goal, the electronic quizzes stimulate the reasoning, allow one to retain and to test the acquired knowledge in classes, add new information, turn some complex subjects of Embryology more interesting, colligate the basic and the clinical areas, deal with relevant concepts concerning the professional formation, and develop abilities in solving clinical problems. Thus, the arguments previously mentioned allow us to conclude that the electronic quizzes constitute an adequate complementary tool for the education of Human Embryology Mestrado Biologia Celular Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientadores: Luis Antonio Violin Pereira, Suzana de Fatima Paccola Mesquita Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: O epidídimo de mamíferos, através da secreção de proteínas andrógeno-dependentes, é responsável pela maturação dos espermatozóides visando o processo de fecundação, alterando-os em características morfológicas e bioquímicas. O criptorquidismo é uma condição patológica congênita na qual os testículos e epidídimos permanecem alojados na cavidade abdominal do organismo, causando a interrupção da espermatogênese e a ausência de espermatozóides no epidídimo, bem como atrofia e alterações histológicas que comprometem a função do epitélio germinativo do testículo e do epitélio secretor do epidídimo. A orquidopexia consiste no posicionamento dos testículos e epidídimos à topologia normal, contudo há ainda relatos de casos de infertilidade pós-orquidopexia. Alterações no epidídimo não revertidas pela orquidopexia poderiam ser co-responsabilizadas pelo baixo índice de fertilidade em indivíduos pós-orquidopexia. O objetivo deste estudo foi descrever em camundongos C57BL/6 as alterações histológicas e estereológicas causadas pelo criptorquidismo experimental e a possível reversibilidade destas alterações pela orquidopexia. Adicionalmente, foram determinadas e comparadas as concentrações séricas de testosterona e o número e o volume do núcleo das células de Leydig em camundongos controles, submetidos à condição de criptorquidismo experimental e à orquidopexia. A condição criptorquídica causou reduções significativas nos parâmetros estereológicos avaliados, contudo as alterações epididimárias foram menos acentuadas do que as verificadas para testículos. Após a orquidopexia, os valores de todos os parâmetros no epidídimo atingiram valores significativamente semelhantes aos controles. A dosagem sérica de testosterona não foi significativamente diferente em nenhum grupo analisado. A persistência da redução no número de células de Leydig na condição criptorquídica associada à não variação dos níveis de testosterona sugerem um mecanismo compensatório da atividade das células de Leydig. Os resultados demonstram que as alterações epididimárias causadas pelo criptorquidismo podem ser revertidas pela orquidopexia. Assim, a orquidopexia pode ser considerada um método eficaz para restauração da espermatogênese e alterações histológicas da cabeça do epidídimo causadas pelo criptorquidismo e, desta forma, sugere-se que a infertilidade, pós-orquidopexia, não deve ser correlacionada às alterações sofridas pela cabeça do epidídimo Abstract: The mammalian epididymis, through secretion of androgen-dependents proteins, is responsible for maturation of the sperm aiming fecundation process, modifying the sperm in theirs morphological and biochemical features. Cryptorchidism is a pathological condition in which testis and epididymis are retained in the abdominal cavity, resulting in interruption of the spermatogenesis and absence of sperm in the epididymis as well as atrophy and histological alterations that compromise the function of germinative epithelium of the testicle and secretor epithelium of epididymis. Orquidopexy restored the normal topology of testis and epididymis, however there are relates of cases of infertility pos-orchidopexy. Epididymis alterations not reverted by orchidopexy could be coresponsable for decrease fertility potential pos-orchidopexy. The aim of this study was to describe in mice (C57BL/6) by histology and stereological parameters the alterations induced by experimental cryptorchidism in epididymis and testis and the possible reversibility of these alterations by orchidopexy. Additionally were determined and compared serum levels of testosterone, number and nuclear volume of Leydig cells in mice controls and mice submitted to experimental cryptorchidism and orchidopexy. The cryptorchidic conditions caused significantly reduction of stereological parameters that were analyzed, however the epididymal alterations were less decreased than testicular alterations. After orchidopexy, the values of all parameters in the epididymis were significantly similar to controls. The serum testosterone levels were not significantly different among the groups analyzed. The decreased number and nuclear volume of Leydig cells in cryptorquidic conditions not associated with variations of the serum testosterone levels suggest a compensatory mechanism of the Leydig cells activity. The results showed that alterations in caput of epididymis and interruption of spermatogenesis caused by cryptorchidism can be reverted by orchidopexy, suggesting that the infertility, pos-orchidopexy, does not have to be correlated to the alterations suffered by the caput of the epididymis Mestrado Biologia Celular Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientadores: Luis Antonio Violin Dias Pereira, Lúcia Elvira Alvares Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: A albumina e sua família gênica desempenham importantes funções de manutenção no organismo, não sendo alvos comuns da seleção natural. O provável envolvimento dessa molécula na reprodução de mamíferos, no entanto, parece destoar dessa premissa. Testando sua condição constitutiva, esse estudo priorizou a análise de abordagens integrativas do sistema testículo-epidídimo-ducto deferente e se propôs a realizar, em camundongos adultos C57Bl6, via experimentações cirúrgicas (orquidectomia, ligadura de túbulos eferentes, criptorquidismo e orquidopexia) e intervenções farmacológicas (flutamida e finasterida) a indução de microambientes, os quais permitiram a emersão de cenários de sinalização e da expressão de fatores-chave ao contexto da fertilidade. Tais interpretações foram mensuradas via investigação transcricional (RT-PCR e PCR quantitativo), traducional (imuno-histoquímica, morfometria e immunoblotting) e funcional (fertilização in vitro; FIV). O cenário induzido pela interferência da orquidectomia evidenciou que os eventos de síntese e secreção da albumina no epidídimo e ducto deferente são regulados pela disponibilidade de testosterona bioativa, ainda que, isoladamente, esse estímulo não seja suficiente para manutenção do padrão total de expressão gênico e proteico da albumina nas orquidectomias unilaterais (estímulo androgênico endógeno) ou nas bilaterais com reposição de cipionato de testosterona injetável (estímulo androgênico exógeno), sinalizando provável dependência de fatores luminais testiculares e/ou testosterona por ação parácrina. Outros metabólitos, além da testosterona, influenciaram na síntese e secreção de albumina, como a diidrotestosterona (cenário de modulação hormonal por finasterida), principalmente em epidídimo e ducto deferente. Houve falha no papel antagonista exercido pela flutamida, no cenário da expressão/presença da albumina. Evidenciado pelo contexto da ligadura de túbulos eferentes, sinalizou-se a dependência da albumina da presença ipsilateral de fluido luminal advindo do testículo, principalmente pela alteração da expressão/presença de albumina no segmento inicial do epidídimo. Soma-se a esse cenário de dependência, a presença de espermatozoides (ausentes no contexto do criptorquidismo) e/ou estresse térmico (hipertermia), nos quais, apesar da manutenção de estímulos androgênicos, testículo e fatores luminais, a expressão/presença de albumina mostra-se alterada em todos os órgãos analisados, sendo somente parcialmente restaurada após o retorno da espermatogênese à normalidade (orquidopexia). Ademais à orquestração dos eventos de espermatogênese, experimentos de FIV demonstraram a capacidade da albumina de transcender sua usual atribuição constitutiva, relacionando-se à interação espermatozoide-zona pelúcida (possivelmente via reação acrossômica) e operando como agente potencializador mesmo em contextos de variação androgênica. Com seu evidente papel carreador e a caracterização da dependência de sua expressão gênica e presença proteica frente aos cenários testados nessa tese, desperta-se o interesse para estudos futuros que busquem a compreensão da integração de estímulos autócrinos, parácrinos e endócrinos na espermatogênese, projetando-se uma perspectiva de uso futuro da albumina para a dispensabilidade de fármacos de ação específica no contexto da aquisição de capacidade fértil. Ademais, ao se relacionar a processos espécie-específicos, cria-se um vínculo direto entre a evolução da albumina de vertebrados e a perpetuação gênica desse grupo Abstract: Albumin and its gene family perform important maintenance functions in the body, not being common targets of natural selection. The probable involvement of this molecule in mammals reproduction, however, seems to run counter to this premise. Testing its constitutive condition, this study prioritized the analysis of integrative approaches of the testis-epididymis-vas deferens system and proposed to carry out in adult C57Bl6 mice, through surgical experiments (orchidectomy, efferent tubule ligation, cryptorchidism and orchidopexy) and pharmacological interventions (flutamide and finasteride), the induction of microenvironments, which allowed the emergence of signaling scenarios and the expression of key factors in the context of fertility. These interpretations were measured through transcriptional (RT-PCR and quantitative PCR), translational (immunohistochemistry, morphometry and immunoblotting) and functional (in vitro fertilization, IVF) investigations. The scenario induced by the orchidectomy showed that the events of albumin synthesis and secretion in the epididymis and vas deferens are regulated by the availability of bioactive testosterone, although this single stimulus is not sufficient to maintain the total pattern of gene and protein expression in unilateral orchidectomy (endogenous androgenic stimulus) or bilateral orchidectomy with replacement of injectable testosterone cypionate (exogenous androgenic stimulus), signaling a probable dependence of testicular luminal factors and/or testosterone by paracrine action. Other metabolites, in addition to testosterone, influenced the synthesis and secretion of albumin, such as dihydrotestosterone (scenario of hormonal modulation by finasteride), especially in the epididymis and vas deferens. Flutamide exerted an antagonistic role in the albumin expression/presence scenario. The albumin dependence on the ipsilateral presence of luminal fluid coming from the testis was evidenced in the context of efferent tubule ligation, mainly by the alteration of expression/presence of albumin in the initial segment of the epididymis. It is added to this scenario of dependence, the presence of spermatozoa (absent in cryptorchidism) and/or thermal stress (hyperthermia), in which, despite the maintenance of androgenic stimuli, testis and luminal factors, albumin expression/presence was altered in all analyzed organs, being only partially restored after the return of spermatogenesis to normality (orchidopexy). In addition to the orchestration of spermatogenesis events, IVF experiments demonstrated the ability of albumin to transcend its usual constitutive attribution, relating to the spermatozoa-zona pellucida interaction (possibly via acrosome reaction) and operating as a potentiating agent even in contexts of androgenic variation. With its evident carrier role and the characterization of the dependence of its gene expression and protein presence against the scenarios tested in this thesis, draws out the interest for future studies that seek the understanding of the integration of autocrine, paracrine and endocrine stimuli in spermatogenesis, to the prospect of future albumin use for the dispensability of specific drugs¿ action in the context of the acquisition of fertile capacity. In addition, when relating to species-specific processes, a direct link is created between the evolution of vertebrate albumin and the genetic perpetuation of this group Doutorado Biologia Celular Doutora em Biologia Celular e Estrutural CNPQ 140808/2014-0

Orientadores: Luis Antonio Violin Dias Pereira, Lúcia Elvira Alvares Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: A origem da albumina nos órgãos do trato reprodutor masculino tem sido questionada ao longo dos anos sendo sua presença tecidual constantemente atribuída a um mecanismo de extravasamento do plasma sanguíneo para o espaço extravascular intersticial, atribuindo-se ao fígado o papel de sítio de síntese desta proteína no período pós-natal. O padrão de distribuição da proteína albumina nos tecidos epiteliais de órgãos do trato reprodutor masculino reserva questionamentos quanto à veracidade de seu alcance luminal pelo rompimento de suas barreiras hematoteciduais. Carreador de esteroides; estimulador de células de Leydig; mediador do mecanismo parácrino de comunicação entre células de Sertoli e germinativas; promotor de proliferação celular e mediador de mudanças estruturais em membranas celulares, com suposta participação na reação acrossômica e capacitação do espermatozoide são possíveis papéis atribuídos à albumina no trato reprodutor masculino. A associação da proteína albumina a componentes glicídicos não é usual para mamíferos, porém há respaldo a essa hipótese através das PES (glicoproteínas pré-albumínicas epidídimo-específicas de ovinos) e dados de nosso grupo de pesquisa através do epítopo reconhecido pelo anticorpo monoclonal (Amc) TRA 54 (testicular germ cells immunized to rat). Essa dissertação de mestrado retoma a polêmica discussão centrada na presença, origem, localização e função da albumina no trato reprodutor masculino e se propôs, através de uma abordagem cronológica pós-natal (períodos neonatal, pré-púbere, púbere, adulto e idoso) a rediscutir os fundamentos teóricos associados à principal proteína sérica de mamíferos bem como o dúbio perfil de expressão dessa proteína em Ratos analbuminêmicos Nagase (NAR). Nesse estudo, a presença da proteína albumina foi evidenciada por immunoblotting em todos os grupos e períodos do desenvolvimento pós-natal, apresentando padrão distinto de bandeamento para testículos e epidídimos NAR. A localização celular da proteína albumina foi identificada em camundongos, por imunohistoquímica, principalmente no tecido intersticial e nas células da linhagem germinativa. Testículos de ratos Sprague Dawley adultos apresentaram marcação adicional para células de Sertoli. Testículos e epidídimos de NAR mantiveram reatividade intersticial, sugerindo, ainda que em níveis extremamente baixos, a expressão de albumina. Para epidídimos, foi identificado amplo espectro de perfis de imunomarcação das células epiteliais e estereocílios. Ductos deferentes apresentaram, na região proximal ao epidídimo, imunomarcação citoplasmática e, na região distal, marcação de estereocílios e espermatozoides luminais. Perfis de imunomarcação citoplasmática também foram observados em vesícula seminal, próstata e uretra peniana, principalmente, no período adulto. Por fim, a presença de transcritos de RNAm detectados por ensaios de RT PCR (reação em cadeia de polimerase via transcriptase reversa) para testículos e epidídimos foi confirmada desde o período neonatal até idoso, mostrando-se também presente para ducto deferente a partir da puberdade. A abordagem do desenvolvimento pós-natal revelou um pico de maior expressão da albumina no período adulto com início do declínio registrado no período idoso. Como ressalva final, a confirmação da presença de RNAm para órgãos do trato reprodutor masculino não invalida a hipótese da também presença de albumina circulante, sintetizada, em primeira instância, pelas células hepáticas Abstract: The origin of the albumin in the male reproductive tract has been questioned over the years and their presence tissue constantly assigned to a mechanism for extravasation of plasma into the interstitial extravascular space, assigning the role of the liver as the site of synthesis of this protein in the postnatal period. The distribution pattern of the albumin protein in the epithelial tissues of organs of the male reproductive tract reserves inquiries as to the veracity of their luminal reach through the disruption of their tissue blood-barriers. Carrier steroids; stimulator of Leydig cells; mediator of paracrine mechanism of communication between Sertoli and germ cells; promoter of cell proliferation and mediator of structural changes in cell membranes, with alleged involvement in the acrosome reaction and capacitation of sperm are possible roles of albumin in the male reproductive tract. The association of the albumin protein to glycidyl components is unusual for mammals, but there is support to this hypothesis by the PES (prealbumins epididymis-specific glycoproteins of sheep) and data from our research group through the epitope recognized by the monoclonal antibody (mAb) TRA 54 (testicular germ cells immunized to rat). This dissertation takes up the controversial discussion centered on the presence, source, location and function of albumin in the male reproductive tract and proposed, through a chronological postnatal approach (neonatal, prepubertal, puberal, adult and elderly periods) to revisit the theoretical foundations associated with major serum protein of mammals as well as the dubious expression profile of this protein in Nagase analbuminemic rats (NAR). In this study, the presence of albumin protein was detected by immunoblotting in all groups and periods of postnatal development, with distinct banding pattern in testis and epididymis of NAR. The cellular localization of the albumin protein has been identified in mice by immunohistochemistry mainly in the interstitial tissue and in germline cells. Testes of Sprague Dawley rats showed additional labeling of Sertoli cells. Testes and epididymides of NAR maintained interstitial reactivity, suggesting the expression of albumin even at extremely low levels. To epididymis a broad spectrum of immunostaining of epithelial cells and stereocilia profiles were identified. Vas deferens showed cytoplasmic immunostaining in the region proximal to epididymis, and in the distal region, stereocilia and luminal spermatozoa labeling. Cytoplasmic immunostaining profiles were also observed in the seminal vesicle, prostate and penile urethra, especially in adult period. Finally, the presence of mRNA transcripts detected by RT PCR (reverse transcriptase polymerase chain reaction) assays to testis and epididymis was confirmed from neonates to the elderly, being also present in vas deferens from puberty. The approach of postnatal development revealed a peak with the highest expression of albumin in the adult period beginning to decline at elderly. As a final caveat, the presence of mRNA confirmed for organs of the male reproductive tract does not invalidate the hypothesis of the also presence of circulating albumin in reproductive tissue, which must be synthesized at first instance, by liver cells Mestrado Biologia Tecidual Mestra em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Luis Antônio Violin Dias Pereira Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: "Núcleo curricular essencial" aqui se referem aos tópicos do conhecimento que deveriam ser necessariamente e indispensavelmente abordados no decorrer de uma disciplina. Este estudo descreve o processo de elaboração de um núcleo curricular essencial de embriologia humana para o curso de graduação em medicina, usando o método de Delphi como ferramenta para obtenção de consenso, em um processo democrático e baseado em pesquisa. A partir da identificação de conteúdo essencial, foi feita a reestruturação e elaboração de um livro digital (e-book), contendo animações, exercícios e casos clínicos que priorizam tópicos classificados como essenciais. A aprovação ética para este estudo foi concedida pelo Comitê de Ética em Pesquisa da Universidade Estadual de Campinas (Referência CAAE 59382016.0.0000.5404). Um método Delphi modificado, de duas rodadas, com sete fases, foi usado para identificar tópicos essenciais de conteúdos de embriologia: (1) um questionário inicial foi desenvolvido pela equipe de pesquisa, com seleção dos tópicos de conteúdo de embriologia, (2) a validação do questionário foi realizada por um painel piloto; (3) na primeira rodada do painel os participantes foram solicitados a avaliar a relevância de cada tópico em uma escala Likert e os dados demográficos foram coletados; (4) a seguir foi realizada a análise de consenso e identificação de informações demográficas; (5) a segunda rodada do método de Delphi, os participantes foram convidados a aceitar ou rejeitar os tópicos mais relevantes da rodada anterior, (6) foi realizada a análise de consenso e o processo de seleção final dos tópicos considerados essenciais, (7) a análise estatística envolveu análise de agrupamento multivariada e análise de categorização descritiva. Os resultados estão listados a seguir: (1) Três livros didáticos de embriologia foram selecionados para a seleção de tópicos de conteúdo de embriologia. Um conjunto de 1.577 tópicos brutos foi identificado. Tópicos sinônimos ou semelhantes foram unificados, resultando em 679 tópicos. (2) O tempo médio de resposta ao questionário foi de 53 minutos. (3) Os convites aos painelistas foram enviados a 109 especialistas de oito instituições, e na primeira rodada participaram 57 pessoas (52,3%). Seis dos participantes deixaram seções inteiras sem resposta e suas entradas foram excluídas da análise. (4) O painel de especialistas (n = 51) foi composto por 49% mulheres e 51% homens, e a idade variou de 29 a 70 anos. A faixa etária mais frequente foi 55-59 anos (20%) e 40-44 (20%). No painel, 78% eram médicos, 14% biólogos, 6% cientistas biomédicos e um era enfermeiro (2%). Após análise de consenso, de um total de 679 tópicos em embriologia humana, 10% foram considerados essenciais (n = 69), 32% importantes (n = 215), 44% aceitáveis ??(n = 300) e 12% não exigidos (n = 79). (5) 69 tópicos selecionados para a segunda rodada foram classificados de acordo com a taxa de aceitação. Cinco tópicos alcançaram índice de aceitação igual ou inferior a 80% e foram rejeitados. (6) O núcleo recomendado para o tema Embriologia Humana selecionado pelo painel Delphi, após análise de consenso, foi composto por 64 itens. (7) Os resultados obtidos com o método Delphi foram corroborados pelas análises fatoriais e multivariadas. Nenhuma das seis características demográficas (sexo, faixa etária, titulação, ano de graduação, especialidade médica e ano da última especialização dos respondentes) pôde ser significativamente associada aos dois clusters produzidos após a análise multivariada de agrupamento. No entanto, o núcleo curricular sugerido por especialistas médicos foi de 64 tópicos, enquanto o núcleo curricular sugerido por especialistas não médicos foi de 204 tópicos. A concordância entre esses dois grupos - coeficiente kappa (0,0535) - foi significativa (p

Orientadores: Luis Antonio Violin Dias Pereira, Suzana de Fatima Paccola Mesquita Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Durante o processo de maturação epididimária, proteínas secretadas pelo epidídimo interagem com os espermatozoides modificando-os funcionalmente. Cerca de 75% das proteínas que participam da maturação epididimária são secretadas pelas células epiteliais do segmento inicial e cabeça do epidídimo e 48% destas proteínas tem a síntese dependente de dihidrotestosterona (DHT), a qual é sintetizada a partir da testosterona pela ação da enzima 5 ? redutase. A DHT é de extrema importância para a fisiologia do sistema reprodutor masculino. Níveis elevados de DHT na vida adulta podem predispor a vários distúrbios, tais como a alopecia androgênica. Com o intuito de se minimizar os efeitos da DHT, a finasterida foi o primeiro inibidor da 5 ? redutase que recebeu aprovação clínica para o tratamento desses distúrbios.Um público cada vez mais jovem utiliza a finasterida como um método preventivo e paliativo contra a alopecia androgênica, com isso, estudos dos efeitos da finasterida no sistema reprodutor masculino são de grande interesse clínico. O ojetivo desse estudo foi avaliar as possíveis alterações no segmento da cabeça do epidídidmo e na qualidade espermática em animais submetidos ao tratamento agudo (15 dias), crônico (56 dias) e animais que tiveram o tratamento (agudo e crônico) interrompido por um período de 30 dias. Na administração aguda (15 dias) de finasterida em ratos observou-se algumas alterações na integridade da membrana plasmática do espermatozoide. A administração crônica (56 dias) de finasterida em ratos leva a alterações no epidídimo, tais como: redução do peso, alterações morfométricas-estereológicas, diminuição do tempo de trânsito do espermatozoide, redução da motilidade, alterações na integridade da membrana do espermatozóide e redução nos parâmetros de fertilidade desses animais. Mesmo com a interrupção do tratamento com finasterida (por 30 dias) a qualidade do espermatozóide continua comprometida. Dessa forma, estudos adicionais devem ser realizados para complementar o conhecimento existente sobre a fisiologia do epidídimo após a depleção DHT, sobre o tempo que necessário para a recuperação dos parâmetros de fertilidade após a interrupção do tratamento com finasterida, e se estes parâmetros podem ser totalmente recuperados Abstract: During epididymal maturation, proteins secreted by epididymis functionally interact with the spermatozoa modifying it. About 75% of the proteins that participate in the epididymal maturation are secreted by the epithelial cells of the initial segment and caput of the epididymis and 48% of the synthesis is dependent on dihydrotestosterone (DHT), which is synthesized from testosterone by the action of the enzyme 5 ? reductase.The DHT is extremely important for the physiology of the male reproductive system. High levels of DHT in adulthood may predispose to various disorders such as androgenic alopecia. In order to minimize the effects of DHT, medications were produced with the purpose of inhibit the action of 5 ?-reductase and among those medications the finasteride was the first 5 ? reductase inhibitor that received clinical approval for the treatment of these disorders. A public increasingly young uses finasteride as a preventive and palliative method and against androgenic alopecia, in this way; studies of the effects of finasteride in the male reproductive system are of clinical and commercial interest. The aim of this study was to evaluate the possible alterations in the caput epididymis and sperm quality in animals submitted to acute (15 days) and chronic (56 days) treatment and animals with 30 days post- treatment. Acute administration of finasteride in rats (15 days) was observed reduction in sperm membrane integrity. Chronic administration of finasteride in rats (56 days), leads to changes in the epididymis, such as weight reduction, morphometric-stereological changes, decreased transit time of sperm, motility of the sperm membrane integrity and consequently in fertility parameters of these animals. Even with the interruption of treatment with finasteride (30 days) sperm quality remains committed. Thus, further studies should be performed to complement the existing knowledge on the physiology of the epididymis after DHT depletion, on the time that is needed for the recovery of fertility parameters after interruption of finasteride treatment, and if it these parameters can be fully recovered Doutorado Histologia Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Luis Antonio Violin Dias Pereira Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: O processo de fecundação em mamíferos depende de uma seqüência de eventos que culminam na ativação do oócito pelo espermatozóide. A diferenciação completa das células germinativas testiculares em células com capacidade fecundativa envolve testículos, epidídimos, ductos deferentes e trato reprodutor feminino. No epidídimo, a superfície dos espermatozóides pode sofrer diversas modificações, em um processo conhecido como maturação epididimária. Diversas proteínas sintetizadas e secretadas pelas células epiteliais do epidídimo serão posteriormente localizadas na superfície ou mesmo no interior da vesícula acrossômica do espermatozóide. A aquisição da capacidade de fertilização pelo spermatozóide tem sido correlacionada à esta nova organização das moléculas de membrana proporcionada durante o trânsito epididimário. A obtenção de anticorpos monoclonais que reconhecem os antígenos expressos pelas células germinativas testiculares durante seus processos contíguos de diferenciação, ou pelas células dos ductos pelos quais os espermatozóides transitam durante o processo de maturação tem constituído uma importante estratégia para permitir a geração de um mapa das moléculas que atuam na preparação do espermatozóide para a fecundação. O anticorpo monoclonal (Amc) TRA (testicular germ cells immunized to rat - monoclonal antibody) 54 reconhece um antígeno localizado em espermátides dos túbulos seminíferos de camundongos C57 BL/6 com idade superior a 24 dias pós-parto e também um antígeno expresso nas células epiteliais da cabeça do epidídimo e em espermatozóides da luz deste órgão. A molécula secretada percorre a luz do epidídimo no sentido ântero-posterior e, neste percurso, é incorporada pelos espermatozóides em trânsito. Com o intuito de contribuir para a compreensão dos complexos mecanismos que preparam o espermatozóide para a fecundação, o presente trabalho buscou identificar e reconhecer a estrutura protéica e a função biológica do antígeno reconhecido pelo Amc TRA 54 nas células epiteliais do epidídimo. No futuro, os resultados obtidos poderão contribuir com a geração de novas ferramentas clínicas para a solução de problemas relacionados à biologia da reprodução Abstract: In mammals, fertilization depends on a sequence of events that culminates in the activation of the oocyte by the spermatozoa. The complete differentiation of the testicular germ cells in cells with fertilization ability involves the testis, epididymis, vas deferens and female reproductive organs. In the epididymis, the membrane surface of the spermatozoa may be modified, through a process known as epididymal maturation. Several proteins synthesized and secreted by the epididymal epithelial cells can be further located on the spermatozoa membrane surface or even though inside its acrosomal vesicle. The acquisition of the fertilization ability by the spermatozoa has been related with a new molecular organization of the membrane provided during the epididymal transit. The production of monoclonal antibodies (mAb) that recognizes antigens exclusively expressed by testicular germ cells or by the cells of the ducts through the spermatozoa passes during its maturation has been considered an important approach to permit the elaboration of the molecular map involved in the spermatozoa preparation. The mAb TRA (testicular germ cells immunized to rat - monoclonal antibody) 54 recognizes an antigen located in spermatids of seminiferous tubules of C57 BL/6 mice more than 24 days old and also in a specific population of epithelial cells in epididymal caput and in the luminal spermatozoa. The synthesis and release of the epididymal antigen occur in an androgen-dependent manner and independent of the testicular expression. Released antigen moves down the epididymis and is further incorporated by luminal spermatozoa. This work was performed in order to comprehend the complex mechanisms that prepare spermatozoa for the fertilization process. The molecular structure of the epididymal protein and its biological functions were investigated and solved. In a near future, the obtained results can contribute with new clinical tools for solving problems in reproductive biology Doutorado Histologia Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Luis Antonio Violin Dias Pereira Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: As disciplinas tradicionais de embriologia humana exigem do aluno um rápido entendimento de uma série de mudanças que ocorrem simultaneamente em uma escala macro e microscópica no embrião. Os estudantes têm dificuldade em compreender os conceitos apresentados e criar mentalmente imagens tridimensionais dos processos envolvidos. O estudo do desenvolvimento humano normal e anormal é importante para facilitar o entendimento da anatomia humana e para fornecer a base fisiopatológica da correção cirúrgica ou tratamento clínico dos defeitos congênitos. No presente trabalho foi desenvolvida uma metodologia de ensino para ilustrar e aumentar a compreensão da embriologia humana normal e os defeitos congênitos. A estratégia elaborada envolve a produção e utilização de filmes de técnicas em reprodução assistida e de correção cirúrgica de malformações congênitas, animações desenvolvidas em Flash MX (Macromedia) e a documentação digital macro e microscópica de embriões, fetos e neonatos encaminhados para autópsia. Recém-nascidos e crianças portadores de defeitos congênitos, submetidos à tratamento clínico e cirúrgico também foram documentados. Todas estas imagens obtidas, incluindo os ultra-sons e radiografias, foram cuidadosamente descritas, editadas, catalogadas e organizadas em um banco digital de imagens e dados. Os achados da autópsia, história clínica e outras informações relevantes também foram inseridos no banco de dados. Estas ferramentas de ensino foram utilizadas nos módulos Morfofisiologia Humana I e II do curso de Medicina da Universidade Estadual de Campinas. As aulas de embriologia foram divididas em dois momentos. No primeiro foi descrito o desenvolvimento normal das estruturas corporais, utilizando-se dos esquemas e animações produzidas. No segundo momento, histórias clínicas, imagens de autópsias, de exames imaginológicos e cirurgias corretivas foram apresentadas aos alunos, encorajando-os a identificar as malformações e discutir as histórias clínicas, diagnóstico e terapêutica. O material didático também foi organizado e disponibilizado em um ambiente interativo, o qual foi usado pelos alunos como um complemento às aulas. No final do módulo tanto o material didático quanto a metodologia de ensino desenvolvidos neste trabalho foram avaliados através de instrumentos quantitativos e qualitativos. A maioria dos alunos aprovou a metodologia e enfatizaram a importância da integração entre as disciplinas básicas e clínicas. Esta metodologia se mostrou útil para solucionar uma dificuldade importante associada às metodologias de ensino em instituições médicas, ou seja, a falta de integração entre disciplinas básicas e clínicas Abstract: Traditional human embryology courses are demanding in that they require students to rapidly understand the various changes that occur simultaneously on a macro and on a microscopic scale in embryos. Students have difficulty in grasping the concepts presented and in creating three-dimensional mental images of the processes invblved. Knowledge of normal and abnormal human development is important for understanding the pathophysiology, clinical treatment and surgical repair of malformations. In this study, we developed a teaching methodology to illustrate and enhance the comprehension of normal human embryology and of birth defects. The strategy involved movies of the assisted reproduction techniques, congenital malformations correction surgeries, the Flash MX (Macromedia) animation development and the macro- and microscopical digital documentation of embryos, fetuses and neonates following autopsy. Newborn babies were also photographed in a nursery. The ultrasound and macro- and microscopic images were carefully described, computer edited, catalogued and organized into a digital image database. The autopsy findings, clinical history and other relevant data were aiso stored in the database. These teaching tools were used in the Human Morpho-Physiology course of the medical curriculum at State University of Campinas. The embryology lectures were divided into two parts. During the first part, the development of the body's structures was explained, while in the second, images of selected autopsies were shown to the students, who were also encouraged to find and discuss the malformations and their clinical history, diagnosis and therapeutics. The teaching materiais were also organized on an educational software used by the students as a complement to the lectures. At the end of the course, research methodology was used aiming at evaluating the developed teaching material and method via an attitudinal measuring scale instrument. Most of the students approved of the method and emphasized the importance of integration between basic and clinical disciplines. This approach proved useful for solving an important difficulty associated with teaching methods in many medical institutions, namely, the lack of integration between basic and clinical disciplines Doutorado Histologia Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientadores: Luis Antonio Violin Dias Pereira, Paulo Pinto Joazeiro Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: O processo de fecundação em mamíferos depende de uma seqüência de eventos que culminam na ativação do oócito pelo espermatozóide. A diferenciação completa das células germinativas testiculares em células com capacidade fecundativa envolve não somente o testículo, mas também o epidídimo, ducto deferente e trato reprodutor feminino. No epidídimo acontece a maturação epididimária dos espermatozóides, pela qual ocorrem alterações no padrão molecular da superfície do gameta, visando a capacidade de fecundação. Diversas proteínas sintetizadas pelas células epiteliais do epidídimo, inicialmente liberadas na luz deste órgão, parecem ser posteriormente localizadas na superfície ou mesmo no interior da vesícula acrossômica do espermatozóide. A aquisição da capacidade de fertilização pelo espermatozóide tem sido correlacionada com a nova organização molecular da membrana adquirida durante o fluxo do mesmo a partir da cabeça em direção à cauda do epidídimo. A obtenção de anticorpos monoclonais que reconhecem os antígenos expressos pelas células germinativas testiculares durante seus processos contíguos de diferenciação, bem como aqueles expressos pelas células dos ductos pelos quais os espermatozóides transitam durante o processo de maturação têm constituído importante estratégia para permitir a geração de um mapa das moléculas que atuam na preparação do espermatozóide para a fecundação. O anticorpo monoclonal (Amc) TRA (testicular germ cells immunized to rat- monoc/onal antibody) 54 reconhece um antígeno localizado em espermatócitos e espermátides dos túbulos seminíferos de camundongos C57 BL/6 com idade superior a 24 dias pós-parto (d.p.p.). Resultados preliminares mostraram que o mesmo Amc -reconhece um antígeno nas células epiteliais da cabeça do epidídimo, bem como espermatozóides da luz deste órgão. Este estudo teve por objetivo caracterizar a expressão do antígeno reconhecido pelo Amc TRA 54 nas células epiteliais do epidídimo quanto à ontogenia, características bioquímicas e regulação da expressão. Em conjunto, os dados obtidos com o desenvolvimento deste trabalho poderão auxiliar no esclarecimento do modelo da expressão do antígeno identificado em células germinativas e em células somáticas epiteliais e, adicionalmente, poderão permitir inferências acerca do papel funcional desta molécula na biologia da reprodução Abstract: In mammals, fertilization depends on a sequence of events that culminates in the activation of the oocyte by the spermatozoa. The complete differentiation of the testicular germ cells in cells with fertilization ability involves the testis, epididymis, vas deferens and female reproductive organs. In the epididymis, the membrane surface of the spermatozoa may be modified, t hrough a process k nown as epididymal maturation. S everal proteins synthesized and secreted by the epididymal epithelial cells can be further located on the spermatozoa membrane surface or even though inside its acrosomal vesicle. The acquisition of the fertilization ability by the spermatozoa has been related with a new molecular organization of the membrane provided during the epididymal transit. The production of monoclonal antibodies (mAb) that recognizes antigens exclusively expressed by testicular germ cells or by the cells of the ducts through the spermatozoa passes during its maturation have been important approach to permit the elaboration of the molecular map involved in the spermatozoa preparation. The mAb TRA 54 recognizes an antigen located in spermatocytes and spermatids of the seminiferous tubules of C57 BU6 mice more than 24 days old. Preliminary results showed that this mAb also recognizes an antigen in the epithelial cells of the caput of the epididymis and in the luminal spermatozoa. This work was performed in order to obtain additional information about the antigen recognized by the mAb TRA 54 in the epididymal epithelial cells for ontogenic expression, biochemical characteristics and expression regulation. The results obtained with the development of this work could contribute to elucidate the expression pattem of the antigen recognized by the antigen identified in both germinative and somatic cells and, -additionally, could permit the formulation of hypothesis around the functional role of this molecule in the reproductive biology Mestrado Histologia Mestre em Biologia Celular e Estrutural