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ABSTRACT: Suboptimal LH surges can lead to delayed or absent ovulation during reproductive management programs in cattle. Several signaling pathways may enhance the LH signal, potentially including growth factors. In the present study, we determined whether Fibroblast growth factor 18 (FGF18), which mimics some actions of the LH surge on granulosa cells, may potentiate the action of a suboptimal dose of LH using an established bovine granulosa cell (GC) culture system. Addition of recombinant FGF18 increased the concentration of progesterone (P4) in the culture medium. A combination of LH and FGF18 in the culture medium increased the abundance of mRNA encoding EREG, EGR1 and EGR3, proteins that are early modulators of the LH-induced pre-ovulatory cascade. This study demonstrated that FGF18 may be a co-factor in the regulation of the pre-ovulatory cascade in bovine ovarian granulosa cells.

ABSTRACT: Treatment with prostaglandin F2α (PGF) induces ovulation and increases conception rates in cows, while improving embryo production in buffalos. However, its effect on superovulated cows is unknown. This study verified whether single PGF administration concurrent with artificial insemination (AI) improves fertilization and embryo production rates in superovulated cows. In each replicate, embryo donor cows were equally allocated to two groups: the untreated control and PGF groups. The latter of which received 482 µg of cloprostenol concurrent with the first AI. Each cow (n = 35) was subjected to two superovulations (SOV) in a crossover design (total = 70 embryo collections). In the control and PGF groups, respectively, the observed responses were [median (95% CI)]: 12 (10-18) and 15 (12-18) total structures, 9 (7-11) and 7 (6-10) viable embryos, 1 (0-1) and 1 (1-3) degenerated embryos, and 1 (0-3) and 2 (0-5) oocytes (P > 0.05). In conclusion, single PGF treatment concurrent with the first AI did not affect embryo production in superovulated cows.

There is growing evidence that histone lysine demethylases (KDMs) play critical roles in the regulation of embryo development. This study investigated if KDM7A, a lysine demethylase known to act on mono-(me1) and di-(me2) methylation of H3K9 and H3K27, participates in the regulation of early embryo development. Knockdown of KDM7A mRNA reduced blastocyst formation by 69.2% in in vitro fertilized (IVF), 48.4% in parthenogenetically activated (PA), and 48.1% in somatic cell nuclear transfer (SCNT) embryos compared to controls. Global immunofluorescence (IF) signal in KDM7A knockdown compared to control embryos was increased for H3K27me1 on D7, for H3K27me2 on D3 and D5, for H3K9me1 on D5 and D7, and for H3K9me2 on D5 embryos, but decreased for H3K9me1, me2 and me3 on D3. Moreover, KDM7A knockdown altered mRNA expression, including the downregulation of KDM3C on D3, NANOG on D5 and D7, and OCT4 on D7 embryos, and the upregulation of CDX2, KDM4B and KDM6B on D5 embryos. On D3 and D5 embryos, total cell number and mRNA expression of embryo genome activation (EGA) markers (EIF1AX and PPP1R15B) were not affected by KDM7A knockdown. However, the ratio of inner cell mass (ICM)/total number of cells in D7 blastocysts was reduced by 45.5% in KDM7A knockdown compared to control embryos. These findings support a critical role for KDM7A in the regulation of early development and cell lineage specification in porcine embryos, which is likely mediated through the modulation of H3K9me1/me2 and H3K27me1/me2 levels, and changes in the expression of other KDMs and pluripotency genes.

ABSTRACT: Previous studies have evaluated the effects of different reproductive procedures on discomfort markers in sheep and cattle. Such studies may help stimulate the adoption of techniques that are more beneficial for animal welfare. However, markers that are commonly used to evaluate discomfort are highly influenced by external factors. To overcome this, several systemic markers can be evaluated to more precisely identify stress, pain, and inflammation. Such markers include cortisol, acute phase proteins, bradykinin, and substance P. We aimed to review the potential markers of stress, pain, and inflammation, and discuss how and when they are regulated after different stimuli related to reproductive procedures in cattle and sheep. Furthermore, we aimed to review how reproductive procedures with different degrees of invasiveness cause stress and provide information that may help develop strategies to limit animal discomfort.

Conjugated linoleic acid (CLA) might be able to improve the cryotolerance of in vitro-produced (IVP) embryos. The effect of two CLA isomers on the cryotolerance of bovine IVP embryos, as well as that of the stage of embryonic development and the method used for cryopreservation was evaluated by three experiments. In Experiment 1, oocytes (n = 3,917) were fertilized in vitro and cultured with 0, 50, 100, or 200 ?M trans-10, cis-12 (t10, c12 CLA). In Experiment 2, fertilized oocytes (n = 2,131) were cultured with 100 ?M t10, c12 or cis-9, trans-11 (c9, t11 CLA), or a combination of both isomers. The embryos were vitrified at the blastocyst (BL) or the expanded blastocyst (EB) stage. In Experiment 3, oocytes (n = 1,720) were fertilized and cultured with or without 100 ?M t10, c12 CLA, and the blastocysts were vitrified or frozen. Blastocyst development rate as well as the rates of re-expansion and hatching after thawing was recorded. Moreover, the mean cell number and mRNA expression of acetyl-CoA carboxylase (ACC1) and stearoyl-CoA desaturase (SCD1) as well as fatty acid synthase (FASN) multienzyme complex were determined. In Experiment 1, the highest concentration of t10, c12 CLA that did not reduce blastocyst development rate was 100 ?M. In Experiment 2, the rates of re-expansion and hatching among the EBs obtained through IVP after supplementation with t10, c12 CLA (73.1% and 57.7%), with c9, t11 CLA (80.0% and 68.6%), with the combination (78.3% and 52.2%), and with the control group (85.4% and 58.3%) were similar. At the BL stage, the rates of re-expansion and hatching were lower than those at the EB stage, and CLA combination allowed a hatching rate (8.0%) lower than that observed in the control group (40.0%). In Experiment 3, the hatching rates for vitrified EBs (vitrified control; 67.4%) and vitrified CLA EBs (65.8%) were higher than those obtained for frozen EBs, exposed (13.3%) or not exposed (28.6%) to CLA. In addition, in Experiment 3, the hatching rate was higher at the EB stage in vitrified groups, while the rates of BL and EB were similar in frozen groups, thus proving that vitrification was more efficient than freezing for IVP bovine embryos. In Experiment 3, CLA isomer t10, C12 did not influence the embryonic cell number or mRNA expression of ACC1 and SCD1 enzymes, but decreased the mRNA expression of FASN. In conclusion, 100 ?M CLA did not affect subsequent embryonic development. However, neither CLA isomer improved the cryotolerance of IVP bovine embryos.

O presente estudo teve como objetivo avaliar a capacidade crioprotetora das lipoproteínas de baixa densidade (LDL) presentes no plasma de gema de ovo, adicionado ao trihidroxiaminometano (TRIS) para congelar sêmen ovino. Trinta e seis ejaculados foram coletados para formar 12 "pool". Cada alíquota de sêmen foi diluída em TRIS-gema de ovo (TRISG) ou TRIS- plasma de gema de ovo (TRISP) antes de congelar o sêmen. Para a obtenção do plasma da gema de ovo, foi utilizado o método de ultracentrifugação. Após o descongelamento, não houve diferença entre os dois extensores em relação aos parâmetros seminais (motilidade, viabilidade, membrana acrossômica e plasma). No entanto, no Teste de Termo Resistência Lenta (TTRL - 4h/38°C), o sêmen congelado com TRISP resultou no aumento do número de espermatozoides com acrossoma intacto (P

The objective of this study was to investigate the mRNA expression and protein localization of Grb10 gene in bovine cumulus-oocyte complexes (COCs) from different follicle sizes. Firstly, it was investigated the mRNA expression to correlate with maturation rates. COCs from follicles at 1-3, 4-6, 6-8 and >8mm were used to evaluate Grb10 gene expression by qRT-PCR assay and nuclear maturation rates. It was observed that more competent oocytes (from follicles at 6-8 and >8mm; P>0.05), had lower Grb10 mRNA expression levels when compared to the oocytes from follicles at 1-3 and 4-6mm (P>0.05). After it was performed an immunofluorescence analysis in COCs from different follicle sizes (1-3, 4-6, 6-8 and >8mm) to investigate Grb10 protein localization. Samples were incubated with primary antibody: Polyclonal rabbit anti-Grb10 (1:100). Primary antibody was detected using goat anti-rabbit IgG antibody conjugated with Alexa Fluor 488 (1:500). Positive fluorescence signal was detected in all analyzed samples but less evident in COCs from largest follicles. These results characterized Grb10 gene in bovine COC and provide evidences for its involvement during oocyte molecular maturation.

Cell therapy has shown encouraging perspectives for human and veterinary medicine. Experimentally, genetic manipulation allows to mark and locate allogeneic cells. However, this makes their genotype/phenotype different from non-marked cells used clinically. Alternatively, the presence of the Y-chromosome enables male donor cells detection in female organisms. However, the concentration of engrafted cells may be minimal in tissues, due to systemic distribution. In this study, a nested-PCR multiplex test was developed, aiming to increase the sensitivity of the presence/absence diagnosis of male mice adipose-derived (ADSC-Y) and bone marrow mononuclear (BMNC-Y) cells in samples of blood and lungs from females, after endovenous transplantation. Four females received placebos; four females received ADSC-Y from two males; and four females received BMNC-Y from two males. The PCR first-step included two primer sets (multiplex): one for amplification of a Y-chromosome fragment (SRYout; 300bp); the other for amplification of an X-chromosome (DXNds3 gene) fragment. In the PCR second-step, one primer set (SRYinn) was used for amplification of a 110bp fragment, restrained in the SRYout amplification product. The PCR internal control (DXNds3 gene) was detected in all DNA samples, whereas the SRY gene external fragment (300bp) was detected exclusively in ADSC-Y and BMNC-Y pure DNA samples. The SRY gene internal fragment (110bp) was detected in 100% of the blood and lung samples from the ADSC-Y and BMNC-Y female recipients. The nested-PCR technique increased sensitivity and reliability for molecular diagnostic of presence or absence of male mice cells in body fluids and tissues of female recipients after endovenous transplantation.

The main objective of this study was to detect the steroidogenic effects of Ang II in bovine theca cells in vitro. Bovine theca cells were obtained from follicles (larger than 10mm of diameter) collected from a local abattoir and submitted to different treatments in a sequence of experiments. In experiment 1, CYP17A1 mRNA profile was evaluated in LH- (10ng ml-1) and Ang II-treated (0.1µM) theca cells. In experiment 2, a dose-response effect of Ang II (0.001; 0.1 e 10µM) plus insulin (100ng ml-1) and LH (100ng ml-1) was evaluated on steroidogenesis of bovine theca cells. Experiment 3 explored the effects of saralasin (an antagonist of Ang II receptors) on steroid production and steroidogenic enzymes regulation in theca cells. After 24 hours, culture media from experiments 2 and 3 was collected to evaluate testosterone and androstenedione levels by High-Performance Liquid Chromatography. In parallel, mRNA levels of key steroidogenic enzymes (HSD3B2, CYP11A1, CYP17A1) and STAR were assessed by RT-PCR. There was no difference in testosterone and androstenedione production between treated and controls groups, as well as in mRNA levels of the evaluated genes. In conclusion, the results suggest that Ang II does not regulate steroidogenesis in bovine theca cells

ABSTRACT: Gestation length in swine has a considerable amplitude and both early and delayed parturition are common. This variation increases the occurrence of unassisted farrowing and could lead to a wide-ranging age at weaning for piglets born from one batch. Supervision of sow parturition is crucial to reduce mortality of neonate piglets. To facilitate assistance, induction of farrowing using prostaglandin F2α (PGF) has been widely used in batch farrowing systems, whereby synchronization would concentrate the time of farrowing, allowing for better organization of employees. However, a viable alternative method that can be implemented to manage farrowing is to sustain high progestagen levels in the final days of gestation and, consequently, prevent early parturition. Efficient techniques to delay farrowing such as using oral progestagen supplementation have been previously described, but are only recently being considered for commercial use. The present manuscript reviews publications regarding delaying parturition and discusses the use of intravaginal devices (IVDs) containing progestagen. There is limited data addressing the effect of progestagen treatment during gestation on productive and reproductive performance. Therefore, future studies should focus on improving synchronization protocols following progestagen supplementation and evaluating piglet viability and sow fertility, before widely using progestagen supplementation to manipulate parturition.

The aim of this work was to evaluate the effect of heat stress during oocyte maturation on ovine in vitro embryo production. Ovaries were collected at abattoirs and oocytes retrieved from follicles ranging from 2 and 6 mm in diameter. After selection, all oocytes, in 10 replicates, were placed in in vitro maturation (IVM) during 24 hours. The oocytes were submitted to heat stress at 41º C during 3, 6, 12, 18 and 24 hours and were further transferred to 39º C in order to complete IVM, which was the temperature of maturation of control oocytes. Embryonic development was determined on days 3, 4, 5, and 8 post-fertilization. Embryo evaluation was performed as total cell count by DAPI staining and determination of positive blastomere for apoptosis by the TUNEL assay. We observed that heat stress diminishes (P < 0.05) oocyte maturation capacity in accordance with exposure time at 41º C. In the group of oocytes incubated at 39 ºC, 70.70% matured, while in the groups exposed to heat stress at 41º C, only 45.28%, 35.17%, 12.30%, 9.74% and 4.60% matured after 3, 6, 12, 18 and 24 hours of incubation, respectively. The duration of exposure to heat stress was inversely proportional (P < 0.05) to embryonic developmental capacity and directly proportional (P < 0.05) to the number of blastocysts positive to apoptosis. However, the cleavage rate and embryonic development from 8 to 16 cells and morulae stages were affected by heat stress (P > 0.05) only up to 18 hours of incubation. The results allow the conclusion that heat stress during oocyte in vitro maturation reduces the quantity and quality of ovine embryos produced in vitro determined by the high incidence of apoptosis.

The objective of this study was to evaluate the efficiency of progestagen intravaginal devices (IVDs) in preventing parturition in sows by determining the effect of delaying parturition on the alive/total born piglets ratio. Evaluations of IVDs containing 0.5, 1.0 or 1.5g progesterone (P4) showed they were not effective in delaying parturition at any dosage tested. In a second experiment, seventy-five sows at day 112 of pregnancy were equally distributed (n=15 per group) in the following treatments: prostaglandin (PGF2α; 250µg sodium cloprostenol; control group) or PGF2α and simultaneous insertion of an IVD containing medroxyprogesterone acetate (MPA) for 48h. Control sows initiated labor 27.7±1.6h after PGF2α injection. The mean time (±SEM) between PGF2α administration and parturition was 72.1±8.8h, 72.7±3.8h, 82.7±7.1h and 81.8±3.5h for MPA 100, 200, 400 and 800mg, respectively, differing from control group (P0.05). These findings confirm that IVDs impregnated with MPA can effectively prevent parturition in sows without affecting the alive/total born piglets ratio and therefore represent an alternative to avoid weekend farrowing in swine herds.

O presente estudo teve como objetivo avaliar o efeito da Ang-(1-7) e de seu receptor (MAS) na regulação da ovulação. No experimento I, utilizando um modelo in vitro de cultivo de células foliculares, foi avaliado o efeito do tratamento com Ang-(1-7) ou do bloqueio do receptor MAS através do inibidor d-Ala7-Ang-(1-7) (A-779) na expressão de RNAm para epirregulina (Ereg; um marcador inicial do processo de ovulação) em células da granulosa. No experimento II, foi utilizado um modelo in vivo de injeção intrafolicular no qual vinte vacas tiveram o ciclo estral sincronizado e, quando os folículos atingiram um diâmetro mínimo de 12mm, foi realizada a injeção intrafolicular de A-779 ou solução salina 0,9%. No momento da injeção intrafolicular, foi realizada uma aplicação IM de análogo de GnRH. A suplementação com Ang-(1-7) ou o bloqueio de seu receptor MAS em sistema de cultivo de células da granulosa não alteraram o padrão de expressão de RNAm para Ereg. A aplicação intrafolicular de A-779 (10-5M) não bloqueou a ovulação quando realizada antes do início do pico esperado de LH (100% das vacas ovularam nos grupos A-779 e controle), sugerindo que a Ang-(1-7) não possui papel relevante no início da cascata ovulatória em bovinos.This study aimed to evaluate the effect of Ang-(1-7) and its receptor (MAS) in the regulation of the ovulatory cascade. In the experiment I, the effect of Ang-(1-7) or d-Ala7-Ang-(1-7) (A-779; Ang-(1-7) antagonist) on the epirregulin (Ereg; initial marker of ovulation process) mRNA expression in granulosa cells was assessed using an in vitro model of follicular cell culture. In experiment II, it was used an in vivo intrafollicular injection model, in which twenty cows had their follicular waves synchronized and the ovarian follicular size was daily monitored by ultrasound. Follicles that reached a minimum diameter of 12mm were injected with A-779 or saline 0.9%. At the time of the intrafollicular injection, cows were challenged with an intramuscular application of GnRH analogue. Ang-(1-7) or the blockade of its receptor MAS had no effect in Ereg mRNA expression in granulosa cells cultured in vitro. Likewise, the intrafollicular injection of MAS receptor inhibitor (10-5M of A-779) did not block ovulation before the expected time of LH peak (100% of the cows ovulated after GnRH challenge in the treatment and control groups), suggesting that Ang-(1-7) has no role in the early ovulatory cascade in cattle.

Neospora caninum é um protozoário de grande importância na pecuária, por determinar problemas reprodutivos principalmente em bovinos. Os gerbils (Meriones unguiculatus) podem atuar como modelos experimentais para reproduzir a neosporose aguda de bovinos. Neste trabalho, foram formados dois grupos de gerbils (n=10), inoculados com taquizoítos de N. caninum (cepa NC-1) nas doses de 5x10(6) taquizoítos ml-1 (G1) ou de 5x10(5) taquizoítos ml-1 (G2), doses capazes de induzir infecção aguda. Cérebro, medula espinhal, coração, pulmão, fígado, rins e baço foram coletados e a técnica de PCR foi realizada a partir das amostras de tecidos e órgãos. Na maioria dos animais, o DNA do N. caninum foi detectado pelo menos em cinco tecidos, considerando ambos os grupos (12/20; 60%). No grupo 1, a frequência de detecção de DNA, na totalidade das amostras, foi maior (52/70; 74,28%) quando comparada ao grupo 2 (38/70; 54,28%). A partir desses resultados, pode-se afirmar que o protozoário replicou eficientemente após inoculação e se disseminou pelos tecidos. Além disso, demonstrou-se que gerbils podem ser utilizados como modelo de infecção aguda pelo N. caninum, apresentando sinais clínicos da neosporose.Neospora caninum is a protozoan of great importance for livestock, mainly by causing reproductive diseases in cattle. Gerbils (Meriones unguiculatus) may be a model to reproduce experimental acute neosporosis of cattle. In this study two groups of gerbils were formed (n=10) and gerbils were inoculated with N. caninum tachyzoites (NC-1 strain) at two different doses appropriate to cause acute neosporosis: 5x10(6) tachyzoites ml-1 (G1) or 5x10(5) tachyzoites ml-1 (G2). Brain, spinal cord, heart, lung, liver, kidneys and spleen were collected and PCR was performed using samples of these tissues and organs. DNA of N. caninum was detected in at least five tissues for most animals (12/20; 60%) considering both groups. In group 1, the frequency of DNA detection, evaluating all samples, was higher (52/70; 74.28%) compared to group 2 (38/70; 54.28%). These results showed that the protozoan replicated efficiently after inoculation spreading by several tissues. Also, was demonstrated that gerbils can be used as model for acute infection with N. caninum showing clinical signs of neosporosis.

O objetivo deste estudo foi determinar a presença de anticorpos anti-Neospora caninum em amostras coletivas de leite, através da reação de imunofluorescência indireta (RIFI). Para isso, foram coletadas amostras do leite dos tanques refrigerados de 36 rebanhos, das quais foram selecionadas 14 para coletas de amostras individuais de soro sanguíneo e de leite das vacas. Encontrou-se correlação em 12 dos 14 rebanhos selecionados para a amostragem individual dos animais, em comparação à detecção de anticorpos nas amostras coletivas de leite. Foi observada uma concordância de 76% comparando-se o resultado das amostras coletivas com os resultados individuais de leite. Observaram-se baixos títulos de anticorpos (50) no soro sanguíneo dos animais soropositivos, cujos resultados da RIFI no leite coletivo e no sangue foram discordantes. Assim, a partir dos resultados deste estudo, pode-se concluir que a utilização de testes sorológicos para detecção de anticorpos anti-N. caninum em amostras coletivas de leite através da RIFI pode ser uma opção ao diagnóstico para a triagem de rebanhos positivos bem como para estudos epidemiológicos.The aim of this study was to determine the presence of anti-N. caninum in the bulk milk samples by indirect immunofluorescence assay (IFAT). For this, it was collected samples of milk from refrigerated tanks from 36 herds, of which 14 were selected for sampling of individual blood serum and milk of cows. It was found concordance for 12 of the 14 herds selected for samples of individual animals, compared to the detection of antibodies in the bulk milk samples. Concordance was of 76% when comparing the results of the pooled sample with the results of individual milk. It was observed low antibody titers (50) in the serum of animals positive whose results in IFA of bulk milk and blood were discordant. Thus, with the results of this study, it can be concluded that the use of serological tests for detection of anti-N. caninum in the bulk milk samples from the IFAT could be an alternative diagnosis for the screening of positive herds as well as for epidemiological studies.

O objetivo deste trabalho foi avaliar a utilização de dispositivos intravaginais (DIV) para o controle da reprodução em suínos. Porcas aos 112 dias de gestação receberam injeção de PGF2α (controle, n = 15) ou PGF2α com inserção de DIV contendo acetato de medroxiprogesterona (grupo DIV, n = 14) por 48 horas. As fêmeas iniciaram o parto 27,7±1,6 e 82,3±3,8 horas após aplicação de PGF2α nos grupos controle e tratado, respectivamente. Quanto ao controle do estro, dez porcas receberam DIV por 12 dias, iniciando imediatamente após o desmame, e o estro foi confirmado aos 17,25±0,17 dias após o desmame, em comparação a 4±0,25 dias no grupo controle. Dispositivos intravaginais com progestágeno podem ser utilizados no controle da reprodução em suínos.

Neospora caninum é um agente envolvido em perdas reprodutivas em bovinos. O diagnóstico dessa infecção é de grande importância, principalmente para programas de erradicação e controle. Sendo assim, os objetivos deste estudo foram: (1) adaptar uma reação de imunofluorescência indireta (RIFI) para detecção de anticorpos anti-N. caninum no leite, a partir de uma RIFI padronizada para a detecção desses anticorpos no soro sanguíneo, (2) analisar a concordância entre a detecção desses anticorpos pela RIFI no soro sanguíneo e no leite de fêmeas bovinas, (3) avaliar a viabilidade da RIFI para a detecção de anticorpos anti-N. caninum em amostras coletivas de leite. Foram testadas amostras de soro sanguíneo e de leite, coletadas de 112 vacas em lactação, e seis amostras coletivas de leite, correspondentes a cada uma das propriedades avaliadas. Encontrou-se 78% de concordância entre a detecção de anticorpos no soro sanguíneo (com título de anticorpos >50) e no leite, com sensibilidade de 90% e especificidade de 100% para a RIFI nas amostras de leite. Entretanto, para as vacas com títulos de anticorpos >100 no soro sanguíneo, tanto a concordância como os valores de sensibilidade e especificidade da RIFI no leite foram de 100%. Todas as amostras coletivas de leite foram positivas na RIFI. Isso demonstra que, conforme a propriedade pode-se eleger com segurança qual a melhor abordagem diagnóstica a ser adotada em relação à coleta de soro sanguíneo ou de leite para a pesquisa de N. caninum pela RIFI. Além disso, a determinação da presença de anticorpos em amostras coletivas de leite pode servir para diagnóstico e triagem de rebanhos com animais infectados.

O pós-parto em bovinos é caracterizado como um momento em que as fêmeas bovinas não ovulam, principalmente devido a uma inadequada liberação de gonadotrofinas. Os conceitos e os mecanismos regulatórios do hormônio liberador de gonadotrofinas (GnRH) têm sido descritos isoladamente. Esta revisão aborda a influência da nutrição e amamentação, com enfoque na regulação do GnRH, e fornece conceitos atuais do controle neuroendocrinológico da secreção de GnRH durante o pós-parto em bovinos. Conhecimentos atuais das funções do hormônio inibitório de gonadotrofinas (GnIH), da leptina, dos estrógenos, da kisspeptina e da adiponectina, bem como suas complexas inter-relações durante este período estão detalhados para melhor entendimento do assunto.The bovine postpartum period is characterized as a moment when the ovulation is suppressed, mainly in consequence of insufficient release of gonadotropins. Concepts and regulatory mechanisms of gonadotropin-releasing hormone (GnRH) had been described independently. This review covers the influence of nutrition and suckling with emphasis on GnRH regulation, and provides up to date concepts of neuroendocrine control of GnRH secretion during postpartum in cattle. Current knowledge of gonadotropin-inhibitory hormone (GnIH), leptin, estrogens and kisspeptin during this period are presented in order to provide a better understanding of the subject.

The aim was to develop a timed artificial insemination (TAI) system in suckled beef cows. Cows (n=227), 60-80 days postpartum, received estradiol benzoate (5mg) and a vaginal device containing 250µg of medroxyprogesterone acetate (MPA; day 0). On day six, cloprostenol (125µg) and eCG (400IU) were administrated and calves were weaned for 88h. The devices were removed on day seven (BioRep group) or on day eight (TAI group). All cows of TAI group and cows of BioRep group that did not exhibit standing estrus received GnRH (100µg) on day 9. In experiment I, the follicular growth was monitored daily by transrectal ultrasound exams, from day 6 to day 9. The average size of the dominant follicle on day nine was 11.1±0.99mm (BioRep, n=7) and 11.5±0.65mm (TAI, n=7) and all animals ovulated. In experiment II, the BioRep group cows (n=106) were observed for estrous behavior after withdrawal of the device, twice a day for 48h, and inseminated 12h after detection. In the TAI group (n=107), the devices were withdrawn on day eight and after 24h these cows and those from the BioRep group, which were not stand in estrus, received 100µg of GnRH and TAI 16h later. The pregnancy rates were 57.6% (BioRep) and 52.3% (TAI). In conclusion, an increase on MPA exposure time did not affect the follicular dynamics and pregnancy rates and allow TAI without estrous observation. Furthermore, the treatment for eight days provides an efficient TAI system in suckled beef cows.O objetivo deste estudo foi desenvolver um protocolo de inseminação artificial com tempo fixo (IATF) em vacas de corte durante período de amamentação, avaliando o intervalo entre a retirada do progestágeno e a aplicação de GnRH sobre a dinâmica folicular e a prenhez. Para tanto, vacas (n=227) em pós-parto de 60 a 80 dias receberam benzoato de estradiol (5mg) e um pessário vaginal de acetato de medroxiprogesterona (250mg MAP; dia 0). No dia seis, os animais receberam cloprostenol sódico (125µg), gonadotrofina coriônica eqüina (400UI) e desmame temporário (88h). O MAP foi retirado no dia sete (Grupo BioRep) ou no dia oito (Grupo IATF). Todas as vacas do grupo TAI e aquelas que não manifestaram cio do grupo BioRep receberam GnRH (100µg) no dia nove. No experimento I, o monitoramento das estruturas ovarianas de 14 vacas foi realizado a cada 24h, desde o dia seis até 36h após a aplicação de GnRH em ambos os grupos. O tamanho médio do folículo dominante no dia nove foi de 11,1±0,99mm (BioRep n=7) e 11,5±0,65mm (IATF n=7) e todos os animais ovularam. No experimento II, no grupo BioRep (n=106), após a retirada do MAP, as fêmeas foram inseminadas com detecção de estro durante 48 horas. O restante dos animais do grupo BioRep e todos do grupo IATF (n=107) receberam 100µg de GnRH (dia nove) e IATF 16h depois. As taxas de prenhez foram de 57,6% (BioRep) e de 52,3% (IATF). O intervalo de 24h entre a retirada de MAP, mantido por oito dias, e a aplicação de GnRH não interfere na dinâmica folicular e na prenhez, permitindo inseminar vacas de corte amamentando sem observação de estro.

The objective of this study was to investigate the causes of the repeat breeder syndrome comparing clinical signs and postmortem findings in beef cows. The identification of factors affecting the reproductive tract can support decisions as to whether treatment of repeat breeder cows is justifiable than culling. Since all animals were submitted to clinical examination before being slaughtered, this study has a differential approach when compared with others, where genital tracts from abattoir were examined. In this study, 130 crossbred cows and heifers that have failed to conceive after three or more services were identified, submitted to a clinical examination and blood collection for karyotyping and sent to an abattoir. postmortem examinations included macroscopic evaluation of the genital tracts, bacteriology and histopathology of the uterus. Uterine alterations were predominant followed by oviduct and ovarian pathologies. Histopathological examination was more sensitive as a diagnostic tool than clinical examination. Repeat breeder cows had a predominance of uterine abnormalities (95%), such as inflammatory (42.9%) and degenerative (59.7%) conditions. Oviduct abnormalities were found in 29.8 % of animals. Furthermore, 1 out 10 karyotyped cows showed aneuploidy. Thus, this study stressed the importance of laboratory exams in the diagnosis of the causes of infertility of repeat breeder cows.O objetivo deste estudo foi avaliar as causas de infertilidade em vacas de corte repetidoras de serviço, relacionando sinais clínicos com características laboratoriais post-mortem. A identificação dos fatores que afetam o desempenho reprodutivo pode fornecer uma fundamentação científica para auxiliar na decisão quanto ao destino de vacas repetidoras de serviço; tratamento ou descarte. Este estudo tem abordagem diferencial dos trabalhos que contemplam somente a ocorrência de alterações post-mortem do trato genital. A correlação das alterações post-mortem com o histórico clínico dos animais pode auxiliar na determinação da causa de repetição de serviço de animais sem alteração clínica. Foram utilizadas 130 vacas e novilhas cruzas que não conceberam depois de, no mínimo, três serviços. Todos os animais foram identificados e submetidos à exame clínico e coleta de sangue para cariotipagem. Foram incluídos no estudo apenas animais com histórico de falha reprodutiva. Os animais foram encaminhados para um abatedouro e foram realizados exames post-mortem como inspeção macroscópica do trato genital, cultura bacteriológica e estudo histopatológico do útero. Alterações uterinas foram predominantes seguidas de alterações de oviduto e ovário. Foi observada uma maior freqüência de alterações histopatológicas de útero que alterações clínicas. Os animais utilizados no estudo apresentaram alta freqüência de patologia uterina (95%), tanto inflamatórias (42,9%) quanto degenerativas (59,7%). Patologias diagnosticadas somente por exames post-mortem e laboratoriais como oclusão tubária (29,8%) e trissomia do par sexual também foram observadas (1/10 vacas). Portanto, este estudo evidencia a importância do exame laboratorial no diagnóstico das causas de infertilidade de vacas com histórico de repetição de serviço.

This experiment compared the efficiency of combined hormonal treatment and 96-hour calf removal with weaning in cows fed different forages allowances and with different weight gains. A total of 310 cows (190 Aberdeen Angus and 120 Charolais), 50 to 70 days postpartum, were sorted into 6 groups. Groups A2, A5, B2 and B5 were composed of 53, 49, 53 and 55 cows, respectively; the first two groups had higher forage availability, while the others had lower forage availability, in the postpartum period; groups A2 and B2 received 2mg estradiol benzoate (day zero) and the groups A5 and B5 5mg estradiol benzoate as well as an intra-vaginal device (CIDR) with progesterone. Six days later they received 1000UI equine chorionic gonadotropin (eCG). At day 7 the CIDR device was removed and the 96-hour calf removal period began. Groups AD and BD, with 52 and 48 cows and high and low forage availability respectively, in the postpartum period, were weaned on day 7. All cows that showed estrous were inseminated between day 7 and 17, and then were bred, up to day 67. Between days 60 and 127, ultrasounds diagnosis of pregnancy were performed. Data analysis was carried out using to the PROC CATMOD in the SAS statistical program. There were no significant differences in pregnancy (p>0.05) rates among groups submitted to different forage offers. Data was then analyzed according to whether the cow gamed or lost weight in the post partum period. These results indicate that weaning was more efficient than the hormonal treatment used and cows that lost weight in the have gained weight in the same period. KEY WORDS: Beef cows, forages availability, ovulation induction, post-partum anestrous, weaning. Este experimento teve por objetivo comparar a eficiência de um protocolo hormonal associado ao desmame por 96 horas com o desmame definitivo, em vacas em pastejo com diferentes ofertas forrageiras. Utilizaram-se 310 vacas (190 Aberdeen-Angus e 120 Charolês), entre 50 e 70 dias pós-parto, distribuídas em seis grupos. Os grupos A2, A5, B2 e B5 foram mantidos em maior (A2 e A5) e menor (B2 e B5) disponibilidade forrageira, no período parto-tratamento, e receberam (dia 0) 2mg (A2 e B2) e 5mg (A5 e B5) de benzoato de estradiol e dispositivo intravaginal com acetato de medroxiprogesterona (CIDR). Seis dias após, receberam 1.000 UI de gonadotrofina coriônica eqüina (eCG). No sétimo dia, foi retirado o CIDR e procedido ao desmame dos bezerros por 96 horas. Os grupos AD e BD foram constituídos por 52 e 48 vacas, permanecendo, respectivamente, em maior e menor disponibilidade forrageira, submetidas ao desmame definitivo dos bezerros (dia 7). Inseminaram-se as vacas que manifestaram estro entre os dias 7 e 17, sendo acasaladas, depois, até o 67ºdia. Nos dias 60 e 127 realizaram-se diagnósticos ultra-sonográficos de prenhez. Para análise dos dados, utilizou-se PROC CATMOD do pacote estatístico do SAS, não se verificando diferença (P>0,05) na prenhez entre os grupos com diferentes ofertas forrageiras. Uma nova análise das vacas, conforme seus ganhos de peso, indicou que o desmame definitivo proporciona melhor percentual de prenhez em relação ao modelo de tratamento hormonal utilizado. As vacas que perdem peso no período pós-parto respondem, ao desmame definitivo, mais lentamente do que as que ganham peso no mesmo período. PALAVRAS-CHAVES: Anestro pós-parto desmame, indução à ovulação, ofertas forrageiras, vacas de corte.

O objetivo do presente experimento foi investigar se a realização exclusiva da inseminação artificial em tempo fixo (IATF), empregando como indutor da ovulação o benzoato de estradiol (BE), proporciona taxas de prenhez semelhantes a uma associação de IA convencional e IATF com GnRH, em vacas de corte no pós-parto. Duzentos e cinqüenta vacas amamentado receberam um pessário vaginal contendo 250mg de acetato de medroxi-progesterona (MAP) e uma injeção intramuscular (IM) de 5mg de BE no dia 0. O pessário vaginal permaneceu por sete dias. No dia 6, foram aplicadas 400UI de gonadotrofina coriônica eqüina por via IM e 5mg de análogo de prostaglandina na submucosa vulvar, realizando nesse momento o desmame por 96h. Após a retirada dos pessários (dia 7), as vacas foram distribuídas em dois grupos. No grupo BioRep (n=150), as fêmeas foram observadas duas vezes por dia para detecção de estro por 48h e inseminadas 12h após sua manifestação. Os animais que não manifestaram estro nesse período receberam uma injeção IM de 100mg de GnRH, sendo submetidas à IATF, 16 a 18h após. No grupo BE (n=100), as vacas receberam uma injeção de 1mg de BE IM no dia 8 e foram inseminadas em tempo fixo no dia 9. A porcentagem de prenhez no grupo BioRep (54,7%) foi maior (PThis experiment was aimed at comparing two estrus induction protocols for cows in post partum period, using either GnRH and two-day artificial insemination (AI) or estradiol benzoate (EB) and fixed-time artificial insemination (TAI). A total of 250 suckled beef cows received a vaginal device containing 250mg of medroxyprogesterone acetate (MPA) and an injection of 5mg of EB intramuscularly (IM) on day 0. The vaginal device was removed on day 7. On day 6, cows were injected with 400IU eCG (IM) and 5mg prostaglandin analog (into vulvar submucosa) and calves were removed for 96 hours (h). After removing the vaginal devices (day 7), cows were divided in two groups. In the BioRep group (n=150), estrus detection was carried out twice a day during 48h and the animals were inseminated 12h after detection. Cows which were not detected in estrus received 100mg of GnRH IM and were inseminated 16 to 18h later. In EB group, cows were injected IM with 1mg of EB on day 8 and were inseminated on day 9 without estrus detection. The pregnancy rate was higher (P

The aim of the present study was to investigate the association of the estrogen receptor (ER-PvuII) and retinol-binding protein 4 (RBP4-MspI) gene polymorphisms and their interactions with prolificacy in a commercial synthetic pig line reared in Brazil. A total of 10,374 piglet records from 218 sows and 817 litters were used for litter size analysis. Only females with three or four farrowings were included in the analysis. The mean litter size ranged from 5.0 to 19.5 piglets. DNA was extracted from leukocytes by a standard method, and ER-PvuII and RBP4-MspI polymorphisms were characterized by the polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) technique. The association between alleles or genotypes and reproductive performance was analyzed using a general linear model including the interaction between the ER-PvuII and RBP4-MspI genotypes. For the ER-PvuII gene, the allele frequencies of allele A and allele B were 0.56 and 0.44, respectively. For the RBP4-MspI gene, the frequencies of alleles A1 and A2 were 0.29 and 0.71, respectively. The total number of piglets born (TNB), born alive (NBA), or number of mummies and stillborn piglets (NMUM and NSB) per litter did not differ between the various ER-PvuII and RBP4-MspI genotypes. However, when the ER-PvuII and RBP4-MspI genotypes were considered together in each sow, TNB and NBA were 1.4 (p = 0.0026) and 0.9 (p = 0.019) higher in AA/A1 and AB/A1 animals, respectively, than in AA/A2 and BB/A1 animals. Likewise, TNB and NBA were 0.9 (p = 0.0258) and 0.8 (p = 0.0168) higher in BB/A2 and AB/A2 sows, respectively, than in AA/A2 and BB/A1 animals, but no difference was observed compared to AA/A1 and AB/A1 animals. The results showed larger litter sizes (TNB and NBA) for sows carrying the ER-PvuII allele A and the RBP4-MspI genotype A1, and for animals carrying the ER-PvuII allele B and the RBP4-MspI genotype A2. In conclusion, the interaction between genotypes ER-PvuII and RBP4-MspI is more efficient in the selection of prolific sows than each one of these molecular markers alone.

Adiponectin is the most abundantly produced human adipokine with anti-inflammatory, anti-oxidative, and insulin-sensitizing properties. Evidence from in vitro studies has indicated that adiponectin has a potential role in reproduction because it reduces the production of androstenedione in bovine theca cells in vitro. However, this effect on androgen production has not yet been observed in vivo. The current study evaluated the effect of adiponectin on androstenedione secretion and oxidative stress parameters in a rodent model. Seven-week-old female Balb/c mice (n = 33), previously treated with equine gonadotropin chorionic, were assigned to one of four different treatments: Group 1, control (phosphate-buffered saline); Group 2, adiponectin 0.1 μg/mL; Group 3, adiponectin 1.0 μg/mL; Group 4, adiponectin 5.0 μg/mL. After 24 h, all animals were euthanized and androstenedione levels were measured in the serum while oxidative stress markers were quantified in whole ovary tissue. Female mice treated with adiponectin exhibited a significant reduction (about 60%) in serum androstenedione levels in comparison to controls. Androstenedione levels decreased from 0.78 ± 0.4 ng/mL (mean ± SD) in controls to 0.28 ± 0.06 ng/mL after adiponectin (5 μg/mL) treatment (P = 0.01). This change in androgen secretion after 24 hours of treatment was associated with a significant reduction in the expression of CYP11A1 and STAR (but not CYP17A1). In addition, ovarian AOPP product levels, a direct product of protein oxidation, decreased significantly in adiponectin-treated mice (5 μg/mL); AOPP (mean ± SD) decreased to 4.3 ± 2.1 μmol/L in comparison with that of the controls (11.5 ± 1.7 μmol/L; P = 0.0003). Our results demonstrated for the first time that acute treatment with adiponectin reduced the levels of a direct oxidative stress marker in the ovary as well as decreased androstenedione serum levels in vivo after 24 h.

Three short tandem repeats (STRs), BMS1074, BM1500, IDVGA-51, and three single nucleotide polymorphisms (SNPs), LEPSau3AI (A/B), LEPSau3AI (+/-) and LEPKpn2I linked to the LEP gene were investigated to verify associations with productive performance in postpartum cows of two beef cattle breeds, Aberdeen Angus (AA, n=98) and Charolais (C, n=83). After polymerase chain reaction, STRs were analyzed by vertical electrophoresis and SNPs in agarose gel after endonucleases cleavage. In AA herd 79% of BMS1074*151 carriers had a lower average daily weight gain (ADG) when compared with the population mean daily weight gain (103g), while 62% of BMS1074*151 non-carriers presented a higher ADG (PForam investigadas três repetições curtas em tandem (STRs), BMS1074, BM1500 e IDVGA-51 e três polimorfismos de um único nucleotídeo (SNPs) LEPSau3AI (A/B), LEPSau3AI (+/-) e LEPKpn2I, ligados ao gene da leptina, verificando-se associações com o desempenho produtivo em vacas no pós-parto, em dois rebanhos de gado de corte, Aberdeen Angus (AA, n=98) e Charolês (C, n=83). Após a reação em cadeia da polimerase, os STRs foram analisados em géis de poliacrilamida e os SNPs em gel de agarose, após a clivagem com endonucleases. Na raça AA, 79% dos portadores do alelo BMS1074*151 apresentaram ganho médio de peso diário (ADG) menor, quando comparados com a média da população (103g), enquanto 62% dos não-portadores mostraram ADG mais alto (P

We investigated the expression of calcium-dependent phospholipid binding protein annexin-II (Ann-II) messenger RNA (mRNA) during preantral follicle development and in oocytes from antral follicles of different diameters (< 3 mm, 5 to 8 mm and > 8 mm). The action of retinol on Ann-II mRNA expression in mature oocytes was also examined. Only oocytes from secondary preantral follicles expressed Ann-II mRNA and at the germinal vesicle stage expression by oocytes from follicles larger than 8 mm was significantly higher (p < 0.05) compared with oocytes from follicles smaller than 3 mm or between 5 and 8 mm. Ann-II mRNA expression by metaphase II oocytes from follicles larger than 8 mm was significantly higher (p < 0.05) than that from oocytes from follicles smaller than 3 mm, with oocytes from both these size-classes showing similar levels of Ann-II mRNA expression as oocytes recovered from 5-8 mm follicles. In the presence of retinol, Ann-II mRNA expression was higher than when retinol was absent (p < 0.05). Our data indicate that Ann-II mRNA expression is highest in competent oocytes and that retinol increases Ann-II mRNA and may be involved in the regulation of oocyte competence by decreasing the translation and/or degradation of Ann-II mRNA.

O objetivo deste experimento foi comparar a eficiência de um programa hormonal associado ao desmame temporário por 96 horas na indução do estro e ovulação com o desmame definitivo aos 60 dias em vacas de corte. Foram utilizadas 183 vacas de corte amamentando, das raças Charolês (C), Nelore (N) e suas cruzas recíprocas, as quais foram genotipadas como homozigotas (HOM) ou heterozigotas (HET) para o microssatélite (STR) BMS3004, que está localizado no mesmo cromossomo do gene da cadeia beta do LH. Entre 60 e 80 dias pós-parto (dia 0), as vacas foram distribuídas em dois grupos. No grupo indução hormonal (IH), as vacas (n=87) receberam (dia 0) 250 mg de acetato de medroxiprogesterona por 8 dias, 2,5 mg de benzoato de estradiol (dia 1) e 500 UI de gonadotrofina coriônica eqüina (dia 7). No dia 8, os bezerros foram desmamados por 96 horas. No mesmo dia (dia 8), as vacas (n=96) do outro grupo apenas foram submetidas ao desmame definitivo (grupo DP). Após, procedeu-se 4 dias de inseminação artificial (IA) e, passado esse período, foram entouradas. O primeiro diagnóstico de gestação (DG) foi realizado 60 dias após o período de IA e, o segundo, 60 dias após o final do entoure. As taxas de estro foram maiores nas vacas do grupo IH em relação as do grupo DP. As vacas com condição corporal 2,5 e 3,0 apresentaram menores percentuais de prenhez ao 1ºDG no grupo IH (29,6 e 46,4%) em relação ao grupo DP (56,0 e 72,2%). Os percentuais de prenhez das vacas com índice corporal 65-73 não diferiram entre os grupos IH e DP. As vacas N do grupo IH, apresentaram menor percentual de prenhez ao 1ºDG que as F1 (27,7 vs. 64,2%), mas não diferiram em relação às C (40,0%). No grupo IH, o percentual de prenhez ao 2ºDG foi menor nas vacas HOM do que nas HET. O desmame definitivo precoce mostrou-se mais eficaz no incremento dos percentuais de prenhez em vacas de corte.The aim of this experiment was to compare the efficiency of a hormonal protocol, associated to the temporary weaning for 96 hours, with the definitive weaning at 60 days in beef cows, for the induction of estrus and ovulation. One hundred and eighty-three suckled beef cows were used. The breeds of the cows were Charolais (C) and Nellore (N) and their crosses. The animals were genotyped as homozygous (HOM) and heterozigous (HET) for the microsatellite BMS3004, that is localized in the same chromossome of the LH beta chain gene. The cows were distributed in two groups between 60 and 80 days postpartum (day 0). In the hormonal induction group (HI), the cows (n=87) received (day 0) 250 mg of medroxiprogesteron acetate for 8 days, 2.5 mg of estradiol benzoate (day 1) and 500 UI of eCG (day 7). On day 8, the calves were weaned for 96 hours. In the same day (day 8), the cows (n=96) of the other group were just submitted to early weaning (group EW). Twelve hours after weaning, artificial insemination (AI) was done during four days. After this period, they were mated. The first diagnosis of pregnancy (DP) was performed 60 days after the AI period and, the second, 60 days after the end of mating. The estrus rates were higher in cows from HI group than in those of EW group. In the HI group, the cows with body condition 2.5 and 3.0 presented lower pregnancy rates at the 1st DP (29.6 and 46.4%) than in the EW group (56.0 and 72.2%). The rates of pregnancy in cows with body index 65-73 did not differ between the HI and EW groups. The N cows of HI group presented lower pregnancy rate at 1st DP than the F1 (27.7 vs. 64.2%), but was not different than the C cows (40.0%). In the HI group, the pregnancy rate at the 2nd DP was lower in HOM cows than in the HET ones. The cows in the early definitive weaning group showed to be more efficient than in the hormonal induction group to improve the pregnancy rate.

O presente estudo teve por objetivo caracterizar distintos grupos de fertilidade e averiguar diferenças quanto ao ganho de peso no pós-parto e habilidade materna em uma população Brangus Ibagé (3/8 Nelore + 5/8 Angus). Foram computados dados de 1145 partos de 287 vacas, sendo considerados apenas os registros de 168 fêmeas com, no mínimo, quatro partos. As fêmeas foram agrupadas de acordo com a média do intervalo de partos em grupos de alta, intermediária, e baixa fertilidade. Adicionalmente, foram levantados dados de peso ao parto (PPAR) e ganho de peso no pós-parto (GPP). A habilidade materna foi inferida a partir do peso à desmama dos terneiros (PP205). As médias e respectivos erros-padrão de intervalos de partos (IP) para os grupos de fertilidade alta, intermediária e baixa foram 404,6 ± 5,44, 523,5 ± 4,77 e 711,2 ± 20,89, respectivamente. Não foram constatadas diferenças significativas (P>0,05) entre grupos, tanto no desempenho da vaca (PPAR, GPP) como no PP205. Vacas primíparas apresentaram peso ao parto menor (P0,05). O efeito de ano foi significativo (P

Este experimento foi desenvolvido com o objetivo de avaliar a eficiência de tratamentos hormonais, associados ao desmame temporário, na indução de ovulação após o parto, em fêmeas de corte criadas extensivamente. Foram utilizadas 143 vacas (Hereford e cruzas Hereford x Nelore), pluríparas, entre 50 e 70 dias após o parto, com condição corporal (CC) 2 e 3 (1-5). O grupo SEMED (somatotropina, estradiol, medroxiprogesterona, gonadotrofina e desmame) foi constituído por 50 vacas, as quais receberam (dia 0) 500mg de somatotropina bovina recombinante (bST-r), 5mg de benzoato de estradiol e um pessário intravaginal contendo 250mg de acetato de medróxiprogesterona (MAP) e, seis dias após, (dia 6) 500UI de gonadotrofina coriônica eqüina (eCG). No momento da retirada dos pessários (dia 7), os terneiros foram separados totalmente das vacas por 96h. No grupo EMED (estradiol, medroxiprogesterona, gonadotrofina e desmame), constituído de 48 vacas, adotou-se um tratamento semelhante ao do grupo anterior, diferindo apenas na não utilização da somatotrofina. No grupo CONTROLE, 43 vacas foram unicamente separadas dos seus filhos por 96h. Logo após a retirada dos pessários vaginais e de realizado o aparte dos terneiros, as vacas foram colocadas em um piquete com touros (1:10). Após 53 dias, foi realizado o diagnóstico de gestação por palpação retal e ultra-sonografia, para detectar as vacas que conceberam no estro subseqüente aos tratamentos. Obtiveram-se índices de prenhez de 11,1% , 38,0% e 56,2% respectivamente, para os grupos CONTROLE, SEMED e EMED, cujas diferenças foram significativas (p

O presente trabalho teve como objetivos determinar a influência de células ovarianas no desenvolvimento in vitro de folículos pré-antrais, avaliar a viabilidade das células ovarianas em monocamada e a influência do soro na manutenção de folículos pré-antrais in vitro. Folículos pré-antrais (FPs) e células ovarianas foram isolados de ovários de fetos bovinos, com idade entre 6 e 8 meses de gestação, oriundos de matadouro. Células ovarianas em monocamada foram cultivadas em meio TCM-199, e a viabilidade celular, após o cultivo na presença ou ausência de FSH, foi determinada com o corante vital azul de tripan. FPs foram distribuidos em quatro tratamentos e cultivados em TCM-199 modificado, contendo soro de novilho castrado (SNC), SNC em monocamada de células ovarianas (MCO), MCO com FSH ou meio definido com álcool polivinílico (PVA) como macromolécula. A viabilidade celular não foi afetada em conseqüência da presença ou ausência de FSH. No entanto, houve um incremento significativo no tamanho dos FPs cultivados na presença de SNC, MCO e FSH (PThe aim of the present work was to determine the influence of ovarian cells in the in vitro development of preantral follicles (PF). The viability of monolayer ovarian cells and the effect of the serum in the survive of in vitro PF was also investigated. Ovarian cells and PF were isolated from ovaries of bovine fetus between 6 and 8 months of pregnancy, obtained in a slaughterhouse. Monolayer of ovarian cells were cultured in a modified TCM-199 in the presence and absence of FSH and its viability after incubation was determined with Trypan Blue. PFs were divided in four different treatments, cultured in modified TCM-199, containing serum of castrated steer (SCS), SCS in monolayer of ovarian cells (MOC), MOC with FSH or a defined medium with polyvinyl alcohol (PVA) as macromolecule. The cellular viability was not affected by the presence or absence of FSH. However, PFs had a significant development (P

O objetivo do presente estudo foi de avaliar a amplitude da variação de pH em meios de maturação e de cultivo embrionário, com diferentes concentrações do tampão HEPES. Inicialmente, foi determinado o efeito de diferentes concentrações de HEPES (0, 12,5 e 25,0mM) na variação do pH dos meios de maturação (TCM-199 modificado) e desenvolvimento embrionário (KSOM modificado) em meio ambiente, à temperatura de 25ºC, e na estufa, em uma atmosfera de 5% de CO2 em ar a 39ºC. Em um segundo experimento, os oócitos foram maturados em TCM-199 modificado sem HEPES (142 oócitos) ou com 25,0mM de HEPES (137 oócitos) e foi avaliado índice de blastocisto. O meio Fert-TALP foi utilizado para a fecundação, sendo que os embriões foram co-cultivados com células epiteliais de oviduto (CEO) em KSOM modificado com 10% de SFB. Um terceiro experimento foi delineado para determinar a importância da presença do HEPES no meio de cultivo embrionário sobre o desenvolvimento de embriões bovinos in vitro. Para isso, após a retirada do cumulus, os zigotos foram divididos ao acaso e co-cultivados com CEO em KSOM modificado (com 10% de SFB) sem HEPES (grupo controle; n = 95) ou com 25,0mM de HEPES (grupo HEPES; n = 92). Foram mantidos em cultivo somente os embriões com duas ou mais células, sendo considerados desenvolvidos os que atingiram o estádio de blastocisto expandido (Bx), 7 e 9 dias após inseminação. O cultivo dos oócitos e embriões, em ambos os experimentos, foi efetuado em estufa a 39ºC, com uma atmosfera contendo 5% de CO2 e umidade saturada. Os resultados mostram que os meios contendo 25,0mM de HEPES foram mais eficientes em minimizar a variação do pH que os meios com 12,5mM ou sem HEPES. Além disso, a adição de HEPES ao meio de maturação aumentou os índices de Bl sobre o total de oócitos e sobre o total de clivados (21,9% e 42,86%) com relação ao controle (10,56 e 16,67%; pThe aim of the present study was to evaluate the range of pH changes in maturation and embryo development media, buffered with different HEPES concentrations. Initially, the effect of different concentrations of HEPES (0, 12.5 and 25.0mM) on the variation of pH in the maturation (modified TCM-199) and embryonic development (modified KSOM) media was evaluated at room temperature (25ºC) and in an atmosphere of 5% CO2 in air at 39ºC. In another experiment, the effect of HEPES on in vitro oocyte maturation was determined. Oocytes were maturated in TCM-199 modified either with 25.0mM of HEPES (HEPES group; n = 137) or without HEPES (control group; n = 142), performing 7 replicates and evaluating the rate of blastocyst. In this study, the medium used for fertilization was Fert-TALP while for embryo development was KSOM with 10% of fetal bovine serum with monolayer of oviduct epithelial cells. A third experiment was designed to determine the effect of HEPES on embryo development. The zygotes were divided in two groups and co-incubated with oviduct epithelial cells in modified KSOM with 10% of fetal bovine serum without HEPES (n = 95) or with 25.0mM of HEPES (n = 92). For this experiment, it was used embryos with two or more cells and the embryo development was considered from cleavage to expanded blastocyst (Bx), 7 and 9 days after insemination. The oocytes and embryos were incubated at temperature of 39ºC, an atmosphere containing 5% CO2 in air and saturated humidity. The media with 25.0mM of HEPES were more efficient in minimizing the range of pH than those with 12.5mM or without HEPES. To determine the effect of HEPES during in vitro oocyte maturation, the percentage of Bl considered either the total number of oocytes or the total number of cleavages was higher in the HEPES group (21.9% or 42.9%, respectively) than those obtained in the control group (10.56% or 16.67%, respectively). When HEPES was added to embryo culture medium, the percentage of Bx (45.65%) was higher than that obtained in medium without HEPES (11.58%; p

Este trabalho foi conduzido com o objetivo de avaliar o sêmen ovino criopreservado com etileno glicol em relação ao glicerol, quanto à motilidade progressiva e vigor e, especialmente, quanto à integridade das membranas plasmática, nuclear e mitocondrial. Foram utilizados ejaculados de sêmen provenientes de dois carneiros da raça Ile-de-France, com padrões mínimos de volume (0,5ml), turbilhonamento (2 de 0-5), motilidade progressiva (65%), vigor (3 de 0-5), aspecto (cremoso fino, 3x10(6) espermatozóides/mm3) e células normais (80%). Um total de 25 pools foi dividido em duas alíquotas, as quais foram, posteriormente, congeladas com etileno glicol a 0,5M ou glicerol a 0,72M em pellets. Os parâmetros utilizados, para avaliar o desempenho dos crioprotetores, foram a motilidade progressiva, vigor espermático e integridade do acrossomo e das membranas plasmáticas dos espermatozóides. A motilidade e vigor foram aferidos no sêmen fresco, resfriado, descongelado, mantido a 38°C por 5 horas de incubação (TTL- teste de termorresistência lento) e à temperatura de 45°C por 30 minutos (TTR- teste de termorresistência rápido). Não houve diferença entre o etileno glicol e o glicerol para a avaliação da morfologia do acrossomo, motilidade progressiva e vigor. As células espermáticas criopreservadas com etileno glicol apresentaram maior integridade das membranas plasmática, nuclear e mitocondrial do espermatozóide. O etileno glicol é mais eficiente do que o glicerol para preservar a integridade das membranas espermáticas na congelação de sêmen ovino.The aim of the present experiment was to evaluate the effect of ethylene glycol, in relation to glycerol, as a cryoprotective agent for preserving ovine spermatic cells. The semen had to present a minimal quality to be used, regarding volume (0.5 ml), wave motion (score of 2, from 0 to 5), percentage of progressively motile spermatozoa (65%), rate of progressive motility (score of 3, from 0 to 5), sperm cell concentration (3x10(6) cells/mm³) and normal sperm morphology (80%). Each pool of semen from ejaculates of two rams was divided into two equal subsamples. One subsample was frozen with ethylene glycol and the other with glycerol. The parameters used to evaluate the semen were sperm motility, vigor, acrossome status and membrane integrity. Sperm motility was evaluated in fresh semen, cooled semen, frozen semen, after 5 hours at 38°C or after 30 minutes at 45°C. No difference was observed between ethylene glycol and glycerol for acrossome status and sperm motility. The sperm cells that were preserved with ethylene glycol showed more integrity of the plasmatic, nuclear and mitochondrial membranes. From the viewpoint of cell membrane integrity, it can be concluded that ethylene glycol gives higher protection to the sperm cell than glycerol.

A formação de pró-núcleos, clivagem e perfil protéico foram avaliados após a ativação da proteína quinase C (PQ-C) durante a maturação de complexos cumulus-oócito (CCOs) bovinos. Visando a determinar estes efeitos da PQ-C, 1936 CCOs foram distribuídos aleatoriamente em 4 tratamentos, sendo maturados na presença de PMA (100nM phorbol 12-myristate 13-acetate, ativador da PQ-C), de 4alfa-PDD (100nM de 4alfa-phorbol 12,13-didecanoetate, forbol éster que não ativa a PQ-C; controle forbol éster), de SVE (10% de soro de vaca em estro, controle positivo) e de um controle negativo constituído pelo meio de maturação básico para os demais tratamentos, com exceção do SVE, onde não foi adicionado o álcool polivinílico (PVA). Os CCOs foram mantidos na presença de PMA por 1, 4 e 7 horas, sendo após, transferidos para o meio básico de maturação até que se completassem 24 horas de cultivo. A estimulação da PQ-C, por esses períodos, não alterou a formação de pró-núcleos, porém, diminuiu a percentagem de clivagem dos zigotos. Os resultados do grupo 4alfa-PDD comprovam que as alterações ocorridas no grupo PMA são devido à ativação da PQ-C e não ação direta do forbol éster na célula. A análise da composição protéica demonstrou uma banda de proteína adicional no grupo SVE ao redor de 74 kilo Daltons (kDa). Os resultados desse estudo, quando associados aos dados preliminares de Western blot, indicam a importância da PQ-C na regulação da maturação, fecundação e clivagem de embriões bovinos.In the present study the pronucleus formation, cleavage and protein profile after protein kinase C (PK-C) activation were evaluated during bovine oocyte maturation. A total number of 1936 bovine cumulus-oocyte complexes (COCs) were randomly distributed in 4 treatments, and matured with PMA (100nM phorbol 12-myristate 13-acetate, PK-C activator), 4alpha-PDD (100nM de 4alpha-phorbol 12,13-didecanoetate, phobol ester that do not bind on PK-C, phorbol ester control), ECS (10% of estrus cow serum, positive control) and in a negative control (basic maturation media for all treatments, except on ECS group where the polyvinyl alcohol was not added). The COCs were kept in presence of PMA for 1, 4 or 7 hours and then transferred to basic maturation media until the 24 hours maturation period was completed. The PK-C stimulation in these periods did not alter the pronucleus formation but caused a decrease in the zygotes cleavage rate. The 4alpha-PDD group results showed that the alterations in PMA group were caused by PK-C activation and not by direct phorbol ester action on the cell. The protein composition analysis showed an additional protein band on ECS group around 74 kilo Daltons (kDa). Altogether, these results with the preliminary Western Blot analysis, indicate an important role of PK-C on bovine oocyte maturation, fertilization and embryo cleavage.

Com o objetivo de avaliar o efeito do desmame interrompido na dinâmica folicular aos 35 e 70 dias pós-parto, 15 vacas da raça Charolesa com parição na primavera, manejadas em campo nativo, foram distribuídas deforma aleatória em cinco diferentes tratamentos de desmame como segue: uso de tabuleta por dois dias (TAB 2), quatro dias (TAB 4), separação total por dois dias (TOT 2), quatro dias (TOT 4) e controle. A partir do início dos tratamentos, foi realizado monitoramento da atividade ovariana durante oito dias, e coletas diárias de sangue para dosagem de progesterona e identificação de cio com auxílio de rufião. Os ovários foram avaliados ecograficamente e os folículos foram classificados, conforme o diâmetro, em pequenos (< 3mm), médios (4 a 9mm) e grandes (> 10mm). A população de folículos pequenos e médios não variou entre os tratamentos e durante os oito dias, nos diferentes tratamentos aplicados aos 35 e 70 dias. Com relação aos folículos grandes, ocorreu diferença (p = 0,0001) nos tratamentos aplicados aos 35 dias pós-parto, em pelo menos um dos dias da avaliação, sendo que o grupo TOT 4 apresentou um aumento significativo da população de folículos grandes (p = 0,001), a partir do segundo dia de desmame, diminuindo após o quinto dia, devido à ovulação. Nos demais tratamentos, não houve diferença nos diferentes dias. Aos 70 dias, a população de folículos grandes variou no tratamento TAB 4 (p = 0,05) e TOT 4 (p = 0,013), que apresentaram uma distribuição quadrática. Os resultados demonstram também que houve efeito do indivíduo dentro dos tratamentos (p = 0,0001). Conclui-se que o desmame com tabuleta por dois dias, aplicado aos 35 e 70 dias pós-parto, não altera a dinâmica folicular. O desmame com tabuleta, aplicado por quatro dias, não altera a dinâmica folicular quando aplicado aos 35 dias pós-parto, mas ocasiona um aumento da população de folículos grandes e ovulação aos 70 dias. A separação total induz, um aumento dos folículos grandes quando aplicada por quatro dias, aos 35 e 70 dias pós-parto, mas não altera a dinâmica folicular quando aplicado por dois dias.The aim of the present work was to determine the weaning effect on ovarian activity during postpartum period, 35 and 70 days after parturition, in Charolais cows that calved during spring season in natural pasture condition. Fifteen cows were randomiy assigned to five weaning treatments as the following: nose-plates for two days (TAB 2), for four days (TAB 4), calves removal for two days (TOT 2), or for four days (TOT 4) and neither nose-plates nor calves removal as a control group. Ovarian activity was controlled for eight days from the beginning of the treatments, followed by both daily blood collection for determining progesterone level and heat identification. Ovaries were evaluated by ultrasound and follicles were classified in small (< 3mm), medium (4 a 9mm) and large-size (>10mm). The number of small and medium size follicles did not change during the eight days of examination among the different treatments at 35 and 70 days in one day at least postpartum. The large size follicles population changed at 35 days postpartum amoung treatments (p = 0.0001) and second day group TOT 4 presented a increase on large siz.e follicle population on second day, decreasing after fifth day by ovulations. The other treatments did not change on different days. At 70 days postpartum, the large size follicles population changed on TAB 2 (p = 0.05) and TOT 4 (p = 0.013), showing a quadratic distribution. There was an animal effect inside treatments (p = 0.0001). Considering the data, it is possible to conclude that weaning with nose plates for two days at either 35 or 70 days postpartum do not change follicular dynamic. The nose plates for four days do not change follicular dynamic at 35 days postpartum but induce an increase in large siz,e follicle population and ovulation at 70 days. The calves removal also induce an increase in large size follicles for 4 days at 35 and 70 days postpartum but do not change follicle dynamic for 2 days.

O presente experimento foi delineado com o objetivo de determinar a influência de diferentes períodos de digestão enzimática nos ovários de fetos bovinos, sobre o número total de folículos pré-antrais resgatados e o número de folículos resgatados em cada estágio de desenvolvimento. A presença da membrana basal, envolvendo o complexo formado pelas células da granulosa e o oócito, foi observada através de um estudo histológico, o que permitiu avaliar a integridade morfológica dos folículos pré-antrais isolados. Para isso, ovários de fetos bovinos, entre 150 e 270 dias de gestação, foram obtidos em frigorífico. No laboratório, os ovários foram seccionados em vários fragmentos com uma tesoura cirúrgica e dissociados com pipetas de Pasteur, com diâmetros aproximados de 1000 e 500mim. Após este processo, os fragmentos foram submetidos à digestão enzimática com colagenase em uma concentração de 200UI/ml de TCM199 modificado, por períodos de 20, 30 ou 40 minutos. Os resultados obtidos com esta técnica permitiram determinar que o número de folículos pré-antrais isolados, assim como, os estágios de desen- volvimento em que esses folículos encontravam-se no momento do isolamento, são similares nos três períodos de incubação enzimática. A estrutura morfológica desses folículos, formada pelo oócito, células da granulosa e membrana basal, manteve-se intacta após o isolamento nos três períodos de digestão enzimática.The objective of this experiment was to determine the efficiency and the effect of different enzymatic digestion periods on the number and developmental stages of preantral follicles isolated from bovine fetal ovaries. The presence of basal membrane, surrounding granulosa cells-oocyte complex, was observed, after digestion, through histologycal study. For this, ovaries from bovine fetues, were collected in slaughterhouses, between 150 and 270 days of pregnancy. In the laboratory, the ovaries were cut into several fragments with surgical scissors and dissociated with Pasteur pipette, having either 1000 or 500mum diameter. After these steps, the fragments were submitted to an enzymatic digestion with collagenase in a concentration of 200IU/ml of modified TCM 199, for periods of 20, 30 or 40 minutes. The results showed that determined the total number and the quantity of the different developmental stages of isolated preantral follicles were similar in the three different periods of enzymatic digestion. The histological analyses demonstrated that the enzymatic digestion periods did not affect the morphological structure of the follicles.

Com o objetivo de isolar mecanicamente folículos pré-antrais caprinos, 52 ovários de cabras sem raça definida (SRD) foram coletados em matadouros ou extraídos por ovariectomia. O protocolo utilizado para o isolamento dos folículos, denominado procedimento mecânico direto (PMD), consistiu no corte do tecido ovariano em pequenos fragmentos, utilizando-se um cortador de tecidos. Em seguida, os fragmentos obtidos foram dissociados mecanicamente com pipetas de pasteur (1600mim e 600mim de diâmetro) e a suspensão resultante, contendo os fragmentos ovarianos, foi sucessivamente filtrada em malhas de náilon (500mim e 100mim). A realização deste procedimento permitiu isolar um número médio (± EP) de 1.067 ± 160 folículos por ovário. Com a finalidade de aumentar o número de folículos pré-antrais isolados por ovário, foi utilizado um procedimento mecânico complementar (PMC), que consistiu em submeter os fragmentos retidos nas malhas de 500mim e 100mim às etapas descritas no PMD. A utilização desses fragmentos resultou em um incremento médio de 5,2% no total de folículos isolados por ovário. O número médio (± EP) de folículos isolados por ovário, utilizando-se o procedimento mecânico (PMD + PMC), foi 1.126 + 163. Independentemente do procedimento utilizado, observou-se uma grande variação individual no número de folículos isolados por ovário. Os limites mínimo e máximo desta variação foram 53 e 7.482 folículos, respectivamente. O tamanho dos folículos isolados variou de 15,0mim a 92,7mim. É viável a utilização do procedimento mecânico, descrito pela primeira vez, para o isolamento de folículos ovarianos pré-antrais caprinos.For mechanical isolation of caprine preantral follicles, ovaries from 52 undefinined breed type goats were collected at a local slaughterhouse or cirurgically extracted. The method used for preantral follicle isolation was a direct mechanical procedure (DMP). Briefly, ovaries were cut into small fragments using a tissue chopper adjusted to 500mum. The ovarian fragments were suspended 80 times with a pasteur pipette and then, the suspension was filtered successively through 500 and 100mum nylon mesh filters. The DMP resulted in a large number of isolated preantral follicles. On average, 1,067 ± 160 (mean number ± SEM) preantral follicles were isolated per ovary. To increase the number of preantral follicles recovered per ovary, the ovarian fragments remaining in the 500 and 100mum nylon mesh filters were transferred to the tissue chopper, and the procedure was repeated (complementary mechanical procedure - CMP). The use of CM P resulted in a mean increment of 5.2% of the total preantral follicles isolated per ovary. The mean number (mean ± SEM) of follicles isolated per ovary using the mechanical procedure (DPM + CPM) was 1,126 + 163. Irrespective of the procedure used, the number of preantral follicles isolated was characterized by extreme individual variation. The limits minimum and maximum of this variation were 53 and 7,482, respectively. The diameter of follicles isolated showed a range from l5.0mum to 92.7 mum. In conclusion, these results showed, for the first time, that preantral follicles can be successfully isolated from caprine ovary by applying a mechanical procedure.

O presente trabalho descreve os efeitos do estágio reprodutivo (animais impúberes, adultos não-gestantes e gestantes), posição anatômica do ovário (direito e esquerdo) presença de corpo lúteo funcional, peso do ovário e número de folículos antrais superficiais (FAS) sobre o número de folículos pré-antrais (FPA) isolados mecanicamente. Os FPA isolados foram divididos em 3 classes a saber: primordiais, primários e secundários. O número médio (± EP) de FPA isolados por ovário foi de 1.324 ± 193; 866 + 170 e 779 ± 139, respectivamente para ovários oriundos de animais impúberes, não-gestantes e gestantes, sendo observada diferença significativa somente entre animais impúberes e gestantes. A posição anatômica do ovário (exceto para os animais não-gestantes) e a presença ou ausência de corpo lúteo não exerceram nenhum efeito sobre o número e distribuição dos FPA isolados. De um modo geral, o número de folículos primários e secundários foi negativamente correlacionado com o peso ovariano. Já o número de folículos primordiais e secundários foi, respectivamente, positiva e negativamente correlacionado com o número de FAS. Analisando as categorias de animais isoladamente, observou-se que, nos animais impúberes, o número de folículos primordiais foi positivamente correlacionado com o número de FAZ, enquanto que o número de folículos primários e secundários foi negativamente correlacionado com o número de FAS. No tocante à categoria de animais gestantes, o número de folículos primários foi negativamente correlacionado com o peso ovariano. Dependendo da categoria de ovários estudada, foram observadas associações significativas entre o número de folículos primordiais, primários e secundários.The aïm of this study was to describe the effects of reproductive stages (pre-pubertal, non-pregnant and pregnant adult animals), ovarian anatomic position (left or right), presence of functional corpus luteum, ovarian weight and number of superficial antral follicles on the number of preantral follicles mechanically isolated. The mean number (mean ± SEM) of isolated preantral follicles per ovary was 1,324 ± 193, 866 ±170 and 779 ± 139, respectively for prepubertal, non-pregnant and pregnant adult animals. Anatomic position (except for nonpregnant animals) and the presence or absence of corpus luteum dia nof affect the number and distribution of isolated preantral follicles. In general, the number of primary and secondary follicles was negatively correlated with the ovarian weight. The numbers of primordial and secondary follicles were, respectively, positively and negatively correlated with the number of superficial antral follicles. Analyzing animal categories separately, it was observed that in prepurbetal animals, the number of primordial follicles was positively correlated with the number of superficial antral follicles. However the numbers of primary and secondary follicles were negatively correlated with the number of superficial antral follicles. In the category of pregnant animals, the number of primary follicles was negatively correlated with the ovarian weight. According to ovary category analyzed, were observed significant correlation between the number of primordial, primary and secondary isolated follicles.

Com a finalidade de avaliar a eficácia do etileno glicol para a preservação do sêmen ovino, utilizou-se 16 pools de sêmen, sendo cada um dividido em quatro alíquotas com concentrações de 0,3M, 0,5M e 0,7M de etileno glicol par a comparação com 0,72M de glicerol. A avaliação do sêmen por teste de termo-resistência demonstrou que a motilidade inicial, final e vigor final foram semelhantes para 0,5M de etileno glicol e 0,72M de glicerol, e superiores aos demais tratamentos. No entanto, o grupo que utilizou o etileno glicol em 0,5M proporcionou uma melhor proteção acrossomática. Setenta ovelhas divididas em três grupos (etileno glicol 0,5M, glicerol 0,7 2M e sêmen fresco), foram submetidas a sincronização de cios, inseminação, pela via cervical e diagnóstico de gestação aos 45 dias de gestação por ultra-sonografia. Não foram observadas diferenças significativas entre o grupo do etileno glicol com os do sêmen fresco e glicerol, porém verificou-se diferença entre os grupos do sêmen fresco e do glicerol. Considerando os resultados obtidos, conclui-se que o etileno glicol utilizado na concentração de 0,5M propicia motilidade e vigor semelhantes ao glicerol (0,72M), porém proporciona uma melhor proteção acrossomática.The aim of the present study was to verify the efficiency of ethylene glycol for freezing ram semen. A total of 16 pools of semen was used and each pool was divided in four fractions, which were frozen with ethylene glycol (in concentration of 0.3M, 0.5M or 0.7M) or glycerol (0.72M; control group). The percentage of motile spermatozoa after thawing (initial motility) and after 5 hour of incubation at 37°C (final motility) as well as the final sperm vigor were similar after freezing with ethylene glycol (0.5M) and glycerol (0.7 2M). The other concentrations of ethylene glycol resulted in lower sperm motility and vigor. However, ethylene glycol, in the concentration of 0.5M, was able to increase the number of sperm with intact acrosomes. Seventy ewes were divided into three different treatments (ethylene glycol-0.5M, glycerol-0.72M and fresh semen). The estrous were synchronized and the ewes were inseminated by cervical technique. Forty-five days after finishing the artificial insemination program, pregnancy diagnosis was performed by ultrasound. The pregnancy rate was similar when the ethylene glycol treatment group was compared to the glycerol and fresh semen. However, the percentage of pregnancy was higher in the group of ewes inseminated with fresh semen than with semen frozen with glycerol (p

A maturação in vitro, fecundação e as técnicas de cultivo de embriões na espécie eqüina são extremamente importantes e necessárias para se examinar as causas de repetição de cio, redução de concepção em éguas velhas e também para a preservação da espécie eqüina. Para avaliar o efeito das gonadotrofinas na regulação da maturação nuclear de oócitos eqüinos, folículos com diâmetro entre 5 a 20mm foram aspirados de 551 ovários provenientes de matadouro obtendo-se 408 oócitos aptos para cultivo. Após a aspiração, os oócitos foram avaliados no próprio líquido folicular quanto a sua integridade e distribuídos nos diferentes tratamentos. No Tratamento I (T1) - grupo controle - os oócitos (n=92) foram cultivados em TCM-199 modificado (mod.), com 25mM de HEPES, 2,2mg/ml de bicarbonato de sódio, 1 mi g/ml 17-beta estradiol, 250mi M de piruvato de sódio e 0,4% de albumina sérica bovina. No tratamento 2 (T2), os oócitos (n= 108) foram cultivados no mesmo meio TC M-199 mod. acrescido de lug/ml de hormônio luteinizante suíno (LHs). No Tratamento 3 (T3), os oócitos (n=102) também foram cultivados em TCM-199 mod. porém com 0,5mi g/ml de hormônio folículo estimulante suíno (FSHs) e no Tratamento 4 (T4) os oócitos (n= 106) foram cultivados com 1mi g/ml de LHs e 0,5mi g/ml, de FSHs. Os oócitos dos quatros tratamentos foram cultivados em estufa a 39°C com 5% de CO2 , e 95% de umidade relativa no ar, durante 24 h. Após este período, as células do Cumulus oophorus foram removidas e os oócitos fixados em solução de ácido acético glacial-metanol (1:3) em placas de Petri 10 x 35mm por 24h sendo posteriormente corados com aceto-orceína. O percentual de oócitos em telófase I / metáfase II foi de 55,6% (59/106) para o T4 (FSHs/LHs) e de 53,9% (55/102) para o T3 (FSHs), os quais não diferiram significativamente. No entanto, estes percentuais foram significativamente superiores (pIn vitro maturation, in vitro fertilization and embryo culture in equine are extremely important and necessaries for examining reproductive problems in the mare. The aim of the present study was to determine the effect of gonadotropins on nuclear maturation of equine oocytes. Follicles-smaller than 20mm were aspirated from 551 ovaries obtained at slaughterhouse, 408 oocytes suitable for culture being recovered. After aspiration, oocytes were evaluated in follicular fluid and distributed in four treatments. In the first treatment, control group, oocytes (n=92) were cultured for 24 hours in modifled TCM-199 with 25mM HEPES, 2.2mg/ml sodium bicarbonate, 1mug/ml 17 beta estradiol, 250mu M piruvic acid and 0.4% bovino serum albumin. In the second treatment, oocytes (n=108) were cultured in modified TC M-199 plus 1mu g/ml porcine LH. In the third treatment, 102 oocytes were cultured in modifled TCM-199 with the addition of 0.5mu g/ml porcino FSH and on the fourth treatment oocytes (n=106) were cultured in modifled TC M-199 with 1mu g/ml porcine LH and 0.5mug/ml porcine FSH. All four groups were cultured for 24h in an atmosphere with 5% CO2 at 39°C. Afterwards, cumulus cells were removed and oocytes were fixed in acetic acid-methanol (1:3) solution for 24h and stained with aceto-orcein. A significantly greater percentage of MII was observed in oocytes cultured with FSH/LH 59/106 (55.6%) and with FSH 55/102 (53,9%) than in the other groups. When oocytes were cultured in the presence of porcine LH, only 35/108 (32,4%) reached the MII stage, a similar percentage being obtained with the control group. This results demonstrate that equine oocytes cultured in vitro are stimulated to reach metaphase II when they are cultured in the presence of porcine FSH alone or added with porcine LH. Otherwise, porcine LH alone does not stimulate nuclear maturation beyond that obtained with oocytes cultured in the absence of gonadotropins.

O presente trabalho foi conduzido com o objetivo de avaliar a eficácia de três técnicas de coloração nuclear de oócitos bovinos nos estágios de vesícula germinativa (VG), metáfase I (MI) e metáfase II (MII). Nestes três estágios de maturação nuclear, os oócitos, sem as células do cumulus, foram fixados em ácido acético:metanol (1:3) em lâminas (fixados em lâmina e corados com lacmóide; FLL) ou placa de petri (fixados em placa e corados com lacmóide; FPL) e corados com lacmóide a 1% em PBS (phosphate buffered saline). Os oócitos foram também distribuídos aleatoriamente a um terceiro grupo, no qual foram fixados em lâmina e corados com Giemsa (fixados em lâmina e corados com Giemsa; FLG). No estágio de VG, a percentagem de oócitos corretamente identificados no tratamento FLL (93,5%) foi significativamente maior do que nos tratamentos FPL (53,1%; χ²9,84; p-0,0017) e FLG (55,2%; χ2=9,03; p=0,0027). No entanto, a proporção de oócitos nos estágios de MI e MII precisamente corados com a técnica FLL (MI 41,7% e MII 41,9%) foram estatisticamente inferiores do que aquelas observadas nos tratamentos FPL (MI 90,0%, χ²13,25; p=0,0003, e MII 92.8%, χ2=12,45, p=0,0004) e FLG (MI 83,3%, χ2=10,69; p=0,0011, e MII 89,7%, χ²=12,24; p=0,0005). Assim sendo, os resultados demonstraram que a eficácia das técnicas de fixação e coloração dos oócitos bovinos depende do estágio de maturação nuclear que está em estudo.

O presente experimento teve por finalidade verificar o efeito na prenhez de diferentes técnicas de inseminação cervical com sêmen congelado, em 234 ovelhas Corriedale, em cio natural. Utilizou-se sêmen congelado em peletes de três carneiros Suffolk e um Corriedale. Cento e trinta e seis ovelhas foram inseminadas por via cervical, com (60) e sem (76) tração cervical. Como grupo controle, noventa e oito ovelhas foram submetidas à inseminação laparoscópica. Para a análise do índice de prenhez, verificado através da ecografia, os graus de penetração foram classificados em cervical superficial e profundo. Considerando-se todas as ovelhas submetidas à inseminação cervical, obteve-se resultados de prenhez de 44,19% e 32,26%, respectivamente para maior e menor profundidade de deposição. A inseminação cervical sem tração resultou em 28,95% de prenhez, o que é estatisticamente inferior aos resultados observados por laparoscopia (57,14%; p < 0,001) e similares aos obtidos com tração cervical (45,00%). No entanto, a percentagem de prenhez foi semelhante entre a inseminação por tração cervical e laparoscópica. Os resultados são indicativos de que a inseminação com tração cervical proporciona resultados de prenhez análogos aos obtidos com a laparoscopia.

A forma de abertura, o comprimento, o diâmetro e o número de dobras de 272 cérvices, provenientes de ovelhas abatidas, foram examinados, sendo 134 da raça Ideal e 138 da Corriedale. Adicionalmente, a forma de abertura de 136 ovelhas Corriedale, em serviço de inseminação artificial, foi examinada. A forma de flap foi a mais freqüente em ambas as raças, com uma média de 52,2%, confirmado também nos animais inseminados. O comprimento cervical médio foi de 5,9cm para a raça Ideal e 5,7cm para a raça Corriedale (p

Este experimento teve por objetivo comparar a eficiência de um protocolo hormonal associado ao desmame por 96 horas com o desmame definitivo, em vacas em pastejo com diferentes ofertas forrageiras. Utilizaram-se 310 vacas (190 Aberdeen-Angus e 120 Charolês), entre 50 e 70 dias pós-parto, distribuídas em seis grupos. Os grupos A2, A5, B2 e B5 foram mantidos em maior (A2 e A5) e menor (B2 e B5) disponibilidade forrageira, no período parto-tratamento, e receberam (dia 0) 2mg (A2 e B2) e 5mg (A5 e B5) de benzoato de estradiol e dispositivo intravaginal com acetato de medroxiprogesterona (CIDR). Seis dias após, receberam 1.000 UI de gonadotrofina coriô­nica eqüina (eCG). No sétimo dia, foi retirado o CIDR e procedido ao desmame dos bezerros por 96 horas. Os grupos AD e BD foram constituídos por 52 e 48 vacas, permanecendo, respectivamente, em maior e menor disponibilidade forrageira, submetidas ao desmame definitivo dos bezerros (dia 7). Inseminaram-se as vacas que manifestaram estro entre os dias 7 e 17, sendo acasaladas, depois, até o 67ºdia. Nos dias 60 e 127 realizaram-se diagnósticos ultra-sonográficos de prenhez. Para análise dos dados, utilizou-se PROC CATMOD do pacote estatístico do SAS, não se verificando diferença (P>0,05) na prenhez entre os grupos com diferentes ofertas forrageiras. Uma nova análise das vacas, conforme seus ganhos de peso, indicou que o desmame definitivo proporciona melhor percentual de prenhez em relação ao modelo de tratamento hormonal utilizado. As vacas que perdem peso no período pós-parto respondem, ao desmame definitivo, mais lentamente do que as que ganham peso no mesmo período. PALAVRAS-CHAVES: Anestro pós-parto desmame, indução à ovulação, ofertas forrageiras, vacas de corte.

ABSTRACT: Pregnancy diagnosis is an important tool for farm management. Ultrasonography is the main technique used for pregnancy diagnosis in ewes. As an alternative, radioimmunoassay (RIA) allows accurate and early detection of pregnancy-associated glycoproteins (PAGs) in sheep blood. However, radioactive-based techniques, as RIA, have been increasingly inadvisable due to environmental risk. Homology between ovine and bovine PAGs is high, and ELISA kits used for PAGs detection in cattle are safer than RIA. Thus, this study aimed to evaluate the feasibility of PAGs detection for pregnancy diagnosis in sheep serum samples using an ELISA kit produced for cattle. The sensitivity and specificity of the ELISA kit were 93.5% and 98.9%, respectively, whereas positive and negative predictive values were 99.0% and 93.1%, respectively, in comparison to ultrasonography diagnostic (control). PAGs reached consistently detectable concentrations in ovine serum around 33 days after mating. Accuracy of the ELISA test was 96.1% from 33 days of pregnancy until lambing. After parturition, PAGs were still detectable seven days post-lambing. However, from 21 days post-parturition, PAGs from the previous pregnancy were no longer detected in serum samples. In conclusion, the bovine ELISA kit can accurately detect pregnancy in sheep 33 days following mating, while PAGs levels from the previous gestation are no longer detected from 21 days post-partum. The evaluated ELISA test is a reliable tool for pregnancy diagnosis in sheep at random stages and as a complementary exam at early gestation.

Com a finalidade de verificar o valor de alguns atributos para avaliação da qualidade do sêmen congelado, através da prenhez, duzentas e noventa e sete ovelhas da raça Corriedale foram inseminadas, intra-uterinamente, por laparoscopia. Utilizou-se cio sincronizado, com pessários vaginais contendo 50 mg de MAP (acetato de medroxiprogesterona), por 12 dias, e 400 UI de eCG (Equine chorionic gonadotrophin) no 12º dia. O sêmen, proveniente de 32 carneiros, foi congelado em pellets. Para a inseminação, utilizaram-se amostras de sêmen com diferentes padrões de qualidade preestabelecida, de motilidade progressiva (MP) ao descongelamento, média da MP durante todo o período de incubação (0, 1, 2, 3, 4 e 5 horas), a 37ºC, MP após cinco horas de incubação e percentagem de células, morfologicamente, íntegras. O diagnóstico de gestação foi realizado por ecografia 40 dias após a inseminação. Obtiveram-se percentuais de prenhez entre 60 e 80% somente quando as amostras apresentaram um movimento progressivo superior a 40% (68,0%), uma MP média e após 5 horas de incubação mínima de 20% (64,4 e 72,3%) e uma MP às 5 horas de incubação quando superior a 10% (61,1 e 78,5%). Com relação ao percentual de células íntegras, as amostras com um mínimo de 40% proporcionaram prenhez de 61,7 e 66,4%, enquanto nas com menos de 40% o percentual foi de apenas 15,2%. Os parâmetros estudados demonstraram eficiência para estimar a capacidade fecundante do sêmen congelado para utilização em inseminação laparoscópica.