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Acute cerebral dysfunction is a pathological state common in severe infections and a pivotal determinant of long-term cognitive outcomes. Current evidence indicates that a loss of synaptic contacts orchestrated by microglial activation is central in sepsis-associated encephalopathy. However, the upstream signals that lead to microglial activation and the mechanism involved in microglial-mediated synapse dysfunction in sepsis are poorly understood. This study investigated the involvement of the NLRP3 inflammasome in microglial activation and synaptic loss related to sepsis. We demonstrated that septic insult using the cecal ligation and puncture (CLP) model induced the expression of NLRP3 inflammasome components in the brain, such as NOD-, LRR-, and pyrin domain-containing protein 3 (NLRP3), apoptosis-associated speck-like protein containing a C-terminal caspase recruitment domain (ASC), caspase-1, and IL-1β. Immunostaining techniques revealed increased expression of the NLRP3 inflammasome in microglial cells in the hippocampus of septic mice. Meanwhile, an in vitro model of primary microglia stimulated with LPS exhibited an increase in mitochondrial reactive oxygen species (ROS) production, NLRP3 complex recruitment, and IL-1β release. Pharmacological inhibition of NLRP3, caspase-1, and mitochondrial ROS all decreased IL-1β secretion by microglial cells. Furthermore, we found that microglial NLRP3 activation is the main pathway for IL-1β-enriched microvesicle (MV) release, which is caspase-1-dependent. MV released from LPS-activated microglia induced neurite suppression and excitatory synaptic loss in neuronal cultures. Moreover, microglial caspase-1 inhibition prevented neurite damage and attenuated synaptic deficits induced by the activated microglial MV. These results suggest that microglial NLRP3 inflammasome activation is the mechanism of IL-1β-enriched MV release and potentially synaptic impairment in sepsis.

Background Brain-derived neurotrophic factor (BDNF) is a pro-survival factor in the brain that also regulates energy balance. BDNF loss-of-function point mutations are responsible for haploinsufficiency, causing severe early-onset obesity. Up to date, only a few studies have sequenced this gene to search for rare mutations related to obesity. In this study, we aimed to investigate the prevalence of BDNF variants in a cohort of adults with severe obesity from Brazil. Material and Methods This study comprised 201 adults with severe obesity (BMI ≥ 35.0 kg/m2) with onset during childhood- or adolescence/youth. As controls, 73 subjects with normal weight (18.5 ≤ BMI ≤ 24.9 kg/m2) were selected. The exclusion criteria were pregnancy, lactation, the use of medication to lose or gain weight, and the presence of symptoms suggestive of syndromic obesity (only for the case group). The coding region of the BDNF gene was screened by Sanger sequencing. Demographic, anthropometric, and blood pressure parameters were obtained from the participants as well as serum hormone and cytokines concentrations and biochemical values. Results As a result, three missense variants [p.(Thr2Ile), p.(Val66Met), and p.(Arg209Gln)] and four synonymous variants (p.Leu107=, p.Thr149=, p.Ala150=, and p.Ser213=) were identified. The p.(Arg209Gln) was predicted as pathogenic by all in silico algorithms used and was not observed in the control group. The individuals carrying the p.(Val66Met) mutated allele had higher waist circumference, HDL-cholesterol and MCP1 levels, and reduced risk of developing metabolic syndrome. Conclusion We observed that the common BDNF p.(Val66Met) variant has influenced waist circumference, HDL-cholesterol, and MCP1 levels. This polymorphism has also a protective effect on metabolic syndrome susceptibility. Additionally, we described for the first time a rare potentially pathogenic BDNF variant in a Brazilian patient with severe obesity and childhood-onset.

β2 integrins are critical in host defense responses to invading pathogens and inflammation. Previously, we reported that genetic deficiency of integrin αDβ2 in mice altered outcomes in experimental systemic infections including accelerated mortality in animals infected with Salmonella enterica serovar Typhimurium. Here, we show that deficiency of αDβ2 results in impaired accumulation of leukocytes in response to peritoneal infection by S. Typhimurium, impaired pathogen clearance in vivo, defective bacterial elimination by cultured peritoneal macrophages, and enhanced pyroptosis, a cell death process triggered by Salmonella. Salmonella-infected animals deficient in αDβ2 had increased levels of peritoneal cytokines in addition to other markers of pyroptosis, which may contribute to inflammatory injury and increased mortality in the context of impaired bacterial killing. These observations indicate important contributions of leukocyte integrins to the host response in experimental Salmonella infection and reveal previous activities of αDβ2 in bacterial infection.

Hepatic Stellate Cells (HSCs) play a crucial role in pathogenesis of liver inflammation and fibrosis. During chronic liver injury, HSCs lose vitamin A and transform into myofibroblastic cells. In schistosomal granulomas, these activated HSCs are called GR-HSCs. Schistosomal-triggered hepatic fibrogenesis has TGF-β as the most potent fibrogenic stimulus, that also controls gene expression of the angiogenic molecule VEGF in HSCs. COX-dependent production of prostaglandins (PGs) also play role in angiogenic processes. Besides angiogenic roles, prostanoids control immunomodulation of Schistosoma mansoni infection. Specifically, schistosoma-derived PGD2 has emerged as a key parasite regulator of immune defense evasion, while no role is still established to host PGD2. Therefore, the aim of this work is to investigate the ability of GR-HSCs to synthesize COX-derived PGD2 and a potential role of this prostanoid in VEGF production by GR-HSCs in vitro. Here, we confirmed that GR-HSCs express COX-2, which displayed perinuclear localization. While unstimulated GR-HSCs produce basal levels of PGD2, TGF-β stimulation besides increasing COX2- mRNA levels, enhanced synthesis/secretion of PGD2 in GR-HSCs supernatant. Moreover, GR-HSCs-derived PGD2 mediate VEGF production by TGF-β-stimulated GR-HSCs, since the pre-treatment with HQL-79, an inhibitor of hematopoietic PGD synthase inhibited both PGD2 synthesis and VEGF secretion by TGF-β-stimulated GR-HSCs. All together, our findings show an autocrine/paracrine activity of GR-HSCs-derived PGD2 on TGF-β-induced VEGF production by GR-HSCs, unveiling a role for PGD2 as important regulator of HSCs activation in hepatic granulomas from schistosome infected mice.

Introdução: A sepse é uma condição clínica, caracterizada como disfunção inflamatória sistêmica em resposta a uma infecção, que pode levar a morte. As armadilhas extracelulares de neutrófilos (NETs) são estruturas com formato de redes e compostas por proteínas de neutrófilos sobre um arcabouço de DNA. A depuração das NETs é mediada por desoxirribonucleases (DNases), que degradam esse arcabouço. Estudos realizados por nosso grupo de pesquisa demostram um aumento da concentração de NETs no plasma de pacientes com sepse. Além disso, diversos trabalhos mostram que a degradação de NETs por DNases recombinantes melhoram o desfecho de animais com sepse. Objetivo: Analisar a modulação da atividade DNase e a expressão dessas enzimas em animais saudáveis ou com modelo de sepse experimental. Metodologia: Utilizando o modelo de ligadura e punção do ceco (CLP) analisamos a mortalidade causada pelo modelo e os níveis de citocinas no plasma dos animais, além dos níveis de NETs e a atividade DNase no baço, fígado, circulação sistêmica e no lavado peritoneal. Também no baço, fígado, e no lavado peritoneal foi analisado a expressão dos genes para as DNases 1, X e γ. Além disso, verificamos em cultivo de células aderentes do baço se as NETs isoladas e o LPS podem interferir na liberação de DNases. Adicionalmente, utilizando o modelo de sepse induzida por injeção de LPS, verificamos a influência desta toxina na atividade e expressão de DNases no lavado peritoneal. Resultados: O modelo de sepse por CLP proporcionou a mortalidade de 100% dos animais em até 48h após o procedimento, também houve aumento dos níveis das citocinas TNF-α, IL-1β e IL-6 no plasma desses animais. Os níveis de NETs foram aumentados na circulação, baço, fígado e no lavado peritoneal dos animais com sepse. A atividade DNase dos animais com sepse aumentou no lavado e na circulação após o procedimento, enquanto no baço e fígado permaneceu estável. No baço, foi observado redução da expressão de todas as DNases analisadas, em contrapartida no fígado ocorreu aumento da expressão da DNase 1 e γ, no lavado peritoneal foi observado redução da expressão da DNase γ. Além disso, ambos os estímulos (LPS e NETs) diminuíram a secreção dessas enzimas em células aderentes do baço. Dessa forma, hipotetizamos que o aumento da atividade DNase observado no lavado dos animais sépticos induzidos por CLP, não correspondem as DNases endógenas. Então foi analisado através do modelo com injeção intraperitoneal de LPS, um aumento da atividade da DNase apenas no tempo de 12h após a sepse. Além disso neste modelo, a DNase 1 apresentou aumento de expressão em 12 horas e a DNase γ teve um aumento de expressão em 6 horas seguida por diminuição nos tempos posteriores. Conclusões: Nossos resultados mostram que em animais que passaram pela indução de sepse por CLP há um aumento da atividade Dnase no local da infecção, esse aumento parece ser dependente da presença de bactérias. Além disso, demonstramos que durante a sepse há modulação da expressão de DNases, que parece ser mediada pelo LPS. Introduction: Sepsis is characterized as life-threatening inflammatory dysfunction in response to an infection, which can lead to death. Extracellular neutrophil traps (NETs) are net-like structures composed of neutrophil proteins on a DNA scaffold. The clearance of NETs is mediated by deoxyribonucleases (DNases), which degrade this backbone. Studies carried out by our research group show an increase in the concentration of NETs in the plasma of patients with sepsis. In addition, several studies show that the degradation of NETs by recombinant DNases improves the outcome of animals with sepsis. Objective: Analyze the modulation of DNase activity and the expression of these enzymes in healthy or in an experimental sepsis model animals. Methodology: Using the cecum ligation and puncture (CLP) model, we analyzed the mortality caused by sepsis and the levels of cytokines in the plasma of the animals. Also, we evaluated NETs levels and DNase activity in spleen, liver, systemic circulation and peritoneal cavity. In addition, we analyzed the expression of DNases 1, X and γ genes in spleen, liver, and peritoneal lavage. Furthermore, we verified whether NETs and LPS can interfere with the release of DNases by adherent spleen cells. Using the LPS-induced sepsis model, we verified whether this substance can influence the activity and expression of DNases in peritoneal cavity. Results: The CLP model of sepsis provided the mortality of 100% of the animals within 48 hours after the procedure and increased the levels of cytokines TNF-α, IL-1β and IL-6 in the plasma of CLP animals. NETs levels were increased in the circulation, spleen, liver and peritoneal lavage of animals with sepsis. The DNase activity of the animals with sepsis increased in the lavage and in the circulation after the procedure, while in the spleen and liver did not show any difference. In the spleen, a reduction in the expression of all DNases analyzed was observed, in contrast, in the liver, there was an increase in the expression of DNase 1 and γ, in the peritoneal lavage, a reduction in the expression of DNase γ was observed. We observed that both stimuli (LPS and NETs) decrease the secretion of these enzymes by these cells. These results led us to the hypothesis that the increase in DNase activity observed in the washing of septic animals induced by CLP does not correspond to endogenous DNases. Thus, it was analyzed that in the endotoxin model, through the intraperitoneal injection of LPS, there was an increase in DNase activity only at the time of 12 h after sepsis. It was also possible to observe a different pattern of DNase expression in this model, DNase 1 showed an increase in expression at 12 hours and DNase γ had an increase in expression at 6 hours followed by a decrease. Conclusions: Our results show that in animals that underwent sepsis induction by CLP there is an increase in Dnase activity at the site of infection, this increase seems to be dependent on the presence of bacteria. Furthermore, we demonstrated that during sepsis there is modulation of DNase expression, which seems to be mediated by LPS.

O diabetes tipo 1 (DT1) é uma doença metabólica associada a uma inflamação sistêmica de baixo grau, responsável por importantes co-morbidades associadas. Nosso grupo demonstrou que esta inflamação depende dos níveis plasmáticos aumentados de leucotrieno-B4 (LTB4), o qual estimula o eixo Myd88/STAT1 amplificando a resposta dos receptores TLR/IL1&#946 em macrófagos. Isso caracteriza o programa pró-inflamatório M1 nestas células, que requer energia proveniente da glicólise e produz substancias tóxicas como espécies reativas de oxigênio (ROS) e óxido nítrico (NO). Isto pode ser minimizado pela respiração mitocondrial desacoplada à síntese de ATP no metabolismo lipídico. Assim, na primeira parte do trabalho os macrófagos de camundongos (C57Bl/6) DT1, expressaram níveis elevados de marcadores de oxidação de ácidos graxos, o que não foi observado em macrófagos de camundongos diabéticos tratados com o antagonista de LTB4 (u75302). Além disso, o u75302 também reduziu a expressão aumentada de CD36, receptor envolvido na captação de lipídios, assim como aumento de lipídios intracelulares nestas células. Os elevados níveis de triglicérides e ácidos graxos presentes no plasma dos diabéticos também foram reduzidos pelo antagonista u75302, e isso foi consistente com o aparecimento de marcadores de lipólise (Prdm16 e Fgf21) no tecido adiposo branco destes animais. Da mesma forma, u75302 reduziu o consumo de oxigênio dos macrófagos de animais diabéticos. Isso foi consistente com os resultados obtidos em macrófagos de camundongos diabéticos deficientes da UCP1, os quais apresentaram maior peso corporal, maior massa de gordura e metabolismo mitocondrial mais baixo do que diabéticos WT. A perda de gordura também foi recuperada pelo tratamento com u75302 indicando o envolvimento do LTB4 na perda de adiposidade e dislipidemia em DT1. Na segunda parte do trabalho, confirmamos a participação dos leucotrienos na inflamação sistêmica em DT1 induzida por estreptozotocina. Camundongos (129SvE) diabéticos apresentaram níveis sistêmicos elevados das citocinas e este aumento não ocorreu em 129Sve deficientes da enzima 5-lipoxigenase (5LO-/-), responsável pela síntese de leucotrienos. A freqüência de monócitos pró-inflamatórios (CD11b&#43Ly6ChighLy6G-) circulantes estava aumentada em camundongos diabéticos WT mas não nos 5LO-/-. Macrófagos peritoneais residentes de camundongos diabéticos também apresentaram um fenótipo semelhante ao M1 classicamente ativado (alta expressão de Nos2 e Stat1, e alta produção de NO), que não foi revertido com o estímulo de IL4 in vitro ou in vivo. Por outro lado, os macrófagos dos 5LO-/- diabéticos apresentaram o fenótipo de macrófagos M2 alternativamente ativados (alta expressão de Ym1 e Arg1, e alta atividade de arginase). Os animais WT diabéticos tiveram cicatrização deficiente que se correlacionou com uma baixa freqüência de macrófagos M2 (CD45&#43F4/80&#43CD206&#43) nas lesões cutâneas comparado com os demais grupos. Juntos, estes dados sugerem que no DT1 os leucotrienos contribuem para a inflamação sistêmica e reprogramação dos monócitos e macrófagos para perfil inflamatório e isto está associado com aumento do metabolismo energético nestas células. Estas alterações induzidas nos macrófagos pelos níveis elevados de leucotrienos, particularmente LTB4, se correlacionam com a cicatrização deficiente, com a perda de gordura e hiperlipidemia nos camundongos DT1, sugerindo que o LTB4 possa ser um alvo terapêutico no diabetes. Type 1 diabetes (T1D) is a metabolic disease associated to systemic low grade inflammation, which has an important role in co-morbidities. Our group showed that this inflammation depends on the high systemic levels of leukotriene-B4 (LTB4), which stimulateds MyD88/Stat1 axis, amplifying TLR/IL1&#946 response in macrophages. This characterizes pro inflammatory M1 program, which requires energy from glycolysis, and produces harmful molecules, such as reactive oxygen species (ROS) and nitric oxide (NO). This can be mitigated by mitochondrial respiration uncoupled to ATP synthesis in lipid metabolism. Therefore, in the first part of this study, macrophages from T1D mice (C57Bl/6) expressed high levels of fatty acid oxidation markers, which was not observed in macrophages from T1D mice treated with LTB4 receptor antagonis, u75302. Moreover, u75302 also reduced the high expression od CD36, a receptor involved in lipids uptake, and also reduced intracellular lipids in these cells. The high levels of triglycerides in diabetic plasma were reduced by u75302, and this is consistent with lipolysis markers (Prdm16 and Fgf21) in white adipose tissue of these mice. This was also consistent with results obtained in macrophages from diabetic UCP1 deficient mice, which had higher body weight and lower mitochondrial metabolism then WT diabetics. Fat loss was also recovered by u75302 treatment, indicating an involvement of LTB4 in adiposity loss and dyslipidemia in T1D. In the second part of this study, we confirmed leukotrienes participation in systemic inflammation in T1D streptozotocin-induced. T1D mice (129SvE) increased systemic levels of cytokines, which was not observed in T1D 5-lipoxygenase deficient mice (5LO-/-).The frequency of pro inflammatory monocytes (CD11b&#43Ly6ChighLy6G-) was increased in WT diabetic mice, but not in 5LO-/-. Resident peritoneal macrophages in diabetics had a phenotype similar to M1 classically activated (Nos2 and Stat1 highly expressed, and high production of NO), which was not reversed by IL-4 stimulation in vitro and in vivo. On the other hand, macrophages from diabetic 5LO-/- had a phenotype M2 alternatively activated (Ym1 and Arg1 highly expressed, and high arginase activity). WT diabetic mice had a defective wound healing, which was related to low frequency of M2 (CD45&#43F4/80&#43CD206&#43) macrophages in cutaneous wounds, compared to the other groups. All together, our data suggest that in T1D leukotrienes induce systemic inflammation, and reprogram pro inflammatory phenotype in monocytes and macrophages, and this is related to increased energetic metabolism in these cells. These alteration in macrophages due to leukotrienes effects, mainly LTB4, are correlated to defective healing, with fat loss, and dyslipidemia in T1D mice, suggesting that LTB4 can be a therapeutic target in diabetes.

A psoríase é uma doença inflamatória crônica com uma elevada incidência, que afeta a pele. A patogênese da psoríase caracteriza-se pela participação de inúmeras células, incluindo os queratinócitos que são as principais células efetoras da citocina IL-17, críticas para a doença, que produzidas pelas células T. Evidências crescentes sugerem o importante papel da piruvato quinase M2 (PKM2) na regulação da resposta inflamatória, mas o mecanismo subjacente permanece obscuro. Nesse sentido, no presente estudo investigamos o papel da PKM2 no desenvolvimento da psoríase. Observamos o aumento de PKM2 em biópsia humana, em modelo de psoríase induzida por imiquimode e em modelos espontâneos K14-IL-17Aind e DC-IL-17Aind. Em adição, esse aumento observado na enzima foi predominante nos queratinócitos e isso foi associado a marcadores de ativação de queratinócitos. Utilizando o inibidor de PKM2, Shikonin (SKN), como abordagem farmacológica, observamos que o tratamento com esse composto foi capaz de reverter a psoríase experimental e a reduzir marcadores associados a doença como: K17, LCN2, TNF-?, KC, S100A8, S100A9, IL-6 e IL-17A. Associado a isso, observamos a redução na frequência de células T (?? e ??) produtoras de IL-17 e do número de neutrófilos na pele em modelo de imiquimode após inibição da PKM2. O SKN, também, reduziu o número de neutrófilos no modelo DC-IL-17Aind. Em nosso próximo passo, observamos que queratinócitos HACAT estimulados com IL-17A apresentou um aumento da expressão de PKM2 e que a sua inibição foi associada a redução da ativação de queratinócitos e de mediadores inflamatórios como a IL-8. Além disso, a deleção da PKM2, utilizando a tecnologia CRISPR/Cas9, reduziu a expressão do receptor de IL-17. Por fim, o desenvolvimento da psoríase por imiquimode foi atenuada em animais deficientes para PKM2 em queratinócitos (K14-PKM2fl/+), no qual foi observado a redução de neutrófilos na pele e, além disso, evidenciamos a redução da expressão de IL-17A nesses animais. O conjunto de resultados apresentados nesse trabalho demonstram que a PKM2 apresenta um papel crítico no desenvolvimento da psoríase e que a ativação do receptor de IL-17 promove um aumento da PKM2 em queratinócitos e esta contribui para ativação de mediadores que é responsável diretamente para o desenvolvimento da psoríase. Esses resultados, ainda, sugerem a PKM2 como um biomarcador para diagnóstico da psoríase e consequentemente, um potencial alvo terapêutico para tratamento dessa doença e outras doenças inflamatórias. Psoriasis is a chronic inflammatory skin disease with high incidence in the global population. The pathogenesis of psoriasis is characterized by involvement of many cells, including keratinocytes that are targets for IL-17-producing T cells. Evidences suggests a critical role of pyruvate kinase M2 (PKM2) in inflammatory response, but the underlying mechanism remains unclear. In this context, here we investigated the role of PKM2 in the development of psoriasis. We observed overexpression of PKM2 in psoriatic human skin, imiquimod-induced psoriasis and spontaneous K14-IL-17Aind and DC-IL-17Aind models. In addition, the overexpression of this enzyme was observed in keratinocytes associated with keratinocytes activation markers. Using the PKM2 inhibitor, Shikonin (SKN), as a pharmacological approach, we observed that the treatment with this compound was able to reduce experimental psoriasis and disease-associated markers such as K17, LCN2, TNF-?, KC, S100A8, S100A9, IL-6 and IL-17A. Moreover, we observed reduction of frequency of IL-17-producing T cells (?? and ??) and the number of neutrophils in the skin after imiquimod application plus inhibition of PKM2. SKN, also, reduced the number of neutrophils in the DC-IL-17Aind model. In our next step, we observed overexpression of PKM2 in human keratinocytes HACAT stimulated with IL-17A and that its inhibition was associated with less keratinocytes activation and inflammatory mediators such as IL-8. In addition, deletion of PKM2, using CRISPR/Cas9 technology, reduced IL-17 receptor expression. Finally, the development of imiquimod-induced psoriasis was attenuated in PKM2-deficient mice in keratinocytes (K14-PKM2f/+), with reduction in the number of neutrophils in the skin. In addition, we evidenced the reduction of IL-17A expression these animals. Taken together, these results demonstrate that PKM2 plays a critical role in the development of psoriasis and that IL-17 receptor activation promotes an increase of PKM2 in keratinocytes and this contributes to the release of mediators that is directly responsible for development of psoriasis. These results, suggest PKM2 as a biomarker for the diagnosis of psoriasis and consequently a potential therapeutic target for the treatment of this disease and other inflammatory diseases.

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Inflamação exacerbada com concentrações elevadas de citocinas inflamatórias contribuem para o extravasamento vascular e a gravidade da dengue. Estudos recentes demonstraram altos níveis da proteína não estrutural 1 (NS1) do DENV no sangue dos pacientes com dengue grave. A NS1 está relacionada à interação com TLR4 em macrófagos, induzindo a secreção de mediadores inflamatórios, e à ruptura do endotélio vascular, contribuindo para o extravasamento vascular. Apesar de a interação da NS1 com macrófagos e células endoteliais já ter sido demonstrada, sua habilidade em ativar plaquetas ainda é desconhecida. Nesse estudo, plaquetas de voluntários saudáveis foram estimuladas com NS1 do DENV2 recombinante e a resposta plaquetária foi avaliada por citometria de fluxo e ELISA. Nós observamos que a NS1 do DENV2 recombinante produzida em E. coli aumentou a ativação plaquetária, indicada pela expressão da P-selectina (CD-62P) na superfície. Nossos resultados indicam que a NS1 aumenta a secreção das quimiocinas RANTES/CCL5 e PF4/CXCL4 e das citocinas próinflamatórias IL-1α e MIF. Contudo, não houve aumento nos níveis da citocina antinflamatória TGF-β. O pré-tratamento com polimixina B não afetou a habilidade da NS1 em induzir a translocação da P-selectina e secreção de citocinas, indicando ausência de contaminação por LPS. Além disso, pré-exposição a NS1 potencializou a ativação plaquetária e secreção de quimiocinas em resposta a uma concentração sub-ótima de trombina. As plaquetas também foram estimuladas com NS1 produzida em células HEK e os resultados obtidos demonstraram um aumento na expressão superficial de P-selectina, confirmando os dados anteriores de que a NS1 do DENV2 promove ativação plaquetária. Posteriormente, plaquetas de voluntários saudáveis pré-tratadas com anticorpos neutralizantes anti-TLR4 ou IgG inespecífica foram estimuladas com NS1 produzida em células HEK . Nossos resultados demonstram que a NS1 ativa plaquetas parcialmente através do receptor TLR4. Finalmente, nós demonstramos que plaquetas infectadas com DENV além de replicarem o RNA viral, são capazes de traduzir o genoma do vírus, sintetizando NS1. No entanto, nossos resultados mostram que as plaquetas não secretam partículas virais, indicando que o ciclo de replicação do vírus não é completo. Apesar dessa replicação abortiva, as plaquetas são capazes de secretar a NS1, que pode agir como um PAMP induzindo respostas imuno-inflamatórias. Nossos dados demonstram que NS1 do DENV2 é capaz de ativar plaquetas, induzindo a secreção de mediadores inflamatórios. Somado a isso, NS1 do DENV2 potencializa a ativação plaquetária pela trombina, sugerindo uma intensificação da resposta tromboinflamatória. Nossos resultados indicam que as plaquetas não só respondem a NS1 exógena como também são fontes de NS1 durante a infecção pelo DENV. Em conjunto, estes eventos podem potencialmente contribuir para a patogênese da dengue. Dengue is a disease caused by dengue virus (DENV), composed by 4 serotypes, and transmitted mostly by Aedes aegypti mosquitos. Some patients may develop a severe form of the disease, called severe dengue, characterized by vascular leakage, severe hemorrhage and organ failure. High concentrations of inflammatory cytokines in the blood of dengue patients contribute to vascular leakage and dengue severity. Recent studies have shown high plasma levels of the non-structural protein 1 (NS1) in the blood of dengue patients. NS1 has been related to interaction with TLR4 on macrophages, inducing the secretion of proinflammatory mediators, and to the disruption of the vascular endothelium, contributing to vascular leakage. Although interactions of NS1 with macrophages and endothelial cells have already been demonstrated, its ability to activate platelets is still unclear. Platelets from healthy volunteers were stimulated with recombinant DENV-2 NS1 produced in E. coli and platelet responses evaluated by flow cytometry and ELISA. We observed that DENV- 2 NS1 increased platelet activation as indicated by P-selectin surface expression. Our results indicate that NS1 increases the secretion of the chemokines RANTES/CCL5 and PF4/CXCL4 and the proinflammatory cytokines IL-1α and MIF. However, there was no increase in the levels of the anti-inflammatory cytokine TGF- β. Treatment with polymixin B did not affect the ability of NS1 to induce P-selectin translocation and cytokine secretion, indicating the absence of LPS contamination. In addition, pre-exposure to NS1 potentiated platelet activation and chemokine secretion in response to a suboptimal concentration of thrombin. Platelets were also stimulated with recombinant NS1 produced in HEK cells and the results show a similar increase in the surface expression of P-selectin, confirming previous data in which DENV2 NS1 promotes platelet activation. Furthermore, platelets from healthy volunteers were incubated with anti-TLR4 neutralizing antibodies or control IgG and then stimulated with NS1 produced in HEK cells. Our data shows that NS1 activates platelets partially depending on TLR4. Finally, we demonstrated that DENV-infected platelets replicated viral RNA, as quantified by qPCR, and also expressed and secreted NS1, as detected by western blot of pellets and supernatants of infected platelets. However, although DENV2-infected platelets are not able to secrete viral particles, promoting abortive replication, they secrete NS1, which may act as a PAMP inducing immune-inflammatory responses. Our data demonstrate that DENV NS1 is capable of activating platelets inducing the release of pro-inflammatory mediators. Besides, DENV NS1 potentiates platelet activation by thrombin, suggesting an intensification of the thromboinflammatory response. Our data also indicate that platelets not only respond to exogenous NS1 but also are a source of NS1 during DENV infection.

Entre os genes estimulados por interferon mais expressos está a família das IFITs (proteínas induzidas por interferon com repetições de tetratricopeptídeos). IFIT1 é uma molécula efetora crítica da imunidade antiviral intrínseca das células, que se liga principalmente a RNAs sem a 2´-O-metilação no primeiro e segundo nucleotídeos proximais ao cap (cap0), característica essa de RNAs não próprios. Após a ligação, IFIT1 previne a tradução desses RNAs por competir com o fator eucariótico de iniciação da tradução 4F. Mesmo IFIT1 podendo ligar-se diretamente a esses RNAs, já foi demonstrado que ela interage com muitas outras proteínas, incluindo outras IFITs, em células estimulados por interferon. Entretanto, os detalhes moleculares dessas interações e o seu impacto na atividade de IFIT1 ainda não tinham sido mostrados. Os complexos de IFITs humanas foram aqui reconstituídos em experimentos de gel filtração utilizando proteínas recombinantes, e sua estequiometria foi determinada por SEC-MALS. IFIT1 interage fortemente com IFIT3 para formar um heterotetrâmero estável. Os homodímeros de IFIT2 e IFIT3 dissociam-se para formar um heterodímero mais estável, que interage com IFIT1 em um heterotrímero de IFIT1:IFIT2:IFIT3. A presença de IFIT3 nesses complexos aumenta sua estabilidade, como demonstrado por fluorimetria de varredura diferencial. A associação de IFIT3 e IFIT2:IFIT3 também potencializam a ligação de IFIT1 a RNAs modelo contendo cap0 em ensaios de inibição da extensão do iniciador e a inibição da tradução desses alvos in vitro. Por meio de mutações, a interface de ligação IFIT1:IFIT3 foi identificada como um motivo conservado YxxxL na região C-terminal de ambas as proteínas. Alterações nessa interface anulam a potencialização da atividade de IFIT1 dependente de IFIT3. Em células, foi demonstrado que IFIT3, mas não IFIT2, estabiliza a expressão de IFIT1. Por fim, um sistema de co-precipitação in vitro foi desenvolvido para identificar interações do complexo IFIT1:IFIT2:IFIT3 com mRNAs celulares próprios. Os RNAs ligados foram sequenciados em profundidade e a sua expressão proteica avaliada no contexto da super-expressão de IFIT1. Juntos, esses dados revelam novos papéis para IFIT3, esclarecem aspectos críticos da montagem e função dos complexos de IFITs e trazem novas pistas a respeito do mecanismo de inibição da tradução celular mediado por IFIT1. Among the most highly expressed interferon stimulated genes are members of IFIT family (interferon-induced proteins with tetratricopeptide repeats). IFIT1 is a critical effector molecule of the antiviral cell-intrinsic immunity that binds mainly cap0 RNAs, which lack 2´-O-methylation of the first and second cap-proximal nucleotides (cap0), characteristic of non-self RNAs. After binding, IFIT1 prevents their translation by competing with the cap-binding eukaryotic translation initiation factor 4F. Despite IFIT1 can bind RNAs by itself, it was demonstrated that it interacts with several proteins, including other IFITs in cells stimulated with interferon. However, the molecular details of these interactions and the impact on IFIT1 activity wasn´t shown. The human IFITcomplexes were here reconstructed in gel filtration experiments using recombinant proteins, and their stoichiometry were determined by SEC-MALS. IFIT1 strongly interacts with IFIT3 to form a stable heterotetramer. IFIT2 and IFIT3 homodimers dissociate to form a more stable heterodimer that interacts with IFIT1 in a heterotrimer of IFIT1:IFIT2:IFIT3. The presence of IFIT3 in these complexes increases their stability as demonstrated by differential scanning fluorimetry. IFIT3 and IFIT2:IFIT3 association also enhanced IFIT1 binding to model cap0 RNAs in toeprinting assays and the translation inhibition of its targets in vitro. By mutational analysis, the IFIT1:IFIT3 binding interface were identified as a conserved C-terminal YxxxL motif present in both proteins. Disruption of this interface abrogates IFIT3-dependent IFIT1 enhanced activity. In cells, it was demonstrated that IFIT3, but not IFIT2, stabilizes IFIT1 expression. Finally, an in vitro pulldown system were developed to identify IFIT1:IFIT2:IFIT3 interactions with cellular self mRNAs. Bound RNAs were deep sequenced and their protein expression evaluated in the context of IFIT1 overexpression. Together this work reveals new roles for IFIT3, clarifies the critical aspects of IFIT complexes assembly and function, and brings new clues to the mechanism of IFIT1-mediated cell translation inhibition.

Legionella pneumophila, o agente etiológico da doença dos Legionários, é conhecida por desencadear a formação de poro em membranas de macrófagos derivados de medula óssea (BMMs) por mecanismos dependentes do sistema de secreção do tipo IV conhecido como Dot/Icm. Neste trabalho, foram utillizados vários mutantes de L. pneumophila em combinação com camundongos nocautes para investigar os fatores bacterianos e do hospedeiro envolvidos na formação de poro em BMMs. Observamos que apesar da atividade do Dot/Icm, a formação de poro não ocorre em BMMs deficientes para caspase-1 e Nlrc4. A formação de poro foi temporalmente associada com a secreção de IL-1b e precedeu a lise celular e a piroptose. A formação de poro foi dependente do Dot/Icm, mas independente de várias proteínas efetoras, da multiplicação bacteriana e da síntese de novo de proteínas. A flagelina, a qual é conhecida em ativar o inflamassoma de Nlrc4, foi necessária para a formação de poro; a bactéria mutante flaA falhou em induzir a permeabilização celular. Consequentemente, a transfecção da flagelina purificada foi suficiente para desencadear a formação de poro independente da infecção. Utilizando 11 diferentes espécies de Legionella, nós observamos alta formação de poro em resposta à L. micdadei, L. bozemanii, L. gratiana, L. jordanis e L. rubrilucens, e essa resposta estava correlacionada com a expressão de flagelina por essas espécies. Além disso, verificamos que as proteínas Asc e Caspase-11 apresentam fenótipo intermediário na formação de poro, sugerindo que outras vias podem estar envolvidas no processo. Observamos também que a formação de poro desencadeada por L. pneumophila difere daquela induzida pelo ATP. Em conjunto, nossos resultados sugerem que a formação de poro não é uma resposta específica de L. pneumophila nem o resultado de dano da membrana induzido pelo Dot/Icm. Ao invés disso, a formação de poro é uma resposta do hospedeiro altamente coordenada, dependente dos componentes do inflamassoma Nlrc4 e caspase-1 e é desencadeada em resposta a bactérias que expressam o sistema de secreção do tipo IV e flagelina. Legionella pneumophila, the etiological agent of Legionnaires disease, is known to trigger pore formation in bone marrow-derived macrophages (BMMs) by mechanisms dependent on the type IVB secretion system known as Dot/Icm. Here, we used several mutants of L. pneumophila in combination with knockout mice to assess the host and bacterial factors involved in pore formation in BMMs. We found that regardless of Dot/Icm activity, pore formation does not occur in BMMs deficient in caspase-1 and Nlrc4/Ipaf. Pore formation was temporally associated with IL-1b secretion and preceded host cell lysis and pyroptosis. Pore-forming ability was dependent on bacterial Dot/Icm but independent of several effector proteins, multiplication and de novo protein synthesis. Flagellin, which is known to trigger the Nlrc4 inflammasome, was required for pore formation as flaA mutant bacteria failed to induce cell permeabilization. Accordingly, transfection of purified flagellin was sufficient to trigger pore formation independent of infection. By using 11 different Legionella species, we found robust pore formation in response to L. micdadei, L. bozemanii, L. gratiana, L. jordanis and L. rubrilucens, and this trait correlated with flagellin expression by these species. Furthermore, we found that Asc and Caspase-11 showed an intermediate phenotype in pore formation, suggesting that other pathways may be involved in this process. We also observed that the pore formation triggered by L. pneumophila differs from the pore induced by ATP. Together, the results suggest that pore formation is neither L. pneumophilaspecific nor the result of membrane damage induced by Dot/Icm activity; instead, it is a highly coordinated host cell response dependent on host Nlrc4 and caspase-1 and on bacterial flagellin and type IV secretion system.

A tuberculose é responsável por mais de 2 milhões de mortes ao ano. A imunidade protetora contra a tuberculose está relacionada com a ativação de linfócitos CD4+ e CD8+ produtores de IFN-g, citocina que potencializa os mecanismos microbicidas dos macrófagos para eliminação dos bacilos. Nos últimos anos, o leucotrieno B4 (LTB4) destacou-se como mediador lipídico que participa da imunidade protetora contra diversas infecções, incluindo a tuberculose. Dessa forma, o objetivo desse estudo foi avaliar o papel dos leucotrienos na proteção induzida pela imunização homóloga com DNA-HSP65 ou heteróloga com BCG/DNA-HSP65. Para isso, inicialmente, nós confirmamos a participação dos leucotrienos no controle da infecção por M. tuberculosis ao mostrar que animais C57BL/6, que controlam a replicação dos bacilos, secretam mais LTB4; e ao bloquear a síntese de leucotrienos com a droga MK-886, estes animais ficaram suscetíveis à infecção. Em seguida, nós passamos a avaliar se os leucotrienos participavam da proteção conferida pela imunização homóloga com DNA-HSP65 ou heteróloga (prime-boost) com BCG/DNA-HSP65. Nossos resultados mostraram que animais deficientes para a síntese de LT (5-LO KO) infectados foram mais suscetíveis à infecção em relação aos animais WT. A maior suscetibilidade dos animais 5-LO KO foi associada à redução na secreção de IFN-g, nitrito e IL-17, aumento na secreção de PGE2, defeitos no recrutamento de células inflamatórias e aumento no influxo de células Foxp3+ para os pulmões. A imunização homóloga perdeu completamente seu efeito protetor na ausência de leucotrienos, enquanto a imunização heteróloga induziu proteção parcial. Animais 5-LO KO imunizados pelo esquema prime-boost secretaram concentrações mais elevadas de IL-17 e tiveram menor influxo de células Foxp3+ para os pulmões quando comparados aos animais 5-LO KO não imunizados e infectados. A inibição da síntese de prostaglandinas durante o protocolo de imunização pela estratégia prime-boost reduziu a capacidade protetora da vacina tanto em animais WT como nos 5-LO KO, sugerindo que as prostaglandinas podem desempenhar papel no processo de imunização. Em conjunto, nossos resultados reforçam a importância dos leucotrienos na imunidade protetora contra tuberculose, sugerindo sua atuação indireta, uma vez que, além de contribuírem para síntese de IFN-g e nitrito, também parecem colaborar na síntese de IL-17. Tuberculosis is responsible for more than 2 millions of death for year. The immune response against tuberculosis is related to activation of IFN-g-producing CD4+ and CD8+ cells. IFN-g increases the microbicidal mechanisms of macrophages to kill intracellular bacilli. Recently, the lipid mediator leukotriene B4 (LTB4) has been related to protection against several diseases, including tuberculosis. In this sense, the aim of this study was to evaluate the role of leukotrienes in the protection induced by homologous immunization with DNA-HSP65 or heterologous with BCG/DNA-HSP65 (prime-boost). Firstly, we confirmed the role of leukotrienes to control the replication of M. tuberculosis when we showed that C57BL/6 mice, which are able to contain bacilli growth, secreted high levels of LTB4; and when we blocked leukotrienes synthesis by treatment with MK-886, C57BL/6 mice became more susceptible to infection. Then, we evaluated the role of leukotrienes in the protection induced by homologous or heterologous (prime-boost) immunization. Our data showed that animals deficient in leukotrienes synthesis (5-LO KO) infected with M. tuberculosis were more susceptible to infection than WT mice. The higher susceptibility of 5-LO KO was related to the decreasing of IFN-g, nitrite and IL-17 production, increasing of PGE2 secretion, defective recruitment of inflammatory cells and increased influx of Foxp3+ cells to the lungs. Homologous immunization has lost completely its protector effect in the absence of leukotrienes, while heterologous immunization induced only partial protection. Prime-boost-immunized 5-LO KO mice secreted higher levels of IL-17 and had lower influx of Foxp3+ cells to the lungs, when compared to non-immunized infected 5-LO KO. The abrogation of the synthesis of prostaglandins during the immunization by prime-boost reduced the protector effect of the vaccine either in WT and 5-LO KO mice, suggesting that prostaglandins may be important to the process of immunization. Together, our data reinforce the key role of leukotrines in immune response against tuberculosis, suggesting that these lipid mediators may act indirectly to induce IFN-g, nitrite and IL-17 synthesis.

A aterosclerose é uma importante doença cardiovascular associada à elevada mortalidade em todo o mundo. Na busca pela prevenção ou tratamento de eventos cardiovasculares, estudos utilizando nutrientes tem se destacado fortemente. O butirato é produzido no organismo pela fermentação bacteriana de fibras e carboidratos não digeridos no cólon e constitui a principal fonte energética para os colonócitos. Diversos estudos têm mostrado que o butirato possui efeitos anti-inflamatórios, anti-oxidantes, anti-carcinogênicos, bem como outras propriedades. Uma vez que a aterosclerose é uma doença de etiologia multifatorial onde inflamação e estresse oxidativo são fatores importantes, as propriedades anti-inflamatórias e anti-oxidantes do butirato o tornam um nutriente promissor para o estudo do seu efeito sobre a aterogênese. Assim, o objetivo deste trabalho foi estudar o efeito da ingestão de butirato de sódio no desenvolvimento da aterosclerose utilizando camundongos deficientes na apoproteína E (ApoE-/-). Para tanto, foram utilizados animais machos, com 6-8 semanas de idade, divididos nos grupos Controle e Butirato, recebendo dieta padrão para camundongos, sem ou suplementada com butirato de sódio, respectivamente, por dez semanas. Previamente à eutanásia, foram realizados Teste de Tolerância Oral à Glicose e Teste de Sensibilidade à Insulina. Os resultados mostraram que o butirato não alterou o perfil lipídico e glicêmico nem a tolerância oral à glicose. No entanto, a sensibilidade à insulina foi melhorada no grupo Butirato. Apesar da ausência de efeito sobre a colesterolemia, houve uma importante redução da aterosclerose na aorta do grupo Butirato. Embora esta redução não tenha sido encontrada na válvula aórtica, essa apresentou menor presença de moléculas inflamatórias (CCL2 e VCAM1) nas lesões, assim como maior estabilidade da placa, uma vez que apresentou menor quantidade de metaloproteinase-2 de matriz extracelular acompanhada de maior conteúdo de colágeno. A peroxidação lipídica no fígado dos animais tratados também foi reduzida, apresentando menores concentrações de malondialdeído e de hidroperóxidos, associado ao aumento da atividade da catalase. Foram realizados, também, experimentos in vitro com células endoteliais (EA.hy926) pré-tratadas com butirato por 2h e, em seguida, estimuladas com LDL oxidada. O pré-tratamento com butirato atuou de maneira benéfica, reduzindo a secreção das moléculas pró-inflamatórias CCL2, VCAM1, TNF, IL-6 e IL-1, bem como aumentando a secreção da citocina anti-inflamatória IL-10. O tratamento com butirato também reduziu a atividade do NF-kB e a expressão de NADPH oxidase-p22phox. Os resultados sugerem, portanto, que os efeitos antiaterogênicos do butirato de sódio podem resultar das propriedades anti-inflamatórias e antioxidantes desse nutriente. Atherosclerosis is a major cardiovascular disease associated with high mortality worldwide. In the search for prevention or treatment of cardiovascular events, studies using nutrients has emerged strongly. Butyrate is produced in the body by the bacterial fermentation of fiber and undigested carbohydrates in the colon and is the main energy source for colonocytes. Butyrate has anti-inflammatory, anti-oxidants, anti-carcinogenic effects and other properties. Since atherosclerosis is a multifactorial disease in which inflammation and oxidative stress are important factors, anti-inflammatory and anti-oxidant properties of butyrate make it a promising nutrient for the study of its effect on atherogenesis. Therefore, the objective of this work was to study the effect of intake of butyrate in the development of atherosclerosis in apoprotein E-deficient mice (ApoE-/-). Male animals (6-8 weeks old) were fed a control diet or butyrate-supplemented diet (1%) for 10 weeks; control and Butyrate group, respectively. Before euthanasia, Oral Glucose Tolerance Test and Insulin Sensitivity Test were performed. Butyrate did not affect the lipid and glycemic profiles or oral glucose tolerance. However, the insulin sensitivity was improved in the butyrate group. Despite the absence of effect on serum cholesterol, there was a significant reduction of atherosclerosis in the aorta of the butyrate group. Although this reduction was not found at the aortic valve, this had less inflammatory molecules (VCAM1 and CCL2) in the lesions, as well as increased stability of the plate, since showed less matrix metalloproteinase-2 and increased collagen content. Lipid peroxidation in the liver of treated animals was also reduced, with lower concentrations of malondialdehyde and hydroperoxide associated with increased catalase activity. We also performed in vitro experiments to study the effect of pre-treatment of endothelial cells (EA.hy926) with butyrate. EA.hy926 cells were pre-icubated with butyrate for 2h and then stimulated with oxidized LDL. The pretreatment reduced production of proinflammatory molecules CCL2, VCAM1, TNF, IL-6 and IL-1, and increased secretion of anti-inflammatory cytokine IL-10. Butyrate also reduced the NF-kB activity and NADPH oxidase-p22phox expression. Therefore, the results suggest that the anti-atherogenic effects of butyrate may result from anti-inflammatory and antioxidant properties of this nutrient.

Utilizando modelo de coinflamação tuberculose e alergia (TB/OVA), nosso grupo mostrou que camundongos BALB/c coinflamados apresentaram diminuição significativa no número de bacilos, associada com diminuição no infiltrado granulomatoso no pulmão, aumento na produção de leucotrieno B4 e no número de células CD8+, quando comparados ao grupo infectado com Mycobacterium tuberculosis (TB). No presente estudo, nosso objetivo foi avaliar os mecanismos envolvidos na restrição ao crescimento dos bacilos nos animais do grupo TB/OVA. Quatro estratégias foram usadas: I) Para avaliar o papel dos linfócitos CD8+ no modelo TB/OVA, foram utilizados camundongos deficientes para a molécula CD8 (CD8KO). Foi observado que não houve diferenças significativas no crescimento do bacilo no pulmão dos animais CD8KO-TB/OVA e WT-TB/OVA. No entanto, nos pulmões dos animais WT-TB/OVA houve maior crescimento de bacilos em relação aos animais WT-TB, diferente do previamente observado com os animais TB/OVA da linhagem BALB/c. Para avaliar o papel dos leucotrienos foram usadas as seguintes estratégias: II). Camundongos da linhagem 129Sv tratados com MK886, inibidor da enzima 5-lipoxigenase (5LO), envolvida na síntese de mediadores lipídicos; III) animais 129Sv, deficientes para a expressão da 5LO (5LOKO). Foi observado que o tratamento com MK886 não afetou o número de bacilos no pulmão do grupo coinflamado TB/OVA quando comparado ao grupo TB/OVA. Além disso, diferente do que foi previamente observado em animais BALB/c, os animais 129Sv coinflamados foram mais susceptíveis que os animais 129Sv infectados. Do contrário, animais 5LOKO-TB/OVA foram mais resistentes que os camundongos WT-TB/OVA. Para avaliar se alterações no infiltrado granulomatoso estavam relacionadas com o infiltrado de macrófagos no pulmão, usamos a quarta estratégia: IV) quantificação das populações de macrófagos M1 e M2. Foi observado que os animais TB/OVA apresentaram aumento da população de macrófagos M2 no pulmão, enquanto a população de macrófagos M1 manteve-se inalterada comparado-se ao grupo apenas infectado. A diminuição no crescimento de bacilos nos animais TB/OVA foi dependente dos macrófagos M2, pois animais deficientes para a expressão do receptor de IL-33 submetidos ao protocolo de coinflamação tiveram diminuição da população de macrófagos M2, e foram susceptíveis à infecção. Esses resultados mostram que a diminuição no crescimento de bacilos nos animais coinflamados TB/OVA é dependente do aumento da população de macrófagos M2. Using model of coinfection allergy and tuberculosis (TB / OVA), our group showed that coinfected BALB/c showed a significant decrease in the number of bacilli, associated with a decrease in granulomatous infiltrate the lung, increased production of leukotriene B4 and the number of cells CD8+, compared to the group infected with Mycobacterium tuberculosis (TB). To evaluate the mechanisms involved in reducing the growth of bacilli in group TB/OVA, were used four strategies: I) To assess the role of CD8+ lymphocytes in model TB/OVA, we used mice deficient for the molecule CD8 (CD8KO).We was observed that the number of bacilli in the lungs of animals in the group CD8KO-TB/OVA and WT-TB/OVA was similar. However, the lungs of animals WT-TB/OVA growth of bacillus was higher compared to WT animals, TB, unlike what was previously observed with background genetic BALB/c. To evaluate the role of leukotrienes, we use the following strategies: II) strain 129Sv mice treated with MK886, an inhibitor of the enzyme 5-lipoxygenase (5LO), involved in the synthesis of lipid mediators, III) 129Sv animals deficient for the expression of 5LO (5LOKO). We observed that treatment with MK886 did not affect the number of bacilli in the lung of the coinfected group TB/OVA. Moreover, unlike what was previously observed in animals BALB/c mice, coinfected 129Sv were more susceptible than the animals infected 129Sv. On the contrary, 5LOKO-TB/OVA animals were more resistant than mice WT-TB/OVA. To assess whether changes in granulomatous infiltrates were related to macrophages, we use the fourth strategy: IV) quantification of macrophage populations M1 and M2. We observed that M2 population in animals TB/OVA showed increased lung. The decrease in bacilli growth of animals TB/OVA was dependent on macrophage M2, since animals deficient for the expression of IL-33 protocol submitted to coinfected protocol had decreased macrophage population M2, and were susceptible to infection. These results show that the reduction in growth of bacilli in coinfected animals TB/OVA is dependent increase in macrophage population M2.

A leptina é um mediador tanto de respostas neuroendócrinas como imunes, e tem sido associada a diversas autoimunidades. O nosso objetivo foi estudar a importância da leptina na modulação da resposta imunológica no transplante experimental, com ênfase em seu papel na plasticidade de linfócitos T e de células dendríticas (DC). Observamos que os animais deficientes em leptina têm uma sobrevida aumentada do enxerto de pele e uma menor frequência de células Th1 e maior T reguladoras (Treg), Th2 e Th17. Ademais, células T CD4+ naive diferenciam-se mais eficientemente em células Treg e Th17 tanto com DC como sem DC, na ausência de leptina. Nossos dados indicam que BMDC, imaturas e maduras, é comprometida na ausência de leptina, induzindo menor proliferação de linfócitos CD4+ e maior geração/expansão de células Treg, Th17 e Th2. Assim, a ausência de leptina resultou num predomínio de células Treg um padrão Th2 que, em conjunto com o perfil tolerogênico das DC, poderiam ser um dos mecanismos responsáveis pelo aumento da sobrevida do enxerto alogenêico de pele. Leptin is a mediator of both neuroendocrine and immune responses, and has been associated with several autoimmune diseases. Our objective was to study the importance of leptin in modulating the immune response in experimental transplantation, with emphasis on its role in the plasticity of T lymphocytes and dendritic cells (DC). We observed that animals leptin deficient had an increased skin graft survival and lower frequency of Th1 and increased regulatory (Treg), Th2 and Th17 T cells. Furthermore, naive CD4+ T cells differentiate more efficiently in Treg and Th17 cells, with DC and without DC, in the absence of leptin. Our data indicate that BMDC, mature and immature, is compromised in the absence of leptin, leading to less proliferation of CD4+ and increased generation / expansion of Treg cells, Th2 and Th17. Thus, the lack of leptin resulted in a predominance of Th2 and Treg T cells, which together with the profile of tolerogenic DC could be one of the mechanisms responsible for increased survival of allograft skin.