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Amoebae from the genus Acanthamoeba are important pathogens responsible for severe illnesses in humans such as Acanthamoeba keratitis and granulomatous amoebic encephalitis. In the last few decades, AK diagnoses have steadily increased. Most patients suffering from AK were contact lens users and the infection was related to poor hygiene. However, therapy is not yet well established, and treatments may last for several months due to resistance. Moreover, these treatments have been described to generate cytotoxicity. Therefore, there is an urgent need to develop new therapeutic strategies against AK. In this study, the amoebicidal activity of different generation cationic carbosilane dendrons derived with 4-phenylbutyric acid was demonstrated against Acanthamoeba polyphaga and Acanthamoeba griffini trophozoites and cysts. In addition, the combination of chlorhexidine digluconate and the most effective dendron (ArCO(2)G(2)(SNMe3I)(4)) showed an in vitro effect against Acanthamoeba trophozoites and cysts, reducing the minimal trophozoite amoebicidal concentration as well as concentrations with cysticidal activity., Ministerio de Economía y Competitividad, Universidad de Alcalá, Comunidad de Madrid

Anionic carbosilane dendrons decorated with sulfonate functions and with a thiol moiety at the focal point have been used to synthesize water soluble gold nanoparticles (AuNPs) by direct reaction of dendrons, gold precursor and reducing agent in water and also by place-exchange reaction. These nanoparticles have been characterized by nuclear magnetic resonance (NMR), transmission electron microscopy (TEM), thermogravimetric analysis (TGA), X-ray photoelectron spectroscopy (XPS), UV, elemental analysis, and Z potential. Also, the interacting ability of the anionic sulfonate functions was investigated by electron paramagnetic resonance (EPR) using copper(II) as a probe. It was found that the different structures and conformations of the AuNPs modulate the availability of sulfonate and thiol groups to be complexed by copper(II). Toxicity assays of AuNPs showed that those produced by direct reaction were less toxic than those obtained by ligand exchange. Inhibition of HIV-1 infection was higher for dendronized AuNPs than for dendrons., Ministerio de Economía y Empresa, Comunidad de Madrid, Universidad de Alcalá

Медицинская биофизика

Staphylococcus aureus es una bacteria ampliamente distribuida por todo el mundo, causante de un gran número de infecciones, que en ocasiones producen brotes, tanto de infecciones adquiridas en la comunidad como nosocomiales. Se trata además de un microorganismo con gran capacidad de adquirir nuevas características que lo hacen más adaptado y versátil, incluyendo resistencias a antimicrobianos y genes de patogenicidad. Lo anteriormente descrito, junto con el aumento de movimiento poblacional por todo el mundo, generan la necesidad de vigilancia de estas infecciones, para prevenir o superar problemas de salud pública a nivel global. Entre los años 2014 y 2018 se aislaron 80 cepas de S. aureus de pacientes de un hospital rural de Etiopía. Dichas cepas causaban infecciones, principalmente adquiridas en la comunidad, que presentaban una elevada virulencia y en ocasiones recurrencia, siendo en su mayor parte infecciones de piel y partes blandas. Los principales objetivos de esta tesis, fueron en primer lugar caracterizar genotípica y fenotípicamente dichas cepas, e intentar revelar la relación entre estas y su virulencia, así como sus manifestaciones clínicas y la evolución o procedencia de dichas cepas. También tratamos de estudiar el efecto de estas cepas sobre cultivos celulares humanos para poner de manifiesto la virulencia previamente determinada. Por otro lado, se pretendía desarrollar tratamientos alternativos a antibióticos, o limitar el uso de estos, debido a la facilidad de este microorganismo de manifestar resistencias. Para el estudio fenotípico, se estudiaron algunos factores de virulencia mediante técnicas bioquímicas o de cultivo, como son la formación de biopelículas, la sensibilidad antimicrobiana, la actividad DNasa y lecitinasa, y el tipo de hemólisis. Los resultados demostraron una baja prevalencia de resistencias a antibióticos y sólo una cepa SARM, justificado por el uso limitado de estos fármacos en la zona rural de estudio debido a la dificultad de adquisición de estos. Sin embargo, el análisis de factores de virulencia debidos a enzimas determinó una elevada actividad DNasa y un alto porcentaje de cepas que expresaron actividad lecitinasa. También se identificó una elevada proporción de cepas que forman biopelícula, en algunos casos muy altos. El estudio de caracterización molecular, realizado mediante análisis por MLST, estudio filogenético y detección de genes de virulencia, confirmó la identificación de cepas como S. aureus y determinó una elevada diversidad de STs, la mayor parte de ellos descritos por primera vez en Etiopía o en todo el mundo. Sin embargo, los estudios de filogenia establecieron relaciones cercanas entre muchos de las cepas. La detección de genes de virulencia demostró una elevada prevalencia de cepas que presentaban los genes pvl, hla and fnba. Además, se corroboró la relación entre el ST152 y el gen pvl, previamente descrita en otras zonas de África. Para estudiar el efecto de algunas de estas cepas seleccionadas sobre células humanas, se midieron los niveles producidos de la enzima lactato deshidrogenasa (LDH), para determinar la citotoxicidad, y se cuantificaron los niveles de TNFα, IL-1β y proteínas totales, así como de expresión de los genes TNF-α, IL-1β e IL-6, sobre co-cultivos de células similares a macrófagos y 11 cepas de S. aureus de Etiopía seleccionadas en función de su caracterización previa. Los resultados identificaron la cepa más inocua que coincidía con los resultados previos obtenidos de caracterización, pero no determinaron una relación clara entre los factores de patogenicidad encontrados en cada una de las cepas y la virulencia producida sobre células similares a macrófagos. Finalmente, debido al aumento de resistencias antimicrobianas de las últimas décadas, así como a la facilidad que presenta S. aureus de adquirir dichas resistencias, se estudió el efecto in vitro de sistemas dendríticos sobre esta bacteria, así como de la combinación de estos con el antibiótico cloxacilina. Los resultados indicaron que el compuesto BDTR003 fue el más efectivo individualmente con una actividad bactericida frente a las tres cepas testadas de S. aureus. Sin embargo, la combinación que presentó un efecto sinérgico en la cepa multirresistente fue la formada por la cloxacilina y el dendrímero BDTL050. Esto abre una posibilidad a nuevos tratamientos contra infecciones causadas por bacterias resistentes, que futuros estudios confirmarán y determinarán la causa de dicha efectividad. En conclusión, a pesar de la baja prevalencia de resistencias antimicrobianas, las cepas de S. aureus aisladas en una zona rural de Etiopía presentan determinantes de patogenicidad que, junto con las condiciones socioeconómicas e higiénicas de la población de estudio, podrían explicar su elevada virulencia.

Las amebas de vida libre (AVL) del género Acanthamoeba son patógenos o parásitos oportunistas siendo los agentes etiológicos de la encefalitis granulomatosa amebiana (EGA), queratitis amebiana (QA) y amebiasis cutánea. Las cepas de este género se clasifican en 20 genotipos diferentes (T1 - T20). En los últimos años, el número de casos de encefalitis amebiana granulomatosa y, sobre todo, de queratitis amebiana han aumentado, debido a la mejora de las herramientas diagnósticas y un mayor conocimiento del personal sanitario sobre este parásito. En la mayoría de estos casos el genotipo al que pertenece la cepa Acanthamoeba aislada es el T4. Ambas patologías tienen un tratamiento problemático debido a la falta de fármacos eficaces o por la forma de resistencia de la ameba (quistes) o por el retraso en el diagnostico ya que la sintomatología es común a otras patologías. Por estos motivos, en los últimos años se ha estudiado la eficacia de una gran variedad de distintos compuestos, tanto de origen químico como natural. Para realizar este tipo de ensayos (cribado de fármacos) es necesario el aislamiento de las amebas y posterior cultivo en medio axénico (cultivo formado por una única especie de microorganismo). Además, una identificación del genotipo al que pertenece el aislado es recomendable, ya que, los aislados diferentes al genotipo T4 muestran una mayor resistencia a los fármacos que los aislados del genotipo T4. En más del 80 % de muestras procedentes de pacientes se detectó Acanthamoeba spp., mientras que en las muestras de las aguas de limnoembalses estudiados sólo se aisló Acanthamoeba spp. en un 9,6 %. Estos aislados se cultivaron en los medios axénicos habituales (PYG suplementado con 2 % de bactocasitona y CERVA) para realizar la identificación del genotipo, estudio de la patogenicidad y ensayos in vitro de cribado de compuestos posiblemente amebicidas. De las 10 cepas aisladas, sólo una (ISCIII-UAH 66/14) no creció en los medios tradicionales. Así pues, se diseñaron empíricamente medios de cultivo indefinidos basados en ingredientes habituales en los supermercados para intentar establecer un cultivo de ISCIII-UAH 66/14. Estos medios se nombraron medio 1, medio 2 y así sucesivamente hasta el medio 80, todos ellos se probaron en todas las cepas presentes en el laboratorio de parasitología de la UAH, el crecimiento se comprobó por placas sensibles a oxígeno (OCR) y por microscopio óptico. Se observó crecimiento en todas las cepas, incluso la cepa ISCIII-UAH 66/14, en los medios 39 y 80. Una vez establecidos los cultivos axénicos, se determinó el genotipo de los aislados clínicos y ambientales. La mayoría de estos, pertenecen al genotipo T4, una muestra clínica es T3 (ISCIII-UAH 66/14) y dos muestras ambientales son T2 (P-UAH-O3 y PV-UAH-V2). También se analizaron los factores de patogenicidad, pero no se observaron claras diferencias entre las cepas clínicas (teóricamente patógenas) y las ambientales (teóricamente no patógenas). Por último, se estudió el efecto amebicida del dimetilsulfóxido (DMSO), aceite del árbol del té (TTO), nanopartículas, dendrones y dendrímeros sobre trofozoítos de dos cepas clínicas con distinto genotipo (A. polyphaga 2961 – T4 y A. griffini MYP2004 – T3). Se comprobó que la combinación de DMSO y TTO tiene un gran efecto amebicida, pero es citotóxico en células humanas (células epiteliales de cornea y HeLa). De los sistemas dendríticos estudiados, los que mayor eficacia mostraron fueron BDTL072 y BDTL073 y no presentan citotoxidad en células humanas. Ambos son dendrímeros catiónicos carbosilanos cuyos grupos funcionales son biguanidas.

30 p., El agua es un recurso natural, limitado y escaso, indispensable para la vida. La creación de embalses supone una garantía de suministro de agua, pero conlleva un importante impacto negativo en el medio ambiente. La construcción de embalses de cola (denominados limnoembalses) es una iniciativa innovadora que pretende acabar con los efectos negativos de los embalses, teniendo además un gran interés por contar con dos funciones básicas: una recreativa y otra ambiental. En este trabajo nos centramos en el análisis microbiológico de las aguas de limnoembalses de Castilla-La Mancha para determinar su calidad y prevenir posibles infecciones por contaminación fecal. Para realizar el análisis se tomaron muestras en tres ubicaciones distintas: el limnoembalse de Pareja, El Vicario y Presa Verde; y los correspondientes ríos que los abastecen. Las muestras se tomaron en las 4 estaciones del año y a distintas profundidades. Los resultados del análisis mostraron que los valores de contaminación fecal presentes en los limnoembalses cumplían con lo establecido en el Real Decreto 1341/2007 sobre la gestión de la calidad de las aguas de baño. Además, la calidad ecológica de las aguas de los embalses y los ríos pudo ser considerada como buena., Water is a natural, limited and scarce resource essential for life. The creation of reservoirs is a guarantee of water supply, but it brings a significant negative impact on the environment. The construction of dams tail (called limnoembalses) is an innovative initiative which aim is to eliminate the negative effects of the reservoirs, having besides a great interest in having two basic functions: both recreational and environmental. This paper is focused on the microbiological analysis of the limnoembalses waters of Castilla-La Mancha with the objective of determine its quality and prevent infections by fecal contamination. To perform the analysis, the samples were taken at three different locations: the limnoembalse of Pareja, El Vicario and Presa Verde; and the corresponding rivers that supply them. Samples were taken in the 4 seasons of the year and at different depths. The results of the analysis showed that the values of fecal contamination present in the limnoembalses fulfill with the provisions of the Real Decreto 1341/2007 on the management of the quality of bathing water. In addition, the ecological quality of water reservoirs and rivers could be considered as good., Grado en Farmacia